Sunteți pe pagina 1din 70

Cuprins Prefa ........................................................................................5 Introducere ................................................................................8 1. Interaciunea OMG cu mediul ambiant ................................10 2. Consecinele utilizrii bio-tehnologiilor agricole ..................

13 2.1. Agricultura ecologic......................................................13 2.2. Biopesticide ....................................................................15 3. Consecinele aplicrii iingineriei genetice n industrie .........15 3. 1. Industria Chimic ..........................................................16 4. Impactul OMG asupra sntii publice ...............................18 4.1. OMG - declanatorii alergiilor ........................................19 4.2. Proteine legate de patogenez ........................................27 4.3. Modificarea toxicitii plantelor ......................................32 4.4. Rezistena indus la antibiotice ......................................41 5. Aportul benefical utilizrii OMG ...........................................48 5.1. Agricultura i industria alimentar..................................49 5.2. Industria farmaceutic ....................................................57 ncheiere ....................................................................................65 Bibliografie ................................................................................67

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Prefa
Problema privind diversitatea biologic constituie una din principalele preocupri ale omenirii n Mileniul III. Problema const n faptul, c odat cu avansarea progresului tehnologic i utilizrii intensive a resurselor naturale a sporit considerabil impactul antropic asupra diversitii biologice, diminund esenial numrul speciilor i varietilor de organisme vii care populeaz Globul Pmntesc. Aceast situaie critic a pus n gard comunitatea internaional i societile civile din multe ri. n rezultatul discuiilor la nivel nalt a fost elaborat Convenia privind diversitatea biologic, deschis pentru semnare la conferina Naiunilor Unite pentru Mediu i Dezvoltare la 5 iunie 1992 la Rio de Janeiro, i care a ntrat n vigoare la 29 decembrie 1993. Convenia are ca obiectiv principal protecia, conservarea i utilizarea durabil a diversitii biologice. Una din ntrebrile abordate de Convenie este securitatea biologic. Sistemul de Biosecuritate vine s protejeze sntatea uman i a mediului de efectele adverse posibile cauzate de rezultatele biotehnologiilor moderne. n acelai timp, e bine cunoscut faptul c biotehnologiile moderne au un potenial considerabil pentru promovarea bunstrii umane, n particular, pentru depirea necesitilor critice n alimentaie, agricultur i sntatea uman. Convenia recunoate n mod deschis aceste aspecte ale biotehnologiei moderne. ncepnd cu anii 60 ai secolului trecut s-au dezvoltat cercetrile tiinifice n domeniul biotehnologiilor, care au cptat un aspect aplicativ n anii 80, odat cu acceptarea pentru cultivare a plantelor modificate genetic. Din acest moment au aprut discuii n cercurile academice i societatea civil asupra beneficiilor i riscurilor posibile rezultate din utilizarea organismelor modificate genetic (OMG) asupra mediului i sntii umane. Astfel, la 22 ianuarie 2000 la o ntlnire extraordinar a Conferinei Prilor la Convenia privind diversitatea biologic (Montreal, Canada), a fost adoptat Protocolul de la Cartagena privind Biosecuritatea. Acest document la nivel global reglementeaz activitile legate de asigurarea unui nivel adecvat de protecie pentru sigurana transferului, manipulrii i utilizrii organismelor modificate genetic rezultate din biotehnologiile moderne i care pot avea efecte imprevizibile asupra conservrii i utilizrii durabile a diversitii biologice, innd de asemenea cont de riscurile pentru sntatea uman i concentrndu-se n special asupra micrii lor transfrontaliere. Semnarea Protocolului a fost calificat drept un pas semnificativ prin faptul c el asigur 

Organisme modificate genetic i sntatea uman

cadrul internaional de reglementare pentru reconcilierea necesitilor respective de comer i protecie a mediului n privina industriei biotehnologice. Astfel, Protocolul creeaz un mediu favorabil pentru aplicarea ecologic a biotehnologiei moderne, ceea ce permite utilizarea echitabil a beneficiilor din potenialul oferit de biotehnologie, minimiznd n acelai timp riscurile pentru mediu i sntatea uman. Republica Moldova a ratificat Convenia privind diversitatea biologica n a.1995 i Protocolul de la Cartagena privind biosecuritatea n a. 2002. n conformitate cu angajamentele luate, Ministerul Ecologiei i Resurselor Naturale ntreprinde mai multe msuri n vederea implementrii prevederilor acestor documente internaionale. n special, au fost elaborate i aprobate Primul Raport Naional privind diversitatea biologic, Strategia Naional i Planul de Aciuni n domeniul diversitii biologice, Legea privind securitatea biologic. La momentul actual Republica Moldova ntreprinde pai concrei ntru fortificarea capacitilor n domeniul securitii biologice prin dezvoltarea cadrului naional de biosecuritate i contribuie la procesul de contientizare a populaiei privind problemele n cauz. Cu scopul implementrii prevederilor Protocolului de la Cartagena, Programul Naiunilor Unite pentru Mediu (UNEP) i Fondul Global de Mediu (GEF) acord asisten tehnic Guvernului Republicii Moldova n vederea consolidrii eforturilor ntru crearea unui sistem naional de securitate biologic. Proiectul UNEP-GEF Dezvoltarea Cadrului Naional de Biosecuritate n Republica Moldova (2003-2004) a prezentat parte component a Proiectului Global pentru dezvoltarea cadrelor naionale de biosecuritate n mai mult de 100 de ri. Acest Proiect a avut menirea de a contribui la implementarea Protocolului de la Cartagena la nivel naional, n special pentru dezvoltarea politicilor naionale, sistemului legislativ, procedurilor administrative al examinrii notificrilor, inclusiv evalurii riscurilor, procedurile participrii publicului la luarea deciziilor, aplicarea legislaiei i monitoring al activitilor legate de obinerea, transportarea, importul-exportul i comercializarea organismelor modificate genetic i a produselor rezultate din astfel de organisme. n acest scop i prin asistena proiectului a fost elaborat conceptul Cadrului Naional pentru Securitatea Biologic (CNSB) al Republicii Moldova, document de recomandare, ce va determina direciile prioritare de dezvoltare a sistemului de reglementri i monitorizare a organismelor modificate genetic, n vederea respectrii cerinelor Protocolului de la Cartagena. 

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Cadrul Naional pentru Securitate Biologic (CNSB) este o mbinare de politici, instrumente juridice, administrative i tehnice, care urmeaz a fi dezvoltate pentru asigurarea unui nivel adecvat de protecie n domeniul securitii transferului, manipulrii i utilizrii organismelor modificate genetic ce rezult din biotehnologiile moderne i care pot avea efecte adverse asupra conservrii i utilizrii durabile a diversitii biologice, pentru a preveni riscurile asupra sntii umane. Guvernul Republicii Moldova a constituit Comisia Naional pentru Securitatea Biologic care este abilitat cu funcia de luare a deciziilor i autorizrii activitilor legate de utilizarea organismelor modificate genetic. Ca act normativ de aplicare a Legii privind securitatea biologic a fost aprobat Regulamentul privind autorizarea activitilor legate de obinerea, testarea, utilizarea i comercializarea organismelor modificate genetic. Legea i Regulamentul stipuleaz reglementri asupra utilizrii n condiii izolate, introducerii deliberate n mediu, introducerii deliberate pe pia, ct i importul/exportul organismelor modificate genetic. Prin decizia Minitrilor Ecologiei i Resurselor Naturale i al Educaiei a fost constituit Centrul pentru Securitate Biologic, care va efectua testri ale GMO i evaluarea adiional, dup necesitate, a securitii mostrelor, i a riscurilor poteniale ale organismelor modificate genetic asupra mediului i sntii. ntru susinerea acestor eforturi, Ambasada Marii Britanii din Chiinu a contribuit la aceste iniiative prin finanarea co-proiectului Suport pentru Dezvoltarea Cadrului Naional de Biosecuritate n Republica Moldova. Activitile planificate n cadrul acestui proiect au fost focusate la trainingul specialitilor din domeniu, facilitarea procesului de informare i contientizare a publicului larg i societii civile din Moldova n vederea cunoaterii prevederilor Protocolului de la Cartagena i practicilor arilor europene ntru reglementarea utilizrii organismelor modificate genetic. n prezent n Republica Moldova se implementeaz Proiectul UNEPGEF Suport pentru Implementarea Cadrului Naional de Biosecuritate pentru Republica Moldova (2006-2010). Scopul principal al proiectului este de a asista Republica Moldova n fortificarea capacitilor naionale existente, structurile technice i infrastructura necesare pentru a respecta obligaiunile trii fa de Protocolul de la Cartagena privind Biosecuritatea i de a avea un Cadru Naional privind Biosecuritatea pe deplin operaional pn n anul 2010. 

Organisme modificate genetic i sntatea uman

INTRODUCERE
n conformitate cu definiia Codex Alimentarius Commission (CAC 2001a) (adaptat pentru Protocolul de la Cartagena), biotehnologia modern este definit ca aplicare in vitro a tehnologiilor cu acid nucleic, inclusiv ADN recombinat i injectarea direct, care depesc barierele naturale ale fiziologiei reproductive ori barierele recombinrii naturale, i acestea nu sunt tehnologii utilizate n reproducerea i n selecia natural. Aplicarea biotehnologiilor moderne n industria alimentar ofer noi posibiliti pentru dezvoltare i pentru sntatea omului. Includerea noilor caractere contribuie la majorarea productivitii agricole or la mbuntirea calitii produselor alimentare, care astfel contribuie la ameliorarea sntii populaiei. n privina efectelor asupra sntii publice, pot exista i efecte indirecte, precum reducerea utilizrii chimicalelor i creterea veniturilor gospodriilor agricole, sporirea viabilitii cerealierelor i a securitii alimentare, n special n rile n curs de dezvoltare. Ingineria genetic, n prezent, are ca scop obinerea produselor hipoalergice. Cercettorii japonezi au creat un soi experimental de orez cu nivel sczut de alergeni. Matsuda et al. (1996) a aplicat strategia ARN-antisens pentru a reprima expresia genelor alergenice. Dei acest orez este hipoalergic, nc nu a fost acceptat pentru consum de ctre persoanele alergice. Caracterele noi ale OMG-urilor pot, de asemenea, aduce i riscuri poteniale. Multe din genele i caracterele utilizate n biotehnologiile agricole sunt noi i nu sunt cunoscute ca alimente inofensive. Exist i riscul efectelor negative indirecte asupra sntii omului prin influena negativ asupra mediului i economiei, inclusiv impactul social i etnic. Ingineria genetic i produsele sale au aprut numai n ultimii 20 de ani. De aceea este aproape imposibil de evaluat impactul potenial al speciilor transgenice asupra mediului. Plantele de cultur, rezultate din experienele de inginerie genetic, reprezint mai mult dect urmtoarea generaie de varieti vegetale rezultate din tehnologia modern high-tech. Ele prezint dou caracteristici specifice care le pot transforma ntr-un pericol special pentru sntatea uman sau pentru mediul nconjurtor: In primul rnd, plantele MG conin gene i caractere care sunt complet noi pentru speciile - int, mediul lor de via i fondul lor genetic. n al doilea rnd, procesul de inginerizare genetic nu este nici precis, nici direcionat, 

Organisme modificate genetic i sntatea uman

ci mai degrab reprezint o intervenie brutal. Noua gen introdus se poate integra oriunde n genomul plantei receptoare. Efectele nedorite cauzate de OMG-uri organismului uman pot fi datorate: 1. Includerii propriu-zise a ADN-ului strin n cel uman, fapt ce poate duce la schimbarea activitii anumitor gene ale organismului recipient sau la transmiterea pe orizontal a organismelor transgenice spre alt organism. 2. Sinteza proteinelor transgenice noi, care pentru organismul recipient pot fi toxice sau/i alergice. Principalele preocupri referitoare la sigurana alimentelor care conin derivate MG se concentreaz asupra urmtoarelor aspecte: testele analitice existente i bazele de date, coninnd substanele toxice naturale sau nutrienii prezeni n alimentele convenionale, nu sunt adecvate pentru a testa modificrile neintenionate ale derivatelor MG; ingineria genetic poate afecta n mare msur toxinele, alergenii sau nutrienii din alimente; alergiile asociate alimentelor pot fi exacerbate prin inginerie genetic; folosirea genelor-marker, care confer rezisten la antibiotice n unele alimente MG, ridic probleme de sntate. Dou rapoarte, realizate de medici, au evideniat creterea ngrijorrii printre medicii profesioniti n legtur cu sigurana i reglementarea OMG. Un raport a fost realizat de Asociaia de Mediu a Medicilor Irlandezi, fiind publicat n martie 2001 ca rspuns la un raport solicitat de guvern. Acest raport a pus sub semnul ntrebrii toate cele 3 argumente de baz, pe seama crora raportul solicitat de guvern i baza concluzia pe faptul c alimentele MG nu reprezint nici un pericol pentru sntatea uman. Asociaia Medicilor Irlandezi a respins afirmaiile raportului care susineau: datele tiinifice asupra siguranei produselor alimentare MG actuale sunt susinute de lipsa oricrui raport privind efecte adverse rezultate din consumul lor. Dr. Cullen de la Asociaia Medicilor a spus: Lipsa total a etichetrii nseamn c virtual este imposibil s se stabileasc o legtur cu alergiile posibile. De asemenea, dumneaei a adugat c n ultimul timp s-a constatat o cretere constant a numrului de alergii la soia printre copiii irlandezi, dar nu a existat nici o posibilitate de a afirma dac este n legtur cu alimentele ce conin soia MG, deoarece nu exist obligativitatea etichetrii acestor produse conform legislaiei Uniunii Europene. 

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Raportul grupului de medici irlandezi a reprezentat un ecou al ngrijorrilor exprimate de Asociaia Medicilor Britanici (BMA) care n darea de seam pentru anul 1999 au spus: Orice concluzie referitoare la sigurana introducerii materialului MG n Anglia este prematur, neexistnd actualmente suficiente date pentru a informa factorii de decizie. BMA a urgentat aplicarea principiului precauiei n dezvoltarea plantelor i alimentelor MG, i a afirmat c OMG nu ar trebui sa fie eliberate pn cnd nivelul certitudinii tiinifice va fi suficient pentru a asigura sigurana pentru sntate i mediu. BMA a cerut un moratoriu pentru plantarea comercial a plantelor MG n Anglia, stabilirea unor sisteme de meninere i urmrire corespunztoare a segregrii i identitii plantelor MG i interzicerea utilizrii genelor-marker care confer rezisten la antibiotice n alimentele MG. n plus, ei au subliniat necesitatea cercetrilor ulterioare pentru a determina ntregul impact posibil al OMGurilor asupra mediului i sntii. Astfel, savanii susin urmtoarele: riscurile i beneficiile OMG nu sunt complet clare ori universale; capacitatea de a prezice impactul ecologic al speciilor noi (OMG or tradiionale) este joas, din cauza incertitudinii datelor disponibile; pot exista anumite beneficii i riscuri, care nu ar fi nc identificate or prezentate n literatura de specialitate; cantitatea i calitatea OMG-urilor, care pot fi elaborate merit atenie special n privina estimrii riscurilor, evaluarea minuioas a beneficiilor poteniale poate ajuta specialitii privind determinare echilibrului ntre beneficii i riscuri; elaborarea msurilor privind prevenirea transferului de gene ctre plantele slbatice poate reduce impactul asupra mediului i contribui la generarea beneficiilor.

1. Interaciunea OMG cu mediul ambiant


Interaciunea OMG cu mediul ambiant poate fi variat. Spre exemplu, producerea de substane chimice noi or enzime produse de microorganismele modificate genetic (chimicale, adausuri farmaceutice or alimentare etc.) pot contribui considerabil la reducerea cantitii de energie utilizat, a toxinelor i deeurilor solide eliminate n mediul nconjurtor. De asemenea, utiliza10

Organisme modificate genetic i sntatea uman

rea cerealelor MG conduce la micorarea contaminrii mediului i expunerea oamenilor la pesticide. Acest fenomen a fost stabilit la utilizarea bumbacului Bt-rezistent (Pray et al. 2002). Totodat interaciunea plantelor MG cu cerealele tradiionale or cu cele din familia slbatic al acestora poate avea efect indirect asupra securitii alimentare prin contaminarea resurselor genetice (Quist and Chapela 2001, Ag BioTech 2002; Alvarez-Morales 2002). Att caracteristicele contaminrii ct i a polenizrii interspecifice depind de distribuia caracterelor transmise de polenul or seminele a unei plante anumite. De asemenea animalele i petii MG pot fi o cale indirect de intrare pe piaa alimentar. Ingineria genetic genereaz noi forme de poluare sau contaminare, denumit generic poluare genetic sau biopoluare. n anumite cazuri, biopoluarea poate avea efecte majore asupra sntii i mediului nconjurtor, astfel crend riscuri biologice (polenizarea ncruciata). Introducerea de noi specii n ecosisteme a dus la fenomenul numit bioinvazie. Exista multiple ci prin care OMG sporesc vulnerabilitatea ecologic a agriculturii. Unii savani indic patru motive din cauza crora biotehnologia poate duce la creterea utilizrii substanelor chimice n agricultura: 1. Produsele ingineriei genetice pot cauza rezistena la erbicide. Aceasta poate duce la creterea, nu la scderea utilizrii erbicidelor. 2. Substanele chimice se vor rspndi i n regiunile unde nu se practic utilizarea acestora. 3. Creterea rezistenei duntorilor la culturile BT i distrugerea alternativelor ecologice pentru combaterea duntorilor. 4. Introducerea n plante a unei toxine poate duce la efecte adverse, inclusiv poate spori eliminarea toxinelor de ctre aceste plante i prin urmare n ntregul ecosistem. Astfel, unele din consecinele posibile sunt: Crearea de noi duntori: o plant de cultur, care a fost modificat prin inginerie genetic pentru a fi tolerant fa de sruri ar putea scpa (evada) din lanul de cultur, ar putea invada estuarele, sufocnd vegetaia natural a acestui habitat. Amplificarea problemelor cu duntorii deja existeni: plantele de cultur sunt capabile de a transfera gene la distane de kilometrii la specii nrudite, prin polenizarea mediat de vnt sau insecte, unele dintre aceste specii putnd fi buruieni cunoscute. Astfel, genele strine de la plantele de cultur cu 11

Organisme modificate genetic i sntatea uman

caractere inginerizate, cum ar fi tolerana la erbicide sau uscciune, ar putea fi transferate la buruieni, fcndu-le i mai greu de controlat. Afectarea speciilor nevizate, non-int: virusurile, microorganismele sau plantele modificate genetic pentru a omor insectele duntoare ar putea afecta i insectele utile. In experimentele de laborator, bacteriile modificate pentru a converti reziduurile vegetale cum ar fi frunzele n alcool, cu scopul utilizrii acestuia ca i combustibil, au determinat reducerea populaiilor de ciuperci (fungi) benefice. In unele cazuri, au fost distruse i ierburile din zone nvecinate prin otrvire cu alcool. Reducerea biodiversitii prin nlocuirea speciilor native: plantele de cultur GE care au un avantaj de supravieuire ar putea evada din cmpurile de cultur, ar putea invada alte ecosisteme i ar putea nlocui alte specii. Aceast pierdere a biodiversitii ar putea diminua sever abilitatea ecosistemelor sau speciilor de a rspunde cu succes la stresuri neateptate, cum ar fi uscciunea sau bolile. Irosirea unor resurse biologice valoroase: bacteria Bacillus thuringiensis (Bt) este utilizat n mod curent ca i pesticid natural. Cercettorii ns au modificat genetic numeroase plante de cultur cu Bt i acest fapt ar putea grbi viteza cu care diferite insecte se adapteaz i devin rezistente la Bt, fcnd tehnologia inefectiv. Dac OMG-urile supravieuiesc i prosper ele ar putea nlocui speciile slbatice naturale i acele plante i animale care depind de acestea. Tendina de a crea plante de cultur super, gndite s fie capabile s se autoprotejeze de dumanii lor principali, cum ar fi insectele i bolile, ar putea duce la proliferarea lor n detrimentul plantelor native. Biodiversitatea ecosistemelor situate n apropierea lanurilor cultivate cu plante de cultur super ar putea fi n pericol. n timp, plantele modificate genetic ar putea nlocui total flora nativ i ar putea pune n pericol supravieuirea vietilor slbatice care depind de aceast flor. Un exemplu bine documentat pentru efectele negative ale fluxului de gene de la varietile agricole la rudele slbatice este extincia orezului slbatic n Taiwan. Orezul slbatic hibridizeaz cu orezul cultivat. Deja n anii 1950, caracteristici ale orezului cultivat au putut fi detectate n populaiile de orez slbatic. Conform opiniei cercettorilor taiwanezi, extincia orezului slbatic n Taiwan a fost determinat de fluxul de gene de la varietile Japonica, introduse n 1930.

12

Organisme modificate genetic i sntatea uman

2. Consecinele utilizrii bio-tehnologiilor agricole


Biotehnologiile intervin pentru transformarea produselor brute in alimente, furniznd enzime pentru fabricarea pinii, lactatelor, braserie. Alte enzime intervin n fabricarea sucurilor, aromelor etc. Biotehnologiile fac industria agroalimentar mai puin poluanta. De exemplu, la transformarea amidonului in zahar, enzimele permit diminuarea consumului vaporilor de apa cu 30%, iar a deeurilor - cu 50%. Ele suprim 90% din produsele adiionale nedorite.

2.1. Agricultura ecologic


Rezistena fa de insecte este unul dintre caracterele-cheie modificate n plantele agricole prin inginerie genetic. Prin inginerie genetic, se introduc n plantele de cultur toxine, care omoar insectele care se hrnesc cu plante. Cele mai des utilizate toxine sunt aa-numitele toxine Bt, provenind de la bacteriile din sol Bacillus thuringiensis. Se cunosc mai multe toxine Bt cu diferite proprieti toxice. S-a crezut c aceste toxine sunt selective, c ele nu omoar orice insecte ci numai anumite insecte. Exist toxine Bt care se spune c sunt specifice pentru mute, altele pentru larvele de fluturi sau gndaci. De zeci de ani suspensiile bacteriene au fost folosite n agricultur n deosebi n agricultura ecologic pentru a lupta mpotriva insectelor duntoare. Preparatele naturale de toxin Bt sunt compuse din cristale proteice aflate n sporii bacterieni, care se disperseaz simplu pe suprafaa plantelor i care apoi sunt rapid inactivate de razele solare i de ali factori de mediu. O serie de studii tiinifice au dezaprobat prezumia c toxinele Bt din plantele MG ar avea aceleai caracteristici favorabile ca i toxinele Bt n stare natural. Este acum cunoscut printre oamenii de tiin c toxinele Bt din plantele transgenice spre deosebire de toxinele Bt n form natural n bacterii pot afecta speciile din lanul trofic i se pot acumula n mediu. Toxina natural Bt, prin interaciunea sa cu bacteria, apare n stare cristalin, inactiv. Dar, n plantele transgenice Bt, cum ar fi porumbul produs de firma Pioneer, toxina va aprea ca o protein vegetal preactivat, care se sintetizeaz pe parcursul ntregii viei a plantei. Astfel, plantele de cultur MG rezistente la insecte se pot dovedi nefaste pentru multe specii non-int i pot afecta echili13

Organisme modificate genetic i sntatea uman

brul ecologic. De asemenea, insectele expuse tot timpul aciunii toxinei sunt presate continuu pentru a-i dezvolta rezisten. Datele tiinifice sugereaz c prin folosirea necontrolat a plantelor transgenice Bt insectele vor dezvolta rezistent la aceast toxin. Aceasta este ngrijorarea cea mai serioas pentru agricultura ecologic, deoarece poate pune n pericol viitorul utilizrii toxinei Bt naturale de ctre sistemul durabil al agriculturii ecologice. Bacteria Bacillus thuringiensis, sub form de suspensie, au fost spray-ate (dispersate) pe suprafaa plantelor de cultur de mai mult de 50 de ani, reprezentnd o metod biologic de combatere a insectelor. Exista sute de tulpini de Bt care produc aproximativ 200 cry-proteine. Bt afecteaz anumite specii de insecte, n mod specific, cum ar fi larvele, iar spary-urile reprezint o metod foarte util de combatere pentru agricultura ecologic, mai ales atunci cnd exist o infestare serioas. Diferite tulpini de Bt sunt specifice diferitor receptori din peretele intestinal al insectei, din aceast cauz toxicitatea Bt depinde de afinitatea sa fa de receptori. S-a dovedit c omul i celelalte vertebrate nu au astfel de receptori, din aceasta cauz toxinele sunt inofensive. Scurt istoric Biologul japonez Shigetane Ishiwatari, studiind cauza bolii care nimicea n mas viermii de mtase, a izolat pentru prima dat bacteria Bacillus thuringiensis n 1901. n 1911, independent, E. Berliner a izolat bacteria care nimicea molia finii, i astfel a redescoperit aceast bacterie, numind-o Bacillus thuringiensis, dup denumirea oraului Thuringia, Germania, unde a fost descoperit. In 1915, Berliner raporteaz despre existena cristalelor Bt, dar activitatea acestora va fi descoperit mai trziu. Astfel, n 1920, a nceput utilizarea Bt n calitate de pesticid, comercializat sub form de spray. Aceast form, ns, era neconvenabil din cauz c era uor nlturat cu ploaia i degrada sub aciunea razelor UV. Un alt inconvenient era ca nu nimicea insectele care parazitau la rdcina si pe partea dorsala a frunzelor. Pn in 1977 au fost descrise doar 13 tulpini de Bt, toate fiind toxice doar fa de anumite specii de larve de lepidoptere. n 1980, a crescut frecvena utilizrii Bt din cauza creterii rezistentei insectelor la insecticidele sintetice si impactului negativ al acestora asupra mediului. n SUA, toate populaiile naturale de gndac de Colorado (CPB) sunt nc sensibile la toxina Bt. Totui n experimente de laborator a fost identificat un gndac de Colorado rezistent la toxinaBt.32 Acest ecotip de CPB a putut supravieui pe plante transgenice Bt timp de dou generaaii33. Mai mult, dezvoltarea rezistenei insectelor la o toxin Bt duce la rezisten i fa de alte toxine Bt. De exemplu, insectele selectate ca fiind rezistente la toxina Bt CryIA (c) au prezentat rezistena i la toxinele CryIA(a), CryIA(b), CryIB, CryIC i CryIIA. 14

Organisme modificate genetic i sntatea uman

2.2. Biopesticide
O nou posibilitate de a lupta cu insectele duntoare este folosirea virusului Baculovirus, care le afecteaz in mod natural. Acesta infecteaz doar insectele si are un potenial biopesticid din cauz ca acioneaz doar asupra nevertebratelor (artropodelor), poseda specificitate i cauzeaz moartea anumitor insecte-int (Carstens, 1996). Baculovirusul acioneaz ncet, avnd nevoie de 5-14 zile pentru a distruge insecta si are o virulenta moderata. Perioada lunga de activare sugereaz ca insectele pot aduce daune considerabile plantelor in acest rstimp. In plus, producerea baculovirusului este mai costisitoare dect producere pesticidelor chimice. Dar ntruct tendina de baza in prezent este de a le abandona si ntruct creste i rezistenta vtmtorilor la ele, producerea agenilor benigni (biopesticidele) devine un obiectiv de baza. Astfel, in prezent, cercettorii au demonstrat metode ale ingineriei genetice cu ajutorul crora au accelerat activitatea virusului. Prin incorporarea hormonilor, care afecteaz viabilitatea insectei se obine scderea apetitului sau accelerarea metamorfozei i insecta moare mai repede. De exemplu, baculvirusul MG, care conine hormonul Hez-HK-II (Suszkiw,1998) provoac dereglri grave in metabolismul larvei. Aceasta nceteaz sa mnnce i in 2 zile moare. Baculovirusul este distrus momentan de razele solare.

3. Consecinele aplicrii iingineriei genetice n industrie


Metodele biotehnologice sunt aplicate att n agricultur ct i n industrie. Cu timpul, materialele plastice ar putea fi nlocuite de ctre biopolimeri. Spre exemplu, producerea materialelor plastice, a uleiurilor, a diferitor tipuri de cear etc. Astfel multe produse obinute in baza de petrol pot fi nlocuite de ctre produsele obinute din plante MG. n 1992, savanii au izolat gena necesar pentru producerea plasticului, au transferat-o n planta Arabidopsis, obinnd astfel prima plant care sintetizeaz polihidroxialcanoatul (PHA-derivat de plastic din plante). Tehnologia dat a fost ulterior implementata i adaptat pentru porumb, astfel nct PHA sa fie produs doar n tulpini i n frunze lsnd spicul liber, pentru a fi folosit n hrana omului i a animalelor. Dar purificarea i prelucrarea ulterioar a substanei 15

Organisme modificate genetic i sntatea uman

obinute pentru definitivare cheltuieli suplimentare, astfel, in comparaie cu industria petrolier depete costurile de 300 de ori. Prin urmare, Monsanto (primii productor de PHA) au abandonat aceast afacere. Totui este explorat producerea altor poteniali polimeri n baz de plante fibrele naturale. Anumite bacterii sunt modificate genetic pentru a sintetiza polimeri naturali, cum ar fi mtasea naturala, elastina, colagenul i cheratina (Somerville, Bonetta, 2001). Merit de a fi menionate posibilitile ingineriei genetice de a modifica compoziia acizilor grai i compoziia uleioas a plantelor. Acizii grai pot fi folosii att in alimentaie ct i n calitate de precursori pentru sinteza materialelor, ca de exemplu a nailonului (Somerville, Bonetta, 2001).

3. 1. Industria Chimic
Obiectivul de baz a biotehnologiilor este de a privilegia ntrebuinarea materiei prime biologice, precum i de a diminua producerea deeurilor i a gazelor cu efect de ser. De asemenea, bio-tehnologiile vor diminua necesitile n ap, n particular cele utilizate la rcirea instalaiilor industriale. Crend o chimie uoar datorita enzimelor, biotehnologiile permit diminuarea utilizrii apei si a petrolului, respectiv-diminuarea producerii gazelor cu efect de ser. Astfel, n 2010-2020, biotehnologiile trebuie sa permit producerea lubrifianilor, solvenilor, carburanilor n baza produselor agricole (rapia, porumbul etc.) la preturi rezonabile. Enzimele mai sunt folosite n fabricarea detergenilor, textilelor, hrtiei, alimentelor. Soluiile i prafurile de splat: Detergenii sunt substanele care faciliteaz emulsionarea murdriei. Enzimele amplifica efectul detergenilor descompunnd petele din interiorul esturii. n substanele pentru splat se conin, de asemenea, si fosfai pentru dedurizarea apei. Ei previn formarea calcarului, evitndu-se astfel blocajul aciunii detergentului. Dar fosfaii au o aciune nefast asupra mediului, iar enzimele permit splarea fr adaosul fosfailor. Enzimele sunt produse de microorganisme. Eficacitatea acestora este constant ameliorata, astfel nct ele sunt active la temperaturi joase si rezista la aciunea altor componente. Cu toate ca exista detergeni de origine vegetala (spun n baz de ulei de msline etc.), dou treimi sunt de genez petrolier, utilizat nc din 1980.

16

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Este posibil ca in 2010-2020 s apr pe piaa detergenii de origine vegetal pe baz de rapi, o planta bine adaptat la producia industrial. Deja au fost introduse n unele culturi de rapi genele necesare. Hrtie: Pasta pentru fabricarea hrtiei este compusa din celuloza de lemn, obinut dup eliminarea particulelor dure (lignina). Prelucrarea chimica clasica necesita ageni corozivi (clorul, soda s.a.) i consum sporit de energie (mcinarea, uscarea termica sub presiune). n plus, pasta pentru hrtie polueaz o cantitate mare de apa i genereaz mirosuri neplcute. Folosirea enzimelor permite micorarea cantitii de apa fr a suprima definitiv prelucrarea chimic. O ameliorare tehnologic poate fi obinut crend specii de arbori destinai anume producerii hrtiei, care datorit ingineriei genetice au fost deja obinute. Se presupune, c ctre anii 2015-2020, se vor face concluzii in privina rentabilitii acestor specii. Depoluarea: n natur exista microorganisme cu capacitate de descompunere a petrolului, produselor toxice i de concentrare a metalelor. Acestea sunt actualmente utilizate pentru depoluarea reelelor industriale, resorbia deeurilor organice. Procesul respectiv poate fi ameliorat odat cu introducerea enzimelor mai eficiente i a asociaiei optime de microorganisme, de asemenea, o dat cu crearea microorganismelor speciale pentru anumite grupuri de poluani. ntre 1994 i 1999 cifra bio-tehnologiilor utilizate a crescut de la 7% la 8% n Europa. Biocarburanii: Biocarburanii sunt subproduse ale agriculturii care pot nlocui benzina, gazul etc. Ei se obin din produse bogate n zahr ori n amidon (trestia de zahar n Brazilia, porumbul n SUA, sfecla de zahr n Europa), sau din uleiul de rapi. Biocarburanii pot fi folosii n cantiti mari n forma sa pur, pentru motoarele cu ardere intern, n urma unor adaptri a motoarelor. De asemenea, ei pot fi amestecai in cantiti mici cu carburanii obinuii, fiind utilizai fr a regla motoarele. n 2000, preurile la bio-carburani erau de 4 ori mai mari dect la produsele petroliere. n t oate rile aceast diferen este compensat de facilitile fiscale. Obiectivul acestora este de a oferi posibiliti de dezvoltare sectorului biocarburani i de a nu mri consumul de petrol n viitor.

17

Organisme modificate genetic i sntatea uman

4. Impactul OMG asupra sntii publice


Privitor evaluarea siguranei plantelor MG, se consider c alimentele sunt complet digerate i genele din produsele alimentare consumate nu pot circula ctre celulele recipientului. Totui aceast presupunere nu a fost verificat pn n momentul actual, cnd unele studii au artat c fragmente de gene pot circula i uneori se pot integra n cromozomi organismului-gazd. Apoi a fost demonstrat c ADN-ul nu este dezintegrat totalmente n tractul gastrointestinal. Segmentele de ADN ingerate pot avea dimensiunile necesare pentru a conine gene ntregim care rmn intacte i pot nainta ctre esuturi i pot nimeri n snge. ADN-urile conin elemente genetice numite CpG motif , care pot provoca sistemul imun la o reacie de tip inflamator. Odat eliberate n mediu, plantele MG nu mai pot fi ngrdite. Ca toate organismele vii, plantele MG se reproduc i aceasta este o posibilitate pentru gene s scape n afara zonei de cretere destinat iniial. Calea major de a scpa n mediul natural, slbatic, a noilor gene introduse, este prin transferul polenului. Seminele pot fi culese de psri i lsate s cad n alt parte, mamiferele mai mari pot transporta tuberculii de cartof, sau organe de reproducere pot fi chiar dislocate de vnt. Majoritatea plantelor de cultur MG aflate pe pia actualmente conin gene marker care confer rezisten la antibiotice, alturi de caracterele dorite cum ar fi rezistena fa de insecte sau erbicide.Exist riscul ca aceste gene s fie transferate de la plante la microorganisme productoare de boli dac palntele transgenice sunt utilizate ca furaj pentru animale sau ca alimente pentru oameni. Aceste bacterii vor deveni prin urmare imune la tratamentul cu antibiotice. Cercetrile asupra existenei transferului de gene i a dimensiunii acestuia au nceput numai recent, de aceea datele tiinifice existente sunt incomplete. n anul 2002, cercettorii englezi au demonstrat pentru prima oar c materialul modificat genetic (ADN) din alimente i gsete calea spre bacteriile din intestinul uman, ridicnd probleme poteniale serioase de sntate. Multe plante MG au inserate gene marker de rezisten la antibiotice deja ntr-un stadiu timpuriu de dezvoltare. Dac materialul genetic al acestor gene marker gsete o cale de a ajunge n stomac, ceea ce cercettorii de la Universitatea Newcastle (Anglia) au sugerat c este posibil, atunci eficacitatea antibioticelor folosite pe scar larg ar putea fi compromis. ntr-un studiu publicat n revista La Recherche, profesorul Patrice Courvalin de la Institutul Pasteur din Frana a accentuat posibilitatea ca rezistena 18

Organisme modificate genetic i sntatea uman

la antibiotice s fie transferat de la plantele transgenice n mediu i deci s ajung n tractul digestiv. Lucrarea atenioneaz asupra faptului c prin cultivarea pe scar larg a plantelor transgenice se accentueaz problema deja dificil a bacteriilor rezistente. Exist suficiente date tiinifici care susin c: genele pot fi relativ stabile n intestin; bacteriile pot n principiu prelua gene n intestinul mamiferelor; transferul orizontal de gene de la microorganismele modificate genetic la bacterii a fost observat n intestinul insectelor (i anume la colembole); bacteriile din sol pot prelua gene din sol. Deoarece aceste gene sunt inutile i periculoase pentru sntatea uman, multe autoriti de reglementare din Europa se opun folosirii genelor-marker care confer rezisten la antibiotice.

4.1. OMG - declanatorii alergiilor

Dup Profet (1991), reaciile alergice sunt rspunsuri de adaptare si de aprare a organismului la proteina toxica. La persoanele sensibile reacia alergic poate fi provocata chiar si de o doza infima de alergen. Este foarte greu de stabilit individual doza minim declanatoare. Totui consecinele reaciei alergice depind de cantitatea ingerat de alergen, astfel gravitatea depinde de doz. Alergiile alimentare sunt foarte frecvente n toate tarile dezvoltate i afecteaz n medie 3-4% din populaia adult i pn la 8% copii. Alergiile alimentare sunt bazate pe reacii imunologice, spre deosebire de intolerana alimentar, definit ca reacie non-imunolgic (Bargmann et al. 1992, Klein 1991).
REACII ALIMENTARE ADVERSE Hipersensibilitate alimentar

Intoxicaie

Repulsie

Figura 1. Prezentare schematic a reaciilor alimentare adverse


1

Mediere non-imun Mediere non-imun Intoleran alimentar Alergie alimentar - metabolic; - farmacologic; non-IgE IgE - nedefinit.

Majoritatea alergenilor sunt glicoproteine hidrosolubile cu masa molecular ntre 18 i 70 kDa (Lemke and Taylor 1994). Masa molecular de 10 kDa reprezint limita de jos pentru rspunsurile alergice.

19

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Alergiile pot fi divizate n 4 categorii. Alergiile alimentare pot fi de tip I, III, IV (Lemke and Taylor 1994 S.117ff), dar cel mai des de tip I (Aulepp and Vieths 1992). Reaciile alergice de tipul I sunt acute sau de tip imediat. Dup ingestie sau inhalare, alergenii alimentari induc producerea anticorpilor specifici (IgE), cu care apoi interacioneaz (Lemke and Taylor 1994). Sunt cunoscute circa 10 tipuri de produse alimentare, care cauzeaz 90% din alergiile alimentare severe ntlnite n emisfera de vest (Vieths et al. 1996, Schafer 1996) (Tab.1). Tabelul 1. Produse alimentare cu potenial alergic
Alimente alergice (cauzeaz > 60 % alergii alimentare la copii) arahide soia gru lapte de vaci ou Alimente alergice (cauzeaz > 90 % alergii; adiional celor 60 %) pete de mare crustacee (crevei, raci, crabi) fructe legume (elin, morcovi)

Bargman et al. (1992), Lemke i Taylor (1994), Schafer (1996) i Vieths et al. (1996)

Reaciile alergice la alimente sunt bine cunoscute. Majoritatea alergenilor alimentari sunt de structur proteic i se conin n ou, pete, fructe de mare (inclusiv crustacee), soia, nucuoare (migdale, arahide, alune de Brazilia, alune de pdure, acaju (Anacardium), fistic i nuci), gru. Datorit faptului c aceti alergeni sunt cunoscui, a fost posibil de a elabora i utiliza metode de testare, actualmente mult mai avansate. Totui alimentele tradiionale nu sunt, de regul, verificate pentru coninutul de alergeni nainte de a fi livrate pe pia (Tab 2). ntruct orice aliment ce conine proteine poate fi un potenial alergen, introducerea unei noi proteine sau orice schimbare n structura celor deja existente sau modificarea cantitativ poate afecta, de asemenea, capacitatea alergizant a produselor derivate. Metodele biotehnologice disponibile n prezent pot fi utilizate n mai multe scopuri: 1. Inhibarea activitii genei (reducerea producerii proteinelor). 2. Activarea genei existente (iniierea producerii proteinei). 3. Replicarea genei existente (creterea producerii proteinelor specifice).

20

Organisme modificate genetic i sntatea uman

4. Schimbarea genelor existente Protocol de evaluare a riscu(schimbarea compoziiei sau lui pentru alergiile alimeneliminarea proteinei). tare: 5. Introducerea genelor noi de 1. Evaluarea capacitii de alerla alte specii. gizare (dac alimentele or ntroducerea biotehnologiilor anumite ingrediente au un moderne n agricultur ar putea potenial alergic). influena sigurana alimentelor n 2. Evaluarea cantitativ a alercazul n care noile proteine alimengenului (dac concentraia tare ar putea fi cauza reaciilor alerde alergen este inofensiv). gice, iar teste veridice pentru deter3. Eevaluarea expoziional minarea capacitilor de alergizare (care e calea posibil de a a proteinelor noi, lipsesc. Astfel, contacta alergenul). concluziile privind proprietile 4. Evidenierea subpopulaiei alergizante ale proteinelor pot fi sensibile (care ar fi rspunsul fcute doar n baza factorilor de alergic la alimentele noi). risc. Experii FAO/WHO (FAO/ WHO 2001a) au stabilit un protocol de evaluare al potenialului alergizant al alimentelor MG. Protocolul este aplicabil pentru alimentele care conin gene derivate att din surse cunoscute, ca fiind alergice, ct i din surse care nu au prezentat pericol alergic. Grupul de experi oricum, i-a exprimat dezacordul privind transferul genelor din alimentele-alergeni, excepie fcnd doar cazurile n care a fost demonstrat lipsa capacitilor alergizante al proteinelor rezultate n urma transferului de gene. Aceste principii au fost aplicate de numeroase agenii pentru evaluarea siguranei alimentelor MG i au servit ca baz pentru Ghidul privind estimarea securitii alimentelor produse prin biotehnologii (Codex Alimentarius Commission. Guidelines for the safety assessment of foods derived from biotechnology [CAC 2003c,d]). Pe parcursul ultimilor ani, savanii si comunitile medicale devin tot mai nelinitii n privina creterii incidenei alergiilor provocate de plantele MG. Datorit faptului c alimentele MG conin proteine de la alte organisme ale cror gene le-au fost transferate, reaciile alergice cauzate de acestea sunt considerate ca principalul pericol pentru sntatea omului. n primul rnd, modificrile genetice pot crea n plante schimbri, care rezult n expresia unui nou alergen sau n creterea expresiei alergenilor en21

Organisme modificate genetic i sntatea uman

dogeni. Drept exemplu poate servi alergenul din alunele de Brazilia n soia MG. Soia este o important surs de proteine n dieta omului i a animalelor, dar este srac n metionin. Pentru a mbunti calitile ei nutriionale, cercettorii de la Pioneer Hi-Bred International au creat soia mG, care produce o protein bogat n metionin, a crei gen a fost preluat de la alunele de Brazilia (alunele de Brazilia conin 18% metionin). Datorita faptului, c alunele de Brazilia sunt cunoscute ca alergeni, s-au fcut investigaii n privina proprietilor alergizante a soiei MG. Drept rezultat, s-a determinat c persoanele alergice la alunele de Brazilia, dezvolta reacii alergice si la soia MG, din care cauza a fost sistat producerea acesteia. n 2004, a aprut informaia despre mbolnvirea fermierilor din Filipine. Acetia locuiau n apropierea cmpurilor semnate cu soiul transgenic de Btporumb (Dekalb 818 YG). Manifestarea simptomelor coincidea cu perioada de nflorire i de rspndire a polenului. Porumbul a fost modificat genetic pentru a produce insecticidul Bt-toxina Cry1Ab toxica pentru viermele sfredelitor al porumbului. Simptomele prezentate se refereau la sistemul respirator (strnut, tuse alergic, pn la astm .a.), tractul digestiv i tegumente, de asemenea era prezent febra. Simptomele respective dispreau odat cu plecarea n alte raioane ale rii i reapreau la ntoarcere. Pentru nceput, s-a presupus c este vorba de o boal infecioas, dar n urma diferitor cercetri, aceast presupunere a fost infirmat. Alte exemple de modificare genetica sunt introducerea Bt-toxinei Cry1Ac n bumbac, orez, tomate .a. culturi pentru a le proteja impotriva unor lepidoptere. Au fost efectuate 3 studii pe oareci in privina Bt-toxinei Cry1Ac. Dou din aceste studii ne arata ca Bt-toxina iniiaz un rspuns mediat de anticorpi in snge i n mucoasele organelor oarecilor. Al treilea studiu demonstreaz c Cry1Ac crete rspunsul imun la ali antigeni. ntr-un studiu publicat in Natural Toxins se menioneaz c oarecii care au avut o diet bazat pe culturile MG, n care se coninea Cry1AC, au prezentat la examenul histologic al ileonului (poriunea inferioar a intestinului subire) tulburri structurale i de cretere.
BT Bacillus thuringiensis produce proteine insecticide, sub form de cristale parasporale (Cry protoxine), n faza de sporulare.


22

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Toate aceste studii ne Cile de apariie a demonstreaz ca protoxina Cry1Ac proprietilor alergiice la pleste un imunogen activ la mamantele MG: ifere, rspunsul imun manifestn1. inseria unei gene ce du-se att sistemic, ct i, la nivesintetizeaz o proteina deja lul mucoaselor i de aceea poate fi cunoscuta ca alergen; o ameninare pentru organismul 2. transgeneza, care adiional uman. caracterului dorit induce sinUn alt soi de Bt porumb teza proteinelor alergice; Strlink a fost produs de societatea 3. perturbare ntmpltoare la Aventis Crop Science, autorizat in nivelul genomului cu modifiSUA (1998), pentru alimentaia anicare proteinei rezultate, care malelor si industria etanolului. In posed proprieti alergice. septembrie 2000, GEFA (Genetically Engineered Food Alert) a descoperit prezenta acestuia in diferite produse alimentare, iar 44 de americani au depus plngere n privina acestuia, prezentnd simptome precum diareea, voma si reacii alergice cutanate. In urma testelor efectuate, cauza s-a dovedit a fi producerea Cry 9C proteina una dintre familia proteinelor cristalice (Cry), care i confer porumbului un caracter insecticid. Spre deosebire de alte Cry proteine, Cry 9C este termostabila i rezistenta la aciunea sucului gastric acetia fiind principalii indicatori ai potenialului alergic. Un alt moment important este ca la aceasta varietate de porumb expresia genei ce codifica Cry 9C se petrece nu numai in polen si frunze, ci i n seminele acestuia, ceea ce i sporete pericolul pentru sntate. Astfel, concentraia Cry 9C in semine este de 10-400 ori mai mare dect producerea de Cry proteine la alte varieti de porumb. (Dr. A. Felsot. Insecticidal genes: part 2. Agrichemical and environmental news. no.168, April 2000, table 2, p.4). Mai mult de jumtate din proteinele transgenice, care asigur rezistenta plantelor la insecte si la bolile cauzate de ciuperci, si bacterii, sunt toxice i alergice. Exist cteva grupuri de proteine, cunoscute ca alergeni, care particip la mecanismele naturale de aprare a plantelor. Unele din acestea (1) inhibitorii alfa-amilazei i tripsinei, (2) lectinele, (3) proteine legate de patogenez sunt utilizate n ingineria genetic pentru a crete rezistena culturilor agricole.
Sunt cunoscute mai mult de 60 de astfel de proteine. Trei proteine sunt folosite n ingineria Bt porumbului i sunt exprimate de genele Cry1Ab, Cry1Ac,Cry9c.


23

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Tabelul 2. Alergeni alimentari cu funcii cunoscute n reaciile de aprare ale plantelor. Planta
Arahide (Arachis hypogaea) Soia (Glycine max) Gru (Triticum spp.)

Alergenul
Lectina

Funcia de aprare a plantei


Retardare n dezvoltarea Callosobruchus maculatus Retardarea creterii larvei Spodoptera litura Activitate insecticid pentru Callosobruchus maculatus Activitate insecticid pentru Ostrinia nubilalis; Inhibarea creterii larvei Diabrotica undecimpunctata Inhibarea alfa - amilazei la Tenebrio molitor

Inhibitorul tripsinei Aglutinina germenilor de gru WGA Izolectine: T.aestivum:WGA A T.aestivum: WGA D T.durum: WGA B Alfa-amilaza / inhibitorul tripsinei

Orz (Hordeum vulgare)

Consequences of classical and biotechnological resistance breeding for food toxicology and allergenicity. S. L. Franck-Oberspach and B. Keller. Plant breeding 116, 1-17 (1997). Aadar, este posibil ca o protein non-alergic ntr-un organism s devina alergen in altul. Daca o proteina bacteriana este trecuta in plant, aceasta poate s-i cauzeze modificri posttranslaionale, inducnd proprieti alergice. Chiar i cea mai frecventa modificare glicozilarea (nzestrarea proteinei cu lanuri polizaharidice) o modific substanial. INHIBITORII ALFA-AMILAZEI Un ir de patologii alergice sunt cauzate de inhibitorii -amilazei. Spre exemplu, astmul Baker este o reacie alergic de tip I, care cel mai des se declaneaz la inhalarea finii de cereale (Garcia-Casado et al., 1995). ADNul responsabil pentru producerea inhibitorului -amilazei la insecte se gsete n endospermul seminelor de gru Triticum aestrivum (Gomez et al., 1990). Alergeni de tip similar, care provoac reacii mediate de IgE, au fost depistai n orez (Oryza sativa) i orz (Hordeum vulgare). Secvena ADN-ului pentru inhibitorii alergenici ai -amilazei din gru denot similitudine cu ADN-ul inhibitorilor din orez i orz, respectiv 40% i 20%. Proteina alergic din orez este termostabil i rezistent la ageni proteolitici, fapt ce cauzeaz probleme mari pacienilor alergici. ncercrile de a crea orez hipo-alergic au dat deja anumite rezultate, dar rezultatele obinute nc nu confer certitudine deplin privind tolerana acestui orez de ctre pacieni. 24

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Studiile realizate cu seminele de mutar galben (Sinapis alba) au constatat o asemnare a alergenilor proprii acestei plante cu inhibitorii -amilazei din cereale (Menendez-Arias et al., 1988), fasole, mazre etc. Astfel, rezultatele studiilor efectuate sugereaz c proteinele din familia inhibitorilor -amilazei sunt alergeni potenial, cel puin n cereale i legume (Izumi et al., 1992). INHIBITORII TRIPSINEI Un alt exemplu ine de inhibitorul tripsinei din Vigna unguiculata, care protejeaz o planta model de tutun mpotriva Heliothis virescens (Hilder et al., 1987). Inhibitorii tripsinei cauzeaz dereglri serioase in organismul insectelor, cele mai afectate fiind lepidopterele (mai ales larvelor acestora). Ele constau n dereglri de digestie urmate de scdere ponderal pn la moartea acestora. Astfel, aceste proteine devin un bun remediu insecticid pe larg folosit n ingineria genetic. Ca exemplu de aplicare poate servi preluarea genei ce codifica inhibitorul tripsinei de la mutarul alb (Menegatti et al., 1992) i transferarea acesteia la tutunul MG. ns pentru a se ajunge la efectul insecticid scontat, nivelul de expresie a acestei proteine in plantele MG trebuie s fie nu mai mic de 1% din cantitatea totala a proteinelor solubile (Hilder et al., 1987; Leple et al., 1995), ceea ce poate cauza la om efecte nedorite majore. n afara de efectele alergice pe care le cauzeaz, inhibitorii tripsinei pot produce serioase dereglri digestive, pot reduce digestia proteica i pot cauza deficien de absorbie a aminoacizilor. n testele efectuate pe animalele dieta crora era bogat n inhibitori ai tripsinei s-a observat favorizarea proceselor patologice a pancreasului, inclusiv cancerul. Lund n considerare faptul c unele proteine din cerealele i legumele din familia alfa-amilazei i a inhibitorilor tripsinei sunt alergice, orice cultur alimentar transgenic ce conine astfel de inhibitori necesit o testare minuioas pentru a asigura inofensivitatea lor pentru persoanele alergice. LECTINELE Prin termenul lectin (aglutinina) este definit o clas de proteine sau glicoproteine, cu proprieti aglutinante fa de alte celule, care pot lega reversibil hidrai de carbon, fr a le modifica structura. (Peumans i van Damme, 25

Organisme modificate genetic i sntatea uman

1995). Atandu-se de membrana celular n diverse organe (cel mai des intestin), acestea provoac aglutinarea sau pot iniia o cascad de rspunsuri imune sau autoimune, care pn la urm pot provoca moartea celulei. Diferite lectine vizeaz organe i sisteme diferite ale organismului. Odat ce lectina intact se localizeaz la un anumit nivel din organism, ea are realmente un efect magnetic asupra celulelor din regiunea respectiv. Ea aglomereaz celulele i acestea sunt intite spre a fi distruse, fiindc sunt considerate de propriul organism drept elemente strine invadatoare. Aceast aglomerare poate cauza sindromul de iritaie la nivel intestinal sau ciroz hepatic, dar poate s cauzeze i blocarea fluxului sangvin renal. Majoritatea lectinelor ce se gsesc n alimentaie nu sunt foarte periculoase, dei ele pot cauza o mulime de probleme. S-a efectuat un studiu (Nachbar and Oppenheim, 1980), in care s-a constatat c 30% din alimentele proaspete i procesate conin lectine active. Lectinele din frunzele de salat, fructe, mirodenii, semine, cereale i nuci (chiar i dup prjire) au artat un nivel nalt de toxicitate. Acelai lucru poate fi spus i despre uleiurile provenite din plantele ce conin lectine. Astfel, uleiul nerafinat de soia conine 858-2983 mcg/kg lectine, iar cel rafinat 24-55 mcg/kg. n cea mai mare parte dintre cazuri, sistemul imunitar protejeaz organismul mpotriva lectinelor. 95 la sut dintre lectinele pe care le absorbim din dietele noastre tipice sunt ndeprtate de organism, ns cinci la sut dintre acestea sunt filtrate n torentul sangvin, unde reacioneaz i distrug hematiile i leucocitele. Aciunile lectinelor n tractul digestiv pot fi chiar mai puternice. La acest nivel, ele creeaz adesea o puternic inflamaie a mucoasei intestinale, iar aceast aciune aglutinant poate mima alergiile alimentare. Efectele interaciunii lectin - intestin: 1. Alipirea ctre celulele mucoasei intestinale; destrucia membranei microvillus; celulelor shedding reducerea capacitai de absorbie a intestinului subire. 2. Creterea endocitozei; inducia proceselor hiperplastice ale intestinului subire; creterea turnover a celulelor epiteliale. 3. Interferarea cu sistemul imun; reacii de hipersensibilitate. 4. Interferarea cu flora intestinal; nmulirea selectiv exagerat. 5. Efecte directe i indirecte asupra metabolismului. 26

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Lectinele sunt produse frecvent n plante, coninndu-se n cantiti mari n cereale i n unele legume, i pot atinge pn la 10% din proteina totala din semine.(Lis, Sharon 1986; Etzler, 1986). Ele sunt implicate n sistemul de aprare a plantelor mpotriva duntorilor. Ele sunt cunoscute pentru calitile antinutritive i pot fi toxice chiar i n concentraia natural produs(Liener, 1986). Cele mai citotoxice lectine cauzeaz cel mai des alergii alimentare. n calitate de alergeni alimentari s-au identificat 4 lectine: 2 lectine din grul Triticum aestivum (Smith, Raikhel, 1989); 1 din grul Triticum durum (Raikhel, Wilkins, 1987); 1 din arahide Arachis hypogaea (Young et al., 1991). Fiecare din aceti 4 alergeni cauzeaz retardare semnificativa n dezvoltarea unor insecte precum grgria mazrii (Callosobruchus maculatus). Aglutinina Nacetylglucosaminica (lectin-WGA) a germenilor de gru este pe lng toate letala, pentru larva sfredelitorul european al tulpinilor Ostrinia nubialis (European corn borer), chiar i intr-o concentraie relativ mic ea inhiba creterea larvei viermelui sudic al rdcinilor, ce atac rdcina porumbului sudic (Diabrotica undecimpunctata, Czapla, Lang, 1990). Este evident c o anumit lectin cu specificitate definita pentru un anumit hidrat de carbon nu poate sa protejeze planta mpotriva tuturor duntorilor, fiindc structurile glycosil ale suprafeelor externe ale diferitor bacterii, fungi, insecte sunt diferite. Cu toate acestea, viznd eficacitatea nalt a lectinelor n lupta cu duntorii, una dintre sarcinile ingineriei genetice ar deveni cercetarea minuioasa i ulterior introducerea lectinelor cu int specific n anumite plante, avnd n vedere c oricum duntorii posed afinitate ctre anumite plante. Dar scopul de baz rmne oricum depistarea acelor lectine care s fie n acelai moment toxice pentru duntori i inofensive pentru om, animale i insectele benefice.

4.2. Proteine legate de patogenez


Datorit modificrii propriului statut fiziologic, plantele au capacitatea de a se autoproteja n cazul diferitor stresuri precum: condiii nefavorabile, aciunea razelor ultraviolete, metalelor grele, poluanilor din atmosfer, aplicarea diferitor substane chimice precum fitohormonii, rniri i atacuri din partea bolilor i vtmtorilor. Reaciile de protecie pe care le dezvolt plantele n aceste cazuri sunt numite rspunsuri de protecie, iar proteinele activ sintetizate n concordan cu aceste reacii sunt numite proteine de aprare (defense-related proteins). Acestea din urm sunt sintetizate nu numai n locul afectat, ci 27

Organisme modificate genetic i sntatea uman

i n toat planta. Proteinele de aprare, n special cele specific induse n stri patologice, prezint un interes deosebit pentru viitorul agriculturii i sunt numite proteine legate de patogenez (PR proteine). Proteinele respective au fost identificate n multe specii de plante superioare. Sintetizarea i acumularea lor n plant s-a pstrat pe parcursul evoluiei. n ingineria genetic acestea aduc o contribuie considerabil datorit faptului c ele pot fi sintetizate de celule direct prin translaia unei gene. Astfel, PR proteinele descoperite n multe specii de plante au fost clasificate n 17 familii (tab. 5). La baza clasificrii au fost luate: asemnarea secvenial, serologic i imunologic i proprietile enzimatice. Printre alergenii vegetali inclui n Official Allergen Database a Uniunii Societilor Imunologice, aproximativ 25% se refer la grupul proteinelor legate de patogenez. Acestea sunt rezistente la proteoliz i la ph sczut. Aceste caracteristici i nivelul expresiei plaseaz PR n grupa substanelor care provoac rspuns imun la om la contactul cu mucoasele.
CHIMICALE STRESURI PLANTE POLUANI AERIENI SELECIE

PROTEINE LEGATE DE PATOGENEZ

Ci de conservare

alergeni polivaleni

Ci de expunere

Reacie ncruciat

Figura 2. Proteine PR

Proteinele legate de patogenez sunt clasificate n 17 grupuri. 7 din aceste grupuri conin proteine cu proprieti alergice (2, 3, 4, 5, 8, 10, 14) i celelalte conin alergeni alimentari.


28

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Asemnarea n secvena aminoacizilor face ca PR-proteinele sa provoace reacii ncruciate, pentru alergenii din diferite plante. Expresia indus, de ctre factorii de mediu, a alergenilor caracteristici PR-omoloage, poate explica diversitatea alergiilor. Poluanii antropogeni de asemenea influeneaz expresia alergenilor PR-proteinelor (Midoro-Horiuti T., Brooks EG, Goldblum R.M., Patogenesis-related proteins of plants as allergens. Ann allergy asthma immunol, 2001 oct.; 87 [4]: 261-71). Spre exemplu, proteinele care au epitopi comuni cu Bet v. 1 (alergen major al polenului) se ntlnesc n polenul ctorva specii de meri, elin, morcovi, nuci i soia. Pacienii alergici la polen prezint deseori alergii la ingestia anumitor fructe i legume, precum i la produsele derivate din acestea. Spre exemplu, proteinele care au epitopi comuni cu Bet v1 (alergen major al polenului) se ntlnesc n polenul ctorva specii de meri, elin, morcovi, nuci i soia. Tabelul 3. Alergeni alimentari i inhalatorii cu omologie secvenial cu proteine PR clasa PR 10
ALERGENUL5 Alergenul alimentar Mal d I, Malus domesticus(mr) Alergenul inhalator Bet v I, Betula verrucosa(mesteacn) Alergenul inhalator Aln g I, Alnus glutinosa(arin negru) Alergenul inhalator Cor a I, Corylus avellana(alun) Proteina PR6 cu o semnificativ omologie secvenial7 cu alergenii nregistrai PI49/p I176 Pisum sativum (mazre) PvPR 1/2 Phaseolus vulgaris (fasole) PcPR 1-1 Petroselinum crispum (ptrunjel)

STH2 Solanum tuberosum (cartof)

Consequences of classical and biotechnological resistance breeding for food toxicology and allergenicity. S. L. Franck-Oberspach and B. Keller. Plant breeding 116, 1-17 (1997).
Omologie n limitele alergenilor inhalatori nregistrai: 80-90% Alte proteine PR nregistrate ce aparin familiei PR-10. Omologie n limitele rndurilor proteinelor PR de la 37% pn la 64%. 7 Identitatea secvenial ntre Mal d I i Bet v I este de 56% (63% cu izoformul BV1SC AL Bet v I) la nivelul proteic. Identitatea secvenial ntre Bet v I i p I49 este de 55% (70% incluznd schimbrile conservative) la nivelul proteic. Identitatea secvenial ntre Bet v I i PvPR I este de 44% la nivel proteic.
5 6

29

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Pacienii alergici la polen prezint deseori alergii la ingestia anumitor fructe i legume i la produsele derivate din acestea. Majoritatea reaciilor se datoreaz celor 4 structuri de reacie ncruciat8 prezente n polenul de mesteacn (Betula verrucosa). Teoretic, alergenii asemntori dup structur cu alergenii din polenul de mesteacn sunt termolabili i practic sunt distrui n timpul pregtirii produselor sau n procesul de digestie, spre deosebire de alergenii clasici alimentari, ns oricum exist cazuri de reacii alergice la persoanele sensibile. Tabelul 4. Aspecte clinice ale alergiilor alimentare
Cavitatea bucal Tractul gastrointestinal Pielea Aparatul respirator Aparatul cadiovascular

Sindromul oral alergic (prurit i edem al buzelor, cavitii bucale i limbii) Vom, crampe, diaree, dureri abdominale Urticarie, dermatit atopic, edem vascular Astm, rinit, bronhospasm Prbuirea presiunii arteriale, anafilaxie

Conform studiilor efectuate, culturile care conin aceste proteine provoac Sindromul Oral Alergic (OAS), cauzat de reactivitatea ncruciat ntre proteinele din legumele i fructele proaspete i polen (tab. 4). Acest sindrom este prezent la 70% din persoanele cu alergie la polen. Manifestrile clinice ale OAS sunt: senzaie de arsur, usturime, prurit, uneori edemaierea buzelor, limbii, cavitaii bucale, faringelui, care apar la ingestia fructelor sau a legumelor proaspete. Aceste simptome persist de la cteva secunde pn la cteva minute i rareori progreseaz. Totui studiile reflect c 9 % din persoanele cu OAS au n anamneza simptome severe ale alergiilor alimentare, iar 2% - au suportat oc anafilactic.

Secvena aminoacidizilor N-terminali la mr, ciree, morcovi are o identitate de 28-67% cu Bet v 1; identitate de 36-66% cu proteina PR din ptrunjel. Astfel, persoanele alergice la polen dezvolt i alergii la fructe i legume (Vieths et al., 1996).
8

30

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Tabelul 5. Clasificarea proteinelor legate de patogenez Simbolul Familiile Membrii Proprieti genei PR-1a din Antifungic; 14Ypr1 PR-1 17kD tutun
PR-2 PR-3 PR-4 PR-5 PR-6 PR-7 PR-8 PR-2 din tutun P, Q din tutun b-1,3-glucanaza, 25-35 kD Chitinaza tip I, II, II, IV, V, VI, VII; 30 kD Ypr2 Ypr3, Chia Ypr4, Chid Ypr5 Ypr6, Pis Ypr7 Ypr8,Chib

Referin
Antoniw . a., 1980 Antoniw . a., 1980 Van Loon, 1982 Van Loon, 1982 Van Loon, 1982 Green i Ryan, 1972 Vera i Conejero, 1988 Metraux . a., 1988 Lagrimini . a., 1987 Somssich . a., 1986 Melchers . a., 1994 Terras . a., 1992 Epple . a., 1995

R din tutun S din tutun Inhibitor I din tomate


P 69 din tomate Chitinaza din castravete Peroxidaza prductoare de lignin din tutun PR1 din ptrunjel Chitinaza clasa V din tutun Rs-AFP3 din ridiche THI2.1din arabidopsis

Antifungic, chitinaza tip I, II; 13-19 kD Antifungic, tip taumatina Inhibitor al proteinazei; 613kD
Endoproteaza

Chitinaza tip III

PR-9

Peroxidaza Ribonucleaza, Proteina Bet-v1 Chitinaza tipI Defensina Tionina

Ypr9,Prx

PR-10 PR-11 PR-12 PR-13

Ypr10 Ypr11,Chic Ypr12 Ypr13,Thi

31

Organisme modificate genetic i sntatea uman Garcha-Olmedo . a., 1995 Zhang .a.,1995 Wei . a., 1998 Okushima . a., 2000

PR-14 PR-15 PR-16 PR-17

LTP4 din orz OxOa din orz OxOLP din orz PRp27 din tutun

Proteina transferului lipidic Oxalat-oxidaza Tip oxalat-oxidaza necunoscut

Ypr14,Ltp Ypr15 Ypr16 Ypr17

Deci alergiile alimentare reprezint una dintre cele mai serioase probleme la momentul actual datorit impactului asupra sntii. Acesta poate varia de la efecte minore pn la efecte foarte severe. Alergiile alimentare sunt cauzate de interaciunea componentelor alimentare cu sistemul imun. Cei mai importani factori care determin gravitatea reaciilor alergice sunt: tipul alergenului, starea i constituia persoanei afectate i circumstanele consumului unui anumit produs. Orice protein nou introdus n lanul alimentar este un nou potenial alergen. Majoritatea celor mai importani alergeni alimentari au caracteristici comune: masa molecular cuprins ntre 10 i 70 kD, termostabilitate, rezisten la procesele de digestie, proteoliz i hidroliz, hidrosolubilitate. Posibilitatea ingineriei genetice de a produce variate modificri ale produselor sau ale plantelor alimentare determin modificarea potenialului alergic, astfel evaluarea riscurilor i studierea proprietilor alergice sunt vital importante.

4.3. Modificarea toxicitii plantelor


Att n antichitate ct i n prezent, plantele au fost i sunt o important surs de hran pentru om. Prin ncercri i erori, oamenii au nvat c numai anumite plante pot fi consumate fr pericole pentru sntate i via. Pe parcursul evoluiei, ei au realizat, de asemenea, c unele plante pot fi consumate numai dup preparare. Cunotinele despre sigurana alimentara au fost transmise din generaie n generaie, astfel nct pe parcursul ultimului secol, n special ultimii 50 de ani, cu ajutorul analizelor chimice i testelor de toxicitate omenirea a aflat cauzele i constituenii toxicitii multor plante. 32

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Aadar, pe lng componentele nutritive, plantele conin i substane toxice. Aceste substane (tab. 2) sunt sintetizate pentru protecie mpotriva duntorilor i a microbilor. Aici putem meniona i dependena toxicitii de doz, astfel nct o doz mic poate avea efecte benefice asupra organismului, iar dac aceasta depete un anumit nivel, devine otrvitoare. Din aceast cauz se recomand de respectat cantitatea anumitor plante folosite pentru consumul alimentar. Majoritatea acestor toxine sunt prezente n alimentele obinuite, dar cantitatea lor este nesemnificativ, astfel ele nu produc intoxicaii. n altele, de exemplu n cassava, nivelul substanelor toxice este nalt de aceea ea prezint pericol pentru om. Tabelul 6. Toxine naturale ale plantelor de cultur (Holm . a., 1998).
Denumirea plantei Gru Orez Porumb Orz Toxina Durin Lectine Localizarea toxinei Prile vegetative tinere Boabe Boabe Prile vegetative tinere Boabe, tiulei Prile vegetative tinere Boabe

Inhibitori ai proteazelor
Inhibitor al tripsinei Glicozide cianogene Inhibitor al tripsinei Epiheterodendrin Inhibitor al tripsinei Saponine

Soia

Sorg Cassava Cartof Tomate

Daidzein Genistein Inhibitori ai proteazelor Durin Linamarin* Lotaustralin* Inhibitori ai proteazelor Alfa-chaconin** Alfa-solanin** Alfa-tomatin

Lectine Coumestrol

Semine Semine Plante tinere Tuberculi Tuberculi

Nicotin Lectine

33

Organisme modificate genetic i sntatea uman Glucozinolai Acid erucic*** Saponine S-metil-L-cistein sulfoxid
Lectine Lactucin 8-deoxilactucin

Rapi

Cicoare

* Coninutul total de glicozide nu va depi limita de 10 mg/kg. ** Coninutul total de glicoalcaloizi nu va depi limita de 200mg/kg la cartofii vechi i 100 mg/kg la cei noi. *** Coninutul total nu va depi limita de 5% n DK. n unele plante, substanele toxice sunt prezente dintotdeauna, n altele pot fi sintetizate la anumite etape al vieii acestora, pe anumite ci metabolice, sub influena diferitor factori. Probabilitatea activrii mecanismelor pn atunci pasive sau creterea activitii unuia activ este considerat foarte joas la plantele obinuite, dar ea poate deveni nalt datorit modificrilor genetice. Uneori, aceste mecanisme, silenioase de fapt, pot fi activate de mutaii, rearanjamente cromozomiale, sau noi regiuni (poriuni) regulatorii introduse n procesul de cretere (nmulire) i toxinele care pn atunci nu erau proprii speciei pot fi de acum produse. La fel, toxinele produse n cantiti mici pna la modificarea genetic pot s se produc n cantiti mari ca rezultat la aceast modificare. Aadar, n ceea ce privete modificarea genetic a plantelor, exist 2 aspecte ale toxicitii determinate de introducerea n plante a ADN - ului nou i anume: 1. Modificri directe prin (a) producerea substanei toxice noi din momentul modificrilor genetice i (b) schimbarea expresiei cantitative a toxicului deja existent (creterea sau scderea), i 2. Modificri indirecte, care duc la producerea sau la acumularea constituienilor toxici. Aceste efecte adverse pot aprea ca rezultat al oricrei inserii, pleiotropii (schimbare nedorit i neateptat cauzat de expresia transgenului) sau variaiuni somaclonale. Pentru determinarea efectelor adverse ale modificrii genetice i prentmpinarea impactului acestora asupra sntii umane este important de determinat echivalena substanial (substantial equivalence) aprecierea comparativ a plantei MG cu aceeai plant nemodificat. Adic, sunt efectuate estimri privitor prezena anumitor substane relevante din punct de vedere toxicologic, dar i din punct de vedere nutriional. Chiar i cea mai mic diferen 34

Aminoacid toxic Frunze i rdcini Frunze i rdcini Frunze i rdcini

Organisme modificate genetic i sntatea uman

trebuie privit ca indiciu a efectelor Glucozinolaii substane care nedorite care s-au petrecut n urma confer gust picant mutarului, modificrii. hreanului. Aciunea toxic asupra Din pcate, chiar i aceast omului se manifest prin activimetod nu ne poate garanta sut la tate antitiroidian, dereglri la sut lipsa substanelor toxice nedorite, nivelul tractului digestiv, inclusiv iar prezicerea efectelor nedorite este afectarea ficatului. imposibil. Saponinele aciunea toxic se Cel mai evident exemplu de manifest prin iritaie a mucoasei toxicitate a devenit cazul companiei tractului digestiv (gastroenterjaponeze Showa Denko K. K., care a ite cu anorexie, diaree i scdere comercializat suplimentul alimentar ponderal). triptofan MG. Nivelul crescut de Ltriptofan urma sa fie obinut datorit Glicozide cianogene (dubacteriei Bacillus amloliquefaciens MG. rina, linamarina, lotaustralina). Suplimentul alimentar a fost comIntoxicaia acut are urmtoarele ercializat fr a fi testat, deoarece se semne: respiraie i puls accelerat, considera c nu este important calea cefalee, gastralgii, vom, diaree, de obinere. Astfel, triptorfanul MG confuzie, convulsii. La ingestia a fost considerat identic celui comerunei doze mai mari poate surveni cializat anterior. moartea. Ca urmare, n 1989, n SUA a n cazul consumului ndelungat avut loc izbucnirea unei patologii neal plantelor ce conin glicozidele cunoscute pn atunci, care ulterior cianogene, fr prelucrarea acesa fost numit sindromul eozinotora, poate surveni intoxicaia filie-mialgie. Pacienii acuzau dureri cronic urmat de patologii acute n muchi i articulaii, ulterior cronice ale sistemului nervos i tumefierea articulaiilor. Aceasta central. boal era asemntoare cu sclerodermia i practic nu rspundea la tratament. n consecin, a avut loc decesul a 37 de pacieni i invalidizarea a circa 1,5 mii. Cercetrile (Sidransky . a.) au demonstrat c n urma transformaiei, bacteria MG productoare de L-triptofan a obinut proprietatea de a produce n cantiti nensemnate (mai puin de 0,1%) etilenbistriptofanul, o substan extrem de toxic, substan care a i fost cauza acestui sindrom. 35

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Cazul acesta se complic din cauz c firma Showa Denko a folosit n producerea triptofanului bacteria MG, realiznd concomitent o procedur simplificat de purificare. Astfel, pn n prezent nu este clar daca toxicitatea productului se datoreaz utilizrii bacteriei MG sau purificrii insuficiente, mai ales c stocul bacterian modificat genetic nu a fost disponibil pentru investigaii. (Australian Gen-Ethics Network, 1994). Unele substane destinate luptei cu duntorii pot bloca fermenii tractului digestiv att la insecte, ct i la om. O serie de soiuri transgenice de porumb, tutun i roii, rezistente la insecte, sintetizeaz lignina o substan, care mpiedic afectarea plantelor. Aceasta se poate descompune in metanol i fenoli, care la rndul lor au o aciune toxica i mutagena asupra omului. Tomate MG (Flavr Savr) au fost obinute prin metoda antisens, ele fiind primele plante MG comercializate. Au fost efectuate teste de toxicitate acut, pentru aceste tomate pe oareci de laborator. Conform datelor histologice, la 7 din 20 de femele s-au depistat leziuni moderate erozive-necrotice ale intestinului i stomacului. Astfel, la om exist riscul de dezvoltare a hemoragiilor digestive, n particular la vrstnici i la persoanele care folosesc aspirina ca profilaxie a trombozelor. 7 din 40 de oareci au murit n rstimp de 2 sptmni din cauze necunoscute. Cauza toxicitii a rmas nepublicat, iar comercializarea acestor tomate a fost sistata din cauza cheltuielilor exagerate de obinere i a calitilor gustative nesatisfctoare. Porumb MG (Chardon LL) rezistent la erbicide cu gena ce codific enzima Fosfinotricin-acetiltransferaza (PAT-PROTEINA), difer considerabil de porumbul non MG prin coninutul de grsimi i hidrai de carbon. Testele de toxicitate au fost efectuate doar pe pat-proteine. n urma experienelor pe oareci s-a demonstrat c capacitatea de digestie a sczut dup ingestia de porumb MG. EXEMPLE DE STUDII De regul, studiile care se efectueaz asupra plantelor MG se refer la: 1. Integritatea, stabilitatea, numrul de copii i amplasarea transgenului inserat n genomul plantei. 36

Organisme modificate genetic i sntatea uman

2. Comportamentul genelor strine ce permit inseria transgenului n genomul propriu (promotor i/sau terminator). 3. Comportamenul proteinei transgenice. n privina stabilitii ADN - ului inserat n genomul plantei s-a efectuat un studiu (2003) n privina unei secvene a acestui transgen n 5 varieti diferite. Au fost prezentate diferenele ntre liniile (descenden, filiaie) transgenice preconizate i cele prezente n plantele cultivate: absena secvenelor ateptate sau prezena secvenelor neprevzute de ADN. Un alt studiu (Universitatea Leeds, 2002) a demonstrat c ADN - ul nu este completamente degradat n hrana pentru animale. La om s-a demonstrat persistena ADN - ului transgenic n tubul intestinal i o cantitate infim transferat, a acestui ADN, bacteriilor din microflora intestinal. Referitor la promotor (secvena care iniiaz expresia transgenului), cel mai des folosit este promotorul 35S. S-a demonstrat c acesta poate fi activ n celulele umane (studiile in vivo i alte analize continu). n privina proteinelor transgenice, s-au constatat diferene semnificative ntre soia convenional i soia transgenic tolerant la erbicidul RoundUp (RR). Ultima coninea o protein inhibitoare (27%) a unei enzime digestive a sucului pancreatic cu rol de digestie a proteinelor. Efectul rezultat putea fi inhibarea digestiei anumitor proteine cu retardul dezvoltrii animalelor. De asemenea, s-a demonstrat (P. Chowdhury, 2003) c proteina transgenic Cry1Ab persist n organismul uman dup consum. La al 46-lea Simpozion de histochimie, Praga, 2004, de echipa d-lui pr. Malatesta, Universitatea Urbino, Italia a fost prezentat un studiu care demonstreaz c alimentarea oarecilor cu soia transgenic, tolerant la glifosfat, timp de 1-5 sptmni, induce perturbri n testicule: modificri ale activitii enzimatice, modificari ale celulelor Sertoli (implicate n funcia hormonal). Autorii precizeaz totui c aceste efecte pot fi datorate glifosfatului prezent n plante dup aplicarea erbicidului Round Up, dar exist i posibilitatea inducerii acestor efecte de ctre modificrile genetice ce au avut loc n plant. S-a efectuat un studiu pe oareci nrcai, ulterior alimentai timp de 3 luni cu soia MG. Au fost fixate datele microscopiei electronice n ceea ce privete schimbrile la nivelul nucleelor celulelor. Apoi oarecii au fost transferai la alimentaie cu soia non MG timp de 1 lun. Schimbarea regimului alimentar a provocat rentoarcerea la caracteristicile iniiale ale nucleelor. 37

Organisme modificate genetic i sntatea uman

n paralel, pentru a evalua influena soiei MG asupa integritii fizice a indivizilor aduli, un grup de oareci alimentai cu soia non-MG au fost trecui la un regim cu soia MG. n urma examenului microscopic s-au constatat aceleai modificri ca i n primul caz: nucleele hepatocitelor sunt de forma rotunda, cu puncte de condensate de ADN repartizate la periferie. n nucleolii de la al II - lea grup de oareci s-au depistat centre de fibrilare i abundena de compui fibroi deni, n timp ce la I grup nucleolii erau mult mai compaci, cu mai puini compui fibroi deni. n general, diminuarea suprafeei nucleului i creterea frecvenei porilor sunt indicatori ai creterii metabolismului. Suprafaa nucleului, care s-a dovedit a fi inferioar la oarecii alimentati cu soia MG se pstreaz n caz de schimbare a regimului alimentar. nsa, dup cum precizeaz autorii, regimul respectiv afecteaz n principal compoziia structural a nucleului. Exist oare posibilitatea de a regsi n produsele animaliere proteine transgenice, provenite din plantele MG, cu care au fost hrnite animalele respective? n 1997, echipa profesorului Doerfler a Institutului de Genetic al Universitatii din Koln a demonstrat pasajul ADN-ului microorganismului M13 n sngele, ficatul i splina oarecilor. n 2001, experienele profesorului Einspanier de la Institutul de Fiziologie al Universitatii din Mnchen a demonstrat prezena secvenelor ADN din soia i porumbul MG n limfocitele i duodenul vacilor hrnite cu acestea. Astfel, unii savani admit posibilitatea transferului de ADN de la plantele furajere ctre organele animalelor. n urma acestor rezultate s-a pus problema prezenei ADN-ului transgenic n laptele acestor vaci. Un rspuns la aceasta poate fi publicaia echipei profesorului Poms (2003, Universitatea tiintelor Agricole, Viena, Austria), care conchide c transferul ADN-ului dintr-un aliment digerat de un animal nu poate fi depistat n laptele acestuia. Pentru a obine rezultate mai veridice, n prezent se d preferin studiilor sngelui. Un alt studiu a fost efectuat de ctre echipa profesorului Chowdhury, Institutul Naional pentru Sntatea Animalelor, Japonia. Rezultatele acestuia au pus n eviden persistena ADN-ului i proteinelor de origine transgenic n organele porcinelor. Testele s-au petrecut pe porci hrnii cu Bt-porumb. S-a descoperit prezena urmelor genei care codific proteina Bt n stomac, duoden, rect i fecale. 38

Organisme modificate genetic i sntatea uman

n fine, s-a efectuat i un studiu pe om (publicat n 2004 de ctre echipa profesorului Netherwood, Universitatea Newcastle). Rezultatele au demonstrat c anumite gene introduse n soia MG supravieuiesc n condiiile digestiei din intestinul subire al omului, n special gena epsps care confer toleran la glifosfat. Aceste gene dispar, totusi, dup pasajul lor n intestinul gros. Aceste rezultate trebuie luate n considerare pe viitor, cci aceste gene care persist n intestin pot fi transferate microorganismelor prezente n organismul uman sau animal i s creasc numrul microorganismelor patogene, spre exemplu al celor rezistente la anumite antibiotice. PROPRIETI CANCEROGENE OMG pot deveni cancerogene i mutagene din cauza capacitii de cumulare a erbicidelor, pesticidelor i produilor de descompunere ai acestora. De exemplu, erbicidul glifosfat utilizat n prelucrarea sfeclei de zahr i a bumbacului MG este cancerogen i poate declana dezvoltarea limfomului. n urma diferitor procese intracelulare la soiurile MG de orez i tutun cu productivitate nalt se acumuleaz substane biologic active, capabile s provoace diverse tumori. n 2000, 2 cercettori americani (Daniel Doerge, Daniel Sheehan) au relatat rezultatele unui studiu n privina efectelor cancerogene ale soiurilor MG: creterea riscului cancerului mamar la femei, afectarea cerebelar la brbai i anomalii la copii. MUTAII Muli savani sunt de prerea c OMG sporesc riscul mutaiilor. Nu este exclus c ADN-ul transgenic s se acumuleze n organele interne ale omului s nimereasc, de asemenea, n nucleele celulelor embrionului uman, ceea ce poate duce la malformaii i chiar la moartea acestuia. Efectele mutagene pot aprea i din cauza erbicidelor, care se acumuleaz n plantele MG rezistente la erbicide. n aceast privin, cercettoarea dr. biolog Irina Ermakova a efectuat un experiement la Institutul de Neurofiziologie i Studiul Activitii Nervoase Superioare de pe lng Academia de tiine Rus. Nou femele de cobai au fost mprite n 3 grupe de cte 3 o grup de control, o grup n a crui hran s-a adugat fin de soia modificat genetic i o grup, care a consumat alimente amestecate cu fin de soia obinuit. Au fost numrate femelele care au nscut i numrul de cobai nscui vii i mori. Dup primul stagiu, cobaii au fost mprii n dou grupe, una hrnit cu fin de soia modificat genetic, cealalt hrnit cu fin de soia obinuit. 39

Organisme modificate genetic i sntatea uman

A rezultat un numr anormal de mare de decese printre urmaii femelelor hrnite cu soia modificat genetic (tab. 8). n plus, 36% dintre aceiai cobai cntreau mai puin de 20 de grame, fapt care evidenia starea lor de extrem slbiciune. Acesta este primul studiu care a demonstrat o dependen clar ntre hrnirea cu alimente modificate genetic i starea de sntate a urmailor. Morfologia i structurile biochimice ale cobailor snt foarte asemntoare cu cele ale oamenilor, ceea ce este extrem de ngrijortor n ceea ce privete efectele asupra mamelor i copiilor nenscui, mai ales n contextul n care se urmrete introducerea de ct mai multe OMG - uri n alimentaia uman, din raiuni comerciale: a declarat n concluzie Ermakova. Tabelul 8. Analiza comparativ a impactului OMG - urilor asupra natalitii cobailor Procentul Cobai n Femele care Cobai Cobai mori au nscut nscui vii (3 sptmni) deceselor via
Grup de control (4 din 6) Cu soia modificat genetic (4 din 6) Cu soia obinuit (3 din 6)

44 45 33

3 25 3

6,8 % 55,6 % 9%

41 20 30

De asemenea, cercetrile au demonstrat c la obolanii care au fost alimentai cu cartof MG, s-a nrutit compoziia sngelui, au fost depistate anomalii ale dimensiunilor organelor interne. La majoritatea animalelor decedate au fost depistate patologii ale intestinului subire i intestinului gros. Studiul realizat n cadrul Universitii de Agronomie Vavilov din Saratov (capitala regional de pe fluviul Volga) a demonstrat prezena modificrilor patologice severe la cobaii hrnii cu soia MG. Maria Konovalova, inginer biotehnolog, realizatoarea studiului n cauz, cu supervizarea profesorului V. Blinov, a raportat la o conferina de pres faptul c o varietate de soia MG rezistent la erbicidul RoundUp Ready al companiei Monsanto (40-3-2), aprobat pentru consum uman n Federaia Rusa i n multe alte ri, a indus serioase schimbri n morfologia unor organe interne (ficat, rinichi, testicule), inclusiv la nivel celular, la cobaii studiai.

40

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Soia MG a fost, de asemenea, gsit drept cauz a mortalitii infantile, precum i a creterii agresivitii i pierderii instinctului matern. oarecii care au fost hrnii cu proteine de la soia MG au dat semnale clare de comportament diferit i cretere a greutii unor organe interne. Unele dintre femelele care fceau parte din grupa cu regim alimentar modificat genetic i-au sufocat puii. De asemenea, am identificat anormaliti la puii de oareci ale cror mame au fost hrnite cu soia modificata genetic, a declarat Maria Konovalova. Dumneaei a fcut publice dou fotografii realizate n timpul studiului: una cu un oarece tipic, din grupa experimental hrnit cu soia MG pe o perioad de 5 luni i o alta cu un oarece din grupa hrnit cu soia convenional. Diferena n raportul de greutate a fost vizibil, oarecele hrnit cu soia MG artnd ca subnutrit.

4.4. Rezisten indus la antibiotice


Antibioticele sunt substane care distrug bacteriile sau le opresc nmulirea. Ele sunt anticorpi naturali, produi de anumite mucegaiuri, pentru a combate bacteriile competitorii acestora. Unele specii de bacterii au nvat s dezactiveze antibioticele, ele avnd gene care le fac rezistente la acestea. Gena rezistenei la antibiotice este o gen care codeaz enzima responsabil de degradarea antibioticului specific pn la bioprodui inofensivi, protejnd astfel bacteria. Rspndirea genelor rezistenei la antibiotice este rezultatul seleciei clonelor rezistente la prezena antibioticului i transmiterii active intergenetice a genelor rezistente (transferul genetic pe orizontal)9, Mazodier i Davies, 1991; Lorenz i Wackernagel, 1994. Este recunoscut faptul c utilizarea larg a antibioticelor n tratamentul oamenilor i animalelor, de asemenea utilizarea lor ca aditivi alimentari n hrana pentru animale pe parcursul ultimelor decenii, a contribuit la creterea frecvenei genelor rezistenei la antibiotice la bacterii. Figura 3. Evoluia PBP (penicillin binding proteins): de la bacterie cu sensibilitate total la penicilin la rezisten achiziionat prin recepionarea ADN - ului de la alte specii.
Oricare transfer genetic independent ori asincron cu calea de reproducere a organismelor vii (contrar mecanismului: printe-descendent transfer vertical) este numit transfer genetic orizontal.
9

41

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Este tiut faptul c genele rezistenei la antibiotice au aprut cu milioane de ani n urm, pe parcursul evoluiei bacteriilor, ca rezultat al necesitii microorganismelor productoare de antibiotice de a se autoproteja mpotriva propriilor toxine (Davies, 1994) i al coexistenei bacteriilor solului cu diverse microorganisme productoare de antibiotice. Aadar, solul a fost rezervorul iniial al genelor rezistenei la antibiotice. De aici bacteriile rezistente au migrat la animale i oameni prin mecanismele transferului genetic pe orizontal transferul materialului genetic de la un organism la altul fr implicarea mecanismelor de reproducere. Un alt rezervor este omul, n special tractul gastrointestinal al acestuia (fig. 4). Contaminarea omului cu bacterii rezistente la antibiotice se produce pe 2 ci: 1. Ingestia bacteriilor ce contin gena rezistenei, prezente n fructele i legumele proaspete (Corbet D., 1988) i n produsele obinute prin fermentare. 42

Organisme modificate genetic i sntatea uman

2. Contact direct cu ali oameni, animale i sol. Genele re zistenei la antibiotice sunt utilizate n crearea plantelor MG n calitate de markeri. Acetia au fost utilizai n timpul procesului de transformare/ selecie pentru obinerea marii majoriti a plantelor modificate genetic. Pentru a depista n stadiile timpurii de dezvoltare a plantei MG dac a avut loc modificarea dorit , specialitii introduc pe lng gena dorit i gena rezistenei la antibiotic, adic markerul. Markerul funcioneaz conform principiului toxin-antidot. Astfel, celulele care au fost modificate cu succes prin ingineria genetic nu vor muri la aciunea antibioticului, ceea ce demonstreaz i inseria calitativ a celeilalte gene (dorite). Aadar, deoarece modificarea genetic este destul de inexact, geneticienii folosesc gena-marker pentru a stabili dac inseria genelor a reuit. Flanders Interuniversity Institute for Biotechnology, March 2001; Safety of Genetically Engineered Crops. Figura 4. Diseminarea bacteriilor i a genelor acestora n mediul ambiant. Antibiotice

Animale

Alimente procesate

Oameni

Excremente, deeuri

Plante

Excremente, deeuri

Sol, ap

Cum poate gena rezistenei la antibiotice din plantele MG sa induc rezistena la antibiotice la om ? Cea mai mare ngrijorare n legtur cu folosirea markerilor este diminuarea eficacitii terapiei cu antibiotice la om i la animale. OMS in 2001 a avertizat c oamenii manifest deja rezisten la diferite antibiotice, ceea ce i face mai vulnerabili la maladiile severe.
10

- biotop

- rezervoare temporare

43

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Se presupune c ar exista posibilitatea ca bacteriile din intestinul omului i al animalelor s preia gena rezistenei din ADN-ul plantei MG nainte de degradarea total a acestuia. Respectivul risc crete dac omul sau animalul consum n acelai timp i un antibiotic specific, fiindc presiunea seleciei va influena i mai mult bacteria s achiziioneze gena respectiv. Pentru diminuarea riscului dezvoltrii rezistenei la antibiotice, consiliul de experi EFSA a instituit urmtoarele criterii de evaluare a genelor rezistenei la antibiotice: 1. Importana medical a antibioticului. 2. Folosirea curent a acestuia n medicina uman si veterinar. 3. Eficacitatea antibioticului n ceea ce privete deinerea controlului asupra bolilor i proceselor infecioase. 4. Distribuirea natural a cazurilor particulare de antibioticorezisten a microorganismelor, modul apariiei i dezvoltrii acesteia n sol, ap i tractul digestiv al omului i al animalelor. Astfel, conform acestor criterii, autorizare pot obine plantele MG ce conin gena rezistenei la un antibiotic deja larg rspndit n natur si la antibiotice neefective care nu se mai folosesc de mult n medicin. Exist i un alt aspect al acestei probleme genele rezistenei la antibiotice urmeaz s fie evaluate n mod diferit. Consiliul OMG al EFSA le clasific n 3 grupe: Grupa I GRA rspndite printre microorganismele din mediu. Antibioticele specifice pentru GRA I au o importan minim n medicina de astzi. Aceast grup include gena nptII (rezisten la kanamicin)7 i gena hpt (rezisten la higromicin). Experii EFSA aprob plantele ce conin nptII pentru cultivarea de mai departe i experiene. Grupa II GRA larg raspndite printre microorganismele din mediu. ns antibioticele asociate continu s fie folosite n tratamentul anumitor boli. Aceasta se refer la genele: am r (rezistena la ampicilin)8, aad (rezistena la streptomicin), cm r (rezistena la cloramfenicol).
Gena ampr confer rezisten la ampicilin i provine din bacteria E. colli, fiind folosit n porumbul MG Bt176. 8 Gena ampr confer rezisten la ampicilin i provine din bacteria E. colli, fiind folosit n porumbul MG Bt176.
7

44

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Experii EFSA recomand utilizarea acestor gene n cmp doar n cazul experienelor strict necesare. Grupul III GRA ce confer rezisten la antibioticele de o importan major pentru medicin. Spre exemplu, gena nptIII, care induce rezistena la amikacin. Experii EFSA recomand utilizarea acestei gene doar n cadrul experienelor de laborator. Exist ns civa factori care sugereaz c riscul poate fi foarte mic. ntradevr, teoretic, bacteriile sunt capabile s absoarb genele plantelor, dar n condiii naturale aceast posibilitate este foarte mic. n prezent nu sunt descrise cazuri de preluare la nivelul stomacului, de asemenea i n condiii speciale de laborator. Conform diferitor cercetri, este necesar prezena unui ir de factori care s determine bacteria nu numai s ncorporeze gena strin, ci i s manifeste informaia genetic. Doar astfel gena rezistenei la antibiotice poate deveni efectiv. Probabilitatea ncorporrii de ctre o bacterie a unei gene de la plant este de la 1:1 bilion pn la 1:100.000 bilioane. TRANSFERUL GENETIC PE ORIZONTAL Cu privire la plantele modificate genetic, WHO a ajuns la concluzia c nu exist o eviden nregistrat pentru transferul de gene de la plante la microorganismele din intestin i c nu exist rapoarte autentificate asupra transformrii bacteriene n mediul tractului GI uman. Acest fapt s-a bazat pe concluzia ferm c transferul genelor de rezisten la antibiotice este puin probabil sa aib loc, dat fiind complexitatea etapelor cerute pentru transferul genic, expresia i impactul eficientei antibiotice. Transferul genetic pe orizontal depinde de mai muli factori. Astfel, pentru a avea loc transferul de gene, trebuie s aib loc urmtoarele evenimente: ADN-ul vegetal trebuie sa fie eliberat din celule/ esuturi vegetale n forma integral i s supravieuiasc n condiiile de mediu ostile ale tractului GI, inclusiv expunerea la acidul gastric i nucleaze. De regul, cnd ADN-ul este eliberat din celul el este supus aciunii anumitor enzime, fiind dezintegrat. Microorganismele recipiente trebuie s fie competente pentru transformare. Microorganismele recipiente trebuie s lege ADN-ul pentru transformare. ADN-ul trebuie s penetreze peretele celular i s traverseze membrana celulara. 45

Organisme modificate genetic i sntatea uman

ADN-ul trebuie s reziste la sistemul de restricie/ modificare produs


cel puin 20 p. b. pentru o secvena ADN-ul omoloag complet, n vederea recombinrii la ambele capete ale ADN-ului strin. Integrarea poate avea loc prin recombinare, dar aceasta e posibil numai dac se ntlnesc prile necesare,adic secvena ADN-ului a genei rezistente la antibiotic trebuie s corespund strict cu gena bacterian. Translarea informaiei genetice la proteine. Informaia genetic este transmis anumitor proteine, care confer rezisten la un anumit antibiotic. Pentru aceasta gena trebuie s posede un semn de recunoatere, recognition signals, pentru a putea fi citite de bacterie. Totui, n pofida faptului c procesul de transfer genetic pe orizontal pare a fi anevoios, exista factori, care ar putea facilita acest proces, i anume parazii genetici: virusuri, plasmide, elemente mobile. Parazii genetici, avnd capacitatea de a traversa limitele speciilor i barierelor ecologice, pot servi i ca transportatori ai materialului genetic: 1. Majoritatea acestora au capacitatea de a invada i a insera propriul ADN n cromozomii oricrui tip de celul, cu o posibil ulterioar dezordine la nivel genetic i metabolic. 2. Ei sunt special construii pentru a sparge barierele de specie. n tranzit, ei pot lua cu sine i transfera gene de la noul organism-gazd la parazitul genetic sau invers. 3. Pot capt rezisten genetic, astfel reprezentnd noi probleme n sntatea public (rezistena la antibiotice a bacteriilor patogene sau tolerana la erbicide a buruienelor). Subiectul markerilor rezistenei la antibiotice este int permanent a controverselor. De aceea, autoritile mpreun cu experii au recomandat ca n viitor plantele MG s fie obinute fr acetia. Astfel, o noua tendin este acela de a crea markeri selectivi noi care ar nlocui markerii rezistenei la antibiotice (Kunkel . a., 1999; Stein i Hansen 1999). Dou din exemplele aflate n faza de cercetare sunt: sistemul n baz de citokine (Chua . a., 1999) i marcherul selectiv n baz de manoz creat de Novartis (Privalle . a., 2000).

ADN-ul trebuie s se integreze n plasmida sau genomul gazd i necesit

de microorganism, pentru a degrada ADN-ul strin.

46

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Tabelul 9. Genele rezistentei la antibiotice, cel mai des folosite n ingineria genetic la plante Gena rezistenei la antibiotice Antibiotic
ampr bla TEM1 aad sau ant(3)-Ia3 aph(3)-II sau npt II hgh sau hpt cmr sau cat ampicilina, amoxicilina streptomicina spectinomicina neomicina, kanamicina amikacina, neomicina, kanamicina hygromicina cloramfenicol

aph(3)-III sau npt III

(The biosafety of antibiotic resistance markers in plant transformation. Ph. Gay).

Abrevieri: bla =beta-lactamaza aad=aminoglicozidadeniltransferaza ant =aminoglicozidnucleotidtransferaza aph =aminoglicozidfosfotransferaza npt =neomicinfosfotransferaza hpt =hygromicinfosfotransferaza cat =cloramfenicolacetiltransfeaza Tabelul 10. Genele rezistenei la antibiotice n culturile transgenice aprobate Bla porumb porumb nptII porumb porumb nptII rapi rapi nptII cicoare cicoare nptII, aad, cat tomate nptII bumbac nptII cartof nptII dovleac nptII in nptII papaia (The biosafety of antibiotic resistance markers in plant transformation. Ph. Gay). Conform datelor din tabelul de mai sus, putem conchide c gena rezistenei la kanamicin este cel mai important marker folosit n ingineria genetic la ora actual. Aproape 90% din plantele aflate n cercetare conin acest marker. 47
Gena Uniunea European SUA

Organisme modificate genetic i sntatea uman

n viitorul apropiat i pe termen mediu utilizarea markerilor genelor rezistente la antibiotice n ingineria genetic a plantelor va fi limitat la urmtoarele gene: a) gena bla TEM1. Aceasta este prezent n porumbul MG Novartis 176 comercializat n SUA i Canada, de asemenea nregistrat n UE; b) gena nptII, prezent n cteva plante nregistrate n SUA, n special rapia AgrEvo Topaz 19/2, nregisrat i n UE. Aceast gen de asemenea este prezent n culturile aflate la stadiu de experiene; c) gena rezistenei la hygromicina hpt nc nu este prezent n plantele MG nregistrate, dar aceast situaie se poate schimba pe viitor. n calitate de confirmare poate servi faptul c 10% din plantele MG aflate n stadiu de studiere conin acest marker.

5. Aportul benefic al utilizrii OMG


n 1885 un savant pe nume Roux a demonstrat c celulele embrionului de pui pot fi meninute vii n afara corpului. n urmtorii o sut de ani, progresul biotehnologiilor celulare a cunoscut o dezvoltare fascinant n numeroase domenii, de la ceasurile biologice la terapia cancerului. Anticorpii monoclonali pot servi ca instrumente noi pentru detectarea i localizarea moleculelor specifice. De fapt, anticorpi monoclonali pot fi produi mpotriva oricrei macromolecule pentru a o localiza, purifica sau distruge, ca n cazul tratamentului cancerului. Tehnologiile ADN-ului sunt folosite n rezolvarea multor crime. De asemenea, exist posibilitatea crerii bncilor de ADN, ARN, proteine i de cartare a genomului uman. Markerii sunt utilizai la sinteza ADN i ARN specifici, n special pentru identificarea secvenelor vinovate de anomaliile genetice. Prin intermediul ingineriei genetice, sunt sintetizate proteine, care pot fi introduse n genomul plantelor sau animalelor, obinnd astfel plante rezistente la boli i capabile s triasc n mediu ostil. Fiind introduse n bacterii, aceste proteine pot produce antibiotice noi i alte medicamente utile. Tehnicele de clonare genereaz mari cantiti de proteine umane pure, care sunt folosite n tratamentul diferitor maladii, ca de exemplu diabetul. n viitor va deveni posibil crearea bncilor de proteine umane rare sau de alte molecule necesare. Va fi posibil pstrarea segmentului de ADN care este modificat 48

Organisme modificate genetic i sntatea uman

pentru a corecta o mutaie, pentru a majora sinteza unei proteine specifice sau pentru a produce o protein nou. Aceste tehnici vor juca probabil rolul cheie n terapia genetic.

5.1. Agricultura i industria alimentar


Una din problemele importante pentru rile n curs de dezvoltare rmne a fi malnutriia proteic, de asemenea carenele n fier, iod, zinc i vitamina A. Exist milioane de persoane care manifest semne clinice de deficien de oligoelemente sau caren de vitamine, rile Asiei de Sud fiind pe primul loc. UNICEF a estimat un numr de 124 mln. De copii afectai n 1992. n fiecare an din cauza carenei vitaminei A 5 mln. de copii sufer de xeroftalmia i 500 000 devin orbi (Asia de Sud). Dup ce ani de zile s-au obinut organisme modificate genetic n beneficiul fermierilor i fabricanilor de produse alimentare (prima generaie de alimente modificate genetic), tehnicile de inginerie genetic au nceput s fie folosite pentru modificarea calitilor nutritive ale alimentelor, ceea ce conduce la apariia celei de a doua generaii de alimente modificate genetic, alimente proiectate n beneficiul consumatorilor. Cele mai multe organisme modificate genetic, utilizate drept surse alimentare, aparin lumii vegetale. n tabelul 11 sunt prezentate plantele care, pe lng modificrile cu scop agricol, prezint modificri genetice efectuate n scop nutriional. Tabelul 11. Caracteristicile plantelor de cultura modificate genetic (dup Robinson, 2001)
Planta Caracteristici de cultivare Caracteristici nutriionale i de prelucrare

Cassava

Rezisten la virusul mozaicului Rezisten la boli Rezisten la insecte Rezisten la duntorii de depozit

Porumb

Coninut redus de glucozide cianogene Coninut mai mare de amidon Amidon modificat Coninut ridicat de lizin i triptofan Coninut mbuntit de protein Coninut crescut de ulei i modificarea proporiei de acizi grai 49

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Orez

Rezisten la bacterii Rezisten la insecte Rezisten la duntorii de depozit Rezisten la boli de natur fungic Toleran la erbicide Capacitate de fotosintez crescut Protecie mpotriva insectelor Rezisten la viroze Protecie mpotriva insectelor Rezisten crescut la boli Rezisten la viroze Rezisten la insecte Rezisten la duntori de depozit Rezisten la lovituri Rezisten la boli fungice Rezisten la viroze Rezisten la insecte Rezisten la boli Rezisten la boli fungice

Coninut mai mare de provitamina A Coninut mai mare de fier

Soia

Compoziie mbuntit a uleiului Coninut crescut de vit. E Nivel sczut de compui flatuleni Compoziie mbuntit a uleiului
Compoziie mbuntit a uleiului

Rapia
Palmier

Cartof

Coninut sporit de amidon

Tomate Banane

Coninut crescut de licopen Proprieti de procesare mbuntite Coacere ntrziat

Astfel, tehnicile de inginerie genetic pot contribui la (Robinson, 2001): modificarea proporiei de macro- sau micronutrieni; eliminarea sau diminuarea coninutului de compui cu efect nefavorabil asupra sntii (compui antinutritivi, toxine, alergeni);

50

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Una dintre primele modificri genetice efectuate cu scop nutriional a vizat modificarea compoziiei uleiurilor, avnd n vedere eficiena dietelor bogate n acizi grai nesaturai, n special n acid linolenic, pentru normalizarea dislipidemiilor. Uleiul de soia, palmier i rapi prezint, n urma modificrilor genetice suferite de plantele din care este extras, un raport mbuntit ntre acizii grai saturai i nesaturai. n aceste condiii, nutriionitii pot recomanda consumul de astfel de uleiuri pentru a preveni apariia bolilor cardiovasculare i a reduce numrul persoanelor afectate de ateroscleroz. O alt modificare genetic, ce are att implicaii nutriionale, ct i de fabricaie, se refer la modificarea amidonului. Modificarea proporiei existente n mod normal ntre cei doi polimeri coninui de amidon, amiloza i amilopectina, conduce la obinerea de amidon destinat unor scopuri bine definite, cum sunt mbuntirea proprietilor de gelificare sau ngroare i absorbia redus a uleiului n timpul procesului de prjire. De asemenea, amidonurile modificate din plantele modificate genetic reduc tratamentele chimice post - extracie pe care acestea trebuie s le sufere pentru a li se modifica structura n concordan cu domeniul de utilizare. Tot din motive nutriionale, ingineria genetic a fost folosit pentru a obine gru care permite fabricarea pinii cu coninut ridicat de amidon rezistent (form de amidon care exercit efecte benefice asupra strii de sntate, asemntoare celor produse de fibrele alimentare). Ingineria genetic poate fi, de asemenea, utilizat pentru a mbunti compoziia alimentelor de baz din rile srace din Africa, Asia i America Latin, unde posibilitatea de alegere a alimentelor este limitat, motiv pentru care apar frecvent carene de macro- i micronutrieni (vitamine, minerale). Spre exemplu, Institutul Federal pentru Tehnologie din Elveia a creat un orez modificat genetic cu coninut ridicat de provitamin A. Acest orez, care are boabe galbene i a devenit cunoscut sub denumirea de orez auriu, a fost proiectat special pentru cele circa 700 de milioane de persoane care sufer de caren n vitamina A i care consum orezul ca hran de baz (Moraru i Moraru, 2001). Tehnicile convenionale de obinere a unui astfel de orez nu sunt aplicabile, deoarece nu exist nici o varietate de orez care s produc provitamina A n endosperm. Utiliznd tehnicile de inginerie genetic, ntreaga cale de biosintez a provitaminei A a fost introdus orezului, folosind dou gene: una provenind de la narcise i alta de la o bacterie. Produsele de origine animal sunt sursa vitaminei A (retinol), iar cele de origine vegetal conin provitamina A( beta-caroten). Organismul, de fapt, 51

Organisme modificate genetic i sntatea uman

are nevoie de beta-caroten pentru a-l transforma n retinol activ. Biodisponibilitatea retinolului depinde de compoziia lipidic a alimentelor. Ca urmare, utilizarea eficient a beta-carotenului este asociat cu cea a lipidelor. Beta-carotenul este liposolubil, anume forma solubilizat i permite pasajul n enterocite, locul conversiei acestuia n retinol. Bioconversia carotenului n retinol se petrece n celulele intestinale i n ficat. Vitamina A circul n snge sub form de retinol, fiind asociat cu o protein de transport. Printre metodele clasice de corecie a carenei de vitamin A (suplinirea medicamentoas i mbogirea alimentelor cu vit. A) pot fi utilizate metode de ameliorarea genetic (morcovi, cartofi cu coninut sporit de beta-caroten sau producerea orezului auriu). Orezul este un produs consumat de jumtate din populaia globului. Este alimentul de baz n 33 de ri n curs de dezvoltare, prezentnd 27% din aportul energetic, 20% proteic, 3% lipidic furnizat de alimentaie. Conine tiamina, riboflavina, niacina (vitamina grupului B), zinc, n cantiti suficiente, dar este lipsit de vit. C, D, i beta caroten (inclusiv datorit decorticrii). Orezul brun integru conine cantitai nensemnate de provitamina A (0,1 g echivalent beta-caroten per gram), n timp ce orezul decorticat nu o conine deloc. innd cont de obiceiul de decorticare a orezului, geneticienii au decis c expresia provitaminei A s fie intit n endocarp. Procesul se bazeaz pe utilizarea embrionilor de orez i Agrobacteriei pentru a introduce prntr-o singur operaie de transgenez gene specifice. Vectorul pB19hpc include Vitamina A mrete rezistena cartilajelor, mucoaselor i a pielii la infecii, ajut la dezvoltarea normal a scheletului i smalului dentar, precum i la buna funcionare a ficatului, tiroidei i a altor organe. Un rol deosebit pe vitamina A l joac este n funcionarea ochiului, carena respectiv ducnd la scderea capacitii de adaptare a ochilor la lumina difuz, n cazuri mai grave putnd aprea o ulcerare a mucoasei oculare i chiar a corneei, fapt ce provoac opacifierea cristalinului i orbirea. De asemenea, vitamina A intervine la nivelul sistemului imunitar i n integritatea sistemului celular. Acidul retinoic, obinut la oxidarea acesteia, joac un rol important n reglarea expresiei genomice i n diferenierea celular. 52

Organisme modificate genetic i sntatea uman

secvenele phytoen-sintetazei (provenit din planta Narcissus pseudonarcissus) i secvenele phytoen-desaturazei (provenit din bacteria Erwinia uredovora), acestea premind generarea lycopenei n endosperm, unde ulterior se sintetizeaz geranylgeranyl difosfatul, care se transform ulterior n phytoen (caroten incolor). Cantitatea de beta-caroten produs este de 1,6-2,0 g/g. Lund n considerare cel mai mic procent de conversie (12 g beta-caroten pentru a obtine 1 g de retinol) i aportul zilnic recomandat (400-500 g retinol pentru copii), ar rezulta un consum zilnic de 2,5 kg de orez auriu (actualmente produs). n baza coninutului vitaminei A, estimat ntre 0,16-0,20 mg/100 g orez auriu, biodisponibilitate, factori de conversie, aportul recomandat pentru copii este de 0,3 mg/zi i avnd n vedere nivelul care ar fi suficient pentru a reduce mortalitatea, morbiditatea i dereglrile de vedere, consumul zilnic urmeaz s fie conform estimrii de mai jos (Beyer, Portrykus): Tabelul 12. Distribuia consumului recomandat de orez auriu
Factorul de conversie
n funcie de organism

Consumul orezului auriu


Disponibilitatea precursorului: 100%

n g /zi
Disponibilitatea precursorului: 50%

X12 540-675 1080-1350 X6 270-337 540-674 X4 180-225 360-450 Conform autorilor, cercetrile n ceea ce privete mrirea coninutului provitaminei A n orezul auriu nu se opresc aici. Astfel, se preconizeaz apariia unei noi varieti, care va permite eradicarea carenelor i consecinelor acestora n urma consumului aproximativ de 30-224 g/zi. n plus, orezul auriu a fost modificat i n scopul soluionrii unei alte probleme nutriionale majore: carena de fier, care afecteaz 2,15 miliarde de persoane (Ablkhail i Shawky, 2002). Aadar, pe lng genele pentru sinteza -carotenului, orezul auriu conine o gen care mrete gradul de absorbie a fierului din sol i alta care mrete gradul de absorbie a acestuia n organismul uman. Dei modul cel mai eficient de satisfacere a necesarului de vitamin A i de fier al unui organism este reprezentat de consumul unei game largi de alimente, cum sunt carnea roie slab i cerealele, pentru aport de fier, i ficatul, oule, petele gras, fructele i legumele de culoare galben i portocalie, legumele cu frunze verdenchis pentru aportul de -caroten (Ablkhail i Shawky, 2002), multe persoane 53

Organisme modificate genetic i sntatea uman

din rile n curs de dezvoltare nu au acces la acestea. Deoarece orezul este un aliment de baz n aceste ri, el poate contribui cu succes la diminuarea carenei de vitamin A i de fier n aceste pri ale lumii, n care alte strategii s-au dovedit ineficiente. Orezul auriu este nc n faza n care sufer modificri, cercettorii de la Institutul Internaional de Cercetare a Orezului dorind s-i mreasc coninutul de -caroten. Un alt aliment modificat genetic, cu posibile beneficii pentru sntatea locuitorilor din rile n curs de dezvoltare, este un orez care are un randament de obinere cu 30% mai mare dect orezul normal. Ca i orezul auriu, acesta se afl nc n stadiu de cercetare. Nu ntotdeauna mbuntirile nutriionale obinute folosind tehnicile de inginerie genetic sunt considerate a fi un succes. De exemplu, ncercarea de a mbunti coninutul de aminoacizi al soiei a fost o nereuit pe considerente alergice. Soia a fost modificat genetic utiliznd gene de la alunele de Brazilia, care conin concentraii ridicate de aminoacizi cu sulf, iar transferul realizat a inclus i gene ale unei substane alergene. Deoarece derivatele din soia sunt utilizate ca ingrediente alimentare, soia cu coninut mbuntit de aminoacizi cu sulf a fost desemnat necorespunztoare pentru utilizare n alimentaie (Robinson, 2001). Dup cum s-a menionat anterior, unele surse de hran utilizate n alimentaia uman conin factori antinutritivi (hemaglutinine, saponine, inhibitori tripsinici, glicozide cianogenice, tioglicozide, cumarin, gosipol, carbohidrai flatuleni), care afecteaz starea de sntate a consumatorilor. Importana acestor substane variaz la nivel mondial n funcie de frecvena prezenei lor n diet, cantitatea ingerat i sensibilitatea populaiei la un anumit compus. Ingineria genetic poate interveni pentru a diminua coninutul sau elimina prezena factorilor antinutritivi din alimente. Cteva exemple de utilizare a ingineriei genetice n acest sens sunt prezentate mai jos. O globulin existent n orez, rezistent la aciunea proteazelor din intestin, produce dermatit atipic, dermatit care afecteaz n special copiii japonezi. Aceast globulin este i termostabil, astfel nct tratarea termic a orezului nu asigur denaturarea ei. Deoarece hidroliza enzimatic a globulinei pentru obinerea de orez hipoalergenic este foarte costisitoare, iar prin mutagenez chimic s-a obinut orez steril, ale crui boabe nc mai conineau urme de globulin, s-a apelat la tehnicile de inginerie genetic. Prin inginerie 54

Organisme modificate genetic i sntatea uman

genetic s-a reuit reducerea semnificativ a globulinei alergene, fr a afecta caracteristicile agrotehnice ale orezului (Robinson, 2001). Abordri similare pot funciona pentru a elimina proteinele alergene din alune i boabe de soia. Unele lectine pun probleme de sntate, astfel nct au fost create varieti de plante cu coninut redus sau lipsite de aceste substane. Pentru soia i fasolea franuzeasc s-au gsit, n coleciile de plante ale cultivatorilor, varieti care nu posed gena pentru formarea lectinelor, aadar, pentru acestea va fi posibil s se creeze prin metode clasice varieti comerciale lipsite de lectine. Pentru alte specii de fasole, care posed copii multiple ale genelor pentru lectine, nu este posibil aplicarea procedurii clasice, motiv pentru care inactivarea genelor pentru lectine se poate realiza prin tehnici de inginerie genetic. Referindu-ne la componenii produselor alimentare, trebuie de menionat c n fiecare zi noi ingeram un numr mare de bacterii vii. Uneori acestea fac parte din flora saprofita a alimentelor (legume, fructe proaspete, unele mrci de apa mbuteliat). Numrul germenilor oportuniti este redus n alimentele de calitate. Pentru alte produse, ns, bacteriile sunt introduse premeditat de om i intervin n transformarea acestora. Ca exemplu servesc mezelurile, brnzeturile i alte produse lactate fermentate. Cel mai mare consum de bacterii vii se refer la iaurturi i la produsele lactate fermentate, cci numrul bacteriilor este de 108 bacterii/gram, iar consumul acestor produse depete 200 g/zi. n prezent exist 4 mari sectoare brevetate ale industriei alimentare, n care se utilizeaz MMG vii (levuri n calitate de ageni de fermentare): panificaia, oenologia, braseria i industria productoare de etanol. De asemenea, MMG vii se folosesc n producerea enzimelor, aromelor i auxiliarilor tehnologici pentru industria alimentar. MMG mai sunt utilizate n calitate de microuzine metabolice, iar substanele obinute sunt purificate i comercializate. De exemplu, chimozina, enzim utilizat n industria brnzeturilor, este produs de tulpinile MG de E. colli, Aspergillus niger, Kluyvermices lactis. MMG vii au rolul de a ameliora procedeele de producere i calitile organoleptice ale produselor. n majoritatea cazurilor, corpii microbieni sunt separai de produsele finale, cu excepia panificaiei. Dar avnd n vedere temperaturile de coacere a pinii, se presupune c o mare parte din microorganisme sunt distruse. 55

Organisme modificate genetic i sntatea uman

SNTII Unele substane coninute de alimente nu reprezint compui nutritivi eseniali, dar ele i aduc contribuia la promovarea strii de sntate. Aceste substane cu efect benefic, cunoscute sub denumirea de compui vegetali bioactivi, sunt reprezentate de diferite clase de substane vegetale: flavonoide, fitoestrogeni, glucozinolai etc. Se fac eforturi att prin tehnici convenionale, ct i prin tehnici de inginerie genetic pentru a spori coninutul de compui vegetali bioactivi (de exemplu, mrirea coninutului de glucozinolai din speciile de varz), dei mrirea coninutului lor poate s nu mbunteasc starea de sntate. Alte componente alimentare, cum sunt fibrele, dei nu au valoare nutritiv pentru c nu sunt hidrolizate de enzimele digestive, au efecte benefice asupra funcionrii intestinului. Prin utilizarea tehnicilor de inginerie genetic se dorete s se creasc proporia de fibre din alimente, dei, ca i alte substane, duneaz dac sunt consumate n exces. Dezechilibrul ntre aportul i necesarul de substane biologic active, care influeneaz patologia omului contemporan, poate explica implicarea ingin56

Poteniale pericole i riscuri pentru sntate. 1. Modificarea metabolismului MMG poate conduce la efecte nedorite, neateptate directe sau indirecte pentru organism. n principiu, MMG n sine nu sunt periculoase. Cu toate acestea, supraexpresia acestora poate antrena dup sine dereglri la nivelul tractului digestiv. 2. MMG pot fi rezideni sau tranzitorii care i schimb statutul funcional i relaia cu flora intestinal. 3. MMG, prin interaciuni neateptate cu bacteriile rezidente, pot modifica echilibrul florei intestinale sau pot favoriza instalarea florei patogene.

Un sector aparte n care se utilizeaz cu succes MMG este industria lactatelor. Acest sector prezint un interes major pentru medicin din punctul de vedere al folosirii MMG vii cu proprieti specifice diferite, importante n tratamentul i profilaxia diferitor maladii. Dar acesta rmne s fie sectorul cu cele mai multe restricii i ntrebri fr rspunsuri din cauza securitii sanitare care urmeaz s fie evaluat. Nici unul dintre brevete nu are meniuni speciale referitoare la sntate. PROMOTORI AI

Organisme modificate genetic i sntatea uman

eriei genetice n modificarea compoziiei alimentelor. Astfel de cercetri pot ncuraja consumul de alimente promotoare ale sntii.

5.2. Industria farmaceutic


ncepnd cu anii 1980, a nceput cultivarea MMG i utilizarea lor pentru obinerea moleculelor de interes terapeutic. De exemplu: insulina, hormonul creterii, vaccinuri (vaccinul contra hepatitei B obinut din tulpina levuric Saccharomyces cerevisae). Pe parcursul ultimilor 20 ani, n aceste produse au fost introduse noi specii de bacterii. Rolul acestora este de a modifica calitile gustative i texturale, dar nainte de toate ele sunt folosite pentru a induce efecte benefice pentru sntatea omului. Ele sunt numite probiotice i principalele lor efecte pozitive sunt: reglarea tranzitului intestinal si stimularea sistemului imun. Astfel, microorganismele modificate genetic (MMG) care au achiziionat noi proprieti pot fi folosite n scop medical, pentru a conferi produselor proprietile organoleptice dorite sau pentru a introduce modificri n procesul industrial de producere. Conform studiilor efectuate, MMG ar putea fi utilizate n viitor nu numai n mod indirect, ci i n mod direct pentru atingerea anumitor scopuri terapeutice si profilactice. Aceasta se refer la MMG care ar putea nlocui un anumit principiu activ (medicament, enzim) i ar putea fi consumat de om via produsele alimentare. De asemenea, e de menionat capacitatea MMG de transportare a unui medicament n poriunile inferioare ale tractului digestiv (pentru a prentmpina degradarea medicamentului sub influena fermenilor gastrici) fr a recurge la forme medicamentoase sofisticate. BACTERII-MEDICAMENTE Exist dou domenii principale de utilizare a bacteriilor cu rol de medicamente. Primul domeniu se refer la obinerea vaccinurilor pentru vaccinarea oral, parenteral sau nazal. Astfel, expresia antigenilor virali, tumorali, anticorpilor neutralizani sau producerea concomitent a diferitor interleukine i antigeni de ctre MMG moduleaz reacii imune necesare profilaxiei sau tratamentului diferitor maladii. Al doilea domeniu se refer la MMG, care, fiind ingerate, secret enzime sau mediatori cu rol benefic n tratament sau profilaxie. Exemplul cel mai 57

Organisme modificate genetic i sntatea uman

marcant la ora actual este studiul efectuat de echipa lui Steidler: producerea interleukinei 10 de ctre Lactococcus lactis n tractul digestiv. Experimental s-a demonstrat c acesta reduce inflamaia la nivelul tractului digestiv, actualmente fiind testat la pacienii cu boala Crohn (patologie inflamatoare cronic a intestinului). Tabelul 13. Utilizarea bacteriilor n tratamentul medicamentos
Organismul productor

Streptococcus gordonii Streptococcus gordonii

Anticorpi H6 Anticorpi

Molecula produs

Scopul medical

Referine

Vaginite cu Candida albicans Imunizare pasiv mpotriva infeciilor neonatale cu streptococi din grupa B Imunizare contra papilomului virusului uman HPV Protecie mpotriva holerei Protecie mpotriva Helicobacter pilori Protecie antiviral Protecie mpotriva Clostridium tetani

[57]

(similari polizaharidelor capsulare de tip III)

[58]

Streptococcus gordonii si Lactococcus casei Lactobacillus plantarum Bacillus subtilis Bacillus subtilis Bacillus subtilis

Proteina E7 Toxina holeric B Ure B (subunitate a ureazei Helicobacter pilori) Interferon alpha-2 uman Fragment C al toxinei tetanosului

[59, 60] [61] [62] [63, 64] [65, 66]

REMEDII MEDICAMENTOASE I VACCINURI n prezent, cercetrile privind utilizarea biotehnologiilor pentru producerea medicamentelor cuprind diverse domenii printre care: cancerul, obezitatea, bolile genetice rare. Pentru ultimele, biotehnologiile reprezint singura cale de vindecare. ns toate aceste cercetri vor dura cel puin cteva zeci de ani. 58

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Ingineria genetic va permite producerea unor noi antibiotice, fiindc antibioticele actuale actioneaz doar asupra unor reacii chimice proprii microbilor. Identificarea totalitii reaciilor i studierea mecanismelor de aprare a insectelor i plantelor mpotriva infeciilor vor deschide o nou cale n era preparatelor antimicrobiene. O alt viitoare aplicare a geneticii este farmacogenetica. Ea urmeaz s optimizeze tratamentul n general. Astfel, datorit testelor genetice, va fi posibil alegerea tratamentului individual, adaptat caracteristicilor organismului respectiv. n prezent, biotehnologiile sunt utilizate pentru producerea medicamentelor care nu pot fi obinute pe cale chimic din cauza imposibilitii sintezei sau costului prea ridicat. Actualmente mai mult de 100 de medicamente i vaccinuri sunt obinute prin inginerie genetic. Prima aplicare a biotehnologiilor a fost producerea vaccinurilor, serurilor i antibioticelor. Astzi, biotehnologiile permit nlocuirea produselor extrase din organe umane i animale cu remedii produse de ctre bacterii (ncepnd cu 1982, diabetul zaharat este tratat cu ajutorul insulinei produse de bacterii, nlocuind astfel extractul pancreasului de porc). Medicina moderna studiaz n continuare posibilitile de sintez a produselor farmaceautice mai efective pentru prevenirea i tratarea bolilor. Ca exemplu poate servi implicarea ingineriei genetice n obinerea vaccinurilor comestibile, plantelor productoare de anticorpi si proteine umane. Ingineria genetic face posibil i fabricarea moleculelor complexe, imposibil de extras prin metode industriale din cauza concentraiei infime a acestora. Acesta e cazul eritropoetinei (EPO), hormon care permite tratamentul diferitor forme de anemie, de asemenea interferonului utilizat in tratamentul cancerului i civa hormoni. Producerea proteinelor medicamentoase prin ingineria genetic decurge prin transferul genei corespunztoare ntr-un organism uor de cultivat (microorganism, plant). Aceast operatiune se numete clonaj al genei i creeaz un OMG. Dup aceasta, purificarea proteinei se face cu ajutorul metodelor industriale sofisticate. Costul acestui tip de producere este mai ridicat dect la producerea chimic. Posibilitile contemporane permit nlocuirea, n anumite cazuri, a bacteriilor i levurilor prin utilizarea plantelor MG. Extracia moleculelor din plante este mai facil dect din bacterii i levuri i este mai puin costisitoare. 59

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Plantele MG au deschis o nou cale de cercetare a vaccinurilor, i anume a vaccinurilor comestibile. Sistemele de producere a proteinelor de interes farmaceutic cu ajutorul plantelor MG prezint urmtoarele caracteristici i avantaje: celulele vegetale sunt celule eucariote (ca i celulele umane), ele dispunnd de un sistem ce permite n multe cazuri de a produce proteine complexe cu proprieti terapeutice echivalente proteinelor umane. De asemenea, transgeneza vegetala permite fabricarea vaccinurilor imposibil de fabricat prin metode tradiionale, nivelul actual al biotehnologiilor permite de a depista precis esuturile care exprim proteina de interes, astfel devenind posibil stocarea eficient i extragerea mai uoar a acestora. Vaccinurile clasice sunt culturi microbiene distruse sau cu virulen atenuat, sau fragmente de antigene, utilizate n profilaxia unor boli infecioase. Avantajele vaccinurilor comestibile (exprimate n plante) ar fi eliminarea necesitii de purificare i eliminarea cii injectabile de administrare. Experienele au demonstrat c n urma administrrii vaccinurilor este indus rspunsul imun (Tacket et al., 1998). n plus, aceti antigeni formeaz un rspuns imun potrivit organismului-gazd. Studiile au fost efectuate pe: porumb, tutun, roii, soia, cartof, salat, spanac, mazre (Langridge, 2000). Primul studiu care a demonstrat c plantele pot exprima antigenii a avut loc n 1990 (Curtiss, Cardineau). n acest studiu, tutunul a fost modificat genetic pentru a exprima antigenul de suprafa al bacteriei dentare, Streptococcus mutans. Experiena a fost efectuat pe oareci, rezultatul fiind pozitiv, adic sau format anticorpi mpotriva acestei bacterii. Pentru prima dat, eficacitatea vaccinurilor comestibile a fost raportat n 1995 (Arntzen), iar prima relatare despre vaccinurile comestibile umane a fost fcut n 1998. Astfel, s-a ajuns la concluzia c vaccinurile comestibile supravieuiesc n urma digestiei i efectiv stimuleaz rspunsul imun. ncepnd din acel moment, multe alte vaccinuri au fost exprimate n diferite plante. De exemplu, vaccinuri contra: rabiei, holerei, diareei cltorului, cariei dentare, cancerului de colon, infeciilor pulmonare, hepatitei B, Helicobacter pylori (cauza ulcerului), citomegalovirusului, virusului Norwalk, . a. (Hood, Jilka 1999, Walmsley, Arntzen, 2000). n curs de dezvoltare este vaccinul comestibil mpotriva hepatitei B cultivat n banan. Eficacitatea acestuia a fost demonstrat deja la oareci. De asemenea, se efectueaz cercetri n privina porumbului MG pentru prevenirea i trata60

Organisme modificate genetic i sntatea uman

mentul SIDA. n mai 2001, savanii Universitii Thomas Jefferson au anunat despre cercetrile n privina spanacului MG, cu scopul de a obine expresia proteinei HIV-supresoare, cu sperana ca aceasta s fie o cale spre un vaccin eficient mpotriva SIDA. Cercettorii au introdus gena care exprim proteina HIV-supresoare ntr-un virus vegetal, obinnd astfel inseria materialului genetic n spanac. Ulterior, planta ncepe s produc proteina respectiv. O alt echip de cercetatori a Universitii din California au obinut cartofi transgenici purttori de vaccin mpotriva holerei. Este vorba de toxina holerica B, protein inofensiv care declaneaz rspuns imun la oareci i la oameni. La 25 ianuarie 2007, o echip a Universitii Centrale din Florida a anunat despre producerea a unei antigen-proteine extras din cloroplatii tutunului MG, care poate fi utilizat n producia vaccinului mpotriva amebeazei (boal parazitar care afecteaz intestinul gros, anual mbolnvindu-se 50 mln i provocnd moartea a 100 000 persoane). Vaccinurile obinute prin ingineria genetic pot fi mai ieftine dect cele produse n laborator. n al doilea rnd, datorit acestei metode, este imbuntit tehnica securitii, deoarece producerea clasic implic un nalt risc de infectare a personalului implicat. De asemenea, un alt avantaj este c pot fi conservate la temperatura mediului ambiant n ambalaj natural fructul (vaccinurile comestibile). Ca o varietate a conceptului utilizrii vaccinurilor comestibile, implicate n dezvoltarea imunitii, cercettorii experimenteaz calea folosirii alimentelor MG pentru supresarea imunitii (cazul bolilor autoimune, cnd organismul produce anticorpi mpotriva esuturilor proprii: psoriasis, lupus eritematos, artrita reumatoid . a.). n prezent, se lucreaz la obinerea vaccinului comestibil mpotriva diabetului, planta implicat fiind cartoful ce conine decarboxilaza acidului glutamic enzima implicat n procesele autoimune (Arakawa et al., 1998). ANTICORPI I PROTEINE TERAPEUTICE Pe lng producerea vaccinurilor, cercettorii lucreaz i la crearea plantelor productoare de anticorpi. Deocamdat toate descoperirile rmn la faza de laborator. Se consider c aceti anticorpi vor fi utilizai mai pe larg pentru diagnosticul diferitor boli la oameni i animale. Succesul n prevenirea bolilor prin intermediul plantelor productoare de anticorpi a fost raportat pentru prima dat n 1998. n studiul respectiv au fost descrise primele experiene clinice la om, n care anticorpii obinui de la plant au fost aplicai pe dini, n loc s fie consumai ca vaccin comestibil. 61

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Acest tratament previne colonizarea cu Streptococcus mutans, demonstrndu-se astfel posibilitatea de a preveni patologiile dentare. De asemenea, n faz de cercetare, sunt studiile legate de tratamentul cancerului. n 2000, Stoger et. al. a anunat despre expresia anticorpului mpotriva antigenului carcinoembrionic n gru i orez. Despre crearea plantelor MG, care produc anticorpi pentru diagnostic s-a raportat n Japonia n 1998 (Tsuda et al.). Astfel, a fost obinut un soi de tutun MG care exprim antigenul HB core al hepatitei B, acesta fiind folosit pentru determinarea contaminrii cu virusul hepatitei B. Estimrile arat c coninutul unei frunze de tutun MG poate fi utilizat pentru testarea a 64 000 - 102 000 indivizi (n funcie de concentraia antigenilor n frunze). Lista proteinelor umane care pot fi obinute cu ajutorul plantelor MG este n permanent cretere, datorit cererii nalte pentru uz terapeutic i diagnostic. De exemplu: enkefalinele, -interferonul, albumina, hemoglobina, eritropoetina, enzima de conversie a angioenzinei-1 (Giddings et al., 2000). Hemoglobina este o molecul-cheie a respiraiei, ntruct asigur transportul oxigenului i al bioxidului de carbon n snge. De mai multe decenii, savanii sunt n cutarea unui substituent sangvin, care ar putea fi stocat i transportat cu uurin i care nu ar pune problema compatibilitii dup grupele de snge i a riscului infecios. Acest substituent ar putea fi folosit n cazuri de urgen n situaii de hemoragii masive. n prezent se evalueaz posibilitatea producerii tutunului transgenic, care va produce molecula hemoglobinei umane. Hemoglobina este sintetizat datorit activitii a 2 gene. Aceste 2 gene au fost transferate n tutun, ceea ce a permis sinteza acesteia n celulele plantei. n continuare se efectueaz diverse studii clinice, care ar permite o ulterioar aplicare n practic. Colagenul este principala protein a pielii omului. Este aplicat n calitate de cicatrizant, acoperire a implanturilor, pansament n traumatisme, tratamentul cicatricelor i ridurilor .a. Colagenul utilizat actual este preluat de la bovine. Situaia dat creeaz cerere pentru colagenul uman sintetizat de plantele transgenice, fiindc astfel s-ar elimina reaciile imune i posibilitatea infectrii cu diveri ageni patogeni specifici animalelor. Dou echipe de cercettori francezi au reuit producerea colagenului uman n tutunul MG. Cercetrile continu. Lipaza gastric este o protein utilizat n tratamentul insuficienei funciei exocrine a pancreasului. n lipsa lipazei gastrice devine imposibil digestia lipidelor. Aceast problem afecteaz ndeosebi pacienii cu mucoviscidoz sau cu patologii ale pancreasului. 62

Organisme modificate genetic i sntatea uman

Mucoviscidoza este o maladie ereditar frecvent n Europa, constituind 1/2500 noi-nscui. Lipaza gastric este indispensabil acestor bolnavi n calitate de tratament de susinere i pentru a ncetini evoluia patologiei. Tratamentul actual se bazeaz pe administrarea extractului pancreatic de porc el, ns, rmnnd ineficient pentru 15% de pacieni. n cadrul unui laborator din Frana se fac cercetri n privina unei lipaze gastrice produse din porumb MG. Astfel, gena care codific aceast lipaz este transferat mai nti n tutun (planta de testare), apoi n rapi, acestea fiind mai eficiente n ceea ce privete producerea moleculelor farmaceutice. Lipaza gastric obinut din tutun reprezint 0,5 - 1% de materie uscat de frunze, 1 kg/ha, ceea ce permite de a trata cteva zeci de bolnavi pe an. n 2005, n Frana s-au cultivat 20 ha porumb MG productor de lipaz gastric. Societatea Meristem Therapeutics a fabricat un soi de porumb transgenic, care produce o lipaza gastric de cine destinat mbuntirii strii tractului digestiv al copiilor bolnavi de mucoviscidoz. Aceasta a devenit o alternativ eficace de producere a acestei proteine. Pn la momentul dat, lipaza gastric era produs cu ajutorul levurilor prin transgenez, procesul acesta ocup cteva sptmni. Avantajul acestei metode este urmtorul: toate proteinele obinute cu ajutorul microorganismelor necesit diferite modificri chimice pentru a deveni active. De exemplu, glicozilarea, care este realizat n laborator i implic pierderi att de cost, ct i de calitate. Pe cnd plantele sunt capabile s realizeze aceasta (de asemenea i alte modificri posttraducionale) astfel nct s se obin substana activ gata format. Dezavantajul principal este legat de riscul de diseminare. Producia unei substane farmaceutice n cmp deschis este echivalent cu deschiderea unei farmacii pe natur. Astfel, poluarea genetic avnd loc att pe orizontal (transfer direct al materialului genetic ntre 2 organisme fr ncruciare, de exemplu ntre plante i microorganismele solului), ct i pe vertical (polenizarea i ncruciarea ntre varieti). PRODUCEREA PROTEINELOR UMANE Primul oarece transgenic a fost obinut n 1981 (Gordon, Ruddle, 1981). El a fost inginerizat pentru ai include gena hormonului creterii umane. Spre deosebire de semenii obinuii, oarecele transgen era mult mai mare, iar nivelul hormonului de cretere n snge era de cteva sute de ori mai mare. Ulterior, cteva rase de oareci MG au fost create pentru producerea proteinelor umane 63

Organisme modificate genetic i sntatea uman

destinate studiilor n domeniul infeciilor, cancerului, inflamaiilor (Yang X-D et al., 1999, Russel et al., 2000). n prezent, proteinele umane sunt produse n oi, porci i capre, obiectivul general fiind proteinele implicate n patologii genetice. Alfa-1-antitripsina (ATT) este enzima cu funcie de inhibare a elastazei. Multe boli ale apartului respirator, ndeosebi fibroza cistic, se datoreaz dezechilibrului dintre acestea dou. Deficiena sever a ATT (emfizemul ereditar) afecteaz aproximativ 200 000 oameni n SUA i n Europa. Pentru a asigura pacienilor tratamentul, sunt folosite animale MG pentru a produce aceast protein. Modificarea genetic a animalelor este, de asemenea, folosit pentru obinerea vaccinului antimalaric. n 1998, cercettorii de la Genzyme Transgenic, Marea Britanie, n colaborare cu savanii de la American National Institute of Allergy and Infectious Diseases, au raportat producerea antigenului MSP-1 n laptele oarecilor MG. MSP-1 declaneaz producerea de anticorpi mpotriva Plasmodium falciparum. Lizozimul este o protein antimicrobian care se conine n laptele uman. n prezent, se fac cercetri n privina aplicrii ingineriei genetice pentru sporirea produciei de lizozim n laptele de vaci, util pentru copiii care sunt hrnii n baz de lapte de vaci, ridicnd astfel nivelul proteciei organismului uman. Insulina uman este, actualmente, produs prin transgenez cu ajutorul bacteriilor, pe calea fermentrii (din 1981). La ieire din microorganisme ea nu este funcionala i urmeaz s fie supus anumitor modificri in vitro, nainte de a fi administrat persoanelor cu diabet zaharat. ntreprinderea argentinian Biosidus a anunat c 4 vaci transgenice nscute la ei posed n patrimoniul lor genetic gena insulinei umane, prin urmare, produc lapte care conine insulin. Cercettorii de la Biosidus sper ca n urmtorii 3 ani s obin un taur MG cu acelai patrimoniu genetic pentru a putea perpetua rasa. XENOTRANSPLANTUL O alt arie de cercetri n privina animalelor MG este producerea esuturilor i organelor pentru utilizarea la oameni. Majoritatea cercetrilor se fac pe porci, din cauza similitudinii maximale cu omul. Pentru prima dat despre clonarea porcilor s-a anunat n 2000, de ctre PPL Therapeutics. Sarcina de baz, specific acestui domeniu, este de a crea esuturi lipsite de 1-galactozil transferaz, proteina legat de rejecia esuturilor umane (problema de baz a transplantologiei). 64

Organisme modificate genetic i sntatea uman

ncheiere
Conform raportului prezentat de ctre International Service for the Acquisition of Agri-biotech Applications, n 2006 suprafaa acoperit de ctre plante MG a constituit 102 mln. ha, cu 13% mai mult dect n anul precedent.
90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 1996 1997 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004

Suprafaa global a culturilor MG (1996-2004) Total rile industriale rile n curs de dezvoltare

Clive James; 2004 Figura 5. Suprafaa global a culturilor MG (1996-2004) n 2006, rile principale n privina cultivrii plantelor MG au fost: SUA, Argentina, Brazilia, Canada, India i China, din care suprafaa utilizat de ctre SUA a constituit 53%. n Europa, ara cu cea mai mare suprafa, acoperit de culturile MG este Spania, cu 100 000 ha, urmat de Portugalia, Frana, Germania, Republica Ceh i Slovacia. Dei comunitatea tiinific este, n mod obinuit, de acord cu faptul c scparea genelor de sub control (evadarea genelor) este un eveniment probabil, impactul acestui fenomen este discutabil. O team major este posibilitatea ca genele nou - introduse s confere plantelor un avantaj selectiv care le va permite s intre n competiie i s elimine vegetaia natural. Timp de mai muli ani societatea civil din mai multe ri a luptat pentru protecia mediului i a sntii populaiei. Principiul de precauie a jucat un rol considerabil n formarea noii abordri pe ntreg globul pmntesc privitor 65

Organisme modificate genetic i sntatea uman

la rezolvarea problemelor de mediu i asigurarea sntii publice. Se consider c expresia culminant a principiului de precauie la nivel internaional a constituit-o Declaraia de la Rio din 1992 la Conferina ONU pentru Mediu i Dezvoltare (Agenda 21). Actualmente, populaia planetei se confrunt cu un pericol fr precedent pentru sntatea uman i pentru existena unui mediu durabil. Totodat, exist oportuniti pentru schimbarea fundamental a activitilor care sunt realizate, principiul de precauie rmnnd unul cheie. Printre riscurile ce in de prezena organismele MG, se evideniaz transmiterea genetic pe orizontal, sigurana generaiilor multitransgenice, a vaccinurilor MG, utilizarea noilor nanobiotechnologii. Studiile tiinifice recente arat, c utilizarea metodelor actuale ar putea s nu asigure identificarea materiei MG n alimente. Astfel, rmnem cu un numr mare de ntrebri fr de rspuns. Cnd o anumit activitate crete pericol pentru sntatea public or pentru mediul ambiant, msurile de precauie ar trebui s fie ntreprinse, chiar dac unele relaii de cost-efect nu sunt tiinific totalmente stabilite. Wingspread Statement on the Precautionary Principle, ianuarie 1998.

66

Bibliografie
1. OGM-food & bio pollution certification, Pilot project I/02/B/F/PP120211. 2. H. Maelor Davies, Engineering new oilseed crops from rapeseed, Purdue University, 1996. 3. Ph. Desmarescaux, Situation et perspectives de dveloppement des productions agricoles usage non-alimentaire, p. 25. 4. Mougin C., Chaplan V., Gaillardon P., Sohier L., Mercier R., Sigoillot J.-C., Asther M., Le traitement biologique des sols pollu es par des composs organiques - intrt des champignons filamenteux, n Le Courrier de environnement nr. 28, aot 1996. 5. Gestion des dchets organiques et des boues: un choix local, n Dossier Science&Decision, fvrier 2003. 6. F. Gillaume, Rapport dinformation dpos par la dlgation de Assemble nationale pour Union europenne sur les biocarburants dans lUnion Europenne, France, Assemble nationale. Dlgation pour Union europenne. pp.19-32. 7. Van Loon, L.C., Pierpoint, W.S., Boller, T. and Conejero, V. 1994. Recommendations for naming plant pathogenesis-related proteins. Plant Mol. Biol. Reporter 12: 245-264. 8. Van Loon, L. C. and Van Strien, E. A., 1999. The families of pathogenesisrelated proteins, their activities, and comparative analysis of PR-1 type proteins. Physiol. Mol. Plant Pathol. 55: 85-97. 9. Antoniw, J. F., Ritter, C. E., Pierpoint, W. S. and Van Loon, L. C. 1980. Comparison of three pathogenesis-related proteins from plants of two cultivars of tobacco infected with TMV. J. Gen. Virol. 47: 79-87. 10. Epple, P., Apel, K. and Bohlmann, H. 1995. An Arabidopsis thaliana thionin gene is inducible via a signal transduction pathway different from that for pathogenesis-related proteins. Plant Physiol. 109: 813-820. 11. Garca-Olmedo, F., Molina, A., Segura, A. and Moreno, M. 1995. The defensive role of nonspecific lipid-transfer proteins in plants. Trends Microbiol. 3: 72-74. 12. Green, T. R. and Ryan, C. A. 1972. Wound-induced proteinase inhibitor in plant leaves: a possible defense mechanism against insects. Science 175: 776777.

13. Lagrimini, L. M., Burkhart, W., Moyer, M. and Rothstein, S. 1987. Molecular cloning of complementary DNA encoding the lignin-forming peroxidase from tobacco: molecular analysis and tissue-specific expression. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 7542-7546. 14. Melchers, L. S., Apotheker-de Groot, M., Van der Knaap, J. A., Ponstein, A. S., Sela-Buurlage, M. B., Bol, J. F., Cornelissen, B. J. C., Van den Elzen, P. J. M. and Linthorst, H. J. M. 1994. A new class of tobacco chitinases homologous to bacterial exo-chitinases displays antifungal activity. Plant J. 5: 469-480. 15. Metraux, J.-P., Streit, L. and Staub, Th. 1988. A pathogenesis-related protein in cucumber is a chitinase. Physiol. Mol. Plant Pathol. 33: 1-9. 16. Okushima, Y., Koizumi, N., Kusano, T. and Sano, H. 2000. Secreted proteins of tobacco cultured BY2 cells: identification of a new member of pathogenesis-related proteins. Plant Mol. Biol. 42: 479-488. 17. Somssich, I. E., Schmelzer, E., Bollmann, J. and Hahlbrock, K. 1986. Rapid activation by fungal elicitor of genes encoding pathogenesis-related proteins in cultured parsley cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 2427-2430. 18. Terras, F. R. G., Schoofs, H., De Bolle, M. F. C., Van Leuven, F., Rees, S. B., Vanderleyden, J., Cammue, B. P. A. and Broekaert, W. F. 1992. Analysis of two novel classes of plant antifungal proteins from radish (Raphanus sativus L.) seeds. J. Biol. Chem. 267: 15301-15309. 19. Van Loon, L. C. 1982. Regulation of changes in proteins and enzymes associated with active defense against virus infection. In: Active Defense Mechanisms in Plants (R.K.S. Wood, ed.), pp. 247-273, Plenum Press, New York, USA. 20. Vera, P. and Conejero, V. 1988. Pathogenesis-related proteins of tomato. P-69 as an alkaline endoproteinase. Plant Physiol. 87: 58-63. 21. Wei, Y., Zhang, Z., Andersen, C. H., Schmelzer, E., Gregersen, P. L., Collinge, D. B., Smedegaard-Petersen, V. and Thordal-Christensen, H. 1998. An epidermis/papilla-specific oxalate oxidase-like protein in the defence response of barley attacked by the powdery mildew fungus. Plant Mol. Biol. 36: 101-112. 22. Zhang, Z., Collinge, D. B. and Thordal-Christensen, H. 1995. Germinlike oxalate oxidase, a H2O2-producing enzyme, accumulates in barley attacked by the powdery mildew fungus. Plant J. 8: 139-145. Nordlee, J. S., Taylor, S.,

Townsend, J., Thomas, L., Bush, R. 1996. Identification of a brazil- nut allergen in transgenic soybeans. New England J. Med. 334:688-692. 23. S. L. Franck-Oberspach, B. Keller. Consequences of classical and biotechnological resistance breeding for food toxicology and allergenicity. Plant breeding 116, 1-17 (1997). 24. Smith J. M. Inhaled GM maize pollen may cause disease. 25. Pryme I. F., Seralini G., Velot C. Statement on the potential allergenicity of the Bt toxin, Cry1Ac. 26. Glare, T.R., O Callaghan, M. (2000). Bacillus thuringiensis: biology, ecology and safety. 27. Pusztai, A., Bardocz, S. Biological effects of plant lectins on the gastrointestinal tract: metabolic consequences and applications. 28. Pusztai A., Plant lectins. Cambridge University Press 1991. 29. Tudor A., Popescu A. Alimentaia n funcie de grupa sangvin. Ediie special, 25 iulie 2007. 30. More D. Oral allergy syndrome. 31. Hoffmann-Sommergruber K. Pathogenesis-related proteins identified as allergens. Biochem Soc Trans. 2002 nov; 30 (Pt 6): 930-5. 32. Vieths S., Scherer S., Ballmer-Weber B. Current understanding of crossreactivity of food allergens and pollen. Ann NY Acad Sci. 2002 may; 964: 47-68. 33. Modern food biotechnology, human health and development: an evidence-based study. World Health Organization 2005. 34. Dr. T. Traavik: GMO risks and hazards: Absence of evidence is not evidence of absence of risk. (Third World Resurgence No. 104/105, April/may 1999). 35. FDA DOCKET N. 92N-0139, statement of policy: foods derived from new plant variety. 36. Pusztai, Genetically Modified Foods: are they a risk to human/animal health? 37. Safety of genetically engineered crops. VIB publication. Flanders Interuniversity Institute for Biotechnology. 2001. 38. The nucleolus, Schwarzacher Hget al., Anat Embbryol 1993; 188: 515-36.

39. Characterization of commercial GMO nserts: a source of useful material to study genome fluidity. Collonnier et al., 7th International Congress of Plant Molecular Biology, 2003. 40. Effect of feed processing conditions on DNA fragmentation. MAFF Report CS0116. 41. Assessing the survival of transgenic plant DNA in the human gastrointestinal tract. Netherwood T. Et al. Nat Biotechnol. 2004 feb; 22920; 204-9. 42. The 35S CaMV plant virus promoter is active in human enterocyte-like cells. Traavik et al., European Food Research and Technology. Oct 2005. 43. Chowdhury et al., Detection of corn intrinsic and recombinant DNA fragments and Cry1Ab protein in the gastrointestinal contents of pigs fed genetically modified corn Bt11. Journal of Animal Science 2003. 81; 2546-2551. 44. Vecchio L. Et al., Transcription and metabolism in testis of mice fed on GM soybean. 46 e symposium dhistochimie, sept. 2004. Prague. 45. L. Ceballos, E. Meunier. Sant et PGM: des doutes renforcs. Dossier Inf, OGM Nr. 76-juin 2006. 46. E. Meunier. Produits danimaux nourris aux OGM: innocuit pour le consommateur. Dossier Inf. OGM, n. 53, 2004. 47. Doerfler W.et al., Foreign (M13) DNA ingested by mice reaches peripheral leukocites, spleen, and liver via intestinal wall mucosa and can be covalently linked to mouse DNA. Proceedings of National Academy of Sciences. 1997. n. 94, pp.961-966. 48. Einspanier R. Et al., The fate of forage plant DNA in farm animals: a collaborative case-study investigating cattle and chicken fed recombinant plant material. European Food Research Technology. 2001. 212. pp 129-134. 49. Chowdhury et al., Detection of corn intrinsic and recombinant DNA fragments and Cry1Ab protein in the gastrointestinal contents of pigs fed with genetically modified corn Bt11. Journal of Animal Science, 2003, n. 81, pp. 2546-2551. 50. Rackis, Joseph J. et al. The USDA trypsin inhibitor study. I. Background, objecives and procedural details, n Qualification of plant foods in human nutrition, vol. 35, 1985. 51. James, J. M., Sixbey, J. P., Helm, R. M., Bannon, G. A. and Burks, A. W.1997. Wheat alpha-amylase inhibitor: a second route of allergic sensitization, Journal of allergy and clinical immunology 99: 239-244.

52. Heinemann, J. A. and Traavik, T. 2004. Problems in monitoring horizontal gene transfer in field trials of transgenic plants Nat. Biotechnol. 53. EFSA report on antibiotic resistance markers, 22 April, 2004. 54. Safety of genetically engineered crops. Flanders Interuniversity Institute for Biotechnology. March 2001. 55. US Natl. Acad. Sci. Inst. of Medicine, January 9, 2001. Beyer P. Tables on provitamin A amount, Forum US AgBioView, 2001. 56. FAO/WHO Expert Consultation (1998) Requirement of Vitamin A, Iron, Folate, and Vitamin B12. Food and Nutrition Series no.23, FAO, Rome The latest report to consider requirement for vitamin A. 57. Beninati C., Oggioni M., Boccanera M., Spinosa M. R., Maggi T., Conti S., Magliani W., De Bernardis F., Teti G., Cassone A., Pozzi G., Polonelli L (2000). Therapy of mucosal candidasis by expression of an antiidiotype in human commensal bacteria. Nat Biotechnol 18(10):1060-4 58. Beninati C., Oggioni M., Mancuso G.,Midiri A., Polonelli L., Pozzi G., Teti G., (2001) Anti-idiotypic vaccination against group B streptococci. Int rev Immunol 20(2): 263-73. 59.Di Fabio S., Medaglni D., Rush C.M., Corrias F., Panzini G.L., Pace M., Verani P., Pozzi G., Titti F. (1998). Vaginal immunization of Cynomolgus monkeys with Str.gordonii expressing HIV-1 and HPV 16 antigens. Vaccine 16(5): 485-92. 60. Medaglini D., Oggioni M. R., Pozzi G., (1998). Vaginal immunization with recombinant gram-positive bacteria. Am J Reprod Immunol 39(3): 19-208. 61. Slos P., Dutot P., Reymund J., Kleinpeter P., Prozzi D.,Kieni M.P., Delcour J., Mercenier A., Hols P. (1998). Production of cholera toxin B subunit in Lactobacillus. FEMS Microbiol Lett 169(1): 29-36. 62. Urdaci M. C., Pinchuk I. V., Sorokulova I. B., Megraud F. (2003). Use of bacillus subtilis strain CU1 as a vaccine delivery system for mucosal immunization against Helicobacter pylori infection in mice. FEMS Congress, Bacllus 2003 satellite symposium, Ljubljana, Slovenia. 63. Sorokulova I. B., (1998). The safety and reactogenity of the new probiotic subalin for volunteers. Microbiol Z. 60(1): 43-6. 64. Beliavskaia V. A., Kashperova T. A., Bondarenko V. M., Ilchev A. A., Sorokulova I. B., Malik N. I., (2001). Experimental evaluation of the biological safety of gene-engineered bacteria using a model strain Bacillus subtilis

interferon-producing strain. Zh Mikrobiol Epidemol Imunobiol. 2001, 2: 16-20. 65. Duc le H., Hong H.A., Fairweather N., Ricca E., Cutting S.M. (2003). Bacterial spores as vaccine vehicles. Infect Immun. 71: 2810-8. 66. Mauriello E. M., Duc le H., Isticato R., Cangianco G., Hong H. A., Felice M. D., Ricca E., Cutting S.M.(2004). Display of heterologus antigens on the Bacillus subtilis spore coat using CotC as fusion partner. Vaccine. 22: 1177-87. 67. Affsa, OGM et alimentation: peut-on identifier et valuer des bnfices pour la sant ? 68. Contre information sur les OGM mdicamenteux. Rapport du Dr. C. Velot, 18 mars, 2005. 69. A. Webster, N. Brown, B. Rappert, P. Martin, R. Frost. Genetics: an inventory of new and potential development in human genetics and their possible uses. European Parliament. Directorate General for Research. September 2001. pp 23-27. 70. Rapport sur ltat des mdicaments orphelins. European agency for evaluation of medicinal products. 8 avril 2002. 71. J. Paugh, J. C. Lafrance. The US biotechnology industry. US Department of commerce. Office of technology policy. July 1997. 72. R. Kirschstein, L. R. Skirboll. Stem cells: scientific progress and future research directions. Report prepared by the National Institutes of health. June 2001. 73. J-H. Trouvin, K. Ho. Protines mdicaments. De la transgenese animale a la biothrapie chez lhomme. N. Le Douarin diteur. Rapports sur la science et la technologie nr.14. Acadmie des Sciences. Fvrier 2003. p. 120. 74. Contre information sur les OGM medicamenteux. Rapport du Dr. C. Velot, 18 mars, 2005. 75. A. Nicolau. Alimente modificate genetic n scopuri nutriionale. 76. Zavaleta et al. Efficacity of rice-based oral rehydration solution containing recombinant human lactoferrin and lyzozyme in Peruvian children with acute diarrhea. Pediatr Gastroenterol Nutr.