BOMBEO DE PROTONES EN LEVADURAS: PROCESOS INHIBITORIOS Y DESACLOPANTES

Angulo, Diana; Estrada, Luis y Gutirrez, Gustavo. Espacio de laboratorio de Bioqumica Facultad de Ciencias Naturales Universidad Icesi

1. RESULTADOS Se pretendi evaluar la actividad de dos compuestos conocidos por afectar severamente la respiracin celular: el Dinitrofenol y la Azida de Sodio (Ver estructuras en la figura 1). Para tal propsito se tomaron tres soluciones de levadura, a una se le adicion DNP, a otra Azida y se sostuvo un control sin ninguno de los dos agentes. Se observ el comportamiento del pH desde el tiempo 0 hasta el minuto 6, luego se aadi glucosa a cada una de las soluciones de levadura para potenciar el proceso de respiracin celular y hacer ms observable el efecto de cada uno de los agentes txicos. Los resultados se encuentran a continuacin Tabla 1. Variacin de pH respecto al tiempo para cada uno de los ensayos

Para apreciar de mejor manera la variacin en el pH respecto al tiempo, pueden observarse las grficas en el anexo A al final del presente documento.

Figura 1. Izq. Estructura del DNP Dcha. Estructura de la Azida de Sodio 2. ANLISIS DE RESULTADOS Previo al anlisis de resultados propiamente dicho es conveniente definir inhibidor y desacoplante en el presente contexto. El primer trmino hace referencia a un agente que bloquea el proceso de respiracin celular, como es el caso del grupo azida, por tener tres de tres tomos cargados es sumamente inestable y en qumica, inestabilidad es sinnimo inequvoco de reactividad, de acuerdo a algunos estudios [1,2,3,4] el grupo azida se une covalentemente a algunas protenas de suma importancia como aquellas que conforman los complejos multiproteicos de la cadena de transporte de electrones[2],

Tiempo (min) 0 3 5 7 10 15 25 35

Control DNP 6,59 6,53 5,86 5,92 5,83 5,91 CON GLUCOSA 5,44 5,62 5,31 5,35 5,23 5,23 5,08 5,05 4,95 4,97

Azida 6,51 5,98 5,98 5,77 5,75 5,74 5,76 5,69

bloqueando la formacin del potencial redox, impidiendo as el bombeo de protones acoplado a la respiracin celular. ste argumento se respalda con la presente evidencia experimental, ya que si se observa la columna que relaciona el cambio de pH respecto al tiempo puede observarse como ste no vara significativamente si es comparado con el cambio presentado en la solucin en la cual las levaduras se encontraban en presencia del DNP o incluso respecto a la solucin control, la baja variacin en el pH es un reflejo claro de que la actividad de bombeo de H+ est considerablemente diezmada. Por otra parte, cuando se habla de un agente desacoplante, se hace referencia a aquel que no detiene el proceso, sin embargo impide la comunicacin entre procesos que ocurren por sinergia mutua, como lo son la sntesis de ATP y la creacin del gradiente qumico y electroqumico segn el cual se impulsa la ATPasa en la teora quimiosmtica. El DNP afecta la integridad de la membrana mitocondrial permitiendo que los protones pasen a travs de sta y no obligatoriamente por la ATPasa, tal y como se esperara la concentracin de hidrogeniones aumenta, de mano de la disminucin en el pH, ya que stos escapan indefinidamente al medio, lo que sustenta la tsis de que el DNP es un agente desacoplante. 3. CONCLUSIONES La azida es un agente inhibidor del bombeo de protones, sta afirmacin sta respaldada por la evidencia experimental, dado que el pH vari muy poco a travs del tiempo en la

solucin de levadura que contena el agente en cuestin. En la solucin que contena DNP el pH disminuy en mayor cuanta que en las otras dos soluciones, lo que respalda la tsis de que dicho compuesto es un agente desacoplante ANEXO A: GRFICOS pH RESPECTO AL TIEMPO DE LOS TRES ENSAYOS

4. BIBLIOGRAFA 1. WEISS J.N., LAMP S.T. Glycolysis preferentially inhibits ATP-sensitive + K channels in isolated guinea pig cardiac myocytes. Science. 1987;238:6769.

2. SHYNG S.-L., FERRIGNI T., NICHOLS C.G. Regulation of KATP channel activity by diazoxide and MgADP; Distinct functions of the two nucleotide binding folds of the sulphonylurea receptor. J. Gen. Physiol. 1997;110:643654. 3. PENEFSKY H.S. Mechanism of inhibition of mitochondrial adenosine triphosphate by dicyclohexylcarbodiimide and oligomycin: relationship to ATP synthesis. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1985;82:15891593. 4. ASHFORD M.L.J. Potassium channels and modulation of insulin secretion Potassium Channels: Structure, Classification, Function and Therapeutic Potential 1990. Chichester: Ellis Horwood Limited; 300325.325Cook, N.S. (ed). pp.
5. TSUBAKI M., YOSHIKAWA S. Fouriertransform infra-red study of azide binding to the Fe3-CuB binuclear site of bovine cytochromeoxidase. Biochem. 1993;32:174 182.