Sunteți pe pagina 1din 31

GENETICA MEDICINA DENTARA

CURS

2 10 octombrie 2012

AUTOR: PROF.DR. EMILIA SEVERIN UMF Carol Davila Bucuresti

Experimentele de identificare si descriere a materialului genetic la Ek au demonstrat rolul genetic al ADN:

ADN este molecula EREDITATII


Principiul transformarii genetice si transferul experimental de material genetic intre specii diferite stau la baza unei BIOTEHNOLOGII denumita:

TEHNOLOGIA ADN RECOMBINANT


Ansamblul de metode si mijloace folosit pentru obtinerea moleculelor de ADN recombinant.

(ADN in VITRO si era ingineriei genetice)


GENETICA MD
CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

TEHNOLOGIA ADN RECOMBINANT


ADN RECOMBINANT (rDNA)

Se obtine prin utilizarea tehnicilor de laborator, tehnici prin care se manipuleaza informatia genetica.

Este o molecula ADN care rezulta din unirea unor fragmente ADN cu origini diferite
(o molecula ADN, artificial creata, care poate modifica genomul si schimba fenotipul unui organism).

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

Constructia moleculelor de

ADN RECOMBINANT ETAPE


1. Obtinerea fragmentelor ADN de interes (gene) prin sectionarea moleculei ADN cu enzime de RESTRICTIE (endonucleaza) la nivelul situsului de recunoastere;

2. Inserarea fragmentului ADN de interes intr-un VECTOR pentru a fi introdus in celula gazda unde va fi multiplicat;

3. Fragmentele ADN sunt legate intre ele pentru a forma o secventa continua cu ajutorul enzimei LIGAZA.

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

Constructia moleculelor de

ADN RECOMBINANT - ETAPE


SITUS de RESTRICTIE

ADN specia A

SECTIONARE
enzima de restrictie

Capete adezive

ADAUGAREA FRAGMENTULUI ADN de la specia B

ADN specia B

UNIREA celor doua fragmente ADN

enzima LIGAZA

GENETICA MD

Molecula de ADN RECOMBINANT

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

Constructia moleculelor de

ADN RECOMBINANT

Enzime de RESTRICTIE

ADN exogen

Fragmente ADN

Enzime de RESTRICTIE

Unirea capetelor cu LIGAZE

ADN recombinant
PLASMID

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

ADN RECOMBINANT

Molecula de ADN RECOMBINANT introdusa in celule gazda:


- celule vii in culturi celulare

este

(E.coli, Drojdia de bere, celule de mamifer)

- in zigoti - in celule stem embrionare

SCOP: transfer de caractere noi, peste barierele naturale, celulelor sau organismelor.

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

ADN RECOMBINANT

Molecula de ADN RECOMBINANT incorporata in celula gazda este capabila sa se replice si sa se exprime;
De regula, ADN RECOMBINANT este inserat intr-un VECTOR .
Vectorul este o molecula naturala de ADN utilizata pentru:
- transportul secventelor ADN exogen intr-o celula gazda; - abilitatea de a se replica independent, formand clone moleculare.

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

ADN RECOMBINANT
Aplicatii practice in MEDICINA
PROTEINE TERAPEUTICE
Produse de ANIMALE TRANSGENICE

VACCINURI

MEDICAMENTE
Obtinute prin sinteza bacteriana

ANIMALE KNOCKOUT
utilizate pentru studiul functiei unor gene umane si modelarea unor boli umane

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

ANIMALE TRANSGENICE

Sunt organisme transformate genetic prin introducerea in momentul fertilizarii a unei noi informatii genetice (gena);

Animalul transgenic exprima fenotipic noua informatie genetica si o transmite descendentilor sai.
SOARECELE URECHE*

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

10

ANIMALE TRANSGENICE
Obtinerea animalelor transgenice
1. Secventa de ADN exogen (transgena) 2. Zigot recent fertilizat 3. Microinjectia in pronucleul masculin al unui zigot recent fertilizat 4. Animal transgenic cu un mozaic de celule transformate/ netransformate 5. Animal transgenic complet: celulele transformate contribuie la formarea liniei germinale si transgena este transmisa in generatia urmatoare

A D N

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

11

ANIMALE KNOCK-OUT

ANIMAL KNOCK-OUT animal model de laborator, obtinut prin introducerea in celulele stem embrionare a unei informatii genetice (gena) modificata (se inactiveaza expresia acelei gene).

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

12

EREDITATE

INFORMATIA GENETICA

ADN

STOCARE

EXPRIMARE

REPLICARE

CODON

TRANSMITERE

TRANSCRIPTIE

ARN
Diviziune celulara

TRANSLATIE

PROTEINA

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

13

CUM ESTE ORGANIZAT ADN PENTRU A INDEPLINI URMATOARELE FUNCTII?


1. STOCAREA informatiei genetice 2. EXPRIMAREA informatiei genetice 3. REPLICAREA si TRANSMITEREA informatiei genetice 4. VARIATIA informatiei genetice

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

14

DESCOPERIREA STRUCTURII
REGULILE LUI CHARGAFF

ADN

(REGULILE IMPERECHERII BAZELOR AZOTATE)

E.CHARGAFF arata ca, indiferent de specie, in molecula ADN: Totalul bazelor purinice = Totalul bazelor pirimidinice

G = T

Raportul dintre suma adeninelor si suma timinelor este unitar; Raportul dintre suma guaninelor si suma citozinelor este unitar;
(PRINCIPIUL ECHIVALENTEI)

T A G

= G + +

Raportul de asimetrie :

*este diferit de la o specie la alta, dar caracteristic pentru fiecare specie.


GENETICA MD
La specia umana este ~ 1,6. CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

T = 1* C

15

DESCOPERIREA STRUCTURII

ADN

DIFRACTIA CU RAZE X a MOLECULEI ADN

M.H.WILKINS si R.FRANKLIN studiaza structura moleculelor ADN folosind o tehnica bazata pe difractia cu raze X. Concluzia: Molecula ADN are o structura ordonata care se repeta, elicoidala.

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

16

MODELUL WATSON&CRICK:

DUBLA ELICE

CARACTERISTICILE MOLECULEI ADN


1. Molecula ADN este alcatuita din 2 lanturi polinucleotidice legate intre ele prin punti de H care se formeaza la nivelul bazelor azotate (b.a.). 2. Imperecherile 3. Diametrul

intre b.a. se realizeaza in mod complementar.

moleculei ADN este de 2 nm.

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

17

MODELUL WATSON&CRICK:
5 3

DUBLA ELICE

CARACTERISTICI MOLECULEI ADN


4. Catenele se infasoara una in jurul celeilalte (plectonemic) printr-o rotatie spre dreapta ; intre perechile de b.a. succesive exista o distanta de 0,34 nm, iar un tur complet de spira (3600) are 3,4 nm (pasul elicei), deci 10 b.a. /tur de spira.

5. Cele doua catene sunt antiparalele avand polaritati


opuse.

5
2 nm

6. Spatiul dintre coloana fosfoglucidca a unei catene si a celeilalte catene nu este uniform ocupat de b.a., astfel ca, prin rasucirea catenelor apar depresiuni (santuri) inegale ca marime; la nivelul depresiunii mari se fixeaza factorii proteici implicati in transcriptie iar in depresiunea mica se fixeaza histonele.

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

18

MODELUL WATSON&CRICK:

DUBLA ELICE

Modelul structurii ADN a fost unanim acceptat de lumea stiintifica din urmatoarele motive:

Este universal valabil in lumea vie;

Corespunde functiilor materialului genetic;

Este considerat forma clasica a structurii ADN numita B-ADN.

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

19

STRUCTURA MOLECULEI ADN

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

20

DEZOXIRIBONUCLEOTID
Unitatea structurala a moleculei ADN este DEZOXIRIBONUCLEOTIDUL, format din trei elemente distincte:
3.GRUP FOSFAT

PO4

1.BAZA AZOTATA

BAZA
5

CH2 2. PENTOZA
(dezoxiriboza) 1

OH

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

21

DEZOXIRIBONUCLEOTID
nomenclatura

Cele 3 elemente distincte (b.a., pentoza si grupul fosfat) se asambleaza intre ele prin legaturi covalente formand:l

BAZA AZOTATA + DEZOXIRIBOZA =

NUCLEOZID + GRUP FOSFAT =

NUCLEOZID

NUCLEOTID

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

22

DEZOXIRIBONUCLEOTID

ADENOZINA NUCLEOZID

ADENOZINMONOFOSFAT (AMP) NUCLEOTID

ADENOZINMONOFOSFAT (AMP) NUCLEOTID

ADENOZIN-DIFOSFAT (ADP) NUCLEOTID

GENETICA MD

23 CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

CATENA (LANTUL) ADN


(STRUCTURA PRIMARA)
Capatul 5

Polimerizarea nucleotidelor prin legaturi 3 5 fosfodiester formeaza o CATENA ADN (lant polinucleotidic), liniara si neramificata. Sensul de citire a informatiei genetice este determinat de polaritatea 5 3 a catenei ADN:

NUCLEOTID 1

Legatura FOSFODIESTER

A
NUCLEOTID 2

C
NUCLEOTID 3

5 TACG 3

Legatura FOSFODIESTER

G
NUCLEOTID 4
Capatul 3

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

24

MOLECULA ADN
(STRUCTURA SECUNDARA)
5
Punti de HIDROGEN

Molecula ADN este formata din doua catene polinucleotidice legate intre ele prin b.a., in mod complementar.

Perechea de baze G C se leaga prin trei punti de hidrogen slabe.

Perechea de baze A T se leaga prin doua punti de hidrogen slabe.

5
CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

GENETICA MD

25

STRUCTURA MOLECULEI ADN

DEZOXIRIBOZA

NUCLEOTIDE

GRUP FOSFAT

COMPLEMENTARITATEA BAZELOR AZOTATE

Copyright 2006 Pearson Prentice Hall, Inc.

GENETICA MD

26

ALTERNATIVE STRUCTURALE ALE MOLECULEI ADN


Molecula ADN poate avea conformatii diferite;
Conformatia adoptata depinde de:
- tipul de orientare

a rotatiei, spre dreapta sau spre stanga

1.B-ADN (conformatia
biologica principala, caracteristica celulelor vii)

- modificarea - conditiile de

umiditate

pasului elicei si nr.de baze/tura de elice

2.A-ADN

- concentratia

- inclinarea bazelor

3.Z-ADN
( coloana fosfo-glucidica in zig-zag)

ionica

azotate fata de ax

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

27

ALTERNATIVE STRUCTURALE ALE MOLECULEI ADN


CONFORMATII STRUCTURALE ALE MOLECULEI ADN CONFORMATIA

A
Orientarea dublei elice Diametrul elicei spre dreapta (dextrogir) 2,3 nm

B
spre dreapta (dextrogir) 2,0 nm

Z
spre stanga (levogir) 1,8 nm

Numarul de baze/tura elice

11

10

12

Distanta intre p.b Pasul elicei

0,26 nm 2,82 nm

0,34 nm 3,32 nm

0,38 nm 4,56 nm

Santul mare

Ingust si foarte adanc

Larg si adanc

Ingust si adanc (similar santului mic) Ingust si adanc

Santul mic

Larg si putin adanc

Ingust si adanc

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

28

ALTERNATIVE STRUCTURALE ALE MOLECULEI ADN


B-ADN A-ADN Z-ADN

Sant mare

Sant mic

Sant

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

29

REFERINTE ELECTRONICE
Pentru ilusrarea experimentelor si a mecanismelor moleculare prezentate s-au preluat imagini din domeniul public (internet).

SURSE http://images.google.com www.google.com http://www.juliantrubin.com/bigten/dnaexperiments.html http://nucleus.cshl.org/CSHLlib/DNAinNY/Case5/Case_5.htm http://www.allometric.com/tom/courses/bil255/bil255goods/09_dna.html https://wikispaces.psu.edu/display/230/DNA+and+Chromosomes https://deltawire.delta.ncsu.edu/around-campus/making-metabolism-easier-to-digest/ http://www.stolaf.edu/people/giannini/flashanimat/molgenetics/transcription.swf http://www.mun.ca/biology/desmid/brian/BIOL2060/BIOL2060-19/CB19.html

Pentru clarificarea unor probleme legate de tematica predata la curs se pot trimite intrebari la adresa: geneticaintrebari@gmail.com

GENETICA MD

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright-ES

30

NE REVEDEM SAPTAMANA VIITOARE !

Miercuri 17 octombrie