Aplicatii ale radioizotopilor n tiinele biomedicale

Markeri radioactivi Studiul unor procese din organism sau a unor fenomene in vitro care implic , de exemplu, molecule greu de pus n eviden prin metode clasice se poate face marcnd aceste molecule ,adic atandu-le prin diferite procedee, fie un atom radioactiv care va emite o radiaie uor de detectat(marker radioactiv), fie o enzim a crei activitate poate fi msurat(marker enzimatic), fie un marker fluorescent. n felul acesta, molecula va deveni vizibil. Pentru studiile in vitro, dou categorii de radioizotopi pot fi folosii: a. Radioizotopi cu utilitate doar in vitro care nu pot fi utilizati n studiile in vivo b. Radioizotopi care pot fi utilizai in vivo i care sunt studiai in vitro pentru elucidarea mecanismului si a specificitatii de fixare celulara a moleculei radiomarcate anterior studiului in vivo. O molecul radiomarcat include unul sau mai muli atomi radioactivi care ns nu-i modific proprietile chimice. Deoarece atomii radioactivi pot fi detectai prin emisia lor de radiaii, ei vor putea fi utilizai pentru a evidenia prezena i activitatea moleculei marcate.

Modaliti de detecie: principiul scintilaiei lichide Detecia radioizotopilor in vitro se poate face n dou modaliti: calitativ sau prin tehnici cantitative. Pentu msurarea radioactivitii probelor cel mai frecvent se utilizeaz cintilaia lichida(radioizotopi emitori ). Scintilaia lichid este o metod fizic ce permite msurarea radiaiilor - de joas energie, emise de radioizotopi frecvent utilizai n studii in vitro. Importana pentru biologie i medicin este n relaie cu urmtoarele argumente: a. Utilizarea frecvent, ca markeri, a unor izotopi radioactivi ce emit radiaii + b. Imposibilitatea folosirii altor detectoare pentru radiaii - moi, ca urmare a -energiei mici a radiaiilor (emise de tritiu sau de 14C) -unui fenomen de autoabsorbie care poate apare (pentru o grosime a eantionului >0,1 mm) Scintilatorii lichizi Sunt molecule organice aromatice n sistem de duble legturi conjugate, care posed electroni (nivele energetice de acelai ordin de mrime cu energia radiaiilor moi). Aceti electroni vor fi implicai n mecanismul scintilator. Se folosesc amestecuri scintilante formate din solventi unul sau mai muli solvii. Solventul este o substan de natur organic aromaticp, frecvent utilizai fiind toluenul, xilenul, diaxanul. El are rol dublu: de a absorbi energia radiaiilor emise de radioizotop i de a solubiliza scintilatorul. Solviii sunt substane de natura aromatic ce au rol de a capta energia de dezexcitare (fluorescen) furnizat de moleculele solventului. Moleculele excitate vor emite ulterior radiaii corespunztoare domeniului de sensibilitate a fotocatodului.

Mecanismul fizico-chimic al scintilaiei lichide 1. Atomii de 3H sau 14C(markeri) se dezintegreaza 2. Sunt emise particule - de joas energie

3. Particulele - interacioneaz cu moleculele solventului organic, corsepunznd fenomenului de excitare (stri excitate singlet) 4. Moleculele excitate de dezexcit (rapid, 10-9 secunde) radiaia emis nefiind ns situat n regiunea de sensibilitate a fotocatodului. Ea este reabsorbit de moleculele solvitului, cu producerea altor fenomene de excitare(transmise n circa 10-12 sec). Dezexcitarea pune n libertate radiaii corespunztoare domeniului de sensibilitate a fotocatodului. Numrul fotonilor emii este proporional cu energia radiaiilor - iniiale. 5. Fotonii sunt transformai n electroni, care vor fi nregistrai.

Autohistoradiografia Este o tehnic de localizare i cunatificare a unor molecule intracelulare, prin cuplarea acestora cu radioizotopi, in vivo sau in vitro, ca urmare a proprietilor radiaiilor ionizante, emise de acetia, de a reduce bromura de argint din emulsiile fotosensibile. n principiu, o celul sau un constituient celular este marcat radioactiv i, ulterior preparatul este acoperit cu o emulsie fotografic sensibil la radiaii. Developarea emulsiei permite observarea distribuiei materialului radiomarcat(la microscop). a. Sunt utilizai izotopi radioactivi ai unor elemente ce intervin n procesele metabolice celulare sau care au afinitate pentru o serie de structuri intracelulare; acetia sunt incubai cu celulele de studiar b. Preparatele marcate sunt ulterior fixate, secionate, apoi acoperite la ntuneric cu o emulsie de hialogenur de argint, sensibil la radiaiile eliberate de izotopii radioactivi. c. Dup o perioad de expunere ( ce poate dura zile sau chiar luni de zile) emulsia este developat . Atomii de argint vor aprea la nivelul locurilor de interacie cu particulele , care vor corespunde exact locurilor n care se gsesc moleculele de studiat. Prin varierea timpului dintre marcarea iniial (puls) i perioada final de fixare(int) poate fi urmrit eventuala deplasare a celulelor marcate, de la locul mitozei spre un alt situs, de exemplu.

Aplicaii ale autohistoradiografiei a. Autoradiografia poate fi utilizat pentru a localiza situsurile de sintez ADN, receptori, metabolii(prin complexe neimune) b. Cuplarea autoradiografiei cu microscopia electronic mrete rezoluia metodei; se poate identifica drumul strbtut de o molecul de la locul de sintez, secreie i destinaia sa final. Microautoradiografia Se poate realiza pe esuturi fixate i incluse n parafin sau celoidin, secionate la criotom. Frotiurile i amprentele pot fi convenabil montate autoradiografic.

Electronomicroautoradiografia Reprezint o tehnic autoradiografic extins la nivelul microscopiei electronice, care permite detectarea i localizarea susbtanelor marcate n structuri infracelulare, cu o rezoluie de ordinul a 0,1 mm. Deoarece principalul avantaj al autoradiografiei electronomicroscopice comparativ celei la microscopul optic este creterea puterii rezolutive, toi factorii ce pot fi implicai n aceasta capt o importan deosebit (emitori de particule moi, emulsii fine i granule de argint foarte mici).

Evaluarea rezultatelor autoradiografiei a. Evaluarea calitativ Interpretarea calitativ se limiteaz la aprecierea prezenei sau absenei granulelor de argint n esuturi, celule sau la nivel infrastructural-n cazul autohistogramelor examintate microscopic b.Evaluarea cantitativ Metode radioizotopice de studiu a receptorilor Utilizarea radioizotopilor tehnicilor de dozare a receptorilor membranari ori citosolici, precum i studiul unor caracteristici ale cuplrii ligand-receptor. Receptorii, indiferent de localizarea lor, au proprietatea de a cupla molecula ligand, cu mare specificitate i afinitate. Cuplarea ligand-receptor este reversibil i poate fi caracterizat de o constant.

Aplicaie medical: dozarea receptorilor hormonali n neoplasmul mamar Factorul de cretere epidermic(EGF) i moleculele EGF-like sunt citokine implicate n reglarea creterii celulare. Ele pot aciona printr-un mecanism paracrin sau/i autocrin, necesitnd cuplarea cu un acelai receptor membranar. Prezena receptorilor membranari EGF, ct i secreia autocrin a acestui factor de cretere, caracterizeaz celula malign n funcie de tip i malignitate. Studii metabolice i studii farmacologice Radioizotopii sunt frecvent utilizai pentru a urmri unele procese metabolice prin radiomarcarea unei molecule substrat a respectivului metabolism. Dup administrarea unei doze mici de 14C pentru glucoz, se recolteaz material experimental la diferite intervale de timp(corespunznd diferitelor etape metabolice) i se separ metaboliii care, provenind din substratul radiomarcat, vor fi de asemeni marcai radioactiv. Radioizotopii permit i studii de turnover metabolic. De exemplu, turnoverul proteic poate fi studiat, la animale ed experien. Validarea i introducerea unui nou medicament necesit studii multiple iar utilizarea markerilor radioactivi este de mare folos de exemplu pentru evaluarea locului de acumulare i de aciune a medicamentului, a vitezei de acumulare, a vitezei de metabolizare i a produilor de metabolism, fie prin studiu autohistoradiografic sau metabolic pe modele animale. Aplicaii ale radioizotopilor n practica medical: bazele fizice i biofizice ale medicinii nucleare Utilizarea n scop diagnostic sau terapeutic unor anumi i radioizotopi a dat natere unui domeniu medical numit medicin nuclear. Dezvoltarea acestui domeniu este dovada cert a posibilitii de folosire a unor radioizotopi, alei dup criterii precise, n scopuri utile medicinii. Clasificarea domeniilor medicinii nucleare se poate face utiliznd dou criterii: n funcie de scop i n funcie de modul de utilizare a radioizotopilor n funcie de scopul utilizrii radioizotopilor, deosebim dou domenii mari: unul diagnostic i unul terapeutic. Domeniul diagnostic include: a. Explorri cu caracter att morfologic ct i funcional (scintigrafia clinic) b. Explorri strict funcionale(radioiodocaptarea, nefrograma izotopic, etc) Dup modul de utilizare a radioizotopilor, deosebim: medicin nuclear in vivo (care include o parte din explorrile diagnostice i ntreg domeniul de terapie cu radioizotopi i este astfel denumit deoarece se efectueaz pe organismul viu) i medicina nuclear in vitro sau radioimunologia (IRA) include doar explorri n scop diagnostic, iar denumirea provine de la efectuarea determinrilor n eprubete, pe probe biologice care provin de la pacieni. Radiofarmaceutice

Sunt substane care includ anumii radioizotopi i care sunt administrate pacientului n scopul ob inerii de imagini ale organului la nivelul cruia se fixeaz prin mecanisme specifice. Ele trebuiesc supuse unui control de calitate ca i medicamentele. Radiofarmaceuticele se mpart n dou mari categorii: a. Radioizotopul singur, atunci cnd acesta are proprietarea de a se fixa la nivelul unui anumit esut; b. Radioizotop+molecul vectoare; n cea mai mare parte a cazurilor radioizotopul este purtat spre esutul de explorat prin cuplarea cu o molecul neradioactiv care are proprietatea de a se fixa specific pe o anumit structur i care este denumit din acest motiv Molecul Vectoare. Radiofarmaceuticul ideal a. b. c. d. e. Specificitate n funcie de esutul de studiat Radioizotopul s aib proprieti asemntoare radioizotopului ideal Eliminarea din organ, din organism rapid dup achiziia de date S fie uor de obinut i ieftin S nu fie toxic

Caracteristicile radioizotopului a. Timpul de njumtire trebuie s fie scurt dar nu foarte scurt, pentru a avea timp s facem explorarea dup administrarea radiofarmaceuticului; b. Tipul de emisie: de obicei se folosesc radioizotopi emitori gamma n proporie ct mai mare, acesta fiind radiaia cea mai puin nociv n contact cu organismul viu, fr s produc leziuni la dozele la care sunt folosii c. Energia de emisie trebuie s fie adecvat deteciei, fiind cuprins ntre 100-200 keV. Mecanisme de localizare a radiofarmaceuticului a. Fenomene pasive pur fizice b. Fenomene excretorii c. Mecanism specific de captare celular

Modaliti de producere:generatorul de techneiu Generatoarele funcioneaz pe principiul filiaiei radioactive: se obin radioizotopi cu timp de njumtire scurt prin dezintegrarea unui radioizotop cu timp de njumtire lung. Orice generator presupune i o metod de separare a celor dou specii radioizotopice. Cel mai frecvent utilizat este generatorul de techne iu, care este alctuit dintr-un recipient nvelit la exterior de un perete de plumb. Aparatura de detecie Sonda de scintilaie Scintigraful cu baleiaj sau liniar Scintigraful cu bar Gama camera sau camera de scintilaie Terapia cu radioizotopi Radioizotopii pot fi utilizai n scop terapeutic atunci cnd se urmreste distrugerea esutului pe care radioizotopul se fixeaz specific. Se obine astfel o ablaie radioizotopic a esutului(prin analogie cu ablaia-scoaterea din organism-

chirurgical). Caracteristicile radioizotopilor utilizai n terapie vor fi, din acst motiv, diferite de cele ale radioizotoplor utilizai pentru diagnostic, cnd se urmrete fixarea specific a radioizotopului n esutul explorat. Un obiect rmne ns comun: iradierea ct mai mic a organelor interne i a organismului n ntregime. Se aleg deci radioizotopi emitori de radiaii corpusculare, cu timp de njumtire adecvat. Cel mai frecvent terapia cu radioizotopi se utilizeaz n neoplazii i ndeosebi n neoplasmul tiroidian, ca metod unic sau complementar extirprii chirurgicale a tumorii. Archip-Copcianu Cezar Constantin