Transposones

Segmentos de DNA que pueden moverse de un sitio a otro del genoma

Transposones: movilizacin directa de segmentos de DNA. Codifican para las protenas necesarias para manipular el DNA y propagarse en el genoma. Retrotransposones: movilizacin a travs de molcula de RNA La Movilidad depende de su capacidad de hacer copias de DNA a partir de su RNA transcripto

Movilizacin en el genoma

Transposones: Causa importante de variacin en genomas

Mutagnesis por el evento de transposicin mismo: insercin, delecin, o movimiento de una secuencia del DNA genmico a otra localizacin Recombinacin desigual entre elementos dispersos. Inserciones, deleciones, inversiones o translocaciones de secuencias genmicas.

Transposones bacterianos

Secuencias de Insercin (IS)

Target repeat IS1 IS2
transposasa

IR

IR

IR (repet.inv) 23pb 41pb 18pb 16pb 22pb 9pb 18pb

Largo 768pb 1327pb 1428pb 1195pb 1329pb 1531pb 1057pb

9pb 5pb 11-13pb 4pb 9pb 9pb 9pb

IS4 IS5 IS10R IS50R IS903

Genoma de E.coli varias copias (<10) Frec Transposicin 10-3 -10-4/elemento x genoma

 Transposones compuestos

IS

IS

Tn9 Tn903 Tn10 Tn5

IS1 IS903 IS10L(nf) IS50L(nf)

CamR KanR TetR KanR

mdulos IS funcionales IS903 IS10R IS50R

Transposicin no replicativa

Intermediario en la transposicin

10

Transposicin replicativa

Tn 3 (familia TnA) Requiere resolvasa

11

12

Uso de Transposones en Tcnicas de DNA recombinante

Insercin al azar de secuencias en el DNA de plsmidos o genmico
Transposicin in vitro

Transposn Tn 5 artificial Transposasa especfica

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Transposicin in vivo

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Mutagnesis al azar clonado y secuenciacin de la regin de DNA genmico donde se insert el transposn

Electroporacin del transposoma Activacin intracelular por Mg2+

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Generacin de mutantes por insercin

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Transposones eucariotas
Maiz Elementos Ac y Ds (no autnomos)
Transposicin no replicativa Produce deleciones, inserciones y/o rupturas cromosmicas Gen nico con 5 exones que codifica para la transposasa Terminaciones con repeticiones invertidas de 11pb Transposicin regulada (inhibida por metilacin del DNA)

IR

IR

transposasa

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Drosophila Elementos P (2907pb)

Regulacin de transposicin tejido especfica (protena represora de splicing en clulas somticas) Represor de la transposasa (citotipo)

1
ORF 0 ORF 1

2
ORF 2

3
ORF 3

RNA ORF 0 ORF 1 ORF 2

Represor (66kDa)

RNA ORF 0 ORF 1 ORF 2 ORF 3

Transposasa (87 kDa)

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19

Ciclo de vida de un retrovirus

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21

22

23

Transposicin de un retrotransposn o retrovirus

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Retrovirus y retrotransposones tipo LTR

Genoma retrovirus
R U5 gag pol env U3 R

Retrotransposones
Elemento Ty (levadura) TyA TyB
6,3 kb

Copia (Drosophila)

LTR

LTR
5 kb

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Retrotransposones
LTR
Promotor en LTR RNA poly A RT citoplasmtica a partir de PBS (en extremo 5) Transporte del DNAdc al Nu para integracin Reg codificantes con homologa a RT, endonucleasa y gag virales

Elementos Ty y copia

No LTR
Promotor en la regin codificante (extremo 5) RNA polyA RT a partir de poly A (priming DNA genmico) 2 ORF : Prot de unin a RNA + Prot con dominio Endonucleasa y dominio RT

Lines

Seales poly A dbiles Duplicacin de genes

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Retrotransposones no LTR
LINES (autnomos)
Promotor de RNA pol II RNA transcripto polyA, bicistrnico 6-8 kb L1 (genoma humano) Seal de poly A dbil

SINES (no autnomos)

Promotor RNA pol III RNA transcripto con corrida de U PolyA codificado en DNA 90-300pb Derivados de tRNA y 7SL RNA No codificantes

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Recombinacin sitio especfica por retrotransposones no retrovirales

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29

LTR
LTR
PBS

LTR
PolyA

AAAA

RNA

LINES
PolyA

AAAA

RNA

SINES

AAAA AAAA UUUU RNA

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GENOMA HUMANO
% GENOMA L1 (LINE) Alu (SINE) L2 (LINE) MIR (SINE) LTR TRANSP.DNA Pseudog. Pro. TOTAL 16,9 10,6 3,2 2,5 8,3 2,8 <1 45 NCOPIAS 0,5 x 106 1,1 x 106 0,3 x 106 0,46 x 106 0,3 x 106 0,3 x 106 1-2 x 104 3 x 106

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