Cadena Respiratoria y Fosforilación Oxidativa

Biochemistry 2/e - Garrett & Grisham
Sntesis mitocondrial de ATP

Los electrones captados por las coenzimas reducidas pasan a travs de una cadena de protenas asociadas a grupos prostticos, generndose concomitantemente un gradiente de protones a travs de la membrana interna mitocondrial. El gradiente de protones formado durante la caida de energa libre de los electrones da la energa para la sntesis de ATP
Copyright 1999 by Harcourt Brace & Company
DG de reacciones REDOX
DGo' = -nF DEo' DEo' = Eoaceptor (oxidante) - Eo donador (reductor) La reaccin NADH + H + O2 NAD+ + H2O Libera aprox.52,000 cal/mol.. Afortunadamente esta reaccion no ocurre asi en la clula Los electrones son donados paulatinamente al oxigeno a traves de una cadena de transportadores de la membrana interna mitocondrial
Clculo de los potenciales redox estndar

El transporte de electrones
Existen 4 complejos en la membrana mitocondrial interna. Una coenzima liposoluble (UQ, CoQ) y una protena hidrosoluble (cyt c) acarrean los electrones entre los complejos proticos. La energa de los electrones cae entre los complejos I y II y el complejo IV
Cytochrome aa3 complex 2 a type hemes, Cu ions Cytochrome c oxidase

O2
H2 O

Complex subunits MW redox centres
I: NADH-ubiquinone oxidoreductase
46
980kDa
FMN, 8 FeS clusters (2x[2Fe2S] and 6x[4Fe4S])
II: succinate dehydrogenase
120kDa
FAD [2Fe2S] [4Fe4s] [3Fe4S] cyt b560
III: cytochrome bc1 complex
2 x 11
480kDa
cyt b562, cyt b566, Rieske FeS, cyt c1
IV: cytochrome c oxidase
2 x 13
420 kDa
CuA, cyt a, CuB/cyt a3
Centros FeS
Fe(S
ys)4
[Fe2S2](S
ys)4
[Fe2S2](SCys)2(NHis)2 Rieske
[Fe4S4](S
ys)4
Complejo I

NADH-CoQ Reductasa Transfiere electrones del NADH a la CoQ Ms de 30 cadenas polipeptdicas PM= 850 kD Ruta de los electrones:
NADH FMN Fe-S UQ FeS UQ
Cuatro H+ exportados por cada 2 eCopyright 1999 by Harcourt Brace & Company
Complejo II
Succinato-CoQ Reductasa Succinato deshidrogenasa (del ciclo de Krebs!) Flavoprotein 2 (FP2) - FAD unido covalentemente Cuatro subunidades, incluyendo 2 protenas Fe-S Tres tipos de centros Fe-S:
4Fe-4S, 3Fe-4S, 2Fe-2S
Ruta: succinato FADH2 2Fe2+ UQH2 Reaccin neta: succinato + UQ fumarato + UQH2
Complejo III
CoQ-Citocromo c reductasa CoQ pasa electrones al cit c (y bombea H+) en un ciclo redox conocido como ciclo Q La principal protena transmembranal en el complejo III es el citocromo b con hemos bL y bH Los citocromos, como el Fe en los centros Fe-S, son agentes que transfieren un electrn UQH2 es un transportador de electrones liposoluble El cit c es un transportador de e- hidrosoluble
Complejo IV
Citocromo c Oxidasa Los e-s del cit c son usados en una reduccin de cuatro e-s del O2 para producir 2H2O El Oxgeno es por tanto el aceptor terminal de e-s de la cadena respiratoria La citocromo oxidasa utiliza 2 hemos (a y a3) y 2 centros de cobre El complejo IV tambin transporta H+
Acoplamiento entre el transporte de e- y la fosforilacin oxidativa

Durante 20 aos Muchos bioqumicos gastaron sus mejores aos buscando " intermediarios de alta energa " En 1961 Peter Mitchell propuso una idea novedosa: Un gradiente de protones a travs de la membrana interna podra usarse para encauzar la sntesis de ATP Mitchell fue ridiculizado, pero la hiptesis quimiosmtica eventualmente le granje el premio Nobel
Peter Mitchell
1978
ATP sintetasa
La difusin de protones a travs de esta enzima origina la sntesis de ATP Est formada por 2 partes: F1 y F0 (asi llamada esta ltima por su inhibicin con oligomicina) Racker y Stoeckenius confirmaron la hiptesis de Mitchell usando vesculas con the ATP sintetase y bacteriorodopsina Paul Boyer propuso el mecanismo de conformacional y comparti el premio Nobel de qumica de 1997
Paul D. Boyer
John E. Walker
Velocidades de respiracion mitocondrial

adicin/ inhibidor ninguno oligomicina ninguno baja baja cianuro cero
ADP
desacoplante
alta
alta
baja
alta
cero
cero
Inhibidores de la Fosforilacin Oxidative

La rotenona inhibe al Complejo I y ayuda a los nativos de la Amazona a atrapar peces! Cianuro, azida y CO inhiben al Complejo IV, unindose fuertemente al ion (Fe3+) del citocromo a3 La oligomicina y el DCCD son inhibidores de la ATP sintasa
Desacoplantes
Desacoplan el transporte de e- y la fosforilacin oxidativa Los desacoplantes destruyen el estrecho acoplamiento entre el transporte de electrones y la fosforilacin oxidativa al disipar el gradiente de protones Los desacoplantes son molculas hidrofbicas con un protn disociable Equilibran los protones a travs de la membrana interna, disipando el gradiente de protones
Traslocasa ATP-ADP
El ATP debe sacarse de las mitocondrias El ATP se intercambia por ADP mediante una "traslocasa" La salida del ATP se favorece por la carga positiva relativa del citosol respecto a la matriz La salida de ATP 4- y la entrada de ADP 3equivale a la entrada de un protn(+) La sntesis de un ATP cuesta aprox. 3 H+
Por lo tanto, hacer y exportar 1 ATP = 4H+
Qu es la relacin P/O?
Es decir: Cuntos ATPs se hacen por cada par de electrones que atraviesa la CR? El transporte de e- rinde 10 H+ bombeados por par electrnico del NADH al oxgeno 4 H+ regresan a la matriz por ATP que sale al citosol 10/4 = 2.5 para e-s entrando como NADH Para los electrones que entran como succinato (FADH2), aprox. 6 H+ son bombeados por par electrnico que llega al oxgeno 6/4 = 1.5 para los electrones que entran como succinato
Lanzaderas de e
Parte del NADH usado en el transporte de electrones es citoslico y el NADH no atraviesa la membrana mitocondrial interna Qu hacer ? Las lanzaderas" provocan el movimiento de electrones sin un transporte real del NADH La lanzadera del Glicerofosfato transfiere los electrons al glicerol-3-P, el cual transfiere electrones al FAD Malato-aspartato Transfiere electrones al NAD+
Rendimiento neto de ATP a partir de glucosa
Depende de la lanzadera 30 ATP (lanzadera del glicerol-3-P) 32 ATP (malate-asp) 2GLIC+5LAN+2KREBS+20NAD+3FAD En bacterias - no hay mitocondrias - no se gastan H+ para exportar el ATP al citosol, por lo tanto:
10/3 = ~3ATP/NADH 6/3 = ~ 2ATP/FADH2

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II: succinate dehydrogenase

FAD [2Fe2S] [4Fe4s] [3Fe4S] cyt b560

III: cytochrome bc1 complex

cyt b562, cyt b566, Rieske FeS, cyt c1

IV: cytochrome c oxidase

CuA, cyt a, CuB/cyt a3

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