Influena factorilor de mediu asupra creterii microorganismelor

STRUCTURA REFERATULUI

Introducere ! Influena concentraiei su"stratului asupra microorganismelor #! Influena dimensiunii inoculului $! Efectul temperaturii asupra creterii microorganismelor %! Efectul &'(ului asupra creterii microorganismelor )! Concentraia de o*igen di+ol,at

I-FLUE-.A FACT/RIL/R 0E 1E0IU ASU&RA CRE2TERII 1ICR//R3A-IS1EL/R

Celula microbian, avnd o mas redus, este puternic influenat de condiiile mediului ambiant i reacioneaz foarte rapid la diferii factori, fie prin adaptare fie, n caz contrar, prin dispariie. Astfel, creterea microbian este dependent de numeroi factori fizico-chimici i biologici, ceea ce a condus, n cursul evoluiei, la adaptri specifice prin stabilirea de interrelaii ntre microorganisme i mediu. Creterea microorganismelor este influenat de o serie de factori de mediu, dintre care cei mai importani sunt concentraia substratului! calitatea i cantitatea inoculului! temperatura! p"-ul mediului de biosintez! agitarea! concentraia o#igenului dizolvat. ! Influena concentraiei su"stratului asupra procesului de "iosinte+4 Celula microbiana, datorit volumului ei redus, este e#trem de sensibil la variaiile locale ale parametrilor procesului de biosintez, n special la variaiile concentraiei de substrat. $rirea concentraiei de substrat n mediul de cultur poate conduce la sporirea numrului de celule microbiene, dar numai pn la anumite limite, multiplicarea acestora fiind ncetinit de procese de inhibiie care au loc la nivelul celulei. Aciunea unui inhibitor asupra celulei microbiene se poate e#ercita prin modificarea potenialului chimic al substratului, intermediarilor metabolici sau a produsului modificarea permeabilitii peretelui celular i reducerea transportului substanelor nutritive! modificarea activitii enzimelor implicate n procesul metabolic! disocierea agregatelor metabolice! finit!

modificarea parametrilor funcionali ai celulei microbiene %capacitatea de multiplicare, $ecanismele prin care se realizeaz inhibiia sunt

mobilitatea, biosintez unor metabolii&.

reacie chimic cu una sau mai multe componente celulare! adsorbia sau comple#area unor enzime sau coenzime! intervenia n secvene a reaciilor biochimice! intervenia n disocierea comple#elor enzimatice! modificarea parametrilor fizico-chimici ai mediului de biosintez %p", trie ionic, intervenia n funciile celulare de control. acestor fenomene, concentraii mari de substrat inhib dezvoltarea

constant diel'ctrica, capacitate de solvatare&! (atorit

microorganismelor ntr-un anumit grad a)ungnd chiar la inhibiie total. (in acest motiv, pentru un sistem de biosintez se stabilete concentraia optim a substratului att n momentul iniial ct i pe parcurs. (e e#emplu, pentru foarte multe bacterii, concentraia de *+-*,- n surs de carbon %glucoza, zaharoz& este inhibitoare, ele dezvoltndu-se bine la valori ale sursei de carbon sub *+-. Acesta este motivul pentru care n soluii foarte concentrate de zahr %de e#emplu dulceuri, siropuri& microorganismele, n general, nu se dezvolt, acestea putnd fi conservate pe o lung perioad de timp.

#! Influena dimensiunii inoculului Calitatea i cantitatea inoculului )oac un rol important pentru obinerea unor metabolii cu randamente dorite de biosintez. Cel mai adesea se utilizeaz o cantitate mare de inocul pentru a determina o declanare rapid a dezvoltrii culturii, concomitent cu reducerea riscului de contaminare. .n ma)oritatea cazurilor este necesar ca inoculul s se situeze ntre / i *+- din volumul total al culturii. 0entru fiecare tehnologie n parte se stabilete aa-numitul 1raport optim de inoculare2, care definete cantitile optime de inocul. 0entru asigurarea unei productiviti bune i pentru msurarea densitii inoculului, se e#trag probe din cultura aflat ntr-un anumit stadiu de evoluie optim pentru obinerea unei

producii ma#ime a metabolitului dorit i se determin parametrii specifici %numrul de germeni pe unitatea de volum, sau coninutul n biomas uscat raportat la unitatea de volum&. 3fectele determinate de cantitatea i vrsta inoculului sunt specifice pentru diferite microorganisme. 4a bacterii, cnd se utilizeaz o cantitate mare de inocul, se micoreaz faza de lag. Aceasta se datoreaz formrii i acumulrii unor metabolii intermediari eseniali care pot difuza n celule i n mediul de cultur mai rapid dect n cazul utilizrii unui inocul mic. 5neori, ns, cantiti mari de inocul determin apariia unui fenomen de autoinhibiie, datorat sensibilitii celulelor bacteriene fa de unii produi metabolici intermediari. Cnd cantitatea de inocul este ns prea mic, faza de lag poate fi prelungit la infinit i aceasta nu poate conduce la o dezvoltare normal a culturii de microorganisme. 6-a observat c n cazul bacteriilor, pentru iniierea dezvoltrii unui inocul, este necesar prezena n mediul de cultur a unei concentraii critice de metale grele. (e e#emplu, pentru un inocul de Bacillus subtilis este necesar prezena n mediul de cultur a unei concentraii minime de mangan, n vederea iniierii dezvoltrii. Aceste cercetri subliniaz importana ionilor metalelor grele pentru faza de lag la bacterii. Cantitatea de inocul la bacterii are influen mare asupra stadiilor ulterioare ale culturii, determinnd diferite stri fiziologice ale celulelor n funcie de care variaz capacitatea de biosintez a metabolitului dorit. .n cazul Ierurilor, cantitatea de inocul poate influena, de asemenea, durata fazei de lag sau stadiile ulterioare de dezvoltare, similar cu cele descrise n cazul bacteriilor. 7n cazul fungilor, importana standardizrii inoculului vegetativ pentru acest grup de microorganisme
este hotrtoare. Astfel, pentru obinerea unui ritm rapid de dezvoltare este necesar s se utilizeze un inocul sub form de suspensie de spori. (e asemenea, poate s apar fenomenul de autoinhibiie sau autostimulare a germinrii sporilor, datorit prezenei unor substane produse n timpul germinrii sau n fazele ulterioare. Astfel c, n cazul fungilor, cantitatea de inocul influeneaz mrimea i forma miceliului precum i randamentul n metabolii. 8aportul de inoculare trebuie s fie stabilit astfel nct cantitatea de miceliu dezvoltat ulterior s nu fie prea mare n detrimentul secreiei metabolitului dorit. 9 dezvoltare abundent a masei miceliene conduce n acelai timp la un consum mare de surs de carbon, cultura fiind astfel ineficient.

$! Efectul temperaturii asupra creterii microorganismelor

(intre factorii mediului ambiant, temperatura ocup ponderea cea mai mare ca important, deoarece de la apariia vieii pe :erra, temperatura a influenat foarte mult dezvoltarea microorganismelor i a determinat adaptri ale acestora la domeniul de temperaturi ntlnit n condiiile normale pe planeta noastra. $icroorganismele, spre deosebire de organismele superioare, s-au adaptat la un domeniu mai larg de temperatur. $icroorganismele sunt poi;ilotermice, deci temperatura acestora variaz cu cea a mediului. :emperatura are o mare influen asupra proceselor fiziologice ale celulei, deoarece stimuleaz sau inhib activitatea echipamentului enzimatic. .n funcie de temperaturile posibile ale mediului natural i ca rezultat, diferitele specii prezint anumite temperaturi cardinale :emperatura minim < temperatura la care mai poate avea loc creterea, iar dac

temperatura scade sub valoarea minim, creterea este oprit! :emperatura optim < temperatura la care rata specific de cretere este ma#im! :emperatura ma#im < temperatura la care creterea este nc posibil dar prin depirea acesteia efectul devine letal. (omeniul general al temperaturilor cardinale pentru ma)oritatea microorganismelor cu implicaii n industria alimentar este situat ntre + i =, oC i este mai e#tins n limite de </>
o

C ...?@,+ oC %n cazul arhebacteriilor&. 5nele microorganisme, care prezint un domeniu restrns stenotermice, n timp ce

al temperaturilor cardinale %eugenezice&, sunt denumite

microorganismele cu domeniu e#tins sunt denumite euritermice. Astfel, procariotele %bacterii& au un domeniu mai e#tins dect al eucariotelor %dro)dii, fungi filamentoi&. .n cadrul domeniului general al temperaturilor cardinale, n funcie de domeniul specific de cretere, microorganismele sunt separate n patru categorii. Microorganismele psihrofile. .n aceast categorie intr specii care cresc bine la + oC, au o temperatur optim de cretere la *+...*, oC i ma#im la apro#imativ @+ oC. 6e consider c

apro#imativ A+- din microbiota apelor prezint temperaturi optime de cretere la apro#imativ ,
o

C. :olereaz temperaturi negative i se consider c temperatura limit pentru creterea

microorganismelor este <*+ oC. (in grupa bacteriilor psihrofile de putrefacie fac parte genurile 0seudomonas, Blavobacterium, Alcaligenes. $icroorganismele psihrofile prezint sisteme enzimatice active la temperraturi sczute, deoarece conin n membrana plasmatic o concentraie mai mare de acizi grai nesaturai %acid linoleic&, ceea ce e#plic meninerea sa n stare semifluid la rece i degradarea la temperaturi mai mari de /+ oC. $icroorganisme psihrofile Cacterii (ro)dii Pseudomonas, Flavobaterium, Candida, Alcaligenes, Acromobacter, Staphilococcus, Salmonella Rhodothorula,

$ucegaiuri Alternaria, Cladosporium,

Saccharom ces vini Botr tis Cacteriile adaptate la temperaturi sczute prezint anumite particulariti au n componena lipide ce intr n structura peretelui celular i a membranei citoplasmatice i sunt caracterizate de un continut mai ridicat n acizi grai nesaturai. au o mobilitate bun! prezint capacitatea de a produce pigmeni cu rol protector fa de temperaturile scazute! enzimele elaborate sunt mai active la temperaturi sczute. .n practica de laborator microorganismul este psihrofil dac, prin pstrarea la = oC, formeaz colonie vizibil timp de *+ zile. Microorganisme psihrotrofe sau facultativ psihrofile. Aceste microorganisme au

temperatura minim de cretere la + oC, cresc bine la = oC i produc, prin pstrare la aceast temperatur, colonii vizibile sau turbiditate dup =-*+ zile de pstrare. Au temperatura optim de cretere ntre @+ i /+ oC i ma#im la /,...>+ oC. .n acest grup sunt incluse bacterii din genurile

3nerobacter, "afnia, Dersinia, 0seudomonas, CampElobacter, Fibrio, 4isteria! dro)dii din genurile Candida, 8hodotorula i mucegaiuri, microorganisme ce pot da alterri ale alimentelor pstrate prin refrigerare. Microorganismele me!ofile. 8eprezint grupul ma)oritar, cu temperaturi minime la *,...@+
o

C, temperaturi optime n intervalul /+...>+ oC i ma#im la temperaturi de peste >, oC. Cuprinde

bacterii, dro)dii, mucegaiuri, inclusiv microorganisme patogene pentru omGanimale. Microorganisme termofile. 6unt microorganisme adaptate s creasc la temperaturi mai mari de >, oC i ma)oritatea au temperaturi optime la ,,...H, oC i temperaturi ma#ime la peste A+oC. .n cadrul grupului, se difereniaz Microorganisme preferen"ial termofile %:mI@,...@J oC! :oI>,...,, oC, :$I H+...H, oC&, din care fac parte bacterii lactice ale genului 4actobacillus, unii fungi! $icroorganisme obligat termofile %:mI/= oC! :oI,+...H+ oC, :$I H+...=,oC&, din care fac parte specii ale genurilor Cacillus i Clostridium, actinomicete. Aceste bacterii se nmulesc mai repede la H+...H, oC i ntregul ciclu de dezvoltare are loc n *+-*@ ore. Cacteriile termofile au o faz de lag mai redus, iar timpul de generaie la temperatura optim de cretere poate s fie apro#imativ *+ min. $icroorganismele termofile sintetizeaz enzime stabile i active la temperaturi ridicate, ca urmare a unui coninut mai ridicat n aminoacizi hidrofobi %glutamin&. .n A8K ribozomal al bacteriilor termofile se afl un procent mai ridicat al bazelor guanin-citozin care dau stabilitate trmic. .n compoziia membranei plasmatice intr lipide cu acizi grai saturai, cu punct de topire mai ridicat. $icroorganisme termofile Cacterii $ucegaiuri Bacillus sthearotermophillus, Aspergillius fumigatus,

(ro)dii Mucor, Candida

Clostridium Rhi!opus, termosaccharoliticum, #actobacillus, Streptococcus Chetonium, termophillus Peniciullium duponti Fusarium Microorganismele termofile sunt mai pretenioase din punct de vedere nutritiv, necesitnd prezena factorilor de cretere n mediu. 6unt afectate de concentraia de o#igen din mediu, deoarece cu creterea temperaturii scade solubilitatea o#igenului. .ntre termofile sunt incluse i specii de dro)dii ale genului Candida i peste /+ de genuri de mucegaiuri %$ucor, Absidia, Aspergillus fumigatus, 0enicillium duponti .a.&. 4a cultivarea microorganismelor termofile %bacterii lactice mai ales&, inem cont de faptul c au o vitez mai mare de cretere i c necesit factori de cretere deoarece nu au timp sa i sintetizeze singure. 6tudiul microorganismelor termofile este foarte important deoarece, prin biosintez, s-au obinut enzime foarte stabile care pot fi active la temperaturi ridicate %=+-A+ oC& cu multe avanta)e n utilizare. L-amilaza bacterian este activ la A+oC i este folosit la obinerea glucozei i a de#trinei. 6unt considerate microorganisme termotolerante acele microorganisme care continu s creasc i la temperatura de ,+ oC i termodurice < microorganismele care supravieuiesc prin e#punere la temperaturi relativ ridicate, dar nu necesit aceste temperaturi pentru cretere. $icroorganismele termofile sunt folosite industrial pentru obinerea unor produse lactate acide, pentru obinerea enzimelor termostabile, pentru purificarea apelor reziduale i ca bioindicatori pentru anumite tratamente termice. 0ot produce alterarea conservelor i ncingerea cerealelor. Valori minime de temperaturi pentru creterea bacterian

Microorganisme Fibrio Yersinia enterocolica ntereococcus !isteria monoc"togenes Clostridium botulinum %almonella %taf"lococcus

Temperatura minim de cretere, 0C -5 -2 0 # $,$ & ',5

3fectul temperaturilor disgenezice se refer la efectul temperaturilor subminimale i suprama#imale. $emperaturile subminimale. 0strarea celulelor la temperaturi situate sub valoarea

temperaturii lor minime afecteaz activitatea n sensul reducerii vitezei de desfurare a metabolizrii substanelor nutritive i n consecin determin scderea producerii de proteineGenzime prin biosintez. 4a scderea temperaturii cu *+
o

C sub temperatura minim,

viteza de metabolism se reduce pn la @+-, iar e#plicaia const n faptul c, la temperaturi sczute, are loc o plierea a moleculelor de proteine, cu formarea de noi legturi ntre lanurile peptidice, care conduc la mascarea centrului activ al enzimei. Astfel, accesul substratului la catalizator este blocat i nu se mai desfoar reaciile de anabolismGcatabolism. Celulele pot trece ntr-o stare latent de via, respectiv stare de psihroanabioz. (ac temperaturile scad sub temperatura de ngheare a apei, celula trece n stare de crioanabioz i n acest caz, pot avea loc modificri ireversibile de natur fizico-chimic, care conduc la moarteaGdistrugerea celulelor. (egradarea ireversibil este datorat fie cristalelor de ghia, care se formeaz e#tracelularGintracelular, fie plasmolizei avansate, ca rezultat al difuziei apei din interiorul celulei n e#terior, unde formeaz cristale mari de ghea. .n condiii de crioanabioz %congelare sub <*+ oC&, procentul de supravieuitori se reduce n funcie de specie.

Cunoaterea comportrii celulelor i a proceselor care au loc la temperaturi subminimale a condus la numeroase aplicaii practice - pstrarea prin refrigerare %-@... ?J oC& prelungete durata de pstrare a valorii alimentare a produselor la zile-sptmni. (urata este limitat n funcie de natura i concentraia microorganismelor aflate pe produs i de gradientul de temperatur. Astfel, prin introducerea alimentelor calde n spaiul de refrigerare, mictoorganismele continu s se nmuleasc la o rat impus de viteza de rcire! - pstrarea prin congelare %-*+...-H+ oC& nu conduce la o sterilizare a produselor, deoarece microorganismele pot s rmn viabile n produsul congelat n proporie de *+->+- din numrul iniial. Cnd congelarea are loc lent %/-=@ ore&, procentul de supravieuitori este mai ridicat, deoarece apa migreaz din celul n e#terior, formnd cristale mari de ghea, nu se produce un oc termic, astfel nct celula se adapteaz i i menine viabilitatea n stare de plasmoliz. 9 parte din celule sunt distruse de ctre cristalele care cresc n dimensiuni i cauzeaz rupturile nveliurilor celulare sau datorit prelungirii strii de plasmoliz. Cnd congelarea se face rapid, mai ales pn la atingerea temperaturii de <@+ oC, se formeaz cristale mici, att intracelular ct i e#tracelular, ce pot produce distrugerea membranei i a componentelor celulare, blocarea metaboliilor, oc termic la termofile i mezofile, nct procentul de supravieuitori este mai mic comparativ cu congelarea lent. (eoarece prin congelare apa legat nu nghea, n timpul pstrrii se produce deshidratarea, au loc pierderi de gaze 9@GC9@, modificri de p" de pn la +,@-@ uniti i unele proteine sunt ireversibil denaturate. .n produse congelate la <@+ oC, indicele aM %indicele de activitate al apei < reflect coninutul de ap liber pus la dispoziia microorganismelor pentru

reacii chimice, biochimice, transfer de metabolii prin membrane semipermeabile& este de +,J i scade la +,H@ la temperaturi de -,+ oC. (in acest motiv, produsele congelate au o durat de pstrare definit, deoarece unele enzime de natur microbian sau din esut pot s fie active! n special lipazele se menin active pn la <*@ oC i dau modificri senzoriale nedorite, de e#emplu n carne, ngheat .a. .n funcie de forma celulei, bacteriile pot avea rezisten diferit la congelare bacteriile sferice sunt mai rezistente dect bacilii. 3ste important de subliniat c endosporii bacterieni i to#inele ca i bacteriile-ageni ai to#iinfeciilor alimentare nu sunt afectete de temperaturile din domeniul de congelare. Congelarea este utilizat i pentru pstrarea culturilor microbiene. 0entru aceasta, celulele recoltate din mediul de cultivare se suspend ntr-o soluie de glicerol, lactoz *+- sau #iloz, cu rol stabilizator, apoi se face o congelare lent cu *oCGmin i se pstreaz n aceast stare de crioanabioz pn n momentul folosirii. (up decongelare, microorganismele au un timp de generaie mai mare dect cel specific i necesit activizarea. $emperaturi suprama%imale. :empertaturile care depesc cu *+ oC temperatura ma#im de cretere determin n celula microbian denaturri ireversibile, ce conduc la moartea fiziologic a celulelor, ca rezultat a coagulrii proteinelor, al unor procese de o#idoreducere i al inactivrii enzimelor. 3nzimele %la creterea temperaturii peste valoarea ma#im& sufer modificri n arhitectura molecular, au loc dezaminri ale ale unor aminoacizi %de e#emplu ale argininei care este mai sensibil&, au loc rupturi n stratul moleculelor de ap legat de moleculele proteice, se produc desfaceri ale legrurilor disulfitice i, n final, are loc inactivarea ireversibil asociat cu distrugeri pariale ale nveliurilor celulare. 9 bacterie este considerat moart dac nu mai crete cnd se inoculeaz ntr-un mediu de cultur care, n mod normal, i asigur

creterea. Fiteza de inactivare termic a celulelor microbiene este dependent de raportul temperaturGtimp, respectiv cu ct crete temperatura se reduce timpul necesar pentru inactivare. Bormele vegetative ale microorganismelor sunt mai sensibile dect formele sporulate. (e asemenea, celulele tinere, care au i un coninut mai mare de ap n citosol, sunt mai rapid inactivate dect cele mature. Bormele cu cea mai ridicat termorezisten sunt formele sporulate ale bacteriilor din genurile Cacillus i Clostridium, care necesit nclzirea la *@+ oC, tinp de ,@+ min, n medii umede i *H+...*J+oC, timp de >,-H+ min, n mediu uscat. Formele vegetative ale bacteriilor, dro&diile 'i mucegaiurile sunt inactivate la ,*oC, dac- se men"in timp de .*+/* min. Ascosporii de dro&die si sporii de mucegai pot s- re!iste p0na la ,* oC timp de /* de minute. 1ndosporii bacterieni 2bacterii 3n forma sporulata4 din genurile Bacillus, Clostridium, datorita structurii lor specifice 'i a con"inutului sc-!ut 3n apa liber-, au re!isten"- mai mare la $ 5 $M. Pentru inactivarea lor 3n mediu de vapori satura"i 2umed4 e necesar- o temperatur- de .6*oC, timp de .*+6* minute, iar 3n mediu uscat necesit- la .)* oC circa 6 ore, sau la .,*oC circa 78 minute. Compoziia mediului i valoarea p"-ului influeneaz viteza de distrugere termic a celulelor. Astfel, medii sau produse alimentare cu p" acid se sterilizeaz mai uor, iar produsele bogate n proteine, glucide, lipide, cu rol protector, la aceeai temperatur de sterilizare necesit un timp prelungit. 5n factor biologic important pentru eficiena sterilizrii este concentraia de celule n produsul supus sterilizrii, deoarece denaturarea termic este un proces de prim ordin i n fiecare fraciune de timp se distruge o fraciune din numrul total de celule din produs. t ( )*+

.n practica microbiologic de laborator se aplic urmtoarele regimuri de sterilizare - @+ min. 4a *@* oC, m mediu de vapori %autoclav&, pentru medii de cultur! - *-@ ore, la *=+ oC, sau >, min, la *J+ oC, n aer %etuv&, pentru sticlrie! - flambare la rou aplicat n tehnici aseptice pentru ans i fir. .n practica microbiologic se mai aplic i tindalizarea, care const n @-/ pasteurizri repetate, alternate cu perioade n care proba este meninut n condiii favorabile pentru

germinarea endosporilor bacterieni. :indalizarea se aplic mediilor ce conin substane termolabile. 0asteurizarea este tratamentul termic folosit n industria laptelui si se caracterizeaza prin urmatorii parametri =@-=> +CG*,-@+ secunde, suficient pentru distrugerea patogenului

periculos $Ecobaterium tuberculosis. :Endalizarea const n pasteurizare repetata de @-/ ori la @> de ore alternat cu termostatarea produsului final astfel nct acesta va fi lipsit de microorganisme. 6terilizarea este operaia folosit n industria conservelor i conduce la inactivarea

endosporilor bacterieni Clostridium botulinum %cel mai rezistent dintre microorganismele facultativ patogene&. (actori de care depinde inacti)area microorganismelor la temperaturi

suprama*imale T + TM $icroorganismele se dezvolt ntr-un domeniu limitat de temperatur minim ma#im. (ac se depaete :ma# cu cteva grade se produce moartea celulelor deoarece are loc denaturarea proteinelor din citoplasm. $oartea, inactivarea celulelor microbiene, este dependent de numeroi factori biologici corelai cu natura microorganismelor. 7nactivarea termic este dependent i de starea fiziologic a celulelor %cele tinere mor mai repede dect cele mature deoarece conin mai multa ap&.

:emperatura mediului n care are loc procesul de biosintez este un factor e#trem de important pentru activitatea microorganismelor. :emperatura este un factor care acioneaz n mod direct asupra microorganismelor vii! diferena ntre temperatura mediului ncon)urtor i cea din interiorul celulei trebuie s fie nul. 0entru un proces de biosintez industrial, temperatura poate fi considerat unul dintre parametrii fizici cei mai importani, care este implicat profund, prin efectele sale, n optimizarea procesului. Fariaiile temperaturii au efect asupra randamentului de transformare a substratului n produsul dorit, asupra cerinelor nutritive ale microorganismului i compoziiei biomasei obinute precum i asupra vitezei de cretere microbian. .n funcie de domeniul de temperatur n care microorganismele ating viteza ma#im de cretere, acestea se clasific n criofile, mezofile i termofile.
%fig. *&. 6e observ c fiecare grup de microorganisme are un domeniu de cea *+NC n care viteza de cretere este ma#im. $icroorganismele industriale sunt, n general, mezofile, astfel nct acest domeniu este plasat n intervalul @,.../,NC.

*+ @+ /+ >+ ,+ H+ =+

Temperatur

(ig, *. 7nfluena temperaturii asupra creterii microorganismelor %CooneE, *AJ*&. 3fectul temperaturii asupra creterii microorganismelor se e#plic prin faptul c aceasta afecteaz multe procese metabolice din celul, precum i compoziia biomasei n proteine i lipide, coninutul n A8K al celulei. 3ste posibil ca structura lipidic a membranei celulare s se modifice continuu n funcie de variaiile de temperatur, astfel nct membrana s-i menin funcia reglatoare.

%! Efectul p'(ului asupra creterii microorganismelor Faloarea p"-ului este, alturi de temperatur, un parametru important n procesele de biosintez. 7nfluena valorii p"-ului asupra dezvoltrii culturilor microbiene se poate urmri n cteva direcii n general, microorganismele au un domeniu optim de p" pentru dezvoltare, n care viteza specific de cretere atinge valoarea ma#im. (e e#emplu, pentru anumite specii de dro)dii domeniul optim de p" se situeaz ntre valorile > i ,. 3#ist ns i specii de dro)dii care cresc la valori de p" n )ur de @ sau, dimpotriv, la valori ridicate ale p"-ului n )ur de J %de e#emplu, biosintez fenilalaninei cu o dro)die din genul Rhodotorida4. Cultivrile de microorganisme care decurg la valori ale p"-ului mai sczute %p" I /->& prezint avanta)ul unui risc mai sczut de contaminare, ceea ce este apreciat n mod deosebit n cazul unei cultivri industriale! efectul valoni p"-ului asupra randamentului de conversie a substratului la un anumit produs. Bormarea produsului dorit n urma procesului de biosintez poate s fie legat de desfurarea bioprocesului ntr-un domeniu foarte strict de p". 7n timpul dezvoltrii unei culturi microbiene apar deviaii ale p"-ului de la valoarea considerat optim, care pot avea urmri nedorite asupra procesului de biosintez. Aceste modificri se pot datora fie consumrii unui nutrient %consumarea sursei de carbon sau consumarea sursei de azot&, fie producerii unui acid organic de ctre microorganism. 0entru corectarea p"-ului la valoarea prescris se adaug diverse substane chimice %acizi sau baze& alese n funcie de mai muli factori! n cazul n care valoarea p"-ului este sub cea prescris, se pot folosi, pentru corecie, soluii de Ka9" sau O9" n funcie de compoziia chimic a mediului i de necesarul n ionii de Ka ? i O? al
microorganismului! n acelai scop este mult rspndit utilizarea amoniacului gazos sau soluie. n situaia n care valoarea p"-ului este peste cea prescris, se poate aduga acid clorhidric, acid sulfuric sau acid azotic, n funcie de caracteristicile microorganismului %ionul C72 s nu inhibe creterea&, de compoziia chimic a mediului %adugarea de acid sulfuric ar putea conduce la formarea unor sruri greu solubile&, precum i de materialul de construcie al vaselor de reacie i al bioreactoarelor %probleme de coroziune&! prin efectul de disociere a acizilor i bazelor, p"-ul acioneaz asupra caracteristicilor suprafeei celulei, modificnd proprietile ei de aderare la diferite materiale %sticl, metale& precum i cele de floculare.

)! Concentraia de o*igen di+ol,at

.n culturile aerobe, este esenial s se realizeze dizolvarea n mediu a ntregii cantiti de o#igen necesare
microorganismului n orice moment al fermentaiei, prevzndu-se n general un oarecare e#ces fa de nevoi. (e aceea, se urmrete n general obinerea unor aeraii ct mai eficiente, transferul de o#igen din faza gazoas n faza lichid %mediul de fermentaie& avnd loc cu viteze mari. 7n cazul n care procesul de biosintez se desfoar n laborator la flacoane agitate, aeraia depinde de urmtorii parametri

viteza de rotaie sau translaie a agitatorului! mrimea flacoanelor 3rlenmeEer! volumul de mediu de cultur din flacon! creterea turbulenei prin icane.

3ficiena aerrii unui mediu de cultur este reflectat de concentraia de o#igen dizolvat. 3#ist mai multe metode de determinare a eficienei aeraiei

n mediu! -

metoda sulfit, care permite msurarea vitezei ma#ime de transfer a o#igenului din aer metoda polarografic- de determinare a concentraiei o#igenului dizolvat n mediu! utili!area electrodului cu membran- pentru msurarea concentraiei de O2 dizolvat i
utili!area anali!orului paramagnetic de O2, care analizeaz compoziia aerului la ieirea din bioreactor

a consumului de +@!
i o compar cu compoziia celui care intr.

0entru evaluarea cineticii transferului de +@ se utilizeaz de cele mai multe ori prima metod bazat
pe o#idarea practic instantanee a sulfitului de sodiu catalizat de metale grele n prezena o#igenului dizolvat! n acest mod s-a stabilit ecuaia

v ( 9L % a 2 C a + C # 4 , n care v este viteza de transfer a o#igenului prin filmul de lichid de la suprafaa bulei! 9 # + coeficient global de transfer! a - suprafaa interfacial gaz - lichid! C a + concentraia o#igenului la suprafa, egal cu valoarea de saturaie pentru sistemul aer - ep, la temperatura dat! C # + concentraia o#igenului n ap. 0entru sistemele intens aerate, valorile produsului :9# P a2 sunt cuprinse ntre =+ i >++ m$ +@ absorbitGl or. 7n cazul reactoarelor de biosintez, aerarea se aplic unui sistem deosebit de comple#, coninnd numeroase substane dizolvate i avnd o concentraie ridicat de microorganisme

suspendate. Alegerea parametrilor sistemului de aerare este determinat de necesitatea furnizrii unei cantiti de o#igen suficient pentru a asigura o valoare ma#im a activitii metabolice n reactoarele de biosintez! n acest caz, un .anumit microorganism i un anumit mediu de cultur se caracterizeaz printr-o rat de utilizare a o#igenului specific. 0entru conducerea unui proces este esenial cunoaterea e#act a modului de variaie n timp a necesarului de o#igen i a ratei consumului de o#igen. 8ata consumului de o#igen sporete rapid pn la o valoare ma#im nc din primele stadii ale procesului de biosintez, scznd apoi %fig. >./&. Faloarea ma#im a ratei de consum a o#igenului (Oi) coincide, de obicei, cu momentul atingerii concentraiilor ridicate de celule la microorganisme.
Kecesarul de o#igen al culturii este influenat de mediul de

@+

>+ H+ *++ :imp QoreR

J+

(ig, 2, $odificarea concentraiei de +@, p"-ul i concentraia de biomas celular

pentru M cothecium verrucaria.

biosintez utilizat. (e e#emplu, datorit vitezei mari de utilizare a monozaharidelor fa de dizaharide, de ctre Penicillium, necesarul de o#igen este dublu la utilizarea glucozei ca surs de carbon fa de zaharoz.Ali factori care influeneaz transferul de +@ sunt transfer! prezena n mediul de cultur a agenilor tensioactivi, care determin o micorare a coeficienilor de

la naintare!

concentraia de microorganisme la concentraii ridicate de microorganisme, vscozitatea mediului

crete, iar eficiena sistemului de aerare scade, bulele tinznd s circule prin canale prefereniale, cu rezisten redus

sistemul de agitare al bioreactorului, care influeneaz sensibil concentraia o#igenului dizolvat, o

agitare eficient a mediului de cultur conducnd la o dispersie corespunztoare a bulelor de aer i, deci, la mrirea coeficientului de transfer al o#igenului!

infecie&.

echipamentul de aerare utilizat, care permite obinerea unei dispersii uniforme a bulelor de aer

conductele perforate constituie echipamentul preferat pentru reactoarele de biosintez, de volum mare! suprapresiunea, care favorizeaz mrirea concentraiei de o#igen n mediul de cultur, n general

procesele biotehnologice fiind conduse la supra-presiuni cuprinse ntre +,, i * bar %n scopul micorrii riscului de