IDENTIFICAREA BACTERIILOR PE BAZA CARACTERELOR BIOCHIMICE SI DE PATOGENITATE

I. IDENTIFICAREA PE BAZA CARACTERELOR BIOCHIMICE

1.Pigmentogeneza: unele bacterii sintetizeaza pigmenti:

Intracelular ( nedifuzibil ):coloreaza doar colonia bacteriana

Exp: Stafilococul auriu: sintetizeaza pigm. galben auriu ( colonie aurie ) S. epidermidis: colonie alb- galbuie

Extracelular( difuzibil ):difuzeaza si coloreaza mediul de cultura

Exp: Bacilul Piocianic ( germene intraspitalicesc): coloratie verdealbastrui din cauza piocianinei

2. Capacitatea hemolitica
Diferentiaza speciile hemolitice intre ele. Se experimenteaza pe m. geloza-sg. 3 tipuri de hemoliza: Nehemolitice ( gama ) : bacteriile cresc, culoarea mediului nu se modifica. Hemoliza totala ( beta ) : bacteriile cresc,Hb metabolizata in totalitate, in jur apare o zona transparenta de hemoliza. Hemoliza partiala ( alfa) : in jurul bacteriilor apare o zona brun verde - hematii sparte, Hb modificata partiala pana la un produs intermediar verde. Hemoliza este importanta pt clasificarea sreptococilor ( patogeni/ nepatogeni )

3. Testul catalazei

Enzima ce desface apa oxigenata in apa si oxigen Diferenta. Stafilococilor de streptococi Pe o lama: 1 pic apa oxigenata + 1 fragment din cultura, daca apare efervescenta spunem ca bacteria este catalazo+ ( stafilococii catalazo+/ streptococii catalazo-)

4.Testul evid. producerii de hidrogen sulfurat

Rezultat din interactiunea aminoacizilor cu S Pe un mediu cu cisteina( aa ) insamantam un fragment din cultura.. La dop atasam o banda de hartie impregnata cu sulfat de Pb banda neagra Se foloseste pt identificarea enterobacteriilor

5. Producerea de indoli:
gaz ce rezulta din metabolizarea triptofanului

Pe un mediu cu triptofan insamantam un fragment din cultura. La dop atasam o banda de hartie impregnata cu un reactiv, care in prezenta indolului se coloreaza in rosu.
Se foloseste pt identificarea enterobacteriilor

6. Testul de fermentare a glucidelor:

m. de cultura( diferential ) + glucid +indicator de ph

Daca bacteria fermenteaza glucidul, se modifica indicatorul de ph Exp: AABTL: lactozo + / lactozo
Se foloseste pt identificarea enterobacteriilor

II. IDENTIFICAREA PE BAZA CARACTERELOR DE PATOGENITATE

PATOGENITATE: capacitatea unei bacterii de a patrunde in organism, de a se multiplica si a det. fenomene de boala. MECANISME : Invazivitate a) F.de structura ( prot. de suprafata, cps, Ag de suprafata) b) Agresine: enzime prod de bacterie cu actiune agresiva asupra tesutului din jur Toxinogeneza prin elaborarea de: a) Exotoxine b) Endotoxine

Testul pigmentogenezei: ne orienteaza spre patogenitate

Exp: S. auriu patogen / S. epidermidis conditionat patogen

Testul fermentarii manitei:

Exp: S. auriu fermenteaza manita

Testul coagulazei: coagulaza plasma

Exp: o suspensie de S. auriu + plasma de iepure termostat 1-2 h se observa coagularea plasmei ( modalitate de protectie a S. auriu impotriva fagocitozei )

Testul fibrinolizinei: fibrinolizina produce liza cheagului de

plasma Exp: dupa 12-14 h se observa liza chegului format in primele 1-2 h

Prezenta hemolizinelor

Exp: hemolizina beta hemoliza totala Streptococ patogen

Evidentierea toxinogenezei:

Exp: TESTUL ELEK - det tulpinei toxigene de bacil difteric - r. de precipitare Ag-Ac: ser antidifteric ( Ac ) + b. difteric Exp: depistare toxina botulinica - PCR

Forme de crestere pe m. solid Exp: colonii S patogene/ colonii R- nepatog/ B. Koch exceptia Forme de crestere pe m. lichid 1. M. tulbure omogen- forma S ( staf ) 2. M.clar cu depozit grunjos la baza tubului si val la suprafata forma R 3. M. clar cu depozit grunjos la baza tubului si pe pereti strept 4. M. clar cu val la suprafata plisat b. Koch 5. M. tulbure uniform cu inel aderent pe pereti E. Coli