Sunteți pe pagina 1din 19

Proiect stiinific de cercetare

Titlul proiectului: Contribuii n sinteza i caracterizarea de noi vectori coloidali ce au n componen Bifosfonai

Expunerea problemei
Bifosfonaii sunt analogi sintetici ai pirofosfatului folosii n tratamentul osteoporozei datorit capacitii lor de a inhiba resorbia osoas . Datorit proprietilor fizico-chimice (solubilitate mrit n ap, sarcin puternic negativ), acest grup de compui are aplicabilitate preponderent intravenoas. Tratamentul pe calea oral nu este foarte eficient, bifosfonaii avnd o biodisponibilite sczut caracterizat prin absorbie sczut i eliminare renal rapid. Se pune problema cum se poate produce o mbuntire a proprietilor farmacocinetice i implicit a eficacitii administrrii orale.
2

Prezentarea general a proiectului

Scopul lucrrii - formularea i caracterizarea de noi vectori coloidali care s ncorporeze bifosfonai n vederea creterii biodisponibilitii orale a substanei active. S-au formulat in acest sens 2 tipuri de lipozomi, folosind ca material pentru stratul lipidic fie numai fosfatidilcolin , fie amestec fosfatidilcolin- colesterol ntr-un raport bine definit. Lipozomii preparai au fost caracterizai dpdv al stabilitii n timp, al coninutului n substan activ nglobat , pentru a li se putea evalua apoi computaional eficacitatea teoretic a noilor compui.
3

Principalele aspecte analizate n timpul cercetrii :


1.

2. 3.

4.

5.

Formularea a 2 tipuri de lipozomi coninnd Alendronat i Clodronat (bifosfonaii luai n studiu) folosind ca materiale pentru stratul lipidic fosfatidilcolina i colesterolul Examinarea microscopic a noilor formulri Evaluarea capacitii de ncapsulare a substanei active n lipozomi i stabilirea eficacitii formulrilor prin compararea cantitii nglobate din fiecare substan activ din cele dou tipuri de lipozomi Modelarea molecular a celor 2 substane active i predicii teoretice privind comportamentul in vitro comparativ cu restul membrilor clasei de bifosfonai Studiul stabilitii i rezistenei compuilor activi imediat dup preparare i pe parcursul a 3 luni de stocare
4

Variabile

Variabile controlate: temperatur, umiditate, lumin, solvenii i reactivii utilizai, aparatura de laborator Variabile independente: raportul masic de fosfatidilcolin colesterol, gradul de rigiditate (prin cantitatea de colesterol adugat), gradul de mrime al particulelor de lipozomi (prin durata de sonicare) Variabile dependente: determinarea spectrofotometric a coninutului n substan activ; stabilitatea formulrilor prin DLS; capacitatea de ncapsulare prin compararea graficelor obinute
5

Ipoteza de lucru
Categoria de medicamente a Bifosfonailor are o eficacitate terapeutic mai bun la administrare oral dac substana activ este nglobat n Lipozomi.

Materiale i metode

Alendronat i Clodronat Ap distilat Fosfatidilcolin (PC) Colesterol (Ch) Cloroform Soluie 1.5mmol/L de Cu (II) (NO3)2 *3 H2O/HNO3 folosit ca agent complexant Pipete, flacoane de 10-15ml Coloane de separare Supelclean, filtre de ultracentrifugare Agitator, microscop, spectrofotometru, centrifug, aparat Zeta sizer, calculator
7

Materiale i metode
a. Formularea lipozomilor:
Am preparat 5ml de lipozomi care conin substan activ i lipid PC sau amestec PC-Ch n raport molar de 1:4. Pentru tipul de lipozomi cu amestec de lipide, raportul folosit a fost PC-Ch de 19:1. Am folosit 2ml de cloroform pentru dizolvarea lipidului i 5ml de ap distilat nclzit la aprox. 60 grade pentru a desprinde filmul lipidic de pe pereii flaconului i a se forma particulele de lipozomi.
8

Materiale i metode
b.Evaluarea stabilitii i rigiditii moleculelor de lipozomi sintetizate prin tehnica DLS
Probele, pregtite anterior pentru test, au fost analizate cu aparatul ZetaSizer. Iniial, monodispersia lipozomal s-a prezentat sub forma unei singure populaii, aparatul nregistrnd o dimensiune medie a lipozomilor. S-au fcut determinri pe parcursul celor 3 luni de stocare, ultimele date furniznd o mic diferen a distribuiei dimensiunilor, ca urmare a aglomerrii particulelor sub forma a 2 populaii.
9

Materiale i metode
c. Analiza capacitii de ncapsulare a noilor formulri cu bifosfonai
determinarea spectrofotometric indirect a substanei active, dup separarea prealabil a lipozomilor cu ajutorul coloanelor Supelclean i a filtrelor de ultracentrifugare Millipore. Materiale folosite: soluie de lipozomi separai, ap distilat, agent complexant sol. 1,5 mmol/L de Cu (II) (NO3)2 *3 H2O/HNO3 Principiul metodei: Capacitatea bifosfonailor de a forma compleci cu Cu(II) ce determin o absorban specific n UV/Viz la lungimea de und =234nm (alendronat) i =235nm (clodronat).
10

Rezultate i discuii
Noii compui sintetizai au o dimensiune bun, putnd fi observai cu ajutorul microscopului optic la gradul de mrime100x.

Lipozomi cu Alendronat

Lipozomi cu Clodronat
11

Studiul stabilitii i al rigiditii particulelor lipozomale

nregistrarea aparatului imediat dup preparare, prezena unei singure populaii

nregistrarea aparatului dup 3 luni de stocare, prezena a dou populaii

12

Studiul stabilitii i al rigiditii particulelor lipozomale


Aparatul a detectat mici schimbri n distribuia dimensiunilor i s-a dovedit c starea iniial de monodispersie a particulelor poate fi inversat prin simpl sonicare. Particulele nu pierd substana activ din cauza rigiditii dat de componentele straturilor lipidice (mai ales din cauza colesterolului). Cu asemenea proprieti, aceti transportori de medicamente pot circula o lung perioad de timp n snge pn cnd vor gsi organ int.

13

Determinarea capacitii de ncapsulare a Clodronatului n lipozomi

Quantitative determination of the Clodronate incorporated in colloidal vectors


1 0.9
Blank sample Lip PC Blank Cu(II)

0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 200 250 300 350 400
Blank sample Lip PC-Ch Clodr-Cu(II) complex Lip PC Clodr - Cu(II) complex Lip PCCh Blank Lip PC difference Blank Lip PC-Ch difference Clod-Cu(II) complx Lip PC difference Clod-Cu(II) compl Lip PC-Ch difference

14

Determinarea capacitii de ncapsulare a Alendronatului n lipozomi


1 0.9 0.8 0.7 y = 3.4887x + 0.1628 R2 = 0.9964

Absorbance

0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

Alendronate concentration (mg/ml)

15

Encapsulation capacity (%) of the 2 types of liposomes


15.00% 10.00% 5.00% 0.00%

Clodronatul s-a dovedit a fi o substan mai eficient dect Alendronatul n ceea ce priveste capacitatea de a fi ncorporat n lipozomi.

16

Modelare molecular

Au fost calculate predicii despre comportamentul in vivo: pH-ul, solubilitatea, coeficientul de distribuie, permeabilitatea , biodisponibilitatea i concentraia plasmatic. Conform informaiilor furnizate i pe baza sistemelor de clasificare biofarmaceutic, Bifosfonaii fac parte din clasa a III-a de medicamente cu permeabilitate sczut i solubilitate mare. Prediciile teoretice ne-au ajutat s nelegem necesitatea de a crea o formul nou, rigid i stabil, urmtorul pas fiind obinerea unui produs cu eficacitate terapeutic superioar.
17

Concluzii

Formulrile obinute au dimensiuni de ordinul nano, sunt rigide i stabile n timp. Alendronatul i Clodronatul nglobai n lipozomi s-au dovedit a avea o absorbie teoretic mai mare dect produsele existente. Lipozomii sunt sisteme de transport al substanelor active , care elibereaz substana activ la locul int prin interaciunea lor cu membranele biologice. Din acest motiv, nu a fost posibil determinea profilului de cedare in vitro.

Folosind programe de simulare, se dorete corelarea rezultatelor experimentale cu cele teoretice i mbuntirea formulrlor existente.
18

Bibliografie selectiv

Application of UV-derivative spectrophotometry for determination of some bisphosphonates drugs in pharmaceutical formulations, Koba Marcin, Koba Katarzyna and Przyborowski Lech, Acta Poloniae Pharmaceutica - Drug Research,Vol. 65 No. 3, Pages 289-294 (2008) www.avantilipids.com- Liposome preparation Comparative properties and methods of preparation of lipid vesicles (liposomes), Szoka Jr.F., Papahadjopoulos D., Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9 , Pages 467-508 (1980) Dynamic Light Scattering, Berne B.J.; Pecora R. , Wiley: New York, (1976) Liposomes as drug carrier systems. Preparation, classification and therapeutic advantages of liposomes, Budai M., Szogyi M. (2001) Management of osteoporosis in postmenopausal women: 2010 position statement of The North American Menopause Society. Menopause,Volume 17, Issue 1, Pages 25-54 (Jan.- Febr. 2010) The relationship between the chemistry and biological activity of the bisphosphonates, Frank H. Ebetino, Anne-Marie L. Hogan , Shuting Sun,Volume 49, Issue 1, Pages 2033 (July 2011)
19