Lucrare de laborator:DIFUZIUNEA I OSMOZA

A. Studiul influenei unor factori fizici asupra ratei difuziunii A.1 Definirea i explicarea fenomenelor de agitaia termic, difuziune i osmoz A.2 Legile osmozei. Soluii false i soluii adevrate A. !smolalitate i osmolaritate. "alculul presiunii osmotice A.# Aplicaii medicale $. %oiuni generale despre microscopia optic $1. &etode de msurare a dimensiunilor celulare ". 'valuarea cantitativ a fenomenului de osmoz "1. !smoza la celulele vegetale "2. !smoza la nivelul (ematiei La nivelul membranelor naturale se petrec schimburi de substan fr de care celulele vii nu ar putea supravieui. Acestea implic fenomene de transport ale solventului sau/i ale solvenilor intra i extracelulari. Lucrarea prezentat v permite s punei n eviden fenomenul de transport membranar al solventului, osmoza, n cazul celulelor vegetale i animale. icroscopul optic este utilizat pentru a observa i msura variaiile dimensiunilor celulare

A. Studiul influenei unor factori fizici asupra ratei difuziunii A.1 Definirea i explicarea fenomenelor de agitaia termic, difuziune i osmoz
Definiii: Soluie = Lichid mixt omogen, ce conine dou sau mai multe substane Solvent = Agentul de dizolvare a unei soluii. A a este cel mai versatil solvent cunoscut. Solvit = Substana ce se dizolv !ntr" o soluie

!ifuzie" Datorit energiei lor cinetice, moleculele unui luid !e g!e!c intr"o continu mi#care, numit agita$ie termic% acea!ta &ncetea' doar la tem(eratura de 'ero ab!olut) Di u'ia e!te enomenul de (trundere a moleculelor unei !ub!tan$e *lic+ide !au ga'oa!e, (rintre moleculele altei !ub!tan$e *lic+ide, ga'oa!e !au !olide,) Di u'ia !e (roduce ca urmare a tendin$ei luidelor de a ocu(a &ntreg -olumul a lat la di!(o'i$ie, datorit agita$iei termice) Ace!t (roce! conduce la egali'area di eren$elor de concentra$ie, (re!iune !au tem(eratur, iind o e.(re!ie a tendin$ei naturale a !i!temelor de a tinde !(re !tarea de ec+ilibru) Fenomenul de di u'ie e!te caracteri'at de dou legi, cuno!cute !ub numele de legile Fic/) 0n ca'ul di u'iunii, (re'en$a unei membrane (rin (orii creia ! !e reali'e'e enomenul e!te acultati-)
Fig 1 Difuzia [www.williamsclass.com/SeventhScienceWork/ImagesCellBricks/Diffusion

Di u'iunea (rin intermediul unei membrane e!te gu-ernat de (rima lege a lui Fic/:

Unde

lu.ul moleculelor tran!(ortate (a!i- *moli1!, &n !en!ul gradientului de concentra$ie

dc1d., (rintr"o !u(ra a$ S a membranei) 2on!tanta de (ro(or$ionalitate, D, (oart numele de coe icient de di u'iune) Semnul minu! !ugerea' c di u'iunea are loc &ntotdeauna de la 'onele de concentra$ie mare !(re 'onele de concentra$ie mai mic) 2oe icientul de di u'ie de(inde de natura !ub!tan$ei, de tem(eratur #i de orma #i dimen!iunea (articulelor ce di u'ea') 3entru (articule ! erice de mici dimen!iuni, coe icientul de di u'ie !e !crie !ub orma:
D= k! 4r

unde 5 e!te tem(eratura ab!olut, / e!te con!tanta lui 6olt'mann, 7 e!te -8!co'itatea #i r e!te ra'a (articulelor) Fenomenul de di u'ie !t la ba'a a numeroa!e !c+imburi de !ub!tan$ care au loc &n natur &ntre organi!me !au &n interiorul unui organi!m) 0n toate ace!te ca'uri &n!, !ub!tan$ele care di u'ea' nu !unt &n contact direct, ci !unt de!(r$ite (rintr"o membran) Acea!t membran (oate i (ermeabil &n mod di erit (entru !ub!tan$e di erite, ca' &n care !e nume#te !electi- (ermeabil) Un ca' im(ortant e!te acela al membranelor care !unt (ermeabile (entru !ol-entul unei !olu$ii, dar nu !unt (ermeabile (entru !ol-it, numite membrane !emi(ermeabile)

#smoz" Fenomenul de di u'ie !electi- care are loc &n ca'ul a dou !olu$ii de concentra$ii di erite, de!(r$ite (rintr"o membran !emi(ermeabil, (oart numele de osmoz) E ectul o!mo'ei e!te egali'area concentra$iilor celor dou !olu$ii, at8ta tim( c8t o!mo'a nu e!te &m(iedicat de alte cau'e e.terne) 0n ca'ul unei membrane !trict !emi(ermeabile, o!mo'a e!te !ingurul enomen de tran!(ort tran!membranar)

Fig. 2 Membrana celular [www.philadelphia.edu.jo/courses/biology/ diffusion.ppt]

3entru o membran (ermeabil !au !electi- (ermeabil enomenele de o!mo' #i de diali' au loc concomitent, &n !en!uri o(u!e) Di u'iunea !ol-entului *a(a &n !i!temele -ii, are loc din com(artimentul &n care !olu$ia e!te mai diluat *numr de molecule ale !ol-entului mare, molecule de !ol-it (u$ine, &n!(re com(artimentul &n care !olu$ia e!te mai concentrat, are un numr mai mic de molecule ale !ol-entului #i un numr mai mare de molecule de !ol-it, dilu8nd"o) Datorit (roce!ului de egali'are a concentra$iei (rin di u'ia !ol-entului, o!mo'a red tendin$a general (e care o are !i!temul de a"#i mri entro(ia)

Fig ".1 #smoza $n cazul unei mem%rane strict

&ermea%ile. Solu'ii hi&otonice (i hi&ertonice

Mecanismele osmozei E.(licarea molecular"cinetic a enomenului e!te urmtoarea: trebuie ! -ede$i !olu$ia ca iind un ame!tec de dou !ub!tan$e, a( *!ol-ent, #i !ol-it *!au !ol-i$i,, ambele ormate din molecule, dar de dimen!iuni di erite% moleculele !ol-entului -or i &ntotdeauna mai mici dec8t cele ale !ol-itului) 0n ace!t el -a i mai e-ident (entru dumnea-oa!tr a(tul c ambele !(ecii moleculare !e !u(un acelora#i legi, nici una ne iind (ri-ilegiat) De e.em(lu, &ntr"o !olu$ie de !are *Na2l, &n a(, !ol-entul e!te re(re'entat de moleculele de a(, iar !ol-itul e!te re(re'entat de (articule de #i de )

S con!iderm dou com(artimente !e(arate de o membran !trict !emi(ermeabil #i ! ne re(re'entm !itua$ia (rintr"o !c+em !im(l * ig)9,) Molecula de !ol-ent, iind !u ucient de mic, (oate trece (rin membran, (e c8nd molecula de !ol-it nu) Numrul moleculelor de a( ce a:ung &n unitatea de tim( la membrana !emi(ermeabil e!te mai mic &n com(artimentul II dec8t &n com(artimentul I, ca urmare a concentra$iei !c'ute a a(ei &n II) 0n inter-alul de tim( &n care din I trec &n II trei molecule de a(, din II &n I trece doar o molecul de a()

I F

II
Fig. ".) #smoza

Mb) Semi(ermeabil

; molecul de a( ; molecul de !ol-it I; com(artiment cu !ol-ent (ur II; com(artiment cu !olu$ie F; lu. net de !ol-ent Ace!t enomen a(are numai &n condi$iile e.i!ten$ei membranei) Sol-entul di u'ea' (rin membran &n cele dou !en!uri, dar -ite'a de trecere a !ol-entului (ur !(re !olu$ie e!te mai mare dec8t trecerea &n !en! contrar) Acea!t di eren$ de lu. e!te !ingura re!(on!abil de enomenul de o!mo') Flu.ul net re'ultant ace ca ni-elul lic+idului din II ! crea!c, de'-olt8ndu"!e &n ace!t com(artiment o (re!iune% &n momentul &n care acea!t (re!iune% -a i ec+ilibrat de (re!iunea +idro!tatic a!cen!iunea &n II !e o(re#te)

Dac !"ar e.ercita o (re!iune !tatic a!u(ra !olu$iei din com(artimentul II, numrul moleculelor de !ol-ent care ar a:unge &n unitatea de tim( la a$a membranei din!(re ace!t -a! ar cre#te) 28nd numrul ace!tora egalea' numrul moleculelor de !ol-ent ce a:ung &n unitatea de tim( la membran &n -a!ul I, !e !tabile#te un ec+ilibru dinamic &ntre cele dou com(artimente) Acea!t (re!iune ar re(re'enta (re!iunea o!motic a !olu$iei din I) Presiunea osmotic * ,, e!te (re!iunea ce ar trebui e.ercitat a!u(ra !olu$iei (entru a

aduce &n ec+ilibru cu !ol-ent (ur, !e(arat de ea (rintr"o membran !emi(ermeabil, adic (entru a &m(iedica orice lu. de !ol-ent &ntre cele dou com(artimente) 0n e.em(lul men$ionat anterior:

<aloarea numeric a (re!iunii o!motice a unei !olu$ii (oate i m!urat e.(erimental (rin di-er!e te+nici) De a!emenea, ea (oate i calculat teoretic &n ca'ul !olu$iilor (entru care (oate i a(licat un model a!emntor celui al ga'elor ideale)

A.2 egile osmozei. Soluii false i soluii ade!rate 6otani!tul 3 e er, cu a:utorul o!mometrului care &i (oart numele a !tabilit urmtoarea lege cantitati- a o!mo'ei, (entru !olu$ii diluate:

unde, /; con!tant 2; concentra$ia (onderal a !olu$iei *g1l, M; ma!a molar a !ol-itului 5; tem(eratura ab!olut Dac notm cu n numrul de moli di'ol-a$i &n -olumul de !olu$ie <, -om a-ea:

m re(re'int concentra$ia molar *numr de moli1 unitate de -olum, Dac &nlocuim &n rela$ia ini$ial, ob$inem: Unde: ; (re!iunea o!motic a !olu$iei <; -olumul !olu$iei n; numrul de moli de !ub!tan$ di'ol-at =; con!tanta uni-er!al a ga'elor 5; tem(eratura ab!olut Ea e!te, (entru !olu$iile oarte diluate, identic cu legea ga'elor (er ecte) Se nume(te &resiune osmotic* &resiunea care se e+ercit* asu&ra unei solu'ii &entru a o men'ine $n echili%ru cu solventul, se&arat -e ea &rintr.o mem%ran* semi&ermea%il*. egile osmozei

egea concentraiilor" la tem(eratur con!tant, (re!iunea o!motic e!te (ro(or$ional cu concentra$ia molar a cor(ului di'ol-at: #$

egea temperaturii" (entru o !olu$ie dat, (re!iunea o!motic cre#te (ro(or$ional cu coe icientul *9> -alabil (8n &n ,, -aloarea lui ,: # %1& iind aceea#i ca la ga'e, iar t iind teme(ratura *lege '

egea lui (an)t *off"

e!te inde(endent de natura !ol-entului #i de !ub!tan$a

di'ol-ant, ea nu de(inde dec8t de numrul (articule (re'ente &n -olumul ocu(at de !olu$ie: + (,n + -+ . a unei !olu$ii &n care a'a di!(er!at e!te alctuit din !ub!tan$e

egea amestecurilor"

di erite e!te egal cu !uma (re!iunilor o!motice determinat de iecare !ub!tan$ &n (arte) Soluii izo/, 0ipo/, 0ipertone" Se im(un c8te-a de ini$ii: dou !olu$ii A #i 6 care au aceea#i (re!iune o!motic, deci &ntre ele nu ar e.i!ta lu. de !ol-ent &n (re'en$a unei membrane !emi(ermeabile, !e nume!c i'oo!motice *i'o;egal,) Dac A are mai mare dec8t 6 !(unem c A e!te +i(ero!motic a$

de 6 iar 6 e!te +i(oo!motic a$ de A) 0n mod a!emntor, e.(re!ia membran !emi(ermeabil !e re er la un anumit !ol-ent% dac ace!ta nu e!te (reci'at, !e !ub&n$elege c e!te -orba de!(re a() 5ermenii +i(oton #i +i(erton !unt olo!i$i (rin ra(ortare la (la!ma !anguin, la tem(eratura organi!mului *i'oton ;i'oo!metic cu (la!ma, +i(oton; +i(oo!metic a$ de (la!m, +i(erton; +i(ero!motic a$ de (la!m,) Soluii false i soluii ade!rate" Legile o!mo'ei nu !e a(lic riguro! la toate categoriile de !olu$ii) 3entru !olu$iile concentrate (re!iunea o!motic mai mare dec8t cea calculat con orm legilor o!mo'ei) Acea!ta !e datorea' a(tului c -olumul moleculelor &ncetea' de a mai i negli:abil &n ra(ort cu -olumul !olu$iei #i di!tan$a intermolecular) 2a urmare a enomenului de di!ocia$ie electrolitic !rurile, aci'ii, ba'ele au &n !olu$ii a(oa!e o (re!iune o!motic !u(erioar celei care ar core!(unde numrului de molecule (re'ente &n -olumul de !olu$ie dat) De e.em(lu o !olu$ie de -a a-ea o (re!iune tri(l) -a a-ea o (re!iune dubl, o !olu$ie de

0n ca'ul !olu$iilor coloidale, ormate din agregate moleculare, (re!iunea o!motic e!te mai mic dec8t cea calculat teoretic, doarece iecare agregat !e com(ort ca o !ingur (articul) A-8nd &n -edere con!idera$iile de mai !u!, !olu$iile !e (ot cla!i ica &n ade-rate #i al!e, du( cum !e !u(un !au nu legilor o!mo'ei) Solu$iile ade-rate !unt cele cri!taloide neelectrolite diluate, la care numrul de (articule core!(unde e.act cu numrul de molecule di'ol-ate) Solu$iile al!e !unt cele cri!taloide #i cele coloidale) A.1 2smolalitate i osmolaritate. $alculul presiunii osmotice S con!iderm o !olu$ie con$in8nd: moli de !ol-ent de ma! molar moli de !ol-i$i de ma! molar <; -olumul !olu$iei ; -olumul molar *al !ol-entului, ; -olumul molar al !ol-itului 3entru o !olu$ie electrolitic !au neelectrolitic, !e (ot de ini: a, $oncentraia molar *c, *molaritatea !au o!molaritatea,) =e(re'int numrul de !olu$ie1litru:

2oncentra$iile molare !unt aditi-e% ele !unt a(licabile at8t (entru !ol-ent, c8t #i (entru !ol-it) O!molaritatea !e e.(rim &n milio!moli1 litru de !olu$ie) b, Molalitatea *m, !au o!molalitate) =e(re'int numrul de moli de !ol-it con!iderat (er unitate de ma! *&n general (e /g, de !ol-ent)

unde, re(re'int ma!a !ol-entului, &n grame) Molalit$ile !unt aditi-e% ele !unt a(licabile dec8t !ol-en$ilor) 0n ca'ul !olu$iilor a(oa!e oarte diluate, -olumul (articulelor din !olu$ie e!te negli:abil &n ra(ort cu -olumul !ol-entului, iar molaritatea #i molalitatea (ot i con undate) 0n ace!t ca' un litru de a( c8ntre#te a(roa(e 9 /g) Acea!t a(ro.ima$ie nu e!te corect &n ca'ul (la!mei !anguine, deoarece -olumul (roteinelor nu e!te negli:abil)

O!molalit$ile !e e.(rim &n milio!moli1/g de !ol-ent) c, $oncentraia ponderal *(,) =e(re'int ma!a de !ol-it (er -olul de !olu$ie:

2oncentra$iile (onderale nu !unt aditi-e) =ela$ia &ntre concentra$ia molar *moli1litru, #i concentra$ia (onderal *grame1litru, -a i:

2smol/ explicaie i definiie Deoarece o!mo'a de(inde doar de numrul total de (articule de !ol-it din !olu$ie, indi erent de natura ace!tora, &n !co( de uni ormi'are a termenilor cu re erire at8t la !olu$iile care con$in ioni c8t #i la cele care con$in molecule !"a introdu! no$iunea de o!mol, acea!ta re(re'ent8nd o (articul oarecare din !olu$ie *O!m," (articul gram cinetic, adic o (articul a crei mi#care liber #i de'ordonat e!te a!imilabil unei molecule de ga') 3entru neelectroli$i !au electroli$i nedi!ocia$i, o!molul core!(une molului% (entru !olu$iile de electroli$i, o!molul core!(unde ionului"gram% (entru ionii mono-alen$i, o!molul core!(unde #i ec+i-alentului gram) O!molaritatea total a unei !olu$ii e!te, deci, !uma numrului de moli nedi!ocia$i #i a numrului de ioni"gram (er litru de !olu$ie) O!molul iind o unitate (rea mare (entru !olu$iile biologice, !e utili'ea' un !ubmulti(lu al ace!tuia" molio!molul *mO!m,: 9 mO!m; O!m)

3entru !olu$iile com(le.e, o!molalitatea !e calculea' (rin !umarea tuturor concentra$iilor molare ale con!tituen$ilor, $in8nd cont de gradul lor de di'ociere) De e.em(lu, (entru lic+idul e.tracelular, !e con!ider con!tituen$i (rinci(ali: calcul (entru iecare lic+id &n (arte) O!molalitatea (la!tic !e e.(rim &n numr de miliO!moli1 litru de (la!m% !e determin (rin m!urarea (unctului crio!co(ic al unei !olu$ii) , gluco', uree% e.i!t ormule de

A.3 Aplicaii medicale

0n organi!m, !ectoarele celulare, inter!ti$iale #i intra-a!culare !unt tot at8tea com(artimente !e(arate (rin membrane biologice, cu (ermeabilitate !electi-, (rin care tran!(ortul a(ei !e ace (rin mecani!me total di erite dec8t &n ca'ul membranelor biologice (ot e.i!ta (roteine cu rol de canale (entru molecule de a() Fiecare celul !au com(artiment !ubcelular delimitat *nucleu, -acuol, li'o'omi etc), re(re'int com(artimente micro!co(ice &n care inter-in enomenele o!motice) Se (oate -orbi, deci, de (re!iunea o!motic a oricrui com(artiment lic+idian delimitat de o membran) O!mo'a inter-ine #i &n reali'area unc$iei normale a glomerulului renal) 2ea mai mare (arte a lic+idelor din organi!m !unt !olu$ii com(le.e) 3entru acea!t o!molaritate !e calculea' (rin !umarea tuturor concentra$iilor molare ale con!tituen$ilor, a#a cum !"a men$ionat de:a) At8t -aria$iile &n (lu! c8t #i cele &n minu! ale o!molarit$ii di eritelor !ectoare lic+idiene ale organi!mului (ot amenin$a &n!#i e.i!ten$a indi-idului) E.em(lu: o de!+idratare celular (rodu! ca urmare a unei e-a(orri ma!i-e a a(ei (rin tran!(ira$ie abundent) 3ierderea unei cantit$i mari de a( -a i urmat de cre#terea (re!iunii o!motice a lic+idelor e.tracelulare) 0n ace!te condi$ii a(a intracelular !e -a de(la!a e.tracelular"o!mo' la ni-elul membranei celulare, !electi- (ermeabile) Diminuarea -olumului lic+idian intracelular -a altera metaboli!mul celular) Inten!itatea #i durata unei a!t el de de!+idratri condi$ionea' re-er!ibilitatea !au ire-er!ibilitatea alterrilor (roce!elor celulare) E!te !uge!ti- de men$ionat c la un de icit de (e!te 9? @ a( din greutatea cor(oral, (entru un inter-al de tim( de 4"A 'ile, !ur-ine &ncetarea unc$iilor -itale ale organi!mului" moartea) Strile +i(o" #i +i(ero!molare, &n (erioada de re-er!ibilitate, (ot i corectate (rin a(ort !au eliminri lic+idiene controlate, dar acea!ta nece!it &n (realabil a-aluarea o!molarit$ii di eritelor com(ortimente lic+idiene)

Strile 0ipo/ i 0iperosmolare" O!molalitatea lic+idului intra" #i e.tracelular !unt men$inute &n ec+ilibru de#i com(o'i$ia electrolitic e!te di erit) <aria$ii mai mari de B@ ale o!malit$ii (la!matice !unt cuno!cute !ub numele de !tri de +i(ero!molare, re!(ecti- +i(eroo!molare, &n ca'ul -aria$iilor !ub acea!t -aloare) Strile +i(ero!molare (ot i (rodu!e de cre#terea cantit$ii unor !ub!tan$e !ol-ite &n !8nge : , gluco' !au ureea #i alcoolul care nu au ace!t e ect% &n ace!te ca'uri o!molaritatea

determinat e!te mai mare dec8t o!molaritatea total calculat (entru

, gluco', uree) Strile

+i(ero!molare !e (ot datora: cre#terii cantit$ii de !ol-it% !cderii cantit$ii de !ol-ent% unui a(ort e.ogen de !ol-ent #i !ol-it) 5ratamentul im(lic re+idratare (rin indige!tie !au (rin (er u'ie cu !olu$ii i'iologice +i(otone) Strile +i(oo!molare !unt de inite de !cderea o!molalit$ii !ub BC?"CDDmO!m1/g a( #i de !cderea , concomitent) 5ratamentul im(lic (er u'ii cu !olu$ii +i(ertone, (8n la

re-enirea, la o!molaritatea (la!matic normal) 4zoosmolaritatea lic0idelor 5iologice" 0n condi$iile normale, lic+idele biologice !unt i'oo!molare) Men$inearea ace!tei i'oo!molarit$i e!te a!igurat (rin !c+imburi de !ol-ent dar mai ale! de !ol-it) E.(re!ia analitic a o!molarit$ii unui lic+id bilogic, !tabilit cu a:utorul do'rilor c+imice, con!ider electroli$ii ca iind total di!ocia$i, ace!tea e.(lic8nd li(!a unei core!(onden$e riguroa!e &ntre re'ultatele ob$inute (rin crio!co(ie *CDD mO!m, #i (rin calcul) 2ontribu$ia di-er#ilor con!tituen$i (la!matici la o!molaritatea total a (la!mei e!te (re'entat &n tabelul 9) 5abelul 9) 2om(o'i$ia (la!mei &n mEE Ioni 2ationi 9FC ? ? B 5otal Anioni : 9?? 9DC BA C 4 94 9?? 9?9,A ?,F ?,F B,B 94F,A 9DG BG C,B 4,F 9A,9 94F,A mEE1l (la!m mEE1l a( (la!matic

Fo! a$i #i !ul a$i Aci'i organici (roteine 5otal

Lic+idele organi!mului nu !unt !olu$ii ideale, #i de#i di!ocierea electroli$ilor (uternici e!te com(let, numrul (articulelor libere care (ot ! e.ercite o (re!iune o!motic e!te redu!, ca urmare a interac$iunilor dintre ioni) De aceea e ectul o!motic al unui electrolit &n !olu$ie de(inde de concentra$ia !a e ecti- mai mult dec8t de numrul de ec+i-alen$i) #i anionii ce &l &n!o$e!c &n mod obi#nuit re(re'int BD mO!m1l) 2eilal$i cationi #i anioni au contribu$ii mici) Hluco'a contribuie cu ? mO!m1l, deoarece nu di!ocia' #i are greutatea molecular 9ID) 3roteinele, de#i !e g!e!c &n concentra$ie mare, a-8nd greutatea molecular mare, aduc o contribu$ie redu! la o!molaritatea total a (la!mei) S con!iderm acum o membran (oroa! care !e(ar dou !olu$ii biologice com(le.e, con$in8nd molecule de di erite ti(uri #i dimen!iuni) Datorit a(tului c diametrul mediu al (orilor membranei are o anumit -aloare, moleculele cu diametru mai mic dec8t ace!ta -or di u'a u#or, iar (e m!ur ce diametrul moleculelor cre#te, di u'ia !e -a ace din ce &n ce mai greu) 28nd diametrul moleculei e!te egal !au mai mare cu cel al (orilor, di u'ia nu mai are loc) Ace!t e ect de di u'iune !electi- (oart numele de dializ) Ace!t enomen (ermite (uri icarea #ateriale !au (re(ararea !olu$iilor care con$in macromolecule #i !t necesare: la ba'a unc$ionrii rinic+iului arti icial)
$ e rubete cu agar Soluii %m# de: #etil orange &icromat de otasiu Sulfat de cu ru

PA-.6A P-A$.4$7

Di u'iunea (oate i in luen$at de greutatea molecular #i de concentra$ia moleculelor: a' 6fectul greutii moleculare Mod de lucru: 9) Lua$i trei e(rubete con$in8nd de:a o coloan de agar *9D ml gel (oli'a+aridic, &n !tare !emi luid, B) Aduga$i Cml din !olu$iile de aceea#i concentra$ie a unor com(u#i colora$i, cu ma!a molecular di erit) C) Nota$i ni-elul la care !e g!e#te limita de !e(ara$ie a celor dou medii, (entru iecare e(rubet F) La ! 8r#itul orelor de lucrri (ractice: nota$i ni-elul la care a a:un! !olu$ia colorat #i m!ura$i di!tan$a (e care a di u'at) Datele !e notea' &n tabelul de re'ultate

Sub!tan$a Metil orange 6icromat de (ota!iu Sul at de cu(ru Materiale nece!are: C e(rubete cu agar Solu$ii de ? mM de: o Metil orange o 6icromat de (ota!iu o Sul at de cu(ru

Di!tan$a *tim(: B ore,

5' 6fectul gradientului de concentraie 9) Lua$i alte e(rubete cu agar) B) Aduga$i &n iecare e(rubet C ml din !olu$ia aceluia#i com(u! *metil orange, dar de concentra$ii di erite) C) =eali'a$i acelea#i m!urtori ca #i la (uctul a, #i nota$i re'ultatele &n tabelul de re'ultate: Solu$ie metil orange 9 mmol ? mmol 9D mmol Materiale nece!are: C e(rubete cu agar Solu$ii de metil orange de concentra$ii: 9 mmol, ? mmol, 9D mmol) Di!tan$a *tim(:B ore,

8. 9oiuni generale despre microscopia optic 81. Metode de msurare a dimensiunilor celulare

3artici(area enomenului de o!mo' la !c+imbul de !ub!tan$ dintre celul #i mediul &ncon:urtor (oate i ob!er-at (rin e.(erien$e !im(le, utili'8nd micro!co(ul o(tic) Descrierea microscopului optic Micro!co(ul o(tic obi#nuit e!te un !i!tem de lentile con-ergente a!t el reali'at &nc8t ! (oat i olo!it (entru ob!er-area unor !tructuri cu dimen!iuni &n general de ordinul micrometrilor ormat din: 3artea o(tic, care !e com(une dintr"un !i!tem centrat de iluminare #i dou !i!teme de lentile con-ergente: obiecti-ul cu di!tan$ ocal de c8$i-a milimetri #i ocularul, cu di!tan$ ocal de ordinul centimetrilor) Si!temul obiecti- e!te alctuit dintr"un !i!tem centrat de lentile a#e'ate &ntr"o anumit ordine &ntr"un tub metalic montat direct !au (rin intermediul !i!temului re-ol-er la (artea in erioar a tubului micro!co(ului) Obiecti-ele au notat (uterea mritoare care -aria' &ntre .9D #i .GD) Si!temul ocular e!te alctuit dintr"un !i!tem de lentile !ituate la (artea !u(erioar a tubului micro!co(ului) 3uterea mritoare a ocularelor care -aria' &ntre .? #i .9?) E.i!t micro!coa(e monoculare #i binoculare) Si!temul de iluminare !er-e#te (entru a aduce la obiectul e.aminat lumina de la o !ur! natural !au arti icial) E!te !ituat !ub (latina micro!co(ului #i !e com(une din !ur! de lumin, oglind, dia ragm #i conden!or) Unele micro!coa(e au un !i!tem de iluminare cu bec !ituat &n (iciorul micro!co(ului #i oglinda deta#abil) 3artea mecanic !er-e#te la !u!$inerea (r$ii o(tice #i a obiectului e.aminat) Ea !e com(une din (icior, coloan, (latin #i un di!(o'iti- de (unere la (unct ormat din #urubul macrometric #i cel micrometric)

3uterea mritoare a micro!co(ului e!te dat de (rodu!ul dintre (uterea mritoare a obiecti-ului #i cea a ocularului) Micro!coa(ele o(tice actuale ating o (utere mritoare de .BDDD)

Fig. / 0icrosco& o&tic [0e-ia/Science/0icrosco&1 /#&tical 0icrosco&e Diagram freeinfosociet1.com

Principalele mrimi caracteristice unui microscop optic 3uterea de re'olu$ie re(re'int calitatea cea mai im(ortant a unui micro!co() Ea re(re'int ca(acitatea unui !i!tem o(tic de a !e(ara dou (uncte ! ie (erce(ute di!tinct la ni-elul imaginii inale) 3rin termenul general de re'olu$ie !e &n$elege abilitatea unui !i!tem o(tic de a detecta detaliile unui obiect) 3uterea de re'olu$ie e!te in-er! (ro(or$ioanal cu !itan$a minim *J, &ntre dou (uncte luminoa!e ale obiectului, (erce(ute !e(arat) 3rin urmare, dac !e notea' (uterea de re'olu$ie cu 3* ,) 2u c8t J e!te mai mic cu at8t (uterea de re'olu$ie 3 e!te mai mare) Di!tan$a minim J,

denumit #i di!tan$a minim re'oluti- !au minimum !e(arabil e!te dat de ormula lui Abbe:

unde: ; lungimea de und a luminii utili'ate la micro!co( n; indicele de re rac$ie al mediului (rin care trece lumina u; :umtatea ung+iului de de!c+idere a conului lumino! ce cade (e obiectiSe ob!er- c J e!te cu at8t mai mic cu c8t n #i u !unt mai mari) Mrimea *n . !inu, !e nume#te a(ertur numeric #i (oate i mrit &n dou moduri: 9) Mrind indicele de re rac$ie al mediului e.i!tent &ntre obiecti- #i lama ce con$ine (re(aratul: a!t el, obiecti-ele !unt de dou eluri: u!cate #i umede, du( cum &ntre ele #i lamel e.i!t aer !au un mediu cu indicele de re rac$ie mai mare dec8t 9) B) Mrind ung+iul u, (rin con!truc$ie 3uterea !e(aratoare a unui micro!co( o(tic e!te, deci, limitat de lungimea de und a radia$iei utili'ate, de indicele de re rac$ie al mediului #i de con!truc$ia obiecti-ului, care im(une o -aloare ma.im a ung+iului u) 3uterea de mrire e!te mrimea numeric egal cu ra(ortul dintre ung+iul uK !ub care !e -ede imaginea la micro!co( #i mrimea obiectului A6)

3uterea de mrire !e e.(rim &n dio(trii #i e!te in-er! (ro(or$ional cu di!tan$ele ocale ale obiecti-ului #i ocularului)

 3uterea de (trundere e!te o calitate ce a(ar$ine obiecti-elor cu (utere de mrire mic) Datorit ace!tei calit$i !e (oate -edea &n (ro un'ime obiectul e.aminat) Ea -aria' &n ra(ort in-er! cu mrimea ung+iului de de!c+idere a obiecti-ului)

PA-.6A P-A$.4$7 Principiul metodei Se !u(ra(une imaginea micro!co(ic a obiectului de m!urat (e!te imaginea unei !cri gradate etalonat &n (realabil) Se utili'ea' dou ti(uri de micrometre: ocular #i obiecti-) Micrometrul obiecti- e!te o lam de !ticl (e care !unt marcate di-i'iuni ec+idi!tante cu -aloare cuno!cut de 9DLm) El !er-e#te la etalonarea micrometrului ocular ace!ta e!te un di!c de !ticl introdu! &n !i!temul ocular #i la r8ndul lui are marcate di-i'iuni ec+idi!tante) Imaginea lui e!te dat numai de lentila ocular, &m tim( ce micrometrul obiecti- e!te mrit de &ntreaga (utere mritoare a micro!co(ului) A etalona micrometrul ocular in!eamn a !tabili o core!(onden$ &ntre o di-i'iune ale micrometrului obiecti-) 0n ace!t el, di-i'iunile micrometrului ocular (ot i e.(rimate &n unit$i de lungime) Mod de lucru: 9) Se a#ea' (e (latina micro!co(ului lama micrometru obiecti-) Acea!ta !e i.ea' cu a:utorul celor doi ca-aleri) B) =eali'a$i acum imaginea la micro!co(: !e aduce &n a.ul micro!co(ului obiecti-ul .9D (rin rotirea !i!temului re-ol-er) 3ri-ind din lateral, !e rote#te -i'a macrometric !(re &nainte #i !e coboar tubul micro!co(ic (8n ce obiecti-ul !e a(ro(ie de (re(arat) <i'a macrometric !e mi#c oarte &ncet) A(oi, (ri-ind (rin ocular, cu a:utorul aceluia#i #urub macrometric, rotit &n !en! in-er!, !e ridic &ncet tubul (8n ce a(are imaginea &n c8m(ul micro!co(ului) 0n continuare !e (rocedea' la com(letarea (unerii la (unct a imaginii cu a:utorul #urubului micrometric care -a i mi#cat &n ambele !en!uri) C) Se introduce micrometrul ocular intr"unul dintre ocularele micro!co(ului (rin !coaterea ace!tuia din tub #i de#urubarea lentilei !u(erioare a ocularului) Si!temul ocular !e introduce a(oi &n tub) Se ob!er- !u(ra(unerea celor dou imagini ale !calelor micrometrice) Nota$i c8te di-i'iuni ale micrometrului obiecti- core!(und laturii unui (trat al micrometrului ocular) F) 2uno!c8nd -aloarea unei di-i'iuni ale micrometrului obiecti- (ute$i u#or a la c8$i mm re(re'int latura unui (trat din re$eaua micrometrului ocular) Acum, &nlocuind lama micrometru obiecti- cu o lam a-8nd un (re(arat, (ute$i m!ura dimen!iunile obiecti-elor de (e ace!tea) ?) Dac !e utili'ea' un obiect liniar de lungime d cuno!cut *etalon,, a#e'at &ntr"un (lan bine determinat, (er(endicular (e a.a o(tic a micro!co(ului #i !e m!oar

lungimea imaginii reale i;n di-i'iuni a obiectului cu a:utorul micrometrului ocular (entru un obiecti- dat !e (oate determina un actor de tran! ormare Mr de init (rin rela$ia: n 0r = 4) Factorul de tran! ormare Mr e!te o mrime caracteri!tic micro!co(ului #i (oate i utili'at (entru etalonare a!t el &nc8t el ! (oat i olo!it (entru determinarea lungimii unor obiecte micro!co(ice) Dac &n locul obiectului etalon !e a#ea' (re(aratul ce conKine celule de dimen!iuni necuno!cute dK #i !e m!oar lungimea core!(un'toare imaginii nK, &n con ormitate cu rela$ia anterioar !e ob$ine: 0r = 6!aluarea cantitati! a fenomenului de osmoz 1. a ni!elul celulelor !egetale 2elulele -egetale (re'int o membran cito(la!matic*care include (la!malema #i tono(la!tul,% la e.teriorul membranei cito(la!matice e.i!t o alt membran !au (erete celulo'ic rigid, ine.ten!ibil, a lat la o oarecare di!tan$ de membrana cito(la!matic) 5ono(la!tul e!te con!iderat o membran !emi(ermeabil, !ediul (rinci(al al enomenului de o!mo') Du( (!trarea &n mediu i'oo!motic celule &#i con!er- -olumul, deoarece nu are loc nici un lu. re'ultant de !ol-ent, !(re interiorul !au e.teriorul celulei) 0n mediul +i(oo!motic a(a intr &n celul, tra-er!8nd (eretele celulo'ic #i membrana cito(la!matic% celula !e mre#te de -olum, dar acea!t mrire e!te limitat (rin e.i!ten$a (eretului celulo'ic, rigid) Fenomenul (oart numele de turge!cen$) 5urge!cen$a e!te !tarea i'iologic normal, de +idratare o(tim a celulei -egetale) 0n mediul +i(ero!motic, a(a celular e!te e.tra-a'at (rin membran, &n !co(ul re!tabilirii i'otoniei &ntre mediul intra" #i e.tracelular) 2elula &#& mic#orea' -olumul, enomenul iind denumit (la!moli') Membrana cito(la!matic urmre#te (la!ma care !e re!tr8nge &n -olumul celular mic, &nde(rt8ndu"!e de (eretele celulo'ic) 3la!moli'a are loc &n trei a'e: 9) 3la!moli'a inci(ient, care con!t &n de(rinderea cito(la!mei de (eretele celulo'ic numai la col$urile ace!teia% B) 3la!moli'a conca-, care con!t &n de!(rinderea (ar$ial a cito(la!mei de (erete% C) 3la!moli'a con-e., care con!t &n de!(rinderea total a cito(la!mei de (erete) 3la!moli'a (oate i un enomen re-er!ibil #i a(are doar celula -iabil, !emi(ermeabilitatea (roto(la!mei iind un enomen caracteri!tic doar (roto(la!mei -ii% (rin moarte celular (roto(la!ma de-ine (ermeabil) nM -M

3re!iunea o!motic a celulei -egetale e!te numit #i (oten$ial o!motic #i e!te dat de concentra$ia !ucului -acuular &n glucide #i !ruri minerale) 2. a ni!elul celulelor animale La celulele animale, li(!a unui (erete rigid,care ! limite'e mrirea de -olum a celulei &n mediul +i(oton, duce la ru(erea membranei celulare) 0n ca'ul (articular al +ematiei enomenul !e nume#te +emoli') 0n mediul +i(ero!motic a(a ie!e (rin e.o!mo' din celule, membrana cito(la!matic!e retrage &m(reun cu con$inutul celular !(re nucleu, celula mic#or8ndu"#i -olumul% enomenul e!te denumit ratatinare) Modi icrile de -olum ale +ematiei de(ind, deci,de modi icrile de (re!iune o!motic, a!t el &nc8t eritrocitul (oate i con!iderat un -eritabil o!mometru natural) 3re!iunea o!motic total &n interiorul +ematiei de(inde, la r8ndul !u, de concentra$ia ionic #i de concentra$ia gluco'ei, (recum #i de con$inutul !u &n +emoglobin) Membrana eritrocitar e!te (ermeabil la a( #i molecule mici, dar e!te total im(ermeabil la +emoglobin, a!t el &nc8t determinantul (rinci(al al com(ortamentului de o!mometru al +ematiei rm8ne +emoglobina) Eritrocitul re(re'inta &n!a mecani!me de control ce tind ! readuc ra(id celula la !tarea de ec+ilibru ini$ial) A!t el trecerea ma!i- de !(re e.terior (oate com(en!a (ar$ial

cre#terea -olumului) Dac &n!a gradientul tran!membranar de (re!iune o!motic e!te (rea mare, ace!te mecani!me de-in in!u iciente) 0n (lu! +emoglobina care nu (oate (r!i celula men$ine o (re!iune care atrage &n continuare -olumul iar dac (re!iunea o!motic a mediului e.tracelular !cade &n continuare, la un moment dat, iind de(#it re'i!ten$a mecanic a membranei, +emoglobina -a i e.tra-a'at (rin intermediul unor al!e ori icii, r a !e (roduce o -eritabil ru(ere) Membrana eritrocitar, de a!(ect modi icat, -a include un con$inut electrolitic, li(!it de +emoglobin, acea!t nou !tructur (oart numele de antoma eritrocitar) 0n mecani!mul +emoli'ei #i &n re acerea integrit$ii membranare du( eliminarea +emoglobinei un rol im(ortant re-ine #i cito!c+eletului eritrocitar) #ateriale necesare: Dac introducem +ematii normale &n !olu$ie de Na2l, +emoli'a a(are la concentra$ii de #icrosco binocular Na2l de ?g1l #i e!te total la o concentra$ie de C g1l) 0n unele !tri (atologice +emoli'a (oate a(are c+iar #i &n -i-o%'i de e.em(lu &ntr"o maladie Lame lamele de sticl ereditar, &n care +ematiile !unt mult mai !en!ibile la -aria$ii de (re!iune o!motic)
$ vase (etri Soluii cu osmolariti diferite: )a*l +g,l -mediu izoton. )a*l /0g,l -mediu hi erton. A distilat -mediu hi oton. (i ete (asteur $ frunze de 1 Lamele microsco ice

PA-.6 P-A$.4$A

+tt(:11NNN)lin/(ubli!+ing)com1-ideo"tran!(ort)+tm

a. 2smoza la alga :.. Utili'8nd micro!co(ul o(tic, -e$i ob!er-a modi icrile unor celule -egetale (u!e &n medii i'oo!motice, +i(oo!motice #i +i(ero!motice) 2ele mai e-idente modi icri a(ar &n (ri-in$a -olumului #i ormei celulare) 3entru a le ob!er-a a-e$i ne-oie de a m!ura dimen!iunile unei celule (rin metoda de!cri! anterior, micrometria) od de lucru 9) Se (un &n cele C -a!e 3etri re!(ecti- cca BD ml mediu +i(oton, mediu i'oton #i mediu +i(erton #i &n iecare c8te-a run'uli$e de (lant) B) Se la! a!t el BD minute du( care !e e.aminea' la micro!co( c8te o run' din iecare mediu) 3entru a i e.aminat la micro!co(, run'a, a#e'at (e lama de !ticl, !e !ec$ionea' &n gro!ime) Se a#ea' ragmentul de run' (e lama de !ticl, a(oi !e a#ea' (e (latina micro!co(ului &n a#a el &nc8t run'a ! !e a le &n dre(tul ori iciului central al (latinei) Se olo!e#te obiecti-ul .9D) C) Se rote#te di!(o'iti-ul re-ol-er #i !e ormea' imaginea cu obiecti-ul .BD, care a o!t olo!it #i (entru etalonarea micrometrului ocular) F) Se m!oar diametrul longitudinal #i tran!-er!al (entru un numar de 9D celule% datele !e trec &n tabel, &n care: I; mediu i'o"o!motic% II; mediu +i(oo!motic% III;mediu +i(ero!motic% L;diametru longitudinal% 5;diametru tran!-er!al%

m;media aritmetic) I L 9 B C F ? 4 A I G 9D 5 L II 5 L III 5

5. O!mo'a la +ematii 3entru a (une &n e-iden$ enomenul de o!mo' la ni-elul biomembranelor, !e (oate reali'a un e.(eriment a!emntor, dar de data a!ta utili'8nd eritrocitele% ace!tea re(re'inta un model de !tudiu deo!ebit de acce!ibil &n ra(ort cu alte celule animale) 3rotocolul de i'olare celulara *(entru ob$inerea eritrocitelor ,con!ta in centri ugarea !angelui integral urmata de inde(artarea (la!mei !i a !tratului !u(erior * in care !e ga!e!c tromboci tele !i leucocitele, ) Du(a centri ugarea !angelui , eritrocitele !e re!u!(enda in !olu$ie de mani tol D,CM !i !e !(al) S(alarea con!ta dint r "o !erie de centri ugri !i re!u!(endri in manitol )Stocarea eritrocitelor !"a acut (rin tinerea lor la rigider) * tem(eratura iind cu(r in!a intre F"ID 2, , in O6SS *Oan/!K6alanced Salt Solution, continand !aruri , gluco'a, bicarbonat de !odium !i o! ati ) Mod de lucru <e$i ob!er-a dimen!iunea tran!-er!al celulelor) Se -a lucra cu ? reci(iente: &n A a-e$i o !u!(en!ie de eritrocite &n mediu i'oo!motic lor *Na2l Gg1l,% &n 6 #i 69 a-e$i !olu$ii +i(oo!motice de concentra$ii di erite *Na2l Cg1l,% &n 2 a-e$i !olu$ie i'oo!motic *Na2l Gg1l,% &n D a-e$i !olu$ie +i(ero!motic *Na2l FDg1l,) 9) 3une$i cu o (i(et 3a!teur c8te 9 ml !u!(en!ie din reci(ientul A &n iecare dintre reci(ienetele 6, 2,D) B) 0n continuarea la anumite inter-ale de tim(, -e$i lua c8te o (ictur din con$inutul reci(ientelor 6, 2 !i D #i o -e$i e.amina la micro!co() <e$i remarca c celulele (u!e &n 2 nu"#i modi ic dimen!iunile) 2elulele (u!e &n D !e ratatinea') 2elulele (u!e &n 69 #i !coa!e du( (rimul inter-al de tim( !unt turge!cente iar cele (u!e &n 6 !unt (ar$ial !au total di!tru!e)

Inter-ale de tim(: 3entru 6" C? minute 3entru 69" C? minute 3entru 2" BD minute 3entru D" CD minute

6I6LIOH=AFIE SELE25I<P: 9) Lucrri (ractice Ia!iQ)

In cazul membranelor se defineste un parametru, numit coeficient de permeabilitate:

Legea I Fick se scrie:

P coeficient de permeabilitate a solventului prin membrana respectiva. Astfel, coeficientul de permeabilitate a solventului prin membrana respectiva depinde de natura solventului solvitului!, de volumul molecular, de temperatura, de concentratie, de dimensiunile si numarul de pori pe unitatea de suprafata a membranelor.