Sunteți pe pagina 1din 30

UNIVERSITATEA DIN BUCURETI

FACULTATEA DE FIZIC

CONTRIBUII LA STUDIUL FLUORESCENEI CA


AMPRENT SPECTRAL A MATERIEI ORGANICE
DIN SISTEMELE ACVATICE

REZUMAT
CONTRIBUTIONS TO THE STUDY OF THE ORGANIC MATTER
FROM THE AQUATIC SYSTEMS BY FLUORESCENT
FINGERPRINTS
4 0 0 .0 0

1000
9 6 3 .0 1

3 7 5 .0 0

a v e le n g t h
W

Intensity (a.u.)

( n m

8 8 9 .0 2

800

8 1 5 .0 4

3 5 0 .0 0
3 2 5 .0 0

7 4 1 .0 6
6 6 7 .0 7

600

5 9 3 .0 9

3 0 0 .0 0

5 1 9 .1 1

400

4 4 5 .1 2

2 7 5 .0 0
2 5 0 .0 0

3 7 1 .1 4
2 9 7 .1 6

200

2 2 3 .1 7
1 4 9 .1 9

2 2 5 .0 0
2 0 0 .0 0

0
3 0 0 .0 0

7 5 .2 1

300

3 2 5 .0 0

3 5 0 .0 0

350

400
3 7 5 .0 0
4 0 0 .0 0
4 2 5 .0 0
W avelength
(nm)

4 5 0 .0 0

450

4 7 5 .0 0

5 0 0 .0 0

1 .2 2
500

W a v e le n g t h ( n m )

DOCTORAND,
Elfrida Mihaela CRSTEA

CONDUCTOR TIINIFIC,
Prof. Dr. Aurel POPESCU

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

2010

CUPRINS (AL TEZEI INTEGRALE)

LIST DE ABREVIAII____________ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND


INTRODUCERE__________________ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND
CAPITOLUL I. SPECTROSCOPIA DE FLUORESCEN_____ERROR: REFERENCE
SOURCE NOT FOUND

I.1 FACTORI CARE AFECTEAZ INTENSITATEA FLUORESCENEI _____ERROR: REFERENCE


SOURCE NOT FOUND

I.1.1 STINGEREA FLUORESCENEI____________ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND


I.1.2 CONCENTRAIA I EFECTUL DE AUTOABSORBIE__ERROR: REFERENCE SOURCE NOT
FOUND

I.1.3 INFLUENA VALORILOR DE PH ASUPRA FLUORESCENEI_______ERROR: REFERENCE


SOURCE NOT FOUND

I.1.3 INFLUENA SALINITII ASUPRA FLUORESCENEI__ERROR: REFERENCE SOURCE NOT


FOUND

I.2 TEHNICI DE NREGISTRARE A SPECTRELOR DE FLUORESCEN ___ERROR: REFERENCE


SOURCE NOT FOUND

CAPITOLUL II. FLUORESCENA MATERIEI ORGANICE DIZOLVATE____ERROR:


REFERENCE SOURCE NOT FOUND
II.1 SUBSTANELE HUMICE_________________ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND
II.2 SUSBTANELE PROTEICE_______________ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND
II.3 POLUANI___________________________ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND
II.4 CAPACITATEA MATERIEI ORGANICE DE A FORMA COMPLECI CHIMICI ______ERROR:
REFERENCE SOURCE NOT FOUND

CAPITOLUL III. METODOLOGIE____ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND


III.1 EXPERIMENTUL PE RUL BOURN BROOK__ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND
III.2 EXPERIMENTUL PE CANALUL WORCHESTER AND BIRMINGHAM_ERROR: REFERENCE
SOURCE NOT FOUND

III.3 EXPERIMENTUL

PE BAZINUL INFERIOR

ARGE____ERROR: REFERENCE SOURCE NOT

FOUND

CAPITOLUL IV. REZULTATE I DISCUII__ERROR: REFERENCE SOURCE NOT


FOUND

IV.1 AMPRENTE SPECTRALE ALE DIFERITELOR TIPURI DE APE ______ERROR: REFERENCE


SOURCE NOT FOUND

IV.2 CARACTERIZAREA

MATERIEI ORGANICE DIZOLVATE PRIN MONITORIZARE


CONTINU A UNUI SISTEM ACVATIC URBAN STUDIU DE CAZ, RUL BOURN BROOK
______________________________________ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND

IV.2.1 MONITORIZAREA CONTINU, LA SCAL ORAR, A CALITII APEI_________ERROR:


REFERENCE SOURCE NOT FOUND

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

IV.2.2 MONITORIZAREA N TIMP REAL A CALITII APEI_ERROR: REFERENCE SOURCE NOT


FOUND

IV.3. CARACTERIZAREA

MATERIEI ORGANICE DIZOLVATE PRIN MONITORIZARE


CONTINU A UNUI CANAL NAVIGABIL STUDIU DE CAZ, CANALUL WORCHESTERBIRMINGHAM___________________________ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND

IV.3.1 MONITORIZAREA CONTINU A APEI_____ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND


IV.3.2 STUDIUL ASUPRA INFLUENEI NAVIGAIEI______ERROR: REFERENCE SOURCE NOT
FOUND

IV. 4. IMPACTUL ANTROPIC ASUPRA RURILOR STUDIU DE CAZ, BAZINUL ARGE


______________________________________ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND
IV.4.1. REZULTATELE FIZICO CHIMICE______ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND
IV.4.2. REZULTATELE SPECTROFOTOMETRICE__ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND
IV.4.3. CORELAIA MSURTORILOR DE FLUORESCEN CU PARAMETRII STANDARD
_____________________________________ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND

CONCLUZII_____________________ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND


BIBLIOGRAFIE__________________ERROR: REFERENCE SOURCE NOT FOUND

INTRODUCERE

Apa este o substan comun, totui viaa nu poate exista far aceasta,
fiind component major a tuturor fiinelor. Avnd n vedere impactul
semnificativ pe care l are apa asupra sntii, este imperativ studiul calitii
acesteia. n ultimele decenii, s-au dezvoltat tehnici din ce n ce mai avansate, nu
numai pentru caracterizarea calitii apei, ci i a componentei prezente n toate
sistemele acvatice: materia organic dizolvat (engl. DOM) (Coble, 1996;
Baker i alii, 2003). O tehnic nou, spectroscopia de fluorescen, care a fost
aplicat cu succes n biologie, medicin sau chimie, a devenit o abordare
promitoare pentru evaluarea compuilor organici acvatici i a poluanilor
organici, datorit rapiditii si sensibilitii de analiz. Spectroscopia de
fluorescen, sub form de matrice de excitaie emisie (engl. EEM), spectru de
fluorescen sincron (engl. SFS) i fluorescen indus laser (engl. LIF), poate
fi folosit pentru a determina concentraia si compoziia DOM.
Din cadrul amestecului hetorogen al DOM, doar proteinele i substanele
humice sunt studiate, n general, prin fluorescen. Fluorescena proteinelor este
dat de aminoacizii aromatici: fenilalanin, tirozin i triptofan, indicnd
activitatea comunitilor bacteriene din ap (Cammack i alii, 2004; Elliot i
alii, 2006). Fluorescena substanelor humice indic degradarea plantelor i
animalelor prin procese biologice i chimice n mediile terestre i acvatice
(Elkins i Nelson, 2001; Stedmon i Markager, 2003; Patel-Sorrentino i alii,
2002). Datorit dificultilor asociate cu identificarea compuilor fluoresceni
3

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

individuali, aceste grupuri de fluorofori sunt denumite generic ca fiind atribuite


substanelor humice sau atribuite proteinelor (mai exact atribuite triptofanului
sau tirozinei). Grupurile sunt denumite, n acest mod, deoarece fluorescena
acestora apare n acelai spaiu optic cu standardele acestor materiale (Hudson
i alii, 2007).
n ciuda aplicrii frecvente a fluorescenei la analiza calitii apei, n
ultimii 10 ani, doar cateva studii s-au axat pe monitorizarea continu i in-situ,
din cauza lipsei aparatelor necesare. Spencer i alii (2007) i Downing i alii
(2009) au fost singurii care au aplicat spectroscopia de fluorescen pentru
monitorizarea sistemelor de ap dulce, dar cercetarea lor a fost limitat de
utilizarea unui fluorimetru cu o lungime de und fix, evalund numai
componenta atribuit substanelor humice, i de analiza la o frecven redus.
Astfel, acest studiu i-a propus s caracterizeze, pentru prima oar, att
componenta microbian ct i cea humic, utiliznd monitorizarea continu prin
fluorescen, la frecven mare. Rezultatele acestei teze urmresc s contribuie
la inelegerea caracterului DOM i influena antropic asupra calitii apei
folosind spectroscopia de fluorescen, n corelaie cu parametrii standard
chimici i biologici. Cercetrile s-au axat pe trei sisteme acvatice: un sistem
acvatic natural (rul Bourn Brook), un sistem artificial (canalul navigabil
Worchester - Birmingham) i un ru poluat (bazinul inferior al rului Arge).
Monitorizarea continu i in-situ, folosind matrici de excitare emisie (engl.
EEM), reprezint o metod inovativ de analiz a variabilitii calitii apei.
n primul capitol al tezei, Spectroscopia de fluorescen, sunt descrise
principiile de baz ale spectroscopiei de fluorescen, mpreun cu factorii care
afecteaz semnalul de fluorescen. Se prezint cum modificri ale valorilor de
pH, temperatur, concentraie sau salinitate pot s influeneze intensitatea i
lungimile de und de excitare i emisie ale spectrelor de fluorescen. De
asemenea, se indic metodele de nregistrare a spectrelor de fluorescen (i
anume, EEM, SFS sau LIF).
Capitolul doi, Fluorescena materiei organice dizolvate, trateaz stadiul
actual al cercetrilor pe DOM acvatic. Sunt detaliate caracteristicile
fluorescenei ale compuilor proteici i humici, prin prezentarea
comportamentului acestora, att n mediul natural ct i n stare izolat. De
asemenea, se relateaz proprietile produselor petroliere i pesticidelor, fiind
cunoscut impactul semnificativ al acestora asupra calitii apei. Similar, este
evideniat influena ionilor metalici asupra fluorescenei materiei organice.
Capitolul trei, Metodologie, prezint protocolul i zona de prelevare
pentru toate experimentele. n cazul monitorizrii continue, probele au fost
colectate folosind un autoprelevator, care a fost instalat pe malul rului.
Msurtorile n timp real au fost realizate folosind un montaj original, bazat pe
un fluorimetru de laborator cuplat cu o fibr optic. n plus, sunt descrii
parametrii de fluorescen i msurtorile standard.
4

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

n capitolul patru, Rezultate i discuii, sunt ilustrate i comparate


amprentele de fluorescen pentru diferite sisteme acvatice, prin analiza
indicilor de fluorescen specifici. Rezultatele acestui subcapitol (Amprente
spectrale ale diferitelor tipuri de sisteme acvatice) au fost publicate (mpreun
cu membrii grupului de la Institutul Naional de Optoelectronic) n revista
Environmental Engineering and Management Journal, n 2009. Amprentele de
fluorescen au fost incluse ntr-o baz de date, care a servit ca punct de pornire
pentru studiile de monitorizare continu i detecie a contaminanilor.
Subcapitolul, Caracterizarea materiei organice dizolvate prin
monitorizare continu a unui sistem acvatic urban studiu de caz, rul Bourn
Brook, se axeaz pe evaluarea caracteristicilor materiei organice, la scal orar,
explornd posibilitatea monitorizrii n timp real i in situ. Msurtorile n timp
real au artat c exist pulsuri de poluare, la fiecare or, pe timpul zilei,
evideniate prin cantiti mari de DOM. Datorit nregistrrilor n timp real, s-a
putut detecta i investiga poluarea cu motorin a rului. Mai mult, s-a pus n
eviden influena precipitaiilor asupra compuilor humici i proteici. Datele,
obinute n urma monitorizarii continue, au fost publicate (mpreun cu membrii
grupului de la Universitatea din Birmingham i Institutul Naional de
Optoelectronic) n revista Hydrological Processes, n 2009, iar rezultatele
studiul de monitorizare n timp real, au fost acceptate spre publicare n revista
Water Research, n 2010.
Cel de-al treilea subcapitol intitulat, Caracterizarea materiei organice
dizolvate prin monitorizare continu a unui canal navigabil studiu de caz,
canalul Worchester-Birmingham, dezbate tema variabilitii DOM n canale
artificiale, avnd n vedere c, pn n prezent, nu s-a realizat niciun studiu
pentru analiza calitii apei din canale, prin spectroscopia de fluorescen. De
asemenea, se discut influena navigaiei asupra fraciunilor DOM, n corelaie
cu parametrii standard.
Ultimul subcapitol, Impactul antropic asupra rurilor studiu de caz,
bazinul Arge, prezint rezultate care au fost publicate (mpreun cu membrii
grupului de la Universitatea din Birmingham i Institutul Naional de
Optoelectronic) n revista Journal of Optoelectronics and Advanced Materials,
n 2008. Aceast seciune se axeaz pe impactul antropic asupra calitii apei
din ruri, prin analiza spectrelor de fluorescen ale deeurilor menajere
deversate din Bucureti, n rul Dmbovia. S-au investigat variabilitatea
sezonier i orar a contaminrii cu ape menajere urbane i procesele de
autopurificare. Studiile ntreprinse au pus n eviden corelaia datelor de
fluorescen cu parametrii biologici i chimici, care au sugerat posibilitatea
utilizrii spectroscopiei de fluorescen ca metod surogat pentru tehnicile
standard.

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

Teza se ncheie cu prezentarea concluziilor principale i a perspectivelor


de viitor, n vederea mbuntirii metodelor de caracterizare a calitii apei i a
deteciei rapide a contaminanilor.

METODOLOGIE

Pentru a obine amprente de fluorescen, specifice diferitelor tipuri de


sisteme acvatice, probele de ap au fost colectate din: ruri curate (zon
montan), ruri urbane, canale (zon urban), iazuri, lacuri (zon rural), ruri
rurale, ape pluviale (zon urban) i ruri afectate de ape menajere (engl.
sewage impacted rivers SIR). Msurrile continue de fluorescen au fost
realizate folosind un fluorimetru de laborator (Varian Cary Eclipse), pe probe
colectate la fiecare or, pe o perioad de 14 zile. Probele au fost masurate n
maxim 24 ore de la colectare. Masurtorile n timp real au fost realizate in situ,
la fiecare 3 min, utiliznd un montaj original format dintr-un fluorimetru de
laborator, la care s-a cuplat o fibr optic. S-au stabilit urmtorii parametrii
pentru nregistrarea spectrelor de fluorescen: domeniu pe lungimile de und de
excitare 200 400 nm cu pai de 5 nm, domeniu pe lungimile de und de emisie
280 500 nm cu pai de 2 nm, fante de excitare i emisie 5 nm, timp de
integrare 0,0125 s.
Influena antropic asupra rurilor a fost pus n eviden prin
fluorescena indus laser (engl. LIF). Spectrele LIF au fost nregistrate cu un
sistem spectrograf Shamrock i CCD cu intensificator de imagine. Ca surs de
excitare a fost folosit un laser YAG-Nd (lungime de und 266 nm, frecven 10
Hz, durat a pulsului 3-6 ns). Procedurile necesare de filtrare i depozitare au
fost aplicate probelor, n funcie de experiment.

REZULTATE I DISCUII

Rezultatele prezetate, n aceast lucrare, au ca obiectiv contribuia la


studiul materiei organice dizolvate din sistemele acvatice. Prima faz a studiului
a inclus colectarea amprentelor spectrale, care reprezint o baz de date cu
spectre de fluorescen pentru diverse tipuri de sisteme acvatice, permind
caracterizarea DOM i identificarea unor anumii contaminani. Pe baza acestui
studiu, s-a putut realiza urmtorul experiment, care a vizat monitorizarea
continu a calitii apei. Aceasta este prima monitorizare continu a unui sistem
6

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

acvatic, folosind spectroscopia de fluorescen. Scopul principal al studiului a


fost evaluarea caracteristicilor DOM la scal orar i impactul precipitaiilor
asupra compoziiei i concentraiei DOM. Urmtorul pas, dup monitorizarea
orar, a presupus monitorizarea n timp real i in situ, care a permis detecia
rapid a unei poluri cu motorin i alertarea Ageniei de Mediu, n vederea
decontaminrii.
Cel de-al patrulea experiment a implicat tot monitorizare continu prin
fluorescen, dar pe un sistem artificial, mai exact, pe un canal navigabil. Acesta
este primul studiu de monitorizare prin fluorescen a unui canal. Cercetarea a
avut ca scop examinarea caracteristicilor DOM ntr-un sistem cu vitez foarte
scazut de curgere a apei i determinarea influenei navigaiei asupra calitii
apei. Navigaia ar putea modifica cantitatea de biomas, ciclul nutrienilor i
implicit proprietile DOM.
Avnd n vedere c experimentele menionate mai sus s-au realizat pe
sisteme urbane cu surse minore de poluare, s-a considerat necesar aplicarea
fluorescenei (fluorescena indus laser) la analiza apei din ruri foarte
contaminate. Monitorizarea bazinului inferior al rului Arge a artat impactul
apelor menajere netratate asupra calitii rului, dar i precesele de
autopurificare, de la punctul de confluen ale rurilor Dmbovia i Arge pn
la vrsarea n Dunre.
AMPRENTE SPECTRALE ALE DIFERITELOR TIPURI DE APE
Pentru identificarea tipului de poluare ntr-un sistem acvatic, este
necesar stabilirea caracteristicilor naturale ale apei, cantitatea i calitatea DOM
i proporiile relative ale compuilor microbieni i teretrii. n acest sens, s-a
realizat un set de EEM pentru probe colectate din diverse sisteme acvatice, cu
caracteristici similare (canal iaz lac) i cu caracteristici diferite (ape pluviale
ru curat, ru urban ru rural, SIR, ru poluat cu Diesel). Rezultatele
obinute n acest studiu au fost prezentate, n detaliu, ntr-o lucrare publicat n
Environmental Engineering and Management Journal, Romanian Reports in
Physics i n Proc. International Symposium The Environment and Industry
SIMI 2009 (Crstea i alii, 2009; Ghervase i alii, 2010; Cristescu i alii,
2009). Spectrele de fluorescen pentru diverse tipuri de ap (Fig. 1) au
prezentat caracteristici distincte pentru fiecare prob, prin form i intensitate,
corespunznd fluoroforilor tipici (substanele humice cu maximele A i C i
componenta proteic, cu maximele T1, T2 i B).
Maximul A este prezent n toate spectrele de fluorescen avnd forme
specifice pentru fiecare prob. Maximul are un domeniu de excitare mai larg
pentru probele colectate din lacuri i iazuri i o band mai ngust la spectrele
de canal i rul urban. Spectrul apei curate arat doar fluorescena substanelor
humice (maxim A). Componenta humic are maxime de fluorescen mai
7

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

intense la probele cu impact antropic (ru afectat de ape menajere i ape


pluviale) i aport terestru alohton. S-au detectat cantiti semnificative de
substane humice la probele de lac i iaz datorit contribuiei mai multor ruri,
care aduc cantiti mari de materie organic. Cel de-al doilea maxim atribuit
substanelor humice, maximul C, nu se observ la spectrul de fluorescen al
probei din canal, dar este prezent n toate celelalte spectre de fluorescen.
Semnalul de fluorescen este foarte ngust la spectrul rului urban i foarte larg
la proba din lac.

W
2 5 0 .0 0
2 2 5 .0 0
2 0 0 .0 0

3 0 0 .0 0

9 6 2 .9 4

7 3 7 .3 3
6 6 2 .2 8
5 8 7 .2 3
5 1 2 .1 8
4 3 7 .1 3
3 6 2 .0 9

8 1 2 .3 8

3 5 0 .0 0
3 2 5 .0 0

2 8 7 .0 4

7 4 0 .6 1

5 9 2 .3 9
5 1 8 .2 8

400

350

400
5 .0 0
Wavelength4 2(nm)

3 7 5 .0 0

4 0 0 .0 0

4 5 0 .0 0

450

4 7 5 .0 0

5 0 0 .0 0

4 4 4 .1 6

2 7 5 .0 0

3 7 0 .0 5
2 9 5 .9 4

200

2 2 1 .8 3
1 4 7 .7 2

2 2 5 .0 0

6 1 .8 9
3 5 0 .0 0

6 6 6 .5 0

3 0 0 .0 0

2 5 0 .0 0

1 3 6 .9 4

3 2 5 .0 0

8 1 4 .7 2

600

2 1 1 .9 9

300

8 8 8 .8 3

800
Intensity (a.u.)

2 7 5 .0 0

1000

3 7 5 .0 0

8 8 7 .4 3
(n m

3 0 0 .0 0

4 0 0 .0 0

9 6 2 .4 8

a v e le n g t h

3 2 5 .0 0

T
T

(n m

3 5 0 .0 0

a v e le n g t h

3 7 5 .0 0

1000
140
800
500
140
800
700
300
120
250
100
500
120
200
200
120
800
600
600
250
400
100
600
200
600
100
400
80
100
500
150
150
200
600
80
300
150
80
80
400
400
300
400
60
400
150
100
60
100
400
60
300
100
200
200
40
100
40
200
50
40
200
200
50
50
200
100
100
50
100
20
20
0
0
0

4 0 0 .0 0

2 0 0 .0 0

500- 1 3 . 1 6

3 0 0 .0 0

7 3 .6 1

300

3 2 5 .0 0

3 5 0 .0 0

a) Clean river

)
7 3 4 .4 2
6 5 8 .5 4
5 8 2 .6 6
5 0 6 .7 8
4 3 0 .8 9
3 5 5 .0 1

2 7 5 .0 0

8 1 0 .3 0

2 5 0 .0 0
2 2 5 .0 0
2 0 0 .0 0

200
100
50
100
100
50
200
200
200
50
100
0
0
0
3 0 0 .0 0

3 5 0 .0 0
3 2 5 .0 0

T
T

3 0 0 .0 0

3 7 5 .0 0

8 8 6 .1 8

(n m

a v e le n g t h

3 2 5 .0 0

T
T

(n m

3 5 0 .0 0

9 6 2 .0 6

300
800
200
500
150
300
300
150
600
600
150
400
100
200
200
100
200
200
300
100
400
400
100
400

a v e le n g t h

150
400
600
200

2 7 9 .1 3

3 0 0 .0 0
2 7 5 .0 0
2 5 0 .0 0

2 0 3 .2 5
1 2 7 .3 7

2 2 5 .0 0

5 1 .4 9

300

3 2 5 .0 0

3 5 0 .0 0

350

400
5 .0 0
Wavelength4 2(nm)

3 7 5 .0 0

4 0 0 .0 0

4 5 0 .0 0

450

4 7 5 .0 0

5 0 0 .0 0

500- 2 4 . 3 9

2 0 0 .0 0

W
2 5 0 .0 0
2 2 5 .0 0
2 0 0 .0 0

1000
250
400
600
300
400
800
250
500

9 6 2 .5 7

3 7 5 .0 0

8 8 7 .7 2

300
800
500
200
800
250
300
400
200
300
600
400
400
200
600
600
150
200
300
150
200
300
300
150
200
400
400
400
100
400
200
100
200
200
100
100
100
200
200
200
100
100
50
200
50
100
50

7 3 8 .0 1
6 6 3 .1 6
5 8 8 .3 0
5 1 3 .4 5
4 3 8 .6 0
3 6 3 .7 4
2 8 8 .8 9
2 1 4 .0 4
1 3 9 .1 8

3 5 0 .0 0
3 2 5 .0 0

T
T

8 1 2 .8 7

0
0
3 0 0 .0 0

3 0 0 .0 0
2 7 5 .0 0
2 5 0 .0 0
2 2 5 .0 0

6 4 .3 3

300

3 2 5 .0 0

3 5 0 .0 0

350

400
5 .0 0
Wavelength4 2(nm)

3 7 5 .0 0

4 0 0 .0 0

W a v e le n g th (n m )

e) Pond

500- 0 . 5 0

8 8 8 .8 9
8 1 4 .8 1
7 4 0 .7 4
6 6 6 .6 7
5 9 2 .5 9
5 1 8 .5 2
4 4 4 .4 4
3 7 0 .3 7
2 9 6 .3 0
2 2 2 .2 2
1 4 8 .1 5
7 4 .0 7

300

3 2 5 .0 0

3 5 0 .0 0

350

400
5 .0 0
Wavelength4 2(nm)

3 7 5 .0 0

4 0 0 .0 0

4 5 0 .0 0

450

4 7 5 .0 0

5 0 0 .0 0

5000 . 0 0

d) Canal
4 0 0 .0 0

(n m

2 7 5 .0 0

5 0 0 .0 0

W a v e le n g th (n m )

a v e le n g t h

3 0 0 .0 0

4 7 5 .0 0

50
100
100
20
20
0
3 0 0 .0 0

3 2 5 .0 0

T
T

a v e le n g t h

)
(n m

3 5 0 .0 0

450

9 6 2 .9 6

c) Urban river
3 7 5 .0 0

4 5 0 .0 0

1000
160
400
400
120
300
200
140
500
800
150
400
250
100
300
120
300
400
150
600
600
100
200
300
80
100
200
300
200
80
100
150
400
400
60
200
60
200
100
200
40
200
100
50
40

W a v e le n g th (n m )

4 0 0 .0 0

4 0 0 .0 0

b) Rural river
4 0 0 .0 0

3 7 5 .0 0
)

1000
250
200

400
5 .0 0
Wavelength4 2(nm)

3 7 5 .0 0

W a v e le n g th (n m )

W a v e le n g th (n m )

4 0 0 .0 0

350

4 5 0 .0 0

450

4 7 5 .0 0

5 0 0 .0 0

500- 1 0 . 5 3

2 0 0 .0 0

1000
800
300
250
300
500
500
200
250
800
300
800
800
200
250
600
600
400
400
200
150
600
200
600
150
300
200
300
400
150
150
100
400
100
200
200
100
100
100
200
200
100
50
200
100
50
50

9 6 2 .6 2
8 8 7 .8 5
8 1 3 .0 8
7 3 8 .3 2
6 6 3 .5 5
5 8 8 .7 8
5 1 4 .0 2
4 3 9 .2 5
3 6 4 .4 8
2 8 9 .7 2
2 1 4 .9 5
1 4 0 .1 8
6 5 .4 2

0
0
3 0 0 .0 0

300

3 2 5 .0 0

3 5 0 .0 0

350

400
3 7 5 .0 0
4 0 0 .0 0
4 2 5 .0 0
Wavelength
(nm)

4 5 0 .0 0

450

4 7 5 .0 0

5 0 0 .0 0

500- 9 . 3 5

W a v e le n g th (n m )

f) Lake

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

4 0 0 .0 0

3 2 5 .0 0

T
T

(n m

3 5 0 .0 0

a v e le n g t h

3 7 5 .0 0

3 0 0 .0 0

2 7 5 .0 0
2 5 0 .0 0
2 2 5 .0 0

1000
300
800
300
500
400
800
300
250
800
300
250
600
400
200
300
600
600
600
200
200
200
300
150
400
200
150
400
400
400
400
400
100
200
100
100
200
100
200
200
200
200
200
50
100
50

2 0 0 .0 0
3 0 0 .0 0

9 6 2 .9 7
8 8 8 .9 1
8 1 4 .8 5
7 4 0 .7 9
6 6 6 .7 3
5 9 2 .6 7
5 1 8 .6 1
4 4 4 .5 5
3 7 0 .5 0
2 9 6 .4 4
2 2 2 .3 8
1 4 8 .3 2
7 4 .2 6

300

3 2 5 .0 0

3 5 0 .0 0

350

400
5 .0 0
Wavelength4 2(nm)

3 7 5 .0 0

4 0 0 .0 0

4 5 0 .0 0

450

4 7 5 .0 0

5 0 0 .0 0

5000 .2 0

W a v e le n g th (n m )

g) Surface runoff

h) Sewage impacted river

Figura 1. EEM de fluorescen pentru diverse sisteme acvatice


(A i C substane humice; B-tirozin, T1 i T2 triptofan).

Componenta microbian poate fi gsit n toate spectrele, cu excepia


rului curat, datorit influenei antropice i eutrofizrii. Se observ att maximul
de fluorescen atribuit triptofanului (maximele T1 i T2) ct i cel al tirozinei
(maxim B) la probele colectate din rul afectat de ape menajere (SIR).
Maximul T1 se gsete, n principal, la spectrele care aparin probelor foarte
contaminate, caracterizate prin activitate microbian crescut.
Forma spectrelor de fluorescen poate fi utilizat ca amprent spectral
cu scopul de a diferenia ntre sisteme acvatice, ns intensitatea compuilor
derivai terestru este, de asemenea, foarte eficient (Fig. 2) i microbian (Fig. 3).
Cel mai intens semnal de fluorescen al acestor compui a fost nregistrat la
proba colectat din rul cu impact antropic (SIR), n timp ce valoarea cea mai
mic a fost obinut pentru proba din ru curat. S-au detectat valori
semnificative de fluorescen la proba de ap pluvial, att pentru componenta
microbian ct i pentru cea terestr. Maximul T2 mare se datoreaz faptului c
apa pluvial a fost veche, iar comunitatea bacterian s-a dezvoltat n perioada
dintre ploaie i colectarea probei.
De asemenea, maximul T2 domin n spectrul de fluorescen al probei de
ap rural, cauzat de prezena deeurilor de la ferme, care sunt direct deversate
n ru. Maximul de fluorescen aparinnd compusului triptofan este mai puin
intens, pentru ape menajere de la ferme, dect cel pentru deeuri umane, care
sunt prezente n rurile afectate de ape menajere.

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

700

Peak T
Peak B

Fluorescence intensity (a.u.)

600

500

400

300

200

100

0
Clean river

Rural river

Urban river

Canal

Pond

Lake

Surface runoff

SIR

Sample type

Figura 2. Intensitatea fluorescenei pentru compuii derivai microbian:


triptofan T2 i tirozin B, SIR ru afectat de ape menajere.

Fluorescence intensity (a.u.)

500

Peak A
Peak C

400

300

200

100

0
Clean river

Rural river

Urban river

Canal

Pond

Lake

Surface runoff

SIR

Sample type

Figura 3. Intensitatea fluorescenei pentru compuii derivai terestru: substane humice,


maxime A i C, SIR ru afectat de ape menajere.

Caracteristicile materiei organice pot fi studiate mult mai riguros prin


calculul proporiilor relative dintre fraciunile microbiene i terestre, din
sistemele acvatice, folosind indici de fluorescen (Huguet i alii, 2009;
McKnight i alii, 2001): indice de humificare (HIX), indice biologic (BIX)
i indicele F450/F500.
Indicele de humificare poate fi calculat dup urmtoarea formul:
10

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

HIX =

( F
( F

330

F345 )

435

F480 )

(1)

unde F330 F345 i F435 F480 reprezint intensitatea de fluorescen n domeniul


indicat, cu lungime de und de excitare la 254 nm.
Cel de-al doilea indice de fluorescen, BIX, este calculat ca raportul ntre
intensitatea de fluorescen la 380 nm i 430 nm, cu excitare la 310 nm. Cei doi
parametrii pot fi utilizai ca o abordare complementar pentru studiul
caracterului materiei organice i pentru identificarea amprentei spectrale a
fiecarui sistem acvatic. Indicele F450/F500 a oferit informaii nesemnificative
comparativ cu HIX i BIX. Cel mai bun rezultat a fost obinut pentru proba SIR,
la care indicele F450/F500 a indicat originea microbian a materiei organice, n
timp pentru alte probe a dat rezultate neconcludente.
Acest studiu a prezentat prima evaluare si comparaie a parametrilor de
fluorescen pentru o identificare eficient a amprentelor de fluorescen ale
diverselor tipuri de sisteme acvatice, cu caracteristici similare sau diferite.
Indicii de humificare sau biologici au fost foarte eficieni n a diferenia ntre
tipurile de ap, mprindu-le n patru categorii: rurile curate i lacurile care
conin materie organic puternic humificat; rurile urbane, iazurile i apele
pluviale prezint grad de humificare mare dar i component microbian;
rurile rurale i canalul navigabil conin fraciune microbian mare i
cantiti sczute de component terestrial; rurile afectate de ape menajere
conin fraciune microbian semnificativ i cantiti sczute de component
terestrial.
Probele, cu cel mai mare grad de humificare, au fost cele prelevate din
ru curat i lac, datorit influenelor reduse de poluare difuz i lipsei de surse
de poluare n apropiere. Probele din iaz, ru urban i ap pluvial prezint grad
mare de humificare, dar sunt afectate de poluare difuz.
CARACTERIZAREA

MATERIEI
ORGANICE
DIZOLVATE
PRIN
MONITORIZARE CONTINU A UNUI SISTEM ACVATIC URBAN STUDIU DE CAZ,
RUL BOURN BROOK

Acest studiu a pus n eviden variabilitatea diurn a DOM, n perioade


cu i fr precipitaii, prin prima monitorizare continu a unui sistem acvatic, la
scal orar. Rezultatele acestui studiu au fost publicate n lucrrile: Continuous
fluorescence assessment of organic matter variability on the Bourn Brook
River, Birmingham, UK, E. M. Crstea, A. Baker, I. Boomer, G. Pavelescu,
Hydrological processes, 23, 19371946, 2009; Comparison between the
characteristics of DOM and nitrate content in an urban river, E. M.
Crstea, G. Pavelescu, L. Cristescu, D. Savastru, University Politehnica of
Bucharest Scientific Bulletin, Series A, Vol. 71, No 3, 105-110, 2009.
11

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

n acest experiment, am analizat raspunsul de fluorescen al DOM, la


fiecare or, pe probe colectate dintr-un ru urban (rul Bourn Brook), pe
perioada a cinci precipitaii, timp de dou sptmni n Noiembrie 2007. S-au
analizat continuu, att concentraia (intensitatea fluorescenei, absorbia UV,
carbon organic total) ct i caracterul materiei organice (rapoarte de intensitate a
fluorescenei, lungimea de und a fluorescenei, absorbia UV specific (engl.
SUVA)), mpreun cu analiza izotopic i s-a evaluat influena precipitaiilor
asupra caracteristicilor i concentraiei materiei organice. n figura 4, este
prezentat semnalul de fluorescen pentru cei patru compui ai materiei
organice, derivai terestru i microbian. Intensitatea de fluorescen a maximelor
A, C, T i B este reprezentat grafic pentru probele colectate la fiecare or (Fig.
4 a-d), mpreun cu absorbia UV la 254 nm (Fig. 4e).
Fiecare perioad cu precipitaii a fost notat de la I la V (Fig. 4).
Folosind metoda tipping bucket, s-au nregistrat cantiti diferite de
precipitaii: evenimentul I 2,1 mm; evenimentul II 1,2 mm; evenimentul III
1,1 mm; evenimentul IV 4,8 mm i evenimentul V 11,8 mm. n primele
dou zile ale experimentului, cnd nu s-au nregistrat precipitaii, s-a observat
un maxim mic, dar detectabil, de fluorescen pentru A i C la prnz, cu un
minim n timpul nopii. De asemenea, s-a detectat un semnal mare de
fluorescen, pentru toate fraciunile DOM, i valori mari ale absorbiei UV, la
evenimentul I, cauzate de ape pluviale vechi care au fost deversate n ru.
Urmtoarele trei evenimente, II, III i IV, au aprut la intervale scurte,
genernd cantiti din ce n ce mai reduse de DOM, dar n acelai timp
proporionale cu cantitatea de precipitaii. Evenimentul IV a fost urmat de o
perioad de trei zile fr precipitaii, intensitatea fluorescenei fiind constant
pn la evenimentul V. Ultimul eveniment, V, a fost caracterizat de cantiti
mari de zapad, care au afectat numai fluorescena maximelor A i C, i
absorbia UV. Maximele T i B au prezentat creteri nesemnificative ale
intensitii fluorescenei, ins doar la nceputul evenimentului V, cnd s-a
nregistrat doar ploaie.

12

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

Figura 4. Msurarea continu a fluorescenei i absorbiei:


Intensitatea fluorescenei pentru substanele humice (maximele C (a) i A (b));
Intensitatea fluorescenei pentru substanele derivate (maximele B (c) i T (d)); i
datele de absorbie la 254 nm (e).

Astfel, se poate observa c, a crescut concentraia materiei organice, n


aproximativ o or dup fiecare precipitaie, acesta fiind un rspuns rapid tipic
pentru bazinele mici puternic urbanizate. Totui, analizele izotopice sugereaz
c sursa DOM poate fi diferit ntre evenimentele I-IV i evenimentul V,
datorit cantitii mari de precipitaii i deversri, la ultimul eveniment.
Analizele au artat c DOM variaz la un interval de 12 ore i c
fraciunile DOM sunt dependente de cantitatea de precipitaii i conectarea
rului la sistemul de canalizare urban. Intensitatea fluorescenei maximului C
(fluorescena substanelor humice), s-a corelat cu valorile obinute pentru
carbon organic total (TOC), ceea ce sugereaz c este posibil att cuantificarea
ct i caracterizarea DOM folosind o singur matrice de fluorescen.
Dup evaluarea la scal orar a variabilitii DOM, s-a trecut la pasul
urmtor, i anume, monitorizarea n timp real i in situ. Studiul de monitorizare
orar a condus la numeroase tematici de cercetare precum: evaluarea varibilitii
DOM la frecvene mari; determinarea caracteristicilor compuilor proteici sau
humici; stabilirea timpului n care se pot realiza msurtori on-line fr s fie
13

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

necesar o procedur de curare; determinarea existenei unor modificri ale


semnalului de fluorescen n urma apariiei biofilmului; stabilirea frecvenei
optime de msurare n timp real.
Studiul de monitorizare n timp real a avut scopul de a clarifica aceste
probleme, prin msurarea continu (la fiecare 3 minute) a calitii apei dintr-un
bazin mic urban, folosind un montaj original, bazat pe un fluorimetru de
laborator cuplat cu o fibr optic. Acest studiu reprezint prima caracterizare, n
timp real, a fluorescenei compuilor derivai terestru i microbian folosind
EEM, pe probe colectate dintr-un sistem acvatic cu ap dulce, la rezoluie
temporal mare. Studiul a demonstrat c sistemul poate funciona continuu, fr
curarea sistemului, timp de cel puin dou sptmni. Rezultatele
experimentului sunt incluse ntr-o lucrare, care a fost acceptat spre publicare n
revista Water Research (Continuous fluorescence excitation emission matrix
of river organic matter, E. M. Crstea, A. Baker, M. Bieroza, D. Reynolds,
acceptat pentru publicare n Water Research, 2010).
Pe parcursul experimentului, s-au colectat 2.597 matrici de excitareemisie. S-au analizat numai maximele pentru substanele humice, A i C, i
maximele pentru triptofan, T1 i T2. Maximul B (tirozina) a prezentat valori
sczute, distingndu-se greu de zgomot. Astfel, s-a evaluat doar intensitatea de
fluorescen a maximelor A, C, T1 i T2, pentru probele colectate prin montajul
realizat, mpreun cu probele control (prelevate direct din ru) msurate la
fiecare or (Fig. 5).
n primele 5 zile, s-a observat o scdere a intensitii maximelor A i C.
Primele precipitaii, din prima zi a experimentului, a condus la deversarea unei
cantiti mari de materie organic, care a scazut gradual pn la finalul
perioadei fr precipitaii. S-a observat aceeai tendin i dup a doua ploaie,
din ziua 9. Aceste rezultate se coreleaz cu monitorizarea anterioar a rului
(Crstea i alii, 2009), care a artat influena precipitaiilor asupra
caracteristicilor DOM, mai ales asupra compuilor humici.

14

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

Figura 5. Datele de fluorescen n timp real pentru maximele T1 , T2, A, i C.

Msurtorile continue de fluorescen au permis detecia, n timp real, a


unei poluri cu motorin. Primele semne de contaminare, la punctul nostru de
prelevare, au fost nregistrate n seara zilei 7, atingnd valorile maxime ale
intensitii de fluorescen dup 3 ore. Iniial, intensitatea de fluorescen a
polurii cu motorin a crescut, fiind urmat de o tendin de descretere pn la
finalul experimentului (Fig. 5). Aceast tendin este caracterizat de fluctuaii,
de scurt durat, ale intensitii fluorescenei cauzate de cea de-a doua ploaie,
din ziua 8, i de procedurile de curare a rului, realizate de Agenia de Mediu.
Maximul de fluorescen al polurii cu motorin se suprapune cu
domeniul de excitare/emisie al triptofanului, fiind dificil separarea celor doi
poluani (Cristescu i alii, 2009). Diferenele dintre poluarea cu motorin i cea
cu ape menajere au fost: n primul rnd, valori sczute ale maximul B, n timpul
polurii cu motorin i, n al doilea rnd, raportul diferit dintre T2 i T1 pentru
cei doi contaminani. Alte studii (Hudson i alii, 2008) au artat c raportul
T2/T1 pentru probele de ap dulce i ape menajere, msurat cu acelai tip de
instrument, a fost ~ 3, n cazul apei menajere i ~ 2 pentru apa de suprafa. n
acest studiu, valorile nregistrate nainte de poluarea cu motorin variau ntre
1,7 i 3,5, n timp ce raportul de fluorescen, la poluarea cu motorin, prezenta
valori cuprinse ntre 4 i 5. Valorile pentru raportul T2/T1 sunt prezentate n Fig.
6.

15

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

Figura 6 Raportul ntre maximele T2/T1 pune n eviden poluarea cu motorin.

Acest studiu a pus n eviden faptul c este necesar o monitorizare, prin


fluorescen, la frecven mai mare de o or pentru evaluarea variabilitii DOM
i pentru detecia rapid a unui anumit contaminant, precum ape menajere sau
produse petroliere. De asemenea, s-a artat c spectroscopia de fluorescen
poate evalua caracteristicile compuilor DOM i poate distinge ntre fluoroforii
care se suprapun.
CARACTERIZAREA

MATERIEI
ORGANICE
DIZOLVATE
PRIN
MONITORIZARE CONTINU A UNUI CANAL NAVIGABIL STUDIU DE CAZ,
CANALUL WORCHESTER-BIRMINGHAM

Canalele artificiale sunt sisteme acvatice cu caracteristici speciale, de


aceea, numeroase cercetri s-au axat pe analiza acestora. Apa din canale are
vitez de curgere foarte sczut, ceea ce o face susceptibil la eutrofizare,
formarea de cantiti crescute de sedimente i determin difuzia lent a
poluanilor. De asemenea, exist numeroi factori externi care influeneaz
calitatea apei din canale: industria, precipitaiile, apele pluviale, apele subterane
i navigaia.
Dei, analiza calitii apei din canale este considerat din ce n ce mai
important, pn n prezent, nu s-a realizat niciun studiu de monitorizare
continu, mai ales prin spectroscopie de fluorescen. Scopul acestui studiu a
fost de a evalua parametrii standard (pH, conductivitate i carbon organic total)
i fluorescena compuilor DOM, la scal orar, pe probe colectate dintr-un
16

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

canal navigabil. Studiul a pornit de la ipoteza c, n urma navigaiei,


sedimentele sunt ridicate la suprafaa apei, modificndu-se ciclul nutrienilor i
cantitatea de biomas. Modificrile ar putea avea un impact direct asupra
caracteristicilor DOM.
n cazul analizei prin spectroscopie de fluorescen, s-au putut observa
diferene ntre probele prelevate de la suprafaa i cele de la baza canalului.
Rezultatele au artat c, la probele de la suprafaa, componenta proteic (maxim
T1) a fost mai afectat de navigaie, dect cea humic. Se poate observa n
figura 7, c valorile fluorescenei par s fluctueze dup trecerea vapoarelor,
comparativ cu perioada n care nu a trecut niciun vapor. Intensitatea
fluorescenei a prezentat o tendin de cretere i apoi descretere la probele
colectate dup trecerea vaporaelor, n timp ce probele din perioada fr
vaporae arat o tendin nesemnificativ de cretere descretere. Cel de-al
doilea maxim proteic, maximul B, a avut aceeai variaie a intensitii, dup
trecerea vapoarelor i variabilitate redus, n condiii normale (fr vaporae).
Spre deosebire de fraciunea proteic, substanele humice nu artat nicio
modificare n intensitatea de fluorescen, dup trecerea vaporaelor.
Probele prelevate de la baza canalului au prezentat modificri
semnificative a intensitii fluorescenei pentru compuii proteici, mai ales
maximul B i intr-o mai mic msur maximul T1 (Fig. 8). Nu s-a observat
niciun efect asupra componentei humice.
Rezultatele au artat c variaia materiei organice apare la un interval de
mai multe zile. S-a remarcat o cretere a intensitii fluorescenei pentru
componenta proteic, maximul T1, i pentru cea humic, maximul A.
Rezultatele obinute pentru probele de la baza canalului s-au corelat cu cele de
la suprafaa canalului. Se mai poate meniona c precipitaiile nu avut nicio
influen asupra intensitii de fluorescen.
Spectroscopia de fluorescen a pus n eviden modificri ale
caracteristicilor materiei organice, dup trecerea vaporaelor. Fraciunea
proteic a fost mai afectat de navigaie, comparativ cu substanele humice care
nu sunt influenate de vaporae. Navigaia a modificat i valorile de pH pentru
probele de la baza i suprafaa canalului. n ciuda rezultatelor obinute, sunt
necesare studii ulterioare pentru stabilirea impactului navigaiei asupra calitii
apei, prin analiza nutrienilor i a biomasei.

17

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

Figura 7. Rezultatele de fluorescen pentru analiza influenei navigaiei asupra DOM, pe probe
colectate de la suprafaa canalului.

Figura 8. Rezultatele de fluorescen pentru analiza influenei navigaiei asupra DOM, pe


probe colectate de la baza canalului.
IMPACTUL ANTROPIC ASUPRA RURILOR STUDIU DE CAZ, BAZINUL
ARGE

Bazinul inferior al rului Arge este unul din cele mai poluate zone din
Romnia datorit concentrrii, n bazinul hidrografic, a unor surse de poluare
industriale, agricole i casnice, n special provenite din zona aglomeraiei
urbane a municipiului Bucureti (2,5 milioane de locuitori). Gradul mare de
poluare provine din faptul c apele uzate menajere i industriale sunt deversate
n ru, fr s existe o staie de tratare a apelor reziduale.

18

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

Scopul acestui studiu a fost de a determina calitatea apei din bazinul


inferior al rului Arge, care este afectat de poluare cu ape menajere urbane i
de la ferme, pentru compararea rezultatelor de fluorescen cu cele standard de
calitate a apei. Pentru stabilirea amprentei spectrale specifice, s-au aplicat
matricile de fluorescen i fluorescena indus laser pe probe colectate din
rurile Arge i Dmbovia. Rezultatele acestui experiment au fost publicate n
urmtoarele lucrri: (Pfeiffer et al., 2008) Pollution analysis on the Arge
River using fluorescence spectroscopy, E. Pfeiffer (Crstea), G. Pavelescu, A.
Baker, C. Roman, C. Ioja, D. Savastru, Journal of Optoelectronics and Advance
Materials, Vol. 10, No. 6, 1489 - 1494, 2008; (Crstea et al., 2009d)
Evaluation of the anthropogenic impact on surface water systems: case of
Lower Arge Basin, Romania, E. M. Crstea, G. Pavelescu, C. Ioja, L.
Cristescu, Proc. 8th World Wide Workshop for Young Environmental Scientists
WWW-YES 2009, Urban waters: resource or risks?, Paris, 110/188 116/188,
June 2009; (Crstea et al., 2010b) Contributions to the study of the organic
matter from the aquatic systems by fluorescent fingerprints, E. M. Crstea,
Analele Universitii Bucureti, 2010.
Matricile de excitare-emisie nregistrate pentru punctele de prelevare
Hotarele, Budeti i Clteti (Fig. 9 a,b,c) prezint poziia fluoroforilor
principali, observai de obicei, n probele ru i ape uzate. Spectrul de
fluorescen, pentru apele prelevate la Hotarele (Fig. 9a) este dominat de
prezena substanelor humice (excitare/emisie = 220-250/360-450 nm). S-a
nregistrat un semnal slab de fluorescen pentru triptofan (maxim la 350 nm),
la excitare cu 232 nm, rezultat al activitilor din fermele din apropierea rului.
Nu a fost semnalat prezena tirozinei n spectru.

a)

19

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

b)

C
T

c)

Figura 9 Matrici de excitare-emisie pentru probele colectate din:


a) Hotarele (punct 3), b) Budeti (punct 4) i c) Clteti (punct 6).

Spectrele de fluorescen, pentru probele de ap prelevate la Budeti pun


n eviden o modificare clar a compoziiei apei (Fig. 9b). Toate maximele
semnalate n lucrarea lui Coble (Coble, 1996), specifice apelor menajere
netratate i notate A, B, C i T sunt prezente n EEM nregistrate la Budeti.
Spre deosebire de Hotarele, se observ o fluorescen intens la excitare cu 228
nm i emisie n domeniul 280-305 nm (maxim B) atribuit tirozinei. Se observ,
de asemenea, o fluorescen intens a triptofanului (excitare 220-230 nm
emisie 325-375 nm maxim T) i a substanelor humice, maxim C (excitare
320 -340 nm, emisie 400- 440 nm). Alte perechi excitare / emisie la 340 nm /
420 nm i 289 nm / 340-370 nm sunt atribuite substanelor humice (acid fulvic)
i respectiv triptofanului.
Deversarea apelor de canalizare din Bucureti este confirmat de
intensitatea mare a semnalului de fluorescen corespunztoare fluorescenei
datorat proteinelor (zonele notate B i T). Acestea indic o activitate
microbian intens care afecteaz sntatea ecosistemului acvatic. Prin procesul
de autopurificare (diluie i sedimentare) se observ (Fig. 9c) o reducere a
20

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

contaminrii microbiene n aval (Clteti 52 km de la punctul de deversarea a


canalizrii) prin absena fluorescenei tirozinei, comparativ cu spectrul
nregistrat la proba Budeti.
Pentru obinerea de informaii suplimentare, privind poluanii acvatici, a
fost aplicat metoda fluorescenei induse laser, avnd n vedere capacitatea
acestei metode de a excita i moleculele cu eficien cuantic scazut. n figura
10, sunt prezentate rezultatele msurtorilor de fluorescen din cele trei
campanii (februarie, iunie i octombrie), la excitare cu 266 nm, care au indicat
urmtoarea ierarhizare, n ceea ce privete gradul de contaminare: Sabar <
Colibai < Hotarele < oldanu < Clteti < Budeti. Dup cum se poate vedea
din intensitatea semnalului de fluorescen cea mai poluat zon este Budeti,
gradul de contaminare n aval, la oldanu i Clteti, fiind mai mic datorit
autopurificrii apei, n special datorit diluiei.
Spectrele prezint, alturi de linia Raman (mprtierea pe moleculele de
ap), un maxim relativ intens centrat pe 330 nm i un maxim mai puin intens,
centrat pe 425 nm. Banda de fluorescen centrat pe lungimea de und de 330
nm apare numai la excitare cu laser. Ea poate fi descompus in trei benzi,
corespunztoare maximelor la 305 nm (atribuit tirozinei), 324 nm i respectiv
358 nm (atribuit triptofanului). n literatura de specialitate (Elkins i Nelson,
2001; Cammack i alii, 2004), se menioneaz c reziduurile de triptofan,
expuse direct la ap, emit fluorescen n domeniul 340350 nm, n timp ce
triptofanul nglobat n protein, emite la lungimi de und mai mici. Datorit
energiei foarte mari a laserului, este posibil s se obin valori mari ale
fluorescenei triptofanului nglobat, n ciuda eficienei cuantice sczute a
acestuia. Astfel, am presupus c maximul de fluorescen, de la 324 nm,
aparine triptofanului nglobat n proteine (de ex. materie celular vie sau
moart), n timp ce maximul de la 358 nm aparine triptofanului liber dizolvat n
ap (de ex. exsudate sau materie rezultat din liz). Atfel, se poate trage
concluzia c LIF este o metod eficient, care poate aduce informaii privitoare
la natura fluorescenei de tip proteic din ap.

Fluorescence intensity (a.u.)

0.8

Sabar
Hotarele
Colibasi
Clatesti
Budesti morning
Budesti noon

Fluorescence intensity (a.u.)

February

1.0

0.6
0.4
0.2
0.0
300

350

400

450

500

June

1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
300

Wavelength (nm)

Sabar
Soldanu
Hotarele
Budesti
Colibasi
Clatesti

350

400

450

500

Wavelength (nm)

(a)

(b)

21

Fluorescence intensity (a.u.)

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

1.0

Sabar
Soldanu
Hotarele
Budesti
Colibasi
Clatesti

October

0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
275

300

325

350

375

400

425

450

475

500

Wavelength (nm)

(c)
Figura 10 Spectre de fluorescen pentru probe colectate n campanile din
(a) februarie, (b) iunie i (c) octombrie.

a)

120

1050
900

100

750
600

80
60

450
300

40
20

150
0

Campaign I

Clatesti

Soldanu

Budesti

Hotarele

Colibasi

Sabar

Clatesti

Soldanu

Budesti

Hotarele

Colibasi

Fluorescence (a.u)

Faecal coliforms
Peak 330 nm

Sabar

Faecal coliforms (nr/100ml)

Se cunoate (Baker i alii, 2003; Elliot i alii, 2006) c fluorescena de tip


proteic corespunde prezenei bacteriilor n ap. Un indicator convenional al
prezenei bacteriilor n apele de canalizare netratate este dat de coninutul de
coliformi fecali, a cror determinare, conform standardelor n vigoare,
dureaz aproximativ 2 zile. Dup cum poate fi observat, n figura 11a,
msurtorile de fluorescen indus laser (la lungimea de und de 330 nm,
excitare 266 nm) au evideniat o bun corelare cu coninutul de coliformi
fecali, determinai prin metode standard. Pentru validarea rezultatelor
compararea, a fost facut pentru 2 campanii iunie i octombrie. Pentru
intensitatea fluorescenei substanelor humice, nu a fost obinut corelare cu
coliformi fecali (Fig. 11b) ceea ce ntrete concluzia conform creia
fluorescena poate fi considerat o metod de evaluare rapid a contaminrii
microbiene a apei. Din grafice se poate observa c cea mai mare contribuie
a contaminrii cu coliformi fecali provine de la deversrile de ape menajere,
detectate la proba Budeti.

Campaign II

22

Faecal coliforms
Humic substances

200

100

150

80
60

100

40

50

20

Campaign I

b)

Clatesti

Soldanu

Budesti

Hotarele

Colibasi

Sabar

Clatesti

Soldanu

Colibasi

Budesti

0
Hotarele

Fluorescence (a.u)

120

Sabar

Faecal coliforms (nr/100ml)

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

Campaign II

Figura 11. Corelaia coninutului de coliformi fecali din ap i intensitatea fluorescenei


pentru: a) compuii proteici i b) substanele humice.

Alt corelaie, care a fost facut cu msurtorile de fluorescen, se refer


la oxigenul dizolvat (engl. DO) i la consumul biochimic de oxigen (engl.
BOD). n figura 12 a i b, sunt prezentate valorile intensitii triptofanului (358
nm) comparative cu valorile consumului biochimic de oxigen i oxigenului
dizolvat pentru probele Hotarele, Budeti i Clteti. Se observ c intensitatea
triptofanului este invers proportional cu oxigenul dizolvat i direct
proporional cu BOD, factor de corelare 0,92.
9
8

DO

12

Trp-LIF

10

Hotarele

Budesti

February '07

2
1
October '06

2
June '06

February '07

October '06

June '06

February '07

6
5

October '06

LIF Fluorescence (a.u.)

10

June '06

Dissolved Oxigen (mg/l)

14

Clatesti

23

90

160

80

140

70

120

60

100

50

80

40

60

30
20

Trp-LIF

10

BOD

40
20

Hotarele

Budesti

February '07

October '06

June '06

February '07

October '06

June '06

February '07

October '06

0
June '06

LIF Fluorescence (a.u.)

BOD (mg O2/l)

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

Clatesti

Figura 12.Corelaia ntre triptofan i


a) oxigen dizolvat i b) consumul biochimic de oxigen.

Rezultatele acestui experiment au artat c zona Budeti este cea mai


poluat, n principal datorit deversrii apelor netratate din municipiul
Bucureti. A fost demonstrat o corelare bun, ntre msurtorile de
fluorescen i coninutul de coliformi fecali, ceea ce indic metoda
spectroscopiei de fluorescen ca metod rapid n detectarea contaminrii
microbiene a apei. De asemenea, a fost obinut o bun corelare ntre emisia de
fluorescen a triptofanului i consumul biochimic de oxigen.
Analizele efectuate au artat impactul sever al deversrilor urbane asupra
calitii apei rului, ceea ce impune construirea staiilor de tratare a apelor uzate
n scopul reconstruciei ecosistemelor acvatice.

CONCLUZII

Contribuiile originale ale autorului n studiul DOM prin spectroscopia de


fluorescen, aplicat la trei sisteme acvatice diferite: ru urban, canal navigabil
i un ru poluat, sunt prezentate pe scurt, n cele ce urmeaz:
Ru urban
S-a obinut o colecie de amprente spectrale, reprezentnd o baz de date
cu spectre de fluorescen pentru diferite tipuri de ape, cu scopul de a
pune n eviden influena antropic asupra diferitelor tipuri de sisteme
acvatice i pentru a inelege corelaia dintre parametrii standard ai apei i
diveri poluani.

24

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

Parametrii de fluorescen: indicele de humificare (engl. HIX), indicele


biologic (engl. BIX) i indicele F450/F500, au fost foarte eficieni n
diferenierea tipurilor de probe de ap, imprindu-le n patru categorii:
rurile curate i lacurile conin materie organic puternic humificat;
rurile urbane, iazurile i apele pluviale prezint grad de humificare
mare dar i component microbian; rurile rurale i canalul navigabil
conin fraciune microbian mare i cantiti sczute de component
terestr; rurile afectate de ape menajere conin fraciune microbian
semnificativ i cantiti sczute de component terestr.
A fost pus n eviden variabilitatea diurn a DOM, n perioadele cu i
fr precipitaii, prin prima monitorizare continu a unui sistem acvatic,
la scal orar. S-a demonstrat c variaiile caracterului DOM prezint o
frecven de cteva ore i depind de cantitatea de precipitaii i cantitatea
de ape uzate provenite din sistemul urban de canalizare. Intensitatea
fluorescenei maximului C (fluorescena substanelor humice) se
coreleaz cu TOC, sugernd posibilitatea de a cuantifica i a caracteriza
DOM dintr-o singur matrice de fluorescen.
Studiile continue, n timp real, realizate folosind un montaj original, au
artat c montajul utilizat pentru monitorizarea on-line prin fluorescen
este fiabil i poate fi aplicat, pentru testarea calitii apei, n numeroase
condiii, pe o perioad de cel puin dou sptmni.
Msurtorile n timp real au artat c fluorescena substanelor humice
(maxim C) a prezentat intensiti mari n primele zile ale experimentului
(evenimentul cu precipitaii) comparativ cu fraciunea atribuit
proteinelor (maxim T). Maximele A i C par s varieze mai mult la
probele msurate n timpul zilei, comparativ cu msurtorile din timpul
nopii. S-au nregistrat pulsuri zilnice de poluare, datorit conexiunii
diverselor sisteme de canalizare la rul analizat.
n timpul monitorizrii on-line, s-a detectat un eveniment de poluare cu
motorin, al crui maxim de fluorescen se suprapune cu maximul
atribuit triptofanului. n ciuda acestui fapt, cei doi compui, motorina i
triptofanul, au putut fi separai prin aplicarea analizei raportului T 2/T1.
Raportul T2/T1 a dat valori mari de 4-5, n cazul polurii cu motorin,
comparativ cu valorile obinute nainte de poluare (1,75 3).
Canal navigabil
Msurtorile realizate pe un canal artificial navigabil (prima monitorizare
continu a unui asemenea sistem acvatic), au demonstrat c variaii ale
caracterului materiei organice apar la intervale de ordinul a cteva zile. Sa observat o cretere a intensitii fluorescenei la componenta proteic,
maxim T1, i componenta humic, maxim A. S-a obinut o concordan
25

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

mare ntre rezultatele msurtorilor realizate pe probe colectate de la


suprafaa i baza canalului. Intensitatea fluorescenei nu a fost influenat
de precipitaii.
Spectroscopia de fluorescen a pus n eviden modificri ale
caracterului materiei organice dup trecerea ambarcaiilor. Fraciunea
proteic a fost cea mai afectat de navigaie, n timp ce substanele
humice nu par s fie influenate de vapoare. Navigaia a modificat, de
asemenea, valorile pH ntre probele de la baza i suprafaa canalului.
Ru poluat
La rurile extrem de contaminate, intensitatea de fluorescen a
maximului atribuit proteinelor, determinat prin spectroscopia de
fluorescen indus laser (engl. LIFS), s-a corelat foarte bine cu
coninutul de coliformi fecali, msurai printr-o metod biologic
standard. Acest fapt a demonstrat c LIFS poate fi o metod rapid i
eficient n determinarea contaminrii cu ape menajere urbane, lund n
considerare c este o metod mai sensibil pentru detectarea semnalelor
slabe de fluorescen, precum cel al tirozinei i al reziduurilor de triptofan
nglobai sau nu n protein.
De asemenea, msurtorile de fluorescen s-au corelat cu parametrii
standard, cum ar fi consumul biochimic de oxigen i oxigenul dizolvat,
demonstrnd c singura influen major, asupra calitii apei bazinului
Arge, este dat de deversrile cu ape menajere urbane. Acest fapt a
amplificat necesitatea de a se construi staii de tratare a apei menajere la
punctele de deversare i iniierea proceselor de reconstrucie a
ecosistemului.
Cercetrile, prezentate n aceast tez, au demonstrat eficiena
spectroscopiei de fluorescen n caracterizarea materiei organice dizolvate,
inclusiv a compuilor derivai terestru i microbian. Monitorizarea continu i n
timp real, aplicat pentru prima oara de ctre autor, folosind matrici de excitare
emisie a fluorescenei, a contribuit la nelegerea evoluiei caracteristicilor de
fluorescen a materiei organice dizolvate influenate de factori naturali i
antropici. Se presupune c rezultatele experimentelor vor contribui la
dezvoltarea unor metode eficiente, rapide i care implic costuri reduse pentru
monitorizarea apei, astfel conducnd la mbuntirea calitii vieii.

26

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

MULUMIRI

Doresc s mulumesc conductorului tiinific, Domnului Prof. Dr. Aurel


Popescu, pentru ndrumarea i sfaturile oferite, pe parcursul tezei mele de
doctorat. De asemenea, mulumesc Domnului Prof. Andy Baker, de la
Universitatea din Birmingham, UK, pentru ndrumare, ncurajare i ajutor n
cursul stagiilor de cercetare la Universitatea din Birmingham i n publicarea de
articole.
Adresez cele mai calde mulumiri Doamnei Dr. Gabriela Pavelescu, care
m-a ndrumat, susinut i ajutat s-mi depesc limitele, dar n acelai timp mi-a
trasnmis optimismul necesar n momentele dificile. Dr. Gabriela Pavelescu,
Prof. Dr. Aurel Popescu i Prof. Andy Baker au fost cele mai bune surse de
critici, discuii i sfaturi, de-a lungul cercetrii mele. Mulumesc Domnului Ing.
Dan Savastru eful departamentului ITC i colegilor mei de la Institutul
Naional de Optoelectronic, pentru susinerea i rbdarea acordat n toi aceti
ani.
i sunt recunosctoare Domnului Prof. Gilles Pinay pentru sfaturile
oferite, n timpul experimentului pe canalul Worchester Birmingham i
Domnului Richard Johnson pentru ajutorul n laborator.
Nu n ultimul rnd, doresc s mulumesc familiei mele, n special soului
meu care a fcut ca munca mea s merite.

BIBLIOGRAFIE

Baker A., Inverarity R., Charlton M., Richmond S., Detecting river pollution
using fluorescence spectrophotometry: case studies from the
Ouseburn, NE England, Environmental Pollution, 124 (2003), 57-70.
Cammack W.K.L., Kalf J., Prairie Y.T., Smith E.M., Fluorescent dissolved
organic matter in lakes: Relationship with heterotrophic metabolism,
Limnology and Oceanography, 49 (6) (2004), 2034-2045.
Crstea E.M., Baker A., Boomer I., Pavelescu G., Continuous fluorescence
assessment of organic matter variability on the Bournbrook River,
Birmingham, UK, Hydrological processes, 23 (2009a), 19371946.

27

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

Crstea E.M., Cristescu L., Pavelescu G., Savastru D., Assessment of the
anthropogenic impact on water systems by fluorescence spectroscopy,
Environmental Engineering and Management Journal, 8 (6) (2009b),
1321-1326.
Crstea E.M., Pavelescu G., Cristescu L., Savastru D., Comparison between
the characteristics of dissolved organic matter and nitrate content in an
urban river, University Politehnica of Bucharest Scientific Bulletin,
Series A, 71 (3) (2009c), 105-110.
Crstea E.M., Pavelescu G., Ioja C., Cristescu L., Evaluation of the
anthropogenic impact on surface water systems: case of Lower Arges
Basin, Romania, Proc. 8th World Wide Workshop for Young
Environmental Scientists WWW-YES 2009: Urban waters: resource
or risks?, Paris (2009d), 110/188 116/188.
Crstea E.M., Baker A., Bieroza M., Reynolds D.M., Continuous fluorescence
excitation emission matrix monitoring of river organic matter, Water
research, in press (2010a).
Crstea E.M., Contributions to the study of the organic matter from the
aquatic systems by fluorescent fingerprints, Analele Universitatii
Bucuresti Seria Fizica, (2010b).
Coble P.G., Characterisation of marine and terrestrial dissolved organic matter
in seawater using excitationemission matrix spectroscopy, Marine
Chemistry, 51 (1996), 325-346.
Conmy R.N., Coble P.G., Del Castillo C.E., Calibration and performance of a
new in situ multi-channel fluorometer for measurement of colored
dissolved organic matter in the ocean, Continental Shelf Research, 24
(2004), 431442.
Cristescu L., Pavelescu G., Crstea E.M., Savastru D., Evaluation of petroleum
contaminants in soil by fluorescence spectroscopy, Environmental
Engineering and Management Journal, 8 (5) (2009a), 1269-1273.
Cristescu L., Crstea E.M., Pavelescu G., Borisova E., Daskalova A.,
Fluorescence fingerprints of different surface aquatic systems, Proc.
International Symposium The Environment and Industry SIMI
(2009b), 253-258.
Downing B.D., Boss E., Bergamaschi B.A., Fleck J.A., Lionberger M.A., Ganju
N.K., Schoellhamer D.H., Fujii R., Quantifying fluxes and
characterizing compositional changes of dissolved organic matter in
aquatic systems in situ using combined acoustic and optical
measurements, Limnology and Oceanography: Methods, 7 (2009),
119-131.
28

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

Elkins K.M., Nelson D.J., Fluorescence and FT-IR spectroscopic studies of


Suwannee river fulvic acid complexation with aluminium, terbium and
calcium, Journal of Inorganic Biochemistry, 87 (2001), 81-96.
Elliott S., Lead J.R., Baker A., Characterisation of the fluorescence from
freshwater, planktonic bacteria, Water Research, 40 (10) (2006),
2075-2083.
Ghervase L., Crstea E.M., Borisova E., Pavelescu G., Daskalova A.,
Fluorescence evaluation of anthropogenic influence on rivers crossing
Sofia, Romanian Reports in Physics, 62 (1) (2010), 193-201.
Hudson N., Baker A., Reynolds D., Fluorescence analysis of dissolved organic
matter in natural, waste and polluted watersa review, River
Research and Applications, 23 (2007), 631649.
Hudson N., Baker A., Ward D., Reynolds D.M., Brunsdon C., Carliell-Marquet
C., Browning S., Can fluorescence spectrometry be used as a
surrogate for the biochemical oxygen demand (BOD) test in water
quality assessment? An example from South West England, Science of
the Total Environment, 391 (1) (2008), 149158.
Huguet A., Vacher L., Relexans S., Saubusse S., Froidefond J.M., Parlanti E.,
Properties of uorescent dissolved organic matter in the Gironde
Estuary, Organic Geochemistry, 40 (2009), 706719.
McKnight D.M., Boyer E.W., Doran P., Westerhoff P.K., Kulbe T., Andersen
D.T., Spectrofluorometric characterization of dissolved organic matter
for indication of precursor organic material and aromaticity,
Limnology and Oceanography, 46 (2001), 38-48.
Parlanti E., Wrz K., Geoffroy L., Lamotte M., Dissolved organic matter
fluorescence spectroscopy as a tool to estimate biological activity in a
coastal zone submitted to anthropogenic inputs, Organic
Geochemistry, 31 (2000), 1765-1781.
Patel-Sorrentino N., Mounier S., Benaim J.Y., Excitation-emission fluorescence
matrix to study pH influence on organic matter fluorescence in the
Amazon basin rivers. Water Research, 36 (2002), 2571-2581.
Pfeiffer (Crstea) E., Pavelescu G., Baker A., Roman C., Ioja C., Savastru D.,
Pollution analysis on the Arges River using fluorescence
spectroscopy, Journal of Optoelectronics and Advance Materials, 10
(6) (2008), 1489 1494.
Spencer R.G.M., Pellerin B.A., Bergamaschi B.A., Downing B.D., Kraus
T.E.C., Smart D.R., Dahlgren R.A., Hernes P.J., Diurnal variability in
riverine dissolved organic matter composition determined by in situ

29

Contribuii la studiul fluorescenei ca amprent spectral a materiei organice din sistemele acvatice
Elfrida Crstea

optical measurement in the San Joaquin River (California, USA),


Hydrological Processes, 21 (23) (2007), 3181-3189.
Stedmon C.A., Markager S., Bro R., Tracing dissolved organic matter in aquatic
environments using a new approach to fluorescence spectroscopy,
Marine Chemistry, 82 (2003), 239-254.

30