IV IBEROLAB

ALGUNAS METODOLOGAS PARA LA ESTIMACIN ESTADSTICA DEL LMITE DE DETECCIN J. M. Bosque Sendra1, M. Nechar2 y L. Cuadros Rodrguez1
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Departamento de Qumica Analtica, Universidad de Granada, Fuentenueva, s/n, 18071 Granada, Espaa; e-mails: jbosque@ugr.es; lcuadros@ugr.es 2 Equipe de Recherche Chimie de lEau et Pollution Atmosphrique (ERCEPA), Dpartement de Chimie, Facult des Sciences, Universit Abdelmalek Essadi, B.P. 2121 Mhannech II. 93002 - Ttouan Maroc; e-mail: mounir@uae.ma RESUMEN. En esta comunicacin se realiza el estudio del concepto de lmite de deteccin, estableciendo su importancia en la validacin de los procedimientos analticos. Este parmetro de calidad puede ser estimado a travs de diferentes metodologas, cinco de las ms usuales son recogidas y definidas en este estudio. Se plantean los aspectos tericos que sustentan las distintas propuestas y se discute brevemente las ventajas e inconvenientes que presentan. las palabras "se deriva" y "certeza" en la definicin previa (Massart et al., 1988). El objetivo de la utilizacin del lmite de deteccin se debe a dos razones bsicas (Ingle, 1974): a) expresar el lmite bajo del rango de concentraciones, bajo el cual una tcnica especfica, un instrumento, y/o las condiciones puedan ser usados para el anlisis de unas especies particulares, y b) decidir si el analito esta presente en la muestra. Existen dos enfoques globales para la estimacin del lmite de deteccin: (i) estimacin instrumental: est basada en analizar el ruido de fondo del instrumento y decidir cual es la mnima concentracin de analito que genera una seal medible que puede diferenciarse del ruido; y (ii) estimacin estadstica: se basa en analizar estadsticamente la variabilidad del blanco y determinar que magnitud de seal es significativamente diferente (mayor) a la propia del blanco. La determinacin de un analito (que puede estar presente a muy bajas concentraciones) puede ser considerada como un test probabilstico. Este esfuerzo de evaluar la calidad de un mejor procedimiento analtico radica en la determinacin de las probabilidades de falso positivo (!), y de falso negativo (") (Herrero et al., 1994). Dichos trminos se pueden definir como las probabilidades de afirmar, respectivamente, que est presente el analito cuando no es cierta (falso positivo) y de que no hay analito cuando si lo haba (falso negativo). La definicin del lmite de deteccin, aceptada por la IUPAC, contempla la probabilidad de un falso positivo en el anlisis de una muestra problema, pero no evala explcitamente la probabilidad de un falso negativo. Esta probabilidad ha de considerarse como un parmetro de calidad para seleccionar un procedimiento u otro al resolver un problema de deteccin concreto. Para estimar la probabilidad de un falso negativo, se puede utilizar la curva caracterstica de deteccin como informacin para definir el significado real de los resultados experimentales en las proximidades del lmite de deteccin. En esta comunicacin no vamos a considerar el primer enfoque (estimacin instrumental), y vamos a discutir las diferentes metodologas para realizar una estimacin estadstica. El propsito de este trabajo, no es ms que llevar a cabo una discusin simple y general sobre algunos de los modelos ms usados para calcular el lmite de deteccin. Los modelos usados en esta comunicacin fueron: los propuestos por la IUPAC (IUPAC, 1978 y IUPAC, 1995), el propuesto por Long y Winefordner (Long y Winefordner, 1983), el propuesto por Cuadros (Cuadros et al., 1993), as como el propuesto por Clayton (Clayton et al., 1987).

1.- Introduccin La validacin, ltima etapa de la propuesta y desarrollo de un mtodo analtico, consiste en verificar su adecuacin a unos requisitos llamados parmetros de calidad. Dichos parmetros se definen como un conjunto de valores cuantitativos, experimentalmente determinados, para evaluar lo apropiado que es el mtodo para cualquier propsito dado. Uno de estos parmetros, de gran inters en el anlisis de elementos traza, lo forman los lmites bajos. Para un proceso de medida dado, el estudio de los lmites bajos requiere la introduccin de tres niveles: a) un "lmite de decisin", con el se puede decidir si el resultado de un anlisis indica deteccin o no; b) un "lmite de deteccin", indicara la menor concentracin que un procedimiento puede detectar; y c) un "lmite de determinacin", indicara si un procedimiento sera suficientemente preciso para dar una estimacin cuantitativa satisfactoria. Sin embargo, en esta comunicacin, solamente nos vamos a referir al lmite de deteccin ya que es el ms utilizado en la bibliografa analtica. La definicin y la medida del lmite de deteccin han causado gran controversia en los ltimos aos. El examen bibliogrfico, buscando una apropiada definicin, revela un conjunto de expresiones matemticas y una amplia variedad de terminologas. Durante cuatro dcadas, han sido propuestos varios conceptos, terminologas y formulaciones para tratar el problema qumico de la deteccin. Esta capacidad de detectar pequeas cantidades de analito es una de las caractersticas de muchas tcnicas instrumentales. La IUPAC (IUPAC, 1978), proporciona la siguiente definicin para el lmite de deteccin: "el lmite de deteccin, LD, expresado como concentracin, se deriva de la menor medida, Y0, que puede ser detectada con una certeza razonable para un determinado procedimiento analtico". Muchos autores han discutido sobre como deben entenderse

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Utilizando este ltimo modelo, se ha podido estimar la probabilidad de falso negativo, manteniendo el valor de la probabilidad de falso positivo constante, que se asume cuando se usa el modelo de Cuadros (Cuadros et al., 1993), debido a la similitud de la expresin que emplean ambos modelos para calcular el lmite de deteccin.

sY o (4) b donde #(!,",$) es "el parmetro de descentrado de una distribucin t no central". Para ! y ", y un nmero de puntos, $ < 25, tenemos: L D = ( , , )

( , , ) = 2
2.- Aspectos tericos El lmite de deteccin calculado, para un elemento dado, puede fcilmente variar de un orden de magnitud a travs del uso de diferentes aproximaciones estadsticas. Sin embargo, la expresin ms usada es la siguiente: donde

deteccin, por consiguiente, tiene la siguiente expresin:

4 es un factor de correccin para 2t. El lmite de 4 + 1

4 t (1- , ) 4 + 1

(5)

LD = 2

sYo LD = k b

(1)

donde k es un factor numrico elegido de acuerdo con el nivel de confianza deseado; sYo la desviacin estndar del conjunto de repeticiones correspondientes a la seal del blanco, Y0, y b la pendiente de la recta de calibrado. 2.1 Modelo 1: (IUPAC, 1978) Basndose en la ecuacin 1, Kaiser fue el primero en sugerir un valor para k de 3 2 (Kaiser, 1968). Esta recomendacin ha sido reforzada por la IUPAC y otros autores y ahora es muy comn. La aproximacin de la IUPAC, para evaluar el lmite de deteccin, se basa en la ecuacin (IUPAC, 1978): (2) LD = 3 sCo donde la desviacin estndar a concentracin "cero", se calcula a partir de:

Siendo t el correspondiente valor de la t de Student, de una sola cola, con ! = 0.05 y con $ puntos. Los valores as calculados, utilizando el modelo 2, son ms altos que aquellos obtenidos habitualmente a partir del modelo 1. 2.3 Modelo 3: (Long y Winefordner, 1983) El modelo de Long y Winefordner (denominado aproximacin de la propagacin de errores), incluye, en el clculo del lmite de deteccin, las desviaciones estndar tanto de la seal del blanco, sYo, como de la pendiente, sb, y de la ordenada en el origen, sa, tal y como viene recogido en la ecuacin 6:

4 sY o t (1- , ) 4 + 1 b

(6)

LD =

k b

2 sY o + s a + (

a 2 2 ) sb b

(7)

sC o ,
(3)

sC o =

sY o b

donde sYo y b han sido definidos previamente. La obtencin del lmite de deteccin, a partir de este modelo, depende mucho de los errores que se pueden cometer en el estudio de la repetibilidad del blanco. Para estimar el lmite de deteccin es inapropiado recomendar un nmero particular de repeticiones llevadas a cabo sobre la medida del blanco. Sin embargo, un valor de diez observaciones se puede considerar adecuado. Aunque la IUPAC adopt este modelo para el clculo del lmite de deteccin, y la "ACS Subcommittee on Environmental Analytical Chemistry" lo confirm, su aceptacin ha sido lenta debido a que ofreci una gran incertidumbre a la hora de usar los lmites de deteccin como base para la comparacin de los mtodos analticos (Long y Winefordner, 1983). 2.2 Modelo 2: (IUPAC, 1995) La IUPAC, en un trabajo preparado por Currie, propone la siguiente expresin para calcular el lmite de deteccin (IUPAC, 1995):

donde el valor de k es 3, y a y b son, respectivamente, el trmino independiente y la pendiente de la recta de calibrado (Long y Winefordner, 1983). Cuando las desviaciones estndar de la pendiente y del trmino independiente son despreciables frente a la de la seal del blanco, este modelo equivaldra al modelo 1, y por tanto los valores correspondientes al lmite de deteccin obtenidos con el modelo 3 sern inferiores a los calculados a partir del modelo 2. Sin embargo, este modelo original de Long y Winefordner no tiene en cuanta la correlacin existente entre pendiente y ordenada en el origen, ya que no son parmetros independientes sino que el valor de uno influye en la estimacin del otro. Este hecho hace que los valores calculados mediante la ecuacin anterior (ecuacin 6) estn sobreestimados y frecuentemente den lugar a LD excesivamente grandes. Para corregir este hecho, la ecuacin podra modificarse de forma que aparezca el correspondiente coeficiente de correlacin entre ambos parmetros, r(a,b), segn:

LD =

k b

sY o + s 2 a +(
2

a 2 2 a ) sb + ( ) r (a, b) sa sb (8) b b

donde el coeficiente ra,b puede ser calculado a partir del cociente entre la media aritmtica y la media cuadrtica de los valores de concentracin (valores x), segn la ecuacin (IUPAC, 1994): x xi N (9) r (a, b) = =
(x i )
2

xq

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Obsrvese que el valor de r(a,b) es negativo, por lo que el nuevo trmino siempre resta a los anteriores y el LD as calculado es siempre menor que el calculado mediante la ecuacin 6. 2.4 Modelo 4: (Cuadros et al., 1993) Tambin se ha empleado, en este estudio, la propuesta de Cuadros que calcula el lmite de deteccin, segn la aproximacin de la IUPAC, a partir de la ecuacin 2, pero estimando el valor de sCo a partir de la ecuacin 7:
(Yo - Y ) sY,c 1 1 (10) + + b n m b2 ( Ci - C )2 donde sY,c es la desviacin estndar de la regresin; m: nmero de anlisis repetidos; n: nmero total de pares de valores usados para calcular la recta de calibrado; Y0: valor medio de la seal del "blanco"; Y : valor medio de todos los valores de la seal usados en el clculo de la recta de calibrado; ci cada uno de los valores de la concentracin usados para la regresin; c : valor medio de todos los valores de la concentracin usados en el clculo de la recta de calibrado (Cuadros et al., 1993). De esta forma, se toma en consideracin, en el clculo del lmite de deteccin, tanto el diseo experimental del calibrado, la sensibilidad de ste, as como la calidad de la regresin. Los valores correspondientes al lmite de deteccin as calculados, son independientes del instrumento usado. Hay que sealar que cuando los errores que se cometen en la realizacin del calibrado estndar, esto es sY,c, son mayores que aquellos obtenidos en el estudio de la repetibilidad del blanco, es decir sYo, los valores correspondientes al lmite de deteccin calculados a partir del modelo 4, sern siempre superiores a los del modelo 1. sCo =
2

3.- Discusin De las cinco propuestas aqu discutidas, el modelo 1 es el de menor complejidad terica y desde el punto de vista prctico necesita poca labor experimental, simplemente la medida de la precisin del blanco. Sin embargo, no es aplicable a sistemas qumicos que no presenten un blanco bien definido y medible. Adems, puede ser el menos riguroso al no tener en cuenta las caractersticas de calidad del modelo de calibracin utilizado ni tener en consideracin las probabilidades de falso positivo y de falso negativo en su clculo. El modelo 2 manteniendo tanto la simplicidad terica como prctica incorpora en el clculo las probabilidades de falso positivo y negativo. Sin embargo, mantiene las limitaciones del modelo anterior debidas a la necesidad de que el sistema qumico presente un blanco definido y medible y a la no consideracin de las caractersticas de calidad del modelo de calibracin utilizado. El modelo 3 incorpora, al menos en parte, las caractersticas de calidad del modelo de calibracin utilizado al incorporar a la expresin del clculo del lmite de deteccin las desviaciones estndar de los trminos independiente y de la pendiente del calibrado utilizado, aunque no tiene en cuenta el diseo experimental utilizado en el calibrado ni su sensibilidad. Adems, adolece de la misma debilidad de los modelos anteriores al necesitar un blanco medible en el sistema qumico y no incluir en el clculo las probabilidades de falso positivo y negativo. En el modelo 4 si se incluye las caractersticas del calidad del modelo de calibracin utilizado as como las caractersticas del diseo experimental y su sensibilidad. Adems, elimina la necesidad de la existencia de un blanco medible al poder realizar una estimacin de la seal atribuible al blanco a partir del calibrado realizado. Sin embargo, no contempla explcitamente la utilizacin de las probabilidades de los falsos positivos y negativos en el clculo. El modelo 5 siendo el ms complejo desde el punto de vista terico es tambin es el ms completo dado que contempla, a travs, del parmetro de descentrado las probabilidades de falso positivo y negativo. Asimismo, incluye en el clculo tanto las caractersticas de calidad del modelo de calibracin como el diseo experimental del calibrado y su sensibilidad.

2.5 Modelo 5: (Clayton et al., 1987) La expresin que se utiliza para calcular el lmite de deteccin con el modelo 5 es:

L D = ( , )

sY,c b

2 1 1 C + + n m ( C i - C )2

(11)

donde %(!,") es el parmetro de descentrado, que depende de las probabilidades de falso positivo y de falso negativo. El lmite de deteccin, as definido, depender del diseo experimental del calibrado, de la sensibilidad de ste, de la calidad de la regresin y de las probabilidades de falso positivo y de falso negativo que el analista est dispuesto a asumir (Clayton et al., 1987). Para ! = " = 0.05, los lmites de deteccin que han sido calculados a partir de este modelo son siempre superiores a los obtenidos con el modelo 4. La IUPAC ha recomendado este modelo 5 como la mejor forma de estimar estadsticamente el lmite de deteccin (IUPAC, 1997), con una diferencia fundamental. En vez de utilizar todo el conjunto de datos del calibrado, se realiza una calibracin "ad hoc" slo a bajos valores de concentracin, y con lo datos obtenidos se calcula el valor del LD por aplicacin de la ecuacin 9.

4.- Conclusiones El lmite de deteccin es un parmetro de calidad caracterstico del procedimiento analtico. Su utilizacin como un criterio de comparacin de procedimientos analticos puede ser de gran utilidad para la eleccin del mtodo ms adecuado al fin previsto. Sin embargo, las diferentes definiciones existentes as como los distintos procedimientos propuestos para su estimacin pueden dificultar ese objetivo. De las metodologas de clculo presentadas podramos decir que, en general, para un caso concreto los valores del lmite de deteccin que se obtendran aplicando los distintos modelos deberan seguir una secuencia de orden creciente de la siguiente forma: modelo 1 < modelo 2 < modelo 3 <

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modelo 4 < modelo 5. Esto es debido a que la simplicidad del modelo disminuye en el mismo sentido y los modelos 4 y 5 son los ms estrictos desde un punto de vista de introduccin de un mayor nmero de fuentes de variacin en el clculo del lmite de deteccin. Pueden existir sin embargo excepciones de la regla anterior para los valores del lmite de deteccin obtenidos con los modelos 4 y 5. Estos podran ser del mismo orden que los valores obtenidos con los modelos 1-3, si los errores en la pendiente y en el trmino independiente del calibrado utilizado fueran despreciables comparados a los obtenidos en la medida de la seal del blanco. Finalmente, se podra indicar que, como criterio de comparacin de mtodos analticos, el mejor lmite de deteccin podra ser el obtenido con el modelo 5 ya que adems de incluir en el clculo todas las posibles fuentes de error relacionadas con el calibrado tambin tiene en cuenta las probabilidades de falso positivo y falso negativo.

Bibliografa
Clayton, C.A., Hines, J.W. and Elkins, P.D., Anal. Chem., 59, 2506-2514, 1987. Cuadros Rodrguez, L., Garca Campaa, A.M., Jimenz Linares, C., Romn Ceba, M., Anal. Lett., 26, 1243-1258, 1993. Herrero, A., Ortz, M.C., Arcos, M.J. and Palacios, J.L., Analyst, 119, 15851592, 1994. Ingle, J.D., J. Chem. Educ., 51, 100-105, 1974. IUPAC. Analytical Chemistry Division, Spectrochim. Acta B, 33B, 242-245, 1978. IUPAC. Analytical Chemistry Division Commission on Analytical Nomenclature, Pure Appl. Chem. 66 595-608, 1994. IUPAC. Analytical Chemistry Division Commission on Analytical Nomenclature, Pure & Appl. Chem., 67, 1699-1723, 1995. IUPAC. Analytical Chemistry Division Commission on Electroanalytical Chemistry, Pure & Appl. Chem., 69, 297-328, 1997. Kaiser, H., The limit of Detection of a Complete Analytical Procedure, Adam Hilger, London, 1968. Long, G.L. and Winefordner, J.D., Anal. Chem., 55, 712A-724A, 1983. Massart, D.L., Vanderginste, B.G.M., Deming, S.N., Michotte, Y. and Kaufman L., Chemometrics: a textbook, Ch. V, 75-92. Elsevier, Amsterdam, 1988.