Sunteți pe pagina 1din 82

PRINCIPIILE SEMNALIZRII CELULARE

Celulele comunic ntre ele, fiind capabile s primeasc semnale din mediul extracelular i s elaboreze rspunsuri adecvate la aceste semnale. nainte de apariia organismelor multicelulare, chiar organismele unicelulare i-au dezvoltat mecanisme de rspuns fa de modificrile din mediul extracelular privind prezena altor celule (densitatea local) sau a unor factori chimici sau fizici. Acest fenomen numit quorum sensing permite bacteriilor s-i coordoneze comportamentul (expresia genic) ca rspuns la fluctuaiile parametrilor mediului extracelular.
Bacteriile produc i secret molecule de semnalizare.
molecule de semnalizare

Semnalizarea celular
Semnalizarea celular (intercelular) reprezint modalitatea esenial prin care celulele pot comunica ntre ele, indiferent de distana la care se afl. Semnalizarea celular presupune, de regul, cooperarea ntre dou celule; una care trimite semnalul (celula semnalizatoare), i alta care l recepteaz (celula int). Oricare ar fi tipul de cale de semnalizare, la iniierea fenomenului particip dou componente: (i) molecula de semnalizare (molecula semnal), numit i ligand, secretat, sau expus la suprafaa membranei de ctre celula semnalizatoare i (ii) receptorul de la nivelul celulei receptoare. Comunicarea intercelular la organismele superioare se realizeaz prin intermediul a sute de tipuri de molecule de semnalizare: aminoacizi, peptide, proteine, nucleotide, compui steroidici, derivai ai acizilor grai, monoxid de azot, monoxid de carbon.

Pricipalele etape ale semnalizrii celulare:


(1) receptarea (detecia) semnalului (2) transducia semnalului (3) rspunsul celular (declanarea unor procese celulare) i atenuarea semnalului

Secvena evenimentelor intracelulare declanate de fixarea moleculei semnal de receptorul celulei int

Celula semnalizatoare sintetizeaz i elibereaz n mediu o molecul semnal. Molecula semnal ajunge la celula int. Semnalul e detectat de un receptor proteic specific. Activarea receptorului activez la rndul su ci de semnalizare intracelular mediate de proteine de semnalizare intracelulare. Semnalul este transmis ctre efectori intracelulari ce elaboreaz un rspuns celular adecvat.

Aceeai molecul semnal poate determina rspunsuri diferite n tipuri diferite de celule

Rspunsul celular determin unul dintre cele trei efecte posibile:


1) Supravieuirea, care reprezint efectul cel mai des ntlnit; 2) Proliferarea, este declanat la anumite combinaii de semnale ce apar atunci cnd este nevoie de sporirea populaiei celulare ntr-o anume zon a unui esut (ine de capacitatea organismului de a-i menine homeostazia celular); 3) Diferenierea celular, proces n cursul cruia o celul devine nalt specializat; 4) Moartea celular programat, e declanat n prezena unor semnale specifice sau n lipsa oricrui semnal.

Semnalele extracelulare pot induce rspunsuri celulare rapide (modificri de motilitate, modificri metabolice i secreia) sau lente (creterea i diviziunea celular)

Modaliti de semnalizare intercelular:


Semnalizarea local (semnalizarea de vecintate) Semnalizarea dependent de contact Semnalizarea paracrin Semnalizarea autocrin

Semnalizarea la distan Semnalizarea endocrin Semnalizarea sinaptic


Viteza semnalizrii:
Semnalizarea endocrin este lent (difuzia n fluxul sanguin) Semnalizarea sinaptic este rapid (impulsuri electrice - 100m/s)

Concentraia moleculei semnal


Semnalizarea endocrin mic (10-8 M) Semnalizarea sinaptic mare (10-4 M)

Semnalizarea autocrin: celulele rspund la molecule semnal pe care le transmit ele nsele. Celulele canceroase utilizeaz acest tip de strategie pentru stimularea propriei supravieuiri i a proliferrii.

Semnalizarea prin intermediul jonciunilor gap (jonciuni comunicante)

Mediaz pasajul ionilor i al moleculelor <1.000 Da, inclusiv al unor mesageri secundari (cAMP, Ca2+). Fac posibil realizarea unor activiti sincrone.

CLASIFICAREA RECEPTORILOR CELULARI a) Localizarea receptorilor, corelat cu proprietile fizico-chimice ale moleculei semnal.
Moleculele semnal se fixeaz de: (1) Receptori ai suprafeei celulare (pentru molecule semnal hidrofile) (2) Receptori intracelulari (pentru molecule semnal lipofile).

Receptorii pentru liganzi lipofili aparin superfamiliei de receptori nucleari


Genomul uman codific 48 de receptori nucleari, dintre care 6 tipuri sunt receptori cu liganzi identificai.

Receptorii nucleari orfani (au structur similar cu a unor receptori cunoscui, dar liganzii lor specifici nu au fost identificai)

Caracteristici structurale ale receptorilor nucleari

Caracteristici structurale ale receptorilor nucleari

AF-1 i AF-2 reprezint domeniile de activare transcripional.

n stare inactiv receptorii fixeaz proteine inhibitorii care mascheaz domeniile de activare a transcrierii. Legarea ligandului determin o modificare conformaional a receptorului i desprinderea din complexul de inactivare, astfel nct poate exprima funcia de modulare a transcrierii.

CLASIFICAREA RECEPTORILOR CELULARI b) n funcie de natura semnalului Receptori pentru substane endogene
receptori pentru neurotransmitori receptori pentru hormoni receptori implicai n reacii imunitare: pentru antigene endogene pentru anticorpi pentru complement receptori pentru factori de cretere

Receptori pentru substane exogene


receptori pentru virusuri receptori pentru toxine bacteriene receptori pentru antigene non-self receptori pentru lectine receptori pentru droguri

Receptorii suprafeei celulare


Clasificarea n funcie de mecanismul de activare Receptori cu rol de canale ionice (receptori ionotropici) Receptori cuplai cu proteine G heterotrimerice Receptori cu funcie enzimatic sau cuplai cu enzime
Receptori cu activitate tirozin kinazic Receptori asociai cu tirozin kinaze intracelulare Receptori cu activitate fosfatazic Receptori Ser/Thr kinazici Receptori cu activitate guanilat ciclazic Receptori asociai cu histidin kinaze

Receptori cu rol de canale ionice (receptori ionotropici, canale ionice dependente de neurotransmitori)
sunt implicai n semnalizarea sinaptic rapid dintre celule excitabile electric.

Receptori cuplai cu proteine G heterotrimerice (receptori serpentin)


acioneaz indirect n transmiterea semnalului, prin intermediul unei proteine G (proteina ce leag GTP). La rndul ei proteina G regleaz activitatea unei proteine int ce poate fi o enzim sau un canal ionic.

Receptori cu funcie enzimatic sau cuplai cu enzime majoritatea sunt protein kinaze sau sunt asociai cu protein kinaze ce fosforileaz seturi specifice de proteine din celulele int.

Semnalizarea prin intermediul receptorilor cuplai cu proteine G


1994 Martin Rodbell i Alfred Gilman laureai ai Premiului Nobel pentru Medicin i Fiziologie pentru descoperirea proteinelor G i a rolului acestor proteine n semnalizare.

Proteinele G realizeaz cuplarea unei clase distincte de receptori (numii receptori serpentin sau receptori cuplai cu proteine G, lb.engl.G protein-coupled receptors) cu diveri efectori primari membranari: enzime (adenilat ciclaza, fosfolipaza C, fosfolipaza A2, cGMP fosfodiesteraza) sau canale ionice. Efectorii primari genereaz mesageri secundari intracelulari: cAMP, diacilglicerol (DAG), inozitol 1,4,5-trifosfat (IP3), acid arahidonic.

Receptori cuplai cu proteine G


(receptori cu 7 segmente TM, receptori serpentin)

Clasificarea receptorilor cuplai cu proteine G


Se cunosc peste 1000 de RCPG care au fost grupai pe baza omologiei structurale n 100 de subfamilii. RCPG sunt prezeni numai n celulele EK. n funcie de natura ligandului RCPG se clasific n: Receptori pentru peptide i hormoni peptidici: ACTH, trombin, bombesin, bradikinin, glucagon, calcitonin, angiotensin, hormonul foliculostimulator Receptori pentru amine biogene: adrenalin, noradrenalin, dopamin, acetilcolin, histamin Receptori pentru mediatori lipidici: factorul activator al plachetelor, prostaglandine, leucotriene, acid lisofosfatidic Receptori pentru aminoacizi i ioni: glutamat, GABA, Ca2+ Receptori pentru stimuli senzoriali (receptori gustativi, receptori pentru compui odorani, receptori pentru lumin) Se apreciaz c aproximativ 50% dintre medicamente acionez prin intermediul RCPG.

Diversitatea receptorilor cuplati cu proteine G

Structura receptorilor cuplai cu proteine G


Proteine transmembranare multipas tip I cu 7 treceri prin planul membranei (7 segmente TM), unite prin 3 bucle extracelulare i 3 bucle intracelulare.

Fixarea ligandului determin reorganizarea conformaiei unor segmente TM i expunerea unor motive cheie ce permit interaciunea cu proteina G.

Transmiterea semnalului prin intermediul receptorului cuplat cu proteina G, dup fixarea ligandului (ex. adrenalina). Proteina G funcioneaz ca un releu ce cupleaz receptorul serpentin de efectori din aval (ex. adenilat ciclaza)
Legarea ligandului i activarea receptorului Interaciunea receptorului activat cu prot.G Transmiterea semnalului la efectorul din aval

Proteina G heterotrimeric ()
Subunitatea leag cu mare afinitate guanin nucleotide (GDP/GTP)
Subtipuri: - Gs (adenilat ciclaza, canalele pentru Ca2+, canalele pentru Na+), - Golf (adenilat ciclaza din celulele senzoriale olfactive),
- Gi (adenilat ciclaza, canalele pentru Ca2+, canalele pentru K+), - G0 (canalele pentru Ca2+, canalele pentru K+, fosfolipaza C), - Gt (cGMP fosfodiesteraza din celulele fotoreceptoare), - Gq (fosfolipaza C-),

- G12 (activeaz proteine G monomerice)

Subunitatea . Peptidele i sunt asociate necovalent, formnd


un dimer ce reprezint o unitate funcional.

Structura proteinei G i asamblarea/disocierea subunitilor i

Ciclul de activare i dezactivare al proteinei G

Modularea semnalizrii prin intermediul RCPG


Activarea RCPG indus de fixarea ligandului are ca rezultat formarea complexului GGTP activ care iniiaz transmiterea n aval a semnalului.

(GAP, GTPase activating proteins)

Proteinele RGS (regulator of G protein signaling) controleaz stingerea semnalului prin amplificarea vitezei de hidroliz a GTP de ctre G.

Proteinele G i semnalizarea prin cAMP


1958 E.W. Sutherland a descoperit c adrenalina induce glicogenoliza n ficat prin stimularea sintezei unui mesager secundar intracelular, cAMP, i a emis ipoteza c hormonul nu trebuie s intre n celul pentru a transmite un mesaj. (1971 Premiul Nobel pentru Fiziologie i Medicin pentru decoperirile legate de mecanismele de aciune ale hormonilor).

cAMP este sintetizat din ATP sub aciunea adenilat ciclazei cAMP este inactivat sub aciunea fosfodiesterazei

Earl W. Sutherland 1915-1974

Structura adenilat ciclazei

cAMP funcioneaz ca mesager secundar n calea de semnalizare mediat de proteina G

Proteinele G sunt inte ale unor toxine bacteriene. ADP-ribozilarea sub aciunea toxinelor bacteriene (ex.toxina holerei Vibrio cholerae, toxina persusis Bordetella pertusis)
ADP-riboza

Toxina holerei catalizeaz ADP ribozilarea subunitii alfa a proteinei Gs blocnd funcia GTP-azic a acesteia (Gs rmne activat permanent i stimuleaz AC un timp nedefinit, determinnd creterea concentraiei de cAMP n celulele intestinului subire ceea ce induce eliminarea masiv de lichide i ioni n lumenul intestinal, determinnd diareea sever specific holerei). In funcie de tipul celular, celulele rspund diferit la creterea concentraiei de cAMP.

Efectele induse de cAMP sunt mediate de ctre PROTEIN KINAZA A (PKA, protein kinaza dependent de cAMP).

Protein kinaza dependent de cAMP- (PKA)


Structur tetrameric (PKA forma inactiv):
dou subuniti reglatoare (R) i dou subuniti catalitice (C)

Mecanism de activare cAMP se leag la subunitile R determinnd disocierea celor dou subuniti C Fiecare subunitate reglatoare are dou situri distincte de legare a cAMP (notate A i B), localizate n domenii diferite Legarea cAMP la situl B induce o modificare conformaional ce permite expunerea sitului A (legarea cAMP este cooperativ, astfel nct legarea la situl B scade Kd n situl de legare A) Legarea cAMP la situl A elibereaz subunitile catalitice Subunitile catalitice fosforileaz specific proteinele int Modificarea concentraiei de cAMP determin modificarea proporional a numrului de subuniti catalitice Au fost evideniate dou tipuri de subuniti reglatoare (RI, RII) care difer n ceea ce privete secvena de aminoacizi i funcia Exist izoforme ale subunitilor catalitice:
Subunitatea Cb se exprim specific n funcie de tipul de esut Subunitatea Ca se exprim n majoritatea tipurilor celulare

Structura i activarea PKA

Structura i activarea PKA


Rspunsurile celulare mediate de cAMP pot fi: - rspunsuri rapide
(ex.modularea metabolismului glicogenului)

- rspunsuri lente
(fosforilarea factorului transcripional CREB)
(cAMP response element binding protein)

PKA modific transcrierea genelor cu secvene reglatoare CRE (cAMP response elements)

Calea de semnalizare mediat de PKA


CREB proteina ce se leag la elementul de rspuns la cAMP (cAMP response element binding protein)

Factorul transcripional CREB


cAMP Response Element Binding Protein Exist mai multe forme de CREB, fie cu rol activator sau fie cu rol de represor al transcrierii genelor. CREB este implicat n sinteza hormonului peptidic numit somatostatin, precum i n sinteza unor proteine necesare pentru memoria pe termen lung i n dezvoltarea dependenei de droguri. Disfunciile CREB din creier contribuie la instalarea i evoluia maladiei Huntington (caracterizat prin neurodegenerare tulburri ale coordonrii activitii musculare i demen). Efectele cAMP sunt tranzitorii ntruct proteinele fosforilate de ctre PKA sunt defosforilate prin intervenia fosfoprotein fosfatazelor.

Proteinele G i calea de semnalizare dependent de fosfatidilinozitol (PIP2)

Hidroliza PIP2 este activat de RCPG prin intermediul proteinei Gq care stimuleaz fosfolipaza C-

IP3 difuzeaz n citosol pn la nivelul RE unde determin eliberarea Ca2+. DAG rmne la nivelul MP i activeaz protein kinaza C (PKC). DAG poate fi hidrolizat cu eliberare de acid arahidonic, transformat ulterior n eicosanoizi.

Amplificarea semnalelor extracelulare transmise prin intermediul receptorilor cuplai cu proteine G heterotrimerice

Receptorii suprafeei celulare


Clasificarea n funcie de mecanismul de activare Receptori cu rol de canale ionice (receptori ionotropici) Receptori cuplai cu proteine G heterotrimerice Receptori cu funcie enzimatic sau cuplai cu enzime
Receptori cu activitate tirozin kinazic Receptori asociai cu tirozin kinaze intracelulare Receptori cu activitate fosfatazic Receptori Ser/Thr kinazici Receptori guanilat ciclazici Receptori asociai cu histidin kinaze

Receptorii cu funcie tirozin kinazic (RTK)


RTK prezint un domeniu citoplasmatic cu activitate kinazic intrinsec. RTK sunt implicai n controlul unor procese fundamentale: ciclul celular, motilitatea celular, supravieuirea, proliferarea i diferenierea celular i n controlul unor ci metabolice. RTK au nalt afinitate pentru factorii de cretere, citokine i hormoni.

Clasificarea receptorilor cu funcie tirozin kinazic (RTK)


Au fost identificate aproximativ 20 de clase de RTK, ce cuprind circa 60 de reprezentani:
RTK class I (EGF receptor family) RTK class II (Insulin receptor family) RTK class III (PDGF receptor family) RTK class IV (FGF receptor family) RTK class V (VEGF receptors family) RTK class VI (HGF receptor family) RTK class VII (Trk receptor family) RTK class IX (AXL receptor family) RTK class X ( family) RTK class XI (TIE receptor family) RTK class XII ( family) RTK class XIII ( family) RTK class XV ( family) RTK class XVI (RYK receptor family) RTK class XVII (MuSK receptor family)

Organizarea structural a RTK

Factori de cretere
Se cunosc peste 50 polipeptide denumite convenional factori de cretere. Factorii de cretere acioneaz prin 3 mecanisme: mitogene (stimuleaz proliferarea), factori trofici (promoveaz creterea), factori de supravieuire (inhib apoptoza). Factorul de cretere epidermal (EGF) Factorul de cretere derivat din plachete (PDGF) Factorul de cretere fibroblastic (FGF) Factorul de cretere al endoteliului vascular (VEGF) Factorul stimulator al coloniilor de macrofage (M-CSF) Factorul de cretere al neuronilor (NGF) Factorul 1 de cretere asemntor insulinei (IGF1)

NGF factorul de cretere al neuronilor


NGF a fost primul factor de cretere descoperit (n 1952 de ctre Rita Levi Montalcini, laureat a Premiului Nobel pentru Fiziologie i Medicin n 1986). NGF este un factor de cretere cu specificitate restrns favoriznd creterea i supravieuirea unor clase de neuroni; n absena NGF neuronii mor prin apoptoz.
Rita Levi Montalcini (n.1909)

Aciunea mitogen a factorilor de cretere

MECANISMUL DE ACTIVARE AL RTK


Dimerizarea i activarea RTK prin autofosforilare

Fixarea ligandului determin dimerizarea receptorilor, urmat de un proces de autofosforilare, ce are loc prin trans-fosforilare.

Dup activare, RTK recruteaz la nivelul resturilor de fosfotirozin o serie de proteine de semnalizare

Proteinele care se leag de RTK fosforilai au fost grupate n 2 categorii: 1. Proteine adaptoare (ex.Grb-2) 2. Proteine cu funcie enzimatic (ex. Fosfatidil-inozitol 3-kinaza, Fosfolipaza C)

Ancorarea proteinelor de semnalizare pe resturile de fosfotirozin ale RTK activai

Fixarea proteinelor de semnalizare prin intermediul domeniilor SH2 (Src homology 2) la RTK activai (ex. receptorul PDGF)

Structura tridimensional a domeniului SH2 (Src homology 2)

Proteina Src (Sarc)


Protein cu activitate kinazic, codificat de proto-oncogena c-src, similar oncogenei virale v-src (identificat la virusul sarcomei Rous), cu rol important n reglarea dezvoltrii embrionare i a creterii celulare. Proteinele Src (n celulele mamiferelor au fost identificate 10 tipuri de proteine cu secvene omoloage i particularitile proteinei Src) interacioneaz cu numeroase proteine citosolice, nucleare i membranare pe care le modific prin fosforilare pe resturi de Tyr specifice. Organizarea structural a Src (de la captul C-terminal): un domeniu catalitic cu funcie Tyr-kinazic (SH1), un domeniu SH2, un domeniu SH3, domeniul unic (distinct pentru fiecare protein i domeniul SH4. Domeniile SH (Src homology) reprezint structuri modulare identificate la numeroase clase de proteine celulare implicate n lanuri de semnalizare, de exemplu n structura proteinelor adaptoare.

Organizarea structural a proteinelor c-Src i v-Src sub


forma domeniilor modulare SH (Src homology)

Proteinele adaptoare mediaz asocierea fizic


a unei proteine de semnalizare la o alt protein de semnalizare, participnd astfel la transmiterea semnalului. Nu au activitatea catalitic, dar au n structura lor cel puin 2 domenii care mediaz interaciunile protein-protein.

Grb2 (growth factor receptor bound protein -2)


Este o protein adaptoare care realizeaz o punte de legtur ntre receptorii factorilor de cretere (RTK) i calea de semnalizare Ras/MAP kinazic. Grb2 se fixeaz cu domeniul SH2 de RTK activat i folosete domeniile SH3 pentru a recruta alte proteine n complexul de semnalizare, de exemplu proteina Sos. Organizarea structural a Grb2: un domeniu SH2 central, flancat de dou domenii SH3.

Sos (son of sevenless)


Sos este o protein multimodular. Are un domeniu C-terminal bogat n Pro prin intermediul cruia interacioneaz cu domeniul SH3 al proteinei Grb2. Prin intermediul unui alt domeniu, numit ras-GEF interacioneaz cu proteina Ras.
Sevenless este o musculi Drosophila mutant, deficient pentru tipul 7 de celule fotoreceptoare. Ochiul de Drosophila este format din 8 tipuri de celule fotoreceptoare, iar musculiele mutante Sevenless pot fi uor selectate pentru c nu percep lumina UV).

Proteina Ras (Rat sarcoma)


Aparine unei superfamilii de proteine modulate de guanin nucleotide, numit superfamilia proteinelor Ras. Sunt GTPaze monomerice Din aceast superfamilie fac parte diverse familii de GTPaze monomerice: Ras, Rho, Rab, Rac, Ran (numai Ras i Rho au legtur cu receptorii suprafeei celulare) Ras este ancorat pe faa citoplasmatic a membranei prin ataare covalent de lipidele membranare Ras-GTP (forma activ) interacioneaz cu componentele cii MAP kinazice Activarea Ras de ctre RTK are loc pe faa citoplasmatic a membranei plasmatice i e un proces de scurt durat, ntruct fosforilarea receptorilor i a altor molecule de semnalizare e rapid anulat de aciunea unor protein Tyr fosfataze, iar proteina Ras activ se inactiveaz datorit hidrolizei GTP.

Proteina Ras funcioneaz ca un comutator molecular


Ras oscileaz ntre dou stri conformaionale distincte: forma activ Ras-GTP i forma inactiv Ras-GDP. Activarea Ras este controlat de echilibrul dintre activitatea proteinelor GEF i GAP. Proteinele GEF (guanine nucleotide exchange factors),de ex. proteina Sos, catalizeaz o reacie de tip push and pull care induce eliberarea GDP i fixarea GTP, determinnd activarea Ras. Proteinele GAP (GTP-ase-activating proteins) accelereaz viteza de hidroliz a GTP (de 500 ori comparativ cu viteza normal datorat funciei GTPazice intrinseci a Ras) deteminnd inactivarea Ras.

Ciclul de activarea/inactivarea al proteinei Ras i intervenia GEF i GAP

GEF activarea Ras GAP inactivarea Ras

Structura complexelor RasGDP i RasGTP (prin cristalografie cu raze X)

Activarea Ras dup fixarea ligandului (EGF) la RTK


Proteina adaptor Grb2 se fixeaz cu domeniul SH2 de RTK activat i folosete domeniile SH3 pentru a recruta proteine Sos n complexul de semnalizare. Formarea complexului multiproteic de semnalizare (RTK activat-Grb2Sos) plaseaz poteina Sos n vecintatea MP unde se apropie de Ras i stimuleaz schimbul GDP cu GTP. Activitatea GEF a proteinei Sos promoveaz formarea RasGTP (forma activ).

Formarea complexului de semnalizare prin interaciunea domeniilor modulare (A)

Formarea complexului de semnalizare prin interaciunea domeniilor modulare (B)

Cascada de semnalizare Ras/MAP kinazic


Mitogen-activated protein kinases Este un sistem enzimatic de tip releu ce implic o cascad de reacii catalizate de protein kinaze ce se activeaz secvenial.

MAPKKK

MAPKK

MAPK

Cascada kinazic:
- MAPKKK (Raf) este o Ser/Thr
kinaz ce activeaz prin fosforilare MAPKK (MEK).

- MAPKK (MEK) este o Thr/Tyr


kinaz ce activeaz prin fosforilare MAPK.

- MAPK (Erk) activat fosforileaz la


rndul ei o gam larg de proteine citoplasmatice sau ancorate de membran. n plus, MAPK poate fi translocat n nucleu unde activeaz o serie de factori transcripionali.

Conformaia MAPK n form nefosforilat, inactiv (a), i n form fosforilat, activ (b)

Reele de semnalizare intracelular interaciunea dintre cascada de activare a receptorilor cuplai cu proteine G i receptorii Tyr kinazici

Overview of signal transduction pathways