Ceai verde

Metode de separare Utiliznd tehnica Cromatografiei de Lichide de nalt Performan (HPLC) ne-am propus s separm, s identificm i s evalum coninutul de catechine din extracte de ceai verde. n zilele noastre ceaiul este consumat n mai mult de 30 de ri din ntreaga lume, cu un consum mediu per cap de locuitor de 120 ml/ zi, ca i butur ceaiul ocupnd locul doi n lume, dup ap (Graham, H. N., 1992). n funcie de procesul tehnologic de obinere ceaiurile sunt clasificate astfel: ceai verde nefermentat, ceaiul oolong semi-fermentat i fermentat ceaiul negru sau rou.
Flavan-3-olii sunt un subgrup al flavonoidelor, care include catechinele. Frunzele de ceai verde conin ase catechine majoritare: (+)-catechina (C), (-)-epicatechina (EC), (+)-galocatechina, (-)-epicatechin galat (ECG), (-)-epigalocatechina (EGC) i (-)-epigalocatechin galat (EGCG) (Abrevieri 1).

Coninutul total de catechine a fost evaluat utiliznd tehnica HPLC. MATERIALE I METODE Extracia: 0.2 g pudr (Pharmanex, Teacalon, Polyphenon E, Japan Green Tea) sau frunze (Vedda) cu 10 ml ap Millipore fiart, au fost sonicate, centrifugate i filtrate. Cromatografia de nalt Performan (HPLC) este o metod uzual utilizat pentru separarea unor antioxidani ca i catechinele. Analiza HPLC s-a realizat cu ajutorul unui sistem Shimadzu, echipat cu detecie cu fotodiod. A fost utilizat o coloan SUPELCOSIL TM LC-18, 5m, 25 cm x 4.6 mm. S-a folosit un gradient de eluare: faza mobil A- metanol: acid acetic: ap bidistilat i faza mobil B, metanol: acid acetic: ap bidistilat.

Analiza cantitativ HPLC a extractelor de ceai verde Fig. 2 evideniaz separarea amestecului de catechine standard pure, n 22 minute. Ordinea de

eluare a fost: GC, C, EGC, EGCG, EC, GCG, ECG, CG. Fig. 2. Separarea HPLC a opt catechine standard: GC, C, EGC, EGCG, EC, GCG, ECG i CG. Pentru prescurtri, vezi lista abrevieri 1

Fig. 2. Separarea HPLC a opt catechine standard: GC, C, EGC, EGCG, EC, GCG, ECG i CG. Pentru prescurtri, vezi lista abrevieri 1 n acest experiment au fost luate n studiu cinci probe de ceai verde, dou obinute de pe piaa romaneasc (Vedda), respectiv japonez (Japan green tea) i trei suplimente alimentare: Pharmanex, Teacalon, Polyphenon E. Cromatogramele extractelor de ceai verde analizate sunt reprezentate in Fig. 3. Coninutul (mg/g) n catechine al probelor de ceai verde, conform determinrii HPLC i calibrrii cu standarde pure se regsete n Tabelul 1.

Coninutul total de catechine a fost foarte sczut n probele Vedda (12.03 mg/g) i Japan Green Tea (17.56 mg/g), posibil datorit oxidrii polifenolilor i /sau polimerizrii induse de fermentarea frunzelor de ceai. Coninutul total de catechine din suplimentele alimentare (Pharmanex, Teacalon and Polyphenon E) este semnificativ mai ridicat, comparativ cu probele de ceai verde, datorit concentrrii probei n urma tehnologiei de extracie prin pulverizare uscat. EGCG, ECG i EC sunt catechinele ce se regsesc n concentraie mai mare n extractele de ceai verde. Suplimentul alimentar Teacalon conine EC (134.67 mg/g), C (22.83 mg/g) i GCG (23.64 mg/g), compui identificai n cantiti mici n alte dou suplimente alimentare Pharmanex i Polyphenon E. Proba Pharmanex conine 56.58 mg/g EC i 42.07 mg/g ECG, n comparaie cu Polyphenon E 11.62 mg/g EC i 63.39 mg/g ECG. Coninutul de GC din probele Pharmanex i Teacalon a fost similar: 11.69 i respectiv 11.43 mg/g.

A)

B). Fig.3. Cromatogramele extractelor de ceai verde analizate: A).Pharmanex; B).Teacalon

The purpose of using a Soxhlet Apparatus was to determine the content of each flavonoid in the green tea by exhaustive extraction if the flavonoids would be stable. Unfortunately, it ended a failure because the flavonoids were found unstable. An exact amount of 5 g green tea was extracted by 250 mL distilled water. The temperature was fixed to the boiling point of water to secure Soxhlet action, and heating was continued until the siphon fluid changed colorless to indicate that all the flavonoids were extracted.