Sunteți pe pagina 1din 20

Ingineria genetica.

Rezultate

Ce reprezinta ingineria genetica ?


Ingineria genic poate fi definit drept ansamblu de metode i tehnici prin care este posibil manipularea materialului genetic la nivel celular i molecular pentru a obine pe ci netradiionale produi utili omului i genotipuri noi, avnd la baz tehnologia moleculelor recombinate (hibride) de ADN.

Evolutia ingineriei genetice


Ingineria genic se profileaz ca direcie tiinific i tehnologic n anii '70. Apariia ei a fost determinat, n primul rnd, de aprofundarea cunotinelor de genetic la nivel celular i molecular, de dezvoltarea cunotinelor privind materialul genetic al organismelor vii, i anume: descoperirea mecanismelor principale de transmitere a informaiei ereditare: transformaia (A.Avery, C.MacLeod, M.MacCarty, 1944) prin intermediul fragmentelor de ADN; sexducia (J.Lederberg, E.Tatum, 1946) prin conjugarea bacteriilor i transducia (J.Lederberg, 1952) cu ajutorul fagilor; descoperirea structurii moleculei de ADN (J.Watson, F.Crick, 1953); descoperirea i izolarea enzimelor de restricie i legare a fragmentelor de ADN (H.Smith, 1970); descoperirea fenomenului transcripiei inverse a informaiei genetice de la ARN la ADN (H.Temin, S.Mizutani, D.Baltimor, 1970); descoperirea sintezei chimice a genelor (A.Kornberg, 1967; H.Khorana, 1970, 1976).

Bazele tehnico-materiale ale ingineriei genetice


Datorit cercetrilor de genetic molecular, a fost posibil cunoaterea structurii de profunzime a unor gene i genomuri, fapt ce a condus la elaborarea tehnologiei ADN-ului recombinat i la transferul de gene peste barierele de specie. Tehnica recombinrii genetice n vitro include trei etape principale: extragerea sau sinteza chimic a ADNului din diferite specii; construirea unei molecule hibride (recombinate) de ADN; reintroducerea moleculei recombinate de ADN ntr-o celul vie pentru reproducerea i expresia ei (fig. 1).

Fig 1. Etapele principale ale ingineriei genice.

Despre ADN
La repartiia ADN-ului este implicat ADN-ligaza, care poate lega unele fragmente de restricie. Acestea i alte enzime stau la baza obinerii moleculelor recombinate de ADN (fig.2). Pentru transferul genelor de la unele organisme la altele sunt utilizai vectorii (moleculele speciale de ADN ce transfer informaia genetic dintr-o celul n alta) reprezentai prin plasmide, virusuri, liposomi, ADN mitocondrial i ADN cloroplastic.
Fig.2. Obinerea moleculelor recombinate de ADN:

Realizarile ingineriei genetice


Datorit cercetrilor n tehnologia ADN-ului recombinat, au fost elaborate metode de transfer de gene n celulele procariote, care pot sintetiza multe proteine utile. Astfel, a devenit posibil producerea i chiar comercializarea pe scar larg a unor hormoni (insulina, somatostatina, somatotropina), a interferonului, a preparatelor de diagnosticare etc.

I.Obinerea insulinei umane i a altor hormoni


Din 60 de milioane de diabetici, circa 4 milioane necesit un tratament cu insulin. n 1916, E.Sharpy-Schafer a descoperit c insulina este secretat de celule care alctuiesc insulele Langherhans din pancreas, ceea ce l-a determinat s numeasc hormonul insulin. n 1921, F.Banting i H.Best, la Toronto, au izolat din pancreasul de cine hormonul insulin, demonstrnd aciunea lui antidiabetic. n 1923, firma farmaceutic american Eli Lilly pune deja n vnzare prima insulin animal (n prezent, pentru a obine circa 100 grame de insulin, este nevoie de 800 kg de pancreas de bou (greutatea medie a unui pancreas de bou este de 200-250 grame)). Insulina uman este alctuit din dou catene polipeptidice A i B, compuse respectiv din 21 i 30 de aminoacizi, a cror secven a fost stabilit n 1955 de F.Sanger. n perioada 1963-1965, trei grupe de cercettori (americani, germani i chinezi) au reuit sinteza artificial a insulinei prin intermediul a 170 de reacii chimice, lucru ce fcea imposibil producerea insulinei pe cale industrial.

Noile tehnologii industriale de obinere a insulinei umane au fost posibile odat cu extragerea genei insulinei (W.Gillbert i colaboratorii si, 1980) i crearea moleculelor recombinate de ADN n baza plasmidelor (fig.3).
Fig.3. Schema obinerii insulinei umane

Moleculele recombinate de ADN sunt transferate n colibacili (Escherichia coli), unde are loc realizarea informaiei genetice codificate n molecula de ADN. Paralel cu proteinele specifice bacteriei, se sintetizeaz i insulina. Pentru a proteja insulina uman (ea nu este proprie colibacililor i este distrus de enzimele bacteriene), n molecula recombinat de ADN se ncadreaz, pe lng gena insulinei, i o gen reglatoare care codific o protein specific colibacililor (de exemplu galactozidaza). Ca rezultat al manifestrii informaiei genetice a moleculei recombinate de ADN, se obine o caten polipeptidic hibrid, din care mai apoi se separ insulina.

Structura insulinei

Probele clinice efectuate cu insulina uman, produs prin tehnici de inginerie genic, au demonstrat c ea nu are efecte secundare i c poate fi comercializat, adic folosit la tratarea bolnavilor de diabet (din 1982 n SUA, din 1983 n Marea Britanie).
Un hormon de mare importan biologic este hormonul de cretere sau somatotropina (HGH Human Growth Hormone), secretat de lobul anterior al hipofizei. Molecula hormonului cuprinde 191 de aminoacizi. Absena lui provoac nanismul hipofizar, ce are o frecven de 7-100 per milion de persoane. Tratamentul cu acest hormon se realizeaz ncepnd cu vrsta de 4-5 ani i pn la puberitate, n doze de minimum 6 mg pe sptmn per persoan. Somatrotopina este un hormon cu o specificaie nalt i nu poate fi utilizat de la animale. Din hipofiza unui cadavru se extrag doar 4-6 mg de hormon, heterogen i impurificat. Iat de ce, producerea acestui hormon prin tehnici de inginerie genic prezint un interes deosebit.

n prezent, cu ajutorul bacteriilor recombinate sunt obinui i ali hormoni, de exemplu, thimopoietina ce conine 49 de aminoacizi i este secretat de timus. n ce privete hormonii cu molecule mai mici (sub 20 de aminoacizi), este preferabil sinteza lor pe cale chimic.

II.Obinerea interferonilor
Interferonii sunt produi de celule specializate pentru lupta mpotriva infeciilor virale. Ei au fost descoperii n 1957 de F.Isaacs i I.Lindenmann la Institutul Naional de Cercetri Medicale de lng Londra. Interferonii reprezint nite substane proteice (din 146-166 de aminoacizi) i sunt produi n cantiti infime de celula animal sau uman, cnd un virus ptrunde n organism. Exist mai multe tipuri de interferoni: interferonul leucocitar (), interferonul fibroblastelor () i interferonul limfocitelor T sau interferonul imun (). Ei pot fi obinui prin tehnici clasice (din celulele sanguine i din fibroblaste) i prin tehnici de recombinare genic.

Pentru a obine interferon din celulele sanguine sau din fibroblastele cultivate, acestea sunt infectate cu un virus, iar dup 24 de ore prin centrifugare i purificare se izoleaz din mediul de cultur. Dintrun litru de snge se poate extrage pn la 1 mkg (10-3 grame) de interferon. n 1980, savanii americani W.Gilbert i C.Weissmann i japonezul T.Taniguki au produs interferonul uman cu ajutorul unor colibacili cu genomul modificat.

Structura moleculara a interferonului uman alpha

III.Transferul de gene n celulele vegetale i animale


Tehnicile de recombinare genetic permit transferul genelor importante n celulele de plante i animale, iar n rezultat se obin plante i animale transgenice. Pentru transferul de gene la plante sunt utilizate bacteriile Agrobacterium tumerfaciens (descoperite n 1907 de E.Smith i C.Townsend), care provoac formarea unor tumori cancerogene (crown gall) pe tulpinile unor plante (la speciile din 93 de familii de dicotiledonate).

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Plasmidul Ti (tumor inducing) descoperit la A.tumefaciens cauzeaz tumori la plante prin transferul unui segment de ADN (ADN-T) din plasmid n celulele vegetale. Strategia pentru transferul genelor cu ajutorul plasmidului Ti n celula vegetal include: introducerea segmentului de ADN-T ntr-un plasmid de E. coli; introducerea n plasmidul format a genei necesare i a genei marker (gena pentru rezisten la canamicin); introducerea plasmidului recombinat n Agrobacterium tumerfaciens; infecia cu A.tumerfaciens a plantelor respective; selectarea plantelor transformate (fig.4). Pentru realizarea transferului de gene n celula vegetal este utilizat metoda culturilor de celule i esuturi n vitro.

O realizare remarcabil n domeniul transferului de gene n celula animal o constituie oarecii transgenici. Gena hormonului de cretere de la obolan a fost transferat prin microinjecii n cele dou nuclee ale ovulului proaspt fecundat de la oarece (n fiecare nucleu cte circa 600 copii ale genei hormonului de cretere).

Ovulele fecundate (170) au fost implantate n oviductul unei femele-receptor. n consecin, s-au obinut 21 de oricei. La 6 dintre ei s-a constatat o cantitate mrit a hormonului de cretere (de 100 800 de ori). Aceti oricei aveau o cretere mult mai rapid i prezentau greuti corporale superioare animalelor-martor.

Fig.4. Transferul de gene cu ajutorul plasmidului Ti n celula vegetal.

Concluzie

Ingineria genetic, considerat component a biotehnologiilor a cptat n ultimul timp o amploare i importan extraordinar, cu evidente posibiliti pentru a deveni n viitorul nu prea ndeprtat ea insi un domeniu distinct.

Proiect realizat de: Elevele: Leutu Gianina Tarba Oana Claudia Clasa: A XII-A F Profesor: Cireasa Georgeta