Sunteți pe pagina 1din 207

Prof. univ. dr. Eugen ULEA ef lucr. dr.

Florin-Daniel LIPA

MICROBIOLOGIE

IAI 2012

CUPRINS
CAPITOLUL 1 - OBIECTUL DE STUDIU AL MICROBIOLOGIEI......... 9 1.1. Date selective privind istoricul Microbiologiei ........................... 11 1.2. coala romneasc de Microbiologie .......................................... 19 Test de autoevaluare ........................................................................... 21 CAPITOLUL 2 - CARACTERELE GENERALE I POZIIA MICROORGANISMELOR N LUMEA VIE ............................................. 22 2.1. Poziia microorganismelor n lumea vie ...................................... 24 2.2. Prionii .......................................................................................... 26 2.3. Virusurile ..................................................................................... 28 2.3.1. Morfologia virusurilor ......................................................... 28 2.3.2. Structura virusurilor ............................................................. 29 2.3.3. Virusurile plantelor .............................................................. 30 2.3.4. Bacteriofagii......................................................................... 32 2.3.5. Fagii filamentoi .................................................................. 38 2.3.6. Cianofagii............................................................................. 39 2.3.7. Micovirusurile ...................................................................... 39 2.3.8. Sistematica, nomenclatura i identificarea virusurilor ......... 39 2.4. Bacteriile...................................................................................... 41 2.4.1. Morfologia bacteriilor .......................................................... 42 2.4.2. Structura celulei bacteriene .................................................. 48 2.4.3. Compoziia chimic a bacteriilor ......................................... 58 2.4.4. Creterea i multiplicarea bacteriilor ................................... 60 2.4.5. Nutriia bacteriilor................................................................ 63 2.4.6. Respiraia microorganismelor .............................................. 63 2.4.7. Grupe particulare de bacterii................................................ 64 2.4.8. Sistematica, nomenclatura i identificarea bacteriilor ......... 68 2.4.9. Rolul bacteriilor n natur .................................................... 70 Test de autoevaluare ...................................................................... 71 2.5. Cyanobacteriile (algele albastre-verzi) ........................................ 71 2.5.1. Morfologia cyanobacteriilor ................................................ 72 2.5.2. Structura cyanobacteriilor .................................................... 72 2.5.3. Sistematica cyanobacteriilor ................................................ 73 2.5.4. Rolul cyanobacteriilor n natur .......................................... 74

2.6. Protozoarele ................................................................................. 74 2.6.1. Morfologia i fiziologia protozoarelor ................................. 74 2.6.2. Structura protozoarelor ........................................................ 75 2.6.3. Reproducerea protozoarelor ................................................. 76 2.6.4. Nutriia protozoarelor .......................................................... 76 2.6.5. Sistematica protozoarelor .................................................... 77 2.6.6. Rolul protozoarelor n natur ............................................... 78 2.7. Diatomeele ................................................................................... 79 2.7.1. Morfologia diatomeelor ....................................................... 79 2.7.2. Structura diatomeelor ........................................................... 79 2.7.3. Reproducerea diatomeelor ................................................... 81 2.7.4. Sistematica diatomeelor ....................................................... 83 2.7.5. Rolul diatomeelor n natur ................................................. 86 2.8. Ciupercile..................................................................................... 86 2.8.1. Morfologia ciupercilor ......................................................... 86 2.8.2. Structura celular a ciupercilor ............................................ 88 2.8.3. Organele de fixare i de absorbie ale ciupercilor................ 89 2.8.4. Formele de rezisten ale ciupercilor ................................... 93 2.8.5. nmulirea ciupercilor .......................................................... 94 2.8.6. Alternana de faze la ciuperci ............................................ 101 2.8.7. Nutriia ciupercilor ............................................................. 102 2.8.8. Originea i evoluia parazitismului la ciuperci .................. 104 2.8.9. Cerine fa de mediu ......................................................... 105 2.8.10. Sistematica ciupercilor ..................................................... 105 Test de autoevaluare .................................................................... 107 CAPITOLUL 3 - INFLUENA FACTORILOR ECOLOGICI ASUPRA MICROORGANISMELOR ....................................................................... 108 3.1. Influena pH-ului ....................................................................... 108 3.2. Influena temperaturii ................................................................ 109 3.3. Influena apei ............................................................................. 110 3.4. Influena energiei radiante ......................................................... 112 3.5. Activitatea microbian a diferitelor soluri ................................. 113 3.6. Profilul microbian al solului ...................................................... 114 CAPITOLUL 4 - INTERRELAIILE ECOLOGICE NTRE ORGANISME

............................................................................................................... 115 4.1. Interrelaiile dintre populaiile de microorganisme ................... 115 4.2. Interrelaiile dintre plantele superioare i microorganismele din sol ........................................................................................ 119 4.2.1. Influena sistemului radicular al plantelor asupra microflorei solului .............................................................. 119 4.2.2. Natura secreiilor radicelare i influena lor asupra structuriilor taxonomice a microflorei solului ........ 121 4.2.3. Vrsta plantelor i efectul de rizosfer .............................. 122 4.2.4. Micorizele .......................................................................... 122 4.2.5. Interrelaiile ntre ciuperci i plante n cazul micorizelor .. 124 CAPITOLUL 5 - SOLUL CA MEDIU DE EXISTEN PENTRU MICROORGANISME ............................................................................... 126 5.1. Alctuirea general a solului ..................................................... 126 5.2. Reacia solului ........................................................................... 129 5.3. Formarea solului ........................................................................ 129 5.3.1. Compoziia chimic a solului ............................................ 130 5.3.2. Rolul microorganismelor n formarea i evoluia materiei organice ................................................................ 131 5.3.3. Teoria microbiologic a formrii humusului ..................... 132 5.4. Populaia solului ........................................................................ 134 Test de autoevaluare ......................................................................... 136 CAPITOLUL 6 - ROLUL MICROORGANISMELOR N CIRCUITUL MATERIEI N NATUR.......................................................................... 138 6.1. Circuitul azotului ....................................................................... 138 6.1.1. Fixarea azotului molecular................................................. 141 6.1.2. Amonificarea ..................................................................... 151 6.1.3. Nitrificarea ......................................................................... 153 6.1.4. Denitrificarea ..................................................................... 155 6.2. Circuitul carbonului ................................................................... 156 6.2.1. Metabolismul carbonului mineral ...................................... 158 6.2.2. Metabolismul carbonului organic ...................................... 158 6.3. Circuitul sulfului ........................................................................ 168 6.4. Circuitul fierului ........................................................................ 171

6.5. Circuitul fosforului .................................................................... 173 6.6. Circuitul potasiului .................................................................... 175 6.7. Transformrile microbiene ale calciului .................................... 175 6.8. Transformrile microbiene ale magneziului .............................. 175 6.9. Transformrile microbiene ale microelementelor ..................... 176 6.9.1. Manganul ........................................................................... 176 6.9.2. Seleniul .............................................................................. 176 6.9.3. Zincul ................................................................................. 177 6.9.4. Cuprul ................................................................................ 177 CAPITOLUL 7 - MICROBIOLOGIA FERMENTAIILOR ................... 178 7.1. Fermentaia alcoolic ................................................................. 179 7.1.1. Utilizarea microorganismelor n vinificaie ....................... 181 7.1.2. Utilizarea microorganismelor n industria berii ................. 196 7.2. Fermentaia lactic ..................................................................... 196 7.2.1. Rolul microrganismelor n obinerea produselor lactate.................................................................................. 198 7.2.2. Rolul microorganismelor lactice n conservarea alimentelor murate ............................................................. 199 7.2.3. Rolul microorganismelor n producerea furajelor nsilozate............................................................................. 200 7.3. Fermentaia acetic .................................................................... 201 Test de autoevaluare ......................................................................... 205 BIBLIOGRAFIE ........................................................................................ 207

Capitolul 1 OBIECTUL DE STUDIU AL MICROBIOLOGIEI


Microbiologia este tiina care se ocup cu studiul microorganismelor. Microorganismele constituie un grup foarte mare de organisme, diferite ca natur, form i activitate biologic, cu o organizare unicelular i o structur intern relativ simpl, avnd ns caractere comune dimensiunile microscopice, care le fac invizibile cu ochiul liber. Din grupul microorganismelor fac parte bacteriile, ciupercile microscopice (mucegaiurile i levurile), algele unicelulare i protozoarele. Lumii microorganismelor i-au fost alturate i virusurile, care sunt entiti infecioase, alctuite din componentele chimice eseniale ale organismelor vii, proteine i acizi nucleici cu o organizare acelular, care le fac inapte de a se multiplica n afara unei celule vii, fapt ce le oblig la un parazitism intracelular absolut. Dei Microbiologia este o tiin relativ tnr, datorit domeniului de studiu foarte vast, n cadrul ei s-au difereniat o serie de discipline microbiologice independente. Acestea pot fi grupate dup mai multe criterii: A. Dup grupul taxonomic studiat: Virologia (virusologia) este tiina ce se ocup cu studiul virusurilor i aciunea lor asupra organismelor vii. Bacteriologia se ocup cu studierea, identificarea i cultivarea bacteriilor, precum i cu aplicaiile lor n medicin, agricultur, industrie i biotehnologie. Micologia (gr. mykes - ciuperc) studiaz morfologia, genetica, taxonomia, proprietile biochimice i ecologia ciupercilor. Algologia (ficologia) este tiina ce se ocup cu studiul algelor. Protozoologia este ramura microbiologiei care studiaz morfologia, genetica i taxonomia protozoarelor.

B. Dup activitatea microorganismelor n raport cu mediul n care triesc: Microbiologia acvatic se ocup cu studiul microorganismelor care triesc n mediu acvatic i care particip la transformarea substanelor organice i anorganice din mri i oceane. Microbiologia solului studiaz activitatea microbiotei solului i rolul ei n nutriia mineral a plantelor, fertilitatea solului, geneza i formarea structurii solului. C. Dup natura problemelor studiate: Fiziologia microorganismelor studiaz procesele vitale ale microorganismelor (respiraie, nutriie etc). Ecologia microorganismelor studiaz legitile generale de evoluie i interaciunea microorganismelor n natur, interaciunile i interrelaiile dintre micro i macroorganisme. Genetica microorganismelor se ocup cu studiul ereditii i variabilitii microorganismelor precum i cu mecanismele de transfer al materialului genetic. D. Dup aplicaiile practice: Microbiologia medical uman i veterinar studiaz microorganismele patogene i relaiile ecologice care se stabilesc cu organismele infectate. Imunologia studiaz starea de rezisten sau de imunitate fa de agenii infecioi precum i diferite funcii i proprieti ale celulelor i esuturilor organismelor animale i vegetale care determin prezena i apariia sau modificarea acestei stri. Microbiologia industrial (microbiologia tehnic sau a fermentaiilor) studiaz rolul microorganismelor n obinerea pe cale fermentativ a unor substane chimice utile ca: alcoolul etilic, alcoolul butiric, acetona, acidul acetic, glicerina, antibioticele. n industria alimentar, microorganismele au rol n panificaie, la conservarea alimentelor i furajelor, precum i n procese industriale ca topitul inului i cnepei pe cale biologic, tbcirea pieilor etc.

Microbiologia solului (agricol) se ocup de microflora natural din sol i de rolul acesteia n circuitul elementelor n natur, n asigurarea fertilitii solului, n geneza i formarea structurii solului, precum i de relaiile microorganismelor cu plantele. Cunoaterea microflorei solului i a activitii ei biologice permite dirijarea unor procese naturale din sol i folosirea lor n scopul sporirii produciei agricole. Microbiologia insectelor studiaz microflora normal a insectelor i, n general, a artropodelor, relaiile sale cu organismele gazd, mecanismele de transmitere a unor ageni patogeni la om, animale i plante, precum i microorganismele ce sunt patogene insectelor duntoare agriculturii i omului. Microbiologia geologic se ocup cu studiul rolului unor organisme n formarea unor depozite geologice (fier, mangan, sulf) n geneza rocilor calcaroase, a hidrocarburilor, a zcmintelor de petrol, crbuni, gaze naturale i coroziunea rocilor; ea studiaz, de asemenea, folosirea bacteriilor n detectarea depozitelor de petrol etc. Microbiologia marin (pelagic) studiaz rolul microorganismelor n transformarea substanelor organice i anorganice din mri, influena lor asupra productivitii biologice a mrilor i n formarea diferitelor roci biogene i a minereurilor organogene n mri. Microbiologia cosmic este ramura cea mai nou a microbiologiei aplicate ce studiaz probleme legate de influena spaiului cosmic asupra viabilitii i variabilitii microorganismelor, precum i de posibilitatea exportului i importului de microorganisme. Patologia vegetal (Fitopatologia) se ocup cu studiul microorganismelor ce produc boli la plante, stabilind simptomatologia, cile de transmitere, relaiile imunologice ale gazdelor, precum i profilaxia i tratamentul infeciilor produse plantelor cultivate i celor din flora spontan 1.1. Date selective privind istoricul Microbiologiei Microbiologia este o tiina relativ tnr, datorit faptului c, din lipsa mijloacelor de investigaie, oamenii de tiin s-au ocupat, n primul rnd, de vieuitoarele vizibile. Existena microorganismelor ca ageni etiologici ai unor boli era ns bnuit nc din antichitate.

Hipocrat (460-370 .H.), ntemeietorul medicinei, considera doi factori responsabili de aceste boli: unul intrinsec, reprezentat de contribuia bolnavului, i altul extrinsec, constnd dintr-o alterare necunoscut a aerului, care devine nociv. Aceast prim ipotez asupra etiologiei bolilor infecioase a persistat mult vreme sub forma teoriei miasmelor (gr. miasma = emanaie putred, murdrie). Varon (100 .H.) considera c alterarea aerului (gr. malaria = aer ru) este determinat de animale foarte mici, invizibile, care ptrund n organism prin gur i prin nri. Fracastor (1488-1553) intuiete foarte corect una dintre caracteristicile eseniale ale bolilor produse de microorganisme i anume contagiozitatea lor. El arat c "infecia este Fig. 1 Hipocrat aceeai pentru cel care a primit-o i pentru cel care a dat-o" i c ea este produs de "particule mici i imperceptibile", care trec de la un organism bolnav la altul sntos ("De Contagione", 1546). Antony van Leeuwenhoek (1632-1723) reuete descoperirea microorganismelor, folosind ca microscop un sistem de lentile biconvexe de construcie proprie, cu o putere de mrire de 40-275x. El observ protozoare, alge, nematozi, levuri i bacterii, pe care le descrie i le deseneaz n lucrarea sa "Arcana naturae ope microscopiorum detecta" (Tainele naturii descoperite cu ajutorul microscoapelor, 1675). Fig. 2 Fracastoro Dei, descoperirile lui Leeuwenhoek au strnit admiraia i interesul oamenilor de tiin, studiul microorganismelor a rmas n continuare empiric, constituind doar o preocupare a amatorilor de curioziti ale naturii. n felul acesta se acumuleaz numai date disparate cu privire la forma, structura, mrimea i distribuia n natur a acestor microorganisme.

Fig. 3 Antony van Leeuwenhoek. (a) Microscop cu lentil (1), dispozitiv de fixare (2) i uruburi de reglaj (3, 4). (b) Tipuri morfologice de bacterii desenate de Leeuwenhoeck.

Karl Linnaeus, celebru botanist, n opera sa "Systema naturae" (1735) ncearc o sistematizare a vieuitoarelor cunoscute, reunind toate microorganismele ntr-un grup, denumit semnificativ "Chaos".

Fig. 4 Karl Linnaeus (1707 - 1778) i lucrarea "Systema naturae".

Terehovski, folosind pentru prima dat metode experimentale, public, n anul 1775, lucrarea "De Chao infusorii Linnaei", n care demonstreaz c fiinele foarte mici, observate n diferite infuzii bogate n substane organice, cresc, se divid i se mic datorit unor fore interne proprii, ajungnd la concluzia c aceste organisme sunt adevrate animale n miniatur. Louis Pasteur (1822-1895), savant francez, prin lucrrile sale stabilete principiile care stau i azi la baza acestei tiine.

Primele cercetri ale lui Pasteur au fost legate de fenomenul asimetriei moleculare. La acidul tartric racemic, compus inactiv pentru lumina polarizat, demonstreaz c este un amestec echimolecular de acid dextrogir i acid levogir, ale crui cristale sunt de forme asimetrice i enantiomorfe. De asemenea, a observat c, dac n amestecul racemic, inactiv din punct de vedere optic, se dezvolt un mucegai (Penicillium glaucum), soluia devine optic activ, deviind, de ast dat, spre stnga planul luminii polarizate. Mucegaiul degradeaz izomerul dextrogir, lsndu-l intact pe cel levogir, care, astfel, poate fi izolat n stare pur. Fig. 5 Louis Pasteur Aceast descoperire, pe lng faptul c furniza un procedeu simplu de separare a izomerilor optici, a demonstrat i intervenia unei caracteristici fizice, ca disimetria molecular n fenomenele chimice ale vieii, dar, mai ales a atras atenia lui Pasteur asupra unui fenomen spre care se va ndrepta n continuare curiozitatea sa de cercettor: microorganismele produc transformri ale substanelor organice printr-o activitate selectiv foarte specific. Cercetrile lui Pasteur asupra fermentaiei vinului i berii l-au condus la urmtoarele concluzii fundamentale: fermentaiile sunt procese biologice, determinate de aciunea unor microorganisme anaerobe, deci fermentaia este via fr aer; fiecare fermentaie este produs de un anumit tip de microorganism, care este specific, n sensul c determin o anumit transformare a mediului pe care crete; dezvoltarea unui microorganism strin n mediul unde acioneaz un microorganism cu aciune fermentativ specific deviaz cursul normal al fermentaiei n dauna calitii (prin apariia compuilor nedorii) i a randamentului ei n produs util, determinnd o aa-numit "boal" a fermentaiei;

microorganismele strine care produc bolile vinului i ale berii sunt consecina contaminrilor din aer, de pe vasele sau din ingredientele folosite n producie, iar multiplicarea lor poate fi prevenit prin nclzire, procedeu utilizat sub denumirea de pasteurizare. Pn la Pasteur, ideea participrii microorganismelor la determinarea unor boli era respins, ca nefiind probat pe cale experimental. Pasteur extinde noiunea de specificitate din domeniul fermentaiilor n acela al patologiei omului i animalelor, n sensul c orice boal infecioas este rezultatul activitii vitale a unui anumit microorganism specific, care se dezvolt ca parazit n organismul animal respectiv. Ulterior, cercetrile acestuia au demonstrat principiul vaccinrii i stabilirea bazelor tiinifice ale preparrii vaccinului, contribuind, n acelai timp, la descoperirea fenomenului de imunitate. Studiind boala "holera ginilor", Pasteur observ c agentul ei patogen i pierde complet, prin nvechirea culturii, capacitatea sa specific de a produce aceast boal, adic devine avirulent. Inoculat la psri sntoase, cultura avirulent le confer ns rezistena fa de holer, n sensul c ele nu se mai mbolnvesc nici dac sunt infectate cu o cultur proaspt, virulent, psrile "vaccinate" devenind "imune". Pe acelai principiu, Pasteur a mai preparat i utilizat cu succes vaccinul anticrbunos (1881), apoi vaccinul antirabic (1885). L. Pasteur rezolv i problema generaiei spontane (Fig. 5). Ignorarea unor principii eseniale care, mai trziu, au stat la baza microbiologiei experimentale, n ceea ce privete sterilizarea i asepsia, a fcut posibil concluzia fals c microorganismele pot lua natere prin organizarea spontan a substanelor organice din produsele supuse fermentaiei sau putrefaciei. Folosind baloane speciale cu "gt de lebd", Pasteur demonstreaz c un mediu de cultur sterilizat, n spe bulionul de carne, poate rmne steril timp ndelungat, dac se evit contaminarea sa cu germeni din aer. Dac prin nclinarea unui asemenea balon, mediul "spal" poriunile incurbate ale gtului rmas descoperit, poriunile n care s-au depus bacteriile din aer, bulionul se infecteaz. Faptul c n baloanele cu mediu steril, nchise ermetic, nu apar niciodat microorganisme, n timp ce acelai mediu se infecteaz, dac este lsat n contact cu aerul, dovedete c microorganismele nu iau natere spontan din materia organic inanimat, ci

numai se nmulesc n ea, pornind de la organisme similare, provenite din mediul nconjurtor.

Fig. 5 Experimentul lui Pasteur prin care combate teoria generaiei spontane. A: mediul nutritiv este introdus ntr-un balon; B. curbarea gtului balonului (gt de lebd"); C. sterilizarea mediului nutritiv; D. mediul nutritiv rmne steril fiind protejat de ptrunderea microorganismelor din atmosfer prin forma gtului.

L. Pasteur a adoptat pentru denumirea organismelor microscopice termenul de "microb" (trad. via scurt), creat de medicul francez Sedillot, iar noua tiin, care studiaz microbii, a rmas cu numele de microbiologie. Robert Koch (1843-1910) a adus n dezvoltarea microbiologiei ca tiin, contribuii de ordin tehnic i teoretic deosebit de valoroase, ntre care conceptul de "cultur pur", respectiv de organism cultivat ntrun mediu lipsit de alte organisme. Realizarea culturilor pure este facilitat prin introducerea n tehnica microbiologiei de ctre Koch, a mediilor de cultur solidificate (cu gelatin sau agar). Pe lng faptul c a descoperit mai multe specii de bacterii patogene, ntre care bacilul tuberculozei (Mycobacterium tuberculosis) i vibrionul holerei, Koch demonstreaz, fr echivoc, c bacteria carbonoas (Bacillus anthracis) este agentul patogen al Fig. 6 Robert Koch (1843-1910) bolii denumit antrax sau crbune,

pe care l cultiv "in vitro" n ser sanguin, studiind formarea de spori termorezisteni, alternana de sporulare i germinare, precum i faptul c infecia natural a animalelor provine din sol prin iarba contaminat. Pe baza acestor cercetri, R. Koch stabilete criteriile indispensabile pentru ca un microorganism izolat dintr-un organism afectat de o anumit boal s poat fi considerat n mod justificat ca agentul cauzal al bolii respective. Aceste criterii, cunoscute sub numele de postulatele lui Koch, sunt urmtoarele: microorganismul incriminat s poat fi pus ntotdeauna n eviden n toate cazurile bolii respective, iar distribuia lui s corespund leziunilor caracteristice bolii; s poat fi utilizat n cultur pur, pe medii artificiale; dup ce este cultivat "in vitro", mai multe generaii s reproduc boala i leziunile specifice la animalele sensibile, de la care s poat fi reizolat. Postulatele lui Koch au reprezentat i reprezint nc un principiu eficace de lucru, a crui respectare previne interpretrile eronate, n materie de diagnostic bacteriologic sau de identificare a unor ageni infecioi. Ilia Metchnikoff (1845-1916), biolog rus, studiind digestia intracelular la echinoderme, demonstreaz capacitatea anumitor celule de a capta i ngloba diferite particule cu care vin n contact i emite ipoteza c celulele cu funcii asemntoare, denumite de el "fagocite", ar putea exista i n organismul altor animale. Ulterior (1884), studiind infecia crustaceului Daphnia magna cu ciuperca Monospora (Metschnikowia) bicuspidata, observ c sporii aciculari ai levurii ptrund odat cu hrana n tubul digestiv al dafniei, de unde, strpungnd peretele acestuia, trec n cavitatea general, unde sunt atacai de celule mobile. Cnd infecia este Fig. 7 Ilia Metchnikoff moderat, amoebocitele nglobeaz i diger toi sporii ciupercii i, astfel, crustaceul supravieuiete. Cnd ns

infecia este masiv, sporii rmai nefagocitai germineaz i dau natere formei vegetative a ciupercii, care, prin multiplicare, invadeaz tot organismul dafniei, determinndu-i moartea. Metchnikoff extinde rezultatele acestor observaii la animalele superioare i la om, demonstrnd prezena i importana celulelor cu proprieti fagocitare n reaciile de aprare ale organismului fa de bacteriile patogene, stabilind, astfel, bazele imunitii celulare. Ivanovski (1864-1920) Dimitri demonstreaz c mozaicul tutunului este produs de un agent patogen invizibil la microscop, care traverseaz filtrele bacteriene i poate fi transmis de la o plant bolnav la una sntoas prin intermediul filtratului acelular al trituratului de frunze, cu leziuni. Martinus Beijerinck (1851-1931) confirm n 1898 filtrabilitatea agentului patogen i intuiete natura deosebit a agentului patogen, Fig. 8 Dimitri Ivanovski pe care l considera ca agent contagios viu (contagium vivum fluidum). Aceast intuiie a fcut din Beijerinck adevratul intemeietor al virologiei ca tiin. Frederick Twort (1877-1950) i Felix d'Herelle (1873-1949) descoper, n perioada 1915-1917, bacteriofagii (trad. mnctor de bacterii) i fenomenul bacteriofagic. Sergei Winogradsky (1856-1953), lucrnd la Institutul Pasteur din Paris, a descris procesul de asimilare la organismele chimiosintetizante i fenomenul de fixare a azotului atmosferic de ctre microorganisme. n acelai timp el a elaborat metode speciale pentru cercetarea activitii microorganismelor din sol, fiind considerat intemeietorul Fig. 9 Martinus Beijerinck Microbiologiei solului.

Alexander Fleming (1881-1955), observ n anul 1929 c unele culturi de Penicillium, elaboreaz o substan cu proprieti microbiene specifice penicilina. Acest prim antibiotic a fost mai trziu purificat de Florey i Chain (1940). Prin lucrrile sale, Fleming deschide era antibioticelor, de o importan excepional n medicin i biologie.

Fig. 10 Alexander Fleming

Stanley Prusiner (1942- ), neurolog i biochimist american, laureat al Premiului Nobel n 1997. A descoperit c encefalopatia spongiform la bovine i boala Creutzfeldt-Jakob la om sunt produse de particule infecioase de natur proteic, pe care le-a numit prioni.

Fig. 11 Stanley Prusiner

1.2. coala romneasc de Microbiologie Victor Babe (1854-1926), fondatorul colii romneti de microbiologie, a desfurat o prodigioas activitate de cercettor, studiind numeroase boli ale omului, printre care lepra, tuberculoza, holera, febra tifoid i, mai ales, turbarea. n colaborare cu Cornil, este autorul primei lucrri de sintez n bacteriologie i

Fig. 12 Victor Babe

anatomie patologic din lume, aprut n 1885: Bacteriile i rolul lor n etiologia, anatomia i histologia patologic a bolilor infecioase. A studiat, de asemenea, asociaiile microbiene, fiind primul cercettor care, dup Pasteur, i-a dat seama de importana terapeutic a antagonismului microbian. Ioan Cantacuzino (1863-1934) este creatorul Institutului de Microbiologie, care i poart numele, i al colii contemporane de microbiologie din ara noastr. Cele mai importante lucrri sunt referitoare la aparatele i funciile fagocitare n regnul animal i problema imunitii la nevertebrate. Cantacuzino a studiat, de asemenea, diferite boli ca holera, febra tifoid, scarlatina, tuberculoza, crend i organiznd condiiile produciei de seruri i vaccinuri Fig. 13 Ioan Cantacuzino n ara noastr. Constantin Ionescu-Mihieti (1883-1962) a adus contribuii tiinifice valoroase n domeniul virologiei, imunologiei i microbiologiei generale. Dumitru Combiescu (1887-1961) a desfurat o ampl activitate n domeniul rickettsiozelor i zoonozelor. Mihai Ciuc (1883-1969) este autorul unor lucrri deosebit de importante n domeniul bacteriofagilor, paludismului, salmonelozelor, difteriei. tefan Nicolau (1896-1967) este creatorul colii romneti de virologie i fondatorul institutului respectiv. A publicat numeroase lucrri originale n domeniul herpesului, turbrii, febrei aftoase, febrei galbene, hepatitelor virale. Traian Svulescu (1889-1963) este creatorul i ndrumtorul colii romneti de fitopatologie. Este autorul unor lucrri de sintez ca Monografia uredinalelor, Monografia ustilaginalelor i al unor lucrri originale n fitopatologie i n domeniul imunitii plantelor fa de bolile bacteriene.

7HVW GH DXWRHYDOXDUH

1. Virusurile sunt: a) organisme acelulare b) organisme procariote c) organisme eucariote 2. Genomul viral este format din: a) ADN i ARN b) ADN sau ARN c) ADN d) ARN 3. Ptrunderea (Infecia) virusului n celula bacterian are loc: a) prin fore proprii b) printr-un vector activ c) prin "nglobare", de ctre celul 4. Pentru sinteza capsidei virale se utilizeaz: a) proteine existente n citoplasm b) proteine sintetizate de ARN gazd c) proteine sintetizate de AN viral Rezultatele corecte: 1 - a; 2 - b; 3 - a; 4 - b

Capitolul 2 CARACTERELE GENERALE I POZIIA MICROORGANISMELOR N LUMEA VIE


Microorganismele, cu excepia celor cu structur acelular (virusurile), au ca unitate elementar de baz celula. Celula la microorganisme, asemntoare, n general, cu celula vegetal i animal, prezint unele particulariti n funcie de grupul de microorganisme considerat. Aceste particulariti structurale i funcionale au determinat mprirea microorganismelor n dou grupe (Chatton, 1932 i Stanier, 1970). ntre microorganismele procariote i eucariote exist diferene eseniale, structurale, funcionale i de compoziie. Diferenele dintre celula procariot i celula ecucariot
Caracterul Nucleul Dispunerea ADN Compoziia chimic a membranei citoplasmatice Sistemul respirator Aparatul fotosintetizant Ribozomii Curenii citoplasmatici Peretele celular Reticulul endoplasmatic Tipul de diviziune Procariote Bacterii Cyanobacterii Fr membran proprie O singur molecul de ADN dublu catenar, nelegat de histone Lipsit de steroli (cu excepia micoplasmelor) Face parte din membrana citoplasmatic sau mezozomi Absent sau asociat membranei citoplasmatice Tip 70 S Abseni Conine peptidoglicani (murein) Absent Direct (sciziparitatea) Eucariote Alge, Fungi, Protozoare, Plante, Animale Cu membran proprie Unul sau mai muli cromozomi. ADN dublu catenar, legat de histone Conine steroli

Mitocondrii Cloroplaste Tip 80 S Prezeni Cnd este prezent conine celuloz, chitin, silice Prezent Mitoz

Citoplasm

Material nuclear (ADN) Plasmid Ribozom Fimbrii

Flageli Incluziune Capsul Perete celular Membran citoplasmatic

Fig. 15 Structura celulei procariote

Vacuol

Reticul endoplasmatic neted Riboszomi (liberi)

Cloroplast Membran celular Perete celular Ribozomi (ataai) Membran nuclear

Nucleol Aparat Golgi Nucleu Mitocondrie Reticul endoplasmatic rugos

Fig. 16 Structura celulei eucariote

2.1. Poziia microorganismelor n lumea vie Dup acumularea a numeroase cunotine asupra microorganismelor a fost necesar introducerea acestora ntr-un grup taxonomic. Iniial microorganismele au fost incluse n regnul Plantae, iar ulterior au fost incluse n diferite sisteme de clasificare. A. Sistemul tradiional: 1. Regnul Plantae; 2. Regnul Animalia. B. Sistemul lui Hogg i Haeckel (1866): 1. Regnul Monera; 2. Regnul Plantae; 3. Regnul Animalia. C. Sistemul lui Copeland (1938): 1. Regnul Procaryotae (Monera); 2. Regnul Protista; 3. Regnul Plantae; 4. Regnul Animalia. D. Sistemul lui Whittaker (1969): 1. Regnul Procaryotae (Monera) (bacterii, cianobacterii = alge albastre-verzi); 2. Regnul Protista (protozoare, diatomee); 3. Regnul Fungi (ciuperci); 4. Regnul Plantae (alge verzi, brune, roii, brofite, traheofite); 5. Regnul Animalia (animale multicelulare). Astzi, majoritatea specialitilor din domeniul microbiologiei au acceptat sistemul de clasificare elaborat de Whittaeker (Fig. 17) n anul 1969, care corespunde necesitilor actuale.

Organisme eucariote

Organisme procariote

LUMEA VIE
Fig. 17 mprirea lumii vii n cinci regnuri (dup Whittaker, 1969)

Din punct de vedere taxonomic, subdiviziunile regnului sunt: ncrengtura, subncrengtura, clasa, ordinul, familia, genul, specia. Unitatea de lucru efectiv este specia, la care denumirea este n sistemul binominal, numele organismului fiind derivat din latin sau greac. n sistemele de clasificare prezentate anterior sunt cuprinse numai organismele care au ca unitate de baz, celula, eucariot sau procariot, nefiind introduse entitile infecioase, cum sunt virusurile sau prionii, i care au fost "alturate" acestor sisteme de clasificare.

2.2. Prionii Prionii sunt ageni infecioi neconvenionali de natur proteic, lipsii de orice tip de acid nucleic, care produc un grup de boli neurodegenerative, transmisibile la animale i om, numite boli prionice. Procesul care declaneaz boala este reprezentat de conversia unei proteine normale, sintetizat n mod natural n creierul tuturor mamiferelor (PrPc), ntr-una mutant, patogen (PrPSc). Prima semnalare a unei boli de natur prionic a fost fcut n Anglia, n anul 1732, la ovine. Astzi, sunt cunoscute ca boli certe, produse de prioni, urmtoarele: - la animale: 1. encefalopatia spongiform la ovine, denumit popular scrapie (engl.); tramblanta (fr.). n Romnia mai este utilizat, impropriu, termenul de "cpiala" oilor, dar aceasta este o boal bine cunoscut i este produs de un parazit animal. Medicii veterinari avizai folosesc termenul francez de tramblanta oilor. 2. encefalopatia spongiform bovin (BSE sau "boala vacii nebune"); 3. encefalopatia spongiform la feline; 4. encefalopatia spongiform la nurci; 5. encefalopatia spongiform la hamsteri. - la om: 1. Boala "Kuru". Aceasta este prima semnalat i cel mai bine studiat. A fost depistat la un trib local n Papua - Noua Guinee. Dup interzicerea consumului de carne n stare proaspt, aceast boal a fost eradicat. 2. Boala Creutzfeldt-Jacob (CJD); 3. Sindromul Alpers (la copii); 4. Sindromul Gerstmann-Straussler-Scheinker (GSS); 5. Insomnia fatal familial (FFI). Agentul infecios n prezent, se consider c agentul infecios este o molecul proteic, cu greutatea molecular de 28 kilodaltoni, alctuit dintr-un lan de 208-220

de aminoacizi, n funcie de specie, i care prezint o configuraie spaial, asemntoare unui metru de tmplrie, parial destins. Prezint un capt NH2-terminal, o regiune central i un capt COOH-terminal. Aceast protein a fost izolat din creierul tuturor cazurilor bolnave studiate. Surpriza a sosit n momentul studierii n paralel (la oi) a creierului la animale sntoase i care prezint o protein celular similar. Lanul de aminoacizi este identic cu excepia unui singur aminoacid (schimbat). Proteina celular normal (PrPc) prezint o configuraie spaial asemntoare unui resort. Specialitii din biochimie consider c, prin schimbarea unui singur aminoacid din lan, nu se poate modifica configuraia spaial. Fig. 18 Proteina prionic (huPrP) n acelai timp, proteina responsabil pentru o serie de boli prionice la infecioas (PrPSc) rezist la om (www.itqb.unl.pt). atacul proteazelor celulare. Se consider c procesul infecios se desfoar astfel: celula prepar proteina celular normal care se acumuleaz n lizozomi, acetia o transport la exteriorul celulei i n momentul n care aceast protein ptrunde din nou n celul este degradat de proteaze. n cazul proteinei infecioase, aceasta se acumuleaz n lizozomi n mod continuu, pn cnd acetia "crap". Enzimele din interiorul lor degradeaz componentele celulare i, n final, ntreaga celul nervoas. n locul acesteia rmne un orificiu. Din acest motiv, dup un timp, creierul atacat arat ca un burete (cu numeroase orificii). n stadiul final al bolii, creierul degenereaz complet, avnd dimensiunea unei nuci. Studiile cele mai ample sunt efectuate la animale, la om ele fiind extrem de puine, deoarece boala poate fi studiat numai dup moartea individului. Prionii pot rezista la aciunea multor factori fizico-chimici, dintre care amintim: formol 10% (timp de 28 de luni), caldur (rezist la fierbere timp

de 3 ore), factori inhibitori ai acizilor radiaiilor UV. 2.3. Virusurile

nucleici, precum i la aciunea

Virusurile (lat. virus otrav, infecie, lichid otrvitor) reprezint o categorie specific de ageni infecioi, structural i fiziologic fundamental diferii de oricare dintre microorganismele cunoscute (Zarnea, 1983). 2.3.1. Morfologia virusurilor Din punct de vedere morfologic (Fig. 19), virusurile pot aparine urmtoarelor tipuri principale: form cilindric-alungit sau de bastona (virusul mozaicului tutunului - Tobamovirus); form sferic (izometric), sferoidal (virusul gripal - Myxovirus), form paralelipipedic (virusul variolei - Parapoxvirus), form de cartu sau obuz (virusul piticirii galbene la cartof - Nucleorhabdovirus), form de mormoloc, spermatozoid sau cirea cu coad (unii bacteriofagi). Dimensiunile virusurilor: 17 - 2500 nanometri (1 nm = 10-9 m).

Fig. 19 Tipuri morfologice de virusuri: (a) form cilindric (Tobamovirus); (b) form izometric (Myxovirus); (c) form paralelipipedic (Parapoxvirus); (d) form de cartu (Nucleorhabdovirus); (e) form de cirea cu coad (bacteriofagul T4).

2.3.2. Structura virusurilor Dei diferitele virusuri se deosebesc mult ca form i dimensiuni, ele sunt constituite dup principii comune. Particula viral matur (virionul) este alctuit din dou componente eseniale (Fig. 20): genomul viral i capsida, precum i un constituent accesoriu, nveliul extern (peplos).

Genomul viral este reprezentat, n mod obinuit, printr-o molecul de acid nucleic (ADN sau ARN, niciodat ambele). Virusurile cu genom ADN sunt numite dezoxiribovirusuri, iar cele cu genom ARN ribovirusuri. Genomul viral poart informaia genetic necesar replicrii n sensul sintezei constituenilor virali i a precursorilor acestora. Capsida viral (gr. kapsa cutie) acoper genomul, fiind alctuit din subuniti proteice, denumite capsomere. Capsomerele sunt constituite din molecule proteice, aezate n mod regulat, formnd, n ansamblu, structura specific a virusului. Capsida protejeaz materialul genetic. Capsida i genomul viral formeaz nucleocapsida. La unele virusuri, nucleocapsida este acoperit de o structur trilamelar, numit nveli extern sau peplos (gr. peplos manta), ce poate prezenta la exterior nite proeminene de suprafa, denumite spicule.

Capsid Acid nucleic (ADN sau ARN) nveli extern (peplos) Spicule

Fig. 20 Structura unor virusuri i denumirea constituenilor virali

2.3.3. Virusurile plantelor Virusurile plantelor au o mare importan ca ageni patogeni, datorit marii lor rspndiri i faptului c acelai virus poate infecta plante, care aparin de diferite familii botanice. Bolile produse de virusuri la plante sunt denumite viroze. Pn n prezent sunt cunoscute cteva sute de boli virale, produse de virusuri, care aparin la 25 genuri distincte. Majoritatea virusurilor plantelor au genom ARN monocatenar.

Din punct de vedere morfologic, virusurile plantelor aparin la dou grupuri: grupul virusurilor izometrice (izodiametrice) sau sferice i grupul virusurilor alungite. n general, virusurile plantelor au o structur chimic mai simpl dect virusurile animale i bacteriofagii. Mecanismul de transmitere Virusurile se pot transmite de la planta bolnav la planta sntoas pe mai multe ci: A - transmitere mecanic: prin contact ntre frunze; anastomoze radiculare; unelte de lucru; altoire. B - transmiterea prin vectori se realizeaz prin intermediul insectelor (cca..400 specii): afide i cicade. Relaia dintre virus - insect vectoare este variabil i corespunde urmtoarelor trei situaii: Virusuri nepersistente pot fi transmise pn la circa 4 ore de la achiziie. Virusuri semipersistente au capacitatea de infectare variabil de la 10-100 ore de la achiziie. Virusuri persistente cu o capacitate de infectare de peste 100 ore (uneori chiar toat durata de via a vectorului). n funcie de rspndirea i comportarea virusurilor n corpul vectorului, acestea se mpart n trei categorii: Virusuri localizate pe stilet (virusuri nepersistente). Virusuri circulante (virusuri persistente) pot fi transmise timp ndelungat ajungnd n hemolimfa insectei. Virusuri propagative (virusuri persistente) se multiplic n corpul vectorului fiind transmise toat viaa insectei. C - transmiterea prin intermediul ciupercilor fitopatogene din sol, (ex. Polymyxa betae transmite virusul rizomaniei la sfecla pentru zahr). D - transmiterea prin intermediul nematozilor. E - transmiterea prin semine (cca.. 1/3 din virusuri). Circulaia virusurilor n interiorul plantelor se realizeaz prin parenchim (plasmodesme), prin floem i prin xilem.

2.3.4. Bacteriofagii Bacteriofagii (gr. bakterion bastona; gr. phago ein a mnca) sunt virusuri adaptate la viaa parazitar n celulele bacteriene i, care, prin multiplicare, produc liza acestora. n anul 1915, Twort descoper fenomenul de liz transmisibil, dar nu poate explica cu exactitate cauza acesteia. D'Herelle (1917) demonstreaz natura particular a fagului i l consider ca virus, determinndu-l bacteriofag (mnctor de bacterii). n anul 1940, ia fiin un grup de cercettori, denumit "grupul fag", condus de Delbrck, sistemul bacteriebacteriofag fiind folosit ca model experimental pentru cele mai importante studii de genetic molecular. Structura fagilor difer de la un grup la altul, n majoritate acetia ncadrndu-se n dou tipuri de baz i anume: tipul icosaedric (poliedric); tipul filamentos. Datele cele mai numeroase, cunoscute n prezent, sunt cele referitoare la fagii din seria T, ndeosebi la fagi T-par (T2, T4, T6). Anatomia fagilor T-par Particula viral matur a fagilor T-par cu g.m. 2,2x1010 este alctuit din ADN i protein i, din punct de vedere anatomic, prezint urmtoarele componente: cap, guler, coad, plac bazal i fibrele cozii (Fig. 21). Capul fagului, la microscop, prezint o form poliedric, iar n seciune are o form hexagonal, cu o lungime de 100 nm i o lime de 65 nm. Acesta este constituit din capsomere cu diametrul de 4 nm, dar nu este cunoscut, nc, numrul i modul de aezare al acestora. n interiorul capului, se gsete genomul, alctuit dintr-o molecul de ADN d.c., liniar, cu lungimea de 50 m, ce cuprinde 200 gene, fiind mpachetat foarte strns. n partea bazal a capului, la locul de prindere al cozii, se afl un dop proteic, cu rol de articulare mecanic. ntre acest dop i placa bazal se gsete un tub lung de 120 nm, reprezentat de cilindrul axial al cozii. El are un diametru de 7,5 nm i un

canal central cu diametrul de 2 nm, prin care trece ADN-ul n momentul introducerii n celula bacterian. La exteriorul cilindrului axial se gsete teaca contractil a cozii, care n stare extins are o lungime de 80 nm, iar cnd se contract, teaca se scurteaz la , respectiv 35 nm. Teaca este constituit din 24 de inele suprapuse i, datorit aranjamentului capsomerelor, formeaz o helice.
Capsida CAPUL FAGULUI Acid nucleic (ADN) GULER Cilindrul axial al cozii Teaca contractil

FIBRELE COZII COADA FAGULUI

PLACA BAZAL

Croetele cozii

Fig. 21 Structura bacteriofagilor T4

Gulerul fagului este situat ntre dopul proteic i coada fagului i are forma unui disc hexagonal de 1,5 nm grosime cu de 3,6 nm. Placa bazal este un disc hexagonal cu de 40 nm i este prevzut la partea inferioar cu ase crlige (croetele cozii sau spicule), care sunt uniti integrale de fixare a fagului pe bacterie. n momentul contraciei, placa bazal ia forma de stea cu diametrul mrit la 60 nm i este lipsit de dopul central. Fibrele cozii sunt structuri filamentoase, proteice, de 130 nm lungime, fixate cu unul dintre capete pe placa bazal, iar cu cellalt capt pe gulerul fagului, cea de-a doua legtur fiind mai slab. Aceste fibrile formeaz o reea, care mbrac teaca contractil a cozii i, care, n perioada premergtoare fixrii fagului, se desprind de pe guler i

rmn legate numai pe placa bazal, notnd libere n mediu, avnd aspectul unor picioare de pianjen. Structura genomului Bacteriofagii prezint, n majoritate, un genom format dintr-o singur molecul de acid nucleic (ADN m.c., ADN d.c. , ARN m.c.), cu o singur excepie, fagul 6 de la Pseudomonas phaseolicola, care are un genom ARN segmentat, format din trei segmente. Genomul bacteriofagilor se deosebete de genomul virusurilor animale i vegetale prin prezena unor baze nucleice neobinuite, cum ar fi la bacteriofagii T-par, n loc de citozin prezint 5-hidroximetilcitozin, iar la fagii de la Bacillus subtilis, 5-hidroximetilluracil i 5-4,5 hidroximetiluracil. Legat de acest aspect s-a emis ipoteza c aceste baze nucleice ar avea rol de protecie a acidului nucleic fagic mpotriva aciunii unor enzime virale (nucleaze) care atac numai acidul nucleic strin i, n felul acesta, poate degrada selectiv cromozomul bacterian n cursul sintezei de virus. Infecia celulei bacteriene. Replicarea ntre fagi i bacteriile infectate se pot stabili dou tipuri de relaii, funcie de ciclul de via al bacteriofagilor. Dac bacteriofagii sunt viruleni, infectarea bacteriei duce la formarea de noi virioni, care, n urma fenomenului de liz bacterian, sunt eliberai n mediu. Acest tip de relaie poart numele de ciclu litic i faciliteaz formarea i eliberarea a 100-200 de virioni, n aproximativ 20 de minute. n cazul n care bacteriofagii sunt temperai, genomul acestora se integreaz n cromozomul bacterian, se replic concomitent cu acesta i se distribuie la celulele fiice, fr a-i manifesta funciile virale. Aceast manifestare poart numele de ciclu lizogenic, iar genomul fagic integrat n genomul celulei bacteriene a fost numit profag (provirus). Dup mai multe generaii, profagul se desprinde de cromozomul bacterian i devine fag litic care lizeaz celula bacterian i elibereaz n mediul nconjurtor virioni lizogeni. Ciclul de replicare vegetativ (ciclul litic) a fagului are urmtoarele etape:

I. Adsorbia reprezint procesul de fixare a particulelor virale pe suprafaa bacteriilor. Dup o serie de ciocniri ntmpltoare, fagul se fixeaz pe peretele celular prin intermediul fibrelor cozii, realiznd faza de fixare iniial, care poate fi reversibil. Urmeaz faza de fixare ireversibil, realizat prin intermediul croetelor, care este condiionat de prezena receptorilor de fag (Fig. 22). Acetia sunt reprezentai de orice structur existent la suprafaa celulei bacteriene sau pe pilii i flagelii acesteia, iar sinteza lor este controlat de gene bacteriene.

Material nuclear bacterian

Fig. 22 Adsorbia particulelor virale pe suprafaa bacteriilor

II. Injectarea genomului viral n celula bacterian. Dup fixarea ireversibil pe peretele celular are loc o contracie a cozii fagului, axul central al acesteia ptrunznd n adncimea peretelui celular 12 nm, iar genomul este injectat prin intermediul cilindrului axial tubular (Fig. 23). Nu se cunosc nc forele care proiecteaz genomul viral n interiorul celulei, injectarea fcndu-se rapid (15 secunde la T4).

Fig. 23 Injectarea genomului viral n celula bacterian

III. Replicarea bacteriofagilor. Dup ptrunderea genomului fagic n interiorul celulei bacteriene au loc procese coordonate de cele 200 de gene, care i ncep activitatea ealonat n mai multe faze (Fig. 23-25): 1 - formarea proteinelor timpurii cu rol n: a - "astuparea" gurilor produse la intrare n peretele celular; b - blocheaz transcrierea informaiei de ctre ARNm al celulei gazd, rolul fiind preluat de ARNm viral;

Proteine virale

Fig. 23 Sinteza proteinelor virale

c - degradarea ADN gazd, de ctre unele proteine , fiind frmiat pn la nucleotide n segmente de ADN d.h. mici de 1/100 din cromozomul originar, care sunt degradate n continuare la nucleotide, formndu-se un stoc, din care cel puin 1/3 sunt utilizate la formarea fagilor progeni. 2. replicarea genomului viral, care este semiconservativ, i nu prin efectuarea de copii identice, repetate ale genomului originar;

Fig. 24 Replicarea genomului viral

3. formarea proteinelor tardive. Sinteza acestora devine predominant cnd ADN viral a ajuns la rata maxim de replicare. Proteinele tardive sunt grupate n trei categorii: a - proteine structurale ale virusului; b - proteine active n procesul de morfogenez; c - enzime necesare lizei celulei bacteriene.

4. asamblarea i morfogeneza virusului este dirijat de 50 de gene din cele 200. Fagul este constituit din trei poriuni distincte, care se formeaz separat pe trei linii principale, care duc independent la formarea capului, a cozii i a fibrelor cozii. n treptele urmtoare, compuii finii se combin pentru a forma particula viral. ncorporarea genomului are loc naintea unirii celor trei componente., ncorporarea este activat de unele proteine care asigur "aspirarea" ADN n precap, formarea capului fagic nefiind definitiv. ADN se ruleaz ca o bobin, al crui ax este perpendicular fa de cel al cozii. Bobinarea are loc de la exterior la interior, ultima spir fiind prima care iese n momentul infeciei virale. Concomitent cu mpachetarea ADN, capul fagului crete n volum i devine matur. Urmeaz unirea celor trei componente, cap, coad, fibrele cozii, desvrindu-se fagul matur.

Fig. 25 Asamblarea i morfogeneza virusului (dup Tortora i colab., 1992)

IV. Liza bacterian i eliberarea fagului. Liza bacterian se datoreazaciunii unei enzime (endolizina), a crei sintez este indus de prezena fagului n celula bacterian. La un moment dat, cnd coninutul n endolizin este maxim, metabolismul celular nceteaz brusc i are loc o

distrugere masiv a peretelui celular, cu un caracter exploziv, fagii fiind expulzai n exterior (Fig. 26).

Fig. 26 Liza bacterian

2.3.5. Fagii filamentoi Fagii filamentoi (Fig. 27), care infecteaz E. coli, au forma unor bastonae flexibile cu diametrul de 6 nm i o lungime de 1000-2000 nm. Structura este aceea a unui cilindru proteic gol, deschis la capete (capsid), n interior aflndu-se genomul fagic, format din ADN m.c., o molecul circular. Fagii filamentoi infecteaz numai bacteriile cu caracter mascul, ca i fagii cu ARN, adsorbia fcndu-se pe receptori Fig. 27 Structura bacteriofagului M13 speciali situai la extremitatea liber a pililor de sex. Fagii maturi sunt eliminai, fr ca bacteria s fie lizat, prin intermediul unor pori, care se formeaz n membrana citoplasmatic. Bacteria continu s se divid pentru o perioad de timp, iar ulterior coninutul celular al acesteia trece la exterior prin porii deschii de virioni.

2.3.6. Cianofagii Cianofagii (sin. ficovirusuri, algofagi) sunt ageni virali, capabili s produc infecii la numeroase specii de cianobacterii (alge albastre-verzi), influennd, astfel, dinamica acestor populaii, n sensul meninerii unui echilibru n bazinele acvatice naturale. Sunt similari ca structur i evoluie cu bacteriofagii T-impar, genomul fiind reprezentat de ADN dublu catenar de 13,2 m. 2.3.7. Micovirusurile Sunt virusuri care atac fungii, fiind cunoscute i sub denumirea de micofagi. Din cele peste 50 de genuri atacate menionm: Penicillium, Aspergillus, Mucor, Fusarium, Saccharomyces, Candida etc. Structura micovirusurilor. Cel mai bine studiat este virusul care infecteaz specia Penicillium chrysogenum, care se prezint sub forma unor mici particule poliedrice, cu de 33-41 nm. Genomul este reprezentat de o molecul de ARN d.c. La fungi, virusurile sunt, n general, latente, celulele se dezvolt mai lent, dar nu lizeaz constant. Micovirusurile au fost evideniate i n sporii fungilor. Transmiterea micovirusurilor, n general, se face n urma plasmogamiei (heterocarioza). 2.3.8. Sistematica, nomenclatura i identificarea virusurilor Prima clasificare a virusurilor poart numele de sistemul LHT i a fost realizat n anul 1962 de ctre cercettorii Lowoff, Horn i Tournier. Sistemul ofer o prim clasificare tiinific a virusurilor, bazat pe urmtoarele criterii: 1) natura materialului genetic; 2) tipul de simetrie a capsidei; 3) prezena sau absena nveliului extern; 4) dimensiunea virionului i a capsidei.

n prezent, exist dou sisteme principale utilizate pentru clasificarea virusurilor: 1. Sistemul de clasificare ICTV . Centrul Internaional de Taxonomie a Virusurilor (ICTV = International Comitee on Taxonomy of Viruses) a elaborat, la nceputul anilor 1990, un sistem de clasificare i nomenclatur a virusurilor. ICTV are sarcina de a actualiza i de a menine un sistem taxonomic universal. Conform acestui sistem, la clasificarea virusurilor se ine cont de urmtoarele aspecte : proprieti morfologice (mrimea i forma virionului, structura i simetria capsidei, etc.); proprieti fizico-chimice i fizice (greutatea molecular, coeficientul de sedimentare); genomul (tipul acidului nucleic, monocatenar sau bicatenar); organizarea i replicarea genomului; proprietile antigenice; proprieti biologice (spectrul de gazde, modul de transmitere n natur, relaiile cu vectorii). Unitile taxonomice pentru virusuri ncep la nivel de ordin i fiecare taxon prezint sufixul, scris cursiv ntre paranteze. Ordin (-virales) Familie (-viridae) Subfamilie (-virinae) Gen (-virus) Specie Conform datelor publicate n 2010 de Centrul Internaional de Taxonomie a Virusurilor, n schema taxonomic sunt cuprinse: Sase ordine, 87 familii, 19 subfamilii, 348 genuri i 2285 specii de virusuri. Cele ase ordine stabilite de ICTV sunt: Caudovirales, Herpesvirales, Mononegavirales, Nidovirales, Picornavirales i Tymovirales. 2. Sistemul de clasificare Baltimore. Clasificarea Baltimore, iniiat de biologul american David Baltimore (1971), separ virusurile n apte grupe. Are la baz mprirea n funcie de tipul genomului viral, sens, precum i

metoda de replicare. Aceasta clasificare este deseori preferat datorit uurinei de identificare a diferitelor familii de virusuri: Tipul I: Virusuri cu genom ADN, dublucatenar: Fam. Herpesviridae, Fam. Poxviridae, Fam. Adenoviridae i Fam. Papovaviridae Tipul II: Virusuri cu genom ADN monocatenar. Familiile: Circoviridae i Parvoviridae Tipul III: Virusuri cu genom ARN dublucatenar. Familiile: Reoviridae i Birnaviridae Tipul IV: Virusuri cu genom ARN(+), monocatenar. Familiile: Astroviridae, Caliciiridae, Coronaviridae, Flaviviridae, Picornaviridae, Arteriviridae i Togaviridae Tipul V: Virusuri cu genom ARN monocatenar (-). Familiile: Orthomyxoviridae, Arenaviridae, Paramyxoviridae, Bunyaviridae i Rhabdoviridae. Tipul VI: Virusuri diploide cu genom ARN monocatenar: Fam. Retroviridae. Tipul VII: Virusuri cu genom ADN dublucatenar cu molecula de ARN monocatenar ca intermediar: Fam. Hepadnaviridae. Pentru identificarea virusurilor se utilizeaz metode moderne, bazate pe studiul componentelor genomului viral, pe clonri i hibridri nucleare i enzimatice de tip ELISA sau PCR.

2.4. Bacteriile Sunt organisme unicelulare, cu o structur complex, care au un metobolism propriu, datorit unui aparat enzimatic complex, ce le asigur desfurarea proceselor vitale. n linii generale, bacteriile au o serie de caractere generale, ce pot fi sistematizate astfel: Nucleul celulei bacteriene este de tip procariot, adic lipsit de membran, iar afinitile tinctoriale nu sunt deosebite fa de citoplasm. Bacteriile au un polimorfism accentuat, putnd mbrca mai multe aspecte morfologice, ca forme sferice, cilindrice, spiralate sau helicoidale, filamentoase i ptrate.

Micarea la speciile mobile este asigurat de organite speciale, numite cili sau flageli. Bacteriile sunt lipsite de clorofil, dar unele grupe au pigmeni sintetizani i, ca atare, pot folosi energia luminoas. Altele i procur energia necesar sintezelor celulare i altor manifestri vitale dezintegrnd diverse substane chimice prin intermediul proceselor fermentative, fiind, din acest punct de vedere, organisme chimiosintetizante (Chemotrofe). Se nmulesc prin sciziparitate, dar se cunosc la unele grupe i forme de conjugare de tip parasexuat, cu formare de celule sexuate de sens diferit; forma de sciziparitate rmne ns forma esenial de reproducere. Bacteriile pot forma spori, ce constituie un mijloc de conservare a speciei, la unele grupe. 2.4.1. Morfologia bacteriilor Forma exterioar a bacteriilor (Fig. 28) este un caracter controlat genetic, iar din acest punct de vedere se disting cinci tipuri de baz, dup cum urmeaz: bacterii sferice, denumite coci, cu genul principal Coccus; bacterii cilindrice, denumite bacili, sub form de bastona drept sau uor curbat, din care face parte genul Bacillus; bacterii spiralate sau elicoidale, n care se cuprind trei categorii de germeni i anume: vibrion, spiril i spirocheta; bacterii filamentoase, cu celule alungite, reprezentate de actinomicete; bacterii ptrate, ntlnite n apele hipersaline.

Fig. 28 Tipuri morfologice de bacterii: (a) sferice (coci); (b) cilindrice (bacili); (c) spiralate (elicoidale); (d) filamentoase; (e) ptrate.

Dup forma celulelor i modul de grupare n urma procesului de diviziune, bacteriile se mpart n urmtoarele tipuri i subtipuri morfologice: 1. Bacteriile sferice sau cocii (gr. kokkos - bob) au form sferic, ovoidal, elipsoidal sau reniform, cu cele dou diametre aproximativ egale. n funcie de poziia celulelor fiice dup diviziune, cocii prezint urmtoarele moduri de grupare (Fig. 29-34): Cocul simplu, izolat, la care celulele rmn independente dup diviziune (ex. Micrococcus ureae).

Fig. 29 Cocul simplu (Micrococcus ureae)

Diplococul, la care diviziunea se face dup planuri succesive paralele, celulele rezultate rmnnd grupate cte dou (ex. Diplococcus pneumoniae).

Fig. 30 Diplococul (Diplococcus pneumoniae)

Streptococul, la care diviziunea se face dup planuri succesive paralele, iar celulele rezultate formeaz lanuri de lungimi variabile (ex. Streptococcus lactis).

Fig. 31 Streptococul (Streptococcus lactis)

Tetracocul sau tetrada, la care planurile de diviziune sunt perpendiculare unele fa de altele, iar celulele rezultate sunt dispuse cte patru la un loc (ex. genul Gafkia).

Fig. 32 Tetracocul (Gafkia tetragena)

Sarcina, la care planurile de diviziune sunt orientate dup cele trei direcii ale spaiului i reciproc perpendiculare unul pe altul, rezultnd o grupare de celule sub form de cub (ex. Sporosarcina ureae).

Fig. 33 Sarcina (Sarcina lutea)

Stafilococul, la care planurile succesive de diviziune sunt dispuse n mai multe direcii, iar celulele rezultate se grupeaz ca un ciorchine (ex. Staphyllococcus aureus).

Fig. 34 Stafilococul (Staphyllococcus aureus)

2. Bacteriile cilindrice, cunoscute sub denumirea de bacili (lat. bacillus - bastona), au form de bastonae, cu raportul ntre cele dou axe foarte diferit, de la forme cu aspect filamentos, pn la unele cu aspect aproape sferic (cocobacili, ex. Pasturella pestis). Bacilii sunt drepi sau uor curbai la mijloc sau la una din extremiti, iar capetele lor pot fi tiate drept (Bacillus anthracis) sau rotunjite (Escherichia coli). Marginile laterale ale celulei sunt, de obicei, paralele, dar pot fi i apropiate la extremiti, n form de suveic (Fusiformis fusiformis), sau ndeprtate i rotunjite la una sau ambele extremiti, n form de mciuc sau de picot (Corynebacterium sp.). Unele dintre bacteriile cilindrice au proprietatea de a forma spori. Bacilii pot fi (Fig. 35): izolai grupai cte doi (diplobacili), n form de V, X, Y (Mycobacterium sp.); n lanuri, cu lungimi variate (streptobacili);

n palisd, ca scndurile unui gard, celulele ramnnd apropiate i paralele n sensul axului lung, aezarea fiind rezultatul unei micri de basculare a celulei-fiice, avnd ca punct de sprijin peretele transvers recent separat; grupai n form de rozet sau de stea (Agrobacterium stellulatum, Ag. radiobacter, Phyllobacterium stappi).

Fig. 35 Bacterii cilindrice: (a) cocobacil; (b) bacil izolat; (c) diplobacil; (d) streptobacil; (e) bacili grupai n palisad.

3. Bacteriile spiralate (elicoidale) cuprind trei subtipuri morfologice (Fig. 36): Vibrionul, n form de virgul, cu un singur tur de spir (ex. Vibrio cholerae); Spirilul, n form de spiral cu mai multe ture de spir, rigide ca un baston (ex. Spirillum voluntas); Spirocheta, n form de spiral cu mai multe ture flexibile, care se poate strnge i relaxa ( ex. Borrelia sp., Treponema sp. i Leptospira sp.).

Fig. 36 Bacterii spiralate: (a) vibrion; (b) spiril; (c) spirochet.

4. Bacteriile filamentoase pot fi neramificate (Ord. Caryophanales), cu ramificaii false (Ord. Chlamydobacteriales) sau cu ramificaii adevrate (Ord. Actinomycetales). Sunt microorganisme cu asemnri morfologice cu fungii, ce au particularitatea de a forma hife, cu tendin de ramificare, de unde i aspectul lor de miceliu. n unele cazuri, spre exemplu la Sphaerotilus nutans (Fig. 37), aspectul filamentos este determinat de aezarea celulelor individuale n lanuri de celule, reunite printr-o teac delicat cu perete Fig. 37 Sphaerotilus nutans neted. 5. Bacteriile ptrate, evideniate n apele hipersaline din peninsula Sinai, au forma unor ptrate cu latura de 1,5-11 m i o grosime inegal (0,1 m sau chiar mai mic n regiunea central i 0,2-0,5 m la periferie). Multiplicarea se face prin diviziune direct (ex. Quadra sp.). n unele cazuri, fiecare bacterie ptrat crete pn ia form unui dreptunghi, care se divide n dou ptrate egale. Alteori, diviziunea se face n dou planuri, ce alternez n unghi drept, iar celulele rezultate din diviziune formeaz placarde de 8-16 celule (Fig. 38). Fig. 38 Bacterii ptrate

n afara acestor cinci tipuri morfologice de baz exist bacterii cu forme particulare: Bacterii stelate - bacterii sub form de stea; se nmulesc prin sciziparitate (Stella sp.); Bacterii care formeaz trichoame - grupare de celule care n urma diviziunii se prezint sub forma unui filament multicelular, n care celulele adiacente au o suprafa relativ mare de contact i sunt meninute ntr-un nveli parietal comun (Beggiatoa sp., Caryophanon sp., Sphaerotilus sp.); Bacteriile prostecate (gr. prosteka adaos) prezint o complicaie morfologic sub forma unui apendice semirigid, situat n continuarea celulei procariote (Caulobacter sp). Diametrul acestui apendice este mai mic dect al celulei bacteriene mature; Bacteriile cu apendice acelulare prezint un aspect filamentos, datorit apendicelor acelulare (substane secretate sau excretate), nedelimitate de peretele celular (Gallionella sp.). Dimensiunile bacteriilor se exprim n micrometri (1 m = 10-6 m) i, n medie, au 0,5-1 x 3-6 m. Cele mai mici bacterii aparin genului Mycoplasma (diametrul = 125-250 nm), iar cele mai mari pot ajunge la 10-150 m lungime (Beggiatoa sp.). n cazul formelor filamentoase, dimensiunile bacteriilor ajung n mod excepional la 500 m lungime (Saprospira grandis). Sub raportul dimensiunilor, cele mai mici bacterii se suprapun virusurilor mari (Poxvirus), vizibile la microscopul fotonic, iar cele mai mari depesc mrimea celor mai mici protiste eucariote. 2.4.2. Structura celulei bacteriene Celula bacterian este o entitate morfologic i funcional echivalent cu celulele organismelor superioare, cu o structur complex, format din urmtoarele componente, de la exterior ctre interior, lund ca reper peretele celular: Structura extraparietal, format din: capsul; cilii sau flagelii; aparatul fimbrial i pilii de sex; Peretele celular;

Structura intraparietal, compus din: membrana citoplasmatic, mezozomii, citoplasm, aparatul nuclear, incluziunile, ribozomii, vacuolele, sporul bacterian. I. Structura extraparietal: 1. Capsula (Fig. 39) este o secreie, care apare la exteriorul unor celule bacteriene, i constituie un nveli n jurul acestora. n funcie de raportul fa de celula bacterian, capsula este de mai multe feluri: microcapsula este un strat mucoid foarte fin, cu grosimea de pn la 0,2 m i care poate fi pus n eviden prin metode imunologice; capsula propriu-zis are grosimea cuprins ntre 0,2-2 m; stratul mucos este caracterizat prin prezena unei mase amorfe, neorganizate n jurul celulei; zooglea se prezint ca un strat mucos, neorganizat, care nglobeaz Fig. 39 Capsula bacterian mai multe celule microbiene. Compoziia chimic a capsulei difer n funcie de specia bacterian la care apare i de condiiile de mediu, fiind format din 98 % ap i ali constitueni ca polizaharidele i polipeptide. Funciile biologice ale capsulei sunt urmtoarele: - funcia de protecie mpotriva fagocitelor la bacteriile patogene; - funcia de virulen; - funcia de protecie mpotriva desicaiei. 2. Cilii sau flagelii sunt formaiuni filamentoase, cilindrice, lungi, subiri, situate la suprafaa celulei bacteriene i reprezint organite de micare ale acesteia. Prezena cililor este caracteristic numai speciilor de bacterii mobile, iar numrul acestora este variabil funcie de specie, de la unu pn la o sut. Dup modalitatea de inserie pe corpul bacteriei, cilii pot avea urmtoarele poziii (Fig. 40): monotrih, un cil la un singur pol (ex. Pseudomonas aeruginosa);

amfitrich, cu cte un cil la ambii poli ai celulei (ex. Spirillum volutans); lofotrich, cu cili dispui la un pol sub form de mnunchi (ex. Escherichia coli); peritrich, cu cili dispui n jurul bacteriei (ex. Proteus vulgaris).

Fig. 40 Tipuri de ciliaie bacterian: (a) monotrich (Pseudomonas aeruginosa); (b) amfitrich (Spirillum volutans); (c) lofotrich (E. coli); (d) peritrich (Proteus vulgaris).

Cilii sunt organite lungi de 16-18 m, cu diametrul de 0,01-0,02 m pe toat lungimea, de obicei ondulai. Implantarea lor se face n citoplasm printr-un corp bazal, situat ntre peretele celular i membrana citoplasmatic. La bacteriile Gram pozitive, corpusculul bazal este format din dou discuri (inele), angrenate mpreun sub forma butonilor de manet. Lungimea cililor depete pe cea a celulei, n mod excepional pn la de 10 ori. Cu ajutorul cililor, bacteriile se pot deplasa linear sau se pot rostogoli. Viteza de naintare este mare, parcurgnd ntr-o secund o distan de la 10 pn la 40 ori mai mare decat diametrul longitudinal al bacteriei. 3. Aparatul fimbrial Fimbriile (lat. fimbra franjure) sunt formaiuni filamentoase scurte (1-20 m), prezente n numr mare (100-400) pe suprafaa bacteriilor imobile sau mobile. Ele au o poziie radial i nu servesc la micare, ci au rol de fixare pe diferite substraturi solide sau pe hematii, pe care le

aglutineaz. Fimbriile (Fig. 41) sunt de natur intracelular, deoarece, dup ndeprtarea peretelui celular, rmn fixate pe protoplati.

Fig. 41 Aparat fimbrial

4. Pilii (Fig. 42) sunt apendici filamentoi, tubulari, flexibili, care au un canal prin care se face transferul cromozomului bacterian de la celula mascul (F+) la celula femel (F-). Mai sunt denumii i "pili de sex", iar procesul de transfer se numete conjugare bacterian.

Fig. 42 Pili de sex la E. coli

5. Spinii sunt formaiuni extraparietale tubulare i rigide, prezente la suprafaa unor bacterii Gram negative. Numrul lor variaz ntre 1 i 15 i au o distribuie ntmpltoare, perpendicular pe suprafaa celular. Prezint rol taxonomic. II. Peretele celular este invizibil sau foarte greu vizibil la microscopul fotonic i reprezint aproximativ 20% din greutatea uscat a celulei i 25% din volumul ei. Peretele celular are rol: de susinere mecanic; asigur individualitatea morfologic;

ofer protecie fa de ocul osmotic; particip la procesul de diviziune celular; conine receptori de virus; mediaz schimbul de substane cu mediu. Peretele celular este absent la genul Mycoplasma. Peretele celular (Fig. 43) reprezint o structur macromolecular, format dintr-un mucopeptid numit peptidoglican (murein) i substane care formeaz un matrix, n care este nglobat structura parietal bazal i prezint o compoziie chimic particular, n raport cu grupa de bacterii analizat. Coloraia Gram are o importan deosebit n taxonomia bacterian i a fost decoperit n 1844 de Hans Christian Gram. Aceast metod pornete de la observaia c unele bacterii, colorate cu derivai bazici din grupul trifenil metanului (violetul de geniana, violetul de metil, cristal violet) i mordansate cu iod, rezist la decolorarea cu anumii solveni organici (alcool sau aceton), n timp ce altele nu rezist. De aici, necesitatea recolorrii frotiului cu o culoare de contrast (fucsin, safranin), care s recoloreze bacteriile, care nu au reinut primul colorant. Coloraia Gram permite clasificarea bacteriilor n funcie de structura i compoziia chimic a peretelelui celular n dou mari categorii: Gram pozitive (G+, violet) i Gram negative (G-, rou). ntre cele dou categorii exist diferene mari de compoziie chimic i anume: Peptidoglicanul (mureina) este prezent la majoritatea bacteriilor, fiind de mai multe tipuri moleculare. Reprezint 60-90% din greutatea uscat a peretelui celular la bacteriile Gram pozitive, n timp ce la bacteriile Gram negative reprezint 10-20% i se afl n zona median a peretelui. Acizii teichoici (gr. teichos - perete) sunt foarte abundeni la bacteriile Gram pozitive i lipsesc la bacterille Gram negative. Aceti acizi sunt legai de straturile de peptidoglican sau de membrana citoplasmatic. Acizii lipoteichoici sunt ntlnii la bacteriile Gram pozitive, asociai la membrana citoplasmatic, dar se gsesc i n peretele celular. Acizii teichuronici sunt caracteristici bacteriilor Gram pozitive. Lipopolizaharidele caracterizeaz bacteriile Gram negative i sunt responsabile de primul control al permeabilitii celulare. Bacteriile Gram

negative sunt, n general, mai rezistente la inhibitori (peniciline, colorani) dect cele Gram pozitive. Lipoproteinele sunt ntlnite la bacteriile Gram negative sub forma unui strat lax, format din grupri lipidice i proteice. Sunt situate pe suprafaa superioar a peptidoglicanului. Fosfolipidele sunt tipice pentru bacteriile Gram negative. Acizii grai se gsesc sub forma unor lanuri lungi la nivelul peretelui celular la actinomicete i la bacteriile coryneforme.
Bacterie Gram pozitiv
Acid lipoteichoic

Bacterie Gram negativ

Lipopolizaharide
Membran extern

Porine

Fosfolipide

Acid teichoic
Peptidoglican

Peptidoglican Spaiu periplasmic Membran plasmatic

Membran plasmatic

Protein Protein

Lipoproteine
Protein

(a)

(b)

Protein

Fig. 43 Structura peretelui celular la bacterii: (a) Gram pozitive; (b) Gram negative.

III. Structura intraparietal: 1. Membrana citoplasmatic, acoper citoplasma bacteriilor i o separ de faa intern a peretelui celular (Fig. 44). Are o grosime de 8-10 nm, este constituit din dou straturi fosfolipidice i reprezint 10-20% din greutatea uscat a celulei. Analiza chimic a membranei evideniaz trei tipuri de molecule: lipide (fosfolipide), proteine i glucide (polizaharide legate cu proteine glicoproteine sau lipide - glicolipide). Membrana citoplasmatic este o barier osmotic de permeabilitate, care regleaz ptrunderea n celul i eliminarea selectiv a diferitelor substane. Ea menine n celul o concentraie ridicat de macromolecule, molecule mici i chiar ioni, mpedicndu-le difuzarea n mediu, dei concentraia extracelular este mai mic. Conine permeazele care asigur

transportul activ n interiorul Glicolipde celulei a unor substane organice Glicoproteine polare din mediu. Membrana citoplasmatic are rol n creterea i diviziunea celular; la nivelul su ia natere semnalul care declaneaz iniierea replicrii cromozomului bacterian. n sfrit, membrana Canalicul Protein citoplasmatic este suportul Strat fosfolipidic enzimelor care particip la sinteza Fig. 44 Seciune prin membran ATP (la eucariote aceste enzime se afl n mitocondrii). 2. Mezozomii sunt formaiuni care deriv din membrana citoplasmatic sub forma unor invaginri, legate de ADN celular. Aceste organite celulare joac un rol important n diviziunea nucleului i n formarea septului, care separ cele dou celule fiice. La bacteriile purpurii, mezozomii conin pigmeni clorofilieni. La bacteriile fixatoare de azot, nitrogenaza, care este inhibat de O2, este protejat de mezozomi. Bacteriile nitrificatoare prezint numeroase invaginri ale membranei citoplasmatice care mresc suprafaa de schimb enzimatic. 3. Citoplasma este un sistem coloidal, constituit din sruri minerale, compui solubili de natur lipoproteic, nucleoproteine, lipide i ap. Are un pH cuprins ntre 7 i 7,2. Citoplasma poate fi caracterizat ca un complex de stri fizice ntr-o continu transformare, n funcie de starea fiziologic i vrsta celulei. 4. Ribozomii sunt formaiuni citoplasmatice, sferice. O celul bacterian conine, n medie, 18.000 ribozomi de tip 70 S, cu un diametru de 10-30 nm. 50S 30S 70S + Fiecare ribozom se disociaz n dou subuniti, 30 S i 50 S (Fig. 45). Fiecare Fig. 45 Structura ribozomilor bacterieni subunitate 50 S este legat de

o subunitate 30 S prin intermediul legturilor ARN - protein i proteinprotein. Ribozomii 70 S joac un rol precis n cursul traducerii lanurilor de ARN n proteine. Conin 50% ap, iar substana lor uscat se compune din circa 60% ARN (ARN ribozomal) i circa 30% proteine. O parte din ribozomi sunt liberi n citoplasm, iar ceilali sunt fixai de suprafaa intern a membranei citoplasmatice. 5. Materialul nuclear ("nucleul") este constituit dintr-un cromozom format dintr-o bucl de ADN, aflat suspendat n citoplasm. Lungimea acestuia este mare, ajungnd la Escherichia coli la 1 mm, ceea ce implic o rsucire foarte accentuat. Din punct de vedere chimic, materialul nuclear conine 60% ADN, 30% ARN i 10% proteine. 6. Plasmidele sunt considerate material genetic extracromozomial, fiind independente de nucleu. Plasmidele nu sunt indispensabile pentru viaa celular, dar pot aduce un avantaj selectiv. Ele poart informaia pentru degradarea unor substraturi i pentru rezistena la antibiotice. Replicarea plasmidelor se produce n dou momente diferite: atunci cnd celula se divide i atunci cnd se produce procesul de conjugare. Bacteriile pot conine mai multe plasmide. Escherichia coli, de exemplu, posed pe cromozom unul sau dou plasmide conjugate i 10-15 plasmide neconjugate. 7. Vacuolele sunt formaiuni sferice, nconjurate la periferie de o membran lipoproteic, numit tonoplast, i care apar n citoplasm n faza de cretere activ a celulelor bacteriene. Numrul lor variaz ntre 6 i 20, iar n interiorul lor se gsete ap sau gaz (cianobacterii, bacterii fotosintetizante roii i verzi etc.). Cele cu ap au rol n meninerea presiunii osmotice n raport cu mediul extern i n depozitarea substanelor de rezerv, n timp ce vacuolele cu gaz au rol de flotaie sau rol protector (fa de intensitatea luminoas). 8. Incluziunile sunt formaiuni inerte, care apar n citoplasm la sfritul periodei exponeniale de cretere a celulei. Ele pot fi formate din glicogen, amidon, carbonat de calciu i fosfat anorganic. 9. Sporul bacterian este o formaiune care deriv din celula vegetativ a bacteriilor, n anumite condiii de via. Sporul este o form de conservare

a speciei la condiiile nefavorabile de mediu i concentreaz, ntr-un volum redus, toate componentele eseniale ale celulei din care provine. Bacteriile sporogene, cu excepia genului Desulfotomaculum (Gram variabil), sunt Gram pozitive, iar forma sporului poate fi sferic sau oval. Sporul apare ca o structur constant la bacteriile anaerobe, aparinnd genului Clostridium, n mod facultativ la bacteriile aerobe din genul Bacillus i foarte rar la coci (Sporosarcina ureae). Dispunerea sporului n celula vegetativ poate fi central (Bacillus anthracis), subterminal (Bacillus cereus), terminal (Clostridium tetani) sau lateral (Fig. 46).

(a)

(b)

(c)

(d)

Fig. 46 Localizarea sporului bacterian: (a) central; (b) subterminal; (c) terminal; (d) lateral.

Dimensiunile sporilor variaz ntre 0,2 i 2 m, iar diametrul acestora poate fi mai mic (spor nedeformant sau bacteridie) sau mai mare (spor deformant sau clostridie) dect diametrul transversal al celulei n care se formeaz. Dup modul de formare, structur i rezisten la factorii de mediu, sporul bacterian poate fi de mai multe tipuri: Endosporul (sporul propriu-zis) apare n interiorul unei celule vegetative, numit "sporangiu", i prezint o mare rezisten la condiiile nefavorabile de mediu, n special la variaiile temperaturii. O celul vegetativ poate forma un singur endospor. Bacteriile susceptibile de a produce endospori aparin genurilor: Bacillus, Clostridium, Desulfatomaculum, Sporosarcina, Sporolactobacillus, Thermoactinomyces. Artrosporii se formeaz prin fragmentarea unor celule vegetative. Au o form neregulat i o rezisten intermediar ntre cea a endosporului i celula vegetativ. Artrosporii sunt caracteristici bacteriilor actinomicete. Chitii sunt stadii de repaus sau supravieuire, formate ca rspuns la modificrile de mediu i provin din transformarea unei celule vegetative, prin ngroarea pereilor i acumularea de material de rezerv. Au o

rezisten mai mic dect endosporul i nu sunt termorezisteni. (ex. Azotobacter sp.) Gonidia apare endocelular prin condensarea i fragmentarea protoplasmei unei celule vegetative, numit gonidangiu. n interiorul unei celule apar, de regul, mai multe gonidii, care sunt eliberate n mediu prin ruperea peretelui gonidangiului. Principala lor funcie privete capacitatea de reproducere, neavnd rezistena caracteristic sporului (ex. Leptothrix ochracea). Compoziia chimic a sporului. ntre forma vegetativ i forma sporulat a unei specii bacteriene exist deosebiri de ordin calitativ i cantitativ. Astfel, din punct de vedere cantitativ, sporii sunt bogai n Ca2+, Cu2+ i Mg2+ i sraci n P i n substane proteice. De asemenea, sporii au un coninut mai sczut n H2O i ARN, comparativ cu formele vegetative. n plus, sporii mai conin, n cortexul sporului, acidul dipicolinic sub form de dipicolinat de Ca. Compoziia chimic a sporului duce, implicit, la unele deosebiri n legtur cu rezistena sa fa de agenii fizici i chimici. Semnificaia biologic a sporului Sporul bacterian, prin rezistena sporit fa de factorii de mediu, are rolul de conservare a speciei. El concentreaz ntr-un volum redus toate componentele eseniale ale celulei, sporogeneza fcnd parte dintr-un ciclu vital obligatoriu. nsuirile de rezisten ale sporului pot fi sintetizate astfel: rezistena la temperatur, rezistena la uscciune, rezistena fa de factorii chimici. Metabolismul sporului este mult mai redus ca al celulei vegetative i nu permite multiplicarea. Citologia formrii sporului n interiorul celulei bacteriene, formarea sporului presupune crearea unei noi celule diferite de cea vegetativ, care se produce n mai multe faze (Fig. 47): Stadiul preparator viitorul nucleu al sporului ia natere prin detaarea unui segment din cromozomul bacterian, iar n jurul acestuia, ulterior, are loc condensarea citoplasmei; Stadiul depresor n care nucleul sporului, format i nconjurat cu un strat de citoplasm condensat, se separ de restul citoplasmei prin septul sporal; Stadiul apariiei nveliurilor sporale, tunica i cortexul sporului;

Stadiul de maturare const n migrarea sporului la locul definitiv n celula bacterian. n aceast etap are loc reducerea dimensiunilor sporale, dar i maturizarea sporului.
ADN Perete celular Membran citoplasmatic

Celul vegetativ

Membran citoplasmatic

Cortex

nveli sporal Membran citoplasmatic ADN Spor liber nveli sporal Cortex nveli sporal n formare

Fig. 47 Procesul de sporogenez la bacterii

Infrastructura sporului (Fig. 48) prezint urmtoarele componente: 1. nveliul sporal extern (tunica) nconjoar cortexul i prezint o structur Exosporium nveli sporal multistratificat, alctuit din trei straturi: extern (exina), mijlociu i interior (intina). Cortex 2. Cortexul sporului 3. Celula sporal propriu-zis (protoplast sporal) este constituit din sporoplasm (citoplasm granular) i nucleoplasm Membrana (material nuclear). sporoplasmei Unele specii bacteriene (Bacillus cereus, Bacillus anthracis) prezint, la exteriorul nveliului sporal, un exosporium cu structur simpl sau Fig. 48 Structura sporului complex, care acoper sporul. bacterian 2.4.3. Compoziia chimic a bacteriilor Compoziia chimic a celulei bacteriene nu difer prea mult de cea a celorlalte organisme vii. Ea conine cca.. 600 molecule diferite, organice i anorganice.

Apa este mediul biogen esenial i reprezint 78 % din greutatea medie a celulei bacteriene. Se gsete sub form de ap liber sau legat de diferite componente celulare. Apa ndeplinete numeroase funcii: este solvent al compuilor hidrosolubili; este mediu de dispersie pentru constituenii chimici insolubili n ap; condiioneaz activitatea enzimelor; asigur transportul elementelor de metabolism. Srurile minerale reprezint 2-20 % din greutatea uscat a bacteriilor i sunt reprezentate de principalele elemente. Cel mai bine este reprezentat fosforul ( 45 %). Substanele minerale au rol n: reglarea presiunii osmotice; activeaz unele sisteme enzimatice; regleaz pH-ul; influeneaz permeabilitatea peretelui celular; intr n compoziia unor constitueni celulari. Acizii nucleici. ADN se gsete sub forma unei singure molecule circulare, dublu helicale. Reprezint 1/5 din coninutul celular. ARN reprezint cca. 17% din greutatea uscat a celulei bacteriene i se gsete localizat n citoplasm sub trei forme: ARN mitocondrial (ARNm), ARN transfer (ARNt) i ARN ribozomal (ARNr). Proteinele reprezint cca.. 60% din greutatea uscat a bacteriilor i se gsesc sub form de holoproteine i heteroproteine. Proteinele au rol structural, iar unele ndeplinesc funcia de enzime. Glucidele reprezint 4-25% din greutatea uscat a celulei bacteriene i se gsesc sub form de glucide simple (mono i dizaharide) i polizaharide. Glucidele simple particip la metabolismul bacterian, iar polizaharidele au rol structural, energetic sau de material de rezerv. Lipidele se gsesc n proporie de 1-20% din greutatea uscat a bacteriilor, iar aceast variaie este specific, depinznd de vrsta celulei i compoziia mediului de cultur. Lipidele se gsesc n membrana citoplasmatic i sub form de granule intracitoplasmatice. Pigmenii sunt substane colorate care se gsesc n citoplasma bacteriilor cromogene. Dup localizarea pigmenilor fa de celul, bacteriile se mpart n dou categorii:

bacterii cromopare, la care pigmentul este eliminat n mediul pe care l coloreaz (ex. Pseudomonas fluorescens); bacterii cromofore, la care pigmentul rmne localizat n celula bacterian (ex. Staphylococcus aureus). Pigmenii pot fi de mai multe tipuri, dup compoziia chimic: bacterioclorofite, pigmeni carotenoizi (roii, galbeni, portocalii), antocianici, pigmeni melanici (brun sau negru). Pigmenii pot avea rol n fotosintez, rol antibiotic, de protecie mpotriva radiaiilor luminoase i ultraviolete, rol de vitamine. Enzimele bacteriene constituie o grup de proteine cu importan biologic deosebit, de catalizatori ai celulei vii, fiind solubile n ap, termolabile, criolabile i sensibile la aciunea radiaiei ultraviolete. Dup substratul asupra cruia acioneaz, enzimele se clasific n: exoenzime, care sunt eliberate n mediul nconjurtor, acionnd asupra unui substrat din afara celulei; acestea sunt angrenate n procesele de catabolism; Endoenzime, care sunt secretate intracelular i particip la reaciile de sintez (anabolism). Dup viteza de aciune, enzimele pot fi de dou categorii: enzime constitutive, care sunt preexistente i care acioneaz rapid asupra unui substrat. Sunt sintetizate n tot cursul vieii bacteriei; enzime adaptive, care acioneaz lent, deoarece celula trebuie s se adapteze la substrat, apariia enzimelor fiind legat de mediu. 2.4.4. Creterea i multiplicarea bacteriilor Ciclul de dezvoltare al bacteriilor se compune din dou faze: creterea i multiplicarea. Prin cretere se nelege procesul de neoformare, n condiii favorabile, n protoplasma bacteriei, a substanei de constituie. Aceast cretere se continu pn la atingerea unei limite, cnd survine diviziunea celular. Prin multiplicare se nelege sporirea numrului de indivizi, care se face prin diviziune celular. Diviziunea celular poate fi:

izomorf, cnd celulele fiice rezultate sunt egale; heteromorf, cnd celulele fiice rezultate nu sunt egale; n afara diviziunii celulare, multiplicare se mai poate realiza prin: fragmentarea coninutului celular n mai multe elemente; prin nmugurire. Evoluia unei culturi bacteriene. Studiile privind multiplicarea bacteriilor pe medii artificiale, au artat c acest proces se realizeaz n mai multe faze succesive (Fig. 49): 1. Faza de lag sau cretere zero este cuprins ntre momentul nsmnrii bacteriilor i momentul nceperii multiplicrii, cnd numrul bacteriilor din inocul nu crete, iar cultura nu este vizibil macroscopic. Aceast faz dureaz aproximativ 2 ore i este o etap de adaptare la noile condiii de cultur. 2. Faza de accelerare a ritmului de cretere corespunde nceperii multiplicrii, a crei vitez crete progresiv i n care celulele sunt tinere. 3. Faza exponenial sau de multiplicare logaritmic este cea n care procesul se accentueaz n progresie geometric, iar durata unei generaii este minim. Creterea exponenial a unui organism unicelular ce realizeaz o generaie la 20 minute (dup Stanier, 1966)
Timpul (minute) 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 Numr de diviziuni 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Numr de microorganisme exprimat n: nr. aritmetic log2 log10 1 0 0,000 2 1 0,301 4 2 0,602 8 3 0,903 16 4 1,204 32 5 1,505 64 6 1,806 128 7 2,107 256 8 2,408 512 9 2,708 1024 10 3,010

4. Faza ncetinirii ritmului de cretere, cnd rata multiplicrii ncepe s scad progresiv. 5. Faza staionar, cu ritm de cretere zero, care se caracterizeaz prin faptul c numrul celulelor rmne constant din cauza echilibrului ce se stabilete ntre numrul celulelor ce mor i al celor ce apar n urma unei diviziuni foarte lente. Aceast faz corespunde celulelor mature. 6. Faza iniial de declin, n care numrul celulelor viabile scade progresiv, prin moartea unora dintre ele. Aceast faz corespunde celulelor btrne, cu forme de involuie, cnd apar numeroi spori. 7. Faza intermediar de declin, n care numrul celulelor continu s scad, cu un ritm de dispariie constant. 8. Faza final de declin ncheie evoluia unei culturi prin moartea n ritm lent a celulelor pn la sterilizarea complet a culturii.
1. 2. 3.

4.

5.

6.

7.

8.

Numr microorganisme (log)

Timp

Fig. 49 Evoluia unei culturi bacteriene

Oprirea multiplicrii bacteriilor i, n cele din urm, moartea acestora se datoreaz unei serii de factori ca: lipsa substanelor nutritive eseniale din mediul nutritiv; competiia pentru oxigen sau activitatea slab a substanelor folosite pentru procesele respiratorii; modificrile fizico-chimice ale mediului de cultur (acumulare de acizi, alcooli etc.); acumularea produilor de catabolism i a toxinelor n concentraii incompatibile cu viaa celulelor.

2.4.5. Nutriia bacteriilor Bacteriile pot folosi pentru manifestrile lor vitale fie energia radiant luminoas, n cazul celor capabile de fotosintez, fie energia eliberat prin reacii chimice oxidative, la ntuneric, n cazul celor chimiotrofe. Dup sursa de energie, bacteriile pot fi clasificate astfel: fototrofe (fotosintetizante), a cror surs primar de energie este lumina; chemotrofe (chimiosintetizante), a cror surs de energie este obinut la ntuneric, n urma reaciei de oxido-reducere a unor substane organice sau anorganice. paratrofe, la care creterea este dependent de energia furnizat de celula parazitat. n funcie de capacitatea de sintez a metaboliilor eseniali, bacteriile prezint urmtoarele tipuri de nutriie: Autotrofia corespunde capacitii de sintez a tuturor constituenilor celulari prin mijloace proprii, pornind de la surse simple anorganice de carbon i azot ca: CO2, NH3, NO2-, NO3-. Heterotrofia implic incapacitatea de sintez a unor metabolii eseniali i, de aceea, este nevoie de prezena substanelor organice ca surs de carbon sau azot. Bacteriile care folosesc o surs organic de carbon sunt denumite bacterii de fermentaie, iar cele care utilizeaz o surs organic de azot mai sunt denumite bacterii de putrefacie. n concluzie, autotrofele, prin sintezele lor genereaz substana organic, plecnd de la compui minerali simpli, pe cnd heterotrofele nu-i pot realiza sintezele proprii, dect dac dispun de substane organice, pe care le descompun pn la produi mai simpli i pe care i utilizeaz n metabolismul lor. 2.4.6. Respiraia microorganismelor Dup exigenele fa de oxigenul molecular, microorganismele se grupeaz n patru tipuri respiratorii: 1. Microorganisme strict (obligatoriu) aerobe, care folosesc oxigenul ca acceptor final de hidrogen, avnd nevoie de prezena continu a oxigenului atmosferic.

2. Microorganisme strict (obligatoriu) anaerobe, care nu se pot dezvolta n prezena oxigenului molecular, putnd fi cultivate numai pe medii srcite n oxigen. Ele nu dispun de enzimele respiratorii din categoria citocromilor. Anaerobioza lor strict const n faptul c n prezena oxigenului, care se comport ca acceptor final de hidrogen, se formeaz peroxidul de hidrogen (compus toxic) i nu ap. 3. Microorganisme facultativ anaerobe, care sunt capabile s-i orienteze metabolismul spre respiraie sau spre fermentaie, n funcie de disponibilitile de oxigen i care au, n mod obinuit, un metabolism anaerob, fr a fi ns sensibile la prezena oxigenului. Unele microorganisme cu acest tip respirator (levurile) pot trece de la un metabolism aerob la unul anaerob, n funcie de condiiile de mediu. 4. Microorganismele microaerofile au nevoie de o concentraie de oxigen mai mic dect cea din aerul atmosferic. Aceast particularitate se datoreaz sensibilitii unora dintre enzimele lor la condiiile de oxidare puternic. 2.4.7. Grupe particulare de bacterii 1. Bacterii glasogene Apa pur din punct de vedere chimic i biologic, poate rmne n stare lichid pn la -40oC. Supus la temperaturi inferioare pragului de 0oC, nu nghea dect n prezena nucleelor glasogene. Aceste nuclee pot fi reprezentate de particulele minerale, care provoac congelarea, ncepnd de la -10oC. La temperaturi cuprinse ntre -10 i 0oC, gheaa nu se formeaz la plante dect n prezena bacteriilor specifice, ce posed n membrana lor nuclee glasogene. Suele bacteriene n cauz aparin speciilor Pseudomonas syringae (Fig. 50) i Erwinia herbicola; ele pot fi saprofite (epifite) sau parazite pe organele plantelor n cauz (frunze, flori, fructe). Proporia de nuclee glasogene este ridicat la Ps. syringae Fig. 50 Pseudomonas syringae

(60 %) i mai mic la E. herbicola (1-5 %). Puterea glasogen a bacteriilor se exprim "in vitro" sau n "in vivo" pe organele plantelor. Pe de alt parte, suele inductoare de ghea se multiplic abundent pe organele necrozate prin nghe, ceea ce le ofer un avantaj selectiv considerabil. Cnd o suspensie de bacterii glasogene este pulverizat pe frunze apar simptomele ngheului cu ofilirea ireversibil, dac sunt plasate (inute) o or la -5oC, pe cnd plantele martor netratate cu bacterii rmn imune la toate alterrile vizibile. La via de vie s-a observat o corelaie ridicat ntre numrul de bacterii glasogene prezente pe muguri i pierderile cauzate de frig, la temperaturi apropiate de 0oC. Bacteriile glasogene, care provoac nghearea, au fost observate la plante foarte diverse (pin, cire, piersic, prun, cais, forsiia, fasole, porumb, tomate, cpun). Suele bacteriene active, datorit capacitii de a induce formarea gheii, prezint o gen specific, care codeaz o protein foarte particular n membrana lor. Proteina este format din 1200 de aminocizi, cu o structur repetitiv foarte accentuat. Compus din 1200 de aminoacizi, acest polipeptid comport repetiii n mai mult de 100 exemplare. Reducerea numrului de repetiii n lanul polipeptidic reduce activitatea glasogen. Alte proteine cu structur repetitiv sunt prezente n sngele unor specii de animale din regiunile polare, unde au un efect antigel. Bacteriile glasogene joac un rol important n practic, deoarece provoac nghearea n primvar a numeroase plante, n special pomii fructiferi i via de vie. Stoparea aciunii negative a acestor bacterii se ncearc pe diferite ci: tratamente chimice cu antibiotice, pulverizri cu ap, fumigaii, folosirea bacteriofagilor, a microorganismelor antagoniste, aplicarea de polimeri care limiteaz schimburile termice cu exteriorul etc. n ultimii ani s-au obinut prin inginerie genetic sue neglasogene de Ps. syringae, care, aplicate pe plante, inhib dezvoltarea speciilor glasogene. n sens pozitiv, specia Ps. syringae glasogen este utilizat pentru obinerea zpezii artificiale (Snow max). 2. Micoplasmele reprezint un grup particular de bacterii lipsite de perete celular, celula fiind delimitat de o membran lipoproteic cu o compoziie chimic asemntoare celulei animale.

Sunt considerate cele mai mici organisme capabile de cretere autonom pe medii acelulare. Micoplasmele sunt grupate n clasa Mollicutes (moli - moale, pliabil i cute - piele) cu dou genuri: Mycoplasma creterea speciilor din acest gen este dependent de prezena sterolilor n mediu. Acholeplasma cuprinde specii care se dezvolt independent de steroli. Morfologie. Datorit lipsei peretelui celular, micoplasmele au o plasticitate natural foarte mare, fiind descrise mai multe tipuri morfologice ca: sferice-cocoidale, diplococi, filamentoase. Cu toate acestea, cultivate n condiii de mediu bine definite, fiecare specie are o morfologie caracteristic, astfel nct pleomorfismul acestora nu trebuie confundat cu polimorfismul, care implic, obligatoriu, existena a mai mult de o form celular distinct n cursul vieii unui organism. Micoplasmele sunt Gram-negative, iar dimensiunile lor variaz de la 125-250 nm la formele sferice, pn la 1-2 m la cele filamentoase. Lipsa peretelui celular este rspunztoare de instabilitatea morfologic i de alte proprieti, cum ar fi: sensibilitatea osmotic; rezistena la antibioticele care acioneaz asupra sintezei peretelui celular (penicilina); tendina de ptrundere i cretere n profunzimea mediilor; capacitatea de a traversa filtrele bacteriene. Multiplicarea micoplasmelor se poate realiza la aceeai specie prin diviziune, nmugurire i fragmentarea filamentelor. n condiii naturale, micoplasmele sunt parazite, instalarea lor n diferite organisme fiind uurat de natura chimic a membranei, similar membranelor gazdei. Micoplasmele produc peste 40 de boli la plante, dar i la animale i om. 3. Actinomicetele constituie un grup mare de bacterii filamentoase, imobile, Gram pozitive, caracterizate printr-o mare varietate morfologic. Mult vreme, actinomicetele au fost considerate ca fcnd parte din categoria ciupercilor, deoarece au particularitatea de a forma hife (filamente) ramificate i spori de diseminare.

Din punct de vedere taxonomic, actinomicetele sunt incluse n divizia Firmicutes, clasa Thallobacteria. n sol, se gsesc mai ales actinomicete ce aparin familiior Frankiaceae, Nocardiaceae, Streptomycetaceae (cca..70% din total) i Micromonosporaceae. Morfologie. Majoritatea actinomicetelor au o form alungit filamentoas, cu tendin de ramificare, de unde i aspectul lor de miceliu. Filamentele miceliene au un diametru cuprins ntre 0,5 i 2 m i prezint o structur de tip procariot, corespunznd unor celule foarte lungi, multinucleate, fr perei transversali. Pe medii de cultur solide formeaz colonii dense cu aspect cartilaginos sau cretos, aderente la substrat. Pe aceste Fig. 51 Streptomyces sp colonii se formeaz sporofori cu spori. Sporoforii sunt diferii ca form: spiralai, drepi sau curbai. Sporii sunt, de asemenea, variai ca form, fiind sferici ovali, alungii sau cilindrici. Suprafaa sporilor este neted sau prezint diverse ornamentaii. Actinomicetele produc pigmeni, care dau miceliului aerian culori diferite (galben, portocaliu, rou, violet pn la albastru sau cenuiu). La unele specii, pigmenii difuzeaz n mediu. Metabolism. O particularitate a fiziologiei actinomicetelor este modul lor de nutriie omnivor, care le permite s se dezvolte pe substraturi organice dintre cele mai diferite. n condiii naturale, pe resturi vegetale, actinomicetele ncep s se dezvolte numai dup ce bacteriile i ciupercile au ncetat s se mai multiplice, atunci cnd toate substanele uor asimilabile din resturile vegetale au fost descompuse de predecesorii lor. Capacitatea lor de a degrada substanele organice dintre cele mai complexe le confer un rol important n natur, n special n descompunerea substanelor organice din nmoluri i sol. n sol, acestea particip la degradarea biologic i mineralizarea substanelor organice.

Importana lor practic este legat, n mod deosebit, prin intermediul speciilor genului Streptomyces (Fig. 51), de producerea de substane antibiotice (sunt cunoscute peste 500 de antibiotice distincte). Aproximativ 50 % din tulpinile izolate n natur produc antibiotice. Unele actinomicete produc boli la plante, animale i om. 2.4.8. Sistematica, nomenclatura i identificarea bacteriilor La baza clasificrii bacteriilor stau o serie de caractere, care constitue criterii de ncadrare a acestora n mai multe categorii taxonomice, avnd la baz specia. n succesiunea lor, aceste categorii sunt: specia, genul, familia, ordinul, clasa i diviziunea (ncrengtura). Rangurile taxonomice sunt indicate de cte un sufix: Ordin (-ales) Subordin (-ineae) Familie (-aceae) Subfamilie (-oidiae) Unitatea de lucru efectiv este tulpina (sua) bacterian, care este o cultur pur, constituit dintr-o singur specie, avnd la origine o colonie, ce provine dintr-o singur bacterie, care s-a multiplicat. Tulpina sau sua se noteaz cu un simbol sau un numr i se pstreaz n colecii tiinifice. Cercetrile ce stau la baza identificrii i clasificrii bacteriilor sunt numeroase i in cont de urmtoarele aspecte: caractere morfologice: form, dimensiune, cilii, capsula i comportarea tinctorial fat de coloraia Gram; caractere culturale: creterea pe medii de cultur lichide sau solide, forma i tipul coloniei, pigmentaia etc; caracterele biochimice se refer la capacitatea de utilizare a surselor de carbon i azot, tipul de respiraie etc; caractere antigenice (serologice); caractere de patogenitate, privind virulena i toxicitatea speciilor patogene; sensibilitatea fa de bacteriofagii specifici;

posibilitatea de transfer genetic prin bacteriofag sau prin fenomene parasexuale; raportul guanin (G) + citozin (C) sau raportul G/C % fa de masa genomului. Speciile nrudite au un coninut de G/C % aproape identic. caractere ecologice: habitatul natural al microorganismului i relaiile lui cu mediul natural. Dintre ncercrile de sistematizare a bacteriilor se amintesc cele realizate de Ehrenberg (1839), Lehman i Neuman (1927), Pribram (1933), Kluyver i Van Niel (1936), Prevot (1957, 1961), Krasilnicov (1959), Skerman (1967) i Murray (1974). Societatea bacteriologilor americani, pe baza lucrrilor lui Buchanan (1916-1918) i Winslow (1920), a stabilit un sistem de clasificare, prezentat n 1923 de David-Hendricks Bergey n prima ediie a Bergeys Manual of Determinative Bacteriology. Acest determinator, adoptat de majoritatea microbiologilor, se afl la a noua ediie (1994) i clasific bacteriile n baza caracterelor fenotipice comune (caractere morfologice, de cultur, fiziologice, biochimice etc.) n patru divizii i 35 de seciuni:
Clasa 1. Scotobacteria - bacterii non-fotosintetice I. Gracilicutes 2. Anoxyphotobacteria - bacterii fotosintetice anaerobe bacterii Gram negative 3. Oxyphotobacteria - bacterii fotosintetice aerobe (cyanobacterii) II. Firmicutes 1. Firmibacteria - coci i bacili bacterii Gram pozitive 2. Thallobacteria - bacterii filamentoase (actinomicete) 1. Mollicutes - bacterii lipsite de perete celular III. Tenericutes (micoplasme) 1. Archaebacteria bacterii cu perete celular, lipsit de IV. Mendosicutes stratul peptidoglican Divizia

Cel mai nou sistem de clasificare bacterian a aprut n perioada 20012011 i este prezentat n cinci volume ale celei de-a doua ediii din Bergeys Manual of Systematic Bacteriology. Acest sistem clasific bacteriile dup particularitile genotipice (gradul de omologie al secvenelor nucleotidice ale ARN ribozomal, gradul de omologie al secvenelor nucleotidice ale ADN, coninutul relativ de guanin+citozin (GC%) al ADN purificat etc.).

2.4.9. Rolul bacteriilor n natur Bacteriile care triesc n natur joac un rol important n mineralizarea compuilor organici, contribuind, astfel, la realizarea circuitului elementelor n natur (azotul, fosforul, potasiul, calciul, magneziul i microelementele). Bacteriile contribuie i la formarea substanelor humice, mbogind solul n materie organic. Prin unele substane bacteriene de natur mucilaginoas, cum sunt polizaharidele capsulare, acestea contribuie la agregarea particulelor de sol, deci la mbuntirea structurii solului. Unele specii bacteriene au capacitatea de a produce antibiotice, care pot limita dezvoltarea unor grupe de microorganisme din sol, deci menin sau schimb echilibrul biologic din sol. Unele grupe de bacterii triesc n simbioz cu plantele superioare, producnd nodoziti i realizeaz fixarea azotului atmosferic; altele activeaz n zona rdcinii plantelor, contribuind la dezvoltarea acestora i la sporirea activitii rizosferice. n medii specifice, unele grupe de bacterii produc procese fermentative utile, ca fermentaia amidonului, a pectinelor, fermentaia lactic, butiric, propionic etc., n timp ce altele au capacitatea de a secreta enzime extracelulare, cu care lizeaz unele bacterii sau ciuperci.

7HVW GH DXWRHYDOXDUH

1. Bacteriile sunt organisme: a) pluricelulare b) acelulare c) unicelulare 2. Bacteriile prezint: a) nucleu complet b) nucleu fr membran c) nu prezint nucleu 3. Celula bacterian este protejat de: a) membran celular b) membran citoplasmatic c) perete celular d) nu este protejat 4. Bacteriile au dimensiuni care se msoar n: a) mm b) cm c) nm d) m Rezultate corecte: 1 - c; 2 - b; 3 - c; 4 - m.

2.5. Cyanobacteriile (algele albastre-verzi) Cyanobacteriile (gr. kyans albastru) sunt microorganisme procariote, cunoscute, iniial, sub denumirea de alge verzi-albastre, care folosesc apa ca donator de electroni i n prezena luminii produc oxigen. Mecanismul lor fotosintetic este identic cu cel al algelor eucariote, pigmenii fotosintetizani fiind reprezentai numai de clorofila "a" i deficobiliproteine (alloficocyanina, ficocyanina i, uneori, ficoeritrina). Cyanobacteriile sunt strict fotoautotrofe i nu se pot dezvolta numai n prezena substanelor organice, nu au nevoie de vitamine ca factori de cretere, iar ca surs de azot folosesc azotaii, srurile de amoniu, iar unele specii folosesc azotul molecular, fiind fixatoare de azot (genurile Nostoc i Anabaena). Sunt mult rspndite n sol, n apele dulci i in apele srate din mri i oceane. Sunt mai tolerante fa de condiiile extreme nefavorabile dect algele eucariote. 2.5.1. Morfologia cyanobacteriilor Unele cyanobacterii sunt unicelulare, iar altele filamentoase, formnd lanuri de dimensiuni variabile. Forma celulei este specific sau bacilar, cu dimensiuni cuprinse ntre 1 i 60 m. 2.5.2. Structura cyanobacteriilor Celulele prezint un perete rigid, multistratificat, asemntor cu cel de la bacteriile Gram-negative. Peretele celular poate fi acoperit la exterior cu o teac gelatinoas sau fibroas. Cele mai multe cyanobacterii sunt mobile ntr-un anumit stadiu de dezvoltare, avnd o mobilitate de tip glisant, asemnndu-se cu bacteriile filamentoase glisante de tip Beggiatoa. n citoplasm se observ 2-5 saci tilacoizi, ntre care se afl ficobilisomii, implicai n procesul de fotosintez; genomul, alctuit dintr-o molecul de ADN dublu catenar; granule de cianoficin, care conin acid aspartic i arginin; glicogen; polifosfat i vacuole cu gaz, ce au rol de

flotaie. Ficobilisomii conin pigmeni asimilatori, reprezentai, n principal, de ficocyanin, alloficocyanin i, uneori, de ficoeritrin i ficoeritrocianin. Heterochitii, ntlnii la speciile din ordinele Nostocales i Stigonematales, sunt celule vegetative, care au suferit un proces de difereniere structural i funcional. Astfel, ei au pierdut capacitatea de a realiza fotosinteza oxigenic, dar conin enzime specifice procesului de fixare a azotului molecular (nitrogenaza, hidrogenaza). Prezint un perete celular ngroat i o legtur cu celulele vegetative adiacente. n schimbul azotului organic furnizat de ctre heterochiti, celulele vegetative furnizeaz metabolii organici. Akineii reprezint structuri de rezisten, care se formeaz prin creterea n dimensiune i deformarea unor celule vegetative, simultan cu depunerea unor straturi fibrilare dense la exterior. Conserv capacitatea vital a speciei pentru o perioad lung de timp i ofer protecie la aciunea unor factori fizici (temperatur). 2.5.3. Sistematica cyanobacteriilor Cyanobacteriile (Fig. 52) sunt ncadrate n Regnul Procaryotae, Divizia Gracilicutes, Cl. Oxyphotobacteria i, pe baza caracterelor morfologice, au fost clasificate n cinci ordine: Chroococca.les cuprinde reprezentani unicelulari, grupai n asociaii coloniale. Ex: genurile Chroococcus, Cyanobacterium i Gloeocapsa. Pleurocapsales cuprinde specii unicelulare, capabile s formeze spori interni. Ex: genurile Chroococcidiopsis, Pleurocapsa i Stanieria. Oscillatoriales cuprinde genuri, n care celulele sunt grupate n asociaii filamentoase, fr a prezenta, ns, i celule difereniate, numite akinei i heterociti. Ex: genurile Oscillatoria, Plectonema i Spirulina. Nostocales cuprinde specii filamentoase cu celule difereniate, numite akinei i heterociti. Ex: genurile Anabaena, Nostoc i Cyanospira. Stigonematales cuprinde specii filamentoase cu celule difereniate, numite akinei i heterociti. Acest ordin, spre deosebire de Ord. Nostocales, include i cyanobacteriile, care formeaz trichoame adevrate. Ex: genurile Capsosira, Mastigocladus i Stigonema.

(a)

(b)

(c)

Fig. 52 Cyanobacterii: (a) Chroococcus sp.; (b) Oscillatoria sp.; (c) Anabena sp.

2.5.4. Rolul cyanobacteriilor n natur Acestea constituie primele organisme ce populeaz rocile dezagregate, participnd la procesul de solificare, i favorizeaz dezvoltarea n masa lor mucilaginoas a unor bacterii fixatoare de azot, ntre care Azotobacter sp. i Clostridium sp. Dintre cyanobacterii, mai rspndite n natur sunt genurile Gloeocapsa i Chroococcus, care sunt organisme unicelulare. Alte grupe sunt filamentoase ca: Oscillatoria i Lyngbia. Genurile Nostoc i Anabaena, ce au capacitate de a fixa azotul molecular, triesc n solurile umede din orezrii, unde asigur N2 necesar plantelor.

2.6. Protozoarele Protozoarele (gr. protos primul, zoon animal) sunt organisme unicelulare de tip eucariot, variate ca form i dimensiune, la care se cunoate un anumit ciclu evolutiv i care reprezint vieuitoare complete i independente. Sunt caracterizate de prezena unor organite, numite cili, care particip la locomoie i la obinerea hranei. Hrnirea este exclusiv heterotrof; triesc libere n mediul acvatic (majoritatea triesc n ape dulci, dar pot fi ntlnite i specii de ap srat), precum i n soluri umede.

2.6.1. Morfologia i fiziologia protozoarelor Protozoarele sunt variate ca form, iar dimensiunile variaz, n funcie de specie, ntre 1 i 2000 m. Valorile de temperatur optime pentru cretere i dezvoltare sunt cuprinse ntre 18oC i 25oC, iar Cili chitii speciilor din Cl. Rhizopoda (Sarcodina) rezist Membran pna la 70oC. Protozoarele Macronucleu prefer un pH neutru, dar se pot Micronucleu dezvolta ntr-un interval mai larg, cuprins ntre 3,5 i 9. n Vacuol pulsatil raport cu oxigenul, majoritatea protozoarele din sol sunt strict aerobe.
Orificiul bucal (citostom) Citofaringe

2.6.2. protozoarelor

Structura

Vacuol digestiv Orificiul anal (citoproct) Trochocist Ectoplasma Endoplasma

Celula unui protozor se compune din membran, protoplasm i unul sau mai Fig. 54 Structura unui protozoar ciliat muli nuclee, cu forme i structuri diferite (Fig. 54). Pe membrana plasmatic se gsesc fibrile chitinoase, calcaroase sau silicoase, ce asigur coeziunea celulei. Unele specii din clasa Rhizopoda (Sarcodina) prezint o capsul prevzut cu una sau mai multe deschideri, cu rol protector. Protoplasma este un sistem coloidal cu permeabilitate volutina selectiv, format din ecto- i endoplasm. n ea se gsesc organite cu funcie vital specific, cum sunt incluziunile granulare, condriozomii, vacuolele, nucleul sau nucleii (Cl. Ciliata), precum i diferite substane de rezerv. Ca

substane de rezerv n celulele de protozoare s-au descoperit: amidonul, glicogenul, leucozina, grsimi i substane proteice de rezerv. Speciile binucleate din Cl. Ciliata conin un micronucleu diploid, responsabil cu reproducerea sexuat, precum i un macronucleu poliploid, responsabil cu reglarea activitilor celulare. Unele protozoare prezint n ectoplasm organite aciculare sau sub form de bastonae (trichite i trichociti), ce sunt proiectate n exterior n momentul atacului sau al aprrii. Organitele care servesc la deplasarea protozoarelor sunt pseudopodele, cilii i flagelii. Pseudopodele iau natere din corpul plasmatic prin modificri ale tensiunii superficiale, iar cilii i flagelii sunt organite permanente cu aspect specific. Cu ajutorul pseudopodelor, protozoarele se deplaseaz pe substrat solid, iar cu ajutorul cililor i flagelilor, n mediul lichid. Resturile nedigerate sunt eliminate la cele cu pseudopode prin orice parte a membranei plasmatice, iar la celelate protozoare prin anusul celular (citoproct). 2.6.3. Reproducerea protozoarelor nmulirea protozoarelor se face pe cale asexuat prin fisiune, sciziparitate sau nmugurire. Reproducerea prin sciziparitate (diviziune direct) presupune mprirea celulei n dou pri aproape egale, n urma acestui proces rezultnd dou celule fiice. nmulirea sexuat are loc dup mai multe diviziuni simple, prin copulare ntre gamei sau, n cazul speciilor din Cl. Ciliata, prin conjugare. Copularea const n unirea a doi gamei identici (isogamie) sau diferii (heterogamie) din punct de vedere morfologic, cu formarea unui zigot. n urma contopirii gameilor iau natere zigoii, care, n condiii neprielnice, se transform n zigochiti sau chiti de repaus, care au o mare rezisten la temperaturi nefavorabile, concentraii mari de sruri solubile, uscciune sau acumulare n mediul ambiant al unor factori nocivi. La revenirea condiiilor favorabile, din zigochiti apar indivizi obinuii.

Conjugarea apare la ciliate i const n unirea temporar printr-o punte plasmatic a doi indivizi, realizndu-se, astfel, un schimb reciproc de nuclee urmat de o contopire a nucleului introdus cu cel preexistent n celul. 2.6.4. Nutriia protozoarelor Nutriia este autotrof, la speciile care conin clorofil (Cl. Flagellata), i heterotrof (osmotrof sau fagotrof), n cazul celorlalte protozoare. Speciile heterotrofe pot fi: saprozoice, utilizeaz substanele organice moarte; holozoice, se hrnesc cu microorganisme (bacterii, alge i protozoare). Majoritatea protozoarelor sunt holozoice i, prin aceasta, pot limita populaia bacterian a solului. Amoebele nglobeaz hrana cu ajutorul extensiunilor plasmatice iar ciliatele i procur hrana prin invaginri de diferite forme (citostom, citofaringe). Digestia hranei solide se face n vacuole digestive iar hrana lichid este absorbit osmotic. 2.6.5. Sistematica protozoarelor n actualul sistem de clasificare, protozoarele sunt ncadrate n Regnul Protista, ncrengtura Protozoa cu clasele: Flagellata (Mastigophora) sunt protozoare prevzute cu flageli ca organite de micare (gr. mastigos flagel). n condiii nefavorabile, unele specii i pot pierde flagelii i se pot deplasa pe stratul solid printr-o micare de curgere (trre), caracteristic rizopodelor. Flagelatele includ grupe de organisme cu apartenen fie la regnul vegetal (fitoflagelate), fie la regnul animal (zooflagelate). Ca reprezentani sunt genurile Bodo i Euglena. Rhizopoda (Sarcodina) sunt protozoare care au corpul celular nud, cu form instabil, care formeaz chiti. Ele emit pseudopode temporare, care le servesc att pentru deplasare, ct i pentru nglobarea hranei. Unele specii pot fi protejate de o cochilie cu una sau mai multe deschideri. Cele mai rspndite genuri sunt Negleria i Amoeba. Ciliata (Infusoria) cuprinde protozoare care se mic cu ajutorul a numeroi cili, care sunt excrescene protoplasmatice. Ciliatele prezint cel

puin dou nuclee diferite, att morfologic, ct i funcional. Din acest grup, ca reprezentani, citm: Paramoecium, Balantiophorus i Colpoda. Sporozoa include organisme unicelulare parazite, caracterizate prin apariia n timpul ciclului de dezvoltare al stadiului de spor. Ca reprezentani sunt genurile Lankesterella i Schellackia. Cnidosporidia (Amoebosporidia) cuprinde specii unicelulare parazite.

(a)

(b)

(c)

Fig. 53 Protozoare: (a) Euglena sp.; (b) Amoeba sp.; (c) Paramoecium sp.

2.6.6. Rolul protozoarelor n natur Rolul protozoarelor n sol este secundar fa de cel al bacteriilor i ciupercilor. Ele sunt, n majoritate, prdtori, ce se hrnesc cu bacterii i se gsesc n sol, pn la 15 cm adncime, ntr-o densitate care variaz ntre cteva sute i pn la 10.000 de exemplare la 1 gram de sol. Ca microprdtori, protozoarele contribuie la diminuarea numrului de bacterii n sol. n acelai timp, s-a constatat c, prin moartea lor, protozoarele pun la dispoziia microorganismelor surse nutritive, care stimuleaz creterea numrului acestora n sol. n unele experiene cu Azotobacter, n culturile la care s-au adugat protozoare (Colpidium colpoda), s-a fixat mai mult azot dect la culturile martor. De aici, se trage concluzia c protozoarele, fagocitnd bacteriile, foreaz colonia s produc mai multe celule tinere, care sunt mai active n fixarea azotului molecular. Pe de alt parte, se presupune c protozoarele ar elimina n mediu de cultur unele substane stimulatoare pentru dezvoltarea bacteriilor. Dup ali autori, n afar de aciunea indirect asupra biologiei solului, protozoarele ar contribui i la formarea humusului.

2.7. Diatomeele Diatomee (gr. dia de-a cureziul; temnein a tia) clas de alge fotosintetizante, unicelulare, brune-glbui, care particip la formarea fitoplanctonului. Prezint o nutriie de tip autotrof, iar nucleul este de tip eucariot. 2.7.1. Morfologia diatomeelor Diatomeele sunt microorganisme solitare sau unite n colonii sub form de filament sau fund (Fragillaria spp.), evantai (Meridion spp.), zigzag (Tabellaria spp.) sau stea (Asterionella spp.). Multe diatomee secret o substan mucilaginoas, care acoper peretele silicios i care servete ca mijloc de ataare a celulelor n colonii. Substana mucilaginoas poate fi utilizat i pentru ataarea diatomeelor de substrat. Celulele mai pot fi unite n colonii prin diferite excrescene ale frustulei. Dimensiunea diatomeelor variaz de la un m la mai mult de 2000 m, dar cele mai multe se ncadreaz n intervalul 10 - 100 m. 2.7.2. Structura diatomeelor O trstur caracteristic a algelor diatomee este c acestea sunt nchise ntr-un perete celular pectocelulozic, format din dou teci silicioase (epiteca i hipoteca), numit frustula (schelet extern). Fiecare teac este format dintr-o valv i un inel conectival. Epiteca este mai mare comparativ cu hipoteca, astfel c cele dou teci se suprapun asemenea unei plci Petri, mbinarea realizndu-se prin marginile libere ale inelelor conectivale (Fig. 58). Frustula poate prezenta o serie de elemente structurale: puncte, striuri, coaste, cutri sau loje alungite, deschise n cavitatea celular. Suprafaa valvei poate fi reticulat, cu o serie de caviti, numite areole. Peretele areolei poate prezenta pori, prin care citoplasma comunic cu exteriorul. La unele specii din Ord. Pennales se observ prezena unor fisuri, care permit

comunicarea citoplasmei cu mediul extern i care poart numele de raf. La celelalte specii ale ordinului se gsete o pseudoraf. Frustulele de diatomee sunt, de obicei, foarte complicate i variate, iar modelele de ornamentaie reprezint un criteriu taxonomic important de clasificare. Membrana citoplasmatic separ citoplasma de peretele celular (faa intern a frustulei). Citoplasma diatomeelor prezint cureni citoplasmatici, iar n interiorul ei se gsesc organitele citoplasmatice. Nucleul este bine dezvoltat, are o form sferic sau lenticular i prezint 1-2 nucleoli. Citoplasma conine cromoplastide (cromatofori) n care, alturi de clorofil (a i c), se gsete -caroten, fucoxantin, lutenin i diatomin, pigmeni ce dau o culoare galben-brun. Din punct de vedere filogenetic, se crede c diatomeele fac trecerea spre algele brune, datorit existenei pigmentului diatomin (feofil), care mascheaz prezena clorofilei.

Fig. 59 Structura la Melosira spp. (dup Margulis i colab., 1999)

Diatomeele sunt organisme autotrofe, capabile de sinteza tuturor constituenilor celulari prin mijloace proprii, pornind de la surse simple anorganice de carbon i azot.

Deplasarea diatomeelor cu raf se poate realiza prin glisare cu ajutorul citoplasmei, care exud la nivelul acesteia. Speciile care nu prezint rafa, nu se pot deplasa i sunt dispersate pasiv de cureni n straturile de suprafa ale oceanelor. Adaptrile care favorizeaz plutirea includ: forma frustulelor i procesele care mresc raportul Fig. 58 Frustul de diatomee arie/volum, formarea coloniilor (CRPGL, Luxembourg) i nmagazinarea de grsimi sau uleiuri n celul (reduc greutatea specific total). Celula diatomeelor nu prezint flageli, cu excepia gameilor flagelai din timpul perioadei de reproducere sexuat. Din punct de vedere chimic, algele diatomee conin 80-90% SiO2. 2.7.3. Reproducerea diatomeelor Diatomeele se nmulesc asexuat prin diviziune binar i sexuat prin oogamie, isogamie sau anisogamie (heterogamie). Reproducerea prin diviziune binar (Fig. 60) presupune scindarea celor dou teci dup un plan paralel, astfel nct fiecare dintre cele dou celule fiice rezultate va avea cte o teac de la celula mam. Cealalt teac va fi rapid secretat de protoplast. Deoarece hipoteca celulei mam devine epiteca pentru celul fiic, creterea numeric a populaiei de diatomee determin o reducere a dimensiunii medii. Ca urmare a acestui fapt, jumtate din celulele nou formate vor suferi o reducere continu a dimensiunilor, iar celelalte celule vor avea aceleai dimensiuni, comparativ cu celula parental. Reproducerea asexuat se poate repeta de pn la opt ori pe zi, factorii limitativi fiind cantitatea de silice existent n mediu i dimensiunea celulei mam.

Mitoz
Fig. 60 Reproducerea asexuat la diatomee (dup MacDonald, 1869 i Pfitzer, 1869)

Dup o serie de diviziuni succesive, algele diatomee vor ajunge la o dimensiune minim (<1/3 din celula iniial), caz n care mitoza nu mai poate avea loc. Acest lucru induce reproducerea sexuat, care va restabili dimensiunea maxim a celulei de diatomee. Reproducerea sexuat (Fig. 61) este diferit la diatomeele centrice (Ord. Centrales) i penate (Ord. Pennales) i se realizeaz prin oogamie, isogamie sau anisogamie (heterogamie). Ciclul de via al diatomeelor este preponderent diploid (2n), stadiul haploid (n) fiind de scurt durat (n timpul nmulirii sexuate). Oogamia este un tip de proces sexuat caracteristic pentru diatomeele centrice, care const n contopirea gametului femel imobil cu gametul mascul mobil (prezint un flagel). n cazul diatomeelor penate, reproducerea sexuat se realizeaz prin isogamie sau, mai rar, prin anisogamie. Isogamia este o form de nmulire sexuat, n care cei doi gamei care particip la fecundare sunt identici din punct de vedere morfologic, n timp de anisogamia (heterogamie) se realizeaz prin copulaia a doi gamei diferi i ca mrime i form. n cazul Ord. Pennales, cu excepia genului Rhabdonema, reproducerea sexuat se realizeaz prin intermediul unor gamei imobili, nedifereniai din punct de vedere morfologic. Reproducerea sexuat este declanat de reducerea n dimensiune a frustulei. Cnd celulele vegetative (2n) ajung la dimensiunea minim, se iniiaz fenomenul de meioz, n urma cruia sunt produi gamei masculi i femeli. Dup fuziunea celor dou nuclee, diferite din punct de vedere

sexual, rezult zigotul, care ncepe s creasc n volum pn ajunge la dimensiunea celulei caracteristice pentru specia respectiv. Stadiul final poart numele de auxospor (gr. auxein a crete, sporos germen) i este caracterizat prin absena frustulei silicioase i prin capacitatea de a forma o nou celul vegetativ prin germinare.

Fig. 61 Reproducerea sexuat la diatomee: A reproducerea sexuat la Ord. Centrales; B - reproducerea sexuat la Ord. Pennales (dup Hasle and Syvertsen, 1997).

2.7.4. Sistematica diatomeelor Whittaker (1969) i Bayard (1978) plaseaz diatomeele n Cl. Bacillariophyceae, alturi de algele din Cl. Chrysophyceae (alge maro-aurii) i Cl. Xanthiophyceae (alge galben-verzi). Cele trei clase sunt ncadrate taxonomic n ncr. Chrysophyta, Regnul Protista i se caracterizeaz prin formarea de chiti endoplasmatici asemntori, secreia de silice, acumularea de grsimi i existena unui perete celular bipartit n anumite stadii de dezvoltare. Ali cercettori (Woese i colab., 1990; Margulis i Schwartz, 2000) subliniaz diferenele existente ntre clasele enumerate anterior (n special structura frustulei de diatomee) i au ridicat diatomeele la rang de ncrengtura separat, Bacillariophyta (sin. Diatomeae).

O mare parte din sistematica diatomeelor este bazat pe tipurile i modelele ornamentaiilor, care apar pe scheletul extern opalin sau frustula. Aceasta frustul are form de cutie cu teci (valve) suprapuse, cea mai mare fiind numit epiteca, iar cea mai mic, hipoteca. Structurile cele mai importante sunt reprezentate de pori (areole), arii hialine (clare), spini marginali i submarginali. Sunt cunoscute peste 250 genuri de diatomee (70 genuri fosile); acestea cuprind aproximativ 100.000 specii, dintre care peste 10.000 existente. Dintre genurile mai comune menionm: Amphipleura, Asterionella, Biddulphia, Coscinodiscus, Cymbella, Diatoma, Diploneis, Fragilaria, Melosira, Meridion, Navicula, Nitzschia, Pinnularia, Surirella i Thalassiosira. Diatomeele sunt divizate n dou ordine (dup Whittaker, 1969 i Bayard, 1978): Ord. Centrales prezint simetrie radiar (centrul structural este reprezentat de un punct). Ex: Fam. Coscinodiscaceae cuprinde pecii cu frustule discoidale, lenticulare sau globuloase, unite n colonii filamentoase. Celulele se prezint sub form de disc sau de tob, libere sau fixate, solitare sau unite n colonii laxe cu ajutorul unui mucilagiu. Valvele sunt circulare sau eliptice cu relieful ondulat tangenial sau concentric. Specii marine, salmastre sau dulcicole. Unele se fixeaz pe diferite suporturi umede sau pe soluri (Fig. 55).

Fig. 55 Cyclotella meneghiniana (www.pae.ugent.be)

Ord. Pennales prezint simetrie bilateral (centrul structural este reprezentat de o linie). Acest ordin cuprinde: 1. diatomee fr raf Exemplu : Fam. Fragilariaceae cuprinde diatomee penate de ape dulci i marine, ale cror celule sunt izolate sau reunite n colonii. Celulele pot fi alungite, drepte sau curbate, cu valve ornamentate cu striuri sau coaste transversale. Frustula este lipsit de zone intercalare i de septuri (Fig. 56).

Fig. 56 Fragilaria capucina var. amphicephala (http://craticula.ncl.ac.uk)

2. diatomee cu raf Exemplu: Fam. Naviculaceae cuprinde diatomee penate, care la ambele valve prezint cte o raf bine dezvoltat, sub forma unor fisuri. Rafa este situat pe o caren. Cuprinde 29 de genuri de ap dulce, salmastr sau marin. Unele specii se fixeaz pe soluri umede, pe ziduri sau pe diferite suporturi umede (Fig. 57).

Fig. 57 Navicula hamiltonii (http://craticula.ncl.ac.uk)

2.7.5. Rolul diatomeelor n natur Se gsesc n toate mediile marine, salmastre i de ap dulce, dar i n sol (adncimi < 0,25 - 1 m), ghea sau ataate de roci i alte substraturi din zonele de spargere a valurilor de lng ape. n oceanele actuale (adncimi <100 m), diatomeele sunt printre cei mai importani productori primari, iar o abunden ridicat a diatomeelor este tipic pentru cele mai fertile arii ale oceanelor. Diatomeele pot fi folosite pentru monitorizarea condiiilor mediului i n studiul calitii apei. 2.8. Ciupercile Ciupercile sunt organisme eucariote, heterotrofe, ubiquiste, extrem de bogate n specii ce prezint structuri i caractere biologice foarte diverse, adaptate modurilor de via saprofite, parazite sau simbiotice, fiind lipsite de pigmeni asimilatori. 2.8.1. Morfologia ciupercilor Aparatul vegetativ al diferitelor grupe taxonomice de ciuperci este divers constituit (Fig. 62). Astfel, la cele mai primitive ciuperci din clasa Chytridiomycetes, corpul vegetativ este unicelular, sub forma unei celule nude, format numai din citoplasm i nucleu i poart numele de gimnoplast. La un alt grup de ciuperci inferioare din cl. Plasmodiophoromycetes, corpul vegetativ este constituit dintr-o mas citoplasmatic mai dezvoltat, n care se gsesc numeroase nuclee neindividualizate n celule, ce poart numele de plasmodiu. Un alt tip de aparat vegetativ mai evoluat, denumit sifonoplast, se ntlnete la ciupercile din clasele Zigomycetes i Oomycetes, la care acesta se prezint sub form de tuburi simple sau ramificate continuie, fr perei transversali, care conin o mas de citoplasm i numeroase nuclee, nedifereniate n celule, denumit i sifonoplast cenocitic.

La ciupercile superioare din subncrengturile Ascomycotina, Basidiomycotina i Deuteromycotina, aparatul vegetativ poate fi unicelular ca la Fam. Saccharomycetaceae i poart numele de dermatoplast, iar la marea majoritate se prezint sub form de filamente simple sau ramificate, cu perei transversali sau septe, care separ celulele ntre ele. Filamentele acestea se numesc taluri filamentoase, carora li se mai d denumirea de micelii, iar ramificaiilor, aceea de hife miceliene. Septele sau pereii transversali, ce despart celulele talului filamentos, sunt prevzute cu un por central, prin care se face comunicarea ntre celulele vecine, prin masa de citoplasm. Cel mai evoluat tip de aparat vegetativ este alctuit dintr-o mpletire de taluri filamentoase, poart numele de tal masiv i este caracteristic ciupercilor din subncrengtura Basidiomycotina i unor ciuperci din subncrengtura Ascomycotina. Prin mpletirea filamentelor apar esuturi false, numite plectenchime, ce pot ndeplini diferite funcii (de protecie, de absorbie, de rezerv etc.).

(a)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

Fig. 62 Tipuri de aparate vegetative la ciuperci: (a) gimnoplast; (b) plasmodiu; (c) dermatoplast; (d) sifonoplast; (e) tal filamentos; (f) tal masiv (dup Lazr i colab., 1977).

2.8.2. Structura celular a ciupercilor Celula fungic este format din dou feluri de componente i anume din elemente neprotoplasmatice, cum sunt, membrana, vacuomul i substanele de rezerv, i din componente protoplasmatice, ca citoplasma, nucleul etc. 1. Peretele celular, examinat la microscopul optic, apare ca o structur omogen, ns la o examinare cu microscopul electronic prezint o structura stratificat. Dup Hunsley i Burnett, spre exemplu, miceliul matur la Neurospora crassa este constituit din mai multe straturi, dup cum urmeaz: stratul exterior, compus din glucan amorf este urmat de un alt strat reticular din glucan n amestec cu protein; al treilea strat este constituit, n principal, din protein, iar cel de-al patrulea este format din protein, n care sunt cuprinse i microfibrile de chitin. 2. Membrana citoplasmatic acoper citoplasma celulelor fungice i o separ de faa interioar a peretelui celular. Apare la microscopul electronic tristratificat, are o grosime variabil i funcioneaz ca o membran osmotic selectiv. 3. Vacuolele, puse n eviden prin colorarea cu rou neutru, sunt mai numeroase n celulele tinere, dar, cu vrsta, conflueaz ntr-o vacuol mare, ce ocup centrul celulei. Sunt separate de citoplasm printr-o membran simpl, denumit tonoplast, iar n interiorul lor se acumuleaz substane de rezerv sau care rezult n urma procesului metabolic. 4. Citoplasma celulelor de ciuperci se prezint sub form lichid, hialin, omogen, refringent i, uneori, la maturitate, cu aspect granular. n compoziia ei intr: lipide, glicogen, acid ribo nucleic, enzime, acizi organici, fosfai de fitosterine, zaharuri etc. n citoplasm, al crei coninut n ap este nsemnat, se desfoar majoritatea proceselor de metabolism; tot aici se gsesc vacuolele, ribozomii, reticolul endoplasmatic, mitocondriile i anumite vezicule subglobuloase, mici, cu substane de rezerv.

5. Nucleul, la ciuperci, este nconjurat de o membran nuclear dubl, ce prezint, din loc n loc, orificii. n interior se afl nucleoplasma i unul sau mai muli nucleoli. Substana caracteristic nucleului este acidul dezoxiribonucleic (ADN) iar numrul de cromozomi este mic i difer n funcie de specie. Avnd nuclee bine conturate, ciupercile sunt organisme eucariote. Nucleele la ciuperci sunt, de obicei, de form sferic sau ovoid i au dimensiuni relativ mici, ntre 0,75 m la Venturia inaequalis, 1-2 m la Mucoraceae i pot ajunge pn la 20 m. La ciupercile inferioare, cu aparatul vegetativ un plasmodiu, n citoplasma acestuia se gsesc mai multe nuclee ca i n sifonoplastul care nu prezint septe transversale. La ciupercile superioare din subncrengturile Ascomycotina i Basidiomycotina se pot gsi n celule un singur nucleu n faza haploidal i dou nuclee n cea dicariotic. 6. Reticulul endoplasmatic este alctuit din dou membrane, separate printr-un lumen; el poate fi sub form tubular sau sub form lamelar, mai evident n celulele tinere i n legtur cu membrana nuclear. 7. Ribozomii, denumii i granulele lui Palade, sunt formaiuni citoplasmatice, asociate reticului endoplasmatic. Ei sunt formai din ARN n proporie de pn la 65 %, numit i ARN ribozomal (ARNr), i din 35 % protein. 8. Aparatul Golgi este prezent n celulele ciupercilor, fiind format din uniti structurale morfologice, numite dichtiozomi, ce se gsesc n citoplasm. Are rol n procesul de sintez a polizaharidelor, particip la procesul de formare i cretere a membranei celulare i a vacuolelor, fiind ntlnit, mai ales, la ciupercile Oomycetes. 2.8.3. Organele de fixare i de absorbie ale ciupercilor Ciupercile saprofite se fixeaz pe substrat cu ajutorul unor filamente ramificate, numite rizoizi, cu ajutorul crora i extrag i substanele nutritive. Ciupercile parazite ptrund n esuturile gazdei, dar miceliul rmne n spaiile intercelulare trimind n celule haustorii care au rolul de a extrage din celule substanele hrnitoare (Fig. 63).

Haustori

Rizoizi

Fig. 63 Organe de fixare i absorbie la ciuperci

Haustorii sunt constituii dintr-un gt subire, format n momentul ptrunderii n celula parazitat, dup care urmeaz o parte mai dilatatterminal, ce poate avea forme sferice, ca la Cystopus sp., ramificate sau digitate, ca la genurile Peronospora, Erysiphe sau Puccinia. Unele ciuperci parazite, care se dezvolt la suprafaa organelor atacate ale plantei gazd, se numesc ectoparazite, iar miceliul lor este epifit. Aa este cazul ciupercilor din Fam. Erysiphaceae, la care miceliul se fixeaz de substrat cu ajutorul unor formaiuni ca nite ventuze, numite apresorii, din care se dezvolt mai departe micelii fine, ce strbat membrana celular a gazdei i formeaz apoi haustoriile n interiorul celulei parazitate. n ceea ce privete rspndirea miceliului parazit n esuturile gazdelor la ciupercile endoparazite, acesta are o dispersie limitat, provocnd infecii localizate, ca n cazul petelor produse de Polystigma rubrum. La alte grupe de ageni patogeni, infecia este generalizat, afectnd planta n totalitate sau mari pri din aceasta, ca n cazul atacului de Puccinia recondita sau Erysiphe graminis. n alte cazuri, spre exemplu la Verticillium dahliae, se produce o infecie a vaselor conductoare n zona coletului, provocnd o tracheomicoz, iar efectul parazitar este de vetejire, ce afecteaz toat planta.

Un alt aspect ce trebuie menionat este durata de via a aparatului vegetativ al agentului patogen n gazd. Din acest punct de vedere, exist ciuperci cu dezvoltare anual, cum este Erysiphe graminis, care, ntr-o singur perioad de vegetaie, i desvrete ntreg ciclul biologic. O a doua categorie o constituie ciupercile bianuale, care se dezvolt pe plante multianuale sau pe dou gazde diferite, cum este Puccinia graminis. Exist i ciuperci plurianuale, care au ca gazde plante perene, ca pomii fructiferi sau arborii de pdure, pe a cror organe atacate corpii de fructificare dureaz un numr mai mare de ani. Aa sunt ciupercile macromicete ce atac scoara i lemnul ca Stereum purpureum. La un mare numr de ciuperci din subncrengturile Ascomycotina i Basidiomycotina corpii de fructificare sau unele organe de rezisten sunt alctuii din filamente miceliene mai strns sau mai lax ntreesute, ce alctuiesc false esuturi, denumite plectenchime. Plectenchimele, care constituie taluri masive ale unor ciuperci macromicete, ndeplinesc funcii diferite i alctuiesc false esuturi, de cretere, de protecie, mecanice, de conducere, de rezerv, de excreie, de micare etc. Falsele esuturi de cretere sau formatoare sunt constituite din celule cu caracter embrionar, cu membrana subire, foarte bogate n citoplasm, care se divid activ i ndeplinesc funcia de cretere a talului. Falsele esuturi de protecie se gsesc la suprafaa talului masiv, venind n contact cu mediul extern. Elementele care alctuiesc aceste esuturi au membrana ngroat, prezentnd, uneori, i anumite excrescene, ornamentaii sau peri. La ciuperci, se pot deosebi mai multe feluri de esuturi de protecie i anume: Derm este o estur format din celule dispuse perpendicular pe suprafaa organelor ciupercii. Cutis este estura de protecie, ale crei elemente constitutive sunt dispuse paralel cu suprafaa organelor ciupercii. Cortex este o estur de protecie compact, dispus, de regul, la suprafaa unor fructificaii, apotecii, basidiofructe sau a scleroilor. Falsele esuturi mecanice au rol n susinerea talului, cum ar fi piciorul ciupercilor macromicetelor, i sunt constituite din elemente mecanice bine

difereniate, formate din celule cu membrana puternic ngroat, lipsite de coninut, ce sunt comparabile sclereidelor. Falsele esuturi conductoare se aseamn i au acelai rol cu esuturile de la plantele vasculare. Elementele ce alctuiesc aceste formaiuni sunt celule vii mult alungite, cu perei transversali subiri, prevzui cu pori i care prezint dilatri n dreptul septului. Falsele esuturi de rezerv au rolul de a nmagazina apa, hidraii de carbon, substanele proteice, grsimile etc.. Celulele n care se depune apa se numesc cistide, dar aceasta, n unele cazuri, se poate gsi i n spaiile intercelulare. Glicogenul i grsimile se depun n celule sub form de picturi, iar n membrane se depune hemiceluloza. La ciuperci, se cunoate c amidonul nu se gsete ca substan de rezerv. Pe lng aceste false esuturi de rezerv, ca organe speciale, mai au rol n acest proces i scleroii, bulbilii i rizomorfele, care sunt i organe de rezisten. Falsele esuturi de excreie sunt acelea prin care se face eliminarea unor produse de metabolism sub form de secreii sau excreii. Din categoria produselor de secreie amintim enzimele i hormonii, ce se elimin din corpul ciupercilor n procesul de parazitism. Substanele de excreie, ca oxalatul de calciu, carbonatul de calciu, unele substane gomoase, formate n procesul de asimilaie i de dezasimilaie, se elimin permanent din corpul ciupercilor pe msura formrii lor. Falsele esuturi de micare pot fi influenate de un excitant extern i pot provoca micri, denumite tropisme i tactisme. Pe lng acestea se mai cunosc la ciuperci i micri autonome, numite nastii. ntre tropisme se pot deosebi: Geotropismul, care poate fi pozitiv, n cazul organelor de fixare i de absorbie, cum sunt rizoizii, sau negativ, n cazul carpoforilor de la Hymenomycetales. Fototropismul este influena produs de lumin asupra unor organe de ciuperci; el poate fi pozitiv i se manifest asupra ascelor de la unele Discomycetes, care au tendina de a se orienta ctre lumin, sau a sporangioforilor de Pilobolus cristalinus, care, de asemenea, manifest aceeai tendin.

Chemotropismul reprezint tendina de atragere sau de respingere a unor organisme de ciuperci fa de unele substane chimice. Chemotropism pozitiv manifest numeroase ciuperci fa de glucide i zaharuri. Hidrotropismul este influena umiditii asupra ciupercilor. Se tie c, n diferite faze biologice, acestea au nevoie de o atmosfer aproape saturat n vapori de ap sau chiar de picturi pentru micarea i germinarea sporilor i iniierea procesului de infeciune. Haptotropismul reprezint micrile specifice pe care le exercit unele ciuperci ce au tendina de a apuca sau nlnui alte filamente, ca n cazul de la Peziza sp. Tactismele sunt micri libere ale sporilor mobili (zoosporilor) ale unor ciuperci sub influena unui excintant extern. n funcie de factorul excitant, putem avea: chemotactism, fototactism i hidrotactism. Nastiile sunt, de asemenea, micri autonome, dar care nu sunt provocate de un excitant extern. De exemplu, se consider ca nastii micrile de deschidere a fructificaiilor la unele Gasteromycete, a ecidiilor de la Uredinales, precum i micrile de eliminare a ascosporilor din asce sau de proiectare a bazidiosporilor de pe bazidii. 2.8.4. Formele de rezisten ale ciupercilor n situaia cnd condiiile de via nceteaz s mai fie favorabile, ciupercile au posibilitatea de a supravieui, trecnd n forme de rezisten, la care miceliul prezint membrana celular ngroat, coninutul citoplasmei mai bogat n substane de rezerv iar cel al apei este mai redus. n acest fel, ritmul metabolismului devine mai lent i permite supravieuirea pn la revenirea condiiilor favorabile. Uneori, apar i unele forme de rezisten cu o anumit structur, cum sunt: gemele, stromele, scleroii, rizomorfele sau clamidosporii. 1. Gemele sunt forme de rezisten ce apar, mai ales, la ciupercile din cl. Oomycetes, la care poriuni de sifonoplast se nconjoar cu o membran ngroat, coninutul n ap se reduce i, n acelai timp, cel al substanelor de rezerv sporete. Privite la microscop, gemele apar mai strlucitoare, mai refringente dect miceliul vegetativ.

2. Clamidosporii sunt asemntori cu gemele, dar se formeaz la ciupercile superioare, ca de exemplu la genul Fusarium. 3. Stromele reprezint formaiuni uneori de dimensiuni mai mari, rezultate din mpletirea miceliilor vegetative, lund aspectul de crust, ce se formeaz pe organele atacate ale plantelor. Stromele adpostesc adesea forme conidiene sau sexuate de nmulire i sunt viu colorate sau n brun ntunecat. 4. Scleroii (Fig. 64) sunt organe de rezisten, ce reprezint o mpletire de filamente miceliene difereniat, n stratul extern mai dens, paraplectenchimul, i mai lax n interior, ce reprezint prozoplectenchimul. Scleroii se formeaz fie n locul ovarelor florilor, fie la exteriorul i n interiorul altor organe ale plantelor atacate. Din germinarea scleroilor pot rezulta micelii vegetative, forme conidiene sau, la unele specii, apotecii cu asce i ascospori. 5. Rizomorfele sunt formaiuni ce rezult din nmnuncherea a mai multe filamente miceliene strns asociate, ce se formeaz pe prile subterane ale plantelor atacate. 2.8.5. nmulirea ciupercilor La ciupercile inferioare nu exist o diferen tranant ntre aparatul vegetativ i organele de mnulire. Astfel, la ciupercile din clasele Chytridiomycetes i Plasmodiophoromycetes, gimnoplatii i, respectiv, plasmodiile capt rol de nmulire, transformndu-se, pe cale holocarpic, n sporangi, ce conin spori asexuai. La ciupercile superioare, pe organele vegetative se formeaz, n mod difereniat, organe de reproducere, pe cale eucarpic. Ciclurile biologice ale Fig. 64 Scleroi de Sclerotinia sclerotiorum diferitelor grupe taxanomice sunt foarte diversificate i se

succed n timp n cadrul alternanei de faze. Formele de reproducere sunt denumite cu un termen generic spori, iar procesul de nmulire se poate realiza pe cale vegetativ asexuat i sexuat. I. nmulirea vegetativ este o form nespecializat, ce se realizeaz prin fragmente de miceliu, ce se disemineaz fie pe cale natural, fie n mod artificial de ctre om. Spre exemplu, odat cu lucrrile solului, unele fragmente de miceliu sunt desprinse i purtate cu piesele active ale agregatelor la distane uneori importante. Factorii naturali meteorologici au ca efect acelai rezultat. Alteori, unele specii de ciuperci, prin separarea celulelor miceliului, aa cum s-ar produce deirarea unui irag de mrgele, formeaz spori, cum sunt artrosporii, aleurisporii sau clamidosporii, care contribuie, de asemenea, la diseminare. Artrosporii sunt poriuni delimitate de miceliu, ce se nconjoar cu o membran groas i servesc ca organe de propagare. Un asemenea caz se ntlnete la Neurospora sitophila sau la Oidium lactis. Aleurisporii se formeaz terminal pe filamentele miceliene i se ntlnesc la genurile Aleurisma, Sepedonium etc. Clamidosporii se formeaz intercalar prin fragmentarea hifelor ciupercii, sunt prevzui cu perete gros i rezistent, adeseori cu ornamentaii specifice. Dermatoplatii ciupercilor din Fam. Saccharomycetaceae nmuguresc, iar aceste formaiuni poart numele de blastospori (Fig. 65).

Blastospor

Fig. 65 nmulirea vegetativ la drojdia de bere (Saccharomyces cerevisiae)

II. nmulirea asexuat Acest mod de nmulire se realizeaz prin organe difereniate, ce se formeaz n strns dependen de condiiile de nutriie i de clim, ntr-un moment determinant din dezvoltarea ciclului biologic al ciupercii. Organele de nmulire asexuat sunt denumite n termeni generici spori. Acetia au rol de nmulire i de propagare i reproduc faza asexuat, putnd, uneori, s ia i rolul de gamei i s contribuie la nmulirea sexuat. Dup posibilitile de micare, sporii ciupercilor pot fi de dou feluri; Sporii imobili sau aplanospori sunt lipsii de flageli sau cili i sunt dispersai n natur n mod pasiv; Sporii mobili sau planospori sunt prevzui cu 1-2 flageli, care asigur dispersarea n mediul acvatic. Din punct de vedere al modului cum se formeaz, sporii pot fi de dou feluri: Spori endogeni sau endospori, care se gsesc n interiorul unor organe speciale. Astfel, ciupercile din clasa Zygomycetes formeaz spori imobili n interiorul unor sporangi. La ciupercile din clasa Oomycetes, sporii sunt mobili i se formeaz n zoosporangi caduci, denumii, n mod curent, i false conidii. Exist i unele cazuri la ciupercile din subncrengtura Ascomycotina cnd o categorie de spori imobili se formeaz n organe speciale - ascele; formarea acestor spori este n legtur cu procesul sexual i ei se numesc ascospori. Sporii exogeni sau exosporii se formeaz la exteriorul unor organe speciale, difereniate n funcie de faza n care se gsesc ciupercile respective. Aa, unii spori haploidali se formeaz la captul unor filamente cu conformaie deosebit, ce se numesc conidiofori, iar sporii poart numele de conidii (Fig. 66). Sporii exogeni, denumii basidiospori, se ntlnesc la subncrengtura Basidiomycotina; ei se formeaz la exteriorul basidiilor, dup procesul de sexualitate (meioza), i ca i ascosporii sunt spori haploidali.

Spori (conidii) Spori (conidii)

(a)

(b)

Fig. 66 nmulire asexuat prin spori la genurile Aspergillus (a) i Penicillium (b)

III. nmulirea sexuat Asupra problemei sexualitii la ciuperci s-au elaborat nc din secolul al XIX-lea i n cursul celui de al XX-lea lucrri, studii importante i sinteze, cum sunt cele ale unor autori ca: Clausen (1906), Guillermond (1913), Killian (1921), Kniep (1928), Gumann (1940), Moreau (1952), Ainsworth i Sussman (1973) etc. Ca i la organismele mai evoluate i n ciclul de via al ciupercilor exist dou faze i anume, o faz haploidal sau haplofaza, reprezentat prin celule cu n cromozomi i faza diploid sau diplofaza cu celule cu 2n cromozomi. Trecerea de la faza haploidal la cea diploid se face prin procesul de fecundaie (F) iar prin meioz - diviziunea reductoare (R) - se face trecerea de la diplofaz din nou la haplofaz. n procesul de fecundaie se ntlnesc dou etape i anume: plasmogamia (P) care const n contopirea citoplasmelor gameilor i kariogamia (K) care const n fuzionarea celor dou nuclee. Celulele n care are loc desvrirea procesului sexuat prin kariogamie se numesc zeugite, iar acelea n care se produce diviziunea reductoare - meioza (R) se numesc gonotoconte. Aceste dou procese se produc n mod diferit i anume la ciupercile inferioare din cl. Chytridiomycetes i Plasmodiophoromycetes kariogamia urmeaz imediat dup plasmogamie, rezultnd un nucleu diploid al zigotului. La aceste ciuperci, diplofaza este variabil ca durat, dup care, prin diviziunea reductoare, se revine la faza haploidal.

La ciupercile mai evoluate din subncrengturile Ascomycotina i Basidiomycotina, plasmogamia este separat de kariogamie n timp i spaiu, ntre ele intercalndu-se o faz intermediar, denumit dikariofaza, ce este reprezentat prin miceliu secundar cu celule cu cte dou nuclee. Aceast faz intermediar - dikariofaza este foarte scurt la ciupercile din clasele Zygomycetales i Oomycetales, este de mai lung durat la Ascomycotina, fiind reprezentat prin hifele ascogene, i este de lung durat la Basidiomycotina unde constituie miceliul secundar i miceliul teriar al carpoforilor. Sexualitatea ciupercilor este caracterizat printr-o particularitate i anume existena multipolaritii. Din acest punct de vedere, ciupercile pot fi homotalice i heterotalice, fenomen descoperit de Blakeslee la Mucoraceae. Autorul a demonstrat c ciuperca Sporodinia grandis este homotalic, pentru c poate forma zigoi n culturi monosporale, ceea ce denot c organele sexuale + i - se gsesc pe acelai tal. Alte ciuperci, ca Mucor mucedo, Mucor racemosus, Rhizopus nigricans, nu pot forma zigoi. Pentru a se produce fructificaii sexuate trebuie puse n contact dou culturi provenite din spori de sexe diferite i atunci zigoii se formeaz la zona de confluen a miceliilor de sexe diferite. Altfel, ciupercile heterotalice formeaz numai sporangi ce reprezint faza asexuat de dezvoltare. Heterotalismul este un fenomen care nu se ntlnete numai la ciupercile din subncrengtura Zygomycotina, ci i la cele din subncrengturile Ascomycotyna i Basidiomycotina. Acest fenomen se datoreaz segregrii caracterelor sexuale ce are loc atunci cnd se produce diviziunea reductoare (meioza) n timpul germinrii zigotului, n asc i n basidie. Pe lng bipolaritatea sexual a numeroase ciuperci se mai cunoate i sexualitatea tetrapolar, aa cum se ntlnete la Schizophyllum commune. Acest fenomen nu trebuie confundat cu dimorfismul sexual al ciupercilor inferioare, singurele la care se mai manifest deosebiri morfologice ntre sexe. Dup Hartmann i Gumann, formele sexualitii la ciuperci sunt de patru tipuri fundamentale, ntre care se deosebesc amfimixis, automixis, pseudomixis i apomixis, fiecare dintre acestea cuprinznd mai multe forme:

1. Amfimixis este procesul ce se produce prin copularea a dou celule sexuale nenrudite ntre ele; aici sunt cuprinse formele de procese sexuale: Merogamia sau gametogamia ce se realizeaz prin copularea ntre doi gamei, ca la ciupercile Synchytrium sau Olpidium. Gametangiogamia sau gametangia, la care copularea se face ntre gametangii, ca la ciupercile din clasele Zygomycetes i Oomycetes sau la ciupercile superioare din subncrengtura Ascomycotina. Hologamia la care ntreg corpul vegetativ se transform n organ de nmulire, aa cum se ntmpl la ciupercile inferioare. 2. Automixis este procesul ce se produce ntre dou celule sexuale nrudite sau dou nuclee sexuale. Aici exist dou posibiliti i anume: Partenogamia la care copularea are loc ntre dou celule ale filamentului ascogenal, ca la Ascobolus citrinus. Autogamia la care are loc copularea celor dou nuclee, ca la Humaria granulata. 3. Pseudomixis la care copularea se face ntre dou celule vegetative; aceasta poate fi de mai multe feluri: Pseudogamie sau somatogamie, la care are loc copularea a dou celule vegetative ale miceliului ca la Corticium serum. Pedogamia la care copularea are loc ntre o celul matur i una tnr, ca la Saccharomycetaceae. Adelfogamie la care copularea se produce ntre celula mam i o celul fiic, aa cum se ntmpl la Zygosaccharomyces chevalieri. 4. Apomixis la care se produce dispariia copulrii i celulele sexuale se dezvolt mai departe pe cale vegetativ; aici sunt dou situaii: Partenogeneza la care se produce dezvoltarea celulelor sexuale haploide. Apogamia la care se realizeaz dezvoltarea celulelor sexuale diploide. Pentru a ilustra cele mai obinuite moduri de nmulire la ciuperci, vom lua cteva cazuri, ncepnd cu cele mai puin evoluate pn la cele superioare. Astfel, la clasa Chytrydiomycetes, procesul sexual este o merogamie sau gametogamie i are loc ntre doi gamei mobili, identici ca form, deci izogamei. La genul Allomyces sunt anisogamei, deci difereniai morfologic.

Aceste ciuperci inferioare sunt adaptate la viaa acvatic sau triesc n medii interne ale gazdelor, unde umiditatea este asigurat. La ciupercile mai evoluate care s-au desprins de mediul acvatic i s-au adaptat la mediul terestru, se ntlnete procesul sexual sub form de gametangiogamie care reprezint un proces de fecundaie superior. Astfel, la subncrengtura Zygomycotina gametangiile identice (izogamentangii) conin fiecare mai multe nuclee. Mai nti are loc copularea ntre gametangii, iar ulterior nucleele fuzioneaz cte dou; n urma fecundaiei rezult un zigot cenocitic cu nuclee diploide (Fig. 67). La ciupercile din clasa Oomycetes din Familia Peronosporaceae, gametangii sunt difereniai din punct de vedere morfologicheterogametangii. Gametangiul femel - oogonul conine o mas de ooplasm multinucleat, iar gametangiul mascul - anteridia, de asemenea, conine mai multe nuclee. Gametangiile intr n contact printr-un canal de conjugare prin care anteridia i vars coninutul n oogon. n urma fecundaiei rezult un oospor ce poate fi cenocitic, ca la Cystopus bliti, sau conine un singur nucleu diploid, ca la Pythium de Baryanum. La ciupercile mai evoluate din subncrengtura Ascomycotina, procesul sexual se produce tot ntre gametangii, n care gametangiul femel, numit ascogon, conine o mas de citoplasm i numeroase nuclee, iar gametangiul mascul, denumit anteridie, este, de asemenea, multinucleat. Procesul de copulare ntre gametangii are loc prin intermediul trichoginului n dou etape n care prima este plasmogamia (P), n urma creia apare faza intermediar dikariofaza, reprezentat prin Zigot miceliu secundar al hifelor ascogene. Kariogamia se produce mai trziu n asca tnr, prin unirea a dou nuclee, cnd apare diplofaza. Exemplul tipic al acestui Fig. 67 nmulire sexuat la Rhizopus sp. mod de nmulire l constituie cu formarea zigotului ciuperca Pyronema confluens la

care procesul a fost studiat de ctre Harper (1900). Treptat, la Ascomycetele superioare se observ o reducere progresiv, n special a anteridiei, rolul acesteia fiind luat de celulele vegetative, ca n cazul de la Taphrina (Fig. 68).

Fig. 68 nmulirea sexuat la Taphrina deformans cu formarea ascelor libere.

La ciupercile din subncrengtura Basidiomycotina, ordinele Ustilaginales, Uredinales i Hymenomycetales, nu se mai difereniaz gametangii pe miceliul vegetativ haploid i copularea are loc ntre celule vegetative sub form de somatogamie sau pseudogamie. n concluzie, pe msur ce ciupercile sunt mai evoluate procesul sexual se simplific, organele sexuale se reduc i sunt nlocuite prin celule vegetative care preiau funcia sexual, aa cum se ntmpl la ascomicetele superioare i, mai ales, la Basidiomycotina. Simplificarea procesului sexual la ciuperci reprezint o adaptare la via n mediul terestru precum i la cel saprofitic sau parasitic din natur. n funcie de evoluie, rezultatul procesului de fecundaie la ciuperci capt aspecte morfologice difereniate i denumiri corespunztoare. Astfel, la cl. Chytridiomycetes i Plasmodiophoromycetes, produsul de fecundaie se numete zigozoospor, la subncrengtura Zygomycotina poart denumirea de zigot, la clasa Oomycetes este denumit oospor, la subncrengtura Ascomycotina se numete asc, la subncrengtura Basidiomycotina este basidia. 2.8.6. Alternana de faze la ciuperci

Haplofaza, dikariofaza i diplofaza se succed n cursul ciclului de dezvoltare ntr-o alternan de faze care este specific anumitor grupe de ciuperci. Schema general a acestei alternane, reprezentat dup Guman, se prezint dup cum urmeaz. Astfel, ciupercile din subncrengturile Mastigomycotina i Zygomycotina triesc n haplofaz, sunt deci haplobionte; dikariofaza este aici absent. Ciupercile din subncrengtura Ascomycotina triesc, n cea mai mare parte, n haplofaz dar prezint i dikariofaz ce este reprezentat prin filamente ascogene; la acest grup, diplofaza este de scurt durat. La ciupercile din subncrengtura Basidiomycotina, durata dikariofazei este preponderent asupra haplofazei; acestea se numesc ciuperci haplo-dikariobionte. Tot n aceast grup se mai ncadreaz ciupercile din ordinul Taphrinales. O categorie aparte o constituie grupa ciupercilor haplodiplobionte, la care dikariofaza este foarte scurt, iar diplofaza este preponderent asupra haplofazei. Acest tip de alternan de faze se ntlnete la unele Saccharomycetaceae. Ciupercile din subncrengtura Deuteromycotina, neavnd ciclul biologic complet, sunt lipsite de faza de nmulire sexuat. Unele, fiind mai atent studiate, sunt trecute n uniti sistematice superioare, dup ce li se descoper ciclul complet. 2.8.7 Nutriia ciupercilor Ciupercile sunt organisme vegetale lipsite de pigment trofic, deci nu sunt capabile de a face sinteza substanelor nutritive i, din aceast cauz, se dezvolt pe substrat organic viu sau neviu, fiind heterotrofe. Corpul ciupercilor este constituit din macroelemente, ntre care sunt: carbonul, oxigenul, hidrogenul, azotul, fosforul, sulful, siliciul, potasiul, sodiul, calciul, magneziul, fierul, manganul etc. De asemenea, n compoziia corpului lor se mai gsesc i microelemente ca: borul, florul, aluminiul, titanul, cobaltul, nikelul, zincul ce au rol de catalizatori ai proceselor de metabolism. Unele elemente, ca mercurul, cuprul, plumbul, argintul etc. sunt nocive pentru ciuperci servind ca baze toxice la prepararea fungicidelor.

Principala surs de carbon o constituie glucidele i zaharurile, dintre care, n special, sunt utilizate hexozele i pentozele. Unele specii de Fusarium pot folosi i alcoolii ca: alcoolul etilic, metilic, propilic sau butilic. Alte ciuperci pot descompune unele polizaharide ca: amidonul, celuloza sau hemiceluloza sau pot folosi i carbonul din unele lipide. Ca surs de azot, ciupercile pot utiliza azotul atmosferic, azotul amoniacal, azotul nitros i nitric sub form de nitrii i nitrai ca i azotul organic sub form de amide, amine, aminoacizi, peptone i proteine. ntre ciupercile ce pot utiliza azotul atmosferic sunt: Aspergillus niger, Penicillium glaucum, Alternaria tennuis, Rhizopus nigricans, Cladosporium herbarum etc. Azotul amoniacal sub form de sruri de amoniu este folosit de unele Saccharomycetaceae, Mucoraceae, precum i de Botrytis cinerea sau de Aspergillus niger dar unele Mucoraceae pot folosi i azotul nitric sub form de nitrai. n ceea ce privete azotul organic, pot fi utilizate de ctre ciuperci fie ureea, acidul uric sau guanidina, dintre compuii simpli sau aminoacizii, peptonele i albuminele sub form de compui mai compleci. Ca surse de fosfor, sunt utilizai fosfaii din sol sau surse organice ca lecitina i fitina. Sulful este folosit ca produs mineral sub form de sulfai de fier, zinc, amoniu, sodiu etc. sau ca sulf organic din produse ca cistein, cistin, glutation, peptone etc. Elementele necesare ciupercilor trebuie utilizate n concentraii optime, dozele prea mari fiind nocive iar cele prea mici nefiind suficiente pentru desfurarea normal a metabolismului. Ciupercile mai au nevoie pentru edificarea organismului lor i de unele substane stimulatoare de cretere ce intr n compoziia mediilor nutritive n cantiti foarte mici, ntre care sunt vitaminele, hormonii, auxinele, numite i factori auximoni. Unele ciuperci sunt capabile s sintetizeze unele vitamine, ca B, B1, B2, B6, C, K, D etc., ele dezvoltndu-se bine pe medii artificiale. Alte ciuperci, care nu-i pot sintetiza aceste vitamine, nu se dezvolt dect dac n mediile nutritive se adaug vitaminele respective.

Dup modul lor de nutriie, ciupercile se mpart n patru categorii i anume: Ciupercile parazite obligate duc o via strict parazitar, neputndu-se dezvolta pe substrate nevii i nu pot fi, deci, cultivate pe medii artificiale. Din aceast categorie fac parte Peronosporaceele, Erysiphaceele i Uredinalele. Ciupercile saprofite facultative duc, de obicei, o via parazitar, dar, n anumite condiii, pot tri i pe substraturi nevii, ca n cazul speciilor: Phytophthora infestans, Pythium de baryanum, Endostigme inaequalis. Ciupercile parazite facultative se comport, n mod obinuit, ca saprofite i devin parazite n anumite condiii, cum sunt diferite specii ale genurilor: Fusarium, Verticillium, Cladosporium, Alternaria etc. Ciupercile saprofite obligate se dezvolt exclusiv pe substraturi nevii, cum sunt numeroase specii de Mucoraceae, Aspergillaceae, unele specii din subncrengtura Ascomycotina i din Basidiomycotina. 2.8.8. Originea i evoluia parazitismului la ciuperci Prin fenomenul de parazitism se nelege convieuirea nearmonioas ntre dou organisme ce sunt unul fa de altul n stare de dezechilibru biologic, organismul parazit fiind acela ce ia de la gazda sa substanele nutritive de care are nevoie. Cu ct relaiile de parazitism sunt mai evoluate, cu att raporturile dintre cei doi parteneri sunt mai strnse. O prezentare sintetic a problemei parazitismului a fost fcut de Kuprevici, n lucrarea sa : Fiziologia plantei bolnave n legtur cu problemele generale de parazitism. Nutriia saprofit se consider a fi cea iniial, iar formele parazite deriv din cele saprofite. Apariia parazitismului s-a produs prin modificarea i adaptarea la modul de hrnire pe substraturi diferite, pe baza variabilitii sistemului de fermeni, secretai de ciuperci. La ciupercile saprofite, sistemul de fermeni este mai bogat, n timp ce la cele parazite sistemul enzimatic este mai restrns i mai specializat.

n prezent, se consider c, la ciuperci, treptele de trecere de la saprofitism la parazitism sunt urmtoarele: saprofite obligate - parazite facultative - saprofite facultative - parazite obligate. n acest cadru, se consider c, n scara parazitismului, ciupercile cu o specializare larg i cu stadii saprofite n ontogenez sunt forme inferioare, n timp ce paraziii obligai, cu o specializare ngust, sunt cele superioare. Creterea filamentelor miceliene este strict apical, comparativ cu creterea intercalar, cunoscut la alte organisme filamentoase. Apexul hifelor este bogat n vezicule ce conin hidrolaze i sintezaze, necesare creterii n lungime. Acumularea apical a veziculelor implic o circulaie acropetal a coninutului citoplasmatic, afluxul de elemente nutritive realizndu-se din regiunile mature n zonele de cretere. Dac veziculele purttoare de enzime de cretere sunt prea numeroase, apar ramificaii laterale la civa m distan de apex. La un moment dat, apare o concuren trofic ntre axul principal i ramificaiile principale, secundare sau teriare, dat, n principal, de coninutul mai sczut al mediului n elemente nutritive. 2.8.9. Cerine fa de mediu Temperatura. Majoritatea ciupercilor sunt mezofile, cu un optim de cretere situat ntre 25 - 35oC. Unele specii sunt termotolerante (20 - 50oC). Temperatura maxim limit de dezvoltare este de 60 - 62oC. Ciupercile termofile joac un rol important n procesele de degradare a compostului. PH-ul. Majoritatea ciupercilor pot s se dezvolte ntr-o zon de pH cuprins ntre 4,5 i 8. Optimul fiind situat ntre 5,5 i 7,5. Exist specii de ciuperci acidofile cu cretere la un pH inferior lui 4,5 sau acido-tolerante. Aeraia.Unele specii de ciuperci sunt microaerofile, altele sunt strict anaerobe, dar majoritatea sunt aerobe. 2.8.10. Sistematica ciupercilor

Ciupercile cunoscute i descrise pn acum pe plan mondial depesc cifra de 100.000 de specii i mereu apar contribuii micologice noi, care sporesc acest numr. Unitile sistematice crora aparin ciupercile ncep de la regnul Fungi, ncr. Eumycota i continu cu subncrengtura, clasa, ordinul, familia, genul i specia. n afar de acestea, la ciupercile parazite mai sunt formele specializate, rasele fiziologice sau biotipurile, acestea din urm deosebindu-se numai prin unele caractere biologice n legtur strns cu specia, cultivarul sau liniile plantelor gazde, obinute n procesul de ameliorare. n decursul timpului au fost elaborate mai multe sisteme de clasificare ale unor autori, dintre care menionm: Greis (1943), Moreau (1953), Gumann (1964), Goidanich (1963-1964), Alexopoulos (1966), Robert i Bouthroyd (1972). n prezenta lucrare se folosete sistemul de clasificare elaborat de Ainsworth, Sparow i Sussman (1973), dup care ciupercile se ncadreaz n ncr. Eumycota i subncr. Mastigomycotina, Zigomycotina, Ascomycotina, Basidiomycotina i Deuteromycotina.

Test de autoevaluare

1. Cyanobacteriile sunt: a) procariote b) eucariote c) entiti infecioase 2. Protozoarele sunt: a) animale unicelulare b) plante c) organisme unicelulare independente 3. Ciupercile au o nutriie: a) autotrof b) heterotrof c) paratrof Rezultate corecte: 1 - a; 2 - c; 3 - b.

Capitolul 3 INFLUENA FACTORILOR ECOLOGICI ASUPRA MICROORGANISMELOR


3.1. Influena pH-ului Majoritatea microorganismelor care alctuiesc micropopulaia solului prefer valori de pH ct mai aproape de neutru. Aa se explic faptul c n solurile cu reacie neutr se ntlnete cea mai bogat, mai variat i, n acelai timp, mai valoroas microflor. Din punct de vedere al preferinei fa de anumite valori de pH, microorganismele se mpart n mai multe grupe: Microorganismele indiferente. n aceast categorie intr unele bacterii i majoritatea ciupercilor care, n culturi pure, se dezvolt n limite largi de pH. Ex. : Penicilium aculeatum prefer valori de pH cuprinse ntre 2 i 6, iar Trichoderma viride ntre 2 i 8. Microorganismele neutrofile prefer valori de pH ct mai aproape de neutru sau uor bazice. n aceast grup intr cel mai mare numr de microorganisme i cele mai importante specii i grupe pentru fertilitatea solului. Ex: genurile Azotobacter, Nitrosomonas, Nitrosococcus, Nitrobacter, Nitrococcus, Cytophaga, Bacillus, Streptomyces etc. Microorganismele acidofile. Acestea au dezvoltarea maxim la valori de pH 2-3 i cuprind specii bacteriene care oxideaz sulful (ex. Thiobacillus thiooxidans) i fierul (ex. Thiobacillus ferrooxidans). Microorganismele bazofile au cea mai bun dezvoltare la valori de pH peste 8; n aceast categorie intr bacteriile ce descompun ureea ( ex. Bacillus ureolitici). Ca o aplicaie practic, corectarea reaciei solurilor acide prin calcarizare stimuleaz activitatea microorganismelor valoroase i acest efect este cu att mai puternic cu ct solul neamendat a avut valori mai sczute de pH. Ciupercile microscopice sunt microorganisme care suport uor (chiar prefer) reacia acid a solului, concurnd, astfel, toate celelalte

microorganisme din solurile acide. n aceast situaie, pH-ul solului este un factor de reglaj al competiiei pentru hran. De asemenea, s-a observat c ntre coninutul de substane nutritive i reacia solului exist o corelaie dovedit prin schimbul de ioni. Acest raport de schimb ntre ionii de hidrogen produi de rdcinile plantelor este echivalent cu bazele absorbite prin schimb cu mineralele argiloase i coloizii organici. n cadrul descompunerii substanelor organice, procesul de dezalcalinizare i formare a acizilor duce la acidifierea solului, care este contracarat prin fenomene de mineralizare, degradare i unele msuri de fertilizare. Acidifierea solurilor produce o restructurare a grupelor de microorganisme, favoriznd ciupercile i bacteriile anaerobe. 3.2. Influena temperaturii Studiul influenei temperaturii asupra microorganismelor prezint dou aspecte importante - cunoaterea temperaturile cardinale, adic minima (Tm), optima (To) i maxima (TM), care permit creterea i dezvoltarea microorganismelor; - cunoaterea temperaturile letale, care impiedic dezvoltarea sau produce moartea microorganismelor. Temperatura este un factor foarte important pentru cantitatea de humus format n solurile din regiunile umede cu clim temperat. Referindu-ne la dinamica sintezei i descompunerii humusului, s-a constatat c odat cu scderea temperaturii scade i activitatea microbiotei solului. Limitele optime ale temperaturii pentru microorganismele din sol variaz ntre 20 i 30C, iar din punct de vedere al oscilaiilor de temperatur bacteriile au un grad foarte ridicat de adaptabilitate. Se tie c fiecare specie microbian are o anumit temperatur optim de cretere i anumite limite ntre care se desfoar n condiii normale viaa acesteia. n funcie de adaptarea la factorul termic, microorganismele pot fi: Microorganisme psihrofile, cu o temperatura optim de cretere inferioar valorii de 20C, au drept caracteristice urmatoarele valori de temperatur: Tm= 10 .... +5C; To = 10 15C i TM = 20 25C.

Din aceast grup fac parte majoritatea bacteriilor din genurile Pseudomonas, Flavobaterium, Alcaligenes, Acromobacter, Staphilococcus i Salmonella; drojdiile din genurile Candida i Rhodothorula i fungii filamentoi din genurile Alternaria, Cladosporium i Botrytis. Bacteriile adaptate la temperaturi sczute prezint anumite particulariti: coninut ridicat n lipide care intr n structura peretelui celular i a membranei citoplasmatice; coninut ridicat n acizi grai nesaturai; mobilitate ridicat; prezint capacitatea de a produce enzime care sunt mai active la temperaturi sczute. Microorganisme mezofile. Temperatura optim (To) este cuprins ntre 25 i 40C i nu se dezvolt n afara limitelor de 15 - 45C. n acest grup sunt cuprinse marea majoritate a bacteriilor, actinomicetelor i a drojdiilor fermentative. Ciupercile filamentoase au temperatura de cretere n jurul valorii de 26C, iar cea de sporulare de 30C. Microorganisme termofile sunt reprezentate de specii al cror metabolism este intens la temperaturi relativ ridicate. Au drept caracteristice urmatoarele valori de temperatur: Tm = 20 - 30C; To = 40 60C i TM = 70 90C. ntre bacteriile din aceast grup ntlnim bacteriile amonificatoare, celulolitice (Clostridium termocellulolyticum Clostridium termosaccharoliticum, Bacillus cellulosae hydrogenicus i Methylomonas methanica), amilolitice, sulfato-reductoare i altele. Dintre fungi, amintim Aspergillus fumigatus i Penicillium duponti. Trebuie subliniat c aceast clasificare este relativ deoarece multe microorganisme se dezvolt bine n limite largi de temperatur. Rezistena microorganismelor la temperaturi letale sau termorezistena acestora se refer la posibilitatea celulelor microbiene de a rezista pentru o perioad mai scurt sau lung de timp la temperaturi de 90 - 100C sau peste 100C. 3.3. Influena apei Activitatea biologic a unui sol tinde s se diminueze odat cu scderea coninutului n ap, dar contrar celor observate la plante, punctul de ofilire (pF = 4,2) nu constituie un prag indicator al ncetrii activitii microbiene. Se apreciaz c limita superioar oricrei activiti biologice

corespunde la pF= 5,5-5,6. Uscarea solului peste aceste valori antreneaz moartea tuturor microorganismelor. Aceast particularitate a microorganismelor fa de plantele superioare se explic, n primul rnd, prin presiunea osmotic mai ridicat din celulele microbiene; n al doilea rnd, bacteriile din sol nu pierd ap prin transpiraie ca plantele superioare, iar n al treilea rnd, suprafaa de absorbie la microorganisme fa de masa protoplasmatic egal este mai mare ca la plante. Moartea microorganismelor la umiditate sczut este determinat de mai muli factori, ca durata i nivelul uscrii, tipul microorganismului, tipul de sol i structura solului. n funcie de nevoile de ap, microorganismele se mpart n mai multe grupe: Microorganismele hiperxerofile sunt germeni al cror prag este superior valorii pF = 4,9. Aici, majoritatea microorganismelor sunt cele amonificatoare, amilolitice i cele care degradeaz substanele vegetale complexe. Microorganismele xerofile sunt cele al cror prag este cuprins ntre pF = 4,9 i 4,2. Aici se includ germenii care degradeaz celuloza, cei care oxideaz sulful, o parte dintre microorganismele amilolitice, amonificatorii ureei i cei care produc nitrificarea sulfatului de amoniu. Microorganismele hidrofile includ germeni care au pragul pF = 2. Aici se gsesc ageni care descompun carboximetilceluloza ce fixeaz azotul atmosferic precum i o parte dintre nitrificatorii sulfatului de amoniu. Existena pragurilor diferite ridic probleme de ordin practic, deosebit de importante pentru agricultur. Astfel, una dintre consecine este predominarea selectiv a unor procese microbiene asupra altora. Aceasta se ntmpl n cazul umiditii situate n vecintatea punctului de ofilire, cnd predominarea proceselor de celuloliz asupra amonificrii are drept urmare imobilizarea total sau parial a azotului mineral. De asemenea, n cazul umiditii sczute predomin procesele de amonificare, fapt ce antreneaz o acumulare de azot amoniacal, remarcat n solurile n curs de uscare.

Diferitele grupe de microorganisme au un grad variat de rezisten fa de uscciune. Astfel, ciupercile i bacteriile sunt mai sensibile, comparativ cu actinomicetele. 3.4. Influena energiei radiante Radiaiile electromagnetice au un spectru larg, includ radiaiile herziene, infraroii, vizibile, ultraviolete X i Y ce sunt caracterizate fiecare printr-o anumit lungime de und. Ele au dublu caracter, de fenomen ondulatoriu i de fascicol discontinuu de mici cuante de energie. Iradierea reprezint un bombardament cu fascicole de cuante de energie iar efectele ei asupra materialului iradiat sunt determinate de absorbia de ctre acestea a energiei radiaiilor i depind de energia cuantei i de natura materialului absorbant. Radiaiile herziene i infraroii cu lungimea de und mare ( >12.000 ) au un coninut de energie slab, astfel nct sunt incapabile s modifice chimic substanele pe care le absorb i, ca atare, energia lor este transformat n cldur. Radiaiile cuprinse ntre 12.000 (infrarou apropiat) i 2.000 (ultraviolet ndeprtat) au un coninut energetic suficient de ridicat, pentru a produce modificri fotochimice ale moleculelor care sunt absorbite. Radiaiile cu lungime de und sub 2.000 (X, Y i cosmice) au un coninut energetic att de ridicat, nct provoac ionizarea moleculelor pe care le ntlnesc, de unde i denumirea de radiaii ionizante. Efectul biologic al radiaiilor depinde de lungimea lor de und i de doza de iradiere. n funcie de aceti doi factori, iradierea poate avea dou efecte distincte i anume efectul letal asupra microorganismelor i efectul mutagen, ce const n modificarea unor caractere genotipice. Radiaiile luminoase acioneaz asupra celulelor prin intermediul unor reacii fotochimice cu constituenii celulari. Dintre acestea sunt bine cunoscute cele implicate n procesul de fotosintez i n fenomenele de fototoxie, ce se ntlnesc la microorganismele fototrofe. Lumina solar direct este bactericid, datorit nu att radiaiilor ultraviolet, ct nclzirii prin radiaiile infraroii i deshidratrii celulelor expuse. Radiaiile

ultraviolete provenite de la soare sunt reinute, n majoritate, de stratul de ozon din partea superioar a atmosferei. Radiaiile ultraviolete au o aciune antimicrobian net, ale crui efect depinde de intensitatea i durata iradierii. n cazul unei iradieri slabe i de scurt durat, se produc fie alterri limitate la nivelul materialului genetic, care se traduc prin apariia de mutaii, materializate prin pierderea unui caracter de lizogenie al celulei bacteriene sau o inactivare reversibil a unor procese metabolice. Acestea au ca efect blocarea temporar a multiplicrii celulare, deoarece, n urma unei iradieri intense, n celul survin modificri profunde, ireversibile, cu efect letal. Radiaiile ultraviolete cuprinse ntre 2300 i 2800 sunt cele mai active din punct de vedere biologic. Spectrul de aciune antimicrobian al acestora seamn foarte mult cu spectrul de absorbie al UV de ctre ADN, ceea ce a sugerat ipoteza cunoscut sub numele de teoria intei. Conform acesteia, efectul iradierii se exercit, n cea mai mare msur, prin intermediul ADN-ului. Radiaiile lovesc direct acest constituent celular i determin reacii fotochimice selective cu bazele din structura lui. Radiaiile corpusculare, ca razele gamma, dar i radiaiile electromagnetice Y i X produc efecte legate de bombardarea general a celulei. Cnd ntlnesc un microorganism, particulele active lovesc succesiv o serie de atomi din structura sa, desprinznd electroni de pe particulele respective. Se creeaz, n felul acesta, coloane de ionizare intens, ce determin alterarea sau distrugerea unor substane eseniale pentru celul i blocarea a diferite sinteze sau inhibarea procesului de diviziune. 3.5. Activitatea microbian a diferitelor soluri Variaia microflorei n funcie de factorii mai sus amintii duce la o difereniere a activitii biologice a diferitelor tipuri de sol. n ara noastr, cercetri de peste 20 de ani fcute de Papacostea au scos n eviden existena n solurile romneti a unor microorganisme indicatoare, care sunt caracteristice diferitelor tipuri de sol i care au permis din acest punct de vedere clasificarea solurilor n trei grupe.

1. Soluri cu Mucor rammanianus - de la cele foarte acide (de sub pajitile alpine) pn la cele acide, brune (de sub pdurea de molid). 2. Soluri cu Pseudomonas acidophilus i Pseudomonas aureofaciens, cum sunt solurile podzolite pseudogleizate. 3. Solurile cu Pseudomonas lemonieri i Pseudomonas aureofaciens, care sunt formate n climat mai uscat, n zone cu precipitaii ntre 400 i 600 mm pe an. 3.6. Profilul microbian al solului Avnd n vedere influena pe care aeraia o exercit asupra activitii biologice din sol, se constat c numrul genurilor de specii aerobe scade odat cu adncimea, avnd loc, n paralel, o cretere a numrului de specii anaerobe i/sau facultativ anaerobe. Nu putem ns atribui scderea numrului de germeni numai aeraiei; aceast distribuie reflect, n mare msur condiiile de nutriie pe care microorganismele le gsesc n sol i care sunt mai bine satisfcute n orizonturile de suprafa, datorit cantitii mai mari de humus i aprovizionrii mai frecvente cu resturi organice.

Capitolul 4 INTERRELAIILE ECOLOGICE NTRE ORGANISME


4.1. Interrelaiile dintre populaiile de microorganisme Rspndirea foarte larg a microorganismelor n natur face ca, frecvent, s se gseasc, n acelai habitat, mai multe specii ntre care se stabilesc interrelaii de complexitate variat. Aceste interrelaii ntre dou populaii microbiene pot fi: indiferente sau neutrale; pozitive sau sinergice; negative sau antagonice. I. Neutralismul poate fi definit ca relaie de indiferen ntre dou sau mai multe specii, datorit distanei mari ntre populaiile respective sau deosebirilor mari n ceea ce privete exigenelor nutritive, fapt ce le face s nu intre n competiie pentru acelai substrat. II. Interrelaiile sinergice sunt relaii benefice care cuprind o mare varietate de forme de la comensalism (sau metabioz) i mutualism (sau simbioz nutriional) pn la simbioza propriu-zis. 1. Comensalismul microbian sau metabioza este caracterizat prin creterea mpreun a dou specii de microorganisme ntr-un tip de relaie, n care una profit de asociere, pe ct vreme cealalt, n aparen, nu profit, dar nici nu este influenat negativ. Interrelaiile comensalice sunt, la rndul lor, de mai multe feluri, dup modul de aciune a unuia dintre parteneri: Un microorganism produce un metabolit sau un factor de cretere esenial pentru un alt microorganism. Astfel, bacteriile care oxideaz nitriii la nitrai (genurile Nitrobacter, Nitrospira, Nitrococcus) nu se pot dezvolta n sol dect n prezena bacteriilor care oxideaz amoniacul la nitrii (genurile Nitrosomonas, Nitrosococcus, Nitrosospira i Nitrosolobus) i care le furnizeaz substana necesar nutriiei. Un anumit microorganism poate degrada sau neutraliza un factor microbian activ asupra unei alte specii de microorganism.

Biodegradarea bacterian i fungic a fenolilor, a acidului benzoic sau a antibioticelor face posibil dezvoltarea microorganismelor sensibile la aciunea toxic a acestor substane. Unele microorganisme pot s sintetizeze i s elimine n mediu enzime (panicilinaza) care degradeaz anumite antibiotice, protejnd, n felul acesta, microorganismele penicilino-sensibile. Un anumit microorganism modifica proprietile fizice i chimice ale habitatului i creeaz condiii de cretere pentru microorganismul asociat. Spre exemplu, bacteriile aerobe consum din mediu oxigenul, crend, n acest fel, condiii favorabile microorganismelor anaerobe. O parte dintre microorganisme altereaz mediul din punct de vedere fizic, crend condiii de cretere pentru alte specii. Drojdiile osmofile, ce cresc n soluii concentrate de zahr, modific aceste soluii prin fermentaii sau oxidri, permind, astfel, dezvoltarea microorganismelor neosmofile sau mai puin osmotolerante. Un anumit microorganism poate modifica substratul nutritiv, fcndu-l accesibil altui microorganism. Spre exemplu, relaiile comensale ntre bacteriile celulozitice i speciile genului Azotobacter. Primele hidrolizeaz celuloza pn la compui intermediari (monozaharide, acizi organici, alcooli), asimilabili de ctre Azotobacter sp. 2. Mutualismul sau simbioza nutriional const n exercitarea de influene favorabile bilaterale ntre specii diferite, ce se dezvolt simultan pe acelai substrat. Acest tip de interrelaie se deosebete de simbioza propriuzis prin fapul c nu este obligatorie, permanent. El prezint un tip de interrelaie nutriional ntre dou specii de microorganisme, care au nevoie una de alta pentru realizarea unor metabolii eseniali, pe care niciuna dintre specii nu-i poate sintetiza. Astfel, Mucor ramanianum i Rhodotorula rubra nu se pot dezvolta separat pe medii lipsite de tiamin (vitamina B1). Dac sunt ns cultivate mpreun, nu necesit adugarea vitaminei B1 n mediu, deoarece Mucor sp. sintetizeaz o parte din vitamina B1 i anume nucleul tiazolic, iar Rhodotorula sp. cealalt parte nucleul pirimidinic. Un alt exemplu este cel referitor la interrelaiile dintre Lactobacillus arabinosus i Streptococcus faecalis pe un mediu lipsit de fenilamina (indinspensabil pentru Lactobacillus) i acid folic

(indinspensabil pentru Streptococcus), cnd fiecare bacterie sintetizeaz factorul de cretere necesar celeilalte. 3. Simbioza microbian Dou sau mai multe tipuri de microorganisme, ce se gsesc mpreun n acelai mediu, pot avea activiti combinate sinergic, diferite cantitativ sau calitativ de activitile acelorai organisme, crescute separat pe mediul respectiv. n urma acestui tip de asociere pot fi sintetizai unii compui organici cu structur complex sau pot fi degradate unele substane complexe. Fenomene de simbioz pot fi observate n asociaii de microorganisme de tipul lichenilor, la care se formeaz anumii acizi organici, pigmeni i corpi reproductori compleci, care nu pot fi elaborai de niciunul dintre cei doi parteneri considerai separat. III. Relaii de tip antagonic. n cadrul acestor relaii, cunoscute sub numele de antagonism microbian sau de relaii antagonice, una dintre specii se comport ca agresor i profit de pe urma asociaiei cu cealalt care este prejudiciat. Un microorganism sau o populaie de microorganisme poate avea o aciune negativ, de inhibare sau de distrugere a altui microorganism ori micropopulaii, prin diferite mecanisme: modificarea condiiilor de mediu; De exemplu, din activitatea microflorei solului pot rezulta cantiti mari de CO2, care inhib dezvoltarea altor microorganisme sensibile (Rhizobium sp.) i modific pH-ul mediului (devine acid). Astfel, sunt eliminate speciile sensibile la pH acid, cum ar fi cele din genurile Azotobacter, Nitrosomonas, Nitrobacter i unele actinomicete. Pe de alt parte, scderea potenialului oxido-reductor elimin din mediu numeroase specii aerobe. Ca alt exemplu amintim apariia alcoolului etilic sau a acidului lactic sau butiric n timpul unor procese fermentative, compui care provoac dispariia celorlalte micoorganisme din mediu fermentat. competiie; n natur, substanele nutritive se gsesc n cantiti limitate, iar microorganismele, adesea, intr n competiie pentru procurarea acestora. Acest tip de interrelaie poart numele de competitivitate nutritiv. Cnd

mediul este bogat n substane nutritive dar este limitat ca spaiu, poate s apar i o competiie pentru spaiu. Capacitatea competitiv a microorganismelor este determinat, n special, de viteza lor de cretere. Astfel, microorganismele cu o cretere rapid epuizeaz disponibilitile nutritive ale mediului i mpiedic dezvoltarea speciei cu cretere lent. Spre exemplu, unele bacterii nesporulate mpiedic dezvoltarea actinomicetelor. elaborarea unor substane toxice sau inhibatoare; Cele mai multe relaii antagonice se manifest prin producerea i eliberarea n mediu de ctre o specie microbian (specie antagonist) a unor substane inhibatoare sau toxice pentru o singur specie sau un grup de specii, situate n imediata lor apropiere. Efectele acestor substane pot fi bacteriostatic sau fungistatic i bactericid sau fungicid bacteriolitic. n mediile naturale, antagonismul prin antibiotice este foarte frecvent. Microflora solului conine numeroase microorganisme productoare de antibiotice: actinomicete (Streptomyces, Nocardia, Micromonospora), bacterii (Bacillus i Pseudomonas) i fungi (Penicillium, Aspergillus, Trichoderma, Fusarium, Sclerotinia). parazitism; Parazitismul este acel tip de relaie n care un microorganism este distrus, lizat, de un alt microorganism, care se dezvolt n interiorul i pe seama sa. n aceast relaie, parazitul este ntotdeauna mai mic dect gazda i rmne viu cel puin o scurt perioad de timp, multiplicndu-se n celula microorganismului gazd. Exemplu clasic de parazitism este infecia unei bacterii cu un bacteriofag virulent, care are ca efect final liza celulei bacteriene. De asemenea, se cunosc bacterii micolitice, care au capacitatea de a elibera chitinaza, o enzim ce distruge peretele celular al unor ciuperci microscopice, producnd moartea acestora. Multiplicarea microorganismului agresor are loc pe seama constituenilor celulari ai gazdei sale. prdtorism. Prdtorismul este o manifestare de agresiune, n care unele microorganisme mobile, lipsite de perete celular rigid, capteaz, ingereaz i

diger microorganisme de dimensiuni mai mici. Ca exemplu tipic avem protozoarele, care se hrnesc cu bacterii vii. n lumea microorganismelor, prdtorismul este limitat numai la speciile capabile de fagocitoz. Bacteriile, fungii i algele sunt excluse din cauza peretelui celular rigid, care mpiedic nglobarea altor microorganisme sau macromolecule. 4.2. Interrelaiile dintre plantele superioare i microorganismele din sol Plantele, dezvoltndu-se n mediul lor natural (solul) intr n concuren pentru hran cu microorganismele. nc din 1895, Caron a emis ideea c prezena bacteriilor n sol ar putea s aib un efect favorabil asupra plantelor de cultur i invers, c plantele, la rndul lor, ar avea o aciune favorabil asupra florei bacteriene din sol. 4.2.1. Influena sistemului radicular al plantelor asupra microflorei solului Pentru a putea prezenta relaiile care se stabilesc ntre sistemul radicular al plantelor i microbiota din sol este necesar s definim cteva noiuni: spermatosfer i rizosfer. Spermatosfera este zona de sol care nconjoar seminele n curs de germinare. Numrul microorganismelor din aceast zon (n special bacterii) este mult mai mare, comparativ cu zona cu semine aflate n repaus germinativ, deoarece, microorganismele utilizeaz substanele eliminate de semine n timpul germinrii lor i produc, la rndul lor, fitohormoni, care stimuleaz germinarea i apoi creterea plantei. Ulterior, spermatosfera se transform n rizosfer. Rizosfera este zona de sol care nconjoar rdcinile i este influenat de acestea din punct de vedere fizic, chimic i biologic, datorit aciunilor specifice dintre microorganismele solului i plantele superioare. Analiza probelor de sol recoltate de la diferite distane fa de rdcin i chiar de la suprafaa rdcinii a demonstrat influena favorabil pe care o

are sistemul radicular asupra bacteriilor. Existena zonalitii n rspndirea microorganismelor din sol, n jurul rdcinilor plantelor, a determinat pe cercettori s mpart rizosfera n mai multe zone. Astfel, Berezova (1950) distinge n cadrul rizosferei trei zone care se deosebesc ntre ele prin densitatea microbian dar i prin structura speciilor de microorganisme: Prima zon, numit rizoplan, rizosfera intern (rizosfera propriu-zis), zon radicular sau zon radicelar, are o raz de 0-0,5 cm i cuprinde microorganisme de la suprafaa rdcinilor; A doua zon, numit zona periradicular, cuprinde microorganismele ce se gsesc la o distan de 0,5 cm fa de rdcin; A treia zon, numit rizosfera extern, zona rizosferic sau edafosfer, cuprinde microorganisme ce se gsesc la o distan mai mare de 0,5 cm fa de rdcin. Aceast mprire nfieaz aspectul cantitativ al efectului de rizosfer dar influena rdcinilor asupra microflorei din sol se manifest i prin modificarea raportului ntre grupele de microorganisme, ceea ce duce la modificarea echilibrului microbian din sol. Prezena mai multor microorganisme (n special bacterii) n rizosfer dect n solul nerizosferic (fr rdcini) se numete efect rizosferic. Intensitatea efectului rizosferic la bacterii se exprim prin raportul R/S (rizosfer/sol nerizosferic). La actinomicete, ciuperci, alge i protozoare R/S este ntre 2 i 3. Concentraia speciilor bacteriene din rizosfer poate fi influenat de mai muli factori, dintre care amintim: specia plantei; coninutul solului n substane nutritive; faza de vegetaie; distana dintre suprafaa rdcinii i particulele de sol; zonele rdcinii. Creterea plantelor provoac schimbri n echilibrul dintre grupe de nutriie. Sunt stimulate microorganisme cu cerine nutritive simple i cele care folosesc aminoacizi; sunt inhibate cele ce depind de substane mai complexe, coninute de extractul de sol. Cook i Lockhead (1959) constat, de asemenea, c numrul de bacterii care necesit substane biologice active

este din ce n ce mai mic pe msur ce se afl mai aproape de rdcin iar bacteriile capabile s le sintetizeze au fost mai numeroase. Rovira (1956), n scopul de a demonstra c efectul de rizosfer se datoreaz secreiilor radiculare, n special, a adugat solului soluia nutritiv care coninea substanele eliberate n ea a rdcinilor de mazre, n timp ce, n paralel, alte probe s-au tratat numai cu soluia nutritiv simpl. El constatat c stimularera bacteriilor G sporogene este unul din cele mai stabile criterii de apreciere a efectului de rizosfer. n rizosfera plantelor predomin bacteriile nesporogene, G-, din genurile Pseudomonas, Flavobacterium, Achromobacter i Agrobacterium (n rizosfera plantelor leguminoase se regsesc i Rhizobium sp., Azotobacter sp., Azospirillum sp.). 4.2.2. Natura secreiilor radicelare i influena lor asupra structuriilor taxonomice a microflorei solului nc de la primele observaii privind existena densitii diferite a microorganismelor n jurul rdcinilor, Hiltner trage concluzia c secreiile eliberate de plantele leguminoase determin proliferarea altor grupe de microorganisme, comparativ cu cele de la plantele de mutar. Landergadh i Stenlind, lucrnd cu rdcini extirpate, au gsit c grul a secretat o serie de substane, ca glucoza, flavonoli i nucleotide, n timp ce mazrea a secretat numai glucoz i nucleotide. Rovira, analiznd compoziia materialului secretat de rdcinile de mazre i ovz, stabilete c mazrea elimin prin rdcini cantiti mai mari de aminoacizi dect ovzul; totodat, seria aminoacizilor este mai variat la mazre, cuprinznd un numr mai mare de compui aminici. Substanele biologic active sunt, de asemenea, eliminate de rdcini, contribuind la stimularea nmulirii n rizosfer a microorganismelor. Au fost puse n eviden tiamina (B1), biotina, riboflavina (B2), acidul pantotenic, acidul folic i acidul nicotinic. O analiz critic a rezultatelor i concluziilor la care au ajuns cercettorii care s-au ocupat cu studiul microbiologic i chimic al rizosferei plantelor scoate n eviden urmtoarele aspecte:

n jurul rdcinilor plantelor care vegeteaz normal exist un numr de microorganisme, care este mai mare de 10 ori, comparativ cu numrul celor existente n sol fr rdcini; mecanismul stimulrii microflorei se bazeaz pe capacitatea plantelor de a elimina prin rdcini substane cu rol energetic, plastic i de stimulare a creterii; n rizosfer predomin bacteriile G, nesporogene din genul Pseudomanas; selecia n cadrul microflorei rizosferice apare ca un efect al interaciunii microbiene. Microorganismele cu un potenial ridicat de sintez a substanelor biologic active, dotate cu capacitate mare de nmulire i capabile s se hrneasc cu produsele eliminate de rdcini, precum i cele care n cursul metabolismului lor produc substane care inhib nmulirea altora, ajungnd dominante n structura microbiologic a rizosferei. secreiile radiculare ale plantelor sunt influenate de condiiile de nutriie, de condiiile climatice (umiditatea solului, reacia mediului, lumin, temperatur, aeraie etc.). 4.2.3. Vrsta plantelor i efectul de rizosfer n stadiile timpurii, plantele nu influeneaz puternic microflora rizosferic, acest lucru realizndu-se dup ce plantele au atins stadiul de dezvoltare maxim. Krasilnikov (1958) i ali autori au gsit c numrul microorganismelor atinge apogeul cnd plantele sunt n stadiul de cretere activ, mai ales n faza de nflorit. Diferenele de rezultate se datoreaz metodologiei folosite i modului de interpretare dar, n principiu, efectul de rizosfer crete odat cu dezvoltarea plantelor i prezint fluctuaii n funcie de condiiile de mediu. 4.2.4. Micorizele Sub denumirea de micoriz (gr. mikes ciuperc, rhiza rdcin) se nelege o asociaie de tip benefic ntre ciupercile filamentoase i rdcinile sau rizoizii dicotiledonatelor superioare (plante lemnoase i ierboase), ntre

ciupercile filamentoase i rdcinile unor monocotiledonate (orhidee), precum i cu muchii (Bryophyte) i ferigile (Pteridophyta). Ciupercile de micoriz se dezvolt numai n solul din jurul rdcinii, ajungnd cel mult la suprafaa i n interiorul celulelor corticale radiculare. Prezena micorizelor se exteriorizeaz prin apariia pe rdcinile laterale ale plantei gazd a unor excrescene scurte i ramificate care nlocuiesc periorii absorbani i formeaz o psl de miceliu fungic care alctuiete, cu timpul, un adevrat manon periradicular, colorat variabil, ncepnd de la alb pn la brun sau negru. Rdcinle invadate de ciuperci sunt mai scurte dect cele normale i prezint o hipertrofie a celulelor corticale. Plantele furnizeaz ciupercilor de micoriz substane nutritive organice (glucide, vitamine .a.) i acestea favorizeaz, n schimb, absorbia apei i a substanelor nutritive minerale (P, N, K .a.). Micorizele sunt asociaii temporare, deoarece ciupercile mor la sfritul perioadei de cretere vegetativ a plantei. Dezvoltarea micorizei este determinat de nsuirile fiziologice ale partenerilor simbiozei i de condiiile de mediu, precum i de nsuirile fizice i chimice ale solului. Ciupercile care constituie micorize au o poziie sistematic diversificat, putnd fi ncadrate n urmtoarele subncrengturi: Mastigomycotina, Ascomycotina, Basidiomycotina sau Deuteromycotina. Dup raporturile ce se stabilesc ntre ciuperc i plant, micorizele sunt de trei feluri: Micorize ectotrofe. Ciuperca emite hife spre exterior (sol) i spre interior (rdcin), formnd, n acest mod, un manon micelian n jurul rdcinilor. Hifele emise spre interior ptrund n stratul cortical al rdcinilor la nivelul spaiilor intercelulare, formnd o reea, numit "mpletitura lui Harting (exemple: Boletus, Psalliota, Lactarius, Rusula, Marasmius). Sunt frecvente la arborii din familiile Pinaceae, Betulaceae i Fagaceae deoarece rdcinile lor nu prezint periori radiculari. Micorize endotrofe. n acest caz, miceliul ciupercii se dezvolt aproape exclusiv n interiorul celulelor corticale (scoar i epiderm) ale gazdei, dar pot fi ntlnite i n spaiul intercelular. Ele sunt mai frecvente dect cele ectotrofe i sunt ntlnite la plantele ierboase i lemnoase ale cror rdcini prezint periori radiculari (Rhizoctonia repens la orhidee i Phoma sp. la Calluna vulgaris iarba neagr).

Prezena ciupercii se manifest prin tuberizarea rdcinii, ca la orhidee. De obicei, ciuperca poate fi distins la examenul microscopic al rdcinii, n care formeaz structuri caracteristice sub form de arbusculi i umflturi terminale vezicule. n aceste structuri se depun grsimi de rezerv la nivelul celulelor corticale ale rdcinii. Pe msur ce ciuperca se dezvolt, creterea n lungime a rdcinilor infectate este inhibat, iar periorii absorbani dispar. n cele din urm, ramificaiile sub form de arbusculi, situate n grosimea parenchimului cortical, sunt, la rndul lor, digerate de celulele radiculare infectate. Aceasta sugereaz c, n timp ce micorizele ectotrofe prezint particularitile unei simbioze adevrate, cele endotrofe apar mai curnd ca o form de parazitism controlat (dup Pochon). Micorizele ectoendotrofe sau peritrofe reprezint o form de tranziie, caracterizat prin faptul c, pe lng aspectul ectotrof, reprezentat de dezvoltarea abundent a ciupercii n rizosfer i la suprafaa rdcinii, se observ i ptrunderea hifelor n celulele radiculare. 4.2.5. Interrelaiile ntre ciuperci i plante n cazul micorizelor Prezena micorizelor are un efect favorabil asupra dezvoltrii plantelor, fapt semnalat nc din 1886 de Kmenski. Aceast aciune se exercit printr-un mecanism complex, constnd din mai multe aspecte: favorizarea absorbiei apei i a elementelor minerale de ctre plant, deoarece ciupercile de micoriz mresc suprafaa absorbant a rdcinilor, stimulnd, astfel, creterea ramificaiilor i mpiedicnd suberificarea lor; intensificarea activitii metabolice generale a plantei, creia ciuperca i furnizeaz azotul sub form de acid glutamic; spre exemplu, n prezena azotului amoniacal, speciile genului Pinus cu micorize au un coninut dublu de azot fa de speciile care nu prezint micorize; aceasta se datoreaz faptului c srurile de amoniu ptrund n cantitate mare n ciuperc, de unde trec, apoi, n rdcinile plantei; crearea posibilitii de folosire de ctre plant a unor substane greu solubile care conin azot i fosfor, prin solubilizarea lor de ctre ciuperci; absorbia substanelor nutritive necesare plantei din sol, prin intermediul hifelor i transportul lor de ctre ciuperc n esutul cortical al rdcinii;

datorit acestui proces, plantele cu micoriz se dezvolt mai bine dect cele lipsite de ea. relaiile n cazul micorizelor sunt benefice i pentru ciuperc, deoarece aceasta preia din organismul plantei gazde diferite substane nutritive (hidrai de carbon, vitamine, factori de cretere).

Capitolul 5 SOLUL CA MEDIU DE EXISTEN PENTRU MICROORGANISME


Solul reprezint stratul superficial afnat al litosferei care, ndelung i continuu transformat prin aciunea formaiilor vegetale succesive, a agenilor atmosferici i a altor factori naturali, n condiii caracteristice mediului geografic din care face parte, a acumulat, treptat, elementele nsuirii specifice, numite fertilitate, devenind, astfel, capabil s ntrein viaa plantelor superioare. 5.1. Alctuirea general a solului n alctuirea solului intr trei pri i anume: partea solid (mineral i organic); partea lichid sau soluia solului; partea gazoas sau aerul din sol. I. Partea solid a solului Partea mineral a solului deine ponderea cea mai mare (90-95%), ea provenind din rocile pe care s-a format, prin transformarea acestora sub influena proceselor de dezagregare i alterare. Dezagregarea este fenomenul fizic de simpl mrunire a rocilor sub influena variaiilor termice, a apei, vntului i organismelor. n urma procesului de dezagregare rezult roci afnate, alctuite din fragmente i particule de diferite dimensiuni. Acest complex de dezagregare nu reprezint nc solul, ci numai o faz premergtoare n formarea acestuia. Totui, rocile mrunite posed o nsuire nou fa de roca iniial, dur masiv i anume sunt afnate, ceea ce le face permeabile pentru aer i ap. Alterarea este procesul complex de modificare a mineralelor i rocilor, care se manifest printr-o serie de procese simple de hidratare, dizolvare, hidroliz, carbonare i oxido-reducere. Rezultatul alterrii const n faptul c o parte din elementele minerale de nutriie a plantelor trec n forme

asimilabile simple, ndeosebi n sruri minerale. n acelai timp, ns, iau natere i compui minerali compleci, de natura celor care intr n alctuirea argilelor (minerale argiloase). Partea mineral a solului rezult n urma proceselor de dezagregare i n timpul solidificrii propriu-zise, fiind reprezentat, n principal, prin sruri (cloruri, sulfai, carbonai, azotai, fosfai etc.), oxizi i hidroxizi (fier, mangan, aluminiu, siliciu, etc.), minerale argiloase, care formeaz argila din sol principalul coloid mineral al solului, praf sub form de particule cu diametrul cuprins ntre 0,2 i 0,002 mm i nisip cu particule cu diametrul ntre 2 i 0,2 mm. La unele soluri se pot aduga i fragmente cu diametrul de peste 2 mm sub form de pietri, pietre, bolovani. Partea organic a solului deine un procent mai mic dect cea mineral, circa 5-10% n greutate, dar are o importan esenial n formarea, evoluia i proprietile solului. Aceasta este reprezentat de resturile vegetale i animale, netransformate sau transformate sub aciunea microorganismelor. Principalul constituent al prii organice din sol l reprezint humusul, materie organic coloid-dispers, de culoare brun sau brun-negricioas. Humusul este alctuit din compui de resintetizare biochimic a produselor finale de descompunere a materiei organice, acizii humici, la care se pot aduga produse intermediare de descompunere a materiei organice. Humusul, component specific al solului, format sub aciunea microorganismelor asupra resturilor organice, constituie principala rezerv de substan nutritiv pentru plante; el determin cele mai importante proprieti ale solului. Ca o consecin a procesului de alterare a prii minerale a solului i de descompunere a materiei organice, se pun n libertate o serie de elemente ca: N, P, S, Mg, K, Ca, Fe, Al, Mn, Na etc. Dintre acestea, o parte ajung n soluia solului, unde sunt asimilate de ctre plante, iar o alt parte se fixeaz n sol prin fenomene de reinere, constituind un rezervor de elemente nutritive. II. Partea lichid a solului Partea lichid sau soluia solului este reprezentat de apa din sol, n care se gsesc dizolvate substane minerale i organice n stare de dispersie ionic, molecular sau coloidal.

Importana fazei lichide a solului const n aceea c ea conine elemente nutritive n form accesibil plantelor i microorganismelor, adic sub form de sruri solubile, care disociaz n anioni i cationi. n urma proceselor de reinere, pe suprafaa particulelor coloidale ale fazei solide se creeaz o rezerv de elemente nutritive absorbite, care se elibereaz n soluie, pe msura consumrii lor de ctre organismele vii. Cantitatea global de sruri nutritive din soluia solului este, n general, suficient pentru satisfacerea cerinelor trofice ale plantelor superioare i ale microorganismelor (1,1 2,5 g/l). Din punct de vedere calitativ, n soluia solului se regsesc i numeroase microelemente necesare pentru desfurarea n bune condiii a proceselor vitale din sol: Br, Li, I, Co, Ni, Cr, Pb, V, Zn, Cu, Ag, Au. Compoziia soluiei solului este variabil i depinde de condiiile climatice, de activitatea microorganismelor etc. n ceea ce privete soluia solului, pentru dezvoltarea microorganismelor, o importan deosebit o prezint activitatea osmotic a fazei lichide. n general, presiunea osmotic de 3-6 atmosfere, pe care o posed celulele majoritii microorganismelor, este suficient pentru dezvoltarea normal a acestora n soluri, funcie de gradul de aprovizionare a acestora. III. Partea gazoas a solului este reprezentat de aerul care ocup spaiile libere, lsate de ctre ap. Compoziia aerului din sol se deosebete de cea a aerului atmosferic prin raportul cantitativ ntre gazele obinute. Astfel, oxigenul se gsete n concentraie mai mic, comparativ cu cel din atmosfer, deoarece este consumat n activitatea microorganismelor i n procesul de respiraie al rdcinilor plantelor superioare. Din aceast cauz, proporia de oxigen n aerul solului scade, fa de circa 21% n atmosfer, la numai 10-18%. Procentul de CO2 n aerul din sol este de cel puin 10 ori mai mare dect n aerul atmosferic, datorit eliberrii sale sub aciunea de descompunere, exercitat de microorganisme asupra substanelor organice (0,15-0,65% n sol, fa de 0,03% n atmosfer). Cantitatea de azot din aerul solului variaz puin, de la 76 la 79%, fa de aerul atmosferic, unde este de 79%.

Consumul de azot molecular din aerul solului este foarte redus, el fiind folosit numai de ctre unele microorganisme azotofixatoare. n unele soluri, n special n cele mltinoase, n aerul solului se pot gsi i produsele gazoase ale metabolismului bacterian ca: NH3, CH4, H2S i H. Compoziia aerului din sol nu difer totui prea mult fa de cea a aerului atmosferic, datorit schimbului permanent, care este n funcie de permeabilitatea solului, aceasta din urm fiind determinat de porozitatea necapilar a acestuia. 5.2. Reacia solului Dezvoltarea normal a microorganismului depinde nu numai de elementele chimice necesare desfurrii normale a metabolismul acestora, ci i de unele condiii fizico-chimice, dintre care cea mai important este reacia solului. Majoritatea microorganismelor se dezvolt optim la un pH apropiat de neutru (pH = 7), dar reacia solului variaz n funcie de tipul de sol, de la pH = 4 n podzoluri-soluri acide pn la pH = 9 n soloneuri, care sunt soluri srturoase. Fiecare tip de sol are o reacie caracteristic, pe care i-o menine datorit capacitii de tamponare, determinat, n principal, de complexul coloidal al solului. n funcie de reacia i tipul de sol, microorganismele se gsesc rspndite difereniat, n funcie de capacitatea lor de a rezista la reacii extreme, foarte acide sau alcaline. 5.3. Formarea solului Procesul de formare a solului ncepe imediat ce roca ia contact cu mediul extern, cu agenii fizici i chimici, precum i cu aciunea microorganismelor vii. Caracteristica principal a solidificrii const n acumularea materiei organice i a humusului, care determin capacitatea de reinere a substanelor nutritive. Elementele chimice eliberate n urma alterrii au tendina de a fi splate (levigate) spre structurile mai adnci ale rocii dezagregate i alterate. Pe de alt parte, organismele vii - plantele superioare i microorganismele - se opun acestui proces, ducnd la reinerea i chiar la

acumularea substanelor minerale n partea superioar a solului sub form de materie organic i de humus. n cursul solidificrii, se ntlnesc o serie de procese n urma crora ia natere solul ca sistem complex i biologic, n care se desfoar permanent fenomene contradictorii, de al cror echilibru depind proprietile solului. Astfel, n toate solurile se desfoar procesul de alterare a unor minerale primare i secundare, concomitent cu formarea altor minerale secundare caracteristice; descompunerea resturilor vegetale i animale paralel cu sinteza acizilor humici; levigarea substanelor n paralel cu bioacumularea; procesul de acumulare a apei n sol i pierderea ei prin evaporare i prin transpiraia plantelor; absorbia energiei solare ce duce la nclzirea solului, paralel cu iradierea i deci pierderea acestei energii. n felul acesta, intervenia organismelor vii asupra rocii dezagregate marcheaz nceputul procesului de solidificare i aduce modificri importante n marele circuit geologic, ce se desfoar n natur. Intervenia organismelor face ca peste marele circuit geologic s se suprapun micul circuit biologic, care este de sens contrar cu primul. Ca rezultat al acestui proces, descompunerile substanelor organice i minerale sunt nsoite de intense procese de sintez organic, efectuate de organismele vii. Astfel, se acumuleaz diferitele elemente necesare nutriiei plantelor i, n special, azotul, element important, care lipsete din rocile iniiale. 5.3.1. Compoziia chimic a solului Raporturile ntre microorganisme i sol sunt determinate de compoziia chimic a acestuia, n comparaie cu aceea a litosferei, a rocilor de origine. Comparnd datele din coloanele tabelului prezentat mai jos, constatm acumularea n soluri a unor elemente biogene eseniale, cum sunt, n primul rnd, carbonul (n litosfer 0,22%, iar n soluri pn la 45%), i azotul (n litosfer inexistent, n soluri pn la 1,5%). De asemenea, n solurile destinate agriculturii se acumuleaz cantiti importante de magneziu, fosfor i alte elemente chimice, indispensabile vieii, i care, n litosfer, exist n cantiti insuficiente.

Elementele chimice existente n sol se distribuie ntre cele trei pri ale solului, solid, lichid i gazoas, care, mpreun constituie un sistem microeterogen, organomineral, polidispers, structurat i poros. Compoziia chimic a litosferei n % pn la adncimea de 10 m n unele soluri
Denumirea elementelor Oxigen Siliciu Aluminiu Fier Calciu Mangan Sodiu Potasiu Hidrogen Carbon Fosfor Magneziu Sulf Clor Litosfer 46,29 27,61 7,81 5,40 3,77 2,68 2,36 2,40 0,21 0,22 0,10 0,08 0,03 0,01 Podzol Cantitatea n % 69,7 13,4 4,3 0,7 1,1 1,2 3,0 2,2 0,39 1,1 Cernoziom 76,1 15,2 5,6 2,6 2,2 1,3 3,3 4,6 1,10 2,2 -

5.3.2. Rolul microorganismelor n formarea i evoluia materiei organice Materia organic este reprezentat din resturile vegetale, care sunt mineralizate de ctre microorganisme, dar, mai ales, prin humus, care este un complex de substane amorfe n stare coloidal, rezultat din transformri biochimice - descompuneri i sinteze - ale resturilor organice, vegetale i animale sub aciunea microflorei solului. Substanele organice vegetale i animale, ajunse n sol dup moartea organismelor, nu sunt n ntregime supuse degradrii complete pn la compuii finali (CO2, H2O, NH3). O parte din ele sunt transformate n produi noi, mai mult sau mai puin rezisteni la descompunerea de ctre microorganisme substanele humice. Acestea se acumuleaz n cantiti

mari ca rezerve, condiionnd proprietatea cea mai important a solului fertilitatea. n felul acesta, pe lng aciunea lor de distrugere a substanelor organice vegetale i animale, microorganismele contribuie la formarea unor tipuri noi de substane organice. Datorit acestui fenomen, paralel cu dezagregarea enzimatic a substanelor organice, microorganismele din sol efectueaz sinteza unor compui noi, care se acumuleaz temporar n sol, formnd adevrate rezerve de C,N, P, S, K etc., absolut necesare vieii din sol. Dar, microorganismele solului particip nu numai la formarea substanelor humice de rezerv, ci contribuie i la descompunerea lor lent, prin care se asigur plantelor elementele indispensabile pentru noile sinteze organice. 5.3.3. Teoria microbiologic a formrii humusului Procesele de dezagregare i sintez, care au drept rezultat formarea complexelor humice, se datoreaz aciunii bacteriilor aerobe i anaerobe, a actinomicetelor i a ciupercilor microscopice. Bacteriile anaerobe acioneaz asupra substanelor organice aflate sub form de mase dense n profunzimea solului. Procesul este inhibat n momentul cnd cantitatea de acid ulmic acumulat este att de mare, nct oprete dezvoltarea microorganismelor respective i este reluat dup degradarea acestuia. n condiii naturale, denaturarea acidului ulmic se produce dup aciunea frigului, iarna. Datorit acestui fapt, sinteza anaerob a compuilor humici are un caracter periodic, fiind mai activ primvara i vara i scznd n intensitate spre toamn i iarn. Acest proces reprezint forma cea mai important de acumulare a substanelor humice n natur. Sinteza aerob a substanelor humice se realizeaz n straturile mai superficiale ale solului i cu condiia ca acumularea substanelor organice vegetale s se fi fcut n masa afnat. Ea este efectuat de bacterii, n cazul resturilor de plante ierboase, i de ciupercile microscopice, atunci cnd substana organic provine din plante lemnoase. n urma acestui proces rezult acizi humici, care nu omoar microorganismele, deoarece sunt neutralizai de NH3, format n paralel.

Compoziia chimic a humusului este variabil i heterogen, neputnd fi definit prin nicio formul chimic; ea const din acizi ulmici i fulvici (70-80%) i din reziduu insolubil (20-30%). Coninutul bogat n N al humusului, n jur de 5% cu raportul C : N = 10:1, denot caracterul su de produs de sintez. El conine, n special, acid ulmic (acid humic brun), rezultat din aciunea bacteriilor anaerobe, i acid humic (acid humic negru), produs de ciuperci. Una dintre particularitile cele mai importante ale substanelor humice este aceea de a fi mai stabile, n condiii termodinamice date, dect substanele naturale din care s-au format. n acelai timp, ele sunt ntr-o permanent evoluie; pe de o parte, pornind de la diferite substane organice animale i vegetale se formeaz substane noi sub aciunea microorganismelor, iar pe de alt parte, complexele humice sintetizate sunt mineralizate de microflora solului. Datorit acestui proces continuu, formarea humusului se poate afla n diferite stadii de evoluie, sub form de: substane prohumice, capabile s agrege particulele de sol; humus activ, cel mai important pentru fertilitate, care, prin descompunere, formeaz uor substane nutritive pentru plante i reprezint aproximativ 1% din greutatea solului; humus stabil care cimenteaz agregatele de sol dar se descompune greu i nu particip activ la nutriia plantelor; humus inactiv, cu capacitate redus de mineralizare i fr rol n nutriia plantelor sau n formarea structurii stabile a agregatelor de sol. Humusul ndeplinete numeroase funcii de importan excepional, din care se poate deduce rolul microorganismelor care particip la sinteza i descompunerea sa. Astfel, humusul formeaz n sol rezerve imense de N, C, P, S, K, Fe, care pot fi folosite dup mineralizarea prealabil. Dup Waksman, cantitatea de substane organice sub form de humus depete cu mult pe cea prezent n toate formele vii. Humusul favorizeaz nutriia plantelor superioare, furnizndu-le substane nutritive, rezultate din descompunerea sa treptat i lent de ctre microorganisme. Humusul influeneaz caracteristicile fizice ale solului, cruia i confer structura granular i culoarea ntunecat, care favorizeaz absorbia

razelor solare i determina creterea temperaturii. De asemenea, reduce vscozitatea argilelor i uureaz formarea de agregare care amelioreaz aerarea i drenajul solului, mrind, n acelai timp, capacitatea de reinere a apei din sol. Humusul influeneaz proprietile chimice ale solului, prin faptul c menine echilibrul general ntre ionii adsorbii i cei dizolvai i d solului putere tampon. Prin participarea sa la sinteza i transformrile substanelor humice, microflora solului ndeplinete un rol de o importan vital, deoarece, datorit proprietilor amintite, humusul confer solului proprietatea sa de baz fertilitatea care-l deosebete de roca steril. Dup definiia dat de Thaer Humusul este produsul materiei vii i izvorul acesteia sau dup cum afirm Waksman, Humusul este o rezerv i un stabilizator al vieii organice pe pmnt. 5.4. Populaia solului Totalitatea vieuitoarelor din sol, indiferent de dimensiuni, organizare celular, forme, apartenen sistematic i activitate biologic, reprezint populaia solului. Cele vizibile cu ochiul liber, datorit dimensiunii lor, sunt studiate nc din cele mai vechi timpuri i formeaz macropopulaia solului. Celelalte organisme formeaz micropopulaia solului i au putut fi observate i analizate dup perfecionarea mijloacelor de mrire a imaginii. Macropopulaia solului este mprit n dou componente majore: 1. Macroflora solului este format din prile subterane ale plantelor superioare (rdcini, tulpini i frunze ajunse n sol), care furnizeaz solului cea mai important surs de materie organic. Rdcinile plantelor, prin eliminarea a numeroase substane (n special enzime) n cadrul procesului de adsorbie, au un rol important n modificarea concentraiei soluiei solului, intervenind, pe aceast cale, n mod direct n activitatea microorganismelor. Datorit acestor condiii specifice, numrul de microorganisme aflate n jurul rdcinilor (rizosfer) depete cu mult pe cel aflat n restul solului. 2. Macrofauna solului cuprinde o diversitate mare de organisme, dintre care amintim: rme (90-500 kg/ha), furnici, coleoptere, nematozi (circa 10 mii/mp), viermi inelai i diverse vertebrate. Acestea, prin

activitatea lor, mbogesc solul n materie organic, ce va fi utilizat ulterior de ctre populaiile de microorganisme. Micropopulaia solului este reprezentat de microflor i microfaun. 1. Microflora solului constituie populaia cea mai important pentru viaa solului. Ea este format din bacterii, cyanobacterii, ciuperci microscopice i alge. Activitatea microorganismelor din sol poate fi determinat prin raportarea numrului lor la unitatea de volum, de greutate sau de suprafa. Valoarea absolut a unor microorganisme, raportat la un gram de sol, variaz ntre 1 milion-1 miliard de bacterii, ntre 5000 i 50000 la ciuperci, ntre 3000 i 30000 la actinomicete i 500 i 5000 la alge (la adncimea de 2-5 cm). 2. Microfauna solului este constituit din protozoare monocelulare (ntre 100-1000 indivizi/g sol), dintre care majoritatea aparin clasei Flagellata (Mastigophora). Dei aciunea lor este cunoscut, rolul protozoarelor n sol nu este pe deplin clarificat. Numrul microorganismelor din sol i componena lor sistematic constituie un important criteriu practic n aprecierea activitii biologice a acestora dar pentru o edificarea ct mai exact a acestei activiti este necesar i cunoaterea activitii biochimice a microorganismelor care alctuiesc populaia solului.

Test de autoevaluare

1. Fixarea N2 este realizat de: a) virusuri b) bacterii c) cyanobacterii d) alge e) protozoare f) ciuperci 2. Azotul este utilizat de plantele superioare sub form de: a) azot molecular (atmosferic) b) nitrii c) nitrai d) amoniac e) monoxid de azot 3. Fixarea aerob a azotului molecular este realizat de: a) Azotobacter chroococcum b) Clostridium pasteurianum c) Rhizobium leguminosarum d) Frankia alni 4. Nodozitile "eficiente" de pe rdcinile de leguminoase conin un pigment: a) galben b) albastru c) rou d) alb 5. Metabioza este o relaie de: a) parazitism b) prdtorism c) simbioz d) neutralism

6. n cazul rizosferei se stabilete o relaie de: a) neutralism b) simbioz c) antagonism 7. Micorizele reprezint simbioza dintre plante i: a) ciuperci b) bacterii c) alge d) protozoare

Rezultate corecte: 1 - b,c; 2 - c; 3 - a; 4 - c; 5 - a; 6 - b; 7 - a.

Capitolul 6 ROLUL MICROORGANISMELOR N CIRCUITUL MATERIEI N NATUR


6.1. Circuitul azotului Azotul este un element esenial pentru existena vieii n biosfer, deoarece este inclus n structura tuturor proteinelor i a acizilor nucleici. Dei este prezent n natur n cantiti foarte mari, se gsete aproape invariabil n forme inaccesibile direct, plantelor i animalelor. Circuitul azotului n natur (Fig. 69) se desfoar pe parcursul a mai multor etape, care implic desfurarea unor multiple activiti biochimice; unele au loc n anaerobioz, iar altele n prezena oxigenului. Aceste etape sunt: I. Fixarea azotului molecular se poate realiza pe cale abiotic i biotic. Pe cale abiotic, fixarea se realizeaz prin iradieri, descrcri electrice i prin intermediul precipitaiilor. Pe cale biotic, fixarea azotului molecular este un proces lent i continuu, prin care, sub aciunea a peste 100 genuri de bacterii diferite, azotul gazos atmosferic este convertit la forme fixe (NH4-, NO3-, NO2-), care sunt folosite de plante i introduse n forme organice, utiliznd energia obinut prin fotosintez. Bacteriile care particip la aceast fixare au fost grupate astfel: bacterii fixatoare de azot molecular (N2) libere aerobe; bacterii fixatoare de azot molecular (N2) libere anaerobe; bacterii fixatoare de azot molecular (N2), care triesc n asociaie cu plantele. n cazul celui de-al treilea grup, n funcie de relaia care se stabilete ntre cei doi parteneri, ntlnim patru tipuri de simbioz: simbioza Rhizobium leguminoase; simbioza Actinomicetae neleguminoase; simbioza asociativ; simbioza foliar.

II. Amonificarea const n mineralizarea azotului proteic pn la amoniac (NH3). III. Nitrificarea prezint dou trepte: nitritarea i nitratarea, n care are loc oxidarea amoniacului (NH3) pn la nitrii (NO2-) respectiv nitrai (NO3-). IV. Denitrificarea este procesul prin care are loc reducerea azotului nitric pn la azot molecular, ncheindu-se, n acest mod, circuitul azotului.

Fig. 69 Reprezentarea schematic a principalelor etape ale circuitului azotului n natur (dup Delviche, 1977).

Toate procesele desfurate pe parcursul celor patru etape sunt mediate numai de bacterii, cu excepia unei etape premergtoare amonificrii, proteoliza, n care pot aciona i microfungii. n timp ce n ecosistemele naturale, circuitul azotului este un proces echilibrat, n sensul c pierderile de azot din sol sunt compensate de

procesele de fixare, n sistemele supuse procesului de agricultur, pierderile depesc ritmul de nlocuire. Dac rezervele de azot din sol sunt limitate, fapt ce duce la apariia unor frecvente dezechilibre ntre nevoia de azot i posibilitatea de a o satisface, din contr, rezerva de azot atmosferic, este practic inepuizabil, calculele artnd c aceasta ar putea asigura necesarul pentru cel puin 800.000 ani. Din pcate, aceast imens cantitate este inaccesibil n mod direct organismelor vii i mai cu seam plantelor superioare. n cursul ultimilor decenii, datorit nevoilor crescnde de hran pentru o populaie n permanent dezvoltare, cantitile de ngrminte chimice cu azot aplicate au crescut continuu. Dei, o perioad de timp, ngrmintele chimice cu azot au ndreptit speranele rezolvrii i pe viitor a satisfacerii nevoilor nutritive pentru populaie, criza energetic a ultimilor ani i apariia unor efecte secundare nedorite au impus reconsiderarea acestei posibiliti. Azotul atmosferic este convertit industrial n amoniac (NH3), prin procedeul Haber. Reacia are loc la temperaturi ridicate de cca.. 500oC i la o presiune de 300-600 atmosfere, ceea ce presupune un consum ridicat de energie de cca.. 22000 kcal/kg. n acelai timp, excesul de ngrminte chimice cu azot are efecte negative asupra mediului i, uneori, asupra omului, prin produsele vegetale pe care acesta le consum. Creterea coninutului n protein la plante sub influena ngrmintelor cu azot are loc n limita potenialului genetic al speciei sau soiului. De aceea, excesul de azot duce la o serie de deranjamente i la acumularea de azot nitric n plante. Aceste acumulri n plantele furajere sau alimentare provoac intoxicaii grave, ce pot duce chiar la moartea individului. La copii, nitraii sunt redui la nitrii, care, fiind absorbii de snge, reduc capacitatea acestuia de a transporta oxigenul prin formarea metahemoglobinei. La aduli, nitraii sunt convertii la nitrosamin, care, de asemenea, este otrvitoare. Folosirea n doze excesive a azotului duce la splarea acestuia n straturile profunde ale solului i la mbogirea n nitrai a pnzei de ap freatic care poate fi utilizat ca ap potabil sau la adpatul animalelor. De

asemenea, utilizarea intensiv a ngrmintelor chimice duce la creterea coninutului solului n unele elemente (Zn, Pb, Ni, Cr etc.) care anterior se gseau n forme solubile doar ca urme. Creterea concentraiei acestora peste o anumit limit are efecte toxice asupra plantelor i microorganismelor (Davidescu, 1974). Datorit crizei energetice i efectelor secundare ale ngrmintelor chimice cu azot, o atenie tot mai mare se acord n ultimul timp mecanismelor naturale de fixare a azotului n sol i, n special, a fixrii biologice. Prin procesele de fixare biologic sunt introduse n sol cantiti foarte mari de azot. Microorganismele fixatoare de azot posed un complex enzimatic, denumit nitrogenaz, capabil s activeze tripla legtur a moleculei de azot, care poate fi astfel redus la amoniac. Procesul se desfoar la o temperatur relativ sczut, de 15-40oC, frecvent ntlnit n sol i la presiune atmosferic normal. n funcie de numeroi factori, dar mai ales de planta de cultur, cantitatea de azot atmosferic fixat biologic variaz ntre limite foarte largi. Legat de acest aspect, n anul 1971, Hank a sintetizat rezultatele din literatura de specialitate pentru diferite ecosisteme, astfel: - culturi de cmp 7-28 kg N/ha; - angiosperme i alte plante neleguminoase 7-114 kg N/ha; - leguminoase 73-865 kg N/ha; - pdure 58-594 kg N/ha; - puni 13-99 kg N/ha; - ape 70-250 kg N/ha. Fenomenul de fixare a azotului de ctre microorgansime a fost pus n eviden n anul 1888 de ctre Berthelot. Acesta a urmrit, n paralel, variaia azotului n vase cu sol nesteril i n vase cu sol steril, constatnd c, n solul nesteril, coninutul n azot crete iar n vasele cu sol sterilizat nu. 6.1.1. Fixarea azotului molecular 1. Fixarea azotului molecular (N2) de ctre microorganisme libere aerobe n anul 1901, Beijerinck reuete izolarea din sol a dou specii de bacterii care au capacitatea de fixare aerob a azotului molecular. Ulterior,

cercetrile au evideniat existena i a altor specii capabile s realizeze acest proces. Dintre cele mai cunoscute specii putem enumera: - Azotobacter chroococcum; - Azotobacter vinelandii; - Azotobacter agile; - Azotobacter insigne; - Azotobacter macrocytogenes; - Azotobacter mobile; - Azotobacter fluminensis; - Beijerinckia indica; - Derxia gummosa; - Rhodospirillum sp.; - Rhodopseudomonas sp. Dintre acestea, cele mai rspndite i mai cunoscute sunt cele din genul Azotobacter. Bacteriile din genul Azotobacter sunt rspndite n natur mai ales n solurile cultivate, bogate n humus, cu reacie neutr i se gsesc rar n solurile acide, podzolice, turboase i mltinoase. Morfologia lor este foarte variabil, n funcie de condiiile de mediu, fapt ce explic descrierea la un moment dat a numerose specii separate, care, ulterior, au fost considerate ca sinonime. Dintre speciile genului Azotobacter, cea mai rspndit i mai eficace este Azotobacter chroococcum. Azotobacter chroococcum prezint o serie de aspecte morfologice considerate ca fcnd parte dintr-un ciclu de evoluie corelat cu vrsta. n funcie de vrsta coloniei, celulele apar difereniat: 1. Celulele tinere au aspect de bastonae groase de 2 x 4 m, cu capetele rotunjite, izolate sau n perechi. 2. Celulele adulte sunt sferice sau ovale ca nite coci mari de 2 x 1,2 m, coninnd numeroase granulaii, constituite din lipide, volutin, glicogen etc. 3. Celulele btrne, care apar n a 5-a zi de dezvoltare a culturii, sunt aproape sferice i au dimensiuni mai mici de 1,5 x 1,3 m. n condiii nefavorabile de mediu apar chitii.

4. Chitii sunt prevzui cu un perete gros, format din dou straturi, i apar prin modificarea celulelor adulte sau a celulelor btrne. Acetia mai poart numele de macrochiti. Citoplasma lor este constituit din protein concentrat. Chistul este o form latent, de rezisten a germenului, care, sub aceast form, se menine viabil mai multe luni sau chiar ani. Prin germinare, din chiti iau natere celule tinere care reiau ciclul descris. n condiii de cultur, pe medii lichide, Azotobacter formeaz un vl gros la suprafa, albicios, care cade treptat la fund, formeaz un depozit dens albicios i, care, mai trziu, devine brun-negru. Pe mediile solide (Fig. 70) formeaz colonii lucitoare, la nceput incolore, vscoase, cu tendina de scurgere prin glisare pe suprafaa mediului. Cu timpul, acestea se coloreaz n brun-negru, datorit pigmentului melanic.

Fig. 70 Azotobacter chroococcum

Bacteria se dezvolt la temperatura cuprins ntre 9 i 35oC i la un pH ntre 5,8 i 8,5, fiind foarte sensibil la aciditate sub pH=5,8. Este strict aerob, Gram negativ i oxideaz complet hidraii de carbon pn la CO2, fr a produce n mediu metabolii intermediari. n condiii optime fixeaz aproximativ 20 mg N2 pentru fiecare gram de glucoz oxidat. Randamentul fixrii este variabil de la o tulpin la alta, dup natura sursei de carbon. Deosebirile dintre diferitele tulpini constau n viteza

aciunii lor, unele fiind n stare s fixeze n 3 zile 100 % din concentraia final, n timp ce altele realizeaz fixarea ntregii cantiti doar dup 12 zile. 2. Fixarea azotului molecular (N2) de ctre microorganisme libere anerobe Fixarea anaerob a N2 a fost evideniat nc din 1893 de Winogradski, care a reuit izolarea i cultivarea pe un mediu nutritiv lipsit de azot a speciei Clostridium pasteurianum, specie mult rspndit n sol. Ulterior, au fost descrise i alte specii anaerobe, care aparin genurilor Desulfovibrio, Desulfatomaculum i Methanobacillus. Clostridium pasteurianum (Fig. 71) face parte din grupul bacteriilor butirice. Se prezint, n cazul formelor tinere vegetative, sub form de bastona Gram pozitiv, cu capetele rotunjite, cu dimensiuni variabile, cuprinse ntre 1,5 i 8 x 0,8 i 1,3 m. Este o specie mobil, cu cili dispui peritrichi, adesea fuziform. La celulele btrne apar forme de involuie, filamentoase sau cocoide, iar coninutul celulelor este granulos i se coloreaz n violet cu soluie iodurat Lugol, coninnd substane iodofile. Fig. 71 Clostridium pasteurianum Bacteria prezint un spor central, cu diametrul de 1-1,3 m; este un microorganism anaerob obligat, care se dezvolt n condiii optime la 20 - 30oC i la un pH = 7,3 - 8,9. Cultivat pe un mediu ce conine substane hidrocarbonate, dar lipsit de azot, obine energie din fermentarea acestora i fixeaz N2 atmosferic. Cantitatea de azot fixat este proporional cu cantitatea de glucoz fermentat i este de aproximativ 3 mg pe gramul de glucoz consumat. Randamentul fixrii azotului de ctre Clostridium pasteurianum este maxim cnd este asociat cu bacteriile celulolitice anaerobe, care pun la

dispoziie hidrai de carbon solubili, ca glicerina sau manita, care se gsesc n sol n concentraii mici. Fixare anaerob a N2 are un rol esenial n solurile puin aerate sau invadate de ap (mlatini, orezrii), unde Clostridium pasteurianum este principalul fixator de azot. n ceea ce privete proporia dintre cele dou specii descrise, Fedorov arat c, n soluri Azotobacter chroococcum a fost gsit numai n 30 % din cazuri, n timp ce Clostridium pasteurianum n 70 %, avnd deci o preponderen mai mare. 3. Bacterii fixatoare de azot molecular (N2), care triesc n asociaie cu plantele Simbioza Rhizobium leguminoase n solurile cultivate cu leguminoase, n afar de fixarea azotului atmosferic (N2) de ctre bacteriile libere aerobe sau anaerobe, se mai produce i fixarea de ctre microorganismele simbiotice care triesc n nodozitile de pe rdcinile acestor plante. Dei formarea de nodoziti pe rdcinile plantelor leguminoase se cunoate din antichitate, fenomenul era considerat ca un proces patologic, tumoral sau datorat unor nepturi de insecte. Abia n 1865, Voronin a descris nodozitile i corpusculii ce-i conin, iar n 1887, Beijerinck a izolat i descris bacteriile pe care le produc. Biologia bacteriilor de nodoziti Bacteriile care produc nodoziti la leguminoasele cu care triesc n simbioz aparin genului Rhizobium care cuprinde mai multe specii distincte, cu capacitatea de a infecta numai anumite plante gazde (Fig. 72), dup cum urmeaz: - Rhizobium leguminosarum mazre, bob, linte; - Rhizobium trifolii trifoiul; - Bradyrhizobium japonica (sin. Rhizobium japonicum) soia; - Rhizobium phaseoli fasolea; - Rhizobium lupini lupinul; - Rhizobium meliloti lucerna.

Fig. 72 Nodoziti formate de Rhizobium sp. la plantele leguminoase

Activitatea diferitelor specii de Rhizobium este variabil de la o specie la alta, n funcie de dou proprieti biologice importante: infeciozitatea, care reprezint capacitatea de a produce nodoziti, i eficiena, care se refer la capacitatea de a fixa azotul molecular (N2). Bacteriile ajung n zona rizosferic la nivelul periorilor absorbani, fiind stimulate de secreiile radiculare, care au rol chimiotactic pozitiv, dup care are loc un proces de recunoatere a celor doi parteneri. Recunoaterea se realizeaz prin intermediul unor substane specifice, denumite generic lectine. Dup legarea ireversibil are loc deformarea periorului radicular, care ia form de crlig, sub aciunea unor substane eliminate de bacterii. Ulterior, peretele periorului absorbant este dizolvat sub aciunea unor enzime secretate de bacterii i acestea ptrund n interior, formnd un cordon de infecie care ajunge n celulele parenchimului cortical. Cordonul este format la nceput dintr-o matrice mucoas n care se gsesc bacterii i care, treptat, se acoper cu o teac celulozic. Acest manon este constituit din secreii ale ambilor parteneri. Pe msur ce cordonul infecios nainteaz, bacteriile se multiplic continuu i sunt eliberate fie prin unele fisuri ale acestuia, fie prin extremitatea sa distal i se aaz la periferia celulelor unde se multiplic activ. n acelai timp, celulele cortexului radicular infectat se multiplic rapid, transmind infecia bacterian celulelor fiice. Rezultatul acestei proliferri este nodozitatea, care la nceput este inclus n cortexul radicular, apoi l deformeaz pe msur ce crete i n

cele din urm l rupe. Ea apare ca rezultat al invadrii i multiplicrii bacteriilor n celulele gazde i al aciunii unor substane stimulente de tipul auxinei (acid indolilacetic) secretate de bacterii (Fig. 73). La leguminoasele erbacee anuale nodulul este o structur efemer, n timp ce la cele perene dureaz 5-6 ani, dup care sufer modificri degenerative care duc la necrozarea i detaarea sa de rdcin.

Plant leguminoas

Perior absorbant

Apariia nodozitilor

Nodozitate

Bacterii din Rhizobium sp. Bacteroizi Cordon infecios

Bacteriile se transform n bacteroizi, iar celulele i mresc dimensiunile.

Legarea ireversibil a bacteriilor de periorii absorbani; deformarea periorului radicular i ptrunderea bacteriilor n celule.

Fig. 73 Fixarea simbiotic a azotului molecular n nodozitile leguminoaselor (dup Tortora i colab., 1992).

S-a constatat c n procesul fixrii N2 nu toate nodozitile sunt la fel de active, ele mprindu-se n dou categorii: Nodozitile "eficiente" sunt relativ puin numeroase i se formeaz, mai ales, pe rdcinile principale; sunt mai voluminoase i au o suprafa neted sau rugoas. Aceste nodoziti conin un pigment rou, de natur proteic, numit leghemoglobin (hemoglobina leguminoaselor). Nodozitile eficiente au o structur caracteristic, fiind constituite din mai multe regiuni:

- regiunea periferic este reprezentat de cortexul nodozitilor, format din mai multe straturi de celule, compacte, cu rol de protecie; - regiunea meristematic este situat n regiunea distal a nodozitii, fiind format din celule diploide neinfectate i asigur creterea nodozitilor prin diviziune; - regiunea central este alctuit din celule poliploide, ncrcate cu bacteroizi i prezint trei zone distincte: a. zona de invazie, situat sub meristem, format din celule neinfectate i celule mrite, infectate; b. zona simbiotic ocup poriunea cea mai mare din nodoziti i prezint dou subzone: - subzona simbiotic timpurie, cu celule ce conin bacterii care nc mai prolifereaz; - subzona simbiotic tardiv, conine celule mrite pline cu bacterii care nu mai prolifereaz numite bacteroizi. Este zona de fixare activ a azotului molecular (N2). c. zona de senescen, corespunde celulelor vegetale i bacteroizilor n curs de degenerare sau moarte. Nodozitile "neeficiente" sunt mai numeroase, mai mici, cu suprafaa neted i sunt rspndite pe tot sistemul radicular. Infecia lor este foarte limitat, coninnd foarte puine bacterii. Activitatea lor dureaz numai cteva zile, iar fa de celelalte sunt nepigmentate. Mecanismul simbiozei plant-bacterie Bacteriile simbiotice iau energia necesar asimilrii azotului molecular prin procedee de degradare a substanelor hidrocarbonate, furnizate de planta gazd. La rndul lor, bacteriile asimileaz N2 atmosferic pn la stadiul de acid aspartic, care este preluat de plant. Aceasta, prin transaminare enzimatic n prezena acidului piruvic, sintetizeaz alanina. n continuare, planta gazd sintetizeaz ceilali aminoacizi, prin transaminare, pornind de la alanin i diferii acizi cetonici. Leghemoglobina este singurul reprezentant al hemoglobinelor din regnul vegetal; aceasta apare n stadiul activ al fixrii, numai n nodulii eficieni, aflai la maturitate, ca rezultat al simbiozei ntre bacterii i leguminoase. n acest sens, bacteriile aduc nucleul "hem", iar planta

"proteina". Pigmentul nu poate fi sintetizat separat nici de bacterii, nici de planta gazd i fixarea N2 este proporional cu concentraia pigmentului din nodoziti. Simbioza Frankia sp. - neleguminoase (Actinorizele) Actinorizele reprezint asociaii simbiotice fixatoare de azot molecular (N2) la aproximativ 200 specii de angiosperme, care sunt plante leguminoase caracteristice zonelor cu deficit de azot. Bacteriile care triesc n simbioz cu aceste plante aparin genului Frankia, fam. Frankiaceae, ord. Actynomycetales. Cele mai cunoscute genuri de plante n Romnia sunt : Hippophae (Fig. 74) i Elaeagnus. Formarea nodozitilor Modul de recunoatere ntre cei doi parteneri i infecia sunt asemntoare ca la simbioza dintre bacteriile genului Rhizobium i plantele leguminoase. Evoluia procesului infecios determin apariia unor nodoziti laterale pe suprafaa rdcinilor. Formaiunile simple originale au o asemnare extern evident cu nodozitile de leguminoase. Dup 10-15 zile, pe suprafaa nodulului simplu originar apar lobi noi, situai n partea apical. Repetarea acestui proces de ramificare i producerea anual de noi noduli pe rdcini duce la apariia unei grupri compacte cu aspect coraloid, fiecare lob reprezentnd o nodozitate individual.

Fig. 74 Simbioza Frankia sp. cu rdcinile de Hippophae rhamnoides.

Importana deosebit a actinorizelor decurge n primul rnd din faptul c cele mai multe plante gazd sunt specii pionier. Ele populeaz terenurile

cu deficit mare de azot, terenurile mltinoase, solurile srace, dunele de nisip, pietri, regiuni subalpine, zone de deert. n al doilea rnd sunt importante prin larga rspndire a plantelor gazd, prezente n regiunile arctice, temperate, subtropicale, tropicale i de la regiunile de es pn la cele subalpine. Simbioza asociativ Prima semnalare a fixrii azotului de ctre microorganisme asociative a fost fcut n anul 1974 (Fig. 75). n Romnia, prima semnalare a fost realizat n anul 1980, de ctre Hera. Cercetrile efectuate au pus n eviden existena mai multor specii de bacterii ale genurilor Azospirillum, Bacillus i Klebsiella, care triesc n asociaie cu rdcinile unor graminee. Astfel, au fost identificate urmtoarele simbioze asociative: - Azospirillum lipoferum - porumb; - Azospirillum brasilense - gru, orez; - Bacillus macerans - porumb; - Klebsiella pneumoniae - Poa pratensis. Fixarea asociativ este mai rspndit de aproximativ 5 ori n zonele tropicale fa de zona temperat. Simbioza foliar Simbiozele foliare au fost descrise pentru prima dat n anul 1902, de ctre Zimmermann, la reprezentanii a trei familii de plante superioare, rspndite n zonele tropicale i subtropicale: Rubiaceae, Myrsinaceae (i Dioscoreaceae. Astfel, frunzele mai multor specii poart nodoziti superficiale, cuprinznd bacterii. Cei mai mari noduli ating dimensiunile unei gmlii de ac (500 - 2000 m n diametru), pot fi cilindrici sau sferici i sunt localizai n funcie de gen i specie, pe lamin, nervura median sau pe peiol. Bacteriile ptrund prin ostiolele stomatelor i se multiplic apoi n mezofil. Aceti germeni care iniial au form de bastonae i devin apoi claviformi sau ramificai, au fost denumii din 1912, de ctre Faber, Mycobacterium rubiacearum, iar de ctre ali autori, drept specii de Flavobacterium sp. sau de Klebsiella sp.

Fig. 75 Simbioz asociativ

6.1.2. Amonificarea Substanele organice azotate, reprezentnd 99 % din rezervele totale de N2 din sol, constau din rezerve humice i din ali compui acumulai n mod natural n sol prin procesul de fixare biologic a N2 i prin cel de degradare a resturilor organice vegetale i animale, a ngrmintelor verzi i a blegarului. Celulele bacteriene reprezint ele nsele o mas de substan organic, predominant proteic, de aproximativ 6 t/ha, la care se adaug circa 20 de tone, reprezentate de restul microflorei i microfaunei. Dac acest N2 organic ar rmne ca atare, rezervele de N2 accesibile plantelor s-ar micora n fiecare an i nu ar mai permite creterea plantelor. n mod normal, ns, aceste substane sufer un proces de mineralizare, la sfritul cruia sunt aduse n stare de amoniac (NH3). Procesul de amonificare propriu-zis este precedat de descompunerea moleculelor proteice prin hidroliz, cu ajutorul proteazelor extracelulare,

eliberate de numeroasele specii de microorganisme aerobe i anaerobe, dup formula general:


protein H 2O proteinaze peptone H2O peptide H 2O peptidaze aminoacizi

Aminoacizii rezultai din aceast degradare ptrund n interiorul celulelor bacteriene, unde sufer un proces de dezaminare, din care rezult amoniac (NH3) i acidul organic corespunztor. Se ntlnesc mai multe tipuri de dezaminare i anume: 1. Dezaminarea hidrolitic 2. Dezaminarea hidrolitic i decarboxilare 3. Dezaminarea reductoare 4. Dezaminarea reductoare cu decarboxilare (anaerob) 5. Dezaminarea oxidativ cu decarboxilare 6. Dezaminarea cu desaturare. Din asemenea reacii, n afar de amoniac (NH3), pot rezulta acizii: acetic, formic, propionic, butiric, valerianic. n funcie de condiiile de mediu i natura microflorei, aceti acizi pot fi oxidai complet la CO2 i H2O (n mediul aerob), acumulai ca atare, transformai n alcooli. Amonificarea n sens strict poate fi definit, deci, ca un proces biologic n care se elibereaz n sol amoniac (NH3), ca rezultat al aciunii microflorei solului asupra aminoacizilor, rezultai din descompunerea substanelor proteice. n acest sens, nu este inclus n amonificare eliberarea de NH3 sub aciunea micoflorei temporare de putrefacie. n acest proces, NH3 poate fi refolosit ca atare de o serie ntreag de microorganisme. Cea mai mare parte din el sufer n continuare o transformare absolut necesar pentru viaa din sol, n forme accesibile plantelor, iar restul poate fi fixat n sol, mai ales n soluri acide sau se evapor n atmosfer. Microflora capabil s produc amonificarea substanelor proteice este numeroas, diferit i acioneaz n timp, dup cum urmeaz: La nceputul procesului intervin bacterii obligat aerobe, cum sunt: Bacillus cereus var. micoides, B. subtilis, B. thermoproteolyticus, specii nesporulate, ca Serratia marcescens, Arthrobacter sp. etc. i specii

facultativ anaerobe, cum sunt: Proteus vulgaris, Pseudomonas fluorescens, Escherichia coli, Sarcina lutea etc. Dup 2-3 zile, intr n aciune specii obligat anaerobe, cum sunt: Clostridium putrefaciens, Clostridium perfringens i unele actinomicete, ca Streptomyces violaceus i Micromonospora chaleea, care ncep s predomine i fac ca degajarea de NH3 s fie maxim. ncepnd cu ziua a 4-a, mediul este invadat de mucegaiuri i degajarea de amoniac (NH3) descrete, datorit faptului c acestea folosesc amoniacul pentru sinteza proteinelor proprii i produc mult acid, care neutralizeaz amoniacul. Hidroliza ureei este realizat de un grup numeros de microorganisme, capabile s produc enzima ureaza. n acest grup ntlnim specii din genurile: Achromobacter, Bacillus, Clostridium, Corynebacterium, Pseudomonas, actinomicete i microfungi filamentoi. La acestea se adaug grupul urobacteriilor, caracterizate prin rezistena la concentraii mari de uree i pH alcalin dar i prin capacitatea de a elibera cantiti mari de NH3. Din grupa urobacteriilor fac parte: Bacillus (Urobacillus) pasteuri, Micrococcus ureae, Planosarcina ureae etc. Activitatea amonificatoare a urobacteriilor este foarte important, deoarece ureea conine 47 % azot, care ar fi altfel neutilizat de plante. Cantitatea de uree eliminat n natur este mare, atingnd cteva zeci de milioane de tone pe an. Se estimeaz c populaia uman ar elimina n 24 ore circa 15.000 t azot ureic, iar animalele circa 1.500.000 tone. La aceste cantiti se mai adaug ngrmintele cu uree, aplicate prin tehnologiile actuale sub form de cianamid de calciu. Acest compus, fabricat din N2 din aer i carbur de calciu, nu este asimilabil de ctre plante. Compusul sufer n sol unele transformri abiotice i biotice enzimatice pn la amoniac. 6.1.3. Nitrificarea Nitrificarea este un proces de oxidare a amoniacului (NH3) i a altor forme reduse ale azotului anorganic eliberate n sol n cursul procesului de amonificare n nitrai, care reprezint forma asimilabil pentru majoritatea plantelor verzi.

n acelai timp ns, nitraii reprezint i forma sub care azotul din sol este pierdut deoarece, fiind solubili, sunt splai de ploaie sau redui la NH3, nitrii sau chiar la azot molecular (N2) prin denitrificare. Natura biologic a acestui proces a fost demonstrat prin suprimarea sa n urma sterilizrii solului prin nclzire la 110oC sau prin tratarea cu vapori de cloroform. n laborator s-a demonstrat c procesul se desfoar n dou faze: a. Nitritarea reprezint procesul de oxidare a amoniacului pn la nitrii (NO2-).

NH3 + O2

NO2- + 3H+ + 2e-

b. Nitratarea reprezint procesul de transformare al nitriilor (NO2-) pn la nitrai (NO3-).

NO2- + H2O

NO3- + 2H+ + 2e-

Microorganismele nitrificatoare sunt autotrofe chimiosintetizante, care i procur, prin reacii chimice oxidative, energia necesar pentru producerea substanelor celulare proprii. Ele sunt aerobe stricte, rspndite, practic, n toate tipurile de sol i folosesc ca surs de carbon carbonul mineral din CO2 i carbonai, iar ca surs de azot, amoniacul sau nitriii. ntre bacteriile nitroase sau nitrit bacterii putem cita: Nitrozomonas europaea, Nitrosococcus oceanus, Nitrosospira briensis i Nitrosolobus multiformis, care transform srurile amoniacale n nitrii. Bacteriile nitrice (nitrat bacteriile) frecvent ntlnite sunt: Nitrobacter Winogradskii, Nitrospira gracilis i Nitrococcus mobilis, care realizeaz nitratarea ce const n oxidarea nitriilor pn la nitrai. Nitrificarea, care reprezint a III-a faz a circuitului azotului n natur, este un proces de importan excepional, deoarece aduce substanele azotate n forma cea mai uor accesibil plantelor. De altfel, s-a observat c, n general, numrul microorganismelor nitrificatoare este proporional cu fertilitatea solului, putnd ajunge n solurile fertile pn la un milion de bacterii pe gramul de sol. Numrul mare de nitrificatori din solurile fertile, comparativ cu solurile nelenite, se datoreaz i faptului c primele sunt lucrate i, deci, bine aerate.

6.1.4. Denitrificarea Nitraii (NO3-) acumulai n sol, ca rezultat al procesului de nitrificare, sunt, n parte, consumai de plantele superioare, iar o cantitate variabil este splat de apele de infiltrare i iroire. Nitraii pot fi folosii i de microorganisme, fie c sunt asimilai n cursul proceselor de sintez a protoplasmei acestora (asimilarea nitriilor), fie c sunt redui pentru oxidarea unei substane organice sau minerale. Denitrificarea reprezint un proces care nchide circuitul prin ntoarcerea azotului molecular (N2) n natur. Reducerea nitrailor n procesul de denitrificare se face fie pn la N2 sau amoniac (NH3), fie pn la stadii intermediare ca nitrii (NO2-), acidul hiponitros (HNO3-) etc. Condiiile optime de producere ale acestui proces sunt realizate n solurile saturate cu ap i n structurile profunde n care pot aciona mai multe grupuri de microorganisme. Astfel, bacteriile denitrificatoare propriu zise, ce reduc nitraii (NO3-) la azotul atmosferic (N2), sunt: Pseudomonas stutzeri i Pseudomonas denitrificans. Dintre microorganismele din flora general a solului, capabile s reduc nitraii (NO3-) la nitrii (NO2-), sunt Bacillus megaterium, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa etc., precum i unele bacterii sulfuroase ca: Thiobacillus denitrificans. Semnificaia procesului de denitrificare este nc controversat, acesta fiind considerat de unii autori ca un fenomen patologic, inconstant i relativ rar n condiii naturale ale solurilor de cultur. Este sigur c reducerea nitrailor pn la N2 gazos reprezint, pentru solul respectiv, o pierdere real care poate ajunge pn la 120 kg N2/ha/an, cu toate c o parte din N2 degajat poate fi preluat de fixatorii de N2 anaerobi, cum sunt: Clostridium pasteurianum. n acelai timp, reducerea incomplet, pn la stadiile intermediare, de nitrii i NH3, este mai puin duntoare pentru fertilitatea solului respectiv deoarece NH3 poate fi folosit de unele microorganisme heterotrofe, n timp ce nitriii sunt preluai de nitratbacterii i reoxidri n nitrai.

6.2. Circuitul carbonului Dac a fost relativ uor s se realizeze o descriere destul de schematic a ciclului azotului n sol, pentru circuitul carbonului nu este la fel de simplu, deoarece, acesta din urm nu are verigile bine individualizate ca ale primului. Mai nti, trebuie s artm c sursele de carbon introduse n sol sunt numeroase: carbonul mineral al CO2 atmosferic i carbonaii telurici, urmeaz apoi carbonul organic al vegetalelor i animalelor sub forme multiple, de la glucide simple pn la substane polimerizate ca celuloze, sau cu structuri complexe, ca lignina. Metabolismul acestor forme diverse este mult diferit n sol din mai multe cauze i anume: datorit structurii substanelor carbonate; datorit florei multiple zimogene, care acioneaz asupra acestor substane. Aceste diferene se traduc prin viteza de atac diferit i prin produii de metabolism intermediari obinui. Dac produii finali ai oxidrii i mineralizrii carbonului organic sunt n mod constant CO2 i H2O (i metanul, CH4, n condiii de anaerobioz), produsele intermediare sunt foarte variate, prezentndu-se sub form de acizi organici i zaharuri mai mult sau mai puin complexe. De fapt, mineralizarea carbonului organic este, n mod excepional, realizat ntr-o singur etap i, ca regul general, numeroase grupuri de bacterii i ciuperci intervin n mod succesiv pentru a ajunge la produse simple terminale.

Fig. 76 Circuitul carbonului n natur (www.wikipedia.com)

Acest ciclu al carbonului (Fig. 76) este complicat nc prin faptul c substanele hidrocarbonate sunt totdeauna asociate n proporie variabil cu substane azotate (proteice), lipide, precum i cu lignina, cerurile, rinile, taninurile etc. Proporia relativ a acestor diverse substane modific n mod profund metabolismul produilor hidrocarbonai. Metabolismul mai variaz i n funcie de structura fizic i chimic a solului, de clim (temperatur, umiditate), de sistemul de cultur etc. Ultimul factor ce complic situaia este acela c, n acelai timp, cnd substanele hidrocarbonate sunt degradate, microorganismele realizeaz i sinteza pentru propriul lor corp a unor produi (ex. hemiceluloza). Este ca atare dificil de tiut care sunt produii intermediari de degradare i care sunt cei de sintez. n orice caz, att unii, ct i alii se pot combina pe cale chimic sau fizic ntre ei, precum i cu ali compui din sol pentru a forma substanele de rezerv humic. Pentru o mai clar prezentare a problemei, se va lua n considerare mai nti metabolismul carbonului mineral i apoi al celui organic.

6.2.1. Metabolismul carbonului mineral Se tie c majoritatea bacteriilor au nevoie pentru metabolismul propriu de gazul carbonic (CO2), dar acesta intr n ciclul biologic n cantiti relativ mici. Exist grupri fiziologice de bacterii care nu pot metaboliza dect carbonul mineral, cum sunt autotrofele sau litotrofele, care joac un anumit rol n sol. ntre acestea, n primul rnd, sunt bacteriile ce posed pigment asemntor cu clorofila (bacterioclorofil) i algele care posed clorofil i care sunt organisme fototrofe. Metabolismul acestora este asemntor cu cel al plantelor superioare, energia fiind furnizat de ctre radiaiile luminoase. Sunt apoi bacteriile lipsite de pigment, de tip clorofilian, care i iau energia din oxidri ale substanelor minerale reduse (n mod esenial NH3 i SH2); aceast energie le permite s reduc CO2 i s metabolizeze carbonul, fiind organisme chimiolitotrofe. Printre ele se afl bacteriile nitrificatoare i unele care intervin n circuitul sulfului i al fierului. Cu ajutorul carbonului mineral metabolizat cu apa i cu substanele minerale luate din sol, aceste autotrofe realizeaz sinteza protoplasmatic, triesc, respir i, ca urmare, elimin CO2; n felul acesta, ciclul mineral al carbonului se ncheie. Dac importana teoretic a metabolizrii carbonului mineral este foarte mare, din punct de vedere cantitativ nu are dect un rol restrns, comparativ cu cel al circuitului organic, ce provine de la vegetale i animale. 6.2.2. Metabolismul carbonului organic Carbonul organic are, n principal, origine vegetal, fiind introdus n sol prin procese multiple i sub forme variate. Prin procese naturale este introdus sub form de esuturi vegetale moarte, rdcini, frunze, care ajung n sol odat cu moartea plantelor. Prin procese artificiale este introdus n sol prin ncorporarea unor vegetale parial metabolizate, sub form de gunoi natural i artificial. Carbonul organic de origine animal este din punct de vedere cantitativ mai puin important, fiind format din vieuitoarele faunei telurice dup moartea acestora, sub form de cadavre. n acest caz, descompunerea

se realizeaz prin fenomene de putrefacie, unde rolul carbonului este foarte slab, datorit raportului C/N foarte sczut. Ca atare, se va lua n considerare n mod esenial compoziia esuturilor vegetale care reprezint o mas foarte nsemnat de materie organic n natur. Plecnd de la carbonul mineral atmosferic, de la ap i srurile din sol, vegetalele au fcut sinteza constituenilor celulari. n ceea ce privete substanele carbonate, esuturile vegetale sunt constituite din: glucide ca monoze (hexoze-pentoze); dioze trioze, polioze, amidon, inulin, dextrin, hemiceluloz; glucozizi ca acizi organici fici i volatili; grsimi, ceruri i rini; lignin. Principalii constitueni din diferitele produse vegetale sunt prezentai n tabelul urmtor. Constituenii esuturilor vegetale
Substana Fn Paie de ovz Paie de gru Porumb ciocli Porumb boabe Celuloza % 28,50 25,43 37,27 37,67 30,56 Pentozani (hemiceluloze) 13,52 21,33 21,67 31,50 23,54 Lignina % 28,25 20,40 21,21 14,70 15,13 Grsimi i cear 2,00 2,02 0,67 1,37 0,77 Proteine % 9,31 4,30 3,00 2,11 3,50

Mai important din punct de vedere agrobiologic dect clasificarea chimic a produilor hidrocarbonai este aceea care ine seama de solubilitatea acestora, de care este legat viteza de descompunere din sol. Avem, din acest punct de vedere, clasificarea urmtoare: substane foarte solubile, ntre care sunt cuprinse glucidele simple i acizii organici; substane puin solubile, cum este hemiceluloza; substane insolubile, cum sunt: amidonul, celuloza, lipidele, cerurile i rinile; dintre acestea lignina formeaz o substan aparte, datorit gradului su de rezisten la agenii biologici i care are tendine de a se acumula n sol. Constituenii hidrocarbonaii mai importani din punct de vedere cantitativ ai esuturilor vegetale, redai n % de substan uscat, sunt

prezentai n tabelul urmtor, din care reiese c aceast compoziie este variabil n funcie de dezvoltarea plantei, adic de vrst. Compoziia esuturilor la secar n funcie de vrst
Stadiul de cretere 30 mm nspicare nflorire Maturitate Celuloz % 18,06 26,9 30,59 36,26 Pentoze % 16 21,18 22,71 22,90 Lignin % 9,9 11,8 18 17,1 Grsimi i ceruri 2,4 2,6 1,7 1,26 N total % 2,5 1,76 1,01 0,24

n decursul creterii cerealelor, se produce o sporire a proporiei de celuloz, hemiceluloz i lignin, corelat cu scderea proteinelor i, mai ales, a fraciunilor solubile. Ca urmare, esuturile plantelor mature vor fi mai dificil i mai lent descompuse n sol comparativ cu cele provenite de la plantele tinere. Concentrarea n substane superioare polimerizate este nc i mai accentuat la plantele lemnoase, unde proporia medie a acestei componente este urmtoarea: - Celuloz = 45 - 55%; - Grsimi, ceruri i rini = 3 - 5%; - Hemiceluloze = 20 - 30%; - Lignin = 25 - 30%; - Proteine = 0,5 - 1%. Lemnul este dificil fermentescibil n sol i rolul ligninei este, din acest punct de vedere, important prin mbogirea acestuia cu materie organic. Legturile acestor produse cu celuloza i gruprile uronice ale hemicelulozelor fac aceste glucide foarte rezistente la aciunea microbilor din sol. n continuare, vor fi prezentate, succesiv, procesele de degradare biologic n sol ale diverilor constitueni hidrocarbonai i ale esuturilor vegetale n funcie de solubilitate, de la glucidele simple, substanele solubile n ap, hemiceluloza, amidonul, peptina, celuloza, lignina etc. I. Degradarea glucidelor simple i a substanelor solubile n ap Dup ce resturile de esuturi vegetale sunt ncorporate n sol, glucidele i substanele solubile sunt primele atacate de microorganisme i dispar n

cteva zile, ajungndu-se la produii finali CO2 i H2O. Etapele intermediare sunt ns diferite, n funcie de umiditatea, aeraia i temperatura solului care condiioneaz intervenia fie a bacteriilor aerobe, fie a celor anaerobe sau a ciupercilor. n cazul atacului bacterian aerob se formeaz, pe parcurs, acizii piruvic, lactic, acetic, acetaldehida, iar ca produi finali CO2 i H2O. n cazul interveniei ciupercilor aerobe se produc, pe parcurs, acizii gluconic, citric, oxalic, fumaric, succinic etc. Atacul bacteriilor anaerobe are ca rezultat intermediar formarea de acizi volatili ca acidul lactic, hidrogenul, metanul i CO2. n urma aciunii fungilor anaerobi se produc acid fumaric i alcool. Aceste procese au fost urmrite n condiii de laborator dar n natur situaia este mult mai complex. Astfel, produii intermediari formai sunt fie metabolizai imediat de ctre alte grupe de microorganisme, cum este cazul la Azotobacter sp., care utilizeaz alcoolii i acizii organici pentru sinteza proprie a compuilor celulari, fie mineralizai complet, pn la CO2 i H2O. n ceea ce privete produii solubili n ap, a fost studiat problema zaharozei care este descompus de flora zimogen. Mai nti, intervine Bacillus megaterium, care formeaz acid oxi-butiric, i apoi prolifereaz genul Pseudomonas, care utilizeaz acest acid eliberat de primul, producndu-se i aici o reacie n lan. Reaciile de degradare sunt, n mod cert, cuplate cu cele de sintez, cci produsele mai simple rezultate sunt folosite de anumii germeni pentru constituirea capsulei gomoase, format din substane poliozide cu greutate molecular ridicat, de tipul hemicelulozelor. II. Degradarea hemicelulozelor Cantitatea hemicelulozelor n resturile vegetale variaz ntre 6 i 30% din greutatea uscat, n funcie de specie i vrsta plantei. Hemicelulozele sunt polizaharide ce nsoesc celuloza n esuturile vegetale i care sunt grupate n pentoze i hexoze. Din pentoze fac parte xilanul, format din resturi de xiloz, i arabanul, din resturi de arabinoz. Din hexoze fac parte mananele, constituite din resturi de manoz, glucomananele, alctuite din

resturi de glucoz i manoz, precum i galactamanele, formate din resturi de galactoz i manoz. Dintre hemiceluloze galactanele sunt mai rezistente la atacul microbian, n timp ce xilanele i mananele sunt mai repede metabolizate, fiind descompuse de o flor nespecific. Viteza de descompunere a acestor substane depinde de cantitatea de azot accesibil i se produce n mod ealonat i n ritm diferit. Astfel, n primele 4 zile, din paiele de ovz, care conin circa 23% hemiceluloz, se descompun 10% , n urmtoarele 4 zile alte 8,5% i numai 4,50% n ultimele 8 zile. Microorganismele care descompun hemiceluloza se succed ntr-o anumit ordine, ncepnd cu bacilii nesporulai, bacilii sporulai i cocobacilii. Aproape constant apare i Azotobacter sp. care nu prezint specii capabile s atace direct hemicelulozele, dar folosesc produii intermediari de metabolism, formai de celelalte grupe de bacterii. Dintre ciuperci s-au identificat n acest proces Zygorhynchus sp., Cuninghamella sp., Rhizopus sp., Trichoderma sp., Humicola sp., Aspergillus niger i Aspergillus fumigatus. Actinomicetele au fost identificate, de asemenea, ca fiind active n descompunerea hemicelulozelor. Unele bacterii polifage sunt capabile s atace i hemicelulozele. Printre acestea se numr: Alcaligenes sp., Pseudomonas sp., Bacillus circulans i Sporocytofaga myxococcoides, care este o bacterie celulolitic autentic. Activitatea microflorei hemicelulolitice este foarte variat, n funcie de tipul de sol i coninutul n substan organic al esuturilor vegetale. Numrul bacteriilor hemicelulolitice este cel mai mare n solurile neutre i apoi n cele acide. III. Degradarea amidonului Concentraia de amidon din esuturile vegetale este, n principal, sczut, cu excepia seminelor (max. 70% din greutatea uscat) i a tuberculilor de cartof. n funcie de natura solului, greu sau uor, de umiditate i de temperatur, procesul de amiloliz se desfoar n mod diferit. Astfel, n terenurile de cultur mijlocii, bine aerate i semisaturate n umiditate, la

temperatura de 18C, intervin n degradarea amidonului unele bacterii i ciuperci, aparinnd genurilor Aspergillus, Fusarium i Rhizopus. n solurile saturate n ap i cu celelalte condiii asemntoare, se gsesc bacterii aerobe i facultativ anaerobe din genul Bacillus, mai ales B. macerans, B. subtilis i B. cereus. n aceste condiii, fenomenul este mai rapid. n aceleai condiii, dar la o temperatur mai ridicat, pn la 33C, intervin bacteriile strict anaerobe, de tip Clostridium, i amiloliza este, n aceste din urm condiii, foarte rapid. Se ntlnesc bacteriile Clostridium butyricus, Clostridium perfringens, dar i Clostridium pasteurianum, care, pe lng degradarea amidonului, fixeaz i azotul atmosferic. n lumina acestor condiii, se pare c amiloliza n sol este rezultatul activitii unei flore zimogene destul de polifage, cu o dubl constituie. O microflor abundent, puin specializat, bacterian i fungic, care degradeaz amidonul pn la stadiul de dextrin, apoi dextrina este metabolizat de alte microorganisme. O microflor mai restrns i mai specializat hidrolizeaz amidonul pn la acizi, alcooli i gaze. n ansamblu, aceast activitate merge n paralel cu fertilitatea aparent a solului i cu bogia microflorei totale. IV. Degradarea pectinei Coninutul n pectin al esuturilor vegetale este cuprins ntre 10 i 30%, n funcie de specie, de organe i de vrsta plantelor. Pectinele sunt substane cu greutate molecular ridicat, care aparin grupului poliuronidelor. Ele formeaz, n condiii favorabile, geluri n contact cu apa i se mpart n mai multe grupri: protopectine derivaii ale acidului poligalacturonic, legate prin anumii constitueni cu membrana celular; acidul pectic sau pectina propriu-zis, care este acid poligalacturonic esterificat de alcoolul metilic; acidul pectic sub form de acid poligalacturonic neesterificat. Acestor trei compui le corespund enzime specifice ca: protopectinaza, pectinesteraza i, respectiv, poligalacturonidaza. La

descompunerea substanelor pectice particip unele bacterii, actinomicete i ciuperci, bacteriile anaerobe fiind agenii principali de descompunere. Bacteriile pectinolitice anaerobe sunt reprezentate prin speciile de Clostridium, cum sunt: Clostridium aurantibutyricum ce atac att pectina purificat, ct i pectina din resturile vegetale. Clostridium felsineum care atac numai pectina din resturile vegetale. ntre speciile aerobe de bacterii se ncadreaz Bacillus polymyxa, B. macerans i reprezentani ai genurilor Pseudomonas, Arthrobacter i Corynebacterium. ntre actinomicetele pectinolitice se situeaz genurile Streptomyces i Micromonospora. Dintre ciupercile pectinolitice fac parte mai multe genuri ca: Aspergillus, Fusarium, Alternaria, Botrytis, Monilia etc. O alt specie, ciuperca Pullularia pululans, descompune, toamna, pectina din frunzele czute, uurnd mineralizarea acestora. V. Descompunerea celulozei Celuloza reprezint 45-80% din greutatea uscat a resturilor vegetale i, ca atare, constituie cea mai important parte a substanelor organice care se ntorc n sol. Fedorov apreciaz cantitatea de carbon gsit n sol sub form de celuloz la 350 milioane tone n compoziia organelor vii i la 700 miliarde tone n sol i turb. Celuloza este un polizaharid (C6H10O5), format dintr-un lan de 1:4 D glucopiranoz (celobioz), care constituie scheletul peretelui celular la plante. Celuloza este foarte rezistent la degradare, exceptnd descompunerea produs sub aciunea microorganismelor, datorit creia plantele ar primi la hectar aproximativ 15 tone CO2 pentru nutriia lor carbonat. n acest fel, degradarea i mineralizarea microbian a celulozei reprezint i din punct de vedere cantitativ unul dintre procesele cele mai importante ce se petrec pe suprafaa globului.

Degradarea biologic a celulozei a fost evideniat prima dat de Omelianschi care a studiat fenomenele descompunerii aerobe iar apoi Vinogradscki a stabilit i rolul deosebit al degradrii anaerobe. Din hidroliza celulozei rezult glucoz i celobioz iar celobioza, la rndul ei, n final, este descompus n glucoz. Aceti compui apar numai excepional n sol, deoarece procesele biologice merg pn la stadiile de combustie incomplet, cu eliberare de acizi i alcooli sau complet, pn la CO2 i H2O a glucozei. Microorganismele se dezvolt direct pe fibrele de celuloz de care se fixeaz i produc hidroliza enzimatic a celulozei, n cursul creia fibrele i pierd consistena, se gonfleaz i se transform ntr-o mas cu o consisten pstoas i gelatinoas. A. Degradarea aerob a celulozei poate fi realizat de bacterii i ciuperci. Bacteriile celulolitice pot fi puse n eviden nsmnnd particule de sol pe gel de siliciu impregnat cu o substan azotoas. Dup cteva zile de incubare la 30C apar colonii colorate diferit, n galben, crmiziu, brundeschis, roz- portocaliu, verde i foarte rar brun-deschis i negru. Culoarea coloniilor variaz n funcie de vrsta culturii i de specie. Microorganismele celulolitice pot fi criofile, adic rezistente la temperaturi sczute, mezofile sau termofile. Cele mai multe dintre acestea sunt mezofile sau termofile i se mpart, la rndul lor, n microorganisme aerobe i anaerobe. ntre microorganismele celulolitice mezofile aerobe sunt cuprinse o serie de bacterii, actinomicete i ciuperci. Bacteriile celulolitice sunt reprezentate prin mai multe genuri ce aparin ord. Cytophagales, genul Cytophaga ce se prezint sub form de bastonae scurte sau elongate, flexibile sau ca filamente cu dimensiuni de 0,3-0,7 x 5-50 m, cu capetele bastonaelor rotunjite sau ascuite. Celulele i coloniile sunt colorate n nuane de galben, oranj sau rou. Cea mai rspndit specie este Cytophaga hutchinsonii. Genul Sporocytophaga se prezint sub form de celule asemntoare cu Cytophaga dar formeaz microchisturi rezistente la uscciune, specia cea mai comun fiind Sporocytophaga myxococcoides. Din ord. Myxobacteriales produc descompunerea celulozei speciile Sorangium compositum i Polyanginum celullosarum.

Din fam. Pseudomondaceae face parte i specia Cellvibrio ochracea bacterie celulolitic foarte activ. Se mai cunosc ca bacterii celulolitice i specii din genurile Cellulomonas, precum i Bacillus ca B. vagans i B. soli. Dintre actinomicetele celulolitice citm speciile: Streptomyces cellulosae, Streptomyces violaceus, Micromonospora chalcea i Nocardia cellulans. Ciupercile celulolitice sunt ageni activi ai descompunerii celulozei i, mai ales, a celulozei din materialul lemnos. Dintre cele mai rspndite genuri amintim: Chaetomium, Aspergillus, Penicillium, Myrothecium i Trichoderma. n cursul descompunerii aerobe a resturilor vegetale se disting dou etape succesive: n prima faz se produce descompunerea prilor vegetale mai uor atacabile, cu participarea predominant a speciilor de Cellvibrio i Myxococcus. n a doua faz urmeaz descompunerea prilor mai rezistente la degradare, cu predominana speciilor Cytophaga i a ciupercilor microscopice. Din punct de vedere chimic, celuloliza are loc tot n dou etape. La nceput se produce hidroliza celulozei pn la celobioz (C12H22O11) i ali produi mai compleci, dup care, prin oxidarea acestor produi, se formeaz, ulterior, acizi uronici. Dac hidroliza celulozei este mai puternic, mergnd pn la formarea glucozei, aceasta este mai departe oxidat pn la CO2 i H2O, trecnd prin stadiul de oxiacizi:
(C6H10O5)n + nH2O + O2 R-CHOH-COOH CO2 + H2O + x cal.

Formarea de hidrai de carbon solubili i de oxiacizi ca produi intermediari de degradare a celulozei are mare importan n sol, deoarece stimuleaz dezvoltarea fixatorilor de N2, care i folosesc n hran. Degradarea aerob a celulozei se realizeaz n condiii optime n solurile bine lucrate, aerate, bogate n azot i cu climat temperat. n aceste condiii, bacteriile i ciupercile celulolitice sunt active pn la adncimea de

30 cm, ceea ce corespunde, practic, zonei pentru dezvoltarea culturilor agricole. B. Degradarea anaerob a celulozei Acest proces se realizeaz, n special, n zonele umede, mai profunde ale solului, cnd resturile vegetale sunt n mase compacte, dense , neaerate. Din punct de vedere chimic, ea reprezint o hidroliz a celulozei sub aciunea celulazelor i a celobiazei microbiene, cu formare de glucoz, din descompunerea creia rezult acizi volatili, ca formic, butirici, acetic, acizi nevolatili, ca succinic i lactic, precum i alcool etilic i gaze (CO2, H2 i metan). Bacteriile celulolitice anaerobe din sol sunt reprezentate prin Bacillus cellulosae hydrogenicus i Methylomonas methanica, care elibereaz metan. Fermentarea celulozei cu degajare de H2 este nsoit de formarea acidului butiric i a CO2, dup reacia:
(C6H10O5)n + nH2O CH3CH2COOH + CH3COOH + H2 + CO2 + x cal.

n fermentaia metanic a celulozei, cantitatea de gaze eliberat reprezint aproximativ 1/2 din greutatea celulozei descompuse. Schema general a reaciei ar fi urmtoarea:
(C6H10O5)n + nH2O CH3CH2COOH + CH3COOH + CO2 + CH4

Unele specii de bacterii celulolitice anaerobe sunt adaptate s triasc n intestinul uman i al animalelor unde determin descompunerea celulozei din alimente. Bacteriile celulolitice se dezvolt la temperatura optim de 5570C i sunt prezente n medii bogate n celuloz i azot organic i mineral, cum sunt blegarul i nmolurile oreneti. Unele bacterii termofile, cum sunt Clostridium termocellus i Clostridium termocellulolyticum, degradeaz celuloza cu formare de acizi volatili i fici, alcooli i gaze, n special metan. Microorganismele celulolitice mai pot contribui la distrugerea hrtiei n bibliotecile i depozitele ru aerisite i umede, provocnd pagube nsemnate.

VI. Descompunerea ligninei Descompunerea ligninelor are importan deosebit pentru circulaia carbonului ntruct aceasta reprezint cea de-a doua surs a acestui element n natur: 25-30% din corpul plantelor lemnoase i 15-20% din corpul plantelor ierboase. Ligninele reprezint, totodat, complexul vegetal mai rezistent i, din aceast cauz, se acumuleaz continuu n sol, lund parte la formarea humusului. Ligninele sunt substane macromoleculare, provenite prin condensarea unor alcooli aromatici cu o structur complex reticular care necesit o mare cantitate de energie pentru a fi scindat. Agenii principali ai descompunerii ligninei sunt ciupercile din ord. Agaricales, mai ales acelea ce produc putregaiul alb al lemnului care pot ataca i celuloza. Un alt grup de ciuperci cauzeaz putregaiul brun al lemnului dar acesta nu atac lignina. Ciupercile ligninoclastice pot fi grupate n trei tipuri i anume: tipul Polyporus versicolor atac la nceput lignina i apoi celuloza; tipul Armillaria vera atac la nceput celuloza apoi lignina; tipul Ganoderma applanatum atac simultan, att lignina, ct i celuloza. Lignina se descompune mai repede n condiii aerobe, n care acioneaz ciupercile, i mai lent n anaerobioz cnd acioneaz mai mult, bacteriile. VII. Metabolismul taninurilor, lipidelor i cutinei Taninurile sunt descompuse, n special, de ctre ciupercile din genurile Aspergillus i Penicillium. n cazul cnd ating o anumit concentraie n sol, ele au o aciune antimicrobian. Lipidele sunt hidrolizate cu uurin de ctre microorganisme. Cutina este descompus de bacterii din genul Pseudomonas n ritm lent. 6.3. Circuitul sulfului Circuitul sulfului (Fig. 77) este, alturi de cele ale azotului i carbonului, unul dintre cele mai importante circuite din punct de vedere

biologic. Sulful intr n componena aminoacizilor metionin i cistein, a unor vitamine, glicozide, plizaharide, alcaloizi etc.

Fig. 77 Circuitul sulfului n natur (www.scritube.com).

Transformarea microbiologic a sulfului n sol se face n trei faze principale: 1. Mineralizarea sulfului organic, ce se petrece paralel cu mineralizarea azotului i fosforului organic sub aciunea unor microorganisme, ca Proteus vulgaris, Serratia marcesens, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis i Clostridium sporogenes din categoria bacteriilor anaerobe i de ctre unele ciuperci ca Scopulariopsis brevicaulis i Aspergillus niger. n cursul mineralizrii, sulful se elibereaz sub form de hidrogen sulfurat (H2S), metilmercaptan (CH3-SH) sau de sulfat (SO42-). 2. Sulfoficarea este procesul de oxidare a H2S, S, S2O32- (tiosulfailor), S4O62- (tetrationailor), SO32- (sulfiilor) pn la acid sulfuric, respectiv sulfai. Aceast faz este produs de sulfobacterii chimiolitoautotrofe nefilamentoase, ca Thiobacillus sp. i Sulfolobus sp. i filamentoase ca Beggiatoa sp.

Mai este produs de bacteriile purpurii Chromatium sp. i bacteriile verzi Chlorobium sp. Spre exemplu, Thiobacillus thioxidans oxideaz sulful elementar la acid sulfuric: S + 3/2O2 + H2O H2SO4 Bacteria Beggiatoa sp. oxideaz H2S la S: H2S + 1/2O2 S + H2O Sulful se acumuleaz n celulele microbiene sub form de incluziuni. n lips de H2S, bacteria oxideaz sulful din aceste incluziuni pn la H2SO4. Folosirea sulfului elementar poate avea aplicaii practice pentru mbuntirea solurilor alcaline. Astfel, sulful este oxidat de microorganismele sulfoficatoare pn la acid sulfuric, care micoreaz pHul mediului. Dar sulfoficarea poate avea i efecte negative din punct de vedere agricol. n solurile inundate se formeaz cantiti mari de sulfuri, datorit desulfoficrii. n urma drenrii i desecrii acestor soluri, sulfurile se oxideaz rapid la sulf pe cale chimic, iar acesta la H2SO4, datorit microorganismelor sulfoficatoare. Ca rezultat, pH-ul acestor soluri ajunge la valori de 3,2 - 2,2, care pericliteaz viaa plantelor. Pentru a preveni acest efect negativ este necesar aplicarea amendamentelor calcaroase. 3. Desulfoficarea este procesul de reducere dezasimilatorie a sulfailor pn la H2S. Acest proces are loc n condiii anaerobe i se datoreaz, n primul rnd, speciilor din genul Desulfovibrio, precum D. desulfuricans. Bacteria reduce sulfaii la H2S cu ajutorul hidrogenului din substanele organice, ca lactatul i piruvatul, care servesc att ca surse de energie dar i ca surs de carbon. Putem trage concluzia c sulfoficarea duce la acidifiere, n timp ce desulfoficarea produce alcalinizarea solului. n procesul de obinere a H2S rezultat din desulfoficare, nu se ating concentraii toxice pentru plante, deoarece Fe2+ din sol ndeprteaz H2S sub form de FeS care precipit. n solurile srace n Fe2+ i irigate cu ape bogate n sulfai, H2S produs n cantiti mari produce efecte toxice la orez i la alte plante.

6.4. Circuitul fierului Fierul intr n compoziia hemienzimelor, a hemoglobinei, leghemoglobinei, F-S-proteinelor, iar circuitul su cuprinde patru etape microbiene ce se succed astfel: 1. Mineralizarea fierului organic se petrece n paralel cu celelalte procese de mineralizare a substanelor organice. Microorganismele mineralizatoare atac partea organic a compuilor cu fier iar acest element se elibereaz sub form mineral, bi- sau trivalent. Microorganismele respective pot fi bacterii din genurile Pseudomonas, Bacillus, Corynebacterium, Mycobacterium etc.; mai pot fi actinomicete din genurile Nocardia sau Streptomyces, precum i ciuperci, toate ca organisme chimioorganoheterotrofe. Compuii organici cu Fe din humus pot fi atacai de bacterii ce aparin genurilor Metallogenium, Pedomicrobium i Seliberia. Pe suprafaa celulelor respective se depune, sub form de precipitat, hidroxidul feric Fe(OH)3. 2. Formarea compuilor organici de fier este un proces opus mineralizrii fierului organic. Aici, microorganismele sintetizeaz compui organici solubili, deintori de fier, bi- sau trivalent. Fierul poate fi sintetizat de unii compui organici ca acidul acetic sau compleci, ca acizii citrici, acidul 2-ceto-D- gluconic, acizii humici etc. Microorganismele capabile de formarea compuilor organici cu fier sunt unele bacterii i mucegaiuri (ciuperci) precum i unii licheni. Mineralizarea i formarea microbian a compuilor organici cu Fe joac un anumit rol n procesul de podzolire a solului. Sub aciunea microorganismelor, n orizontul A se formeaz Fe organic solubil care migreaz spre orizontul B, unde, sub aciunea microorganismelor mineralizatoare, se elibereaz sub form anorganic fierul trivalent. 3. Oxidarea fierului bivalent. La aceste procese particip ferobacteriile (bacteriile feroginoase i siderobacteriile). Acestea sunt organisme acvatice dar unele se pot dezvolta i n soluri, unde se prezint sub form filamentoas sau nefilamentoas.

La ferobacteriile filamentoase, ca Leptothrix ochracea, celulele individuale sunt incluse ntr-o teac organic comun n care se acumuleaz Fe(OH)3. Ferobacteriile nefilamentoase cuprind unele bacterii pedunculate, ca Gallionella ferruginea, capsulate, ca Siderocapsa treubii, i nependulate i necapsulate, ca Ferrobacillus thiooxidans, la care Fe(OH)3 se depoziteaz pe penduncul, n capsul i, respectiv, pe suprafaa celulelor. Aceste bacterii sunt considerate n prezent chimiolitoorganoheterotrofe, cu excepia lui Thiobacillus ferrooxidans. Acest tiobacil oxideaz nu numai sulful elementar, sulfurile i tiosulfaii dar i Fe2+ i asimileaz CO2, dezvoltndu-se n medii acide cu un pH = 2 6,5. Oxidnd pirita (FeS2) sau calcopirita (CuFeS2), Thiobacillus ferrooxidans produce sulfat feric. ntr-o prim etap, pirita este oxidat la sulfat feros: 2FeS2 + 7O2 + 2H2O 2FeSO4 + 2H2SO4 + energie n continuare, sulfatul feros este oxidat la sulfat feric: 2FeSO4 + 1/2 O2 + H2SO4 Fe2(SO4)3 + H2O + energie La rndul su, sulfatul feric poate oxida pirita cu forme de sulfat feros i acid sulfuric: 7Fe2(SO4)3 + FeS2 + S H2O 15 FeSO4 + S H2SO4 Dezvoltarea lui Thiobacillus ferrooxidans duce la acidifierea mediilor, datorit acidului sulfuric produs. La rndul su, acidul sulfuric poate solubiliza cuprul i alte metale grele din mineralele ce le conin. Din aceast cauz, dezvoltarea speciei Thiobacillus ferrooxidans duce la acumularea de concentraii fitotoxice pentru plantele de cultur, a acidului sulfuric i a metalelor grele n haldele de steril luate n cultur. 4. Reducerea fierului trivalent. Acest produs se datoreaz unor bacterii facultativ sau obligat anaerobe, ca Bacillus circulans, Bacillus polymyxa, Enterobacter aerogenas, Clostridium butyricum etc. Acestea, n prezena substanelor organice, ca glucoza, reduc fierul trivalent (Fe3+) la fierul bivalent (Fe2+), fierul trivalent servind ca acceptor de electroni.

Mai sunt capabile de reducerea fierului trivalent i unele ciuperci din sol. Toate aceste microorganisme fier-reductoare sunt chimioorganoheterotrofe. Trebuie s menionm c oxidarea bivalent i reducerea fierului trivalent n sol se pot produce i fr participarea direct a microorganismelor. 6.5. Circuitul fosforului Fosforul este un element absolut necesar vieuitoarelor i intr n compoziia acizilor nucleici, a unor proteine, a unor compui macroergici (ATP), a fosfolipidelor, a fosfozaharidelor, a fitinei etc. Circuitul fosforului (Fig. 78) se desfoar n mai multe faze, dup cum urmeaz: 1. Mineralizarea fosforului organic se desfoar n paralel cu mineralizarea compuilor organici cu azot (amonificarea), sub aciunea acelorai grupe de microorganisme. Unul dintre microorganismele foarte active n mineralizarea fosforului organic este Bacillus megaterium var. phosphaticus. n urma mineralizrii, fosforul se elibereaz sub form de ortofosfat solubil, asimilabil de ctre plante i microorganisme; n acelai timp, ns, ortofosfatul solubil poate trece n ortofosfai de Ca, Fe, Al, Mg, Cu i Ni, care sunt insolubili. Compuii organici cu fosfor reprezint 15-85% din cantitatea total de fosfor din diferite soluri. ntre compuii organici cu fosfor ai solului predomin fitina i acizii nucleici. Fitina este de origine vegetal, iar acizii organici provin de la microorganisme, plante i animale. Fitina constituie ntre 10 i 80% din cantitatea total de fosfor organic din soluri. Ea este sarea de Mg i Ca a acidului fitic, iar descompunerea ei hidrolitic este catalizat de fitoz.

Fig. 78 Circuitul fosforului n natur (www.scritube.com).

2. Mobilizarea ortofosfailor insolubili este procesul de solubilizare a fosfatului tricalcic, a ortofosfailor de Fe, Al, Mg, Mn, Cu, Ni, ce are loc sub aciunea acizilor produi de microorganisme i de cei excretai de rdcinile plantelor. Aici intr acizii azotos i azotic, produi de microorganismele nitrificatoare, acidul sulfuric, produs de microorganismele sulfoficatoare, acidul carbonic i acizii organici, produi de microorganisme, precum i de rdcinile plantelor. Dintre acizii organici acidul 2-ceto-D-gluconic joac un rol deosebit n solubilizarea ortofosfailor insolubili. Mai contribuie la solubilizare i acizii citric, succinic, malic, oxalic, tartric, lactic, precum i acizii humici. 3. Transformarea meta-, piro- i polifosfailor este realizat sub aciunea unor bacterii ca Pseudomonas fluorescens, Sporocytophaga cauliformis i a unor ciuperci ca Aspergillus sp. i Penicillium sp. Aceste reacii sunt catalizate de enzime, dar ele pot avea loc i sub aciunea aciditii, iar transformarea meta- i pirofosfailor poate fi catalizat i de MnO2. 4. Oxidarea fosfailor i hipofosfailor are loc sub aciunea unor microorganisme aerobe i este, de asemenea, catalizat de enzime.

5. Reducerea ortofosfailor este produs de microorganisme aerobe, reacia respectiv fiind de natur enzimatic. n prezena nitrailor i sulfailor, reducerea ortofosfailor este inhibat, deoarece nitraii i sulfaii sunt utilizai mai uor ca acceptori de electroni. 6.6. Circuitul potasiului Microorganismele elibereaz ionii de K+ prin descompunerea srurilor de potasiu a acizilor organici (ex. acidul acetic sau acidul butiric). Ionii de K+ reacioneaz cu anionii de HO3-, PO42-, SO42-, CO32- i formeaz sruri accesibile plantelor i microorganismelor sau sunt fixai de ctre coloizii solului. Microorganismele mai pot elibera potasiul i prin solubilizarea silicailor. Bacteriile care sunt capabile de aceast aciune au fost denumite silicatbacterii. Printre acestea este i Bacillus mucilaginosus var. siliceus, care, dup unii autori, ar fi o tulpin de Bacillus circulans. Unele ciuperci, ca Aspergillus niger i Penicillium nigrescens, pot, de asemenea, elibera K+ din silicai. Eliberarea K+ din silicai sub aciunea silicatbacteriilor se datoreaz acizilor (H2CO3 i acizii organici), pe care aceste microorganisme i produc. Sistemul radicular al plantelor produce, de asemenea, acizi care joac acelai rol. 6.7. Transformrile microbiene ale calciului Descompunerea microbian a compuilor organici cu calciu duce la eliberarea Ca2+, care, ca i K+, poate reaciona cu anionii minerali, formnd sruri solubile i insolubile sau sunt fixai de ctre coloizii solului. i aici, acizii minerali i organici, produi fie de microorganisme sau de rdcini, solubilizeaz srurile de Ca insolubile. 6.8. Transformrile microbiene ale magneziului Acestea sunt asemntoare cu cele ale calciului, magneziul activnd unele procese microbiene din sol, ndeosebi nitrificarea i fixarea azotului atmosferic.

6.9. Transformrile microbiene ale microelementelor 6.9.1. Manganul Se gsete n sol n form bivalent ionic (Mn2+) la pH mai mic de 5,5 i sub form de Mn trivalent i, mai ales, tetravalent la pH mai mare de 8, datorit autooxidrii Mn2+. Transformrile microbiene ale manganului se produc n zona valorilor de pH de 5,5-8. n condiii aerobe acioneaz unele bacterii heterotrofe din genurile Bacillus, Corynebacterium, Metallogenium, actinomicetele din genul Streptomyces, precum i ciupercile din genurile Curvularia, Cladosporium etc. Aceste microorganisme oxideaz Mn2+, precipitndu-l sub form de MnO(OH)2 (hidroxid de mangan trivalent). Procesul de oxidare a Mn2+ poate duce la apariia n sol a carenei de mangan asimilabil i are ca efect apariia unor boli de nutriie la plante. n condiii anaerobe, n prezena substanelor organice uor asimilabile, unele bacterii reduc mangan tetravalent la mangan bivalent; MnO2 servete ca acceptor de electroni, nlocuind O2. Totodat, acizii produi de microorganisme, att n condiii aerobe, ct i anaerobe, deviaz echilibrul chimic dintre manganul bivalent i cel tetravalent n direcia formrii Mn2+. 6.9.2. Seleniul n plante, seleniul este prezent sub form de selenio-aminoacizi, n care seleniul nlocuiete sulful n structura metioninei i Se-metilcistein. Ambii Se-aminoacizi din resturile vegetale se mineralizeaz sub aciunea microorganismelor din sol. Seleniul apare sub form de selenii (SeO32-) i selenai (SeO42-). Microorganismele din sol sunt capabile i de oxidarea seleniului metalic i al seleniurilor (Se2-) la selenai. O alt transformare microbian a seleniului n sol este reducerea seleniilor i selenailor la seleniul metalic. Aceast capacitate a fost demonstrat la unele bacterii, cum sunt Clostridium, Corynebacterium i ciuperci ca Rhizobium, precum i la unele levuri i mucegaiuri.

Compuii cu Se (selenii, selenai, Se-aminoacizi) pot fi metilai sub form de produs gazos, numit dimetilselein (CH3-Se-CH3). Acest proces poate fi realizat de unele ciuperci, ca Aspergillus, Cephalosporium, Fusarium, Penicillium, ca i de unele bacterii. 6.9.3. Zincul Microorganismele, n urma descompunerii resturilor vegetale, elibereaz zincul sub form solubil (Zn2+). Microflora solului realizeaz aceast solubilizare prin acizii minerali i organici produi. n sens invers, prin diminuarea aciditii, microorganismele micoreaz solubilitatea zincului. Tiobacilii oxideaz sulful din ZnS la acid sulfuric i elibereaz zincul sub form de Zn2+ care rmne n soluie, datorit acidului sulfuric. H2S, produs de microorganisme, ndeprteaz zincul prin formarea de ZnS, care precipit. Insolubilizarea microbian a zincului provoac, la pomii fructiferi, o caren manifestat prin micorarea limbului frunzelor, boal ce poate fi prevenit prin tratarea solului cu sulfat de zinc (ZnSO4). 6.9.4. Cuprul Descompunerea microbian a resturilor vegetale poate duce la micorarea concentraiei cuprului solubil, datorit unei reacii chimice n care sunt implicai produii microbieni, formai n cursul descompunerii. Tiobacilii pot solubiliza cuprul din minereuri sulfuroase, cum este calcopirita (CuFeS2), iar Thiobacillus ferrooxidans poate oxida att sulful, ct i cuprul monovalent din Cu2S. Hidrogenul sulfurat (H2S), format pe cale microbian, poate precipita Cu2+ sub form de CuS. Microorganismele din sol au capacitatea de transformare i a altor microelemente ca: Mo, V, Co, Ni, Pb, Cd, Si.

Capitolul 7 MICROBIOLOGIA FERMENTAIILOR


Microbiologia fermentaiilor studiaz caracteristicile biologice i biochimice, precum i condiiile optime de activitate ale microorganismelor care produc transformri chimice n diferite substraturi, cu formarea unor cantiti relativ mari de substane cu valoare util sau economic. De asemenea, ea studiaz rolul microorganismelor n apariia unor modificri utile a diferitelor produse alimentare, modalitile de a dirija aceast activitate microbian, ca i posibilitile de combatere a microorganismelor duntoare pentru evoluia normal a proceselor fermentative sau pentru buna conservare a produselor alimentare. Fermentaiile sunt procese biochimice, determinate de enzimele unor microorganisme, cum sunt bacteriile, levurile, mucegaiurile care au proprietatea de a degrada n condiii de anaerobioz diferii compui organici ai carbonului cu formarea de substane cu o condiie chimic mai simpl. Din descompunerea anaerob a hidrailor de carbon rezult o serie ntreag de produi finali cu 1, 2, 3 sau 4 atomi de carbon, care apar, obinuit, prin degradarea glucozei pn la acid piruvic. De cele mai multe ori, unul dintre produii rezultai predomin cantitativ i, ca atare, caracterizeaz procesul de fermentaie alcoolic, lactic, butiric, propionic etc. Termenul generic al fermentaiei (lat. fervere = a fierbe) a fost ales pentru a indica aspectul de lichid care fierbe, caracteristic pentru faza de intensitate maxim a procesului fermentativ, aceea n care, datorit eliberrii CO2 sub form de bule de gaz, se produce o efervescen a mediului lichid, n special n vasele foarte mari (de exemplu, la mustul de struguri care fermenteaz). Iniial, fermentaiile se produceau sub aciunea micoflorei "spontane", slbatice, care se gsete pe suprafaa sau n interiorul produsului supus fermentaiei. Aceste microorganisme sunt slab sau inegal active sau pot fi n amestec cu specii duntoare, a cror activitate diminueaz calitatea produsului final. n prezent, pentru a se preveni aceste inconveniene, se recurge la microorganisme selecionate, cu ajutorul crora se obin produse

de calitate superioar, se mbuntete randamentul i se scurteaz durata procesului tehnologic. Microorganismele utilizate n procesele fermentative de tip industrial au urmtoarele caliti, ce pot fi astfel sintetizate: cresc rapid i pot fi uor cultivate n cantiti mari, pe medii ce conin substanele organice corespunztoare; au capacitatea de a-i menine constant proprietile fiziologice, n anumite condiii de cultur, producnd uor i n cantiti mari enzimele necesare pentru transformarea substratului n sensul dorit; realizeaz aceste modificri, cu formarea unor produi folositori, n condiii relativ simple i puin costisitoare. Microorganismele de utilitate industrial sunt astzi folosite pentru procese ca: biosinteza a diferite substane chimice (alcooli, acid acetic, acid lactic, acid citric, aceton, antibiotice); producerea pe cale fermentativ a unor alimente (produse lactate, brnzeturi), a unor buturi alcoolice (vin, bere) i a furajelor nsilozate; obinerea de produse folosite n industria textilelor (fibre de in, cnep prin topire). Microbiologia industrial mai studiaz i aplic metodele de combatere a alterrilor microbiene a alimentelor cu ajutorul conservrii prin refrigerare, sterilizare, fermentaii i alte procese tehnice. 7.1. Fermentaia alcoolic Este un proces anaerob, prin care glucidele fermentescibile sunt metabolizate prin reacii de oxido-reducere sub aciunea echipamentului enzimatic al drojdiei n produi principali (alcool etilic i CO2), produi secundari (alcooli superiori, acizi, aldehide etc) i energie. Alcoolul etilic sau etanolul (CH3-CH2-OH) se obine prin fermentarea complet, n special de ctre unele drojdii, a diferite zaharuri, urmat de separarea prin distilare i purificare a alcoolului obinut. Fermentaia alcoolic este una dintre cele mai importante fermentaii industriale, deoarece alcoolul este ntrebuinat curent n industria alimentar, chimic, farmaceutic, a parfumurilor i cauciucului.

Materiile prime folosite la fabricarea alcoolului sunt ieftine, abundente n natur i sunt grupate astfel: materii prime amidonoase, rezultate din cartof, porumb, orz, secar, care se pot utiliza dup transformarea hidrolitic a amidonului din compoziia lor n zaharuri mai simple, fermentabile de ctre levuri; materii prime zaharoase, provenite din sfecla pentru zahr sau trestia de zahr, sucurile de fructe, melasa, rezultat ca deeu de la fabricarea zahrului i a leiilor sulfitice, ce rezult ca deeu de la fabricarea celulozei, cu coninut sczut de 1-5 % zahr; materii prime celulolitice, rezultate din industria hrtiei, ca lemnul i stuful, care, prin fierbere cu acizi sub presiune, se hidrolizeaz cu formarea de hidrai de carbon mai simpli, fermentabili. nainte de folosirea lor n fermentaiile industriale, amidonul, celuloza i hemiceluloza trebuie hidrolizate sau convertite n zaharuri cu molecule relativ simple i fermentabile. n acest scop, se folosesc fie preparate enzimatice, ca malul de cereale sau enzime de natur microbian, provenite de la bacterii i mucegaiuri, fie anumite substane chimice, ca acizii diluai sau aciunea asociat a unora dintre aceti ageni. Microorganismele care produc fermentaia alcoolic a zaharurilor sunt reprezentate de: ciuperci, n principal din genul Saccharomyces; unele bacterii ca: Zymomonas mobilis, Thermobacterium mobile, Bacillus macerans, Sarcina ventriculi, Bacillus acetosetilycus etc. Fermentaia alcoolic poate fi spontan, produs de drojdiile slbatice, prezente n natur, sau dirijat, prin introducerea n materialul de fermentat a unor sue de drojdii selecionate ce au capacitate superioar de fermentaie. Temperatura optim de activitate este de 28-32oC. Tulpinile selecionate au capacitatea de a suporta concentraii mari de alcool i de a consuma cantiti mari de hidrocarbonate pentru sintezele lor proprii. Aceste drojdii au un echipament enzimatic foarte bogat, graie cruia obin n mediu anaerob energia necesar manifestrilor vitale, prin procesul de fermentaie alcoolic a hidrailor de carbon, dup relaia global:
C6H12O6 2 CH3CH2OH + 2 CO2 + 2 ATP (118 kJ/mol)

7.1.1. Utilizarea microorganismelor n vinificaie Vinul este o butur alcoolic nedistilat, cunoscut din cele mai vechi timpuri care se obine prin fermentaia alcoolic a mustului de struguri. Fermentaia mustului, obinut prin zdrobirea strugurilor recoltai la maturitate, se face n vase speciale deschise, sub aciunea drojdiilor din flora natural sau a unor tulpini selecionate. Pe struguri, n must i, respectiv, n vin, exist un numr nsemnat de microorganisme, bacterii i ciuperci, care iau parte la procesul de fermentaie, avnd fie un rol pozitiv, n cazul fermentaiilor normale, fie un rol negativ, de "mbolnvire" a vinului, cnd declaneaz unele procese fermentative, care duc la efecte nedorite. A. Levurile (drojdii) Levurile sunt ciuperci microscopice, care au capacitatea de a produce fermentaia caracteristic a mediilor ce conin zaharuri (levere = a ridica). Ele sunt grupate din punct de vedere sistematic n subncr. Ascomycotina, fam. Saccharomycetaceae i n subncr. Deuteromycotina (Fungi imperfecti), fam. Cryptococca.ceae. Rspndirea levurilor Levurile sunt larg rspndite n natur, ntlnindu-se n sol, ape, pe plante, flori, fructe etc. Solul este considerat rezervorul principal al levurilor, unde numrul lor este n medie de 250.000 celule pe gramul de sol. n general, se ntlnesc n stratul superficial cuprins ntre 2 i 10 cm, iar n solurile podgoriilor pn la 30-40 cm, att ca forme vegetative, ct i ca forme de rezisten. Levurile apar pe boabe n timpul maturrii acestora i sunt rspndite de insecte (n special Drosophylla sp.), prin intermediul particulelor de praf i, nu n ultimul rnd, odat cu stropii provocai de ploi. Levurile ce se gsesc pe struguri ce aparin mai multor specii, proporia dintre ele fiind diferit n funcie de mai muli factori: condiiile climatice, starea de sntate a recoltei, coninutul n zahr al mustului etc.

Sistematica levurilor Sistemul taxonomic al levurilor utilizat astzi este rezultatul dezvoltrii i integrrii a trei moduri distincte de abordare. Primul dintre acestea a fost stabilit de Myen Ress n 1870, care a ncercat s clasifice levurile, atunci cunoscute, pe baza formei celulelor i a modului de reproducere. Astfel, Myen Ress a pus bazele utilizrii caracterelor morfologice n taxonomia levurilor. A doua contribuie fundamental pentru taxonomie a fost adus de Emil Christian Hansen n 1883, care a evideniat faptul c tulpinile de levuri difer n ceea ce privete capacitatea lor de a fermenta hidraii de carbon. Practica modern a utilizrii caracterelor fiziologice, pentru diferenierea speciilor de levuri, a fost facilitat prin aceast descoperire. Avantajele mult mai importante ale caracterelor fiziologice au fost subliniate de ctre savanii olandezi de la coala lui Kluyver din Delft: L.M. Stelling-Dekker (1931) i J. Ldder (1934, 1952). Al treilea mod a fost iniiat trziu, n secolul al XX-lea, de ctre A. Guilliermond, cnd a nceput studii asupra reproducerii sexuate i filogeniei levurilor ascogene. Aceste moduri distincte de abordare au constituit, de fapt, suportul studiilor clasice asupra geneticii i al conceptului modern al sexualitii i filogeniei levurilor. De la aparaia ediiei a doua a monografiei The Yeasts, a taxonomic study (J. Ldder, 1970) au fost nregistrate progrese pe mai multe direcii, acordndu-se un rol primordial n sistematizarea levurilor, caracterelor fiziologice, fie de fermentare, fie de asimilare, rezervnd un rol secundar caracterelor morfologice i extrem de reduse celor ecologice. O clasificare de referin a levurilor, acceptat i n prezent, este cea a lui N.J.W. Kregger van Rij (1984) care prezint unele modificri fa de cea propus de J. Ldder (1970). Astfel, n clasificarea propus de J. Ldder sunt cuprinse 39 de genuri i 349 de specii, n timp ce n clasificarea actual sunt incluse 60 de genuri i 500 de specii. Un studiu complet al evoluiei principiilor de taxonomie a levurilor a fost fcut de P. Ribereau-Gayon .a. i Kurtman n 1998. Pe baza acestor clasificri i a unor rezultate proprii, M.K. Grossmann (1999) prezint un

studiu referitor la metodele de identificare a levurilor, n general, i a celor din genul Saccharomyces, n special. Multe specii de levuri imperfecte sunt foarte asemntoare speciilor perfecte i difer ntre ele numai prin capacitatea de a forma spori sexuai. Speciile care sporuleaz sunt indicate ca stare perfect (telemorf) a speciilor nesporulate i acestea din urm ca stare imperfect (anamorf) a celor sporulate. Diferenierea generic a levurilor imperfecte se bazeaz pe caracteristici fiziologice, cum ar fi producerea de acid i asimilarea inositolului. n prezent, taxonomitii recunosc dou grupe de levuri: levuri perfecte sau telemorfice care au stadii sexuate distincte, exprimate fie ca asc, fie ca bazidie; levuri imperfecte sau anamorfice sunt cele la care lipsesc stadiile sexuate i se reproduc numai prin nmugurire sau diviziune. Majoritatea levurilor aparin acestui ultim grup. S-a demonstrat, totui, c anumite levuri imperfecte pot fi nrudite fie cu levurile ascomicete, fie cu cele bazidiomicete, pe baza unor caracteristici, cum ar fi ultrastructura peretului celular, formarea conidiilor i compoziia peretului celular. n prezent, metodele de identificarea a levurilor presupun o abordare complex ce vizeaz tehnici moderne de genetic microbian, biochimie, biologie molecular i imunologie. Tehnicile de biologie molecular au fcut posibil compararea informaiei inclus n ADN, artnd c pentru fiecare organism, compoziia n baze purinice este constant i caracteristic. Tehnica hibridrii ADN este foarte important pentru a explora omologia genetic a multor grupuri de levuri. Aceasta este util doar pentru organisme strns nrudite, aparinnd aceluiai gen sau preferabil aceleiai specii. Structura primar a proteinelor enzimatice izofuncionale poate fi diferit. Datorit acestui fapt pot coexista dou levuri cu manifestri metabolice funcionale identice, asigurate de enzime cu structuri tridimensionale similare, dar difer n detalii ale secvenei aminoacizilor. S-a constatat, de asemenea, existena unor diferene semnificative att cantitativ, ct i calitativ, ntre genurile de levuri, pornind de la componena peretului celular. Implicarea peretului celular n taxonomia levurilor se explic prin participarea unei mari poriuni a genomului celular la sinteza

acestuia, n comparaie cu relaiile simple de fermentaie i asimilaie, care sunt sub incidena unui numr limitat de gene. Deoarece, semnificaia imunologic a antigenilor microbieni depinde de structura stereomolecular a peretului celular, este evident corelaia dintre rezultatele analizelor chimice ale peretului celular i cele ale analizelor serologice pentru diferenierea levurilor. S-a demonstrat utilitatea criteriilor serologice pentru specii dificil de difereniat i imunitatea din punct de vedere biologic a diviziunii, la numeroase specii a unor sue similare biologic. Deoarece s-au constatat asemnri n structura antigenic a unor levuri fr nici o corelaie cu alte trsturi ale acestora, taxonomia realizat exclusiv pe baz serologic nu este acceptat deocamdat. Prin aprofundarea studiilor serologice, acestea vor putea fi luate n considerare pentru elucidarea relaiilor taxonomice i filogenetice ntre levuri. Prin mbinarea cunotinelor de genetic, biochimie i biologie celular au fost stabilite noi tehnici de identificare a levurilor: ECP-ul (Electroforse Champ Puls), ce se bazeaz pe separarea celor 16 cromozomi ai levurii, PCR-ul (Polymerase Chain Reaction), tehnic bazat pe amplificarea fragmentelor de ADN specifice, urmat de separarea lor prin electroforez, RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism), ce face, n mod egal, apel la tehnica PCR, dar secvenele amplificate sunt degradate prin enzime de restricie, nainte de separarea fragmentelor prin electroforez i tehnica AFLP (Amplified Fragment Lenght Polymorphism). Metoda AFLP de identificare a levurilor presupune ca fragmentele ADN ale levurii degradate prin enzime de restricie, s fie amplificate prin PCR i n final separate prin electroforez (A. Popa i colab., 2004). Caracterele morfologice generale Celulele drojdiilor msoar, n medie, 4-14 m, iar forma poate fi sferic, oval sau cilindric. n schimb, speciile pot fi monomorfe, dimorfe sau polimorfe. Forma i dimensiunea sunt caractere de gen i specie i depind de vrsta acestora, starea fiziologic i condiiile de cultivare. Formele caracteristice ale unor genuri cu importan deosebit: form oval - Saccharomyces sp.; form sferic - Torulopsis sp.;

form apiculat Kloeckera sp..; Hanseniospora sp.; form cilidric - Candida sp.; form de sticl Saccharomycoides sp. Cultivate n medii lichide, drojdiile produc tulbureala mediului, formarea de spum, apoi depunerea de sedimente i limpezirea supernatantului. Pe medii solide, se formeaz colonii cu caractere morfologice specifice, avnd diametrul cuprins ntre 0,2 i 2 cm, cu aspect cremos, lucioase sau mate, n general de culoare alb-crem. Unele formeaz colonii rou-portocaliu, datorit pigmenilor carotenoizi (Rhodotorula sp.). Structura celulei la levuri Drojdiile prezint o celul de tip eucariot, care se difereniaz puin fa de celula animal (Fig. 79). Comparativ cu celula vegetal, nu prezint cloroplaste i nveli celulozic. Cunoaterea organizrii celulare la drojdii este necesar pentru a nelege potenialul funcional al diferitelor componente. 1. Peretele celular are o grosime de cca.. 25 nm i reprezint 5-15 % din masa uscat a celulelor. Are un aspect lamelar i este alctuit din dou straturi: - stratul extern, are o suprafa rugoas i prezint n anumite zone cicatrici mugurale; n compoziia stratului extern predomin mananul cuplat cu proteine; ncrctura electric este, n mare parte, negativ, cu rol important n stabilirea dispersiilor de drojdii i n comportarea celulelor n timpul fermentaiei. - stratul intern are o suprafa ornamentat cu riduri proeminente, constituite din glucan, care formeaz complexe cu proteine i asigur rigiditatea sau elasticitatea peretelui celular. Funciile peretelui celular sunt: sediul unor enzime, cum ar fi invertaza, fosfataza i permeaza, implicate n biosinteza peretelui celular i n procesul de transfer al substanelor; asigur forma celulei; asigur protecia fa de factorii de mediu; particip la creterea i reproducerea celular.

2. Membrana citoplasmatic (plasmalema) reprezint un strat lamelar cu o grosime de 8-9 nm, care delimiteaz protoplastul de faa intern a peretelui celular. Este construit din dou straturi lipidice, n care moleculele de lipide sunt orientate cu partea hidrofob spre exterior i cu partea hidrofil spre interior. Funciile plasmalemei sunt de: barier osmotic cu permeabilitate selectiv; sediu al enzimelor ce regleaz procesul de cretere i nmulire. 3. Citoplasma este un sistem coloidal cu un coninut de 75-85 % ap, n care substanele componente se afl sub form de sol sau gel. Principalele substane organice sunt: proteinele cu rol structural sau catalitic; lipidele cu rol plasmatic; glucidele cu rol energetic; ARN (mesager, de transfer, ribozomal), dar i ARNK (killer), implicat n sinteza unor proteine cu aciune toxic pentru celelalte sensibile; ADN extracromozomial din plasmide. 4. Incluziunile reprezint forma sub care se acumuleaz substane de rezerv, n principal sub form de: glicogen granule care este metabolizat cnd celula este n stare de nfometare; sferozomii care sunt incluziuni lipidice, ce conin fosfolipide i acizi grai nesaturai i care sunt metabolizai dup liza enzimatic a membranei celulare n condiii de malnutriie. 5. Nucleul reprezint spaiul n care are loc stocarea, replicarea i transmiterea informaiei celulare. Are form sferic sau oval i este protejat de o membran nuclear cu pori. n interior se afl nucleoplasma, iar la exterior se continu cu reticulul endoplasmatic. 6. Mitocondriile sunt organite care ocup cca.. 25 % din volumul citoplasmei, fiind n numr de 10-15/celul. Au rol n ciclul Krebbs i n sinteza ATP. 7. Vacuolele sunt formaiuni sferice, care apar n faza staionar de cretere a celulei, i conin ap, n care se solubilizeaz aminoacizi, proteine, enzime. Are rol de reglare a presiunii osmotice, de meninere a stabilitii chimice a citoplasmei, dar i n hidroliza unor proteine i lipide.

8. Reticulul endoplasmatic este sediul unor enzime cu rol n biogeneza sferozomilor, vacuolelor, aparatului Golgi. 9. Aparatul Golgi este un sistem alctuit din uniti denumite dictiozomi, care fac legtura ntre reticulul endoplasmatic i membrana citoplasmatic. Este considerat un aparat de sortare i dirijare a proteinelor i componentelor membranei spre locul de destinaie. 10. Ribozomii sunt particule nucleoproteice, implicate n sinteza proteinelor celulare. 11. Lizozomii sunt structuri veziculare bogate n enzime: fosfataze, proteaze, lipaze .a., active la pH=5, cu rol n digestia unor compui ai celulei vii, care nu mai funcioneaz eficient. Enzimele nu devin active n citoplasm, deoarece pH-ul acesteia este de 7,3 i numai n momentul scderii acestuia din diferite motive, devin active. 12. Peroxizomii sunt organite sferice cu o membran simpl n care sunt localizate oxidaze cu rol n adaptarea celulei de drojdie la condiii aerobe.
Perete celular

Fig. 79 Celula levurian (dup Gaillardin i Heslot, 1987).

Principalele levuri ntlnite n vin I. Levuri sporogene 1. Saccharomyces ellipsoideus (sin. Sacch. cerevisiae) prezint importana cea mai mare pentru fermentaia mustului. Levurile acestei specii au form elipsoidal sau globuloas (Fig. 80). La fermentarea mustului prezint un randament ridicat, realiznd, n medie, 1 ml alcool pur din 1,7 g glucoz consumat, i rezist pn la concentraii de 16 % vol. alcool, uneori chiar mai mult. Temperatura optim este de 20-25oC i suport concentraii de pn la 250-300 mg/l SO2 total. Dup declanarea fermentaiei, ele pun stpnire rapid pe mediu, pentru ca la sfritul procesului, numrul lor s scad foarte mult.

Fig. 80 Saccharomyces ellipsoideus (Sacch. cerevisiae)

2. Saccharomyces oviformis se prezint sub form oval, uneori rotund. Aceast levur este specific regiunilor calde, unde strugurii realizeaz concentraii ridicate n zahr. Prezint acelai randament n alcool, dar are o putere alcooligen mai mare dect Sacch. Ellipsoideus, depind, uneori 18 % vol. alcool. Specia devine dominant spre sfritul fermentaiei i suport concentraii de pn la 300 mg/l SO2 total i 100 mg/l SO2 liber.

Este considerat o bun levur de finisaj la prepararea vinurilor seci, obinute din musturi bogate n zahr. n schimb, trebuie inactivat sau nlturat din vinurile demiseci, demidulci i dulci, ntruct majoritatea accidentelor de refermentare se datoreaz acestei specii. 3. Zygosaccharomyces bailii. Specie rezistent la concentraii mari de SO2, putndu-se dezvolta pn la concentraii de 12 % vol. alcool. Provoac mbolnvirea vinurilor demiseci i dulci sulfitate. Contaminarea este facilitat de proprietatea ei de a fermenta cu uurin fructoza, lsnd neatins glucoza. Cum majoritatea levurilor fermenteaz mai nti glucoza, n vinurile dulci-licoroase zahrul restant este constituit n principal din fructoz. 4. Saccharomyces chevalieri se aseamn sub raporul activitii fermentative cu Saccharomyces ellipsoideus dar sunt puin ntlnite n vinuri. 5. Saccharomyces bayanus este prezent n toate regiunile viticole, dar se ntlnete n proporii foarte mici la fermentarea mustului, cnd formeaz proporii mrite de acizi volatili i glicoli. 6. Saccharomyces italicus, Sacch. uvarum i Sacch. florentinus sunt levuri specifice, n general, regiunilor viticole meridionale, au proprieti asemntoare speciei Sacch. ellipsoideus dar cu o fermentare mai lent dect aceasta. 7. Saccharomyces rosei este o levur prezent constant pe struguri i n musturi care fermenteaz. Are proprietatea de a fermenta lent dar regulat, cantiti importante de zahr, fr formarea de acizi volatili. Este folosit pentru obinerea vinurilor cu un coninut de pn la 12 % vol. alcool, pentru vinuri cu rest de zahr, precum i pentru recolte atacate de man i putregai cenuiu, la care obinerea de vinuri cu aciditate volatil sczut este o problem dificil. 8. Pichia membranefaciens, P. fermentans i Hansenula anomala sunt levuri cu putere alcooligen slab, ncadrate n categoria levurilor patogene, care, n condiii oxidative, provoac vinurilor boala denumit "floare". De asemenea, afecteaz calitatea vinurilor prin proporii ridicate de esteri, acetat de etil, acetat de amil, pe care i formeaz i care imprim mirosuri neplcute.

9. Saccharomycoides ludwigii este o levur de dimensiuni mari, de form apiculat, rar ntlnit pe struguri i n musturi normale. Excepional de rezistent la SO2 (700-1000 mg/l), este specific musturilor pstrate cu doze mari din acest antiseptic. Este o levur patogen pentru vinurile demiseci sau dulci, aflate n butoaie sau sticle, crora le provoac refermentri. 10. Hanseniospora valbyensis, H. uvarum, H. osmophila. Levur apiculat, specific zonelor calde, provoac declanarea fermentaiei, aa cum n regiunile rcoroase acest proces este declanat de Kloeckera apiculata. Are capacitate mare de a asimila azotai. II. Levuri nesporogene 1. Torulopsis stellata este o levur prezent pe strugurii stafidii, n urma apariiei mucegaiului nobil. Prezint o rezisten mai mare dect levurile apiculate la concentraii de SO2 i alcool, dar mai sczut dect Sacch. ellipsoideus. 2. Brettanomyces intermedius. Numele genului se datoreaz aciunii unor specii de a imprima berii britanice gust i arom caracteristice, n urma unor procese secundare de fermentaie. Speciile acestui gen sunt ntlnite n proporii mici n musturi i vin. Mai frecvent se ntlnesc n vinurile bolnave de floare, oetite. Prezena lor favorizeaz formarea de acetat de etil i ali compui ce dau mirosuri intense, cu iz de oarece. 3. Candida vini (sin. Candida micoderma, Mycoderma vini). Speciile acestui gen sunt cunoscute sub denumirea de "levuri de floare", producnd boala denumit floarea vinului, caracterizat prin formarea unei pelicule la suprafaa vinurilor slab alcoolice, pstrate n vase incomplet pline. 4. Kloeckera apiculata, cunoscut i sub denumirea de levur slbatic, este extrem de rspndit pe toate fructele n regiunea cu climat temperat-rcoros. Prezint celule sub form de lmie, avnd unul sau ambele capete ascuite (Fig. 81). n practic, sunt cunoscute sub denumirea de levuri apiculate. Acestea apar pe bace la faza de prg, iar la maturitatea deplin a strugurilor reprezint 99 % din totalul levurilor existente n acest moment.

Ele declaneaz fermentaia mustului, avnd o capacitate foarte mare de nmulire, randamentul n alcool este mai sczut dect al levurilor eliptice. Ele consum pentru 1 ml alcool pur 2,1 g glucoz. Puterea alcooligen este redus, realiznd 4-5 % vol. alcool, concentraie maxim pn la care aceast specie poate rezista. Prezint o sensibilitate mai mare dect levurile eliptice la SO2.

Fig. 81 Kloeckera apiculata

5. Rhodotorula mucilaginosa, Rh. glutinis i Rh. rubra sunt levuri denumite i mucilaginoase, deoarece produc mucilagii n musturile i vinurile tinere, srace n aciditate, i formeaz pigmeni carotenoizi galbeni pn la roii. Se ntlnesc n pivniele de vinuri, n care formeaz, mpreun cu unele bacterii i alte ciuperci, depuneri mucilaginoase pe pereii umezi. Dei sensibile la alcool, prezint o rezisten mare la temperaturi ridicate (5060oC) i la aciunea substanelor alcaline (fosfat trisodic 1 %). Rezist la aciunea acidului boric pn la concentraia de 3 %. B. Mucegaiurile Ciupercile care formeaz colonii pufoase, vizibile cu ochiul liber, sunt denumite n practic mucegaiuri. Mucegaiurile, obinuit aerobe, sunt foarte rspndite n natur, ntlnindu-se aproape n toate mediile, datorit capacitii mari de nmulire

i de rspndire, precum i a rezistenei mari la condiiile mai puin prielnice de mediu. Sunt frecvent ntlnite n plantaiile viticole, pe frunze, boabe, n sol, pe utilajele i pereii pivnielor, precum i la suprafaa mustului, n primele etape de vinificaie. Mucor racemosus produce n plantaii, pe vreme ploioas, infecia strugurilor. n cazul n care se afl complet scufundat n must, ciuperca se prezint sub form de fragmente de sifonoplast; are capacitatea de a produce fermentarea mustului pn la 5-7 % vol. alcool. Mucor circinelloides este o alt specie, care este folosit la fabricarea berii. Mucor piriformis oxideaz parial glucidele, cu formarea acizilor citric, oxalic, gluconic etc. Rhizopus nigricans este frecvent pe strugurii vtmai, n pivnie sau pe utilajele folosite n vinificaie, formnd pe suprafaa substratului degradat un mucegai de culoare negricioas. Prezint capacitate mic de fermentaie. Aspergillus niger se dezvolt n crame i pivnie, pe vase vinicole, dopuri, formnd un mucegai negru. Aspergillus glaucus se ntlnete, mai frecvent, pe suporturi lemnoase din pivnie. Penicillium glaucum produce putrezirea boabelor incomplet maturate sau a strugurilor vtmai de insecte sau grindin. n cazul n care contaminarea se extinde devreme, se pot produce pierderi de recolt importante, boabele atacate fiind complet distruse. Cnd atac strugurii copi, mustul obinut are gust amar. n crame i pivnie se dezvolt pe dopuri, vase vinicole etc., ptrunznd n lemnul doagelor. n timpul fructificrii secret esteri cu gust i miros caracteristic de mucegai, ce se transmit vinului. Genul Merulius cuprinde specii extrem de pgubitoare, care se dezvolt n pivnie, pe butoaie, czi, pe rafturi, stelaje i orice obiect din lemn, pe care se formeaz un miceliu alb, cu aspect buretos. Speciile genului Merulius formeaz substane cu miros specific neplcut, unele atac numai celuloza, altele numai lignina, transformnd lemnul ntr-o mas moale, de culoare brun sau alb. Merulius lachrymans, denumit popular ciuperca igrasiei sau buretele de cas, formeaz un mucegai alb-cenuiu i filamente izolate sau cordoane compacte.

Cladosporium cellare se dezvolt pe toate substraturile lemnoase, dar i pe pereii pivnielor i chiar pe ramele de fier, grilaje, srme etc., datorit capacitii acesteia de a provoca microcondensarea pe suprafaa hifelor sale, a moleculelor compuilor organici i anorganici n stare de vapori, existeni n aerul din pivni. n unele pivnie, acest mucegai se dezvolt pe perei ntr-un strat gros cu aspect de catifea i, datorit capacitilor sale de a purifica aerul i de a regla umiditatea atmosferic, realizeaz condiii deosebite pentru maturarea i nvechirea vinurilor. Botryotinia fuckeliana prezint ca form conidian Botrytis cinerea i produce "putregaiul cenuiu al strugurilor". Aceast boal apare la intrarea n prg i este favorizat de crparea sau rrirea pieliei boabelor, producia n unii ani putnd fi diminuat cu 6090 %. Vinurile obinute din strugurii atacai de aceast ciuperc sunt slab alcoolice, neplcute la gust, cu miros specific de mucegai i care se mbolnvesc uor. n unele toamne secetoase, cu diminei nelipsite de rou, apare aanumitul "putregai nobil", care conduce la obinerea unui must de nalt calitate. n acest caz, scade mult coninutul boabelor n ap i crete concentraia n zahr (de la 200-220 pn la 400-500 g/l). Producia scade mult, uneori cu peste 40 %, dar se obin vinuri cu o arom buchet deosebit i foarte plcut.

Fig. 82 Botryotinia fuckeliana

C. Bacteriile vinului Bacteriile prezint o mare importan pentru calitatea vinurilor. Unele dintre ele, n anumite condiii, pot contribui prin activitatea lor la

mbuntirea acesteia; cele mai multe pot provoca vinurilor transformri nedorite i chiar mbolnviri grave. n perioada recoltrii strugurilor, pe pielia boabelor, pe lng levuri i mucegaiuri, se gsesc i bacterii, dar pot fi ntlnite, de asemenea, n crame i pivnie, ndeosebi pe suprafaa intern a butoaielor i cisternelor n care se fermenteaz mustul sau se pstreaz vinul i care nu au fost corect curate i ntreinute. Dup procesele pe care le declaneaz, bacteriile au fost grupate n: I. Bacterii acetice, microorganisme aerobe, care se ntlnesc att pe strugurii sntoi, ct i pe cei vtmai, precum i n musturi sau vinuri, mai ales cnd sunt pstrate n vase incomplet pline. Bacteriile acetice care se dezvolt n vin formeaz, la suprafaa acestuia, un vl sau o pelicul, care, uneori, poate fi alburie, subire, aproape transparent, cu reflexe irizante i care poate urca rapid pe pereii vasului. Alteori, acest vl este mai gros, uleios, hidrofob i se coloreaz, pe msura mbtrnirii, n brun. ntr-un al treilea caz, vlul format atinge mai muli milimetri grosime, este vscos, greu de desfcut i, care, cu timpul, cade la fundul vasului, cunoscut i sub numele de cuib de oet. Genul Acetobacter. Acest gen grupeaz specii cu celule sub form de bastonae, dispuse izolat, n perechi sau lanuri, ce sunt imobile sau prevzute cu cili dispui peritriche. Speciile genului Acetobacter produc oxidarea etanolului pn la acid acetic, la un pH de aproximativ 4, precum i a acidului acetic a lactaiilor i aminoacizilor. Ciclul Krebs este prezent i activ. Se dezvolt la temperaturi cuprinse ntre 5 i 42oC, cu un optim de 30oC. Speciile cele mai importante sunt: Acetobacter aceti; Acetobacter pasteurianus i Acetobacter peroxydans. Genul Gluconobacter cuprinde bacterii asemntoare din punct de vedere morfologic cu speciile genului Acetobacter. Singurul criteriu de difereniere l reprezint flagelaia, cnd aceasta exist. Astfel, speciile

genului Gluconobacter sunt lofotriche (3-8 cili la fiecare pol), fa de ciliaia peritriche la Acetobacter. Produc oxidarea moderat a etanolului pn la acidul acetic la un pH=4,5. Temperatura optim de dezvoltare este 25-30oC, dar variaia acesteia poate fi cuprins ntre 7 i 41oC. Fiziologic, se deosebete de genul Acetobacter prin urmtoarele proprieti: ciclul Krebs nu este complet; nu oxideaz acidul acetic i lactaii pn la CO2. II. Bacterii lactice Reprezentanii acestui grup sunt facultativ-anaerobi i particip la o serie de transformri n vin i anume: transformarea glucidelor n acid lactic i ali produi secundari (glicerol, alcool etilic, acid acetic etc); fermentaia malolactic; degradarea acidului tartric, citric; degradarea glicerolului i a altor componeni. Genul Pediococcus cuprinde bacterii Gram (+) cu aspect sferic, grupate sub form de diplococi sau tetracoci. Sunt nesporulate, imobile, homofermentative. Fermenteaz glucidele, iar acidul malic numai la pH ridicat. Nu degradeaz acidul citric i tartric, din acest motiv nu sunt considerate duntoare. Prezint dou specii importante: - Pediococcus cerevisiae; - Pediococcus pentosacens. Genul Leuconostoc cuprinde bacterii Gram (+) cu celule de form sferic, ovoid sau alungit, dispuse sub forma unor iraguri de mrgele, ca i streptococii. Produc fermentaia malolactic numai n vinuri foarte acide, nesulfitate sau cu un coninut redus de SO2. Principalele specii: - Leuconostoc gracile este specia cea mai frecvent n vinuri. Descompune energic acidul malic i, n msur mai mic, acidul citric. - Leuconostoc oinos

Genul Lactobacillus grupeaz bacterii Gram (+) i cuprinde : - specii homofermentative: Lactobacillus acidophillus, Lactobacillus helveticus. - specii heterofermentative: Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei, Lactobacillus brevis. 7.1.2. Utilizarea microorganismelor n industria berii n procesul de fermentaie a mustului de mal, obinut din cariopsele de orz sau orzoaic, se utilizeaz dou tipuri diferite de levuri: levuri de fermentaie inferioar - au proprietatea de a fermenta n condiii submerse, iar la final levurile se depun la baza recipientului. Ex: Saccharomyces carlsbergensis i Saccharomyces uvarum. levuri de fermentaie superioar - au proprietatea de a fermenta la suprafaa mustului. Ex: Saccharomyces cerevisiae. 7.2. Fermentaia lactic Fermentaia lactic este un fenomen cunoscut nc din antichitate, ce a fost explicat de L. Pasteur odat cu descoperirea bacteriilor lactice. Acidul lactic rezultat din aceast fermentaie este un produs foarte util n medicin, industria alimentar, la tbcirea pieilor, ca mordant n industria textil etc. Dup natura produilor finali din fermentaie, bacteriile lactice (Fig. 83) pot fi mprite n dou grupuri: I. Bacterii lactice homofermentative transform substanele glucidice i formeaz numai acid lactic cu un randament de 90-100%. Dintre acestea, cele mai importante sunt: Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii, Lactobacillus delbrueckii ssp. lactis, Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus acidophilus, Pediococcus cerevisiae, Pediococcus acidi lactici, Streptococcus lactis, Streptococcus salivarius ssp. thermophilus etc. II. Bacterii lactice heterofermentative formeaz cantiti mici de acid lactic i cantiti nsemnate de acizi volatili i CO2. Cele mai obinuite sunt:

Lactobacillus buchneri, Lactobacillus casei, Lactobacillus brevis Lactobacillus sake, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermenti, Lactobacillus bifidum, Leuconostoc mesenterioides ssp. cremoris, Leuconostoc paracitrovorum .a.

Fig. 83 Lactobacillus sp. (www.wikipedia.com)

Pentru prepararea acidului lactic pe cale fermentativ se folosesc, ca materie de baz, amidonurile, melasele, cerealele, zerul etc. Amidonul este, n prealabil, zaharificat cu ajutorul malului din smna de orz germinat artificial. Plmada dulce, care conine maltoz zaharificat de mal, se nclzete la 80 C pentru omorrea microflorei, dup care este nsmnat cu o cultur de bacterii termofile Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii. Fermentaia dureaz 8-10 zile, timp n care microorganismele transform n acid lactic pn la 98% din zahrul fermentat. Aceast fermentaie se produce printr-un mecanism similar cu cel al fermentaiei alcoolice, adic tot prin formarea iniial a unei aldehide (metilglioxal), urmat de transformarea acesteia n acid, realizat pe cale enzimatic n mai multe trepte succesive: 1. C6H6O6 2 CH3-CO-CHO + 2H2O glucoz metilglioxal 2. CH3-CO-CHO + 2H2O 2 CH3-CHOH-COOH metilglioxal acid lactic

Pentru a asigura multiplicarea mai departe a microorganismelor, acidul lactic este neutralizat cu hidroxid de calciu pe msur ce se formeaz, dup reacia :

acid lactic

lactat de calciu

Produsul final este lactatul de calciu. Dac acidul lactic nu ar fi neutralizat, fermentaia s-ar opri, ntruct bacterile lactice nu suport aciditatea. Din lactat, acidul lactic este separat prin adugarea de H2SO4 , care precipit calciul sub form de CaSO4. Soluia diluat de acid lactic obinut este evaporat n vid pn la concentraia de 50-80% acid lactic. Fermentaia lactic are numeroase aplicaii practice n industria alimentar, la prepararea laptelui acru, a iaurtului i kefirului, la conservarea legumelor i la prepararea nutreului nsilozat. 7.2.1. Rolul microrganismelor n obinerea produselor lactate Iaurtul este produsul obinut prin fermentarea laptelui cu o cultur mixt de dou specii de bacterii lactice, Streptococcus salivarius ssp. thermophilus i Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus n raport de 1:1. Rolul streptococilor i lactobacililor la obinerea iaurtului const n acidifierea laptelui, sinteza de compui de arom, dezvoltarea texturii i a vscozitii. Bioiaurtul conine, pe lng bacteriile specifice, i Lactobacillus acidophillus i Bifidobacterium bifidum. Acest produs are efect benefic suplimentar, deoarece are efect de ameliorare a creterii bacteriilor, care, n

mod normal, fac parte din microbiota intestinal i ar putea ajuta la protecia fa de unele boli, cum ar fi, cancerul i bolile coronariene. Bifidobacteriile se dezvolt la o temperatur optim de 36-38oC. Pentru fabricarea untului se poate utiliza smntn dulce sau fermentat, care este sterilizat prin pasteurizare i, dup rcire, este inoculat cu culturi mixte de bacterii lactice, aromatizante. Dintre acestea fac parte Lactococcus lactis ssp. cremoris, Lactococcus lactis biovar. diacetylactis i Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris, Lactococcus lactis ssp. lactis. Pentru obinerea brnzeturilor se poate folosi lapte crud, n care bacteriile lactice trebuie s reprezinte peste 50 % din totalul microbiotei i care se pasteurizeaz, avnd grij s nu se produc denaturarea proteinelor din lapte. Dup rcire, se face inocularea cu monoculturi sau culturi mixte specifice, iar etapele tehnologice urmresc s dirijeze activitatea util a culturilor starter. Principalele culturi de bacterii lactice folosite drept culturi de producie pentru diferite tipuri de brnzeturi n Romnia sunt: brnz proaspt de vaci: Lactococcus lactis, Lactococcus lactis var. diacetylactis. telemea: Lactococcus lactis, Lactobacillus casei. cacaval: Lactococcus lactis, Lactobacillus casei, Streptococcus salivarius ssp. thermophilus. vaier: Streptococcus salivarius ssp. thermophilus, Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus, Lactobacillus delbrueckii ssp. lactis, Lactobacillus helveticus, Propionibacterium sp. 7.2.2. Rolul microorganismelor lactice n conservarea alimentelor murate Una dintre aplicaiile practice importante ale fermentaiei lactice este conservarea alimentelor prin murare. Astfel, varza murat se obine prin fermentarea natural a sucului, care conine zahr i care este extras din frunze prin adugarea de sare 2-3%, proces ce se petrece n mai multe faze:

Faza preliminar se petrece la nceputul fermentaiei, cnd se multiplic microflora normal de bacterii Gram pozitive cu preponderena celor heterofermentative de pe suprafaa verzei, din vas i din ap. Preponderent este n aceast faz bacteria Leuconostoc mesenteroides, care descompune incomplet zahrul din varz, cu formarea de acizi lactic i acetic plus diferii esteri, care dau un gust i o arom particulare. Faza primar sau principal ncepe cnd cantitatea de acid din mediu atinge 0,7%. Se dezvolt sub influena bacteriilor homofermentative, care produc mari cantiti de acid lactic; sub influena acestor concentraii, bacteriile i nceteaz aciunea. Fermentaia este terminat de Lactobacillus brevis (specie heterofermentativ), care produce acid lactic, alcool etilic, metilen i CO2 i care este rezistent la un pH foarte sczut. ntregul proces dureaz 7-8 zile la temperatura optim de 21C i nceteaz cnd cantitatea de acid acetic a ajuns la 1,5%. Faza secundar se ntlnete cnd fermentaia nu decurge n condiii normale i unele bacterii, drojdii i mucegaiuri produc denaturri i alterri ale verzei murate ca nmuierea, putrezirea, bloirea (acoperirea cu un strat vscos) i apariia de pete roii sau negre, nsoite de un miros dezagreabil. n cazul castraveilor murai n saramur se petrec trei tipuri de fermentaii i anume: fermentaia determinat de Lactobacillus plantarum, din care rezult acid lactic cu efect prezervant; fermentaia produs de Aerobacter sp. cu eliminarea de ap i CO2; fermentaia sub aciunea unor levuri cu formarea de CO2 i alcool. Microorganismele se gsesc pe castravei i n mediul ambiant i produc fermentarea zaharurilor extrase din soluie de saramur n 2-6 sptmni. Unele microorganisme provoac alterarea castraveilor murai. Bacillus subtilis produce nmuierea, datorit transformrii protopectinei n pectin solubil, i Bacillus subtilis var. niger produce nnegrirea acestora. 7.2.3. Rolul microrganismelor n producerea furajelor nsilozate nsilozarea sau murarea este cel mai bun mijloc de conservare a furajelor suculente, mai ales a celor verzi, cu pstrarea calitii nutritive.

Procesul se bazeaz pe fermentaia lactic n condiii de anaerobioz a zaharurilor ce intr n constituia plantelor, cu formarea de CO2, ap i o cantitate variabil de acid lactic. Plantele destinate nsilozrii sunt recoltate n perioada cnd produc cea mai mare cantitate de mas verde i conin maximum de substane nutritive. Masa vegetal este tocat i aezat n silozuri construite special sau n gropi, unde se pstreaz pentru ndeprtarea aerului. n prima perioad, oxigenul rmas n spaiile din siloz este consumat de celulele vegetale i este nlocuit cu CO2, care creeaz condiii optime pentru fermentaia anaerob. Paralel cu acest fenomen i mai ales pe msur ce diminueaz procesele enzimatice din celulele plantelor supuse conservrii, ncepe dezvoltarea florei epifite, format din Pseudomonas fluorescens i a unor bacterii din sol ca Bacillus subtilis, Bacilllus megaterium, Clostridium sporangenes i altele. Multiplicarea acestor bacterii nceteaz pe msura acumulrii acidului lactic, produs de bacteriile lactice, prezente i ele n frunze. Deoarece, la nceput, cantitatea natural de acid lactic este mic, se adaug n masa nsilozat culturi de Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii i Lactobacillus plantarum, precum i o soluie de melas 1% pentru grbirea fermentaiei. n ara noastr exist un biopreparat, denumit Lactobacterin, care este o cultur de Lactobacillus plantarum. Dup 2-3 sptmni, cnd reacia mediului a atins pH = 4,4, fermentaia nceteaz. Silozul astfel obinut poate fi pstrat chiar pn la 3 ani, cu condiia s fie ferit de mucegaiurile care descompun acidul lactic. Dac nsilozarea s-a fcut defectuos, se produce, pe lng fermentaia lactic, i o fermentaie butiric, i furajele capt un miros neplcut, fiind refuzate de animale. 7.3. Fermentaia acetic Acest proces este, de fapt, impropriu numit fermentaie, deoarece acidul acetic se obine n condiii de aerobioz, prin oxidarea alcoolului n prezena oxigenului gazos de ctre bacterii, aparinnd genului Acetobacter. Dei oetul este cunoscut din cele mai vechi timpuri, abia n 1837, Ktying a emis ipoteza c transformarea alcoolului n acid acetic este

produs de microorganisme. Ulterior, n 1868, Pasteur a confirmat ipoteza i a descris, pentru prima dat, microorganismul Mycoderma aceti. Dezvoltarea spontan a bacteriilor acetice n timpul pstrrii unor produse alcoolizate, ca vinul sau berea, este duntoare, deoarece produce oetirea buturilor . Pentru prepararea industrial a acidului acetic se folosesc culturi de bacterii selecionate, care pot produce pn la 10% acid acetic de calitate. Bacteriile acetice sunt microorganisme aerobe, din genul Acetobacter, care triesc la suprafaa mediilor alcoolizate, formnd o pelicul bacterian groas (Fig. 84).

Fig. 84 Acetobacter aceti (www.vinegarman.com)

Cele mai folosite bacterii n producerea oetului sunt grupate n patru categorii, funcie de mediul din care au fost izolate: I. Bacterii acetice izolate din plmad: Gluconobacter oxidans, izolat din sticle de bere fermentat; Gluconobacter oxidans ssp. Industrium, izolat din drojdia uscat. II. Bacterii acetice din bere: Acetobacter aceti suport pn la 11% alcool i poate produce 4-6% acid acetic; Acetobacter pasteurianum suport 9,5% alcool i produce 6,2% acid acetic; Termobacterium aceti este prezent n depozitele de bere; Acetobacter kutzingianum este izolat din sake. III. Bacteriile izolate din vin cuprind cteva specii ca:

Acetobacter orleanensis formeaz un vl subire, adeseori roz, i care are tendine de a se nla pe pereii vasului. Poate produce 9,3% acid acetic. Oetul provenit din aceast specie este parfumat i limpede. Acetobacter ascendens este izolat din oetul de vin; formeaz un voal ce se rupe uor; Acetobacter xylinum este izolat din oet de vin; suport alcool i produce 4,1% acid acetic. IV. Bacterii acetice fermentative rapide: Acetobacter acetigenu se prezint ca celule rotunde, ce nu formeaz lanuri i produce numai 3% acid acetic. Acetobacter schtzenbachii se prezint sub form de bastonae de 1,63,6 m lungime x 0,3-0,4 m grosime i poate produce 11-14% acid acetic. Acetobacter curvum produce un voal subire, uor de rupt, cu numeroase pete albe. Reacia probabil de transformare a alcoolului n acid acetic const, iniial, n dehidrogenarea alcoolului cu formare de acetaldehid; ulterior, acetaldehida fixeaz o molecul de ap, formnd hidrat de acetaldehid, iar prin hidrogenare rezult acid acetic. n oetul produs pe cale natural mai apar urme de diferii esteri, ca acetatul de etil i cantiti mici de alcool, glicerin, uleiuri volatile, care dau aroma plcut caracteristic. Materia prim folosit n producie este orice produs capabil s produc prin fermentaie alcool etilic, care, ulterior, este supus fermentaiei acetice. Se folosesc, deci, vin, bere, sucuri de fructe, siropuri de zahr i materiale amidonoase hidrolizate iar calitatea produsului final este n funcie de compoziia materiei prime utilizate. Exist mai multe metode de preparare a oetului: 1. Metoda francez (orleanez sau lent) folosete ca materie prim un amestec de vin cu 4% alcool i oet cu 2% acid acetic. Se pune n butoaie de 200 litri jumtate din volum oet i 10-15 l vin. Dup fiecare 7 zile, timp de 4 sptmni, se adaug cte 10-15 l vin. Adaosul de oet are ca scop s mpiedice dezvoltarea microflorei normale din mediu. Producerea oetului are loc lent, pentru c bacteriile vin n contact cu aerul numai la suprafaa luchidului; acesta face ca n oet s se formeze

substane aromatice, care dau acestuia un buchet aparte. Dup 5-6 sptmni, se ajunge la concentraia de 5-6 % acid acetic, se recolteaz 1015 litri oet i se adaug o cantitate egal de vin, dup care procesul se repet. 2. Metoda german, rapid, folosete un amestec de lichid format din alcool etilic 3% i oet 6%, un adaos nutritiv pentru bacterii, care este introdus n butoaie de lemn. n vas se gsete talaj fin de lemn de fag, care mrete suprafaa de oxidare; se adaug bacterii selecionate, ca Acetobacter orleanense, Acetobacter schtzenbachii, Acetobacter acetigenum, i se asigur circulaia aerului. Amestecul de alcool-acid acetic este turnat pe la partea superioar a vasului, se filtreaz prin stratul de talaj, unde alcoolul se oxideaz, iar la partea inferioar se colecteaz un lichid bogat n acid acetic (9%) i aproape lipsit de alcool. Pentru ca oxidarea s fie complet, acelai lichid se trece de trei ori prin stratul de talaj.

Test de autoevaluare

1. Fermentaia alcoolic a mustului este realizat de: a) bacterii acetice b) mucegaiuri c) levuri d) bacterii lactice 2. Permanentizarea levurilor se realizeaz: a) pe vasele de vinificaie b) pe plantele de vi de vie c) n sol d) n aer 3. Specia cu putere alcooligen cea mai mare este: a) Candida vini b) Kloeckera apiculata c) Saccharomyces oviformis d) Saccharomyces ellipsoideus 4. Putregaiul nobil al strugurilor este produs de: a) Merulius lachrymans b) Aspergillus niger c) Botryotinia fuckeliana d) Cladosporium cellare 5. Fermentaia malolactic a vinului este produs de: a) levuri

b) bacterii lactice c) bacterii acetice d) mucegaiuri Rezultate corecte: 1 - c; 2 - c; 3 - c; 4 - c; 5 - b.

BIBLIOGRAFIE SELECTIV
Anghel I., Toma M., Voica C., Cojocaru I. Biologia i tehnologia drojdiilor, Vol. I - 1989, Vol. II - 1991, Vol. III -. Ed. Tehnic, Bucureti, 1993 Baker H. F., Rosalind M. Ridley Prion diseases, Ed. Humana Press, New Jersey, USA, 1996 Baker S., Nicklin Jane, Khan N., Killington R. Microbiology, Ed. Taylor & Francis, Oxford, Marea Britanie, 2007 Buchanan R.E., Gibbons N.E. Bergeys manual of determinative Bacteriology, Ed. Wiliams, USA, 1975 Cardon Zoe G., Whitbeck Julie L. The rhizospherean ecological perspective, Ed. Academic Press, San Diego, USA, 2007 Carp-Crare M. Microbiologie, Institutul Agronomic Ion Ionescu de la Brad Iai, 1991 Coman I., Mare M. Micologie medical aplicat, Ed. Junimea, Iai, 2000 Constantinescu O. Metode i tehnici n micologie, Ed. Ceres, Bucureti, 1974 Dan Valentina Microbiologia produselor alimentare, Ed. Alma, Galai, Vol. I, II, 1999, 2000 Delfini C. Scienza e tecnica di microbiologia enologica, Ed. Il Lievito, Italia, 1995 Eliade Gh., Ghinea L., tefanic Gh. - Bazele biologice ale fertilitii solului, Edit. Ceres, Bucureti, 1983 Gaillardin C., Heslot H. La levure, Ed. La Recherche, 188 (18) 586596, 1987 Graham H. Fleet Wine microbiology and biotechnology, Ed. Harwood Academic Publishers, Switzerland, 1993 Grodzinsky A. M. Allelopathy in soil sickness, Ed. Scientific Publisher (India), Jodhpur, 2006 Hatman M. Microbiologie - lucrri practice, Universitatea Agronomic Iai, Centrul de multiplicare, Iai, 1990

Hatman M., Ulea E. Microbiologie Curs, Universitatea Agronomic Iai, Centrul de multiplicare, Iai, 1993 Hughes M.N., Poole R.K., 1989 Metals and Micro-organisms, Ed. Chapman & Hall, Londra, New York. Kingsley R.S. Introductory-Plant biology, Ed. Wm. C. Brown Publishers, U.S.A, 1991 Kiss t., tefanic Gh., Pasca Daniela, Drgan-Bularde Zborovschi, Crian R. - Enzimologia mediului nconjurtor, Ed. Ceres, Vol. I - 1991, Vol. II - 1993. Korn R. Microbiologia laptelui i produselor lactate, Ed. Ceres, Bucureti, 1989 Leclerc H. Microbiologie, Ed. Doin Deren & Cie, France, pag. 341531, 1976 Ldder J., Kreger Van Rij N. J. W. The yeasts, a taxonomic study, Ed. North Holland Publishing Company, Amsterdam, 1952 Ldder J., Kreger Van Rij N. J. W. The yeasts, a taxonomic studysecond edition, Ed. North Holland Publishing Company, Amsterdam, 1970 Lwoff A., Horne R., Tournier P. A system of viruses. Cold Spring Harb Symp Quant Biol., 27, 51-55, 1962 Madigan M. T., Martinko J. M., Parker J. Biology of microorganisms, Ed. Prentice Hall International Inc., SUA, 1997 Mzreanu C. Microbiologie general, Ed. Alma Mater, Bacu, 1999 Mihescu G., Gavril L. Biologia microorganismelor fixatoare de azot, Ed. Ceres, Bucureti, 1989 Murray P.R., Ellen Jo Baron, Pfaller M.A., Tenover F.C., Yolken R.H. Manual of Clinical Microbiology, Ed. ASM Press, USA, 1995 Pamfil D. Microbiologie, Ed. Genesis, Cluj Napoca, 1999 Papacostea P. Biologia solului, Ed. tiinific i Enciclopedic, Bucureti, 1976 Popa I. A., Teodorescu C. t. Microbiologia vinului, Ed. Ceres, Bucureti, 1990 Priest F., Austin B. Modern bacterial taxonomy, Ed. Chapman & Hall, Londra, Marea Britanie, 1993

Prusiner S. B. - Prion Biology and Diseases, CSHL Press, Danvers, USA, 2004 Ross F. C. Introductory microbiology, Editura Charles E. Merrill Publishing Company, USA, 1983 Schlegel H.G. Allgemeine Mikrobiologie, Ed. Thieme, Germania, 1992 esan Tatiana Eugenia, Tnase C. Mycobiota- Sisteme de clasificare, Ed. Universitaii Alexandru Ioan Cuza Iai, 2006 esan Tatiana Eugenia, Tnase C. Ciuperci anamorfe fitopatogene, Ed. Universitii din Bucureti, 2007 Tnase C. Micologie, Ed. Universitii Alexandru Ioan Cuza Iai, 2002 Tnase C., esan Tatiana Eugenia Concepte actuale n taxonomia ciupercilor, Ed. Uniersitii Alexandru Ioan Cuza, Iai, 2006 Tofan Clemansa Microbiologie alimentar, Ed. Agir, Bucureti, 2004 Topal N.D. Microbiologie general, vol. I, II. Universitatea Al. I. Cuza, Iai, 1978 Tortora G. J., Funke B. R., Case Christine Microbiology - an introduction, Editura The Benjamin/Cummings Publishing Company, INC., SUA, 1992 Ulea E., Iacob Viorica, Ilisescu Izabela The lignicole micromycetes of cherry and plum trees from Central Area of Moldavia, USAMV Iai, Lucrari Stiintifice, Seria Horticultura , 48, 665-670, 2005 Ulea E., Ilisescu Izabela, Mocanu Aliona., Sava D. The effect of the fertilization with Vinassa Rompak product on the biological activity of the cultivated soils, J. Central European Agr, 7, 297-300, 2006 Ulea E., Lipa F. D. Analysis of microbial community on mine tailings from the national park of Climani mountain (Eastern Carpathians), Research Journal of Agricultural Science, vol. 41 (1), p. 518522, 2009 Ulea E., Lipa F.D., Chiriac Irina Paraschiva, Coroi Irina Gabriela Effects of chlorsulfuron on soil microbial population, Universitatea de tiine Agricole i de Medicin Veterinar Ion Ionescu de la Brad Iai, Lucr. t. Seria Agronomie, vol. 53(1), p. 157-161, 2010

Ulea E., Lipa F.D., Chiriac Irina Paraschiva, Coroi Irina Gabriela Acetochlor influence on soil microbial communities, Universitatea de tiine Agricole i de Medicin Veterinar Ion Ionescu de la Brad Iai, Lucr. t. Seria Agronomie, vol. 53(1), p. 153-157, 2010 Ungureanu Elena, Ulea E., Iacob Viorica On the biocide properties of some products based on natural aromatic compounds. Cellulose Chemistry and Technology, 42 (7-8), 381-386, 2008 Van Elsas J. D., Jansson Janet, Trevors J. T. Modern soil microbiology second edition, CRC Press, SUA, 2007 Whittaker R. H. New concepts of kingdoms or organisms. Evolutionary relations are better represented by new classifications than by the traditional two kingdoms. Science, 163(863):150-60, 1969 Widmer F., Beffa R. Aide-mmoire de biochimie et de biologie molculaire, Editions Mdicales Internationales, ISBN: 2- 7430-0175-5, Frana, 1997 Wood M. Soil biology. Ed. Blackie, New York, SUA, 1989 Zamfirache Maria-Magdalena, Toma C., 2000 Simbioza n lumea vie, Ed. Univ. Alexandru Ioan Cuza Iai. Zarnea Gh. Tratat de microbiologie general, Ed. Academiei Romne, Bucureti, Vol. I - 1983, Vol. II - 1984, Vol. III - 1986, Vol. IV 1990,Vol. V - 1994.