STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI PROPRIETI FIZICOFIZICO-CHIMICE MPACHETAREA ADN N CROMOZOMI

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Friedrich Miescher 1869 a izolat ADN i a denumit substana nuclein, care coninea fosfor i azot, dar nu coninea sulf. Nucleina fragmente mici de ADN cu rol n depozitarea fosforului. Albrecht Kossel (premiul Nobel 1910) a studiat structura chimic a nucleinei.

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Lucrrile care au contribuit la identificarea acizilor nucleici ca material genetic.

Genetics a conceptual approach, second edition, 2002

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Experimentul lui Griffith (1928) transformarea la Streptococcus pneumoniae

An introduction to genetic analysis, 8th edition, 2008

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Experimentul Avery, McLeod i McCarty (1944)

Agentul responsabil de transformarea tulpinii nevirulente de Streptococcus n una virulent este ADN.

An introduction to genetic analysis, 8th edition, 2008

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Experimentul Hershey i Chase (1953) ADN este material genetic

Genetics a conceptual approach, second edition, 2002

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Experimentul Heinz Fraenkel-Conrat i Bea Singer (1956) ARN este material genetic

Genetics a conceptual approach, second edition, 2002

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Rosalind Franklin

Genetics a conceptual approach, second edition, 2002

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Regula lui Chargaff

Cantitatea de purine = cantitatea de pirimidine (A+G=T+C) A=T G=C

An introduction to genetic analysis, 8th edition, 2008

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Descrierea structurii ADN de ctre James Watson i Francis Crick n 1953 structura ADN este o spiral dubl cu rsucire spre dreapta.

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Structura polimeric alctuit din monomeri nucleotide. Prile componente ale unui nucleotid: - grupare fosfat - zahr, o pentoz - baz azotat

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Atomii de carbon (C) din compoziia pentozelor (dezoxiriboza sau riboza) sunt notai cu numere prime.

Diferena dintre cele 2 pentoze din compoziia acizilor nucleici este gruparea hidroxil din poziia C2: - riboza are grupare OH - dezoxiriboza nu are

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Pirimidinile din compoziia acizilor nucleici sunt: citozina (C), timina (T) dar numai n cazul ADN i uracilul (U) dar numai n cazul ARN.

Purinele din compoziia acizilor nucleici sunt: adenina (A) i guanina (G)

Genetics a conceptual approach, second edition, 2002

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

O baz azotat legat la o pentoz formeaz un nucleozid. Legtura dintre baza azotat i pentoz se realizeaz printr-o legtur Nglicozidic ntre C1 al pentozei i N1 al pirimidinelor sau N9 al purinelor.

Un nucleozid fosforilat alctuiete un nucleotid.

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Nomenclatura:

Genetics a conceptual approach, second edition, 2002

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Dispunerea bazelor azotate pe catenele opuse indic conform datelor obinute prin difracie cu raze X c acestea pot fi doar de tip pirimidin-purin

2nm

An introduction to genetic analysis, 8th edition, 2008

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Formarea legturilor de H dintre bazele de pe catene opuse: A N1 i C6 T N3 i C4 G C6 N1 C2 C C4 N3 C2

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Monocatenele ntr-o molecul dublu catenar de ADN sunt antiparalele.

Monocatenele de ADN au o orientare 53.

Secvena de nucleotide a unei monocatene se va scrie tot timpul n direcia 53.

5 GGATATACTGCATGTGT 3

Genetics a conceptual approach, second edition, 2002

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Moleculele de ARN au de asemenea orientare 53.

Genetics a conceptual approach, second edition, 2002

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Structura secundar a acizilor nucleici

Modelul descris de Watson i Crick (ADN de tip B) are o structur secundar sub forma unei spirale duble cu rsucire spre dreapta, cele 2 catene sunt antiparalele.

Spirala dubl prezint 2 anuri: mare i mic.

Genetics a conceptual approach, second edition, 2002

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Genetics a conceptual approach, second edition, 2002

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

n ADN de tip Z guanina (G) este n conformaia syn i C3 al dezoxiribozei este endo.

Conformaia C3 apropie nucleotidele, n consecin distana dintre nucleotide este mai mic. Molecula de ADN Z este distorsionat din cauza conformaiei G.

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Guanine in
anti conformation syn conformation

[C3 endo conformation (Z-DNA)] [C2 endo conformation (B-DNA)]

anti

syn

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Principalele diferene ntre cele dou tipuri de acizi nucleici

Caracteristici Pentoza Structura secundar

ADN Dezoxiriboza Spiral dubl

ARN Riboza n general monocatenar, cu unele excepii dublu catenar A, G, C,U Instabil Dimensiuni mici

Baze azotate Stabilitate Mrimea moleculelor

A, G, C, T Stabilitate mare datorit legturilor de H n general foarte mari

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Att ADN ct i ARN pot forma structuri secundare

Genetics a conceptual approach, second edition, 2002

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Secvene palindrom

Metilarea ADN

Genetics a conceptual approach, second edition, 2002

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Denaturarea ADN este procesul prin care se rup legturile de H i cele dou catene sunt separate.

Temperatura de topire (Tm) este temperatura la care doar jumtate din moleculele de ADN sunt monocatenare, restul fiind dublucatenare.

Temperatura de topire este direct dependent de coninutul n G i C al ADN, precum i de tria ionic.

Principles of Genetics,7th edition, 2001

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

Datorit delocalizrii electronilor n heterociclul bazelor azotate acestea absorb n UV.

Efectul hipercromic se caracterizeaz prin creterea absorbanei ADN odat cu denaturarea lui (separarea catenelor).

Coeficient de extincie pentru: ADN =0.02 g/ml dublu catenar ADN =0.03 g/ml mono catenar ARN =0.025 g/ml

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI ORGANIZAREA MATERIALULUI GENETIC

Organizarea materialului genetic la bacterii

Genetics Analysis and Principles, 4th edition, 2011

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI ORGANIZAREA MATERIALULUI GENETIC

Mrimea genomului uman = 3,2 109 pb (un set de cromozomi) Total ADN ntr-o celul uman = 6,4 109 pb (2 seturi de cromozomi) Lungimea ADN = 6,4 109 pb 0,33 nm/pb = 2,1 m Diametrul nucleului este de 5-10 m

Dup digestia cromozomilor cu nucleaze (exemplu de la Micrococcus) se obin fragmente de 200 pb.

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI ORGANIZAREA MATERIALULUI GENETIC

Componena cromozomilor: - ADN dublucatenar (o singur molecul dublu catenar ntr-o cromatid); - proteine histonice - proteine non-histonice

Proteinele histonice din componena nucleosomului: H2A H2B H3 H4 ADN nfoar nucleul histonic de 1,7 ori (146 nucleotide).

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI ORGANIZAREA MATERIALULUI GENETIC

Proteinele histonice sunt proteine mici (102-135 aminoacizi) i sunt conservate la diferite specii. Histonele sunt bogate n aminoacizi arginina (Arg) i lizina (Lys). ntr-un nucleosom histonele formeaz un octamer (protein alctuit din 8 subuniti) cte 2 din fiecare.

http://www.dadamo.com/wiki/histone.png

300 nm

Fragment din cromozom condensat

700 nm

Centromere
Cromozom n mitoz 1,400 nm

Molecul de ADN dublu catenar

2 nm

Organizarea pe nucleosomi

11 nm

Fibra de 30 nm

30 nm

300 nm

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI ORGANIZAREA MATERIALULUI GENETIC

Genetics Analysis and Principles, 4th edition, 2011

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI ORGANIZAREA MATERIALULUI GENETIC

Genetics Analysis and Principles, 4th edition, 2011

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

1. ADN codific informaii pe care celula le utilizeaz n sinteza proteinelor ct i pentru reglarea exprimrii genelor. 2. Mai multe experimente au artat c ADN este material genetic. Meischer a identificat nucleina n leucocite. Griffith a identificat substana care transmite capacitatea de infectare la pneumococi. Avery, MacLeod i McCarty au artat c aceast substan este ADN. Hershey i Chase au confirmat c materialul genetic este ADN i nu proteinele. 3. Chargaff a descoperit legea complementaritii cantitatea de A este egal cu T, iar G cu cea C. Watson i Crick au analizat toate datele experimentale acumulate i au propus modelul structurii ADN.

4. ADN este o molecul polimeric alctuit din nucleotide. Prile componente ale unui nucleotid sunt: o pentoz, o grupare fosfat i o baz azotat. Baza azotat din componena ADN este dezoxiriboza, iar cea din compoziia ARN este riboza. 5. Structura ARN difer de cea a ADN prin prezena ribozei, structur monocatenar, dimensiuni mici, instabilitate, U nlocuiete T i se ntlnesc mai multe nucleotide modificate. 6. Monocatenele de ADN dar i ARN au o orientare 53. Cele dou catene ADN dintr-o molecul sunt antiparalele. Structura secundar a ADN este o spiral dubl cu diametrul de 2nm i pasul elicei de 3,4nm.

STRUCTURA ACIZILOR NUCLEICI

7. Bazele azotate opuse de pe cele dou catene ale unei molecule de ADN sunt dispuse conform principiului complementaritii i menin cele 2 catene mpreun prin formarea unor legturi de H. 8. Exist 3 tipuri de ADN: tip B descris de Watson i Crick, de tip A care are o rsucire spre dreapta caracteristic moleculelor hibride ADN-ARN, tip Z cu rsucire spre stnga. 9. Temperatura de topire (Tm) este temperatura la care doar jumtate din moleculele de ADN sunt monocatenare, restul fiind dublucatenare. 10. Efectul hipercromic se caracterizeaz prin creterea absorbanei ADN odat cu denaturarea lui (separarea catenelor). 11. ADN este mpachetat n nucleu, prima etap de mpachetare este la nivel de nucleosomi. Nucleosomii reprezint ADN nfurat n jurul unui nucleu histonic (octamer) alctuit din proteine histonice. n interfaz ADN este prezent sub forma fibrei de 30nm. n metafaz cromatina atinge condensarea maxim.

!
Structura acizilor nucleici Diferene i asemnri Condensarea ADN n cromozomi Structura nucleosomului, proteinele histonice Denaturarea ADN, temperatura de topire Efectul hipercromic

http://www.foxtaur.com/fuzzy/thinking.gif