UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA FACULTAD DE AGRONOMA DEPARTAMENTO DE QUMICA Y TECNOLOGA CTEDRA: ANLISIS DE PRODUCTOS AGRCOLAS I ETAPA I

Seccin: __________________ Fecha: __________________ Integrantes: Victor Monasterio Adriana Mendoza

INFORME POST - LABORATORIO CROMATOGRAFIA CAPA FINA 1.- Introduccin: La cromatografa es una tcnica sumamente empleada en varias areas cientficas debido a que permite la separacin de una mezcla de solutos, basndose esta separacin en la diferente velocidad con que se mueve cada uno de los solutos a travs de un medio poroso, arrastrados por un disolvente en movimiento. Actualmente existen diversas tcnicas de cromatografa, siendo la cromatografa de capa fina (CCF) una de las ms utilizadas debido a que permite separaciones por reparto (aislar e identificar), filtracin sobre gel, adsorcin e intercambio inico en escalas de tiempo muy corta, sin afectar la muestra a analizar. (Abbott D. Et al. 1973). Es por ello que diversos autores como (Rodrguez, S., et all 2012) han utilizado esta tcnica para la cuantificacin de polisacridos en especies de (Opuntia) en la agroindustria, asimismo (Mennickent, S., Et al. 2000), realizo una metodologa para la cuantificacin del cido acetilsaliclico a travs de CCF, el cual es un antiinflamatorio que se hidroliza fcilmente en contacto con la humedad atmosfrica, tradicionalmente este compuesto es analizado por cromatografa liquida de alta resolucin, lo cual es mucho ms lento y ms costoso que la CCF, debido a que la CCF permite analizar varios analitos en una sola placa ahorrando tiempo y solventes lo cual se traduce en disminucin de costos. Por este orden de ideas su versatilidad y rapidez la hace ideal para la enseanza de la cromatografa, dirigida a los estudiantes de la UCV-FAGRO de la ctedra de anlisis de productos agrcolas I, en la cual se realizara una prctica de CCF con la finalidad de aislar e identificar los compuestos de un analito de importancia agrcola.

2. Objetivos de la prctica: Realizar inoculaciones de muestras en placas cromatografas Determinar el Rf de las distintas manchas desarrolladas en Cromatografa de capa fina. Muestras utilizadas y fundamento de los equipos utilizados Muestras: Colesterol al 1,2 %, Tinta roja, tinta azul, extracto de naranja, extracto espinaca y extracto limn Placa Cromatografa con silicagel G-60: Es una placa de vidrio de (20x20) cm con silicagel G-60, el cual es un absorbente que funcionara como fase estacionaria en donde se inoculara el analito a estudiar y se desplazara la fase mvil, seguidamente las

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inciales G-60 indican el nivel de granulometra del absorbente y dependiendo de las caractersticas de la fase mvil este se desplazara con mayor facilidad. (Abbott D. Et al. 1973). Placa cromatografa con silicagel F-254: Posee el mismo fundamento de la placa cromatografa de silicagel G-60, con la diferencia de que posee Fluorescena que es capaz de detectarse a una longitud de onda de 254 , que al revelarse en luz ultra violeta, permite localizar los compuestos del o los analitos a estudiar. (Abbott D. Et al. 1973). Estufa de secado: Para la activacin de las placas se introducen en una estufa en donde se secaran a un temperatura entre (100- 105) C durante 1 hora, de esta forma se elimina la humedad de la placa y se deja lista para ser introducidas en las cmaras de desarrollo. (Abbott D. Et al. 1973). Cmara de desarrollo [cloroformo (1): benceno (2) y Etanol (1): butanol (3): amonio (1)]: consiste en una cubeta en donde se encuentra la fase mvil, en el interior de la cubeta debe colocarse un papel de filtro, empapado de disolvente, que cubra las paredes interiores de la misma, para conseguir que la atmosfera este empapada del disolvente (fase mvil). El fondo de la cubeta se cubre de disolvente hasta una altura de 0,5 a 1 cm luego se introduce la placa, sin mover la cubeta, se deja que ascienda el disolvente unos 10 cm por encima del origen repartiendo los componentes que sean afines a la fase mvil y a la fase estacionaria, se saca la placa y se deja evaporar al ambiente. (Abbott D. Et al. 1973). Cmara de revelado de vapores de Iodo: consiste en una cmara con una cubeta que contiene en el fondo cristalitos de Yodo, en el cual se introduce la placa cromatografica y se deja reposar unos minutos. Los vapores de el yodo tiende a concentrarse alrededor de los compuestos hacer analizados, por lo cual aparece una mancha marrn oscura, sobre un fondo amarillo plido, este mtodo es uno de los ms utilizados para la revelacin debido a su carcter no destructivo.(Abbott D. Et al. 1973). Cmara de revelado de luz ultra violeta: Consiste en una cmara con una lmpara que emite luz ultra violeta, su fundamento consiste en que muchos compuestos orgnicos, no saturados, presentan fluorescencia, debido a la propiedad de absorber las radiaciones ultravioleta y emitir radiaciones de mayor longitud de onda, por ello estos compuestos, aunque invisibles en el cromatograma con la luz ordinaria, pueden detectarse con una lmpara de rayos ultra violeta, asimismo algunas placas comerciales y absorbentes contienen sustancias fluorescentes como aditivos para el revelado de los compuesto. Segn la longitud de onda de la luz emitida y por consiguiente, el color que presenta, representa una caracterstica del compuesto y se usa como mtodo de identificacin. (Abbott D. Et al. 1973).

3. Resultados: A. Esquematice el procedimiento empleado para el desarrollo de cada Prctica. FE: Silicagel G-60 activa. 1 hora a 100 C grosor de la placa 0,25 mm

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1 10 l

2 20 l

3 30 l

4 40 l

5 50 l

Muestra: Colesterolo 1,2 % Fase mvil: Cloroformo (1): Benceno (2)

Vapores de Yodo Revelar Frentecmara solvente de10 vapores cm Yodo

Desarrollar en cmara

Medir distancia recorrida por las manchas

Calcular Rf de c/u ellas M1 2da parte FE: Silicagel F-254 activada por 1 hora a 100 C, espesor de la placa 0,25mm Muestra: Tinta roja, tinta azul, extracto de naranja, extracto espinaca y extracto limn. Tinta roja 10 ml Tinta azul 10 ml Extracto Naranja 10 ml Extracto Espinaca 10 ml Extracto limn 10 ml M2 M3 M4 M5

F.M: Butanol (3), estanol (1), amonio (1)

Desarrollar en cmara de revelado de luz ultra violeta

Fuente del solvente 10 cm

Medir la distancia recorrida por las manchas Pg. 3 de 7

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Luz visible

Hacer dibujo de placas

M1 Cuadro 1. Calculo de Rf de colesterol al 1,2%.

Colesterol al 1,2%

M2

M3

M4 M5

Concentracin 10 l 20 l 30 l 40 l 50 l

color del compuesto amarillo plido amarillo plido amarillo plido amarillo plido amarillo plido

distancia distancia recorrida recorrida de del compuesto por el frente (cm) (cm) 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 10 10 10 10 10

Rf 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25

Cuadro 2. Calculo de Rf de tinta roja, tinta azul, extracto de naranja, extracto espinaca y extracto limn.

Tinta roja, tinta azul, extracto de naranja, extracto espinaca y extracto limn.
Distancia recorrida por el compuesto (cm) 6 6,5 7,25

V. yodo

UV

Luz visible

Distancia recorrida Rf por el frente (cm) 10 10 10 0,6 0,65 0,725

1A
1M-Tinta roja 1B 1C

negativo negativo negativo

Verde manzana Naranja intenso Naranja intenso

Rosado Fuccia fuccia claro

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1D 2M- Tinta azul 3MExtracto naranja 4MExtracto espinaca 2A 2B 3A 3B 4A 4B 5A 5B 5C

Positivo negativo Positivo Positivo negativo Positivo negativo Positivo negativo negativo

Naranja intenso incoloro verde claro verde claro azul claro verde claro azul claro azul claro azul claro azul claro

ocre azul claro ocre amarillo incoloro ocre incoloro incoloro incoloro incoloro

8 5 9,5 4 9,5 4 9,5 1,5 2,75 9,5

10 10 10 10 10 10 10 10 10 10

0,8 0,5 0,95 0,4 0,95 0,4 0,95 0,15 0,275 0,95

5MExtracto limon

4. Discusin de resultados: 1era parte: Anlisis de colesterol al 1,2 %: El anlisis determino que la muestra de colesterol est conformada por un solo compuesto, debido a que a diferentes concentraciones se obtuvo una sola mancha del mismo color (amarillo plido) y el clculo de Rf arrojo el mismo resultado para todas las concentraciones, por lo cual se verifica que no existe la presencia de otros compuestos y que a pesar de que el dimetro de la mancha vari debido a las diferentes concentraciones realizadas en prctica el Rf permanece igual debido a que los compuestos poseen la misma afinidad por la fase mvil y esta es independiente de la concentracin del analito. 2da parte: Anlisis de Tinta roja, tinta azul, extracto de naranja, extracto espinaca y extracto limn: El anlisis determino que los analitos estudiados estn conformados por varios compuestos, y se observo su capacidad de reaccin en presencia de Vapores de yodo (incoloro o amarillo plido), color de su Fluorescencia en presencia de rayos U.V y color frente a luz visible. Asimismo los resultados de Rf en la gran mayora de los compuestos fueron distintos. Cabe destacar que se pudo observar que existe una relacin entre los analitos (extracto naranja, extracto espinaca y extracto limn), debido a que en los resultados obtenidos sus compuestos (3B, 4B Y 5C) arrojaron los mismo resultados en V.P de yodo, rayos UV y color en presencia de luz visible, por lo cual se pudiese tratar de el mismo compuesto. 5. Conclusin: En la muestra analizada en la primera parte de la prctica el analito de colesterol al 1,2% es una muestra pura y simple debido a que se pudo observar que el analito est conformado por un solo compuesto y que su Rf es el mismo para todas las concentraciones. Con respecto a la segunda practica se determino que los

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analitos estudiados (Tinta roja, tinta azul, extracto de naranja, extracto espinaca y extracto limn) son sustancias complejas y no puras debido que estn conformadas por varios compuestos y poseen distintos Rf, seguidamente se pudo observar que existe una relacin entre los analitos (extracto naranja, extracto espinaca y extracto limn), debido a que en los resultados obtenidos sus compuestos (3B, 4B Y 5C) arrojaron los mismo resultados en V.P de yodo, rayos UV y color en presencia de luz visible, seguidamente para verificar la acertividad de esta relacin se sugiere la revisin de bibliografa en donde otros investigadores hayan realizado pruebas con los analitos estudiados en prctica o buscar en tablas los analitos estudiados con los mismos resultados en prctica en libros o publicaciones acreditadas. Por ltimo la CCF es un anlisis cualitativo de rpida manipulacin y obtencin rapida de resultados lo cual segn (Abbott D. Et al. 1973) se verifica que permite una enseanza mucho ms fcil de la cromatografa, donde esta otorga al estudiante una herramienta ms para el anlisis de productos agrcolas. 6. Bibliografa Abbott, D. y Andrews, R. 1973. Introduccin a la cromatografa. Madrid, Espaa, Alhambra. Pag 1; 33; 49-60. Scheinvar, L. Et al, 2011. Estado del conocimiento de las especies del Nopal (Opuntia spp.) Productoras de Xconostles silvestres y cultivadas. Instituto de Biologia UNAM. (21 Oct 2013) [En lnea]

http://www.biodiversidad.gob.mx/genes/centrosOrigen/Opuntia/Informe_Final/I nforme%20final%20Opuntia.pdf Mennickent, S., Et al. 2000. Desarrollo de un mtodo por cromatografa en capa fina instrumental para anlisis cuantitativo de acido acetilsalcilico. Boletin de la sociedad chilena de qumica. Vol. 45, N 4 concepcion. (21 Oct 2013) [En lnea] http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S036616442000000400015&lang=pt. 7. Anexos REALICE UN BREVE RESUMEN DE LA SEPARATA QUE SE PRESENTA A CONTINUACION: Resumen: Las especies de Opuntia son de gran importancia en la biodiversidad de mexico, gran parte de estas especies silvestres estn en peligro de extincin debido al desplazamiento por parte de las actividades humanas y al cambio climatico (Scheinvar, L., et al. 2011), adems segn (Rodriguez, S., et all 2012) diversos autores han hecho referencias sobre sus posibles beneficios para la industria alimentaria y farmacutica, por este orden de ideas (Rodriguez, S., et all 2012) realizacin un trabajo de investigacin aplicando cromatografa de capa fina o cromatografa de capa delgada en la caracterizacin de musilago de (Opuntia hyptiacantha) con la finalidad de caracterizar sus polisacridos, en la metodologa empleada se usaron CCF con lavados y sin lavados a temperatura ambiente, 65C, 75C y 83C a diversas concentraciones de nopal con H2O (sin H2O,
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(1:1), (1:2) durante un tiempo de (0 min, 1 hora y 2 horas), Nopal en concentraciones H2O con etanol a 50% y 80% sin temperatura y tiempo de extraccin y musilago en polvo en concentraciones de etanol a 96%. Cabe destacar que la concentracin de agua afecto considerablemente la concentracin de monosacridos, polisacridos y cidos uronicos, por lo tanto para futuros anlisis se recomienda concentraciones de H2O (1:1) para obtener resultados confiables, de las CCF empleadas la ms eficiente fue la CCF con musilago precipitado con etanol al 96% debido a que logra precipitar el polisacrido sin la presencia de los monosacridos y los cidos uronicos, trayendo como consecuencia que est listo para estudios de importancia a nivel de agroindustria y la industria farmacutica.

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