Toxicologie Generala Corectata Format Final

Felicia Loghin TOXICOLOGIE GENERAL Editura Medical Universitar Iuliu Haieganu Cluj-Napoca 2002
CUPRINS INTRODUCERE N TOXICOLOGIE Definiie i scop Istoricul toxicologiei SUBSTANE TOXICE I TI PURI DE INTOXICAII Substane toxice: definiie, clasificare Intoxicaii: definiie, clasi ficare 1. Clasificarea conform criteriului clinico-evolutiv 2. Clasificarea conf orm criteriului social-juridic NOIUNI DE TOXICOCINETIC Mecanisme de transport prin membranele biologice Absorbia substanelor toxice 1. Absorbia digestiv 2. Absorbia pe cale respiratorie 3. Absorbia cutanat 4. Absorbia parenteral Distribuia substanelor t oxice Stocarea substanelor toxice Eliminarea substanelor toxice 1. Excreia renal 2. Excreia prin fecale 3. Eliminarea pulmonar 4. Alte ci de eliminare Metabolizarea su bstanelor toxice Reacii din faza I 1. Reacii de oxidare A. Sistemul enzimatic al mo nooxigenazelor dependente de citocromul P450 B. Flavinmonooxigenaza C. Oxidrile n emicrozomale 2. Reacii de reducere A. Reduceri microzomale B. Reduceri nemicrozom ale 1 1 4 8 8 9 9 11 19 19 28 28 33 36 38 38 41 43 43 45 46 47 47 51 51 51 61 62 64 65 66
3. Reacii de hidroliz Reacii din faza II 1. Glucuronoconjugarea 2. Sulfoconjugarea 3. Conjugarea cu aminoacizi 4. Acetilarea 5. Conjugarea cu glutation 6. Metilare a Rezultatul biotransformrii xenobioticelor 1. Inducia enzimatic 2. Inhibiia enzimat ic 3. Bioactivarea RELAII DOZ-EFECT N TOXICOLOGIE Riscul i evaluarea riscului FACTORI I CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA Factori chimici care influeneaz toxicitatea Factori bi ologici care influeneaz toxicitatea Factori de mediu care influeneaz toxicitatea MEC ANISME DE ACIUNE TOXIC Afectarea structurii celulare Moartea celular A) Aciunea caus tic B) Formarea de reactivi intermediari Tulburri ale funciei celulare induse de su bstanele toxice Disfuncii ale exprimrii genice Disfuncii ale activitii celulare n desf re Afectarea homeostaziei celulare Genotoxicitatea Teste de mutagenez Carcinogene za chimic Patogeneza cancerului Carcinogene chimice Teratogeneza Imunotoxicitatea Imunosupresia Stimularea rspunsului imun Autoimunitatea 67 68 68 69 70 71 72 72 74 74 75 76 88 92 97 97 103 117 124 128 128 130 130 139 140 141 141 143 147 150 151 156 161 165 167 168 173
PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC Patologia toxic a sistemului nervos Neuronopat ii Axonopatii Mielinopatii Tulburri ale transmiterii impulsului nervos Miopatii V asculopatii toxice Patologia toxic a funciei pulmonare Efecte sistemice Efecte pul monare Efecte asupra cilor respiratorii superioare Efecte pulmonare dup expunere p e o alt cale Patologia toxic a ficatului Leziuni citotoxice acute Leziuni colestat ice Hepatopatii cronice Patologia toxic a rinichiului Insuficiena renal acut Insufic iena renal cronic Sindromul nefrotic Patologia toxic a sngelui i a mduvei hematoformat are Afectarea hematopoezei Afectarea sngelui periferic Patologia toxic a pielii BI BLIOGRAFIE 177 177 183 186 189 190 191 191 191 192 194 197 197 198 200 201 202 203 205 205 206 207 207 209 210 213
INTRODUCERE N TOXICOLOGIE DEFINIIE I SCOP Toxicologia poate fi definit ca tiina care studiaz efectele duntoare substanelor chimice asupra organismelor, precum i interaciunile acestora cu organi smele vii. ntr-un sens mai larg, ea a fost definit ca tiina care se ocup cu identific area, izolarea i determinarea cantitativ a substanelor toxice, cu aciunea lor asupra organismului, precum i cu mijloacele folosite pentru combaterea efectelor toxice (Gonzales, 1954). Etimologia cuvntului toxic provine din greaca antic, n care toxo n nsemna arc, sgeat sau otrava cu care era tratat vrful sgeilor. Dup Pliniu, termenul oxicus deriv de la taxus, o specie de conifere ale crei fructe se foloseau la otrvi rea sgeilor. Cuvntul otrav provine de la verbul slav otraviti, care nseamn a mhni, a t lbura senintatea sufleteasc. Sfera noiunii de otrav este mai restrns dect a aceleia de toxic i se refer la substanele folosite n scop criminal. Toxicologia este o tiin pluri isciplinar, care necesit cunotine de farmacologie, biochimie, chimie, fiziologie, pa tologie i dei a fost adesea considerat drept o component a acestora, ea este o disci plin tiinific de sine stttoare. Toxicologia este o tiin experimental, cu un caracte ativ pronunat. Rolul su n serviciul societii const n primul rnd n protejarea oamenil altor organisme mpotriva efectelor duntoare ale substanelor toxice, dar i n dezvoltar ea unor compui din clasa medicamentelor anticanceroase sau a pesticidelor care s p rezinte o toxicitate mai selectiv i deci o mai mare securitate n utilizare. Scopuri le toxicologiei moderne sunt multiple, iar clasificrile diferiilor autori sunt mai mult sau mai puin detaliate. Astfel, Loomis i Hayes (1996) definesc trei domenii principale de interes: toxicologia mediului, toxicologia economic i toxicologia me dical (Fig.1.1). Prima se ocup cu reziduurile, poluarea i igiena industrial, a doua cu dezvoltarea de noi substane chimice utilizabile ca medicamente, pesticide i adi tivi alimentari, iar ultima cu diagnosticul i tratamentul intoxicaiilor i cu aspect ele medico-legale ale acestora. Hodgson i Levi (1997) propun o clasificare mai de taliat, care evideniaz foarte clar domeniile de interes ale toxicologiei i importana acesteia n societatea modern. Cele cinci grupe principale studiaz:
2 TOXICOLOGIE GENERALA FARMACOLOGIE CHIMIE BIOLOGIE FIZIOLOGIE PATOLOGIE INGINERIE SANATATE PUBLICA IMUNOLOGIE TOXICOLOGIA MEDIULUI POLUARE ATMOSFERICA A SOLULUI MARINA ECONOMICA SUBSTANTE INDUSTRIALE ALIMENTE SI ADITIVI ALIMENTARI MEDICAMENTE SI CO SMETICE CERCETARE FUNDAMENTALA MEDICALA DIAGNOSTIC TERAPIE MEDICO-LEGALA BOLI PROFESIONALE Fig. 1.1. Domeniile de interes ale toxicologiei i disciplinele conexe (Loomis i Ha yes, 1996) A. Mecanismele de aciune toxic 1. Toxicologia biochimic se ocup cu evenimentele ce a u loc la nivel biochimic i molecular, incluznd enzimele de metabolizare a xenobiot icelor, generarea intermediarilor reactivi, interaciunea cu macromoleculele, aspe cte de biologie molecular 2. Toxicologia comportamental studiaz efectele substanelor toxice asupra comportamentului uman i animal 3. Toxicologia nutriional studiaz efec tele dietei asupra toxicitii 4. Carcinogeneza se ocup cu evenimentele chimice i bioc himice care conduc la apariia cancerului 5. Teratogeneza studiaz evenimentele chim ice i biochimice care conduc la efecte duntoare asupra procesului de dezvoltare 6. Mutageneza se ocup cu efectele toxice asupra materialului genetic 7. Toxicitatea la nivelul organelor studiaz efectele substanelor toxice asupra funcionalitii organel or
INTRODUCERE N TOXICOLOGIE 3
B. Msurarea substanelor toxice i a toxicitii 1. Toxicologia analitic este o ramur a miei analitice care se ocup cu identificarea i determinarea cantitativ a substanelor toxice i a metaboliilor acestora n produse biologice i n probe de mediu 2. Evaluarea toxicologic implic utilizarea organismelor vii pentru estimarea efectelor toxice 3. Patologia toxicologic este o ramur a patologiei care se ocup cu efectele substane lor toxice manifestate prin modificri ale morfologiei subcelulare, celulare, tisu lare sau la nivel de organ 4. Studii structur-activitate studiaz relaiile ntre propr ietile fizicochimice ale substanelor toxice i toxicitatea acestora i n special utiliza rea acestor relaii pentru prevederea toxicitii. C. Toxicologie aplicat 1. Toxicologi a clinic se ocup cu diagnosticul i tratamentul intoxicaiilor la om 2. Toxicologia ve terinar studiaz diagnosticul i tratamentul intoxicaiilor la animale, n special la cel e de companie i la cele care reprezint surse de produse alimentare 3. Toxicologia medico-legal urmrete diagnosticarea intoxicaiilor letale, inclusiv prin detectarea o trvurilor n probele biologice provenite de la intoxicai 4. Ecotoxicologia studiaz co ntaminarea mediului nconjurtor cu poluani, comportarea poluanilor n biosfer i efectele nocive ale acestora asupra ecosistemelor. 5. Toxicologia industrial reprezint un d omeniu specific al toxicologiei mediului, care se ocup de mediul de munc. D. Toxic ologia unor clase de substane chimice cu anumite utilizri: include aspectele toxic ologice ale dezvoltrii de noi substane cu utilizri comerciale specifice: 1. Substane chimice utilizate n agricultur insecticide, ierbicide, fungicide, rodenticide. Se urmrete dezvoltarea de substane cu toxicitate selectiv, adic maxim fa de organismele minim fa de celelalte organisme din mediu sau fa de om. 2. Medicamente evaluarea tox icitii i a efectelor adverse 3. Droguri 4. Aditivi alimentari 5. Substane chimice in dustriale 6. Substane naturale: fitotoxine, micotoxine, minerale 7. Produi de comb ustie
4 TOXICOLOGIE GENERALA E. Toxicologie reglementar se preocup de formularea unor acte legislative care au drept scop reducerea efectelor toxice ale substanelor asupra sntii omului sau asupra mediului 1. Aspectele legale se refer la formularea de legi i regulamente i la apli carea acestora 2. Evaluarea riscului const n definirea riscurilor, a riscurilor po teniale i n stabilirea raportului beneficiu / risc, servind la adoptarea msurilor le gislative.
ISTORICUL TOXICOLOGIEI Toxicologia este o tiin experimental, ale crei nceputuri se pie rd n negura timpurilor, dezvoltarea sa fiind strns legat de drama otrvirilor, care a marcat evoluia societii umane de la nceputurile ei pn n epoca modern. Omul primitiv, lndu-se n contact direct cu natura, a nceput s cunoasc elementele din regnul mineral, vegetal i animal, difereniind produsele toxice de cele folositoare pentru aliment aie. El cunotea efectele toxice ale veninului de arpe, plantelor otrvitoare cum ar f i cucuta sau aconitul, precum i ale unor substane minerale ca arsenul, plumbul, me rcurul, stibiul, cuprul. Unele din acestea erau folosite n scopuri criminale sau de suicid. Papirusul egiptean Ebers (aproximativ 1500 .C.) poate fi considerat dr ept cea mai veche farmacopee care a supravieuit i conine informaii despre numeroase otrvuri, printre care cucuta, aconitul, opiul, plumbul, cuprul, stibiul, glicozid ele cianogenetice. Aceste otrvuri erau considerate a avea proprieti mistice i utiliz area lor era nconjurat de superstiii. Se considera de exemplu c ingestia acestor sub stane era letal pentru cei vinovai i fr efecte pentru cei inoceni. Astfel, n Egiptul ic soiile infidele erau supuse pedepsei piersicilor, care presupunea administrarea smburilor zdrobii de piersici ce conin amigdalin, substan care elibereaz n organism c ur. Sumerienii, n jurul anilor 4500 .C., se nchinau la zeia Gula, care era considerat drept stpna farmecelor, vrjilor i a otrvurilor. Folosirea sgeilor otrvite este cunosc in cele mai vechi timpuri. Vntorii preistorici Masai din Kenia, care au trit acum 1 8.000 de ani, foloseau sgei otrvite, probabil cu extracte din specii de Strophanthu s. Referire la sgeile otrvite se face i n textul indian Rig Veda (sec.XII .C.), n Odis ea lui Homer (850 .C.) i n Cartea lui Iov. Primele ncercri de identificare i clasifica re a otrvurilor, precum i de introducere a unor antidoturi, au fost semnalate n Gre cia i Roma antic. Theophrastus (370-286 .C.), un student al lui Aristotel, a inclus numeroase referine la plantele otrvitoare n lucrarea sa De Historia Plantarum. Dio scorides
(40-80 D.C.), un medic grec care a trit la curtea mpratului Nero, a fcut prima ncerca re de a clasifica otrvurile n funcie de originea lor: animale, vegetale i minerale, clasificare care s-a pstrat timp de 15 secole. Nicander din Colophon (204-135 .C.) , un medic i poet grec, este considerat a fi unul din primii toxicologi i a experi mentat toxinele animale pe criminalii condamnai. n poemul su Theriaca a descris simpt omele i tratamentul otrvirilor cu toxine animale, iar n poemul Alexipharmaca vorbete d espre antidoturi. Otrvirile intenionate au fost foarte frecvente n antichitate, att n execuii ct i pentru eliminarea oponenilor politici. Poate cel mai cunoscut caz de u tilizare a otrvii ca modalitate de execuie este cel al filozofului grec Socrates ( 470-399 .C.), care a fost executat prin administrarea unui extract de cucut (Coniu m maculatum). Una din cele mai infame otrvitoare din toate timpurile a fost Locus ta, care a fost angajat de Agrippina, mama lui Nero, pentru a-i asigura acestuia accesul la tron. Recunoaterea, clasificarea i utilizarea otrvurilor n Grecia antic i n Roma antic au fost nsoite de o cutare neobosit a unui antidot universal. n acest sens, un loc aparte n istoria toxicologiei l ocup legenda regelui Mithridates al VIlea a l Pontului, ale crui numeroase experiene de toxicitate acut pe criminali l-au fcut s pretind c a descoperit un antidot pentru fiecare reptil veninoas sau substan otrvitoar . Teama sa de a nu fi otrvit era att de mare, nct ingera regulat un amestec de 36 de ingrediente pentru a se proteja mpotriva unui asasinat. Datorit efectului acestui amestec de antidoturi, ncercarea de a se sinucide cu otrav cu ocazia capturrii sal e iminente de ctre inamici a euat i a fost nevoit s apeleze la sabia unui servitor. Un alt antidot folosit n Roma antic a fost Theriacum, preparat de medicul lui Nero , Andromachus. Acesta a adugat la antidotul regelui Mithridate, Mithridatum, ingr ediente cum ar fi carnea de vipere, ceapa de mare i cantiti mari de opiu, iar alte ingrediente au fost ndeprtate. Numrul total de componente era de 75 i se presupunea c acest antidot ar fi fost eficient n contracararea tuturor otrvurilor i a mucturilor de animale veninoase. ntre cderea Romei i secolul al XII-lea D.C., subiectul otrvuri lor este rar ntlnit n documente. Prima evaluare critic a antidoturilor se regsete n lu rarea medicului i filozofului evreu Maimonides (Moses ben Maimon, 1135-1204) inti tulat Tratat despre otrvuri i antidoturile lor (1198), care marcheaz intrarea ntr-un n u stadiu al dezvoltrii toxicologiei. Maimonides, ca i Hippocrates naintea sa, a scr is despre biodisponibilitate, menionnd c laptele, untul i smntna pot s scad absorbia stinal. El a respins unele din tratamentele populare ale timpului, dar a continua t s susin utilizarea theriacului i a mithridatului n tratamentul mucturilor de arpe. d din secolul al XV-lea, otrvirea criminal a fost practicat din ce n ce mai des n Ita lia, care devine leagnul crimei prin otrvire. O figur infam a acestui timp este otrvi toarea Toffana, care prepara cosmetice pe baz de arsen
6 TOXICOLOGIE GENERALA
(Agua Toffana). Ea a fost succedat de o imitatoare cu geniu organizatoric, Hieron yma Spara, care i-a dirijat activitile spre obiective maritale i financiare specific e. Printre familiile care au fost implicate n cazuri de otrvire, cea mai faimoas es te familia Borgia, care folosea o otrav numit la cantarella, un amestec de arsen i fo sfor. Activitatea lui Alexandru VI, a fiului su Cesare i a Lucreiei Borgia a contri buit la creterea considerabil a proprietilor statului papal. Catherina de Medici a e xportat cunotinele sale n domeniul otrvirilor din Italia n Frana. Sub faada ngrijirii lor sraci i bolnavi, ea a testat diferite amestecuri toxice sub aspectul simptomat ologiei, momentului de instalare a acesteia i locului de aciune. O urma notorie a ac esteia a fost marchiza de Brinvilliers, iar momentul culminant al acestei practi ci n Frana este reprezentat de Catherine Deshayes, supranumit La Voisine, care i ofere serviciile contra unor sume de bani i care a fost condamnat pentru foarte multe c azuri de otrviri, printre victimele sale numrndu-se peste 2000 de copii. Bazele tiini fice ale toxicologiei au fost puse n epoca iluminist de ctre medicul i alchimistul e lveian Philippus Aureolus Theophrastus Bombastus von Hohenheim-Paracelsus (1493-1 541). Afirmaia sa: Toate substanele sunt otrvuri; nu exist nici una care s nu fie otra v. Doza potrivit difereniaz o otrav de un remediu rmne i astzi principiul de baz a ogiei, contribuind la dezvoltarea conceptelor de relaie doz-efect i de indice terapeut ic. De asemenea, n cartea sa Bergsucht (1533-1534), Paracelsus descrie manifestrile clinice ale intoxicaiilor cronice cu arsen i mercur, precum i boala minerilor. Preoc uprile n domeniul toxicologiei ocupaionale au fost continuate de Bernardino Ramazzi ni care a publicat n 1700 lucrarea Discurs cu privire la bolile muncitorilor. Revol uia industrial a condus la apariia mai multor boli profesionale. Astfel Sir Perciva l Pott a recunoscut n 1775 rolul funinginei n apariia cancerului scrotului la coari. Printele toxicologiei poate fi considerat medicul i chimistul spaniol Mateo Jos Bu enaventura Orfila (1787-1853), care a fost profesor de medicin legal la Universita tea din Paris. El a descris Toxicologia drept o disciplin tiinific diferit de medicin a clinic i de farmacologie i a militat pentru utilizarea analizei chimice i a materi alului de autopsie ca dovezi n intoxicaiile criminale. n 1814 public Tratatul de toxi cologie n care pune bazele toxicologiei experimentale i medico-legale. Alte nume im portante n dezvoltarea toxicologiei experimentale sunt Franois Magendie (1783-1855 ) care a studiat mecanismul de aciune toxic al emetinei, stricninei i cianurii. Ele vul su, Claude Bernard (1813-1878), a avut contribuii importante la descifrarea aci unii toxice a monoxidului de carbon i a curarei. Tratatul lui Bernard, O introduce re n studiul medicinei experimentale, face parte din literatura clasic n dezvoltarea toxicologiei.
n domeniul toxicologiei analitice, s-a urmrit elaborarea unor metode pentru distru gerea materiei organice i pentru izolarea i identificarea substanelor toxice din pr odusele biologice. Astfel, numele chimistului englez James Marsh este legat de e laborarea unei tehnici pentru decelarea arsenului (1836), iar cel al chimistului german Stas de izolarea nicotinei din probe biologice (1851). Fresenius n 1845 i von Babo n 1847, dezvolt o metod de screening pentru toxicii necunoscui, Selmi i Arma nd Gauthier descoper ptomainele, iar Ogier glicozizii cadaverici. O contribuie imp ortant a fost adus de Chelle n problema otrvurilor cianhidrice, prin descoperirea ac idului cianhidric disimulat. Dezvoltarea toxicologiei n secolul XX este tot mai r apid i intereseaz tot mai multe domenii. Progresele din chimia analitic nregistrate d up 1945 au fcut posibil evoluia fr precedent a toxicologiei analitice. Episodul talido midei a determinat nsprirea legislaiei n domeniul evalurii toxicologice a medicamente lor, iar publicarea crii lui Rachel Carson, Silent Spring (1962), a evideniat efectel e utilizrii pesticidelor asupra mediului, contribuind la apariia ecotoxicologiei. A crescut preocuparea pentru descifrarea mecanismelor prin care se produc efecte le toxice i pentru stabilirea relaiilor care exist ntre proprietile fizico-chimice i t xicitate. S-a dezvoltat toxicologia clinic i au aprut noi antidoturi care acioneaz pr in mecanisme specifice. A crescut preocuparea pentru prevenirea intoxicaiilor, att a celor profesionale ct i a celor medicamentoase, prin apariia Centrelor pentru pre venirea intoxicaiilor. n ara noastr, nc nainte de nfiinarea nvmntului farmaceu armaciti care au desfurat activiti n domeniul toxicologiei. Primul toxicolog poate fi considerat farmacistul i medicul Constantin Hepites, care a avut din 1833 un labo rator de analize chimico-legale la Brila i care a devenit ulterior profesor la coal a Naional de Farmacie din Bucureti. Dup 1890, toxicologia romneasc a fost reprezentat e medicul i farmacistul Mina Minovici, care a publicat lucrri n domeniul ptomainelo r, iar fratele su, tefan Minovici, a publicat n 1912 un manual de toxicologie. Ali f armaciti care au contribuit la dezvoltarea toxicologiei romneti au fost: Bacovescu, Vintilescu, Deleanu, Al. Ionescu-Matiu, N. Ioanid, V. Galea, M. Cotru.
SUBSTANE TOXICE I TIPURI DE INTOXICAII SUBSTANE TOXICE: DEFINIIE, CLASIFICARE Substana toxic reprezint obiectul de studiul a l toxicologiei i poate fi definit drept orice compus chimic capabil s produc alterri structurale i funcionale la diferite niveluri de organizare a materiei vii, alterri care se exprim pe plan clinic printr-o stare patologic, care poate s fie reversibi l sau nu. Aceast definiie se refer la compuii chimici exogeni, care ptrund n organism in mediul exterior i care poart denumirea de xenobiotice. n principiu, conceptele d e substan toxic i de otrav sunt sinonime, dar n realitate primul are un caracter gener al, n timp ce al doilea este utilizat atunci cnd folosirea compusului este intenion at, n special n scop criminal. Cea mai veche clasificare a substanelor toxice dateaz din vremea lui Dioscorides, care le clasifica dup originea lor n substane vegetale, animale sau minerale. n zilele noastre, se disting trei grupe de substane toxice n funcie de origine: Compui organici de sintez: o Poluani din aer, ap, alimente: CO, o xizi de azot, oxizi de sulf, hidrocarburi, particule, deeuri industriale, pestici de, fertilizani o Aditivi alimentari: conservani, antioxidani, colorani o Substane ch imice din mediul de munc: metale grele, fluoruri, monoxid de carbon, hidrocarburi , alcooli, esteri, compui organometalici, nitro- i aminoderivai o Droguri: depriman te ale SNC, stimulante, halucinogene, etc o Medicamente o Pesticide o Solveni: hi drocarburi alifatice, hidrocarburi halogenate, alcooli alifatici, glicoli, hidro carburi aromatice o Hidrocarburi aromatice policiclice o Cosmetice Toxine natura le: o Micotoxine: aflatoxine, tricocetene, etc o Toxine microbiene: toxina botul inic, toxina tetanic, etc o Toxine din plante (fitotoxine): alcaloizi, glicozide, etc o Toxine animale: veninuri de erpi, veninuri din insecte
SUBSTANE TOXICE I TIPURI DE INTOXICAII 9 Substane anorganice: metale Alte criterii de clasificare in cont de organul int asup ra cruia acioneaz substana, de mecanismul de aciune, sau de toxicitatea compuilor. Ast fel, n Uniunea European, substanele toxice sunt clasificate n 4 clase de toxicitate, pe baza valorii dozei medii letale (DL50) determinate la obolani (Tabel II.1.): Tabel II.1.: Clasele de toxicitate n Uniunea European Intervalul DL50 (mg / kg) DL 50 25 25 < DL50 200 200 < DL50 2000 2000 < DL50 Clasa de toxicitate Foarte toxic e Toxice Duntoare Neclasificate INTOXICAII: DEFINIIE, CLASIFICARE Intoxicaia este rspunsul organismului la ptrunderea unei substane toxice. Ea reprezint o stare patologic, reversibil sau nu, care se tr aduce printr-o modificare a structurilor celulare sau a metabolismului celular. Intoxicaiile se pot clasifica dup dou criterii principale: criteriul clinico-evolut iv - intoxicaii acute - intoxicaii cronice criteriul social-juridic - intoxicaii vo luntare = intenionate - intoxicaii involuntare = accidentale
1. Clasificarea conform criteriului clinico-evolutiv 1.1. Intoxicaiile acute apar n urma ptrunderii n organism a substanei toxice n doz relativ mare, o singur dat sau mai multe ori ntr-un interval de 24 de ore. Simptomatologia apare n general brusc , este bine conturat i evolueaz rapid. Exist ns i substane toxice cum ar fi fosforul, liul sau paraquatul, n cazul crora simptomatologia nu se instaleaz dect dup cteva zile sau sptmni de la absorbie. Evoluia poate conduce la decesul intoxicatului sau la rec uperarea
10 TOXICOLOGIE GENERAL
total sau parial a acestuia. n ultimul caz pot s rmn sechele sau leziuni persistente. pendent de doza absorbit i de modul de evoluie, intoxicaiile acute pot fi subclasifi cate la rndul lor n: intoxicaii supraacute intoxicaii acute propriu-zise intoxicai ubacute Intoxicaiile supraacute survin n urma absorbiei unor doze mai mari dect doze le letale, simptomatologia fiind aproape instantanee i aprnd la cteva minute sau ore de la expunere. De cele mai multe ori aceste intoxicaii sunt letale. Intoxicaiile subacute survin n urma absorbiei unor doze mici de substan toxic, simptomatologia es te moderat, apare dup o perioad de laten, iar uneori este subclinic, fr manifestri e te, chiar dac se produc perturbri la nivele biologice distincte. Intoxicaiile acute sunt n rile dezvoltate una din principalele cauze de spitalizare a persoanelor sub 30 de ani. Se constat c frecvena acestor intoxicaii este de peste 50% la sexul femi nin, c grupa de vrst cea mai afectat este cea sub 13-14 ani, c peste 80% din intoxicai i se produc la domiciliu i peste 70% sunt accidentale. Clasele de substane implica te n producerea intoxicaiilor pot s difere de la o ar la alta, n funcie de gradul de i dustrializare sau caracteristicile culturale. Astfel, n rile dezvoltate sunt mai fr ecvente intoxicaiile cu medicamente (analgezice, antidepresive, sedative-hipnotic e, stimulante i droguri, medicamente cardiovasculare), n timp ce n rile n curs de dezv oltare se ntlnesc mai ales intoxicaii cu produse agricole (pesticide, ciuperci otrvi toare) sau produse industriale (alcool metilic, produse petroliere) i menajere (s od caustic, detergeni, decapani, solveni, etc.). 1.2. Intoxicaiile cronice se produc n urma absorbiei repetate de doze mici de substan toxic. Aciunea toxic se datoreaz fie a umulrii substanei n organism, la nivelul diferitelor organe sau esuturi, fie sumrii e fectelor lezionale n decursul timpului, cu apariia unor stri patologice. Modificrile care apar sunt adesea latente (subclinice), dar pot s devin manifeste n cazul scder ii condiiei fiziologice generale sau a mobilizrii substanei toxice din depozite, cnd se produce o intoxicaie acut prin creterea nivelelor sanguine ale toxicului. Cauze le cele mai frecvente ale intoxicaiilor cronice sunt utilizarea necorespunztoare a medicamentelor, produselor industriale i pesticidelor, contaminarea mediului i to xicomaniile.
SUBSTANE TOXICE I TIPURI DE INTOXICAII 11
2. Clasificarea conform criteriului social-juridic 2.1. Intoxicaii voluntare Din aceast categorie fac parte: crimele, sinuciderile, toxicomaniile, dopingul i utili zarea afrodisiacelor. 2.1.1. Crimele prin otrvire, care n trecut au fcut numeroase victime, au sczut ca inciden o dat cu dezvoltarea unei metodologii eficiente pentru punerea n eviden a substanei toxice implicate. Unele cazuri celebre de otrvire au con tribuit decisiv la progresul toxicologiei analitice (dozarea arsenului, extracia substanelor toxice organice, etc). n general, substanele folosite n scop criminal su nt substane cu un potenial toxic ridicat i cu proprieti fizice care s le confere persi sten i care s nu permit decelarea lor de ctre victim (fr miros sau gust caracteristi rintre acestea se numr: - derivaii de arsen - srurile de mercur - acizii corozivi stricnina - stupefiantele - acidul cianhidric i cianurile - barbituricii i alte ps ihotrope - insecticidele organofosforice (n special paration) - fosforul, produse le raticide pe baz de fosfor, fosfura de zinc - aconitina - elementele radioactiv e, etc. Un loc aparte ntre intoxicaiile criminale l ocup intoxicaiile colective ca ur mare a folosirii substanelor toxice de lupt, care fac parte din categoria substanel or iritante, caustice i vezicante pe piele i mucoase (Iperita folosit n primul rzboi mondial), a substanelor neurotoxice (Somanul, Sarinul), sau a biotoxinelor. 2.1.2 . Sinuciderile reprezint autointoxicaii acute, de cele mai multe ori cu sfrit letal. Sinuciderile au fost frecvente n toate timpurile, dar n ultimul secol statisticil e indic o cretere a procentului de otrviri fa de alte metode de sinucidere. Ele sunt mai frecvente la femei, dei cazurile letale sunt mai ntlnite la brbai. Grupul de vrst el mai afectat este cel ntre 17 i 20 de ani. Sinucigaii caut de obicei substane toxic e care produc o moarte uoar (barbiturici, tranchilizante, morfin), iar n lipsa acest ora se folosesc substane mai uor accesibile (sod caustic, acizi, pesticide). Princip alele substane utilizate n scop suicidar sunt:
12 TOXICOLOGIE GENERAL - medicamente psihotrope (hipnotice, antidepresive), asociate sau nu cu alcool gaz de eapament (monoxid de carbon) - aspirin - digitalice - pesticide (insectici de, raticide) - cianuri - stricnin - hipoclorit - solveni, etc. anxiolitice, neuroleptice,
2.1.3. Toxicomaniile sunt intoxicaii voluntare de tip cronic, determinate de cons umarea repetat a unui drog. Conform Organizaiei Mondiale a Sntii: Toxicomania reprezin o stare psihic, uneori i fizic, care rezult din interaciunea unui organism i a unui me dicament i care se caracterizeaz prin modificri de comportament i alte reacii, care c onin ntotdeauna nevoia de a lua substana n mod continuu sau periodic, pentru a resimi efectele sale psihice i uneori pentru a evita suferinele privaiunii. Etimologia cuvn tului toxicomanie provine din limba greac, de la toxicon (otrav) i manie (nebunie). Denumirea toxicomaniei se formeaz de la numele drogului plus sufixul manie (ex. co cainomanie, heroinomanie), sau de la numele drogului plus sufixul ism (ex. alcooli sm, tabagism). Clasificarea toxicomaniilor se poate face: a) dup gravitatea lor: toxicomanii majore (cu heroin, cocain, LSD) toxicomanii minore (cafeism, teism) to xicomanii de grani (tabagism) b) dup numrul drogurilor administrate monotoxicomanii, cnd se consum un singur drog politoxicomanii, cnd se consum mai multe droguri n ulti ma perioad se constat o cretere marcat a numrului politoxicomaniilor, drogaii asociind 2, 3 i chiar 7 droguri. De asemenea, este foarte frecvent asocierea dintre drogur i i alcool. Utilizatorii de droguri sunt n marea lor majoritate tineri, aproximati v 90% ntre 16 i 30 de ani, segmentul de vrst cel mai afectat fiind cel ntre 21 i 25 de ani. n funcie de vrst, se folosete cu predilecie un anumit drog. Astfel, solvenii sun n general utilizai de subieci foarte tineri, ntre 8 i 18 ani, la 14 ani se ncearc tut nul, la 16 ani consumul de alcool, iar la 18 ani consumul de canabis, cocain, her oin i halucinogene. Aproximativ 75% din utilizatori sunt biei. Toxicomaniile au, n ge neral, patru caracteristici:
1) Dependena psihic, care const n modificri de comportament i o stare mental particula soit de necesitatea psihic imperioas de a-i administra substana periodic sau continuu, pentru a obine o stare de bine sau pentru a nltura disconfortul psihic. Este carac teristica principal, care se ntlnete n toate cazurile de toxicomanie. 2) Dependena fiz ic este o stare patologic ce const n necesitatea organic de a folosi drogul, n vederea evitrii tulburrilor ce apar la ntreruperea administrrii. 3) Tolerana reprezint admini strarea unor doze crescute de drog pentru a obine efectul dorit. Toxicomanii ajun g astfel s tolereze doze care produc la persoanele normale efecte foarte grave, s au chiar moarte. Tolerana nu este o caracteristic obligatorie a unei toxicomanii, ea fiind mai pronunat la unele droguri (ex. morfin, cocain), i absent la altele (ex. h alucinogene). 4) Sindromul de abstinen apare la ntreruperea administrrii substanei, s au uneori la reducerea important a dozelor. El se caracterizeaz prin tulburri psihi ce i organice care se manifest prin simptome opuse celor produse de drogul n cauz. 2 .1.4. Dopingul const n administrarea de substane n scopul creterii randamentului fizi c, intelectual sau sportiv; aceste substane pot sau nu s produc dependen. Printre pri ncipalele clase de compui utilizai se numr hormonii i euforizantele, care pot induce n timp tulburri endocrine i neuropsihice importante. 2.1.5. Utilizarea de afrodisia ce a fost ntlnit pe parcursul ntregii istorii a umanitii, dar nu s-au obinut produse -adevr eficiente i care s nu posede efecte adverse. Afrodisiacele fac n general part e din clasa euforizantelor i a vasodilatatoarelor. 2.2 Intoxicaii accidentale n acest grup se ncadreaz intoxicaiile prin contaminarea me diului, intoxicaiile profesionale, intoxicaiile medicamentoase, intoxicaiile alimen tare, intoxicaiile casnice i intoxicaiile cu toxine animale sau vegetale. 2.2.1. In toxicaiile prin contaminarea mediului (aer, ap, alimente) pot avea caracteristicil e unor epidemii atunci cnd n mediu sunt deversate cantiti masive de substane toxice. Exemple de substane care pot produce intoxicaii prin contaminarea mediului sunt: O xizii de sulf i de azot ajung n atmosfer n urma proceselor de combustie i sunt foarte iritani pentru piele i mucoase
Tetraetilul de plumb folosit ca antidetonant n benzina pentru motoarele cu combus tie intern Particule de fluoruri provenite din prelucrarea criolitei n vederea obin erii aluminiului; pot fi responsabile de producerea maladiei numit fluoroz Hidroca rburile aromatice policiclice rezultate n urma combustiei materiei organice; au u n potenial cancerigen deosebit Pesticidele utilizate n agricultur i gospodrii pot s termine intoxicaii prin contaminarea mediului Substanele cel mai frecvent implicat e n cazurile de contaminare a mediului sunt, n ordine alfabetic, urmtoarele: cadmiul , dioxidul de carbon, mercurul, oxizii de azot i oxidanii fotochimici, oxizii de s ulf, plumbul. 2.2.2. Intoxicaiile profesionale sunt intoxicaii care survin la locu l de munc, n special n industrie i n agricultur. Uneori ele se pot produce ca urmare a unor accidente de munc i au caracter acut, dar de cele mai multe ori sunt intoxic aii cronice, insidioase, care rezult n urma absorbiei repetate a substanelor n timpul exercitrii profesiei. Substanele cu care se produce intoxicaia poart denumirea de no xe industriale i pot fi materii prime, intermediari sau produse finite. Principal ele grupe sunt: oxidul de carbon, plumbul, arsenul, mercurul, manganul, siliciul , solvenii, aminele aromatice, pesticidele. Ptrunderea lor n organism se face n spec ial prin inhalare, pe cale cutanat sau eventual prin ingestie. mbolnvirile produse poart denumirea de boli profesionale, iar nomenclatura lor deriv de la substana inc riminat (ex. saturnism, hidrargirism). Simptomatologia apare insidios, fr forme car acteristice, iar n momentul n care se instaleaz boala leziunile sunt bine constitui te, astfel nct tratamentul este dificil i nu poate evita apariia sechelelor. Preveni rea acestor boli profesionale se bazeaz pe aplicarea unor msuri de igien i de sigura n specifice, pe supravegherea medical a muncitorilor, pe folosirea de echipamente i materiale de protecie adecvate i pe respectarea concentraiilor maxime admisibile n med iul de munc. 2.2.3. Intoxicaiile medicamentoase sunt intoxicaiile care necesit cel m ai frecvent ngrijire medical de specialitate. Ele pot fi: Intoxicaii voluntare n sco p suicidar, care se ntlnesc aproape exclusiv la adult sau la adolescent Intoxicaii accidentale o La copii sau la bolnavi psihici o Prin erori produse la diferite n ivele: medic, farmacist, pacient
SUBSTANE TOXICE I TIPURI DE INTOXICAII 15 Erori ale medicului: - prescrierea unor doze de medicament care depesc dozele maxi me terapeutice - prescrierea concomitent a unor formulri care conin un principiu ac tiv comun sau substane cu aciune sinergic - prescrierea unor medicamente fr a ine cont de posibilele interaciuni medicamentoase sau de starea patologic a pacientului ca re poate modifica farmacocinetica compusului Erori ale farmacistului: - nedescif rarea corect a prescripiei - nesemnalarea dozelor maxime depite - confuzia de substa ne - eliberarea de preparate neomogene - absena consilierii pacientului cu privire la modul de administrare Erori ale pacientului: - supradozarea voluntar - autome dicaia - polipragmazia - confuzia medicamentului - confuzia cii de administrare Ac este intoxicaii pot fi acute sau cronice. n cazul expunerii cronice, absorbia repet at poate conduce la fenomene de toleran sau ineficacitate, sau la acumularea medica mentului. De aceea, cunoaterea farmacocineticii compusului are o importan deosebit n evitarea acestor intoxicaii. De asemenea, medicamentele pot induce efecte adverse , uneori grave, iar pentru acelai compus sensibilitatea poate varia considerabil de la un individ la altul. Astfel, unii pacieni pot dezvolta reacii alergice de gr avitate variabil. Mai trebuie luate n considerare riscurile care apar la subiecii c u deficiene de eliminare datorate unor afeciuni renale sau riscurile posibile la a socierea dintre unele medicamente i alimente. Importana efectelor adverse a determ inat dezvoltarea activitii de farmacovigilen, care conform OMS reprezint: orice activi tate care are drept scop obinerea de indicaii sistematice cu privire la legturile p robabile de cauzalitate ntre medicamente i reaciile adverse observate ntr-o populaie. 2.2.4. Intoxicaiile alimentare pot avea diferite cauze: intoleran la anumite alimen te, consumarea de alimente care conin n mod natural substane toxice, consumarea de alimente contaminate cu substane toxice, consumarea de alimente contaminate micro bian.
1) Intolerana la alimente se datoreaz unei sensibiliti particulare, de natur alergic, care se observ la anumii indivizi atunci cnd consum unele alimente cum ar fi crustac eele, unii peti, cpuni, etc., care sunt inofensive pentru majoritatea populaiei. Ale rgenii sunt reprezentai de proteinele alimentare. Dup primul contact cu organismul , alergenii alimentari determin producerea unor mici cantiti de imunoglobuline (IgE ), care la majoritatea indivizilor este suprimat prin expunerea repetat a mucoasei digestive. Exist ns persoane la care producerea de IgE continu, consecina fiind apar iia alergiilor alimentare. Acestea afecteaz n principal persoanele cu risc genetic crescut, care pot dezvolta i alte boli genetice. Cantitatea de IgE produs, deci in tensitatea reaciei alergice, depinde de vrsta la care a avut loc primul contact cu antigenul, de doz, de integritatea mucoasei digestive i de ali factori care nc nu au fost identificai. 2) Consumarea de alimente care conin n mod natural substane toxic e cum ar fi: - ciuperci toxice (Amanita phaloides, Amanita muscaria, etc.) - pla nte ingerate prin confuzie care conin alcaloizi toxici (Atropa belladona) sau gli cozizi cianogenetici (smburi de migdale, piersici, zarzre) - peti care n perioade de criz secret substane pentru combaterea prdtorilor - molute care acumuleaz toxine prin ingerarea de plancton toxic 3) Consumarea de alimente contaminate cu substane tox ice Substanele pot ajunge n alimente prin: a) cedarea din ambalaje - din conservel e vechi necorespunztor cositorite, care pot ceda plumb - din vasele de ceramic art izanal care sunt glazurate cu colorani pe baz de plumb, pe care l pot ceda n alimente le acide - cedarea de plastifiani sau stabilizani din materiale plastice: ex. comp uii organostanici folosii ca stabilizani pentru materialele din PVC i care pot fi ce dai n uleiuri, avnd proprieti hepatotoxice i neurotoxice; triortocresil fosfatul care a fost folosit ca plastifiant pentru hrtia de ambalaj pentru unt i care are propri eti neurotoxice. b) folosirea de aditivi alimentari, fie neautorizai, fie n cantiti ca re depesc dozele zilnice admisibile - azotaii, care sunt folosii n mezeluri pentru a le pstra culoarea, se pot reduce n anumite condiii la azotii, care n prezena aminelor secundare pot forma nitrozamine cancerigene - unii aditivi alimentari sunt alerg eni: metabisulfitul de sodiu folosit ca antioxidant poate declana crize de astm l a unele persoane;
- glutamatul de sodiu, care este folosit ca potenator de gust, este bnuit a fi res ponsabil de sindromul restaurantului chinezesc, caracterizat prin arsuri i furnictur i pe fa, gt i partea superioar a corpului. c) remanena unor compui pe produsele alimen are - pesticide: insecticidele organoclorurate, care sunt stabile, puin biodegrad abile i cumulative de-a lungul lanurilor alimentare, au fost n mare parte interzise n marea majoritate a rilor; insecticidele organofosforice sunt puin stabile, sufer o hidroliz rapid n sol i pe vegetale, riscul de contaminare a produselor vegetale fii nd redus; fungicidele organometalice sunt liposolubile, stabile i se pot fixa la nivelul SNC, avnd o toxicitate considerabil. - substane cu care sunt tratate animal ele din cresctorii: antibioticele sau estrogenii. Antibioticele sunt folosite pen tru a preveni infeciile sau pentru a crete calitatea proteinelor animale. Persiste na lor n alimente poate fi asociat cu unele riscuri: - perturbarea florei intestina le umane; datorit cantitilor reduse n care se gsesc n alimente, acest risc este redus - declanarea unor reacii alergice - inducerea rezistenei la antibiotice; riscul est e redus, datorit concentraiilor mici n care se gsesc n carne Estrogenii sunt administ rai, n special la bovine, pentru a crete cantitatea de protein animal format. Se pare c metabolismul lor nu este identic cu cel al hormonilor endogeni, putnd exista ris curi de natur diferit, motiv pentru care n Europa a fost interzis utilizarea lor. d) contaminarea cu poluani industriali i radioactivi care se pot acumula n alimentele destinate hranei omului sau animalelor. f) contaminarea alimentelor cu mucegaiu ri care produc substane toxice numite micotoxine: aflatoxina B1, un hepatocarcino gen foarte puternic, ochratoxinele care sunt nefrotoxice, patulina care este neu rotoxic i care se poate regsi n unele sucuri de mere. 4) Intoxicaiile de origine micr obian se datoreaz consumrii de alimente care devin patogene n urma contaminrii cu bac terii sau cu toxine bacteriene: a) Intoxicaiile microbiene survin n urma consumrii de alimente contaminate cu toxine bacteriene produse anterior ingerrii (ex. toxin a botulinic) b) Toxinfeciile bacteriene se produc n urma consumrii de alimente conta minate cu bacterii care se dezvolt n organismul consumatorului excretnd toxine (ex. Escherichia coli, Staphiloccocus, Salmonella).
2.2.5. Intoxicaiile casnice sunt n general intoxicaii acute sau supraacute, care ad esea evolueaz spre un sfrit letal sau care n cazul n care sunt tratate pot lsa sechele grave. n aceste intoxicaii sunt implicai cel mai frecvent copiii i persoanele n vrst. Se produc n general din neatenie, netiin sau impruden. Substanele incriminate sunt: bstanele caustice: sod caustic, acizi tari, unii putnd intra n compoziia unor produse decapante sau detartrante - produse folosite pentru dezinfecie - colorani pentru p ielrie sau esturi - spume izolante sau adezivi pe baz de uree-formol, care pot elibe ra formaldehid - pesticide, n special insecticide organofosforice (paration) sau r aticide (fosfura de zinc) - medicamente, n special la copii, care confund drajeuri le cu bomboanele - alcool metilic confundat cu alcool etilic 2.2.6. Intoxicaii cu toxine animale sau vegetale Numeroase plante, insecte, peti i reptile conin toxine (acizi organici, enzime, peptide) care inoculate la mamifere produc durere loca l i o multitudine de efecte sistemice de tip anafilactic, hemolitic, paralizant, c ardiotoxic, etc.
NOIUNI DE TOXICOCINETIC Pentru ca un compus chimic s i poat exercita efectul toxic, el trebuie s vin n contact cu sistemul biologic asupra cruia acioneaz. Efectul poate s fie local, la nivelul cii de ptrundere, sau sistemic, dup absorbia n organism. Dup ptrunderea n organism, xenob oticele urmeaz mai multe faze pn la producerea efectului toxic. Acestea sunt: faza de expunere, faza toxicocinetic i faza toxicodinamic (Fig. 3.1.). Natura i intensita tea efectelor substanei toxice vor depinde deci de concentraia acesteia la nivelul organelor-int, care la rndul su este determinat de: - doza administrat - absorbie, di tribuie, capacitatea de fixare, excreia din organism Cu studiul comportrii medicame ntelor n organism, adic al absorbiei, distribuiei, metabolizrii i excreiei, se ocup f acocinetica, care utilizeaz modele i ecuaii matematice pentru a descrie i apoi a pre vedea acest comportament. Toxicocinetica studiaz absorbia, distribuia, metabolizare a i excreia xenobioticelor n condiii n care se poate produce toxicitate sau n caz de e xpunere excesiv.
MECANISME DE TRANSPORT PRIN MEMBRANELE BIOLOGICE Organismul este alctuit din o su m de organe, esuturi, celule i organite subcelulare, fiecare din acestea fiind prot ejate de nveliuri specializate sau membrane protectoare. Pentru ca o molecul de sub stan toxic s fie absorbit, distribuit i n final excretat din organism dup ce i-a e efectul, ea trebuie s traverseze aceste membrane protectoare (Fig.3.2.). Procesul toxicocinetic implic deci o serie de etape de translocare, care cresc posibilita tea expunerii substanei exogene la o serie de molecule endogene voluminoase, cum ar fi proteinele, ce pot lega eficient aceste substane, modificndu-le funcia i ndeprtn u-le din organism. Xenobioticul poate veni n contact cu diferite pri ale organismul ui, putnd fi excretat prin rinichi, tractul respirator sau glandele salivare. De asemenea, molecula exogen poate fi biotransformat de sistemele enzimatice prezente n diferitele organe. Ea poate fi depozitat n organe de depozitare (Fig.3.3.)
20 TOXICOLOGIE GENERAL Eliberarea substantei Substanta toxica Entitati toxice Interactiunea intre Absor btie toxice din forma de disponibila pentru Distributie disponibile entitatile t oxice si administrare Metabolizare absorbtie receptori Formarea substantei Excre tie toxice in tubul digestiv 1 - Faza de expunere 2 - Faza toxicocinetica 3 -Faz a toxicodinamica Efect toxic Fig. 3.1. Parcursul unei substane toxice n organism MEDIUL EXTERN LICHID EXTRACELULAR MEMBRANA LICHID INTERSTITIAL MEMBRANA- CAPILARA PLASMA MEMBR ANA- CAPILARA Mucoasa Respiratorie Pielea LICHID INTERSTITIAL MEMBRANA CELULARA LICHID INTRACELULAR MEMBRANA SUBCELULARA L ICHID DIN INTERIORUL ORGANITELOR CELULARE Fig.3.2. Transportul xenobioticelor prin barierele membranare
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 21 Diferitele tipuri de membrane au o structur similar. Conform teoriei clasice, memb ranele sunt alctuite dintr-un strat bimolecular de fosfolipide, cu grupri polare d e fosfatidilcolin sau fosfatidiletanolamin, care predomin pe suprafaa intern i pe cea extern a membranei, i cu lanuri de acizi grai, mai mult sau mai puin perpendiculari, care umplu spaiul intern. n acest strat dublu sunt inserate proteine, care pot for ma pori hidrofili (Fig. 3.4). Acizii grai din membran nu au o structur cristalin rig id, fiind cvasi-fluizi la temperaturi fiziologice. Caracterul fluid al membranelo r este determinat n mare parte de structura i de proporia acizilor grai nesaturai. Cu ct membranele au un coninut mai mare de acizi grai nesaturai, cu att ele sunt mai fl uide i sunt mai uor strbtute de compuii chimici. Una din cele mai importante caracter istici ale membranei celulare este permeabilitatea selectiv. Astfel, ea poate fi traversat de anumite substane n funcie de anumite proprieti fizico-chimice cum ar fi: mrimea i forma moleculei, liposolubilitatea, polaritatea, similitudinea structural cu molecule endogene. EXPUNEREA LA XENOBIOTIC ABSORBTIE FORMA LIBERA FORMA LEGATA DISTRIBUTIE LOCURI DE DEPOZITARE LOCURI DE BIOTRANSFORMARE EXCRETIE XENOBIOTICUL SI METABOLITII SAI Fig.3.3. Cile pe care le poate urma un xenobiotic n organism
22 TOXICOLOGIE GENERAL Fig.3.4. Structura tridimensional a membranei celulare. Proteinele (a) sunt inser ate n stratul bimolecular de fosfolipide (b) (Timbrell J.A., 1991) Principalele mecanisme prin care xenobioticele pot traversa membranele biologice sunt: difuzia pasiv, filtrarea prin porii membranei, transportul specializat i en docitoza. 1. Difuzia pasiv reprezint probabil cel mai important mecanism de transp ort al xenobioticelor. Const n trecerea moleculei, fr consum de energie, dintr-un co mpartiment cu concentraie mare spre un compartiment cu concentraie mic, deci n sensu l gradientului de concentraie. Nu prezint specificitate de substrat i se bazeaz pe d ifuzia substanei prin stratul lipidic bimolecular. Pentru ca molecula s fie transp ortat prin difuzie pasiv, trebuie s fie ndeplinite anumite condiii: - existena unui gr adient de concentraie - liposolubilitatea xenobioticului - compusul nu trebuie s f ie ionizat Compuii ionizai nu vor difuza uor prin membran deoarece pe de o parte ei au o solubilitate redus n lipide, aceasta fiind esenial pentru transport, iar pe de alt parte pot determina interaciuni ionice ntre xenobiotice, lipidele i proteinele d in membran.
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 23
Aceste condiii au fost ncorporate n teoria pH-partiiei, conform creia doar compuii lip ofili neionizai vor fi absorbii prin difuzie pasiv n situaia existenei unui gradient d e concentraie. Multe substane chimice de interes toxicologic sunt acizi sau baze s labe, care n soluie sunt ionizate. Forma ionizat are o liposolubilitate redus, deci nu va trece uor prin stratul lipidic al membranei. Forma neionizat are un anumit g rad de liposolubilitate, fiind astfel difuzibil. Viteza de difuzie prin membran es te definit de Legea lui Fick: Viteza de transport = [KS(C2 C1)] / g Unde: K este coeficientul de difuzie, S este suprafaa membranei, C2 este concentraia compusului la suprafaa extern a membranei, C1 este concentraia la suprafaa intern a membranei, iar g reprezint grosimea membranei. Coeficientul de difuzie prin membran K depinde de proprietile fizicochimice ale compusului, cum ar fi liposolubilitatea, mrimea i forma moleculei. Parametrul care apreciaz liposolubilitatea compuilor este coefici entul de partiie lipide / ap, care este cu att mai mare cu ct compusul este mai lipo fil. Pe de alt parte, raportul molar ntre moleculele ionizate i cele neionizate ale unui acid sau ale unei baze organice n soluie depinde de constanta de ionizare, c are furnizeaz o msur a triei acestora. pH-ul la care un acid sau o baz organic slab es e ionizat 50% poart numele de pKa sau respectiv pKb. Gradul de ionizare al unui c ompus depinde de pKa-ul su i de pH-ul soluiei. Relaia ntre pKa i pH este descris de ec aiile Henderson-Hasselbach: Pentru acizi: Pentru baze: pKa pH = log ([forma neion izat] / [forma ionizat]) pKa pH = log ([forma ionizat] / [forma neionizat]) n concluzie, difuzia acizilor slabi prin membran va fi favorizat de existena unui me diu acid, iar cea a bazelor slabe de un mediu bazic (Fig.3.5.).
24 TOXICOLOGIE GENERAL pH scazut .......... .......... .......... .......... .......... .......... .... ...... .......... .......... .......... .......... .......... .......... ....... ... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .......... .. ........ pH ridicat ACIZI BAZE Fig. 3.5. Transportul acizilor i bazelor slabe n funcie de pH
2. Filtrarea se bazeaz pe difuzia substanei dizolvate n ap prin porii membranei, n se nsul gradientului de concentraie. Fluxul apei prin aceti pori este determinat de f orele hidrostatice i / sau osmotice. Procesul este limitat de mrimea porilor membra nei. Astfel, porii majoritii celulelor sunt n jur de 4 nm, permind trecerea doar a co mpuilor hidrofili, cu mas molecular de 100-200 daltoni, n timp ce porii membranei gl omerulare sunt relativ mari, n jur de 70 nm, permind trecerea moleculelor cu mas mai mic dect a albuminei (60 000 daltoni). Deoarece multe substane toxice au molecule relativ mari, acest mecanism este mai important n eliminarea xenobioticelor, mai ales pe cale renal. 3. Transportul specializat Exist numeroi compui al cror transport prin membrane nu poate fi explicat doar prin difuzie pasiv sau filtrare, deoarec e ei sunt fie prea mari pentru a trece prin pori fie sunt prea puin liposolubili pentru a difuza prin stratul lipidic bimolecular. Totui, ei sunt adesea transport ai rapid prin membrane, chiar mpotriva gradientului de concentraie. Acest fenomen s e explic prin existena unor sisteme specializate de transportori. Aceste sisteme s unt responsabile de transportul prin membrana celular a unor substane nutritive cu m ar fi glucidele, aminoacizii, acizii nucleici, dar i a unor compui exogeni. Tran sportorul este de obicei o protein, care leag substana toxic, o trece de o parte pe cealalt a membranei i apoi o elibereaz, relundu-i poziia iniial i devenind disponibi tru un nou ciclu de transport (Fig. 3.6.). Aceste mecanisme sunt importante atun ci cnd xenobioticul prezint similitudini structurale sau chimice cu compui endogeni care utilizeaz mecanismele de transport specializat n cursul proceselor fiziologi ce normale. Se cunosc mai multe tipuri de transport specializat:
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 25 3.1. Transportul activ, care prezint urmtoarele caracteristici: - a) compusul se d eplaseaz mpotriva gradientului electrochimic sau de concentraie - b) se realizeaz cu consum de energie metabolic - c) poate fi inhibat de substanele toxice care inter fereaz n metabolismul celular - d) sistemul de transport este saturat la concentrai i mari de substrat - e) sistemul de transport este selectiv pentru anumite carac teristici structurale ale moleculei transportate, deci poate s apar competiia ntre d iferii compui pentru legarea de transportor Sistemele de transport sunt cuplate cu enzime ce produc energie (ex. ATPaze) i deoarece pot fi saturate, procesul se de sfoar conform unei cinetici de tip Michaelis-Menton. Prin acest mecanism poate fi t ransportat medicamentul anticanceros 5fluorouracil de ctre sistemul de transport al pirimidinelor, plumbul poate fi absorbit n intestin prin sistemul de transport al calciului, iar ierbicidul paraquat este preluat n plmni prin sistemul de transp ort al poliaminelor. Transportul activ este foarte important mai ales pentru eli minarea xenobioticelor din organism. Sistemul nervos central are dou sisteme de t ransport la nivelul plexurilor coroide, care elimin compuii din lichidul cefalorah idian, un sistem pentru acizi i unul pentru bazele organice, rinichiul are dou sis teme de transport, iar ficatul cel puin patru. 3.2. Difuzia facilitat are similitu dini cu transportul activ: - a) necesit o molecul proteic transportoare (enzime num ite permeaze) - b) procesul poate fi saturat sau inhibat competitiv dar n acelai t imp este diferit, deoarece: - c) transportul se realizeaz n sensul gradientului ele ctrochimic sau de concentraie - d) procesul nu necesit energie metabolic i nu este i nhibat de substanele care interfereaz n metabolismul celular 3.3. Transportul prin intermediul transportorilor ABC Transportorii ABC fac parte din superfamilia pro teinelor ABC (ATP Binding Casette) care reprezint un grup ubicuitar i evolutiv de proteine cu diferite funcii, majoritatea legate de transportul prin membranele bi ologice, n special din celul spre exteriorul acesteia. Ele sunt alctuite dintr-un d omeniu transmembranar format de obicei din ase helixuri transmembranare i dintr-un domeniu de legare a nucleotidelor. Cei mai cunoscui reprezentani ai acestei clase sunt P-glicoproteina i proteina MRP (multidrug resistance-associated protein) (F ig 3.7).
26 TOXICOLOGIE GENERAL Membrana Transportor Energie Substanta toxica Fig.3.6. Reprezentarea schematic a transportului activ
Trstura cea mai particular a acestei categorii de transportori este reprezentat de g ama foarte larg de substraturi ce pot fi transportate, corelaia cu structura molec ulelor fiind dificil de realizat. Cercetri recente au identificat n molecula subst raturilor P-glicoproteinei cel puin dou grupri acceptoare de legturi de hidrogen cu o poziionare spaial precis, dar aceast cerin nu pare a fi foarte restrictiv. Compuii sportai nu pot fi foarte hidrofili sau foarte hidrofobi, iar n ceea ce privete mrime a moleculei exist limite inferioare i superioare, fiind excluse moleculele foarte mici sau foarte mari. S-a demonstrat c P-glicoproteina este implicat n transportul morfinei din creier napoi n snge prin bariera hemato-encefalic i c poate fi indus de a ministrarea cronic a acestei substane, ceea ce poate explica parial mecanismul de i nstalare a toleranei la morfin. Proteina MRP poate i ea transporta substraturi cu s tructuri foarte variate, dar n special hidrofile, iar interesul su toxicologic deo sebit const n faptul c poate transporta din celul nu numai molecule amfotere, dar i m etabolii conjugai cu glutation sau acid glucuronic, participnd astfel la aa numita f az a III a de detoxifiere. Proteina MRP este implicat i n instalarea rezistenei la te rapia anticanceroas, prin excluderea din celula int a moleculelor de medicament.
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 27 Fig. 3.7. Modelele structurale ale P-glicoproteinei (A) i Proteinei MRP (B) 4. Endocitoza Acest proces const n invaginarea membranei celulare pentru a ngloba p articule solide (fagocitoza) sau particule lichide (pinocitoza). Se formeaz o vez icul care poate fuziona cu un lizozom primar, transformndu-se n lizozom secundar n c are enzimele pot digera macromolecula. Uneori, o poriune a membranei plasmatice c are prezint receptori specifici leag macromolecula i apoi se invagineaz. Procesul ne cesit energie metabolic i poate fi indus de prezena anumitor molecule, cum ar fi ion ii din mediul nconjurtor. Acest sistem de transport este important la nivelul alve olelor pulmonare, unde particulele insolubile de dioxid de uraniu sau azbest pot fi absorbite prin fagocitoz, sau la nivelul intestinului, pentru absorbia molecul elor mari. Este de asemenea important pentru eliminarea din snge a unor substane p rin intermediul sistemului reticulo-endotelial din splin i ficat. Din punct de ved ere toxicologic, cele mai importante mecanisme de transport prin membrane sunt d ifuzia pasiv i transportul activ.
ABSORBIA SUBSTANELOR TOXICE Absorbia reprezint procesul prin care xenobioticele ptrun d n organism, respectiv trec din mediul extern n lichidele biologice (snge, limf, li chid cefalorahidian). O substan toxic poate ptrunde n organism pe diferite ci, care po t fi clasificate n: - a) ci naturale: o digestiv o respiratorie o cutanat o prin muc oase sau seroase - b) ci artificiale (parenterale) o intraperitoneal (i.p.) o intr avenoas (i.v.) o subcutan (s.c.) o intramuscular (i.m.) Cile principale de absorbie p entru substanele toxice sunt calea digestiv, calea respiratorie i calea cutanat. Cile parenterale se folosesc de obicei pentru administrarea substanelor medicamentoas e i sunt utilizate n experimentele toxicologice. Calea de ptrundere poate s influenez e: - efectul toxic final al unui compus; astfel, pH-ul acid stomacal poate deter mina hidroliza unor substane, iar bacteriile intestinale pot modifica natura unor compui prin metabolizare, afectnd astfel efectul toxic indus - distribuia ulterioa r a substanelor; astfel, absorbia cutanat este lent i va conduce la o distribuie inii circulaia periferic, n timp ce absorbia pulmonar este rapid, organele majore fiind exp use foarte repede. - metabolismul prin primul pasaj hepatic; substanele care sunt absorbite din tractul digestiv trec nti prin ficat nainte de a ajunge n inim i a fi d istribuite n ntreg organismul, suferind o prim metabolizare sub aciunea enzimelor he patice. Substanele administrate pe alte ci, inclusiv cele absorbite prin mucoasa n azal, bucal sau din rect, nu sufer acest prim pasaj i ating concentraii mai mari n org anism. 1. Absorbia digestiv Este o cale de ptrundere major pentru substanele toxice, fie pri n intermediul alimentelor contaminate, fie ca medicamente sau substane otrvitoare
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 29 ingerate accidental sau intenionat. Majoritatea crimelor i sinuciderilor se produc ca urmare a ptrunderii agentului toxic pe cale oral. Tractul gastrointestinal poa te fi privit ca un tub care strbate organismul. Dei el se gsete n organism, coninutul su poate fi considerat ca fiind n afara organismului. De aceea, substanele toxice d in tractul gastrointestinal nu produc afectare sistemic dect dup absorbie, cu excepia compuilor iritani sau caustici. Absorbia se poate face de-a lungul ntregului tub di gestiv, n mod difereniat, dependent de: - structura mucoasei digestive - pH-ul de la nivelul segmentului digestiv respectiv Absorbia se face prin difuzie pasiv, tra nsport activ, endocitoz sau transport paracelular, adic prin jonciunile intercelula re. Celulele mucoasei intestinale conin i P-glicoproteina, care a fost implicat n se creia intestinal a unor medicamente ca: ciclosporina, digoxinul, unele fluorochino lone, ranitidina, citostatice, beta blocante. Moleculele absorbite sunt transfer ate n celulele endoteliale, spre capilare i ficat, sau napoi spre lumenul intestina l (secreie). 1.1. Absorbia la nivelul cavitii bucale este o cale minor de absorbie a s ubstanelor toxice deoarece timpul de contact cu mucoasa bucal este foarte scurt. P ot fi absorbite substane cum ar fi: alcoolii, aldehidele, cetonele, cianurile, ni troglicerina, hormonii estrogeni, nicotina, cocaina. Absorbia la nivelul esofagul ui este foarte redus, datorit timpului scurt de contact, dar substanele toxice caus tice pot leza grav mucoasa esofagian. 1.2. 1.3. Absorbia la nivelul stomacului depinde de: - Coeficientul de partiie al subst anei: substanele liposolubile sunt mai uor absorbite prin difuzie pasiv, care reprez int procesul de absorbie cel mai important din punct de vedere cantitativ, dar n ac elai timp, un anumit grad de hidrosolubilitate, care favorizeaz dizolvarea n coninut ul apos al stomacului i deci un contact intim cu mucoasa, crete gradul de absorbie; cel mai bine se vor absorbi substanele cu un coeficient de absorbie apropiat de 1 . - Prezena formei neionizate, absorbabile prin difuzie pasiv. Absorbia va fi deci determinat de pH-ul mediului i de pKa-ul substanei toxice. Deoarece pH-ul secreiei g astrice este acid, cuprins ntre 1,2 i 3,5, n funcie de starea de plenitudine a stoma cului (1,2-1,8 a jeun i 3-3,5 dup mas), la acest nivel se vor absorbi acizii slabi (pKa > 2,5), care se gsesc n forma neionizat. Bazele slabe care sunt ionizate sau p arial ionizate (pKa < 2,5) sunt neabsorbabile sau greu absorbabile. Aceste difere ne sunt amplificate de
faptul c la pH-ul sngelui circulant de 7,4 acizii slabi se gsesc sub form ionizat i vo r fi preluai de fluxul sanguin, n timp ce bazele slabe sunt neionizate i vor avea t endina de a difuza napoi n stomac. 1.4. Absorbia la nivelul intestinului subire inter eseaz majoritatea compuilor care ptrund pe cale oral. - Bazele slabe, care la pH-ul mai alcalin (pH 6) al sucului intestinal se gsesc sub form neionizat, vor fi rapid absorbite, dei pH-ul 7,4 al plasmei nu favorizeaz ndeprtarea lor, fiind posibil rentoa rcerea n intestin. - Acizii slabi, care se gsesc sub form ionizat, vor fi totui absor bii datorit: o Suprafeei mari a intestinului subire i timpului lung de sejur n acest s egment al tractului digestiv o Ionizrii moleculei la pH-ul 7,4 al sngelui, care fa vorizeaz ndeprtarea de la locul absorbiei i meninerea gradientului de concentraie de-a lungul membranei intestinale (Fig.3.8.). o Existenei unui microstrat acid n vecinta tea mucoasei intestinale, cu grosime de 20 m i al crui pH este cu 0,5 uniti mai mic d ect cel din lumenul intestinal; aciditatea acestui microstrat este mai pronunat n du oden fa de poriunea distal a intestinului subire. Plasma pH 7,4 NH2 NH3 + COO Stomac pH 2 COOH NH3 + NH2 Intestin pH 8-9 COOH Plasma pH 7,4 COOH COO COO NH2 NH3 + Fig. 3.8. Absorbia moleculelor ionizate la nivelul stomacului i intestinului
Absorbia substanelor toxice din intestin este favorizat de (Fig.3.9): Grosimea redu s a mucoasei intestinale unistratificate Suprafaa considerabil de contact oferit de prezena vilozitilor i a microvilozitilor Vascularizaia bogat la acest nivel Timpu de contact dintre mucoas i substan pH-ul apropiat de cel fiziologic Coninutul de sub tane emulgatoare. Aceste substane emulgatoare sunt reprezentate de srurile biliare, sruri de sodiu i potasiu ale acizilor biliari conjugai cu glicin i taurin. Ele au un rol important n absorbie, mbuntind viteza de dizolvare i solubilitatea n ap a substa insolubile. Ali factori care influeneaz absorbia sunt: mrimea particulelor, prezena un or solveni i emulgatori, prezena microorganismelor, legarea de componente ale coninu tului gastric, viteza de golire a stomacului, temperatura coninutului stomacal, m otilitatea intestinal, efectul alimentelor, secreia gastrointestinal. Fig. 3.9. Tractul intestinal la om (a: ficatul; b: stomacul; c: duodenul; d: ile onul; e: colonul; f: seciune longitudinal prin ileon; g: vilozitate; k: detaliu al unei viloziti; o: detaliu al celulelor epiteliale cu microviloziti (Timbrell J.A, 1 991)
Un aspect important al absorbiei gastrointestinale este reprezentat de circuitul enterohepatic. Dup secreia prin bil a metaboliilor conjugai hidrosolubili, acetia pot fi hidrolizai n intestin de microflora intestinal sau de alte condiii locale, elibern d compusul ntr-o form mai puin polar, care poate fi reabsorbit i ajunge din nou n fica prin vena port (Fig.3.10). Acest proces se poate repeta de mai multe ori i crete t impul de njumtire biologic, fcnd posibil apariia unor efecte adverse la nivel hepati alt ciclu este circuitul buco-enteric, n care substanele toxice absorbite n intest in sunt transportate de snge ajungnd la nivelul glandelor salivare, fiind apoi exc retate n cavitatea bucal. Un exemplu de substan toxic ce poate intra n acest circuit e ste mercurul. Fig. 3.10. Diagrama circulaiei enterohepatice (Niesink R.J.M., et al, 1996) 1.5. Absorbia la nivelul intestinului gros Capacitatea de absorbie a intestinului gros este mult mai redus fa de cea a intestinului subire, iar aceast cale de ptrundere este mai puin important pentru substanele toxice. Absorbia n acest caz depinde de : - a) locul de administrare, absorbia fiind mai rapid i mai eficient atunci cnd substa na este aplicat n apropierea anusului, zon irigat de venele hemoroidale inferioare, c are evit pasajul hepatic; - b) vrst, procesul descrescnd treptat o dat cu naintarea n st.
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 33 n concluzie, absorbia gastrointestinal se realizeaz preponderent la nivelul intestin ului subire, fapt corelat pozitiv cu suprafaa disponibil pentru absorbie a acestui s egment digestiv (Tabel III.1). Tabel III.1. Mrimea suprafeei de absorbie pentru diferitele segmente ale tractului digestiv Cavitatea bucal Stomac Intestinul subire Intestinul gros Rect 0,02 0,1-0, 2 100 0,5-1,0 0,04-0,07
2. Absorbia pe cale respiratorie Este o cale de absorbie important pentru ptrunderea substanelor toxice care se gsesc n aerul din mediul industrial sau comunal sub for m de gaze, vapori ai lichidelor volatile sau particule fine, lichide sau solide. Sistemul respirator este prevzut cu unele mecanisme de protecie mpotriva substanelor toxice, n special a celor sub form de particule. Totui, el este vulnerabil din mai multe motive: - Schimbul de gaze la nivelul alveolelor capilare se produce la o distan foarte mic (1-2 m) de sistemul circulator, ceea ce permite nu numai schimbul de oxigen i dioxid de carbon, ci i schimbul de substane toxice gazoase. - Pereii al veolari sunt umectai de un film apos subire, care faciliteaz absorbia iniial a substan lor toxice din aerul alveolar. Totui, n unele cazuri, componenta fosfolipidic de la suprafaa stratului monomolecular interacionez cu compuii cu liposolubilitate mare i le ntrzie absorbia. - Suprafaa alveolelor pulmonare este foarte mare (ntre 50 i 100 de m2), de aproximativ 50 de ori mai mare dect suprafaa pielii (Fig. 3.11.).
34 TOXICOLOGIE GENERAL Fig. 3.11. Structura sistemului respirator (a: traheea; b: bronhiol; c: sac alveo lar cu vascularizaia aferent; d: aranjarea vaselor de snge n jurul alveolelor; e: ar anjarea celulelor i a spaiilor de aer n alveole; f: structura celular a alveolei; g: celul endotelial a vasului capilar; h: eritrocite; i: celul epitelial a sacului alv eolar. (Timbrell J.A., 1991)
Procesul respiraiei implic trecerea aerului prin mai multe segmente intercorelate care includ: nasul, gura, faringele, traheea, bronhiile i apoi cile respiratorii i nferioare i alveolele pulmonare. Cantitatea de aer reinut n plmn este cunoscut drept v lumul rezidual. Viteza de ptrundere a substanelor toxice sub form de vapori este co ntrolat de viteza de ventilaie alveolar, compusul fiind prezent n alveole de manier t emporar, de aproximativ 20 de ori / minut. n cazul inhalrii gazelor, moleculele ace stora difuzeaz din spaiul alveolar n snge, n care se dizolv. Cu excepia unor gaze cu a initate special pentru anumite structuri ale organismului (ex. legarea monoxidulu i de carbon de hemoglobin), captarea unui gaz de un esut se realizeaz de obicei pri ntr-un simplu proces fizic de dizolvare. Dizolvarea moleculelor de gaz n snge are loc pn la stabilirea unui echilibru ntre moleculele de gaz din snge i cele din spaiul alveolar, echilibru la care raportul concentraiilor n cele dou faze este constant i poart denumirea de coeficient de partiie snge-gaz, fiind caracteristic pentru fieca re substan. Viteza de absorbia a gazelor la nivel pulmonar va depinde deci de valoa rea acestui coeficient:
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 35 - pentru gazele cu solubilitate redus, viteza de absorbie depinde n principal de fl uxul sanguin n plmni - pentru gazele cu solubilitate mare, viteza de absorbie depind e n principal de ventilaie (frecvena respiratorie). n cazul particulelor solide, abs orbia depinde n principal de mrimea acestora (Fig. 3.12). Nas Gura Faringe 5 - 30m Trahee Bronhii Bronhiole 1 - 5m Alveole 1 m Fig. 3.12. Segmentele la nivelul crora se produce absorbia n tractul respirator
Particulele cu dimensiuni mai mari de 5 m sunt de obicei depozitate n regiunea nas o-faringelui. Particulele ntre 2 i 5 m sunt depozitate n principal n zona traheobronic de unde sunt eliminate prin micarea retrograd a stratului de mucus din poriunea ci liat a tractului respirator. Tusea i strnutul favorizeaz deplasarea mucusului i a par ticulelor spre cavitatea bucal, de unde particulele pot fi eventual nghiite i absorb ite n tractul gastrointestinal. Particulele de 1 m sau mai mici ptrund n sacii alveo lari. Ele pot fi absorbite n circulaia general sau pot fi fagocitate de macrofagele alveolare i ajung n limf, unde substanele toxice pot fi depozitate perioade lungi d e timp. ndeprtarea particulelor din plmni se realizeaz n mare msur prin dizolvare i port vascular. Unele particule pot ns rmne n alveole un timp nedefinit. Aceasta are l oc atunci cnd celulele alveolare prolifereaz n loc s se descuameze i nglobeaz particul de praf, care n asociere cu dezvoltarea unei reele de fibre de reticulin conduc la formarea unei
plci sau a unui nodul. De exemplu, fibrele de azbest sunt fagocitate, rmn n plmn i pot cauza fibroz i chiar tumori pulmonare.
3. Absorbia cutanat Pielea este un esut multistratificat complex, care constituie o barier fiziologic relativ eficient mpotriva ptrunderii xenobioticelor. Ea este relat iv impermeabil fa de majoritatea ionilor i fa de soluiile apoase, dar este permeabil tru multe substane toxice n stare de agregare solid, lichid sau gazoas. Pielea este a lctuit din trei straturi: epiderm, derm i hipoderm, n acesta din urm gsindu-se aparatu pilosebaceu i glandele sudoripare (Fig.3.13). Fig. 3.13. Structura pielii la mamifere (Niesink R.J.M., et al, 1996)
Absorbia substanelor toxice se poate face prin: foliculii piloi, sau celulele gland elor sebacee i sudoripare; este o cale minor, deoarece suprafaa lor raportat la sup rafaa total a pielii este doar de 0,1-1%. Difuzie prin celulele epidermei care con stituie poriunea majoritar a suprafeei pielii. Epiderma este un esut de grosime dife rit (ntre 0,1 i 0,8 mm), alctuit din mai multe straturi. Stratul extern, care reprez int bariera principal n calea ptrunderii substanelor exogene, este stratul cornos, ca re este constituit din 8-16 straturi de celule aplatizate, cheratinizate. Aceste celule moarte, cheratinizate, sunt foarte hidrofile, proprietate care menine pie lea moale i supl. Pielea este acoperit de un ulei natural, sebumul, care confer epid ermei capacitatea de a mpiedica ptrunderea apei. Stratul cornos uman prezint difere ne fizico-chimice i structurale de la o regiune a organismului la alta, care influ eneaz gradul de absorbie; de exemplu, substanele toxice se absorb uor prin scrot, cap , gt, axil, mai puin prin peretele abdominal i foarte greu n regiunea plantar sau palm ar. Prima etap a absorbiei prin piele este difuzia xenobioticelor prin epiderm, care este o etap limitant de vitez datorit prezenei stratului cornos: - substanele polare difuzeaz prin suprafaa extern a filamentelor proteice ale stratului cornos hidratat - moleculele nepolare se dizolv i difuzeaz prin matricea lipidic dintre filamentele proteice, viteza de difuzie fiind direct proporional cu liposolubilitatea i invers proporional cu masa molecular; totui, substanele foarte hidrofile sau foarte lipofil e nu pot strbate stratul cornos. A doua etap a absorbiei const n difuzia substanei to ice prin derm, care reprezint un mediu de difuzie poros, neselectiv i apos. Din de rm, compuii sunt preluai n circulaia sistemic prin numeroasele capilare venoase i limf atice care l irig. Absorbia cutanat poate fi influenat de: - proprietile fizico-chimi ale substanei, n special gradul de ionizare, mrimea moleculei, solubilitatea n ap i li pide - pH-ul pielii - temperatura ambiant - masajul local - aplicarea de surfacta ni i spunuri - solventul n care este condiionat substana Prin tegumente vor ptrunde: ubstane gazoase i volatile: H2S, CO, CO2, HCN - compui organici lipofili: hidrocarb uri alifatice i aromatice, alcooli, solveni clorurai, nitro- i aminoderivai aromatici , fenoli, insecticide organofosforice, alcaloizi lichizi (nicotina)
38 TOXICOLOGIE GENERAL - unele substane minerale (Hg, Pb, Bi, ioduri alcaline), direct sau dup reacie cu a cizii grai din sebum.
4. Absorbia pe cale parenteral Aceast cale de administrare se ntlnete de obicei n into icaiile acute medicamentoase, n tentativele de sinucidere i n cazurile de supradozar e la toxicomani. Viteza de absorbie depinde de modul de administrare, fiind cea m ai mare n cazul administrrii intravenoase, cnd substana toxic este introdus direct n c rculaia sanguin, eliminndu-se procesul de absorbie. Calea intraperitoneal este utiliz at n experimentele toxicologice, atunci cnd se urmrete asigurarea unei biodisponibili ti ct mai apropiat de 100% a unei substane insolubile. Absorbia xenobioticelor este ra pid, datorit vascularizaiei bogate i a suprafeei mari a cavitii peritoneale. Compuii t absorbii iniial n circulaia portal i deci vor trece prin ficat nainte de a ajunge la organe. Cile subcutanat i intramuscular se caracterizeaz prin viteze de absorbie mai r eduse, dar xenobioticul ajunge direct n circulaia general. Viteza de absorbie poate fi influenat de modificarea circulaiei sanguine n zona respectiv, de exemplu prin aso cierea unui vasoconstrictor cum ar fi adrenalina, care reduce viteza de resorbie i prelungete aciunea substanei toxice. DISTRIBUIA SUBSTANELOR TOXICE Distribuia este procesul de transfer al substanei chim ice din circulaia general n esuturile organismului. Procesul poate fi caracterizat a tt sub aspectul vitezei ct i al extinderii, parametrii farmacocinetici corespunztori fiind constanta vitezei de distribuie (a, k12, k21) i volumul aparent de distribuie (Vd). Distribuia are loc de obicei rapid. Viteza de distribuie este determinat ntro prim faz de circulaia sanguin i de viteza de difuzie din capilare n celulele unui anum it organ sau esut. Distribuia final depinde n mare msur de afinitatea xenobioticului p entru diferite esuturi. Ptrunderea substanei toxice n celule se face prin difuzie pa siv sau transport activ. Moleculele mici hidrosolubile i ionii difuzeaz prin porii membranei celulare, n timp ce moleculele liposolubile difuzeaz prin membran. Molecu lele foarte polare i ionii de dimensiuni medii sau mari nu pot ptrunde dect prin me canisme specializate de transport. Lichidele organismului sunt divizate n trei co mpartimente distincte: apa plasmatic, apa interstiial i apa intracelular. Apa extrace lular este constituit
din apa plasmatic i apa interstiial. La om, plasma reprezint aproximativ 4% din greut atea corporal, dar 53% din volumul sanguin total, lichidul interstiial constituie 13% din greutatea corporal, iar lichidul intracelular 41%. Concentraia substanei to xice n snge dup expunere depinde de volumul aparent de distribuie. Astfel, dac substa na este distribuit doar n plasm, n compartimentul vascular va fi atins o concentraie m re. Dac ns aceeai cantitate de xenobiotic este distribuit n apa interstiial i intrac r, concentraia n compartimentul vascular va fi mult mai mic. Distribuia substanelor to xice este ns complex i nu poate fi apreciat doar prin distribuia n unul din compartime tele apoase ale organismului. Legarea de i/sau dizolvarea n depozite de stocare cu m ar fi esutul adipos, ficatul sau oasele, sunt factori importani n determinarea di stribuiei unui xenobiotic. Substanele toxice sunt transportate n organism de ctre sng e fie dizolvate n apa plasmatic, fie legate de un transportor. Acest transportor p oate fi reprezentat de: - proteinele plasmatice, n special albuminele, care leag i oni i molecule n general mici - lipoproteinele, care leag moleculele liposolubile, probabil prin dizolvare n componenta lipidic - eritrocitele, care pot fixa unii co mpui cum ar fi plumbul - leucocitele, care pot fagocita particulele insolubile Di stribuia xenobioticelor n organism depinde de: legarea de proteinele plasmatice af initatea pentru proteinele tisulare debitul sanguin n organ existena unor bariere de protecie 1. Legarea de proteinele plasmatice se face n principal de albumin i event ual de alfa-1-glicoproteina acid sau de globulin. Aceast legare face ca substana tox ic s nu fie disponibil imediat pentru a fi transferat n spaiul extravascular, deci pro teinele plasmatice exercit att un rol de transport ct i de stocare. Legturile formate sunt ns reversibile (legturi ionice, de hidrogen, fore van der Waals, interaciuni hi drofobe) i substana toxic poate fi eliberat pentru a traversa peretele vascular. Dis ocierea se poate produce atunci cnd afinitatea xenobioticului pentru o alt molecul sau component celular este mai mare dect cea pentru proteinele plasmatice, sau cnd scade concentraia compusului nelegat. Astfel, de cte ori concentraia dintr-un comp artiment, snge sau esut, scade, are loc o redistribuie. ntre diferitele substane se p oate produce o competiie pentru legarea de proteinele plasmatice, fapt care este la originea a numeroase interaciuni medicamentoase, unele cu potenial toxic consid erabil (de exemplu interaciunea sulfamidelor
antibacteriene cu sulfamidele antidiabetice, care poate provoca apariia comei hip oglicemice). 2. Afinitatea pentru proteinele tisulare conduce la fixarea prefere nial a substanelor toxice n anumite organe. 3. Debitul sanguin n organ reprezint unul din principalii factori care determin distribuia diferitelor xenobiotice n organe. Astfel, organele puternic vascularizate (ficat, rinichi) pot concentra substanele toxice preferenial fa de alte organe. Creierul, care reprezint doar 2% din greutate a corporal, primete 16% din fluxul cardiac i poate deci reine cantiti mai mari de xeno biotice. 4. Barierele organismului Bariera hemato-encefalic protejeaz sistemul nervo s central de fluctuaiile compoziiei sngelui, realiznd o separare aproape complet a ac estuia de restul organismului. Bariera hemato-encefalic (BHE) este localizat la ni velul peretelui capilar, unde celulele endoteliale sunt strns unite, lsnd ntre ele u n spaiu extrem de redus, care nu permite trecerea substanelor toxice legate de pro teinele sanguine spre creier. Se estimeaz c suprafaa capilarelor cerebrale este de aproape 20 m2 pentru o greutate medie a creierului uman de 1300 g. Comparativ cu celulele endoteliale ale altor capilare, capilarele cerebrale au un numr redus d e vacuole i un procent crescut al fraciunii mitocondriale, ceea ce face ca princip alul sediu anatomic i funcional al BHE s fie endoteliul cerebral. Datorit existenei b arierei hemato-encefalice, schimbul direct ntre compartimentul vascular i parenchi mul cerebral este semnificativ redus. Pot ptrunde gazele i moleculele lipofile de dimensiuni mici, dar pentru majoritatea celorlalte substane transportul se face p rin intermediul unor transportori sau a veziculelor. Sunt patru motive pentru ca re substanele toxice nu pot ptrunde uor n creier: - celulele endoteliului capilar di n SNC sunt strns lipite, lsnd foarte puini pori ntre ele, astfel nct mpiedic trecere eculelor hidrosolubile de dimensiuni mici pn la medii - conin un transportor depend ent de ATP, proteina MDR, care transport unele substane napoi n snge - capilarele din SNC sunt nconjurate n mare msur de astrocite, care trebuie s fie traversate de compui i liposolubili - concentraia n proteine a lichidului interstiial din SNC este mai s czut comparativ cu alte lichide biologice, ceea ce limiteaz deplasarea compuilor ins olubili n ap prin transport paracelular.
Ptrunderea substanelor toxice n creier este deci condiionat de liposolubilitatea aces tora i de prezena formei neionizate. Unele xenobiotice ptrund n creier printr-un pro ces ce implic transportori. De exemplu, metilmercurul se combin cu cisteina, formnd o structur asemntoare cu metionina, care este acceptat de transportorul aminoacizil or din celulele endoteliului capilar. Bariera placentar este un organ intermediar ntre ft i peretele uterului, prin care se realizeaz transferul de gaze, substane nut ritive i produi de degradare ntre sngele mamei i al copilului. Ea este alctuit din mai multe straturi de celule, care variaz de la o specie la alta. Placenta are i un oa recare rol de protejare a ftului fa de ptrunderea substanelor toxice datorit capaciti ale de a biotransforma unele xenobiotice, dar poate fi strbtut prin difuzie pasiv de substanele liposolubile. Concentraia compusului atinge de obicei 75-100% din conc entraia n sngele matern n 5 minute de la administrare, de aceea protecia oferit ftului de aceast barier este redus.
STOCAREA SUBSTANELOR TOXICE Sngele distribuie substanele toxice n toate esuturile org anismului care, n funcie de afinitatea lor, pot reine cantiti mai mari sau mai mici d e substan. Aceast reinere poate fi de dou tipuri: - a) n esuturi care reprezint locul aciune al substanei toxice, caz n care se folosete termenul de localizare. Un astfe l de exemplu este monoxidul de carbon, care are afinitate foarte mare pentru hem oglobin, sau paraquatul, care se acumuleaz n plmn. - b) n alte esuturi dect cele la n lul crora i manifest aciunea toxic, cnd se prefer termenul de stocare sau cel de acum re. De exemplu, plumbul este stocat n oase, dar i manifest aciunea la nivelul esuturil or moi, insecticidele organoclorurate se acumuleaz n esutul adipos, dar acioneaz toxi c la nivelul sistemului nervos central. Substana toxic din organele de stocare est e n echilibru cu fraciunea liber din plasm. Deci, pe msur ce compusul este biotransfor mat sau excretat din organism, o alt fraciune este eliberat din depozite, fapt care poate crete foarte mult timpul de njumtire biologic. Locurile majore de stocare a sub stanelor toxice n organism 1. Proteinele plasmatice pot fixa att constitueni fiziolo gici normali, ct i xenobiotice. Majoritatea acestora se leag de albumine. Transferi na, o beta1
globulin, este implicat n transportul fierului n organism, iar ceruloplasmina n trans portul cuprului. Alfa- i beta-lipoproteinele leag compui liposolubili cum ar fi vit aminele, colesterolul, hormonii steroizi, dar i xenobiotice. Substanele cu caracte r bazic se pot lega de alfa1-glicoproteina acid. Legarea de proteinele plasmatice este reversibil, dar unii compui se pot lega att de puternic nct dup o singur doz r ganism mai muli ani. De exemplu, medicamentul Teridax (acidul 2,4,6-triiodo-3-hid roxifenil propionic) are din acest motiv un timp de njumtire de 2,5 ani. 2. Proteine le tisulare din ficat i rinichi Ficatul i rinichiul au o mare capacitate de a lega diferite substane chimice i concentreaz probabil mai multe xenobiotice dect toate c elelalte organe mpreun. Dei mecanismele prin care ficatul i rinichiul rein substanele toxice din snge nu au fost pe deplin elucidate, se pare c n majoritatea cazurilor s unt implicate transportul activ i legarea de unii componeni tisulari. Astfel, a fo st identificat n citoplasma hepatocitelor o protein, ligandina, care are o mare afi nitate pentru acizii organici, i care leag i azocoloranii carcinogeni i corticosteroi zii. Metalotioneina, o protein cu sulf cu mas molecular mic din ficat i rinichi, are o mare afinitate pentru metale cum ar fi cadmiul i zincul. 3. esutul adipos este u n loc important de stocare pentru compuii cu liposolubilitate mare cum ar fi: ins ecticidele organoclorurate, nitroderivaii aromatici, solvenii organici. Se pare c r einerea se face prin simpl dizolvare a substanei toxice n grsimile neutre. Aceast stoc are determin scderea concentraiei xenobioticului la locul de aciune, deci este de ate ptat ca astfel de compui s aib o toxicitate mai redus la persoanele obeze dect la cel e normale. Concentraia plasmatic poate crete ns mult ca urmare a mobilizrii rapide a l ipidelor dup o perioad de post, existnd posibilitatea apariiei de intoxicaii acute. 4 . esutul osos reprezint locul major de stocare pentru unele substane toxice cum ar fi fluorul, plumbul, stroniul. Fixarea are loc n urma unei reacii rapide de schimb n tre substana toxic din lichidul interstiial i cristalele de hidroxiapatit din os. Dat orit similitudinii ca dimensiune i sarcin, ionul fluorur poate nlocui ionul hidroxil, n timp ce ionul de calciu poate fi nlocuit de ionii de plumb sau stroniu. Stocarea substanelor toxice n os poate sau nu s aib consecine nedorite. De exemplu, plumbul n u este toxic pentru os, n timp ce fluorul produce fluoroz scheletic, iar stroniul ra dioactiv osteosarcom. Xenobioticele stocate n os pot fi eliberate prin:
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 43 - schimb ionic la nivelul suprafeei cristalelor de hidroxiapatit - dizolvarea cris talelor prin mecanisme osteoclastice Unii compui mai pot fi stocai n fanere (arsen, seleniu), piele (aur, argint), sau n celulele sistemului reticulo-endotelial car e pot fagocita particulele. ELIMINAREA SUBSTANELOR TOXICE Dup absorbie n organism, distribuie i biotransformare, s ubstanele toxice sunt eliminate, fie ca atare, fie sub form de metabolii. Eliminare a include toate procesele care conduc la scderea concentraiei xenobioticului n orga nism. Aceasta se poate realiza prin metabolizare, sau prin excreie. Excreia la rndu l ei se poate face pe cale renal, prin fecale, pe cale pulmonar sau prin secreii al e organismului: sudoare, saliv, lacrimi sau lapte. Eliminarea ncepe imediat dup ptru nderea xenobioticului n organism, dar poate s nu reprezinte procesul major pn n momen tul n care absorbia i distribuia sunt diminuate. Factorii care influeneaz eliminarea s unt: - integritatea funcional a principalelor sisteme de organe (cardiovascular, r enal, hepatic) - vrsta - sexul - competiia pentru procesul de eliminare sau inhiba rea acestuia de ctre alte xenobiotice - saturarea proceselor enzimatice - factori i genetici - proprietile fizico-chimice ale substanei 1. Excreia renal Rinichii reprezint principalele organe excretoare. Pe aceast cale s e elimin majoritatea produilor rezultai din cile metabolice normale, dar i xenobiotic ele polare i metaboliii hidrofili ai xenobioticelor lipofile. Unitatea funcional a r inichiului este nefronul (Fig. 3.14.), la nivelul acestuia avnd loc procesele fiz iologice ce sunt utilizate att pentru excreia substanelor endogene, ct i a celor exog ene, i anume: filtrarea glomerular, secreia tubular i reabsorbia tubular.
44 TOXICOLOGIE GENERAL Fig. 3.14. Structura nefronului (McKimm W., 2000) 1.1. 1.2. Filtrarea glomerular reprezint mecanismul principal de eliminare. La adult, prin a rtera renal trece aproximativ 25% din volumul minut cardiac (1,2-1,3 l/minut), de ci n medie 1800 l de snge pe zi. Sngele sufer un proces de filtrare cu o vitez de 130 ml/minut (190 l/zi), care constituie urina primar. Deoarece capilarele glomeruli lor au pori mari (70 nm), majoritatea substanelor toxice pot fi filtrate la acest nivel, cu excepia moleculelor de dimensiune mare, cu masa molecular mai mare de 6 0000 daltoni, sau a celor legate de proteinele plasmatice. Reabsorbia tubular este cel de-al doilea proces major care are loc n rinichi. Filtratul glomerular conine ap i substane care sunt necesare organismului: aminoacizi, glucoz, sruri, care trebu ie recuperate din filtrat n timpul procesului de eliminare. Acest proces are loc n special la nivelul poriunii proximale a tubilor renali, prin mecanisme de difuzi e pasiv sau transport activ. Apa i majoritatea ionilor sunt reabsorbii n tubul dista l i tubul colector. Reabsorbia xenobioticelor are loc o dat cu absorbia moleculelor endogene i se face de obicei prin difuzie pasiv. Substanele liposolubile sunt reabs orbite eficient, n timp ce compuii polari i ionii sunt excretai n urin. De aceea,
pentru substanele toxice cu caracter slab acid sau slab bazic eliminarea renal poa te fi favorizat prin modificarea pH-ului urinar; astfel, alcalinizarea urinei con duce la ionizarea acizilor slabi, ceea ce mpiedic reabsorbia tubular, crescnd elimina rea. 1.3. Secreia tubular a substanelor toxice se poate face prin difuzie pasiv sau printr-un mecanism activ. Difuzia pasiv are o semnificaie minor deoarece filtrarea glomerular, fiind mult mai rapid, va contribui la crearea unui gradient de concent raie care este favorabil reabsorbiei tubulare. Secreia activ se realizeaz cu ajutorul a dou sisteme de transport, unul pentru acizi (anioni) i altul pentru baze (catio ni). Aceste sisteme au specificitate redus, astfel nct un numr mare de compui pot fi transportai activ n tubii renali. Sistemul anionic poate transporta acizi organici (acid acetilsalicilic, peniciline), acizi sulfonici i metabolii acizi (sulfoconju gai, glucuronoconjugai, conjugai cu glicina). Sistemul cationic poate transporta ba ze organice (morfin, histamin) i compui cuaternari de amoniu. Deoarece specificitate a sistemelor de transport este redus, diferite xenobiotice pot intra n competiie pe ntru transportor. De asemenea, afinitatea sistemelor de transport activ pentru d iveri compui fiind mai mare dect afinitatea proteinelor plasmatice, legarea de prot eine nu reprezint un factor limitant al excreiei. Gradul de eliminare a unei subst ane toxice poate fi apreciat prin clearanceul renal, care reprezint cantitatea de snge sau plasm epurat total de xenobiotic n unitatea de timp: Cl = [Cu x V] / Cp Und e Cu este concentraia substanei n urin Cp este concentraia substanei n plasm V este d tul urinar (ml / min). 2. Excreia prin fecale Este un proces care nu este la fel de bine cunoscut ca i ex creia pe cale renal. Sursele care contribuie la excreia substanelor toxice prin feca le sunt: 2.1. Substanele neabsorbite n tractul gastrointestinal: macromolecule i co mpui complet ionizai cu mas molecular mare, cum ar fi polimerii sau bazele cuaternar e de amoniu 2.2. Excreia biliar: reprezint probabil sursa cea mai important a xenobi oticelor eliminate prin fecale i a doua cale de eliminare dup cea renal. Ficatul ar e o poziie foarte avantajoas pentru ndeprtarea substanelor toxice
46 TOXICOLOGIE GENERAL ajunse n snge dup absorbia din tractul gastrointestinal, deoarece acest snge va trece prin ficat nainte de a ajunge n circulaia general. Astfel, ficatul poate reine aceti compui, mpiedicnd distribuia lor n alte segmente ale organismului. n plus, ficatul est e sediul major al biotransformrii xenobioticelor, iar metaboliii formai pot fi excr etai direct n bil. Compuii exogeni excretai prin bil pot fi mprii n trei clase n portul ntre concentraiile lor n bil i n plasm: - Substanele din clasa A (raportul n e 1) sodiul, potasiul, glucoza, mercurul, taliul, cesiul, cobaltul - Substanele d in clasa B (raportul mai mare de 1, de obicei ntre 10 i 1000) acizii biliari, bili rubina, plumbul, arsenul, manganul i multe alte xenobiotice - Substanele din clasa C (raportul este subunitar) inulina, albumina, zincul, fierul, aurul, cromul Su bstanele toxice care se excret prin bil sunt : - compuii puternic polari, anioni sau cationi - metaboliii conjugai care nu pot fi reabsorbii n snge - compuii cu masa mole cular mai mare de 300, cum ar fi hidrocarburile aromatice polinucleare, coloranii azoici Dup ce au ajuns n intestin mpreun cu bila, xenobioticele sau metaboliii acesto ra excretai pe aceast cale pot fi eliminai prin fecale sau, dependent de proprietile lor, pot fi reabsorbii, intrnd n ciclul enterohepatic. Metaboliii conjugai pot fi de asemenea hidrolizai i reabsorbii. 2.3. Secreia intestinal este un proces relativ lent , care se realizeaz n general prin difuzia pasiv a substanei din snge n lumenul intest inal. Este ntlnit la compui cu metabolizare redus sau care au clearance renal sau bil iar sczut. n intestinul gros a fost demonstrat existena unui proces de secreie activ a acizilor i a bazelor organice. 3. Eliminarea pulmonar Pe cale pulmonar se elimin substanele care se gsesc n stare gaz oas la temperatura corpului, precum i lichidele volatile. Cantitatea de lichid eli minat prin plmni este proporional cu tensiunea de vapori a acestuia. Astfel, lichidel e foarte volatile, cum ar fi eterul etilic, se elimin aproape exclusiv pe aceast c ale. Eliminarea se face prin difuzie simpl prin membranele alveolelor pulmonare.
4. Alte ci de eliminare 4.1. Transpiraie i saliv: au o importan minor, iar excreia de de de difuzia formei neionizate, liposolubile, a xenobioticului. Substanele toxic e excretate prin saliv sunt de obicei nghiite i sunt din nou disponibile pentru abso rbia gastrointestinal (ciclul salivar). Prin saliv se mai pot excreta i unele metale care pot forma cu hidrogenul sulfurat provenit din procesele de putrefacie a res turilor alimentare sulfuri ce se depun la nivelul gingiilor sub form de lizereu, constituind un indiciu al expunerii (ex. lizereul lui Burton din intoxicaia cu pl umb). 4.2. Lapte. Secreia xenobioticelor n lapte este deosebit de important, deoare ce substana toxic poate s treac de la mam la sugar, sau de la vaci la populaie, existn riscul de producere a intoxicaiilor. Substanele sunt excretate prin lapte prin di fuzie simpl. Deoarece laptele este mai acid dect plasma (pH 6,5), compuii bazici se pot concentra n lapte. De asemenea, laptele avnd un coninut n lipide de 3-4% , xeno bioticele liposolubile difuzeaz mpreun cu lipidele din plasm n glanda mamar i sunt exc etate n lapte n timpul lactaiei. Printre substanele care ating concentraii mai mari n lapte dect n plasm se numr: tiouracilul, streptomicina, litiul, iodul, mercurul, izon iazida, etanolul, difenilhidantoina, cloramfenicolul.
METABOLIZAREA SUBSTANELOR TOXICE Majoritatea xenobioticelor care ptrund n organism sunt liposolubile, proprietate care le permite s strbat membranele biologice, deci s fie absorbite i distribuite. Aceast proprietate reprezint ns un obstacol n calea eli inrii lor, deoarece compuii lipofili pot fi uor reabsorbii. De aceea, eliminarea sub stanelor toxice depinde n mare msur de transformarea lor n molecule hidrosolubile, ca re pot fi excretate prin urin sau prin fecale. O excepie de la aceast regul o consti tuie eliminarea pulmonar a substanelor volatile, n cazul crora transformarea n compui hidrosolubili nevolatili scade viteza de eliminare. Totalitatea modificrilor pe c are un xenobiotic le sufer n organism poart denumirea de biotransformare sau metabo lizare. Consecinele biotransformrii pot fi: Creterea eliminrii compusului prin forma rea unor metabolii care n general sunt mai hidrosolubili, ceea ce are drept urmare scderea timpului de njumtire biologic i meninerea la minim a potenialului toxic.
Exist ns i excepii, n unele cazuri metabolizarea conducnd la scderea hidrosolubilit i la reducerea excreiei. De exemplu, acetilarea scade solubilitatea n urin a unor s ulfamide, fcnd posibil cristalizarea metaboliilor la nivelul tubilor renali i apariia necrozei tubulare. Modificarea activitii biologice a substanei n sensul reducerii sa u a creterii toxicitii. Astfel: Detoxifierea reprezint procesul prin care n urma biot ransformrii se obin metabolii mai puin toxici dect compusul printe, i deci mai uor ex tabili Bioactivarea este procesul prin care n urma biotransformrii se obin metabolii mai toxici dect compusul printe. Tipul de biotransformare suferit de un xenobioti c depinde de: Structura i proprietile fizico-chimice ale compusului: gruprile funcion ale, stereochimia, coeficientul de partiie Enzimele care se gsesc la nivelul esutul ui expus Enzimele implicate n metabolizarea xenobioticelor: Pot fi localizate n fi cat sau n alte esuturi: piele, plmn, mucoasa nazal, ochi, tractul gastrointestinal, r inichi, pancreas, splin, inim, creier, testicole, placent, plasm, eritrocite, limfoc ite, trombocite Pot fi localizate ntr-un anumit tip de celul sau ntr-un anumit orga n Spre deosebire de enzimele implicate n metabolismul intermediar, n general nu su nt specifice i deci nu sunt ntotdeauna foarte eficiente Enzimele implicate n mod no rmal n metabolismul intermediar pot cataliza biotransformarea unui xenobiotic dac structura acestuia este corespunztoare Un xenobiotic poate suferi mai multe tipur i de biotransformri Au o localizare subcelular particular: n primul rnd n reticulul e doplasmatic (microzomi), sau n citosol, iar cantiti mai mici n mitocondrii, nuclei, lizozomi, peroxizomi Locul biotransformrilor: Ficatul este organul implicat cel m ai frecvent n biotransformarea xenobioticelor datorit: poziiei sale, irigrii sanguin e bogate i funciei sale metabolice, ceea ce implic un coninut ridicat de enzime de m etabolizare. Majoritatea substanelor toxice ptrund n organism pe calea tractului ga strointestinal, de unde ajung prin intermediul venei porte direct n ficat. Pentru acest motiv, ficatul este expus la concentraii mai mari dect majoritatea esuturilo r.
Creierul. Cercetrile din ultimii ani au demonstrat prezena n creier a unor enzime d e metabolizare cum ar fi enzimele citocromului P450, UDP-glucuronoziltransferaze le i glutation-S-transferazele. Aceste enzime sunt localizate att la nivelul barie rei hemato-encefalice, n celulele endoteliale, ct i n diferite structuri cerebrale. n creierul uman, concentraiile cele mai ridicate de citocrom P450 au fost regsite n mduva cerebral i n cerebel, iar cele mai reduse n striat i hipocamp. De asemenea, cito cromul P450 este prezent n neuroni, care reprezint locul de aciune al multor substa ne psihoactive. Cel mai cunoscut exemplu cu relevan toxicologic de biotransformare l a nivelul barierei hemato-encefalice, este cel al 1-metil-4-fenil-1,2,5,6-tetrah idropiridinei (MPTP), care sub aciunea monoaminoxidazei B mitocondriale formeaz io nul dihidropiridiniu (MPP+), responsabil de inducerea unui sindrom de tip Parkin son. Intestinul. La nivelul mucoasei intestinale se gsesc izoenzime ale citocromu lui P450, glucuronoziltransferaze, sulfotransferaze i glutationS-transferaze ce p ot fi responsabile de un metabolism presitemic al primului pasaj, care la rndul su poate influena biodisponibilitatea oral a xenobioticelor sau bioactivarea mutagen ilor i carcinogenilor. Aceste enzime, alturi de enzimele bacteriene ale microflore i intestinale, pot metaboliza poluani din mediu relativ stabili i xenobiotice prov enite din alimente la molecule cu aciune mutagen sau cancerigen. Plmnul conine de ase enea sisteme enzimatice de metabolizare a xenobioticelor, dar n proporie mai mic fa d e ficat. El poate juca un rol semnificativ n eliminarea metabolic sau n bioactivare a xenobioticelor cu mas molecular mic ce sunt inhalate. Nasul. Metabolismul la nive lul mucoasei nazale are implicaii toxicologice importante, deoarece izoenzimele c itocromului P450 de la acest nivel, care au o activitate catalitic mai mare dect n orice alt esut, pot converti unele xenobiotice din atmosfer n metabolii reactivi, cr escnd riscul de apariie a cancerelor nazo-faringiene sau pulmonare (de exemplu, fo rmarea nitrozaminelor n fumul de igare). Clasificarea reaciilor de biotransformare a xenobioticelor (Tabel III.2): Reacii din faza I - includ reacii de oxidare, redu cere i hidroliz i introduc n molecula xenobioticului noi grupri funcionale (-OH, -NH2, -NH, COOH), sau modific grupri existente, care pregtesc intrarea metaboliilor obinui faza II de metabolizare. De obicei se produce o cretere moderat a hidrofiliei mole culei. Reacii din faza II sunt cunoscute sub denumirea de reacii de conjugare i pre supun biosinteza unui compus conjugat ntre substana
50 TOXICOLOGIE GENERAL toxic (dac posed grupri polare), sau un metabolit polar rezultat din faza I, i un met abolit endogen. Metaboliii formai sunt mai hidrosolubili i mai uor excretabili. Majo ritatea xenobioticelor sufer consecutiv att reacii din faza I ct i reacii din faza II. Cele care sunt puin metabolizabile sau cele hidrosolubile foarte polare sunt exc retate n mare msur nemodificate. Tabel III.2. Cile generale de metabolizare a xenobi oticelor i localizarea lor subcelular REACIE Oxidare ENZIM FAZA I Alcool dehidrogenaz Aldehid dehidrogenaz Aldehid oxidaz X antinoxidaz Monoaminoxidaz Diaminoxidaz Prostaglandin H sintetaz Flavinmonooxigenaze Citocromul P450 Azo- i nitroreducerea Reducerea carbonililor Reducerea disulfuri lor Reducerea sulfoxizilor Reducerea chinonelor Dehalogenarea reductoare Carboxie steraze Peptidaze Epoxid hidroxilaza FAZA II LOCALIZARE Citosol Mitocondrie, cit osol Citosol Citosol Mitocondrie Citosol Microzomi Microzomi Microzomi Microflor, microzomi, citosol Citosol Citosol Citosol Citosol, microzomi Microzomi Microzo mi, citosol Snge, lizozomi Microzomi, citosol Microzomi Citosol Citosol, microzom i Mitocondrie, microzomi Mitocondrie, citosol Citosol Reducere Hidroliz Glucuronoconjugare Sulfoconjugare Conjugare cu glutation Conjugare cu aminoacizi Acilare Metilare
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 51 REACII DIN FAZA I 1. Reacii de oxidare Reaciile de oxidare sunt probabil reaciile ce le mai ntlnite n biotransformarea xenobioticelor. Aceste reacii sunt catalizate de d iferite enzime sau sisteme enzimatice: A) Sistemul enzimatic al monooxigenazelor dependente de citocromul P450 (CYP450), care mai poart i denumirea de Oxidaze cu Funcii Mixte Microzomale (OFMM), este cel mai important. Denumirea provine de la capacitatea acestui sistem de a ncorpora unul din atomii unei molecule de oxigen n substrat (RH), formnd un metabolit oxigenat (ROH) i de a reduce cellalt atom de ox igen la ap, conform ecuaiei: CYP450 RH + O2 2H+, 2eROH + H2O OFMM este localizat n membrana reticulului endoplasmatic neted (Fig. 3.15.). Sist emul OFMM este alctuit din cel puin dou componente proteice: o protein heminic numit itocromP450 (CYP450), care are funcia de a lega substratul i oxigenul o flavoprote in denumit NADPH-CYP450 reductaza, ce conine att flavinmononucleotid (FMN) ct i flavin dinucleotid (FAD), i care servete drept transportor de electroni de la NADPH la CY P450 i o fosfolipid, fosfatidilcolina, care faciliteaz transferul de electroni de l a NADPH-CYP450 reductaz la CYP450 Dintre cele trei componente, CYP450 este cea ma i important datorit rolului su vital n activarea oxigenului i n legarea substratului. Datorit gamei foarte variate de xenobiotice pe care trebuie s le metabolizeze orga nismul, citocromul P450 se prezint sub numeroase izoforme sau izoenzime. Pn la ora actual au fost identificate 750 de izoforme, dintre care la om se ntlnesc 36, numrul total fiind estimat la mai mult de 50. Aceste izoforme sunt clasificate n famili i, care au o similitudine a aminoacizilor constitutivi de peste 40% (notate prin tr-o cifr arab) i subfamilii, cu o similitudine de peste 55% (notate cu o liter); ul tima cifr arab din denumire reprezint genul individual. Familiile CYP1, CYP2 i CYP3 din microzomii hepatici sunt asociate cu metabolismul oxidativ al majoritii xenobi oticelor i s-a estimat c numrul total al substraturilor exogene ale CYP450 poate de pi 200000.
52 TOXICOLOGIE GENERAL Fig.3.15. Localizarea sistemului oxidazelor cu funcii mixte microzomale (Niesink R.J.M., et al, 1996) Izoenzimele au specificitate de substrat diferit. De exemplu, izoformele CYP1A au afinitate pentru substraturile poliaromatice planare cum ar fi benzpirenul, n ti mp ce CYP2E prefer compuii cu mas molecular mic, cum ar fi etanolul sau acetona. Izof ormele CYP450 hepatic implicate n metabolizarea medicamentelor sunt prezentate n F ig.3.16., i se observ c mai mult de 1/3 din substane sunt metabolizate de o singur iz oenzim, CYP3A4, ceea ce explic frecvena ridicat a interaciunilor medicamentoase care se produc prin mecanisme enzimatice.
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 53 2D6 21% 2E 1 4% 3A4/5 36% 2C18/19 8% 2C8/9 17% 2B6 3% 1A2 8% 1A1 3% Fig. 3.16. Procentul izoenzimelor CYP450 implicate n metabolizarea principalelor medicamente utilizate n terapie Reacii catalizate de citocromul P450: 1.1.1. Hidroxilarea alifatic Gruprile metil s unt oxidate la grupri hidroximetil, iar acestea din urm, prin oxidare nemicrozomia l, pot fi oxidate n unele cazuri la acizi carboxilici (ex. tolbutamidul). Cnd n mole cul sunt prezente mai multe grupri metil similare, de obicei este oxidat una singur; n cazul gruprilor metil aromatice, cele mai susceptibile sunt cele din poziia para . Catenele alchil laterale sunt adesea hidroxilate la nivelul carbonului termina l sau al penultimului atom de carbon (ex. pentobarbitalul), n timp ce gruparea iz opropil poate fi hidroxilat la carbonul teriar i la oricare din gruprile metil echiv alente (Ex. ibuprofenul, Fig.3.17.). Hidroxilarea catenelor alchil grefate pe ci clurile aromatice nu urmeaz regulile generale, datorit influenei nucleului aromatic . 1.1.2. Hidroxilarea aromatic Reacia de oxidare depinde de izoenzima CYP450 care catalizeaz oxidarea i de potenialul de oxidare al compusului aromatic. Se obin de ob icei produi fenolici, iar poziia n care are loc hidroxilarea depinde de tipul subst ituenilor de pe nucleu, conform teoriei substituiei aromatice electrofile. Pentru compuii monosubstituii ai benzenului predomin hidroxilarea n poziia para, dar se form eaz n oarecare msur i izomerul orto. Atunci cnd sunt prezente mai multe nuclee fenil, de obicei este hidroxilat unul singur (ex. fenitoinul) (Fig.3.18.).
54 TOXICOLOGIE GENERAL SO2NHCONHC4H9 SO2NHCONHC4H9 CH3 Tolbutamid HOCH2 O CH3 CH3 O CH3 CH3 HN CH3 O N H O O HN CH3 N H O OH Pentobarbital OH CH3 CH3 CH3 CH3 COOH CH3 COOH Ibuprofen CH3 HO CH3 CH3 COOH Fig.3.17. Exemple de oxidri alifatice Hidroxilarea aromatic are loc de obicei prin formarea unui intermediar epoxidic c are este foarte reactiv i instabil i poate suferi rearanjri intramoleculare.
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 55 OH Benzen OH OH OH OH Hidrochinona Fenol (principalul metabolit) OH Pirocatehina OH OH OH Rezorcina OH 1,2,4-trihidroxibenzen OH H N O O Fenitoin N H O H N O N H Fig.3.18. Exemple de hidroxilri aromatice 1.1.3. Reacii de epoxidare Reaciile de epoxidare sunt extrem de importante i pot im plica att compui aromatici ct i compui alifatici i aliciclici.
56 TOXICOLOGIE GENERAL Epoxidarea substanelor aromatice este o etap intermediar n hidroxilarea aromatic i con duce la formarea de intermediari foarte reactivi, care au fost implicai n producer ea carcinogenezei chimice i a necrozei celulare sau tisulare. Aceti epoxizi pot su feri o rearanjare neenzimatic cu formare de fenoli, sau pot forma dihidrodioli su b aciunea enzimei epoxid hidrolaz (Fig. 3.19). OH O 1- Naftol OH OH Naftalina Naftalin epoxid Naftalin 1,2-dihidrodiol O HO OH Benzpiren 7,8 diol-9,10 epoxizi HO O OH Benzpiren Benzpiren 7,8 epoxid Benzpiren 7,8 dihidrodiol O HO OH Fig. 3.19. Exemple de epoxidare aromatic
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 57 Prin epoxidarea alifatic se formeaz epoxizi stabili i persisteni n organism (ex. diel drinul, metabolitul stabil al insecticidului aldrin, care este principalul rezid uu regsit la animalele expuse) sau pot fi bioactivate unele substane toxice (ex. a flatoxina B1 , unul din cei mai puternici hepatocarcinogeni cunoscui) (Fig.3.20.) . Cl Cl CCl2 Cl Cl Aldrin O O CH2 Cl Cl Cl CCl2 CH2 O Cl Dieldrin O O O O Aflatoxina B1 OCH3 O Epoxidul aflatoxinei B1 Fig.3.20. Exemple de epoxidare alifatic 1.1.4. Reacii de dealchilare: O-, N- i S-dealchilare Un exemplu de O-dealchilare e ste demetilarea codeinei cu formarea morfinei care, dei nu reprezint metabolitul p rincipal, este responsabil de inducerea farmacodependenei la administrarea cronic a codeinei. N-dealchilarea se ntlnete frecvent n metabolizarea medicamentelor, insect icidelor sau a altor xenobiotice. Prin N-dealchilarea unor antidepresive cum ar fi amitriptilina sau fluoxetina se obin metabolii care i pstreaz activitatea farmacolo gic, respectiv nortriptilina i norfluoxetina, iar prin dealchilarea cocainei se obi ne norcocaina, care se pare c este responsabil de efectele hepatotoxice ale cocain ei. Nicotina, prin N-dealchilare formeaz nornicotina.
58 TOXICOLOGIE GENERAL S-dealchilarea se ntlnete la tioeteri, cum ar fi metilmercaptanul sau 6metiltiopuri na. N CH3 N CH3 H3CO O Codeina OH HO O Morfina OH N CH3 N H N Nicotina H3C S N H N N N Nornicotina SH H N N N N N 6-Metilmercaptopurina 6-Mercaptopurina Fig.3.21. Exemple de reacii de dealchilare 1.1.5. Reacii de deaminare oxidativ Deaminarea oxidativ poate avea loc n cazul amine lor alfa-substituite, cum este amfetamina. Mecanismul oxidativ urmeaz o cale simi lar cu cea a Ndealchilrii, rezultnd n final un metabolit carbonilic (Fig. 3.22.). Di substituirea
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 59 carbonului din poziia alfa inhib deaminarea (ex. fenterminul). Unele amine secunda re i teriare i aminele substituite cu grupri voluminoase pot suferi deaminare direct , fr N-dealchilare, cum este cazul fenfluraminei. CH3 CH3 + NH3 NH2 O Amfetamina Fenilacetona Fig.3.22. Exemplu de reacie de deaminare oxidativ 1.1.6. Reacii de N-oxidare Reaciile de oxidare a azotului pot conduce la formarea de hidroxilamine, oxime sau N-oxizi. Hidroxilaminele se formeaz din anilin sau din derivaii si substituii (Fig.3.23.). N-oxizii se formeaz din amine teriare i amide. H NCOCH3 2-Acetilaminofluorenul N-Hidroxiacetilaminofluorenul OH NCOCH 3 Fig.3.23. Exemplu de N-oxidare 1.1.7. Reacii de S-oxidare Tioeterii sunt oxidai la sulfoxizi, care la rndul lor su nt oxidai la sulfone. Aceast reacie se observ la insecticide din diferite clase (car bamice, organofosforice, hidrocarburi clorurate), precum i la medicamente din gru pul fenotiazinelor (Fig.3.24). i flavinmonooxigenazele pot cataliza astfel de rea cii.
60 TOXICOLOGIE GENERAL O S S N R Fenotiazine R1 N R R1 Fig.3.24. Exemplu de reacie de S-oxidare 1.1.8. Reacii de P-oxidare Oxidarea fosforului conduce la transformarea fosfinelo r trisubstituite n fosfin oxizi (Fig.3.25.). Aceast reacie poate fi catalizat i de fl avinmonooxigenaze. C6H5 H3C P C6H5 O Difenilmetilfosfina H3C P C6H5 C6H5 Oxidul difenilmetilfosfinei Fig.3.25. Exemplu de P-oxidare 1.1.9. Reacii de desulfurare oxidativ Derivaii de acid tiofosforic i ditiofosforic f olosii ca insecticide pot suferi o reacie de oxidare prin care gruparea P=S este t ransformat ntr-o grupare P=O, ceea ce conduce la creterea activitii inhibitoare a col inesterazei (Fig.3.26.).
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 61 H2C2O P H2C2O S O NO2 H2C2O P H2C2O O O NO2 Paration Paraoxon Fig.3.26. Exemplu de desulfurare oxidativ 1.1.10. Reacii de dehalogenare oxidativ Metabolizarea anestezicelor fluorurate pri n dehidrohalogenare oxidativ conduce la formarea de metabolii cu hepato- i nefrotox icitate considerabil. Astfel, halotanul poate genera o clorur a acidului trifluoro acetic, care este foarte reactiv i se poate lega covalent de proteinele tisulare, transformndu-le n proteine acilate cu proprieti antigenice (Fig.3.27.). O CF3CHBrCl Halotan CF3CBrClOH CF3C Cl Proteina O CF3C NH Proteina Trifluoroacetat-proteina Fig.3.27. Dehalogenarea oxidativ a halotanului B) Flavinmonooxigenaza (FMO) este o enzim dependent de NADPH i O2, cu un mecanism d e aciune diferit de cel al CYP450 monooxigenazei, activarea oxigenului avnd loc nai nte de legarea substratului. Specificitatea de substrat a FMO este mai larg dect a OFMM, ea putnd metaboliza amine teriare i secundare i diferii compui cu sulf cum ar f i sulfuri, tioeteri, tioli i tiocarbamai (Fig.3.28.). Ea nu catalizeaz ns reaciile de dealchilare a heteroatomilor.
62 TOXICOLOGIE GENERAL N CH3 N Nicotina N N CH3 O Nicotin-1'-N-oxidul O S CNH2 S CNH2 Tiobenzamida Tiobenzamid S-oxidul Fig. 3.28. Exemple de oxidri catalizate de FMO C) Oxidrile nemicrozomiale sunt catalizate de enzime localizate n mitocondrii sau n citoplasm. 1.3.1. Oxidri catalizate de alcool-dehidrogenaze Alcool-dehidrogenazel e (ADH) catalizeaz conversia alcoolilor la aldehide i cetone: RCH2 OH + NAD+ RCHO + NADH + H+ Reacia este reversibil, compuii carbonilici fiind redui la alcooli. Enzima se gsete n raciunea solubil a omogenatelor tisulare din ficat, rinichi i plmn i este probabil cea mai important enzim implicat n metabolizarea alcoolilor exogeni. Deoarece aldehidel e formate prin oxidarea alcoolilor primari sunt toxice i greu excretabile, aceast reacie poate fi considerat una de bioactivare. 1.3.2. Reacii catalizate de aldehiddehidrogenaze Aldehid-dehidrogenazele sunt enzime care catalizeaz oxidarea unui n umr mare de aldehide endogene i exogene, n urma reaciei formndu-se acizii corespunztor i, care pot fi apoi conjugai:
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 63 RCHO + NAD+ RCOOH + NADH + H+
n genomul uman au fost identificate 16 gene i dou pseudogene care codific aldehid-de hidrogenaze i se recunoate existena unui polimorfism al acestor enzime. Deoarece al dehidele sunt compui electrofili foarte reactivi ce pot interaciona cu gruprile tio l i amino inducnd efecte citotoxice, genotoxice, mutagene sau carcinogene, oxidare a lor de ctre aldehid-dehidrogenaze (ALDH) este considerat o reacie de detoxifiere. Aldehid-dehidrogenazele pot s conduc ns i la formarea de metabolii activi, cum se pet rece n timpul metabolizrii tricloretilenei. Iniial, hidrocarbura clorurat este biotr ansformat sub aciunea CYP450 la tricloretanol i apoi la cloralhidrat i acid triclora cetic, reacii catalizate de alcool- i respectiv aldehiddehidrogenaze. Acidul tricl oracetic, dar nu i metaboliii anteriori, a fost identificat a fi responsabil de pr oducerea de efecte carcinogene i teratogene. 1.3.3. Reacii catalizate de aminoxida ze Se cunosc dou tipuri de aminoxidaze, care catalizeaz deaminarea oxidativ a amine lor, att endogene ct i exogene. a) Monoaminoxidazele (MAO) sunt flavoproteine care se gsesc n mitocondriile celulelor din diferite esuturi: ficat, creier, rinichi, in testin, eritrocite. Substraturile sunt monoamine, amine secundare i teriare, n care amina trebuie s fie legat de o grupare metilen nesubstituit. Se cunosc dou tipuri d e MAO: MAOA i MAO-B, care au preferine diferite pentru substraturi. MAO-A se gsete n principal n terminaiile nervoase adrenergice periferice i are afinitate pentru cate colamine, n timp ce MAO-B este ntlnit n special n trombocite i are selectivitate pentr b-feniletilminele nefenolice lipofile. Substraturi comune sunt dopamina, tiramin a i alte feniletilamine monofenolice. Un exemplu de implicare a monoaminoxidazelo r n bioactivarea unor substane este acela al 1-metil-4-fenil-1,2,5,6-tetrahidropir idinei (MPTP), un contaminant obinut n procesul de sintez a meperidinei, care este biotransformat de MAO-B. Metabolitul su MPP+ (ionul 1-metil-4-fenilpiridiniu) se acumuleaz n neuronii dopaminergici, producnd neurotoxicitate similar cu cea din boal a Parkinson (Fig.3.29).
64 TOXICOLOGIE GENERAL N CH3 N CH3 MPTP MPP+ Fig.3.29. Bioactivarea MPTP sub aciunea MAO-B b) Diaminoxidazele oxideaz aminele la aldehide, dar prefer diaminele alifatice cu lanuri de 4 sau 5 atomi de carbon. Cele cu mai mult de 9 atomi de carbon sunt oxi date de monoaminoxidaze, iar aminele secundare i teriare nu sunt metabolizate (Fig .3.30.): H2N(CH2)5 NH2 + O2 + H2O Cadaverina H2N(CH2)4CHO + NH3 + H2O2 Fig.3.30. Exemplu de reacie catalizat de diaminoxidaze 1.3.4. Reacii catalizate de xantin-oxidaz i xantin-dehidrogenaz Xantin-oxidaza i xant in-dehidrogenaza sunt forme diferite ale aceleiai enzime i sunt interconvertibile, ntlnindu-se adesea sub denumirea de xantinoxidoreductaz (XOR). Aceste enzime joac u n rol important n metabolizarea unor citostatice purinice, dar i n formarea de spec ii reactive de oxigen n timpul biotransformrii alcoolului etilic, radicalii hidrox il rezultai fiind implicai n inducerea cancerului de sn (Fig.3.31.). 2. Reacii de reducere Unele grupri funcionale cum ar fi gruprile nitro, diazo, carbo nil, disulfur, sulfoxid, alchene, sunt susceptibile s sufere reacii de reducere. n f uncie de localizarea subcelular a enzimelor implicate, aceste reacii pot fi clasifi cate n:
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 65 E ta n o l A DH + NAD + A c e ta ld eh id a + NADH + H X O R OX A c e ta t N AD + XO RR O2 O2 + H 2O 2 F e ++ O2 .F er itin a F e + ++ . OH M o d ific a r i A D N s i c a r c in o g e n e z a Fig.3.31. Biotransformarea alcoolului etilic catalizat de xantin-oxidoreductaz A) Reduceri microzomale 2.1.1. Reducerea nitroderivailor la amine primare este ca talizat de nitroreductaze, probabil cu formarea de intermediari cum ar fi nitroza minele i hidroxilaminele (Fig. 3.32.):
66 TOXICOLOGIE GENERAL NO2 NO NHOH NH2 Nitrobenzen Nitrozobenzen Fenil-hidroxilamina Anilina Fig.3.32. Exemple de reacii de reducere a nitroderivailor 2.1.2 Reducerea azoderivailor de ctre azoreductaze este dependent de NADPH i implic p robabil participarea citocromului P450 (Fig.3.33.): H2N H2N N N SO2NH2 Prontosil NH2 NH2 NH2 SO2NH2 Sulfanilamida NH2 Fig.3.33. Exemplu de reducere a azoderivailor B) Reduceri nemicrozomiale 2.2.1. Reducerea aldehidelor i cetonelor printr-o reaci e invers a alcooldehidrogenazelor i aldehid-dehidrogenazelor.
2.2.2. Reducerea disulfurilor la componenii tiolici prin reacii care se desfoar adese a n trei etape, ultima fiind catalizat de glutation reductaz, i necesit glutationul ( GSH) drept cofactor: RSSR + GSH RSSG + RSH RSSG + GSH GSSG + RSH + GSSG + NADPH + H+ 2GSH + NADP+ Un exemplu de astfel de reacie este reducerea disulfiramului (A ntabus), folosit n tratamentul alcoolismului, la acid dimetil-ditiocarbamic. 2.2. 3. Reducerea chinonelor prezint un interes toxicologic deosebit deoarece aceast re acie desfurat n mai multe etape poate conduce la obinerea de semichinone i hidrochinon , care la rndul lor pot fi autooxidate de oxigenul molecular, iniiindu-se formarea de specii reactive de oxigen. 3. Reacii de hidroliz n general, esterii i amidele sunt hidrolizate de enzime care s e gsesc n snge, microzomii hepatici, rinichi i alte esuturi. Esterii i anumite amide s unt hidrolizai rapid de un grup de enzime numite carboxilesteraze. Din acest grup fac parte: colinesteraza, arilcarboxiesterazele, carboxilesterazele din microzo mii hepatici i alte enzime neclasificate. n cele mai multe cazuri, hidroliza grupri lor ester sau amid din molecula substanelor toxice conduce la bioinactivarea acest ora, deoarece metaboliii rezultai sunt mai hidrofili, iar n unele cazuri pot forma glucuronoconjugai. Un exemplu este inactivarea miorelaxantului succinilcolin sub a ciunea pseudocolinesterazei plasmatice (Fig. 3.34.): O N(CH 3)3 O O N(CH3)3 O Succinilcolina COOH COOH + 2 HO N(CH 3)3 Fig.3.34. Exemplu de reacie de hidroliz catalizat de colinesteraz
REACII DIN FAZA II Reaciile de conjugare reprezint probabil cele mai importante rea cii de biotransformare a xenobioticelor, deoarece conduc la creterea hidrosolubili tii i deci la creterea posibilitii de eliminare prin urin sau prin bil. n mod tradi s-a considerat c principalele reacii de conjugare determin dispariia activitii farmaco logice, deoarece metaboliii polari formai, pe lng eliminarea lor crescut, au o difuzi une redus n celule i o afinitate sczut pentru receptori. Aceast opinie a fost infirmat de descoperirea faptului c morfin-6-glucuronida are o aciune analgezic mai puternic dect a morfinei, iar unii compui pot forma reactivi intermediari, care au fost imp licai n inducerea cancerelor, a reaciilor alergice sau a leziunilor tisulare. Unele substane pot urma mai multe ci secveniale de conjugare (Fig.3.35.), iar enzimele c are catalizeaz aceste reacii pot prezenta stereospecificitate pentru un anumit ena ntiomer. acetilare glucuronoconjugare H2N COOH glucuronoconjugare sulfoconjugare OH glucuronoconjugare conjugare cu glicina Fig.3.35. Cile secveniale de conjugare pentru acidul p-aminosalicilic
1. Glucuronoconjugarea Glucuronoconjugarea este calea major de conjugare a xenobi oticelor i este responsabil de formarea majoritii metaboliilor conjugai eliminai prin rin i prin bil. Reacia are loc prin condensarea direct ntre substana toxic, sau un me olit al acesteia rezultat din faza I, cu acidul uridin difosfat glucuronic (UDPG A) (Fig.3.36.) i este catalizat de enzimele UDP-glucuronozil transferaze, care sun t localizate n reticulul endoplasmatic din ficat i din alte esuturi ca rinichi, int estin, piele, creier, splin i mucoasa nazal. Glucuronidarea are loc n general la niv elul unui heteroatom nucleofil bogat n electroni: oxigen, azot sau sulf. Compuii c are pot fi metabolizai prin glucuronoconjugare sunt deci:
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 69 alcooli alifatici i fenoli (formeaz O-glucuronide eteri) acizi carboxilici (formea z O-glucuronide esteri) amine aromatice i alifatice secundare (formeaz N-glucuronid e) grupri tiol libere (formeaz S-glucuronide) Anumite xenobiotice cum ar fi fenilb utazona sau sulfinpirazona au n molecul atomi de carbon suficient de nucleofili pe ntru a forma Cglucuronide. UTP-glucoza 2NAD UDPG-dehidrogenaza UDP-glucuronat (UDPGA) Glucozo-1-fosfat + UTP HO COO UGT OH N H C O Paracetamol CH3 HO OH O O N H CH3 O Fig.3.36. Exemplu de glucuronoconjugare catalizat de UDP-glucuronozil transferaze (UGT) 2. Sulfoconjugarea Sulfoconjugarea crete solubilitatea n ap i deci excreia xenobiotic elor, deoarece gruprile sulfonice au un pKa de 1-2. Sulfoconjugaii vor fi deci apr oape total ionizai n condiii fiziologice i vor avea un volum de distribuie mai mic de ct cel al compuilor neconjugai. Reacia este catalizat de sulfotransferaze. Acestea po t fi localizate n citosol sau n membrana aparatului Golgi a majoritii celulelor. Doa r sulfotransferazele citosolice, care se gsesc n principal n ficat, mucoasa gastroi ntestinal i rinichi, sunt implicate n sulfoconjugarea xenobioticelor. Procesul de s ulfoconjugare necesit activarea prealabil a ionilor sulfat, cu formarea de 3'-fosfodenozin-5'-fosfosulft (PAPS), reacie care decurge cu consum de ATP i de energie (F ig.3.37). Xenobioticele care pot suferi reacii de sulfoconjugare sunt: alcoolii a minele aromatice fenolii hidroxilaminele aromatice
70 TOXICOLOGIE GENERAL SO4 2+ ATP 1. ATP-sulfurilaza 2. APS-fosfokinaza 3-Fosfoadenozin-5'-fosfosulfat + ADP + PPi (PAPS) NH2 N O N O3SO P OH H2O3PO PAPS OSO2O OH O O N OH N HN CH3 O Paracetamol Sulfotransferaza PAP HN CH3 O Fig.3.37. Cile de sulfoconjugare 3. Conjugarea cu aminoacizi Conjugarea cu aminoacizi este o cale metabolic import ant a xenobioticelor acizi carboxilici, care formeaz cu glicina sau cu glutamina c onjugai ionici solubili n ap ce pot fi excretai uor n urin i n bil. Substanele ce i aceast reacie sunt: acizii carboxilici aromatici acizii carboxilici aril-alifati ci acizii carboxilici heterociclici Reacia presupune formarea unei legturi amidice sau peptidice ntre xenobiotic i gruparea amino a unui aminoacid. Xenobioticul est e iniial activat prin formarea unui tioester cu coenzima A (Fig.3.38.). Conjugaii rezultai sunt de obicei mai puin toxici dect precursorul acid.
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 71 R-COOH + ATP + CoA acil sintetaza R-CO-S-CoA + AMP R-CO-S-CoA + R'-NH2 transacetilaza R-CO-NH-R' + CoASH COOH O NH2CH2COOH Glicina Acid benzoic acil sintetaza N H COOH Acid hipuric Fig.3.38. Cile de conjugare cu aminoacizi 4. Acetilarea Aminele exogene sunt acetilate de ctre N-acetil transferaze, donoru l de grupri acetil fiind coenzima A. Enzimele se gsesc n citosolul celulelor din fi cat, mucoasa gastric i limfocite iar la om, la care au fost identificate dou acetil transferaze distincte, exist un polimorfism genetic. Xenobioticele metabolizate pe aceast cale sunt: amine aromatice primare hidrazine hidrazide sulfonamide unel e amine alifatice primare Reacia de acetilare presupune iniial acetilarea enzimei, urmat de adiia substratului i apoi de transferul gruprii acetil la substrat. Produs ul conjugat poate s fie mai puin hidrosolubil dect compusul printe, ceea ce determin o cretere a toxicitii (ex. acetilarea izoniazidei, Fig.3.39.): CONHNH2 CO-NH-NH-COCH3 N Izoniazida N Acetil-izoniazida Fig.3.39. Exemplu de reacie de acetilare
5. Conjugarea cu glutation Conjugarea cu glutation (GSH, g-lutmilcisteinil glici na) mai poart denumirea de conjugare mercapturic, deoarece metaboliii excretai n fina l prin urin sau bil sunt derivai de N-acetilcistein. Reacia presupune iniial adiia glu ationului la molecula de xenobiotic, care este catalizat de glutation-Stransferaz e, enzime solubile ce se gsesc n citosolul hepatocitelor, dar care au fost detecta te i n microzomi. Conjugaii sufer ulterior o scindare enzimatic i o acetilare, rezultn derivai de N-acetilcistein sau acizi mercapturici (Fig.3.40.). n compartimentul ex tracelular, glutationul poate reaciona cu compuii reactivi electrofili i n absena enz imelor dependente de GSH. Glutationul are un rol protector major n organism dator it proprietilor sale oxido-reductoare i inactiveaz diferite tipuri de compui reactivi are conin grupri electrofile i prezint o mare reactivitate fa de proteinele tisulare s au acizii nucleici. Pentru acest motiv, aceast reacie de conjugare a fost consider at o cale de detoxifiere, dar recent s-a dovedit c poate fi implicat i n bioactivarea unor substane. Compuii care se pot biotransforma prin conjugare mercapturic sunt: epoxizi derivai aromatici halogenai nitroderivai aromatici halogenuri de alchil co pui alifatici nesaturai 6. Metilarea Gruprile hidroxil, amino i tiol ale compuilor en dogeni, dar i ale xenobioticelor, pot fi metilate de mai multe metiltransferaze. Aceste enzime se gsesc n mod normal n citosol, dei au fost descrise i O-metiltransfer aze i Smetiltransferaze microzomiale. Donorul de grupri metil este n general S-aden ozil metionina (SAM), format din metionin i ATP (Fig.3.41.). La fel ca i acetilarea, reacia de metilare are mai degrab efect de reducere a hidrosolubilitii dect de creter e a acesteia. Unele metale, cum ar fi mercurul, plumbul, staniul, taliul, sau ne metale ca arsenul, seleniul, telurul, pot de asemenea s fie metilate sub aciunea m icroorganismelor, fapt care este deosebit de important n toxicologia mediului, de oarece compuii metilai sunt absorbii din tractul gastrointestinal i pot strbate barie rele hemato-encefalic i placentar mult mai uor dect formele anorganice.
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 73 O Glutation (GSH) Naftalina S G OH pierdere rest glutamil pierdere rest glicinil S CH2 OH CHCOOH NHCOCH3 OH S CH2 C H NH2 COOH Acid premercapturic H+ S Conjugat cu cisteina CH2 CHCOOH NHCOCH3 H2O Acid mercapturic Fig.3.40. Exemplu de conjugare mercapturic N H N S-Adenozil metionina (SAM) N N CH3 S-Adenozil homocisteina Fig.3.41. Exemplu de reacie catalizat de metiltransferaze
REZULTATUL BIOTRANSFORMRII XENOBIOTICELOR 1. Inducia enzimatic Multe medicamente, p oluani din mediu sau alte xenobiotice, stimuleaz propriul metabolism sau pe cel al altor compui administrai concomitent, modificndu-le efectele toxice. Fenomenul se produce printr-o cretere aparent a activitii enzimelor de metabolizare i poart denumir ea de inducie enzimatic, fiind util n interpretarea rezultatelor studiilor de toxic itate cronic, a mutagenezei sau carcinogenezei, sau n explicarea unor interaciuni m edicamentoase. Deoarece pot fi induse i propriile enzime de metabolizare, acest p roces poate explica instalarea toleranei dup administrarea cronic a unor substane, c um ar fi de exemplu derivaii barbiturici. Cele mai importante enzime ce pot fi in duse sunt izoenzimele citocromului P450, dar fenomenul a fost observat i n cazul U DPglucuronozil transferazelor, glutation transferazelor sau al unor reductaze. S e cunosc dou tipuri de inducie enzimatic: Inducia mediat de derivaii barbiturici, car se pare c induc transcripia ARN-ului mesager specific al CYP450, ceea ce determin creterea sintezei enzimelor de metabolizare la nivelul reticulului endoplasmatic neted din ficat sau alte esuturi extrahepatice. Inducia mediat de hidrocarburile ar omatice policiclice (HAP), care se pare c are loc prin legarea inductorului de o protein specific din citosol, care funcioneaz ca o molecul receptor. Complexul induct or-receptor determin formarea n nucleu a unui ARN mesager specific, iar citocromul nousintetizat este ncorporat n reticulul endoplasmatic. Printre inductorii citocr omului P450 se numr, n afar de derivaii barbiturici i de hidrocarburile aromatice poli ciclice: - fumul de igare - etanolul - compui din alimente (indoli, flavone, safro l, eucaliptol, xantine, peroxizi organici) - medicamente (carbamazepin, clotrimaz ol, eritromicin, glucocorticoizi, griseofulvin, izoniazid, omeprazol, fenitoin, pri midon, rifampicin, etc.) - insecticide organoclorurate (DDT), bifenili policloru rai Evoluia n timp a fenomenului de inducie enzimatic variaz n funcie de agentul indu r i de izoenzimele implicate. Astfel, dup tratamentul cu fenobarbital efectul indu ctor maxim se observ dup 48-72 ore, dup HAP n 24 de ore, iar n cazul inductorilor mai puin eficieni sunt necesare 6-10 zile pentru a se atinge nivelul maxim de inducie. UDP-glucuronozil transferazele pot fi induse de 3-metilcolantren, fumul de igare sau barbiturici.
2. Inhibiia enzimatic Inhibiia enzimelor de metabolizare a xenobioticelor poate ave a consecine majore asupra toxicitii, iar interaciunile medicamentoase care se explic prin acest mecanism au importan clinic mai mare dect cele produse prin inducie enzima tic. Impactul inhibiiei asupra substanelor toxice din mediu este mai redus, dar poa te avea relevan n situaia expunerii la locul de munc. Inhibiia se poate produce n majo itatea cazurilor dup administrarea unei singure doze de inhibitor. Au semnificaie toxicologic inhibiia citocromului P450, inhibiia esterazelor de ctre insecticidele o rganofosforice, sau a monoaminoxidazelor de ctre antidepresivele IMAO. n funcie de mecanismul prin care se produce, inhibiia citocromului P450 este de trei tipuri: Inhibiie reversibil- rezult n urma interaciunii reversibile a xenobioticului cu ionul Fe3+ din gruparea heminic a citocromului P450 sau cu situsurile lipofile ale apo proteinei. Interaciunea are loc nainte de etapa de oxidare a ciclului catalitic, i ar efectele dispar rapid dup oprirea administrrii inhibitorului. Dintre substanele care interacioneaz reversibil cu CYP450 fac parte: fluorochinolonele, cimetidina, unele antifungice, chinidina. Inhibiie prin complexarea CYP450. Unele alchilamine , care nu prezint ca atare activitate inhibitorie, pot fi oxidate de CYP450 la ni trozoalcani, care pot forma compleci stabili cu forma redus (feroas) a unor izoenzi me. Ca urmare, enzima nu mai este disponibil pentru activitatea catalitic i este ne cesar sinteza de novo a acesteia. Efectul inhibitor este de lung durat i poate fi re sponsabil de numeroase interaciuni medicamentoase. Substane care pot induce acest tip de inhibiie sunt: antibioticele din clasa macrolidelor (troleandomicina, erit romicina, claritromicina, care sunt inhibitori selectivi ai CYP3A4), unele antip arkinsoniene (orfenadrin). Compuii metilendioxifenil, de exemplu insecticidul pip eronil butoxid, pot genera metabolii intermediari care formeaz compleci stabili att cu forma feric ct i cu cea feroas a CYP450. Inhibiie prin formarea de substraturi sui cidare. Anumite substane care nu sunt inhibitori ai CYP450 conin grupri funcionale c e pot fi oxidate de sistemul enzimatic la metabolii care se leag ireversibil de en zim. Alchenele i alchinele pot inactiva CYP450 prin generarea de intermediari radi calici care alchileaz structura hemului. Medicamente care acioneaz prin acest mecan ism sunt: estrogenii 17 a-cetilenici, cloramfenicolul care prin declorurare oxida tiv genereaz un fragment acil, ciclofosfamida care poate forma acrolein i spironolac tona, prin metabolitul su 7-tio. - i compuii care lezeaz membrana reticulului endopl asmatic n care este localizat citocromul P450 pot aciona ca inhibitori enzimatici.
76 TOXICOLOGIE GENERAL Un tip particular de inhibiie este inhibiia competitv, care apare atunci cnd se admi nistreaz concomitent doi compui metabolizai de aceeai enzim. Gradul de inhibare a met abolizrii depinde de afinitatea fiecrui compus pentru enzim. Un exemplu cu semnific aie toxicologic este tratamentul intoxicaiilor cu etilenglicol sau metanol, substane care i datoreaz toxicitatea metaboliilor formai, prin administrarea de alcool etilic , care are o afinitate mai mare pentru alcool dehidrogenaz, mpiedicnd bioactivarea alcoolilor toxici. 3. Bioactivarea Metabolizarea xenobioticelor poate conduce la obinerea unor metabolii mai puin toxici, mai hidrofili i deci mai uor excretabili (d etoxifiere), dar i a unor metabolii cu o toxicitate mai mare dect a compusului print e (Fig.3.42.). Biotransformarea xenobioticelor relativ inerte, cu formarea de me tabolii intermediari reactivi, poart denumirea de bioactivare i reprezint adesea eve nimentul iniial care declaneaz un efect toxic. Xenobiotic Metabolit lipsit de toxicitate Eliminare Metabolit reactiv Legare de moleculele celulare (enzime, receptori, membrane, ADN) Toxicitate (Lezare tisulara, cancer, modificari fiziologice) Reparare celulara (repararea ADN, sinteza proteica etc.) Fig.3.42. Relaia ntre metabolismul, bioactivarea, detoxifierea i toxicitatea unui x enobiotic Natura i stabilitatea metaboliilor reactivi Metaboliii reactivi sunt epoxizi, chino ne, radicali liberi, specii reactive de oxigen, conjugai instabili. Datorit marii lor reactiviti, aceti metabolii sunt
adesea considerai a avea o durat de via scurt. ns, datorit transportului lor de la un t la altul, durata de via poate crete. Ei pot fi clasificai n: Metabolii cu durat de a foarte scurt: sunt metabolii care se leag n principal de enzima care i genereaz, cu ste cazul substraturilor suicidare, sau de proteinele adiacente. Metabolii cu dur at de via scurt: sunt metabolii care rmn n celul sau se deplaseaz doar n celulele Leziunile celulare sunt localizate i se produc la locul de bioactivare. Un exemp lu ar fi necroza hepatic centrolobular indus de tetraclorura de carbon n urma bioact ivrii sale la radical triclormetil. Metabolii cu durat lung de via: sunt metabolii c pot fi transportai i n alte celule i esuturi dect cele unde sunt produi; ei pot fi tr nsportai nu numai ca atare, ci i sub form de conjugai, din care intermediarul reacti v este eliberat n esutul int n condiii specifice. De exemplu, aminele aromatice cancer igene sunt metabolizate n ficat la derivai N-hidroxilai care, dup glucuronoconjugare , sunt transportai n vezica urinar unde sunt eliberai metaboliii N-hidroxi la un pH a cid al urinei. Soarta n organism a metaboliilor reactivi Aceasta depinde de natura speciilor reac tive i de fiziologia organismului i poate fi: Legarea de macromoleculele celulare : proteine, polipeptide, ARN, ADN. Aceast legare covalent este considerat a fi even imentul iniial n procese toxice cum ar fi: mutageneza, carcinogeneza, necroza celu lar. Peroxidarea lipidelor poate conduce la distrugerea membranelor i la iniierea n ecrozei celulare. Captarea i inactivarea: n general se realizeaz prin conjugarea cu glutationul. Reacii prin care are loc bioactivarea 1. Reacii de oxidare 1.1. Reacia de epoxidare Monooxigenazele microzomiale pot converti numeroi compui aromatici n epoxizi. Dato rit caracterului electrofil, acetia pot reaciona cu gruprile nucleofile ale macromol eculelor biologice, cum ar fi proteinele i acizii nucleici, inducnd necroz sau canc ere. Un exemplu interesant de bioactivare pe aceast cale este biotransformarea br ombenzenului (Fig.3.43). Epoxidul brombenzenului se poate lega covalent de
78 TOXICOLOGIE GENERAL macromolecule producnd leziuni tisulare, dar metabolizarea pe celelalte ci poate p reveni acest efect. Calea cea mai important de metabolizare o constituie conjugar ea cu glutationul, ea servind drept un mecanism de protecie; doar dup ce nivelele hepatice ale glutationului redus sunt mult diminuate, epoxidul se va lega semnif icativ de macromolecule, producnd necroz hepatic. Depleia de glutation poate s apar n rezena unor doze mari de brombenzen sau dup inducia enzimelor microzomale. Ali compui care pot forma epoxizi n cursul biotransformrii sunt: aflatoxina B1 , benzenul, b enzpirenul, bifenilii policlorurai, tricloretilena, clorura de vinil, furosemidul . Formarea acestor metabolii are loc n principal la nivel hepatic. Br Br microzomi NADPH + O2 brombenzen O H ne-enzimatic legare covalenta de macromolecule H epoxidul brombenzenului rearanjare ne-enzimatica GSH transferaza Br hidrolaza Br Br OH H OH p-bromfenol GS H HO H OH H 3,4-dihidro-3-hidroxi-4S-glutationil-brombenzen 3,4-dihidro3,4-dihidroxibrombenzen Fig.3.43. Biotransformarea brombenzenului 1.2. Reacii de N-oxidare Aminele teriare sunt transformate n N-oxizi, care sunt n ge neral mai puin toxici, n timp ce aminele primare i secundare sunt metabolizate la h idroxilamine. Acestea, prin eliminare sau prin esterificare urmat de eliminare, p ot forma ioni de
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 79 nitreniu foarte reactivi. Aceti ioni, gsindu-se n echilibru cu formele mezomere car bocationice, au o mare afinitate pentru macromoleculele nucleofile, cum ar fi ac izii nucleici. Metaboliii N-hidroxilai pot fi la rndul lor conjugai. Conjugaii cu aci d glucuronic sunt uor excretabili, n timp ce sulfoconjugaii pot fi instabili, avnd e fecte mutagene, cancerigene sau puternic toxice. Acest mecanism este responsabil de hepatocarcinogenitatea acetilaminofluorenului (Fig.3.44.). OH CH3 O2 O acetilaminofluoren CYP450 NADPH PAPS sulfotransferaza SO3H O N O CH3 O N CH3 H N HSO4 N O ion 1-carbeniu CH3 N O ion nitreniu CH3 N O ion 3-carbeniu CH 3 INTERACTIUNE CU MACROMOLECULELE CELULARE (ADN) GENOTOXICITATE Fig.3.44. N-oxidarea acetilaminofluorenului
1.3. Reacii de oxidare nemicrozomial sub aciunea alcool-dehidrogenazei i a aldehid d ehidrogenazei Aceste reacii sunt responsabile de aciunea toxic a unor alcooli ca al coolul metilic, sau glicoli ca etilenglicolul. Aceste substane i datoreaz aciunea tox ic n principal metaboliilor lor reactivi, aldehide sau acizi, i doar n mic msur compu ui printe. 2. Formarea radicalilor liberi i a speciilor active de oxigen Speciile reactive de oxigen se pot forma n timpul ciclurilor redox ale unor xenobiotice cu m ar fi chinonele sau nitroderivaii aromatici. Radicalii liberi rezult n urma accep trii sau pierderii unui electron, sau n urma clivajului homolitic al unei duble le gturi. Aceste entiti foarte reactive pot ataca componente celulare, inducnd diferite fenomene toxice, iar aspectele legate de toxicologia lor vor fi tratate ntr-un c apitol separat. 3. Reacii de reducere 3.1. Reducerea nitroderivailor are loc n mai multe etape, formndu-se iniial anionul radical nitro, apoi nitrozo derivatul, radi calul nitroxil, hidroxilamina i n final amina primar (Fig.3.45.). Fiecare din aceti intermediari poate avea aciune toxic. Hidroxilaminele sunt responsabile de inducer ea methemoglobinemiei, n timp ce mutagenitatea i carcinogenitatea se datoreaz inter aciunii anionului radical nitro, nitrozoderivailor sau hidroxilaminelor esterifica te cu macromoleculele celulare. n timpul metabolizrii se pot forma i specii reactiv e de oxigen. 4. Reacii de conjugare Dei mult vreme s-a crezut c reaciile din faza II, cu excepia reaciilor de metilare, sunt exclusiv reacii de detoxifiere, n ultima per ioad s-a demonstrat c i n urma conjugrii pot rezulta intermediari reactivi, capabili s induc toxicitate. 4.1. Glucuronoconjugarea n general, glucuronidele au reactivita te biologic i chimic mai redus dect a compuilor printe, fiind eliminate rapid din orga ism. Exist ns i excepii, un exemplu notabil fiind cel al morfinei, care este glucuron oconjugat n intestin i n ficat formnd morfin-3-O-glucuronida i morfin-6-O-glucuronida. Metabolitul principal este 3-O-glucuronida, care are o concentraie sanguin de 20 de ori mai mare dect a morfinei i care din punct de vedere farmacologic este un an tagonist opiaceu i are proprieti excitante. 6-O-Glucuronida, cu o concentraie sangui n de 2 ori mai mare dect a morfinei, are o activitate analgezic de 650 de ori mai m are dect a acesteia. Astfel, efectele analgezice ale morfinei sunt rezultatul int eraciunii complexe a medicamentului i a celor doi metabolii asupra receptorului opi aceu. De asemenea, se pare c morfin-6-glucuronida este capabil
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 81 s ptrund n creier, n ciuda hidrofiliei sale, prin plierea moleculei i folosirea unui s istem activ de transport al anionilor. e O Ar N Ar N nitroderivat O aromatic O Ar N O anion radical O nitro nitrozoderi vat e , H O O OH HO OH LEZAREA COMPONENTELOR CELULARE (proteine, acizi nucleici) Ar O O H N O radical nitroxil e , H H Ar N OH arilhidroxilamina 2e , 2H H2O Ar NH2 amina aromatica Fig.3.45. Bioactivarea nitroderivailor aromatici Glucuronoconjugarea este de asemenea capabil s promoveze lezarea celular prin facil itarea formrii unor intermediari reactivi electrofili i transportul lor la esuturil e int. Astfel, aminele aromatice pot fi N-hidroxilate i transformate n ficat n N-gluc uronide care sunt excretate n urin. La nivelul vezicii urinare, datorit pH-ului aci d, pot fi hidrolizate, elibernd N-hidroxilaminele care la rndul lor se pot transfo rma n compui electrofili capabili s reacioneze cu macromoleculele tisulare inducnd tu mori locale (Fig.3.46.).
82 TOXICOLOGIE GENERAL ficat H NH2 UDPGA N OH glucuronida N OH urina glucuronida N OH H+ acid glucuronic H N OH intermediar reactiv electrofil Fig.3.46. Bioactivarea aminelor aromatice
O alt clas de glucuronide reactive sunt acil glucuronidele, formate prin esterific area acizilor carboxilici cu acidul glucuronic. Acestea au semnificaie toxicologi c important datorit numrului mare de medicamente care conin grupri carboxilice i a rol lui major pe care l are glucuronidarea n eliminarea lor. Astfel de medicamente fac parte din clasa antiinflamatoarelor nesteroidiene, a hipolipemiantelor (clofibr at), sau a anticonvulsivantelor (acid valproic), iar
utilizarea lor clinic a fost asociat cu diferite manifestri cum ar fi hepatotoxicit atea, nefropatia sau reaciile alergice. Se pare c aceste efecte toxice sunt mediat e de acil glucuronide, care pot suferi reacii de migrare a gruprii acil n timpul cro ra are loc atacul macromoleculelor celulare nucleofile. Glucuronoconjugaii estrog enilor sunt considerai a fi responsabili de colestaza intrahepatic care poate fi a sociat cu utilizarea contraceptivelor orale, printr-un mecanism care nu a fost co mplet elucidat. 4.2. Sulfoconjugarea Sulfoconjugarea poate conduce la formarea d e reactivi intermediari capabili s genereze metabolii electrofili. Substane care po t fi bioactivate pe aceast cale sunt alcoolii benzilici (Fig.3.47.), hidroxilamin ele aromatice (ex. hidroxilamina acetilaminofluorenului, Fig.3.44.), acizii hidr oxamici aromatici, nitroalcanii, unii compui aromatici policiclici. Sulfoconjugaii rezultai sunt instabili i reactivi. Ei pot pierde gruparea sulfat fie prin hidrol iz spontan, fie prin aciunea sulfatazelor, formnd n final ioni nitreniu sau carboniu, capabili s reacioneze cu proteinele i cu acizii nucleici i s conduc la necroz sau can ere. De asemenea, se crede c unele aziridine, analogi azotai ai epoxizilor care su nt mutageni foarte puternici, sar putea forma pe cale metabolic din aminoalcooli, prin intermediul sulfotransferazelor. R2 N OSO3 R1 R1 N R2 + ion nitreniu SO42H2 C OSO3 H2 C + R3 R3 ion carboniu SO4 2Fig.3.47. Bioactivarea acizilor hidroxamici i a alcoolilor benzilici
84 TOXICOLOGIE GENERAL 4.3. Conjugarea cu glutationul Dei aceast reacie de conjugare este considerat mai de grab o modalitate eficient de inactivare a intermediarilor reactivi, ea poate totui conduce la toxicitate prin mai multe ci: - formarea de conjugai ce pot pune n libe rtate ioni de sulfoniu extrem de reactivi. Acest mecanism explic mutagenitatea i c arcinogenitatea dibrometanului, folosit ca insecticid, fungicid i aditiv n combust ibilii lichizi, precum i a altor compui dihalogenai vicinali (Fig.3.48.) X H X S [Glutation] S [Glutation] X INTERACTIUNE CU MACROMOLECULE NUCLEOFILE X S [Glutation] Ion sulfoniu Fig.3.48. Bioactivarea la ion sulfoniu - formarea unui conjugat cu cisteina care este activat de b-liz, obinndu-se intermed iari reactivi ca: tioli, tiocetene, tiolactone, halogenuri de tionoacil, depende nt de structura conjugatului (Fig.3.49.). Un exemplu este activarea hexaclorobut adienei, care se metabolizeaz la un tiol reactiv.
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 85 Gly R S Cys g Glu R S C C NH3 b-liaza + COO
conjugat cu glutationul N-acetilare R SH R S C C HN COO C O CH3 Fig.3.49. Bioactivarea dependent de bliaz - conjugarea chinonelor i chinoniminelor, care a fost implicat n nefrotoxicitatea u nor compui aromatici cum ar fi brombenzenul i paminofenolul. n cazul brombenzenului , nefrotoxicitatea se datoreaz conjugailor cu glutation ai bromhidrochinonei forma t n faza I de metabolizare. Restul glutation este responsabil de alegerea rinichiu lui ca organ int, deoarece conjugatul se elimin renal, iar la acest nivel hidrochin ona este oxidat la o chinon reactiv, care se poate lega covalent direct de macromol eculele celulare sau poate produce specii reactive de oxigen prin intermediul un ui ciclu redox. - conjugarea reversibil, care permite eliberarea speciilor reacti ve ce au fost iniial detoxifiate. Conjugaii cu glutationul servesc n acest caz pent ru transportul la int sau pentru intirea unor anumite organe. Clasele de compui la c are conjugarea cu glutationul este reversibil sunt izocianaii, izotiocianaii i alfabeta cetonele sau aldehidele nesaturate. 4.4. Acetilarea Reacia de acetilare a fo st implicat n carcinogenitatea unor amine aromatice, care dup acetilare pot fi oxid ate la aril-N-hidroxiamide, care formeaz n final ioni de aril nitreniu (Fig.3.50.) :
86 TOXICOLOGIE GENERAL Ar Ar NH2 Ar NH COCH3 N OH aril-N-hidroxiamide COCH3 Ar Ar NH N H O C O CH3 ion arilnitreniu aril-acetoxi-amide Fig.3.50. Bioactivarea aminelor aromatice acetilate n cazul tuberculostaticului izoniazid, acetilarea urmat de hidroliz i de oxidare micr ozomial conduce la formarea de radicali liberi acetil i de carbocationi, care sunt responsabili de hepatotoxicitatea medicamentului (Fig.3.51.): 5. Bioactivarea n tubul digestiv - n mediul acid stomacal, nitriii i anumite amine pot forma nitrozam ine, care sunt carcinogene puternice. - Nitraii, n anumite condiii, se pot transfor ma n nitrii i pot produce methemoglobinemie. - Ciclamatul este convertit de bacteri ile intestinale n ciclohexilamin, care produce atrofie testicular.
NOIUNI DE TOXICOCINETIC 87 H O N NH2 acetil CoA Polimorfism acetilator O H N N H O O C H N H2N OH N izoniazida N O acetilhidrazina N acid izonicotinic N-acetil izoniazida H N N O O O H N N H O acetil nitrozamina diacetilhidrazina HO N N EXCRETIE URINARA O acetil diazohidroxid DETOXIFIERE N N O O radical acetil Proteina O cation acil Nu Proteina Nu O PROTEINA ACETILATA INTOXICATIE N2 Fig.3.51. Bioactivarea izoniazidei
RELAII DOZ-EFECT N TOXICOLOGIE Relaia ntre doza unui compus i toxicitatea sa este un concept fundamental n toxicolo gie, care a fost enunat pentru prima dat de Paracelsus. Aceast relaie implic cuantifi carea efectului toxic i stabilirea unei legturi de cauzalitate cu expunerea la xen obiotic. Toxicitatea reprezint capacitatea unei substane de a produce efecte toxic e. Ea este o calitate intrinsec a moleculei, dar n acelai timp are o valoare relati v, deoarece intensitatea efectelor produse depinde de doz, de individ i de circumst anele n care s-a produs intoxicaia. Efectul toxic este rezultatul duntor sau advers a l aciunii substanei toxice asupra organismului, consecutiv alterrii mecanismelor bi ochimice sau a echilibrelor fiziologice. Toxicitatea depinde deci de expunerea l a compusul toxic, iar aceasta este la rndul ei determinat de doz i de durata expuner ii. Dac se ine cont de aceste aspecte, toxicitatea poate fi definit (Rozman & Doull , 2000) ca fiind acumularea de leziuni pe perioade scurte sau lungi de timp, care fac organismul incapabil s funcioneze n limitele de adaptare. Doza este cantitatea de substan care ptruns n organism ntr-un anumit interval de timp (n general 24 de ore) produce un anumit efect. Ea poate face ca efectul substanei s varieze n limite foa rte largi. Astfel, dac ne referim la medicamente, se disting trei tipuri de doze: doze terapeutice, doze toxice i doze letale. n ceea ce privete noiunea de timp, pen tru toxicologie este important faptul c evoluia n timp a unei substane toxice n organ ism (toxicocinetica) este adesea foarte diferit de evoluia n timp a toxicitii (toxico dinamica). De aceea, relaiile farmacocinetic-farmacodinamic, care descriu la acelai individ relaia cantitativ ntre efectul indus de compus i concentraia corespunztoare n imp a acestuia, sunt foarte importante pentru evaluarea diagnosticului i a progno sticului intoxicaiilor. Efectul poate fi apreciat prin intensitatea sa, adic prin rspuns. Rspunsurile la substanele toxice pot fi de dou tipuri: Rspunsuri gradate, car e pot fi msurate pe o scal continu, de la un rspuns minim la un rspuns maxim; pot fi o modificare farmacologic, biochimic sau patologic care prezint o variaie procentual s au proporional Rspunsuri cuantale, sau rspunsuri de tip totul sau nimic, cnd intensi ea efectului este msurat prin numrul indivizilor care rspund dintr-un grup de indivi zi care au fost expui n mod egal. Exemple de astfel de rspunsuri sunt moartea sau i nducerea tumorilor.
RELAII DOZ-EFECT N TOXICOLOGIE 89
Indiferent de tipul de rspuns care se folosete pentru aprecierea toxicitii, relaia do z-rspuns se bazeaz pe urmtoarele ipoteze: - a) rspunsul toxic depinde de concentraia c ompusului la locul de aciune - b) concentraia la locul de aciune este determinat de doz - c) rspunsul este n raport de cauzalitate cu compusul administrat Reprezentare a grafic a procentului de rspuns n funcie de doza la care a fost expus organismul po art denumirea de curba doz-rspuns, iar forma ei depinde de tipul de efect toxic msur at i de mecanismul prin care acesta se produce. De exemplu, ionul cianur se leag fo arte puternic de citocromul a3, ntrerupnd funcionarea lanului transportor de electro ni din mitocondrii i stopnd astfel respiraia celular. Deoarece aceast funcie este vita l pentru viaa celulei, curba doz-rspuns va fi foarte abrupt. Un alt aspect important al relaiei doz rspuns este conceptul de prag, respectiv o doz sub care probabilitate a de rspuns este egal cu zero. De exemplu, n unele cazuri este necesar ocuparea unui anumit numr de receptori pentru ca rspunsul s devin evident. Un prag poate s apar i a unci cnd receptorul este complet ocupat sau saturat. De exemplu, o enzim implicat n biotransformarea unei substane toxice poate fi saturat, permind astfel compusului s u rmeze o alt cale de metabolizare, care este responsabil de apariia toxicitii. Un astf el de caz este cel al paracetamolului, care la doze terapeutice are o hepatotoxi citate foarte redus; chiar dac se formeaz metabolitul toxic N-acetil-p-benzochinoni mina, acesta este rapid detoxifiat prin conjugare cu glutationul. La doze mari ns, glutationul intracelular este consumat, metabolitul toxic se acumuleaz n celul i pr oduce toxicitate hepatic fatal. n principiu, curba doz-rspuns este derivat din curba G aussian care descrie o distribuie normal n sistemele biologice (Fig.4.1.). Aceast cur b n form de clopot este rezultatul variaiei biologice, ceea ce nseamn c la dozele mici la dozele mari rspund puine animale, majoritatea rspunznd n jurul dozei medii. O dis tribuie Gaussian perfect permite obinerea unei curbe doz-rspuns de forma unei sigmoide simetrice (Fig.4.2.). Cu ct se utilizeaz mai multe animale, cu att curba este mai apropiat de o sigmoid adevrat. Poriunea curbei ntre procentul de rspuns de 16% i cel 84% este cea mai apropiat de liniaritate i permite determinarea unor parametrii cu m ar fi doza medie letal (DL50 ), sau doza medie eficient (DE50). Liniaritatea cur bei poate fi mbuntit prin reprezentarea logaritmului dozei, care este o metod empiric. Uneori, curba poate fi liniarizat i prin alte metode, cum ar fi metoda probit, car e convertete procentul de letalitate n uniti probit. Procentul de letalitate de 50% corespunde probitului 5, doza care corespunde procentului de letalitate de 84% r eprezint + 1 DS (deviaia standard) de la DL50, iar cea care corespunde letalitii de 16% reprezint 1 DS.
90 TOXICOLOGIE GENERAL 25 20 Frecventa letalitatii (%) 15 10 5 0 0 20 40 60 80 100 Doza (mg/kg) scara logaritmica Fig.4.1. Relaia doz rspuns exprimat ca frecvena distribuiei 100 % Letalitate sau % Raspuns 80 60 40 20 0 10 15 20 25 30 35 40 Doza (mg/kg) scara logaritmica Fig.4.2. Curba doz-rspuns Rspunsul toxic cel mai uor de msurat este letalitatea, care reprezint un rspuns de ti p cuantal. De aceea, pentru aprecierea toxicitii acute a substanelor se folosete doz a medie letal (DL50), a crei determinare este de obicei primul experiment care se realizeaz pentru substanele chimice noi. DL50 este doza de compus care produce moa rtea a 50% din animalele expuse. Ea este o valoare virtual, obinut prin calcul stat istic, nu o constant biologic. Numeroi factori pot influena toxicitatea, afectnd astf el estimarea DL50 . Astfel de factori pot fi:
RELAII DOZ-EFECT N TOXICOLOGIE 91 rasa animalului, vrsta i greutatea, natura hranei, condiiile de vivariu, oprirea al imentelor nainte de efectuarea testului, metoda de administrare, volumul i natura mediului de condiionare, durata observrii animalelor. Datorit acestor variabile, pe ntru multe scopuri este suficient doar determinarea ordinului de mrime a DL50 (ex. ntre 5 i 50 mg/kg, ntre 50 i 500 mg/kg, etc.), nu i a valorii absolute. Doza medie l etal este exprimat n mg/kg greutate corporal, precizndu-se specia pe care s-a fcut det erminarea, calea de administrare i timpul de urmrire a animalelor. Metodele de tes tare sunt foarte bine standardizate de reglementrile internaionale pentru a evita diferenele ntre laboratoare i pentru a reduce la minim erorile. Pentru substanele to xice din aer sau din ap se determin concentraia letal medie (CL50), care reprezint co ncentraia ce produce moartea a 50% din animalele expuse, precizndu-se n mod obligat oriu i timpul de expunere. Rezultatele obinute n experimentele pe animale sunt apoi extrapolate la om inndu-se cont de anumii factori de securitate. Pentru o evaluare mai exact a toxicitii, Luckey i Venugopal au introdus conceptul de potenial de toxic itate: pT = - log T unde T este doza molar de substan, exprimat n moli/kg. Acest para metru ine cont de numrul de molecule, respectiv numrul de atomi implicai n procesele fiziopatologice i se poate aplica oricrui tip de efect. Conceptul poate contribui la explicarea i cuantificarea mecanismelor de toxicitate i a toxicitii proprii a sub stanei, deoarece ia n calcul numrul de atomi sau molecule prezeni la locul de aciune. Se face astfel o apreciere mai precis a toxicitii, dar conceptul este mai ales teo retic, deoarece n practic se folosete n continuare aproape exclusiv DL50 pentru apre cierea toxicitii n scopuri reglementare. Relaia doz-rspuns permite i compararea ntre erite rspunsuri, ntre diferite substane sau ntre diferite specii animale. Astfel, pe baza valorii DL50, substanele toxice pot fi mprite n diferite clase de toxicitate: E xtrem de toxice DL50 1 mg/kg Foarte toxice 1mg/kg DL50 50 mg/kg Moderat toxice 5 0mg/kg DL50 500 mg/kg Slab toxice 500mg/kg DL50 5000 mg/kg Practic netoxice 5000 mg/kg DL50 15000 mg/kg Lipsite de toxicitate DL50 15000 mg/kg
RISCUL I EVALUAREA RISCULUI Riscul de producere a unei intoxicaii prin substane chi mice nu depinde numai de toxicitatea intrinsec a moleculei, ci i de numeroi ali fact ori, dintre care cel mai important este gradul de expunere. n msura n care expunere a omului la aceste molecule nu poate fi evitat, este indispensabil evaluarea toxic ologic, ce urmrete determinarea gradului de expunere care este asociat cu absena ris cului. Riscul este definit ca frecvena presupus cu care apar efecte nedorite ca ur mare a expunerii la o substan toxic. El poate fi exprimat ca un risc absolut, corel at direct cu substana toxic, sau ca un risc relativ, care reprezint raportul dintre riscul observat la o populaie expus la toxic i cel observat la o populaie neexpus. A numite efecte toxice pot fi observate doar de la o doz-prag, sub care nu exist rspu ns detectabil. Acest nivel la care nu se observ efect (NOEL= No Observed Effect L evel) se poate aplica att la un rspuns cuantal, cum ar fi moartea sau o leziune pa tologic, ct i la un rspuns ca inhibiia unei enzime sau legarea de un receptor. Existe na acestui prag poate fi explicat prin saturarea unei enzime sau a unui sistem de reparare fiziologic. Nivelul cel mai ridicat de doz care nu produce nici o cretere semnificativ a rspunsului advers este NOAEL (No Observed Adverse Effect Level). Ac est nivel de doz nu trebuie considerat a fi complet lipsit de risc i valoarea sa d epinde de numrul nivelelor de doze testate, de numrul animalelor incluse n test i de incidena de fond a rspunsurilor adverse la lotul martor neexpus. O alt doz folosit e ste LOAEL, nivelul de doz cel mai redus la care se observ efecte adverse (Lowest O bserved Adverse Effect Level). Conceptul de doz-prag este un concept important n t oxicologie, deoarece permite extrapolarea dozelor toxice obinute n experimentele p e animale i evaluarea ulterioar a riscului la om. Astfel, NOAEL se utilizeaz pentru stabilirea limitelor de expunere, cum ar fi dozele de referin (DRf) i dozele zilni ce admisibile (DZA). Dozele de referin (DRf) sau concentraiile de referin (CRf) estim eaz expunerea zilnic la o substan care este presupus a fi lipsit de efecte adverse asu pra sntii populaiei umane. Doza zilnic admisibil (DZA) este doza de substan care poa ingerat de un individ zilnic, pe parcursul ntregii sale viei, fr a produce, pe baza cunotinelor actuale, efecte nedorite. Termenul a fost introdus de Comitetul de Exp eri FAO/OMS pentru aditivii alimentari n 1962. Iniial a fost utilizat pentru evalua rea aditivilor alimentari i a reziduurilor de pesticide din alimente, iar ulterio r folosirea sa a fost extins la substanele chimice din alimente i la ap. DZA se expr im n mg compus per kg greutate corporal per zi i poate fi calculat plecnd de la valori le NOAEL prin divizarea acestora cu anumii factori de securitate. Valorile NOAEL se determin ntr-un studiu corespunztor de
RELAII DOZ-EFECT N TOXICOLOGIE 93 toxicitate la animal (ex. un studiu de administrare repetat timp de 90 de zile) n care se obin dozele zilnice n alimente la care nu se observ efecte adverse (NOAEDD = No Observed Adverse Effect Daily Dose). [consumul zilnic de alimente x NOAEDD (mg/kg aliment)] greutatea corporal a animalului (kg) NOAEL = DZA = [NOAEL] / [factor de securitate (FS)] Factorii de securitate permit extrapolarea rezultatelor de la animal la om i in co nt de variaia ntre specii, de numrul de animale din experiment, de mecanismul de aci une, de toxicocinetic i de relevana rspunsului la animal pentru riscul la om. Valoar ea factorului de securitate variaz ntre 10 i 2500, dependent de natura substanei i de datele disponibile cu privire la toxicitate; ea este n general de 100. Pentru su bstanele carcinogene genotoxice se calculeaz pa baza unor modele matematice. Pentr u alimente se mai calculeaz i Nivelul Permis (NP) care poate fi obinut din DZA: [DZ A x greutatea corporal a omului (kg)] Consumul alimentar zilnic x FS adiionali NP (mg/kg) = Pentru evaluarea la om a toxicitii aditivilor alimentari sau a poluanilor, se recom and ca 90% din DZA s fie atribuit alimentelor, 10% aerului (20 m3/ zi) i 1% apei de but. Pentru mediul nconjurtor se calculeaz Doza Zilnic Medie pe Durata Vieii (LADD = L ifetime Average Daily Dose), care se poate aplica att la om ct i la celelalte speci i din mediu: Concentraia toxicului x frecvena x fracia x durata expunerii n mediu co ntactului contactului (greutatea corporal) x (durata vieii) LADD = Pentru mediul de munc se calculeaz concentraii ce poart denumirea de valori prag lim it. Se disting trei tipuri de praguri: - valori-prag - medie ponderal n timp, care sunt concentraiile medii la care un muncitor poate fi expus timp de 8 ore zilnic sau 40 de ore pe sptmn, fr a se constata efecte adverse
- valori plafon, care sunt concentraiile ce nu pot fi depite n nici un moment pe par cursul zilei de munc. Se stabilesc n special pentru substanele ale cror efecte princ ipale se datoreaz cumulrii n urma expunerii repetate la concentraii curente (ex. met ale grele, solveni organici). - Valori prag limit pentru perioade scurte de timp ( 15 minute), care nu trebuie s depeasc media ponderal zilnic i care nu pot fi atinse de mai mult de 4 ori pe zi sau la un interval mai mic de o or. O alt valoare des ntreb uinat n mediul de munc, dar i n cel comunal, este Concentraia Maxim Admisibil (CMA), reprezint concentraia de substan la care muncitorii pot fi expui continuu, timp de 8 ore zilnic, ani n ir sau chiar ntreaga via, fr a produce, cu excepia cazurilor de hi sensibilizare, nici un simptom de boal sau condiie fizic proast. CMA se stabilesc pe ntru aer, ap, sol, att n mediul industrial ct i n cel comunal. CMA din mediul comunal au valori mai mici dect cele din mediul industrial, deoarece n acest mediu se triete timp de 24 de ore pe zi i de asemenea triesc i copii i persoane cu diferite afeciuni , care au o sensibilitate mai mare la aciunea substanelor toxice. Pentru aer, CMA se exprim n mg/m3 aer, mg/l aer sau p.p.m. Pentru mediul nconjurtor i pentru mediul d e munc, riscul pe care l prezint o substan mai poate fi caracterizat i cu ajutorul uno r Indici Biologici de Expunere sau Biomarkeri, care sunt parametri ce permit evi denierea absorbiei sau a acumulrii xenobioticului n organism. Acetia pot servi ca i cr iterii de apreciere a gradului de afectare i pot fi: - a) parametri chimici: conc entraia substanei toxice sau a metaboliilor si n lichidele biologice sau n esuturile o ganismului - b) parametri biochimici ce pot fi modificai de expunerea la substana toxic: ioni, glucoz, activitate enzimatic - c) parametri funcionali: modificri ale fu nciilor fiziologice capacitate respiratorie, reflexe, diurez - d) parametri histol ogici: leziuni tisulare Pentru medicamente, aprecierea riscului, respectiv a sec uritii utilizrii lor se face cu ajutorul urmtorilor parametri: 1. Indicele terapeuti c = factor relativ de securitate care este raportul dintre doza medie letal i doza medie eficient (DE50): IT = DL50 / DE50
RELAII DOZ-EFECT N TOXICOLOGIE 95
El d indicaii asupra securitii utilizrii medicamentului i anume cu ct este mai mare, c att securitatea relativ este mai mare. Cnd IT este mai mic dect 1, substana nu poate fi utilizat ca medicament, cnd IT este 1, utilizarea este periculoas, iar cnd IT es te mai mare de 1, ea poate fi utilizat ca medicament. Dac IT este sub 10, riscul t erapeutic este ns pronunat (ex. glicozizii cardiotonici). 2. Marja de securitate = factorul de securitate cert este un parametru care apreciaz mai exact securitatea medicamentului deoarece ine cont de forma i panta curbei doz-rspuns (fig.4.3.): Mar ja de securitate = DL1 / DE99 Fig. 4.3. Curbele doz-rspuns pentru efectul farmacologic i pentru efectul letal 3. Limita de securitate standard (Lss): Lss = [(DL1 DE99) / DE99] x 100 Limita d e securitate standard apreciaz de cte ori trebuie mrit doza eficient pentru a se ajun ge la o doz toxic. 4. Coeficientul de securitate: CS = DL50 / CMA
Coeficientul de securitate indic timpul ct poate aciona substana toxic fr a produce ef cte nocive. El se refer la toate substanele, nu numai la medicamente, iar valorile depind de tipul de substan i de mecanismul prin care acioneaz, precum i de frecvena e punerii: - pentru medicamente: ntre 10 i 100 - pentru aditivi alimentari: ntre 100 i 1000 - pentru contaminani metale grele: ntre 1000 i 15000 - pentru contaminani orga nici: ntre 15000 i 20000 - pentru substane cancerigene i mutagene: > 50.000 Toxicita tea cronic a substanelor poate fi cuantificat n mod asemntor cu toxicitatea acut, util znd conceptele de doz medie toxic (DT50) sau de doz medie letal (DL50 ). Acestea se d etermin msurnd rspunsul toxic pe o perioad de timp, de obicei de 90 de zile, dup care se reprezint grafic procentul rspunsului n funcie de doza exprimat n mg/kg/zi, obinnd e curba dozrspuns. Compararea msurtorilor de toxicitate cronic cu cele de toxicitate acut poate evidenia acumularea compusului n organism, permind o aproximare destul de grosier a timpului su de njumtire. Acumularea n organism poate fi exprimat cantitativ in factorul de cronicitate, care este raportul dintre DL50 dup o doz i DL50 dup 90 d e doze (exprimat n mg/kg/zi). Dac valoarea factorului de cronicitate este de 90, co mpusul este absolut cumulativ, dac este mai mare de 2, substana este relativ cumul ativ, iar dac este mai mic de 2, este relativ necumulativ.
FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA Dac toxicitatea este o proprietate intrinsec a unei substane toxice, natura i intens itatea manifestrilor care apar la nivelul organismului expus sunt condiionate de o serie de factori care trebuie luai n considerare atunci cnd se face extrapolarea r ezultatelor testelor de toxicitate de la animal la om, sau cnd se interpreteaz rez ultatele testrii clinice a medicamentelor. Aceti factori pot fi clasificai n: - fact ori chimici, dependeni de substana toxic - factori biologici, dependeni de organismu l expus - factori de mediu, determinai de condiiile n care a avut loc expunerea I. FACTORI CHIMICI CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA
1. Doza Unul din factorii majori care influeneaz potenialul toxic al substanelor chi mice este doza. ntre cantitatea de substan administrat i efectul observat exist o core laie, pentru marea majoritate a compuilor constatndu-se o proporionalitate ntre doz i fect ntre anumite limite. Relaia este reprezentat grafic printr-o sigmoid. Pentru su bstanele cumulative, aceast proporionalitate este valabil numai pn la o anumit valoare a dozei, peste aceasta creterea efectului fiind mult mai mare. Relaia se reprezint grafic printr-o hiperbol. 2. Structura chimic Un efect biologic este rezultatul ul tim al interaciunii dintre o substan i o molecul int din organism, motiv pentru care e ectele toxice ale unui compus pot fi corelate cu anumite caracteristici structur ale ale acestuia. De asemenea, structura moleculei este responsabil de proprietile fizico-chimice ale acesteia, dintre care unele sunt determinante pentru transpor tul moleculei n organism, pentru metabolizarea acesteia sau pentru interaciunea cu inta molecular, cum ar fi: lipofilia, mrimea, pKa-ul, ionizarea, chiralitatea. Atu nci cnd se sintetizeaz o nou substan chimic, indiferent de domeniul viitor de utilizar e a acesteia, este important s se cunoasc potenialul ei toxic asupra sntii omului, dar asupra mediului nconjurtor. Datorit numrului mare de compui noi, dar i a costurilor f oarte ridicate ale testelor toxicologice, a devenit necesar studierea relaiilor ca re exist ntre structur i activitatea biologic i au fost elaborate diferite tehnici
cunoscute sub denumirea de Relaii Cantitative Structur-Activitate (QSAR = Quantita tive Structure-Activity Relationships). Aceste tehnici permit prevederea activitii biologice a unei substane, plecnd de la structura acesteia, chiar naintea sintetizr ii ei. Ele au fost iniial elaborate pentru prevederea efectelor farmacologice, da r utilizarea lor s-a extins tot mai mult n domeniul toxicologiei, n special n toxic ologia mediului. La ora actual exist programe informatice de screening computeriza t, n special pentru clasele de compui al cror mecanism de aciune poate fi corelat cu anumite caracteristici structurale, cum este cazul substanelor mutagene i carcino gene. Se pot stabili astfel relaii ntre structura chimic i tipul de efect observat p e de o parte, i ntre proprietile fizico-chimice i intensitatea efectelor toxice pe de alt parte. Relaii ntre structura chimic i tipul de efect Efectul toxic al unei subst ane se bazeaz pe interaciunea dintre aceasta, sau unul din metaboliii si, i o molecul in organism care reprezint inta molecular. De exemplu, pentru compuii cu caracter el ectrofil inta molecular este o molecul care conine grupri nucleofile: -NH2, -NH-, -O, de care se pot lega covalent. Deoarece principalele molecule de interes biolog ic care conin astfel de grupri nucleofile sunt ADN-ul i proteinele, efectul ultim a l unui compus electrofil poate fi mutagenitatea, necroza sau inhibiia enzimatic. T otui, datorit complexitii sistemelor biologice, numrul substanelor toxice al cror meca ism de aciune la nivel molecular este cunoscut este foarte redus, ceea ce face di ficil stabilirea unor relaii structur-toxicitate. Relaii ntre proprietile fizico-chimi e ale substanelor i intensitatea efectelor toxice Diferii compui chimici pot induce efecte de acelai tip, dar care difer sub aspectul intensitii lor. Aceast comportare d iferit poate fi explicat prin faptul c activitatea biologic este influenat de dou tipu i de procese: - a) Procese toxicocinetice: transport, legare de proteinele plasm atice, metabolizare, care influeneaz la rndul lor concentraia final a substanei n form sa activ la nivelul intei moleculare - b) Procese toxicodinamice, care implic inte raciunea compusului cu inta molecular. Diferenele de comportament toxicocinetic, pre cum i diferenele de afinitate pentru inta molecular se bazeaz pe diferene de propriet izico-chimice. Prin urmare, activitatea biologic va depinde de: probabilitatea (P r1) ca molecula s-i ating inta (transport) probabilitatea (Pr2) ca molecula s interac oneze cu inta molecular (legare)
FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 99
Probabilitatea total (Pr) ca molecula s interacioneze cu inta va fi deci egal cu prod usul Pr1 x Pr2. Concentraia intei moleculare (C) care interacioneaz cu substana toxic a fi deci proporional (constanta de proporionalitate a) cu cele dou probabiliti Pr1 i cu concentraia de compus (C) la care este expus organismul: C = a x Pr1 x Pr2 x C (ecuaia 1) unde C este concentraia care produce un anumit efect (ex. letalitate). Deoarece o anumit intensitate a efectului este dependent de C, ecuaia (1) poate fi reformulat a stfel: log 1/C = log Pr1 + log Pr2 + constant (ecuaia 2)
aceasta reprezentnd ecuaia fundamental pentru QSAR. Transportul unui compus chimic spre locul su de aciune se realizeaz n principal prin difuzie pasiv. Constanta de dif uzie depinde de anumite proprieti ale moleculei cum ar fi: hidrofobia, polaritatea , gradul de ionizare, forma i mrimea moleculei. Parametrul care reflect cel mai fid el hidrofobia unei substane este coeficientul de partiie lipide-ap, sau coeficientu l de partiie octanol-ap (Kow), care permite aprecierea transportului prin membrane . Legarea substanei toxice de inta sa molecular se poate face prin legturi hidrofobe , legturi electrostatice i fore van der Waals. Impedimentele sterice au i ele un rol n interaciunea cu inta molecular, iar compusul se poate lega i covalent, cum este ca zul reaciei dintre agenii electrofili i gruprile nucleofile. Proprietile fizico-chimic e importante pentru QSAR pot fi deci clasificate n: - proprieti hidrofobe - proprie ti electronice - proprieti sterice Anumite studii QSAR ncorporeaz i indici structurali sau topologici cum ar fi conectivitatea molecular, care reflect caracterul mai mul t sau mai puin ramificat al moleculei. Ali parametri care pot fi utilizai sunt: pun ctul de topire, punctul de fierbere, numrul de atomi de carbon, constanta vitezei de reacie pentru anumii compui (ex. compuii alchilani). Tehnici QSAR 1. Metoda Hansc h se bazeaz pe ecuaia (2): log 1/C = log Pr1 + log Pr2 + constant
100 TOXICOLOGIE GENERAL Probabilitatea Pr1 (de transport) fiind dependent de hidrofobia moleculei, poate fi exprimat prin coeficientul de partiie lipide-ap (Kow): log 1/C = log Kow + log P r2 + constant (ecuaia 3) Probabilitatea Pr2 (de legare) este proporional cu constanta de echilibru (K) pent ru interaciunea cu inta molecular: log Pr2 = log K + constant Ecuaia (2) se poate dec i rescrie sub forma: log 1/C = a x log Kow + log K + constant (ecuaia 5) (ecuaia 4)
Pentru a realiza estimri QSAR este necesar determinarea Kow i a K. Hansch a observa t c acelai substituent induce aceeai modificare a Kow ntr-o serie de derivai analogi. Astfel, el a elaborat n 1964 o tehnic de calcul a valorii Kow pentru compuii nrudii structural, utiliznd o constant de substituent p, care poate fi calculat pentru un su bstituent X cu formula: p (X) = log Kow(C6H5X) - log Kow(C6 H6) Aceast constant de sub stituent este aditiv i aproximativ aceeai pentru numeroi compui nrudii structural. Pen ru interaciunile electrostatice i legtura de hidrogen este important sarcina atomilo r. Substituenii influeneaz distribuia sarcinilor ntr-o molecul prin intermediul induci i i mezomeriei. Pentru a descrie efectele substituenilor asupra distribuiei sarcini lor, Hammett a introdus o constant de substituent s, a crei determinare se bazeaz pe echilibrul de ionizare a acidului benzoic: C6 H5COOH C6 H5 COO - + H + Substituenii de pe nucleul fenil influeneaz sarcina negativ a anionului i n consecin nitatea acestui anion pentru protoni. Constanta lui Hammett s se calculeaz pentru u n substituent X cu ajutorul formulei: s (X) = pKa (C6H4XCOOH) - pKa (C6 H5COOH) Valo area constantei lui Hammett este pozitiv cnd substituentul este mai electroatrgtor d ect hidrogenul i negativ cnd substituentul are caracter
FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 101 electroatrgtor mai slab dect hidrogenul. Valoarea constantelor s depinde i de poziia su bstituentului pe nucleul fenil (o, m, sau p). Pentru a descrie impedimentul ster ic, Taft a introdus constanta lui Taft Es, care poate fi corelat cu constanta de vitez (K) pentru hidroliza acetatului de metil: CH3 COOCH3 + H2 O CH3COOH + CH3OH
Ea se poate calcula pentru un substituent X cu formula: Es (X) = log K(XCH2 COOCH3 ) - log K(CH3 COOCH3) Cu ct substituentul este mai voluminos, cu att valoarea Es e ste mai mic. Parametrii p, s i Es pot fi utilizai pentru estimarea valorilor Kow i K din ecuaia (5). Valoarea log K poate fi nlocuit cu: log K = b s + c Es obinndu-se Ecuaia l i Hansch: log 1/C = a log Kow + b s + c Es + d (ecuaia 6) Cnd aceast ecuaie este aplicat pentru o serie de analogi structurali, Kow poate fi nl ocuit cu p. Dac se cunosc valorile experimentale ale log 1/C pentru un numr limitat de compui, ecuaia lui Hansch poate fi rezolvat introducnd constantele de substituent Kow, s i Es corespunztoare. Dintr-un sistem de ecuaii cu mai multe necunoscute se ca lculeaz valoarea constantelor a, b, c i d, iar ulterior, innd cont de structura subs tanelor, se pot determina concentraiile care pot induce un anumit efect. Tehnica p oate fi deci utilizat pentru prevederea activitii biologice a unor compui care nc nu a u fost sintetizai. Pot fi evaluate rspunsuri biologice cum ar fi: DL50, concentraia care produce inhibiia cu 50% a activitii unei enzime (ex. acetilcolinesteraza), et c. 2. Tehnica Free-Wilson Aceast tehnic se bazeaz n ntregime pe structura compusului. Ea se aplic doar la substanele care sunt analogi structurali i pornete de la ipotez a c efectul unui substituent asupra activitii biologice este aditiv i independent de prezena altor substitueni. Rspunsul biologic (RB) este descris de urmtoarea ecuaie:
RB = S(Aij Sij) + K Unde: Aij este contribuia la rspunsul biologic al unui substitue nt i aflat n poziia j a unei molecule Sij indic dac un substituent i este prezent S = 1) sau nu (S = 0)
3. Tehnicile de recunoatere a unui model Aceste tehnici sunt utilizate pentru a s tabili relaii ntre structura unei substane i prezena sau absena unui anumit efect, fr lua n considerare aspectele cantitative. Studiaz deci relaiile structur-activitate. Fiecare molecul este caracterizat printr-un numr de descriptori moleculari, care po t fi parametri ce indic prezena anumitor fragmente, sau eventual unele proprieti fiz ico-chimice. Descriptorul molecular care determin prezena sau absena unui anumit ef ect este pus n eviden prin analiz statistic. Factori chirali Importana factorilor chir ali pentru toxicitatea substanelor a fost recunoscut doar relativ recent, dar cerc etrile n acest domeniu sunt tot mai numeroase. Prezena n molecul a unui centru de asi metrie, care este responsabil de formarea de izomeri, poate influena cinetica unu i compus i n consecin i toxicitatea sa. De asemenea, n urma metabolizrii se poate obi un izomer specific pornind de la o molecul care nu este asimetric. Toate etapele t oxicocinetice pot fi influenate de chiralitate. Absorbia este afectat doar atunci cn d ea se realizeaz printr-un transport activ. De exemplu, L-DOPA este mai uor absor bit din tractul gastrointestinal dect izomerul D. Excreia renal este influenat ca urma re a secreiei active a moleculei, iar excreia biliar poate de asemenea prezenta ste reoselectivitate. Metabolizarea este ns procesul care este cel mai semnificativ af ectat de prezena centrilor chirali. Astfel, pot s apar urmtoarele efecte: - a) stere oselectivitatea de substrat, care se refer la efectul unui centru chiral preexist ent n molecul - b) stereoselectivitatea de produs, cnd se obine un metabolit care pr ezint centri chirali - c) inversarea configuraiei - d) pierderea asimetriei ca rez ultat al metabolizrii. Atunci cnd se administreaz amestecuri racemice, cum este caz ul majoritii medicamentelor, metabolismul selectiv semnific faptul c fie se formeaz d oi sau mai muli metabolii izomeri diferii, fie c doar unul din izomeri este metaboli zat.
FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 103 Un exemplu notabil este cel al talidomidei, n cazul creia doar acidul glutaramic f ormat din enantiomerul S(-) este embriotoxic, nu i cel format din enantiomerul R( +). Ali factori dependeni de substan care pot influena toxicitatea sunt: - concentraia : acizii corosivi sunt mult mai toxici n soluie concentrat dect sub form diluat - solu bilitatea i ionizarea: intervin n etapa de absorbie - volatilitatea: condiioneaz ptrun derea pe cale respiratorie i influeneaz absorbia. II. FACTORI BIOLOGICI CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA
1. Specia Toxicitatea unei substane poate s difere mult de la o specie la alta, an imalele superioare fiind n general mai sensibile dect cele inferioare. Noiunea de t oxicitate selectiv a fost exploatat pentru obinerea unor antibiotice sau a unor pes ticide mai toxice pentru bacterii i pentru duntori dect pentru om i pentru alte mamif ere. n clasa mamiferelor, efectele toxice sunt destul de asemntoare, pe acest fapt bazndu-se extrapolarea la om a rezultatelor unor studii de toxicitate efectuate p e alte specii ca: obolan, oarece, iepure, cine sau maimu. Nu exist ns nici un model a al perfect; pentru unele substane comportarea la om este similar cu cea la obolan, pe ntru altele cu cea la cine. De aceea, din ce n ce mai des se urmrete efectuarea de s tudii de metabolizare a noilor medicamente pe culturi celulare umane, n dorina de a se obine ct mai curnd n dezvoltarea unui nou compus profilul metabolic la om. Sunt cunoscute numeroase cazuri n care metabolizarea s-a dovedit a fi diferit la subie cii umani fa de animalele de experien. Astfel, pentru medicamentul utilizat n tratamen tul SIDA, zidovudina (AZT), studiile in vivo pe animale au sugerat c substana nu e ra metabolizat, pe cnd n studiile pe om s-a observat c este glucuronidat n proporie de 70-80%. Aceast constare a avut impact asupra frecvenei de administrare n clinic, res pectiv o dat la 4 ore i nu de 2 ori pe zi cum se preconizase iniial pe baza studiil or pe animale. Interaciunile medicamentoase sunt de asemenea dificil de detectat la animal datorit profilurilor metabolice diferite ale medicamentelor de la o spe cie la alta. n general, diferenele de toxicitate ntre specii sunt determinate de di ferene de cinetic sau de metabolizare a compusului, a cror nelegere este esenial pentr evaluarea corect a siguranei i a riscului.
1. Diferene de absorbie, distribuie i excreie 1.1. Absorbia compuilor exogeni este dep ndent de condiiile fiziologice i fizice de la locul de absorbie. Absorbia prin piele prezint variaii considerabile de la o specie la alta. n general, pielea este mai pui n permeabil pentru substanele chimice la om comparativ cu iepurii, oarecii sau obola nii. Absorbia digestiv depinde de pH-ul tractului gastrointestinal, care variaz n li mite destul de largi de la o specie la alta. De exemplu, rodenticidul clorur de p irviniu are aceeai toxicitate acut la oareci i la obolani dup administrare intraperito neal, n timp ce dup administrare oral este mult mai toxic la oareci (DL50 15 mg/kg) f a de obolani (1550 mg/kg). Absorbia pe cale respiratorie poate fi influenat de diferen le de fiziologie pulmonar. De exemplu, la animalele mici, cu frecven pulmonar mai ma re dect a omului, cum ar fi oarecii, vrbiile sau canarii, toxicitatea compuilor cu s olubilitate mare n snge, la care absorbia este limitat de ventilaie, va fi mai mare d up expunere la aceeai doz. 1.2. Distribuia compuilor exogeni variaz de la o specie la alta ca urmare a diferenelor n ceea ce privete distribuia lipidelor n organism, vitez a de metabolizare i excreie, prezena unor sisteme de captare specifice la nivelul u nor organe. De exemplu, porcul suport doze mari de arsen, stibiu sau compui organo clorurai datorit depozitrii acestora n esutul adipos, care este bine dezvoltat. Conce ntraia proteinelor plasmatice n funcie de specie este o alt variabil care, prin influ enarea gradului de legare a substanei toxice i deci a concentraiei compusului liber n plasm, poate modifica toxicitatea. 1.3. Excreia Excreia renal difer de la o specie l a alta n ceea ce privete volumul i viteza de producere a urinei, precum i pH-ul aces teia. Pentru compuii care nu sunt excretai printr-un proces activ, diferenele sub a spectul legrii de proteine pot conduce indirect la diferene de excreie urinar. Excrei a biliar este condiionat mai ales de greutatea molecular a substanei, deoarece pragul greutii moleculare de la care o substan poate fi excretat prin bil difer mult de la o specie la alta. 2. Diferene de metabolizare Efectul biologic al unei substane depi nde de concentraia formei sale active i de timpul ct aceasta se menine n organism. La rndul lor, acestea sunt determinate de vitezele de biotransformare i excreie, de n atura i proporia legrii de macromoleculele tisulare. Cel mai frecvent, diferenele de metabolizare ntre specii sunt diferene cantitative, deci sub aspectul vitezei de metabolizare, i mai rar diferene calitative, sub aspectul unor ci diferite de biotr ansformare. n general, animalele mici, oarecii de exemplu, metabolizeaz compuii exog eni cu o vitez
mai mare dect animalele mari, cum ar fi omul. Astfel, la om fenilbutazona are un timp de njumtire de aproximativ 3 zile, n timp ce la maimu, obolan, cine, cobai, iep acesta variaz ntre 3 i 6 ore. Diferenele de metabolizare pot fi observate att la reaci i din faza I, ct i la reacii din faza II. Reacii din faza I Reaciile de oxidare. Dife renele cele mai frecvent observate se refer la viteza cu care are loc oxidarea i ma i puin la calea de metabolizare urmat. Hidroxilarea aromatic a anilinei este supus u nei astfel de variabiliti. La anilin, att poziia orto ct i cea para sunt susceptibile sufere un atac oxidativ, cu formarea aminofenolilor corespunztori. La carnivore, cum ar fi pisica sau cinele, se formeaz n principal metabolitul orto, n timp ce la i erbivore, ca iepurele sau cobaiul, se obine n principal metabolitul para. Omnivore le sunt intermediare, la acestea formndu-se ambii metabolii, cu o preferin totui pent ru metabolitul para. Deoarece p-aminofenolul este mai puin toxic, speciile care v or metaboliza anilina n principal la acest metabolit vor avea o susceptibilitate mai redus la aciunea toxic a acestei substane. Un alt exemplu de diferene cantitative se refer la etilenglicol, care este metabolizat n final la acid oxalic. Toxicitat ea compusului se datoreaz parial acidului oxalic rezultat din calea oxidativ i este proporional cu procentul n care are loc formarea acestui metabolit. Pisica este cea mai sensibil la aciunea toxic a etilenglicolului, deoarece formeaz oxalat n proporia cea mai mare, iar toxicitatea scade la obolan i la iepure, la acesta din urm procen tul fiind cel mai mic. N-hidroxilarea paracetamolului prezint de asemenea diferene cantitative de metabolizare de la o specie la alta, fapt responsabil de variaia hepatotoxicitii. Astfel, obolanul este mai rezistent la toxicitate deoarece metabol izeaz mai puin paracetamol pe calea de bioactivare, n timp ce hamsterul este foarte susceptibil. n schimb, obolanul poate N-hidroxila acetilaminofluorenul, etap neces ar n manifestarea aciunii carcinogene a compusului. La maimu are loc hidroxilare arom atic n loc de N-hidroxilare i efectul carcinogen nu se manifest. Reacii de hidroliz. E xist numeroase esteraze i amidaze responsabile de hidroliza esterilor i a amidelor, i care sunt ntlnite la majoritatea speciilor. Activitatea lor poate ns varia conside rabil de la o specie la alta, ceea ce conduce la diferene de toxicitate. Un exemp lu este insecticidul malation, care este rapid hidrolizat la mamifere, formndu-se un acid dicarboxilic ce se poate conjuga i elimina prin urin. La insecte, la care carboxiesteraza este absent, calea principal de metabolizare este cea oxidativ, fo rmndu-se malaoxonul, un inhibitor puternic al acetilcolinesterazei (Fig.5.1.). Ac east diferen de metabolizare explic selectivitatea remarcabil a acestui insecticid.
106 TOXICOLOGIE GENERAL CH3O P CH3O malation Insecte CH3O P CH3O malaoxon O S CHCOOC2H5 CH2COOC2H5 S S C HCOOC2H5 CH2COOC2H5 Mamifere CH3O CH3O P S malation diacid S CHCOOH CH2COOH conjugare si excretie Fig.5.1. Metabolismul malationului Reacii din faza II Unele reacii din faza II prezint diferene ntre specii care au fost bine caracterizate. Rezultatele unor studii sugereaz existena unei relaii ntre pozii a evolutiv a speciei i mecanismele de conjugare (Tabel V.1.). La om i la majoritate a mamiferelor, principalul mecanism este conjugarea cu acid glucuronic, glicin, g lutamin, sulfoconjugarea, conjugarea cu glutation, acetilarea, metilarea i sinteza de tiocianat. La unele specii de psri i reptile, conjugarea cu ornitin nlocuiete conj ugarea cu glicin; la plante, bacterii i insecte, conjugarea cu glucoz n loc de acid glucuronic determin formarea de glucozide. Unele reacii de conjugare se realizeaz c u anumii compui doar la un numr redus de specii. Este vorba de conjugarea cu fosfat , taurin, N-acetil-glucozamin, riboz, gliciltaurin, serin, arginin, acid formic, succi nat. Anumite specii de pianjeni folosesc pentru conjugarea acizilor aromatici aci dul glutamic i arginina. n ceea ce privete conjugarea acizilor organici, carnivorel e prefer conjugarea cu acid glucuronic, n timp ce ierbivorele pe cea cu aminoacizi , iar omnivorele le utilizeaz pe ambele. Deficienele n reaciile din faza II pot fi c auza unor diferene notabile n ceea ce privete cinetica unui xenobiotic. Cauza acest or variaii poate fi absena enzimelor sau a cofactorilor, sau prezena lor n cantiti red use. Glucuronoconjugarea este unul din mecanismele de detoxifiere cele mai ntlnite la mamifere. Pisica ns, la fel ca i speciile nrudite, are un sistem de glucuronocon jugare deficitar. Dei pisica nu formeaz glucuronide ale: oaminofenolului, fenolulu i, p-nitrofenolului, 1- sau 2-naftolului i morfinei, sau le formeaz n cantitate foa rte mic, ea poate glucuronoconjuga cu uurin
FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 107 fenolftaleina, bilirubina, tiroxinul i anumii steroizi. innd cont de polimorfismul c are se ntlnete la nivelul glucuronozil transferazelor, este posibil ca aceste defic iene s se datoreze mai degrab absenei glucuronozil-transferazelor corespunztoare dect a acidului uridin difosfat glucuronic. n ceea ce privete acetilarea, obolanii au o capacitate de N-acetilare foarte mare, n timp ce la cine aceasta este absent. Omul este din acest punct de vedere o specie intermediar, dar polimorfismul acetil-tra nsferazelor este foarte frecvent. Tabel V.1. Reacii de conjugare uzuale sau neobinuite la diferite specii Gruparea cu care se produce conjugarea Glucidic Uzual Neobinuit Aminoacizi Acetil Formil Sulfat Fosfat Acid glucuronic (animale) N-acetilglucozamin (iepure) Glucoz (insecte, plante) Rib oz (obolani, oareci) Glutamin (insecte, om) Glicin Ornitin (psri) Glutation Arginin Metionin pianjeni) Gliciltaurin (pisici) Glicilglicin (pisici) Serin (iepuri) Grupare a acetil din acetilCoA Formilare (cini, obolani) Grupri sulfat din PAPS Formarea de fosfat monoesteri (cini, insecte)
Se poate deci concluziona c majoritatea diferenelor ntre specii sunt de natur cantit ativ i se datoreaz variaiilor n ceea ce privete concentraia sau parametrii cinetici ai enzimelor, disponibilitatea cofactorilor, prezena enzimelor care catalizeaz reacia invers sau a inhibitorilor, concentraia substratului n esut. Aceste diferene cantitat ive se pot datora ns i faptului c la specii diferite pot fi preferate ci metabolice d iferite, ceea ce determin diferene de aciune farmacologic sau toxic.
108 TOXICOLOGIE GENERAL n general, omul este capabil s realizeze toate transformrile metabolice ntlnite i la a lte mamifere i nu prezint diferene particulare cu privire la prezena sau absena unei anumite ci metabolice.
3. Diferene fiziologice i unii factori fiziologici pot influena aciunea toxic. De exe mplu, obolanii sunt sensibili la aciunea unor rodenticide cum ar fi alcaloizii din Scilla maritima deoarece, spre deosebire de alte mamifere, nu au capacitatea de a vomita i astfel nu pot elimina substana toxic, care este absorbit i i produce efect l toxic cardiac. 2. Rasa Diferite rase ale aceleiai specii animale pot prezenta v ariaii ale metabolizrii substanelor toxice i deci ale toxicitii lor. n cazul raselor u ane, diferenele se datoreaz n principal variaiilor sub aspectul metabolizrii, care su nt determinate de polimorfismul unor enzime implicate n biotransformarea xenobiot icelor, dar i unor diferene sub aspectul practicilor culturale. Sursa major de dife rene culturale este probabil dieta, dar pot fi importani i ali factori, cum ar fi co nsumul de alcool, fumatul, mediul urban sau utilizarea medicamentelor. Exist de a semenea i diferene farmacologice mediate de receptori. S-au constatat astfel difer ene ntre subiecii africani i cei de origine european n ceea ce privete rspunsul la ag ii badrenocetorului. La rasa neagr, rspunsul la terapia antihipertensiv este mai pr onunat. De asemenea, chinezii au un rspuns farmacodinamic la propranolol de dou ori mai mare dect caucazienii. 3. Sexul Metabolizarea xenobioticelor poate varia n fu ncie de sexul organismului. Diferenele legate de sex devin aparente la pubertate i se menin pe parcursul vieii adulte. Dependena de sex a biotransformrii este o form de control genetic, dar care se manifest prin intermediul influenelor hormonale. Din punct de vedere biochimic, diferenele de biotransformare a xenobioticelor ntre ce le dou sexe se datoreaz unei combinaii de factori, printre care se numr diferenele n c ncentraia i activitatea enzimelor, precum i modificrile mediului lipidic n care se gse sc aceste enzime. Astfel, s-a constatat c mai multe izoenzime ale citocromului P4 50 sunt dependente de sex. Se pare c glanda pituitar elibereaz la femele, sub contr olul hipotalamusului, un aa-numit factor feminizant, care este responsabil de o com portare specific a ficatului la mamifere. La masculi, funcia hipotalamusului este inhibat de hormoni i glanda pituitar nu elibereaz factorul feminizant.
Efectul sexului asupra biotransformrii xenobioticelor este adesea foarte pronunat la animalele de experien, ns pare a avea o semnificaie foarte redus la om. Astfel, s-a constatat c obolanii masculi aduli metabolizeaz unii compui exogeni mult mai repede dect femelele. Un exemplu este susceptibilitatea diferit la leziunile hepatice ind use de cloroform la obolanii masculi i obolanii femele, acestea din urm fiind mai se nsibile. Se consider c aceste diferene s-ar datora efectului testosteronului asupra activitii enzimelor microzomiale hepatice. De aceea, tratamentul femelelor cu tes tosteron scade DL50, n timp ce administrarea de estradiol la masculi crete DL50 a cloroformului. n ceea ce privete nefrotoxicitatea cloroformului la oareci, s-a obse rvat c oarecii masculi sunt mai susceptibili. Aceast diferen poate fi anulat prin cast rare i poate fi restabilit prin administrare de androgeni la masculi. Explicaia poa te consta n faptul c testosteronul crete metabolizarea mediat de enzimele microzomia le a cloroformului la metabolii toxici. i alte dezechilibre hormonale, n afara celo r sexuale, pot modifica rspunsul animalelor la unele substane toxice. Este cazul h ipertiroidismului, hiperinsulinemiei, stimulrii axului hipofizo-corticosuprarenal ian. Starea de gestaie poate influena i ea rspunsul la xenobiotice, activitatea mult or enzime cum ar fi catecol-O-metiltransferaza i monoaminoxidaza scznd n aceast perio ad. obolanul femel gestant este mai sensibil la aciunea cancerigen a etilnitrozureei, tumorile aprnd cu o frecven mai mare i avnd o evoluie mai rapid. 4. Vrsta n genera renele de toxicitate sunt observate la extremele de vrst: nou-nscui sau btrni, i se d reaz unor diferene de cinetic sau de metabolizare. Diferene de cinetic La nou-nscui, a sorbia pe cale oral este mult alterat, deoarece evacuarea gastric este lent, iar abso rbia intestinal este crescut, datorit unei permeabiliti mai mari a mucoasei. Acest asp ect este responsabil de alergiile alimentare, care sunt frecvente la copii i care se datoreaz absorbiei de proteine i de peptide exogene. Absorbia cutanat i cea la niv elul conjunctivelor sunt de asemenea crescute, ceea ce se reflect n frecvena mai ma re a reaciilor cutanate. Distribuia la nou-nscut este diferit datorit permeabilitii va culare mai mari i a procentului de ap crescut. Procentul de proteine plasmatice es te redus, modificnd legarea xenobioticelor i crescnd fraciunea liber, care i poate man festa aciunea farmacologic sau toxic. Astfel, lidocaina este legat doar 20% de prote inele plasmatice fa de 70% la aduli. Distribuia compuilor n anumite compartimente poat e fi de asemenea modificat. De exemplu, morfina este de 3 pn la 10 ori mai toxic la o bolanii nou-nscui, din cauza unei permeabiliti
crescute a barierei hemato-encefalice. n plus, esuturile i organele noului-nscut sun t constituite n proporie mai mare din ap i lipide, procentul de proteine i de os fiin d mai mic, iar encefalul reprezint un procent mai mare din greutatea corporal, cee a ce favorizeaz ptrunderea substanelor n SNC. Eliminarea renal este de asemenea mai r edus, deoarece funcia renal este insuficient dezvoltat. De aceea, penicilinele i tera ciclina, care sunt excretate mai lent, pot fi mai toxice la nou-nscui. Incidena mai mare a methemoglobinemiei la copiii mici a fost explicat prin faptul c aciditatea gastric este mai redus, ceea ce face ca flora bacterian intestinal s se poat dezvolta n regiuni superioare, favoriznd reducerea bacterian a nitrailor la nitrii i formarea methemoglobinei. La btrni, absorbia pare a nu fi semnificativ afectat, dei se observ o cretere a pH-ului sucului digestiv, o diminuare a motilitii intestinale i o atrofie a mucoasei cu scderea numrului de celule care particip n procesul de absorbie. Distr ibuia este considerabil modificat fat de aduli. Astfel, la persoanele peste 65 de an i se observ o diminuare cu 30-40% a volumului minut cardiac, ceea ce influeneaz abs orbia substanelor administrate intramuscular i distribuia celor care au fost deja ab sorbite, indiferent de calea de ptrundere. Se constat de asemenea existena unei can titi mai mici de albumine plasmatice i de alte proteine transportoare. Prin urmare, cantitatea de substan liber, capabil s se lege de receptori, este mai mare cu 15-30% , fiind favorizat apariia unor efecte mai intense la doze mai mici de xenobiotic d ect la adult. Pe de alt parte, o dat cu naintarea n vrst crete proporia de esut adi ad masa muscular i apa total, ceea ce determin modificarea volumelor de distribuie. P entru compuii lipofili aceste volume cresc, fiind favorizat reinerea n organism i pre lungirea efectului, n timp ce pentru substanele hidrofile volumele de distribuie sc ad, crescnd concentraiile plasmatice. n ceea ce privete excreia, fluidul renal se dim inueaz cu aproximativ 1,5% pe an i n acelai timp se deterioreaz filtrarea glomerular i secreia tubular, reducndu-se treptat eliminarea pe aceast cale. Acest fapt poate fi agravat de patologiile care sunt frecvente la aceast vrst, cum ar fi insuficiena car diac sau afeciunile renale, care pot crete timpul de njumtire biologic a medicamentel eliminate prin urin. Diferene de metabolizare Animalele cu vrste extreme au n genera l un metabolism redus al compuilor xenobiotici comparativ cu adulii. Nou-nscui. La m amifere, imediat dup natere se iniiaz creterea activitii multor enzime hepatice implic te n biotransformarea compuilor exogeni. n timpul gestaiei, capacitatea ficatului de a desfura reacii catalizate de sistemul monooxigenazelor microzomiale este foarte redus. Ea ncepe s creasc dup natere i nu se observ diferene evidente ntre femelele ii imaturi.
i reaciile din faza II pot fi dependente de vrst. Astfel, glucuronoconjugarea multor substraturi este redus sau absent n esuturile fetale, dar crete o dat cu naintarea n t. La multe specii, incapacitatea mamiferelor nou-nscute de a forma glucuronoconju gai este asociat cu deficiena de glucuroniltransferaze i de cofactor, acid uridin di fosfat glucuronic. Aceast deficien, alturi de ali factori cum ar fi excreia lent a con ugatului bilirubinei i prezena n snge a pregnandiolului, un inhibitor al glucuronidri i, sunt responsabili de apariia icterului neo-natal. S-a constatat de asemenea o deficien a conjugrii cu glicin i cu glutation la obolanii i la cobaii nou nscui. n sulfoconjugarea i acetilarea par s nu fie afectate de vrst. Efectul btrneei asupra me abolismului xenobioticelor a fost mai puin studiat. Se pare totui c la obolani activ itatea monooxigenazelor microzomiale i a glucuroniltransferazelor scade, n timp ce activitatea monoaminoxidazei crete. Aceste modificri ale metabolismului xenobioti celor se reflect adesea n modificri ale toxicitii lor. De exemplu, hepatotoxicitatea paracetamolului, care este activat de enzimele CYP450, este mai sczut la nou-nscui d ect la aduli. 5. Factori genetici Factorii genetici care pot influena toxicitatea a u fost foarte mult studiai n ultimele decenii i se estimeaz c ei ar putea fi responsa bili de 20 pn la 40% din diferenele inter-individuale care se semnaleaz n metabolizar ea i rspunsul la unele medicamente sau factori de mediu. Principalii factori genet ici cu implicaii toxicologice sunt polimorfismul enzimelor de metabolizare a xeno bioticelor i enzimopatiile. 1. Polimorfismul enzimelor de metabolizare a xenobiot icelor Polimorfismul poate fi definit ca apariia n aceeai populaie a dou sau mai multe alele diferite situate pe acelai locus al unei gene, fiecare din ele cu o frecve n apreciabil. Polimorfismul genetic conduce deci la apariia unor forme diferite ale u nei gene i ale produsului codificat de acestea, dintre care varianta cea mai puin n tlnit trebuie s aib o frecven n populaia respectiv de cel puin 1%. Se estimeaz c 30% din genele umane prezint polimorfisme. Variaia structurii proteinelor influene az rspunsul la substanele toxice prin cel puin trei mecanisme: - afectarea fenomenel or toxicocinetice de absorbie, distribuie, metabolizare sau excreie - afectarea rec eptorilor i a secvenei de reacii biochimice care decurg din legarea xenobioticului de acetia - afectarea mecanismelor de aprare, n special a susceptibilitii de declanare a unui fenomen carcinogen
Unele din enzimele implicate n metabolizarea xenobioticelor prezint un astfel de p olimorfism genetic, ceea ce face ca n populaie s existe subgrupuri (fenotipuri) car e difer considerabil n ceea ce privete activitatea enzimatic. Polimorfismul enzimelo r de metabolizare a xenobioticelor poate avea implicaii toxicologice n urmtoarele c azuri: Cnd toxicitatea se datoreaz compusului printe i biotransformarea la un metabo lit inactiv, uor excretabil, este dependent de un sistem enzimatic polimorf. n aces t caz, indivizii cu un deficit enzimatic vor fi mai susceptibili s dezvolte o int oxicaie. Dac organismul este expus concomitent la alt substan care inhib enzima n cauz indivizii cu un fenotip normal vor suferi mai uor o intoxicaie. Cnd calea metabolic pe care o catalizeaz enzima polimorf este calea principal de detoxifiere-eliminare, iar inhibarea sau saturarea acesteia deviaz metabolismul pe o cale ce conduce la formarea unui compus reactiv; indivizii cu un deficit enzimatic vor fi mai susc eptibili s dezvolte o intoxicaie Cnd toxicitatea este mediat de un metabolit reactiv , care se obine pe o cale metabolic n care intervine enzima polimorf; indivizii norm ali vor fi mai susceptibili s dezvolte toxicitate, n timp ce aceia cu enzima defic itar vor fi protejai. Sunt cunoscute i caracterizate polimorfisme ale enzimelor din ambele faze de metabolizare. 1. Polimorfismul enzimelor citocromului P450 Izoen zimele citocromului P450 cu importan toxicologic sunt CYP1A1, CYP1A2, CYP1B1, CYP2B 6, CYP2A6, CYP2E1 i CYP3A4/5. Exist studii care au evideniat existena unui polimorfi sm genetic (Tabel V.2.), dar nu n toate cazurile semnificaia funcional a fost sufici ent documentat. Tabel V.1. Exemple de izoenzime ale citocromului P450 polimorfe i substraturile lor Enzim CYP1B1 CYP2A6 CYP2C9 CYP2C19 CYP2D6 CYP2E1 Exemple de sub straturi Hidrocarburi aromatice polinucleare metilate Cumarin s-warfarin, tolbutam id, AINS Omeprazol, proguanil Neuroleptice, antidepresive Etanol, nitrozamine
Un exemplu de citocrom al crui polimorfism a fost bine studiat este CYP2D6, care este considerat a fi al doilea ca importan ntre izoformele umane implicate n metabol ismul medicamentelor. Printre principalele substraturi se numr majoritatea antidep resivelor i neurolepticelor, multe antiaritmice i betablocante lipofile, opioide i inhibitori ai recaptrii serotoninei. Enzima nu este aparent inductibil i absena ei f ace ca subiectul s fie incapabil s metabolizeze substraturile. Consecina este ating erea unor niveluri plasmatice crescute dup doze obinuite, cu posibilitatea apariiei efectelor adverse. Aproximativ 7% din caucazieni sunt metabolizatori leni, n timp ce la asiatici frecvena este n jur de 1%. Chinezii au o capacitate redus de metabo lizare a substraturilor CYP2D6, dei ei nu au fost clasificai drept metabolizatori leni. Pentru acest motiv, dozele de haloperidol sau alte substraturi ale acestei izoenzime prescrise n China sunt mai reduse. n populaia uman exist ns i metabolizator ltrarapizi, care au gene CYP2D6 duplicate, multiplicate sau amplificate, la care dozele de neuroleptice necesare sunt chiar de 3 ori mai mari dect cele uzuale. C ea mai mare frecven a acestui tip de polimorfism se ntlnete n Etiopia (29%) i n Arabi audit (20%), pe cnd n Spania ea este de 7%. O alt consecin a acestui fenomen, pe lng esitatea creterii dozelor terapeutice, este posibilitatea formrii unor concentraii crescute din metabolitul primar. n cazul codeinei, al crei metabolit primar este m orfina, exist riscul instalrii farmacodependenei n urma tratamentului cu antitusiv. 2. Polimorfismul alcool dehidrogenazei i aldehid dehidrogenazei Polimorfismul ace stor enzime are importan toxicologic n special prin implicarea lor n metabolizarea al coolului etilic. Polimorfismul alcool dehidrogenazei implic izoenzima ADH2. Forma atipic a enzimei are capacitatea de a metaboliza mult mai rapid etanolul, iar in cidena ei n populaia uman este de 90% la chinezi i japonezi, fa de 5% la caucazieini. siaticii vor metaboliza deci alcoolul mai repede dect europenii. n ceea ce privete aldehid dehidrogenaza, forma activ a enzimei lipsete la aproximativ 50% din japone zi i chinezi, ceea ce explic incidena mai mare la acetia a nroirii feei, palpitaiilor ahicardiei dup consumul de alcool. Deficiena de aldehid dehidrogenaz nu a fost obse rvat la caucazieni i la rasa neagr. 3. Polimorfismul colinesterazei plasmatice Aces t polimorfism a fost descoperit n urma unor accidente terapeutice la folosirea n a nestezie a relaxantului muscular succinilcolina. Enzima atipic are o activitate h idrolitic sczut, ceea ce conduce la creterea considerabil a timpului de njumtire al amentului i n consecin la apnee prelungit care poate fi fatal.
4. Polimorfismul paraoxonazei Paraoxonaza este o arilesteraz seric care hidrolizea z paraoxonul, metabolitul activ al parationului, la para nitrofenol i dietilfosfat , compui inactivi. Forma polimorf are o activitate hidrolitic sczut, care corespunde la a treia sau a asea parte din activitatea catalitic normal. La persoanele cu enzi m atipic, riscul de producere a intoxicaiilor cu paration este mult mai mare, fapt important n special n cazul expunerii profesionale. 5. Polimorfismul epoxid hidrol azei Epoxid hidrolazele (EH) reprezint o familie de enzime care hidrateaz epoxizii simpli la dioli vicinali i epoxizii arenelor la trans-dihidrodioli. La mamifere au fost caracterizate cinci clase de epoxid hidrolaze, din care cea mai importan t din punct de vedere toxicologic este forma microzomial, care prezint o larg specif icitate de substrat. Enzima are rolul de a inactiva printre altele epoxizii hidr ocarburilor polinucleare cancerigene, prevenind iniierea procesului cancerigen. F orma polimorf are o activitate hidrolitic sczut, iar cercetrile recente au evideniat o corelaie ntre genotipul EH i frecvena carcinomului hepatocelular, a cancerului ovar ian sau a unor afeciuni pulmonare. 6. Polimorfismul acetiltransferazelor Polimorf ismul acestor enzime a fost mult studiat i a condus la mprirea populaiei umane n dou f notipuri: fenotipul acetilator lent i fenotipul acetilator rapid. Fenotipul aceti lator lent, care se ntlnete n proporie diferit n populaia uman dependent de originea al (Tabel V.3.), se afl la originea a numeroase reacii adverse la medicamente (Tabe l V.4.). Tabel V.3. Distribuia fenotipului acetilator n diferite grupuri etnice Grupul etni c Eschimoi Japonezi Latino-americani Americani rasa neagr Americani rasa alb Africa ni Indieni Britanici Egipteni Acetilatori rapizi (%) 95-100 88 70 52 48 43 39 38 18 Medicament Izoniazid Izoniazid Izoniazid Izoniazid Izoniazid Sulfametazin Izoniazi d Sulfametazin Izoniazid
FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 115 Fenotipul acetilator este un factor important n toxicitatea izoniazidei. Astfel, la acetilatorii leni are loc o inactivare mai lent a medicamentului, care se poate astfel acumula producnd o neuropatie periferic. De asemenea, la acetilatorii leni s-a observat o inciden crescut a cancerului n cazul expunerii la amine aromatice i he terociclice, datorit capacitii reduse de detoxifiere. Tabel V.4. Efecte adverse corelate cu fenotipul acetilator Xenobiotic Izoniazida Izoniazida Procainamida Hidralazina Fenelzin Amine aromatice Efectul advers Neu ropatie periferic Lezare hepatic Lupus eritematos Great, ameeal Cancerul vezicii urin are Incidena Mai mare la acetilatorii leni Mai mare la acetilatorii leni Mai mare l a acetilatorii leni Mai mare la acetilatorii leni Mai mare la acetilatorii leni
7. Polimorfismul altor enzime din faza II i alte enzime din faza II pot prezenta un polimorfism care permite explicarea unor diferene de toxicitate. Astfel, difer enele de conjugare cu glutationul a metabolitului activ al paracetamolului, N-ace til-p-bezochinonimina, ar putea explica parial diferenele de susceptibilitate la e fectele hepatotoxice ale acestui medicament. S-au semnalat de asemenea i polimorf isme ale sulfotransferazelor sau ale glucuronoziltransferazelor, dar implicaiile toxicologice ale acestora nu sunt complet elucidate. 2. Enzimopatiile determin o modificare a rspunsului la substana toxic. Un exemplu este Deficiena de glucozo-6-fo sfat dehidrogenaz, care este o maladie genetic, gena responsabil fiind localizat pe cromozomul X. Ea este asociat cu susceptibilitatea apariiei crizelor hemolitice la persoanele afectate crora li se administreaz substane oxidante (medicamente, nitro derivai sau aminoderivai aromatici): primachin, sulfanilamid, acetanilid, fenilhidra zin. Frecvena enzimopatiei este mai mare la indivizii de ras alb din regiunea medite ranean i la cei din rasa neagr. Deoarece rolul enzimei n eritrocit este de a menine u n nivel de NADPH care s asigure cantitatea de glutation redus necesar protejrii hem oglobinei de aciunea agenilor oxidani, deficitul su fragilizeaz hematiile i favorizeaz hemoliza.
6. Starea patologic Existena unor leziuni sau a unor deficiene organice poate afect a considerabil cinetica i metabolismul compuilor exogeni, influennd toxicitatea aces tora. n plus, expunerea cronic la o substan toxic poate induce leziuni patologice car e pot modifica cinetica acesteia la o expunere ulterioar. 1. Afeciunile digestive i sindromul de malabsorbie pot afecta absorbia xenobioticelor din tractul gastroint estinal. 2. Afeciunile hepatice Deoarece ficatul este sediul major al biotransfor mrii xenobioticelor, afeciunile hepatice au efectul cel mai semnificativ asupra to xicitii. Leziunile hepatice pot influena cinetica substanelor exogene prin urmtoarele mecanisme: - modificarea activitii enzimatice de la acest nivel - modificarea flu xului sanguin - modificarea concentraiilor de albumin plasmatic i deci a legrii subst anei a) Modificarea activitii enzimatice poate s apar n cazul unor afeciuni de tipul h patitelor i cirozei, care reduc reaciile de metabolizare din faza II, cum ar fi ac etilarea, glucuronoconjugarea i sulfoconjugarea, precum i nivelul de citocrom P450 . Consecina este creterea nivelelor sanguine ale xenobioticelor. Icterul obstructi v poate scdea metabolismul xenobioticelor ca o consecin a acumulrii de sruri biliare, care acioneaz ca inhibitori ai unor enzime. Deoarece ficatul este sediul sintezei colinesterazelor, leziunile hepatice au drept consecin reducerea metabolizrii subs traturilor acestei enzime: aspirin, procain, succinilcolin. b) Modificarea fluxului sanguin care se ntlnete n afeciunile colestatice poate afecta clearance-ul unor medi camente c) Modificarea concentraiilor de albumin plasmatic poate s apar n cazul unor a feciuni hepatice cronice, deoarece ficatul reprezint sediul sintezei acestor compui . Pentru xenobioticele puternic legate de proteinele plasmatice, consecina este c reterea semnificativ a concentraiilor plasmatice ale formei libere, cu posibilitate a apariiei de fenomene toxice, n special la medicamentele cu indice terapeutic mic . De exemplu, anestezia cu tiopental poate fi prelungit la persoanele cu afeciuni hepatice cronice, care au un nivel redus de albumine plasmatice. 3. Afeciunile re nale pot modifica efectele toxice ale xenobioticelor prin: - mecanism direct, ca urmare a alterrii funciilor de excreie i de metabolizare ale rinichiului
- mecanism indirect, consecutiv efectului insuficienei renale asupra metabolismul ui hepatic. Astfel, la animalele cu insuficien renal s-a constatat o scdere a coninut ului de citocrom P450 din ficat. S-a observat c timpii de njumtire ai tolbutamidului, tiopentalului, hexobarbitalului i cloramfenicolului sunt prelungii la pacienii cu afectare renal. 4. Afeciunile cardiovasculare severe influeneaz circulaia hepatic i re al, perturbnd funciile de metabolizare i de excreie ale acestor organe, fapt care se reflect n modificarea toxicitii unor substane. 5. Afeciunile osoase cresc toxicitatea unor substane care se acumuleaz la acest nivel, cum ar fi plumbul. 6. Afeciunile cil or respiratorii, cum ar fi astmul, cresc sensibilitatea la aciunea unor poluani at mosferici ca dioxidul de sulf. 7. Deshidratarea crete sensibilitatea la aciunea to xic a compuilor hidrosolubili (staniu, plumb), dar nu influeneaz toxicitatea acut a s ubstanelor liposolubile. 8. Bolile infecioase pot afecta metabolismul, n special ca urmare a creterii nivelelor de interferon endogen, care modific activitatea unor enzime de metabolizare. 7. Ali factori dependeni de organism care influeneaz toxicit atea substanelor sunt: bioritmul i efortul fizic.
III. FACTORI DE MEDIU CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 1. Substane din mediu Omul este e xpus, concomitent sau secvenial, la un mare numr de substane din mediu, care pot ptr unde n organism pe ci diferite. Poate cele mai cunoscute exemple de amestecuri chi mice sunt cele din fumul de igar sau din apa, aerul i solul din zonele de depozitar e a deeurilor. Amestecurile de substane chimice sunt ubicuitare n aerul pe care l re spirm, n alimentele pe care le consumm i n apa pe care o bem. Printre amestecurile de substane chimice din mediu cele mai importante din punct de vedere toxicologic s e numr gazele de eapament ale automobilelor, produii secundari rezultai n urma dezinfe ctrii apei de but prin clorurare sau ozonare, dioxina i compuii nrudii care se formeaz prin arderea incomplet a deeurilor. Xenobioticele din mediu pot interaciona ntre ele sau pot modifica toxicitatea substanelor medicamentoase. Alte surse de substane e xogene sunt alimentele i medicamentele. Componenii alimentari pot influena toxicita tea medicamentelor sau a poluanilor
din mediu, iar medicamentele pot interaciona ntre ele atunci cnd sunt administrate concomitent. Cu excepia interaciunilor medicamentoase, pentru care exist protocoale de studiu deja validate, studiul interaciunilor cu substanele din mediu, sau a ac estora ntre ele, este dificil de realizat i presupune dezvoltarea unor protocoale experimentale inovatoare i eficiente, n vederea examinrii concomitente a tuturor or ganelor int i a elucidrii mecanismelor de aciune. n acest sens, folosirea unor modele farmacocinetice-farmacodinamice elaborate pe baze fiziologice s-a dovedit a fi d eosebit de util. Consecinele interaciunilor dintre substane Toxicitatea unui compus poate fi modificat prin expunerea prealabil, simultan sau consecutiv la o alt substan, efectele putndu-se adiiona, amplifica sau anula. n Fig.5.2. sunt prezentate situaiil e posibile n cazul interaciunii dintre dou substane. Reprezentarea este cunoscut sub denumirea de izobologram. doza A ( DA DE50A ) antagonism absenta interactiunii Ef. partial aditiv 1 Ef. aditiv potentare 1 doza B ( DB DE50B ) Fig.5.2. Izobolele corespunztoare pentru mai multe situaii posibile de interaciune n tre dou substane
FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 119 1. Efectul aditiv presupune c rspunsul toxic rezultat n urma administrrii a dou subst ane este suma rspunsurilor individuale. n aceast situaie practic nu are loc o interaci une. 2. Sinergismul presupune c rspunsul toxic al celor dou substane, administrate c oncomitent sau secvenial, este mai mare dect suma rspunsurilor individuale, iar pen tru unul din compui toxicitatea sa intrinsec este nul sau foarte redus. Un exemplu l constituie folosirea sinergitilor insecticidelor, cum ar fi piperonil butoxidul ( sesamex), care cresc toxicitatea insecticidelor la insecte prin inhibarea citocr omului P450 al acestora, mpiedicnd astfel detoxifierea. Acest compus are de fapt o aciune bifazic, el fiind att inhibitor ct i inductor al CYP450, dar efectul inhibito r se manifest mult mai rapid dect cel inductor, ceea ce face posibil utilizarea sa. 3. Potenarea conduce i ea la creterea rspunsului toxic peste suma rspunsurilor indiv iduale, dar n acest caz ambii compui au o toxicitate apreciabil atunci cnd sunt admi nistrai separat. Un exemplu este cel al interaciunii dintre malation, insecticid o rganofosforic cu toxicitate redus la mamifere datorit hidrolizei rapide, cu un alt insecticid organofosforic, EPN. Asocierea determin creterea semnificativ a toxicitii malationului, deoarece EPN inhib carboxiesteraza responsabil de inactivarea prin hidroliz. 4. Antagonismul are loc atunci cnd una din substane scade efectul toxic a l celeilalte. Acest fenomen este exploatat n tratamentul intoxicaiilor prin folosi rea de antidoturi. 5. Inducia i inhibiia enzimatic pot conduce la modificarea metabo lismului uneia din substane, cu consecine asupra toxicitii acesteia. Nivelele la car e se produc interaciunile dintre substane Interaciunile dintre substane pot avea loc la diferite nivele, care includ absorbia, distribuia, metabolizarea, excreia, locu l aciunii toxice sau mecanismele de reparare. Exemple de astfel de interaciuni sun t prezentate n Tabelul V.4.. Interaciuni medicamentoase Aceste interaciuni au drept consecin fie apariia de reacii adverse, unele foarte grave, la doze terapeutice ale medicamentelor administrate, fie reducerea rspunsului farmacologic i ineficiena tr atamentului. Interaciunile medicamentoase se pot produce prin mecanism chimic, fa rmacocinetic sau farmacodinamic i pot fi influenate de vrst i de factori genetici. Ce le mai numeroase sunt interaciunile farmacocinetice i pot avea loc la nivelul abso rbiei din tractul gastrointestinal, la nivelul legrii de proteinele
120 TOXICOLOGIE GENERAL plasmatice, la nivelul excreiei i la nivelul metabolizrii. Interaciunile la nivelul metabolizrii se explic prin inducie sau prin inhibiie enzimatic i conduc adesea la rea cii foarte serioase. Interaciunile la nivelul receptorilor sunt n general interaciun i antagoniste i sunt exploatate pentru obinerea de antidoturi care acioneaz prin mec anism competitiv. Tabel V.4. Bazele chimice i biologice ale interaciunilor dintre substanele toxice Bazele interaciunii Chimic Sinergism sau potenare Formarea nitrozaminelor din nitrii i amine Antagonism Dimetihidrazina reacioneaz in vivo cu piridoxal fosfatul, formnd o hidrazon i inducnd o depleie a depozitelor tisulare ale acestui cofactor enzimati c Zincul din alimente inhib parial toxicitatea plumbului i prin scderea procentului de plumb absorbit din alimente Seleniul protejeaz mpotriva toxicitii cadmiului prin scderea concentraiilor de cadmiu din ficat i rinichi i prin redistribuirea cadmiului din testicule, de pe proteinele de legare cu mas molecular mic pe cele cu mas molec ular mare. Arsenul antagonizeaz parial efectele seleniului, prin creterea excreiei bi liare a acestuia. Seleniul inhib leziunile hepatice i incidena tumorilor hepatice i nduse de 2-acetilaminofluoren prin deplasarea metabolismului pe o cale de detoxi fiere. Blocarea receptorilor acetilcolinei de ctre atropin n intoxicaiile cu insecti cide organofosforice Interaciunea histaminei i a nordrenalinei, cu efecte asupra v asodilataiei i a presiunii sanguine Inducia reparrii ADN-ului dup expunere la ageni al chilani Absorbia Distribuia Neurotoxicitatea insecticidului organofosforic EPN este crescut de hidrocarburile alifatice cu 6 atomi de carbon i datorit creterii absorbiei prin piele Dup tratament ul cu derivai de ditiocarbamat, tiuram cresc nivelele cerebrale de plumb Excreia Scderea excreiei renale de penicilin la asocierea cu probenecid Compuii organofosfor ici profenfos, sulprofos, poteneaz toxicitatea malationului prin inhibarea esteraz ei care l detoxific. Metabolizarea Interaciunea la nivelul receptorilor Interaciunea la alt nivel dect cel al receptor ilor (antagonism funcional) Interaciune cu ADN-ul
Interaciuni cu compui din diet Regimul alimentar, prin coninutul su n diferii compui ritivi sau nu, poate modifica toxicitatea substanelor. Mecanismele prin care comp onenii din diet pot modula toxicitatea xenobioticelor sunt: - efectele asupra abso rbiei - efectele asupra metabolismului - inactivarea metaboliilor reactivi - induci a reparrii ADN - inhibarea proliferrii celulelor canceroase prin modularea comunicr ii intracelulare, a expresiei oncogenelor i a reglrii hormonale - toxicitatea sele ctiv - inducerea diferenierii - imunomodulare 1. Proteinele n general, o diet srac n p oteine scade activitatea OFMM n ficatul de obolan, efectele fiind dependente de se x i de substrat. De exemplu, N-demetilarea aminopirinei i hidroxilarea hexobarbita lului sunt sczute n principal la masculi, n timp ce hidroxilarea anilinei este redu s la ambele sexe. De asemenea, s-a observat o scdere a activitii azoreductazelor, co nsecina fiind creterea gravitii efectelor carcinogene ale dimetilaminoazobenzenului. Stricnina, care este detoxifiat de OFMM, este mai toxic la animalele cu o diet srac n proteine, n timp ce tetraclorura de carbon, care este bioactivat de aceleai enzime , este mai puin toxic. i reaciile din faza II pot fi afectate. Astfel, glucuronidare a cloramfenicolului este redus la cobaii cu deficit de proteine. 2. Lipidele O di et deficitar n acizi grai nesaturai conduce n general la o reducere a activitii citoc ului P450 la obolan. Lipidele par a fi necesare pentru ca efectul inductorilor en zimatici, cum ar fi fenobarbitalul, s fie complet exprimat. Totui, la animalele cu o diet bogat n lipide s-a observat o inciden crescut a cancerelor de sn i de colon, e pare a fi corelat n special cu evenimentele din faza de promovare. 3. Glucidele O diet bogat n glucide are la obolan un efect asemntor cu cel al unui aport proteic sc ut, scznd activitatea unor enzime ale citocromului P450. Deoarece obolanii tind s ec hilibreze aportul caloric total, aceast constatare ar putea reflecta mai degrab un aport sczut de proteine. 4. Vitaminele Deficienele vitaminice conduc de obicei la o reducere a activitii OFMM, dei exist i unele excepii. Deficiena de riboflavin dete n o cretere a hidroxilrii anilinei, cu toate c n acelai timp produce o scdere a hidrox lrii
benzpirenului. Deficiena de vitamin C scade activitatea att a enzimelor din faza I ct i a glucuronoziltransferazelor. Deficienele de vitamine A i E scad activitatea OF MM, n timp deficiena de tiamin produce o cretere a acestei activiti. 5. Mineralele Mod ificarea aportului de minerale prin diet poate afecta activitatea OFMM. Astfel, u n exces de cobalt, cadmiu, mangan i plumb n diet poate produce o cretere a niveluril or hepatice de glutation i o scdere a coninutului n citocrom P450. Un aport sczut de calciu i fier n diet favorizeaz absorbia cadmiului i a plumbului. Seleniul are un rol important n procesele de detoxifiere, deoarece intr n compoziia unor enzime cum ar f i glutation peroxidaza, cu rol n inactivarea peroxidului de hidrogen i a peroxizil or organici. 6. Factori ne-nutritivi din diet Unii compui din alimente cum ar fi c afeina, etanolul, anumite flavonoide (tangeretin, nobiletin), pot induce enzimel e citocromului P450, dintre care unele sunt implicate n formarea de metabolii reac tivi, mutageni. Sulfura de dialil din usturoi, precum i metabolitul su dialil sulf ona, inhib ireversibil CYP2E1, acesta fiind probabil mecanismul prin care este bl ocat procesul carcinogen. Fenetil izotiocianatul, un produs de degradare a unor vegetale din familia cruciferelor, are de asemenea aciune blocant, iar naringeninu l din grapefruit inhib CYP1A2. Vanilina, aldehida cinamic i cumarina induc unele me canisme de reparare a ADN, iar componentele din ceai, printre care acidul galic, protejeaz mpotriva mutaiilor induse de radiaiile UV n culturi bacteriene. Catechinel e i galocatechinele din ceaiul verde au efecte antimutagene i anticarcinogene prin prevenirea inhibrii comunicrii intracelulare induse de unele carcinogene. Fitoest rogenii au rol protector mpotriva tumorilor dependente de hormonii sexuali, n spec ial mpotriva tumorilor mamare i de prostrat. Beta carotenul i cantaxantina au efecte anticarcinogene i imunomodulatoare. 2. Temperatura Variaiile de temperatur reprezi nt o form de stres i de aceea pot produce modificri mediate prin interaciuni hormonal e. Temperatura poate determina: - creterea toxicitii att la temperaturi sczute ct i la temperaturi ridicate, de exemplu creterea toxicitii cafeinei la oareci; - creterea to xicitii o dat cu creterea temperaturii, cum este cazul Damfetaminei, a crei toxicitat e este mai redus la temperaturi joase. 3. Radiaiile ionizante n general, radiaiile i onizante reduc viteza de metabolizare a xenobioticelor, att in vivo, ct i n preparat e enzimatice.
FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 123 4. Lumina 5. Umiditatea 6. Altitudinea 7. Factorii de stres (zgomotul)
MECANISME DE ACIUNE TOXIC n ultimii 30 de ani, toxicologia a progresat rapid, transformndu-se dintr-o tiin desc riptiv ntr-o disciplin capabil s explice efectele toxice. Aceast modificare a fost ini at de scandalul talidomidei, iar printre moleculele care au contribuit la nelegerea mecanismelor toxicitii se numr paracetamolul, brombenzenul i paraquatul. Explicarea mecanismelor prin care se produc efectele toxice este deosebit de important deoar ece: - permite identificarea cauzei toxicitii - contribuie la prevenirea toxicitii p rin metode chimice sau biologice - furnizeaz o baz raional pentru extrapolarea datel or de toxicitate de la animalele de experien la om i pentru evaluarea riscurilor as ociate cu expunerea la anumite xenobiotice. Efectele exercitate de substanele tox ice asupra organismului sunt foarte variate i destul de dificil de sistematizat. Ele pot fi clasificate dup locul unde se produc, dup reversibilitatea sau nu a fen omenelor, dup momentul n care apar. a) Efecte locale i efecte sistemice Efectele lo cale sunt cele care se exercit imediat, la locul de contact ntre substana toxic i org anism. Ele se pot datora aciunii moleculelor caustice asupra tubului digestiv, a materialelor corosive asupra pielii, sau a gazelor iritante asupra mucoasei cilor respiratorii, i sunt consecina unei distrugeri generalizate a celulelor. Efectele sistemice se manifest dup ce xenobioticul a fost absorbit i distribuit n organism. Substana toxic nu afecteaz n mod egal toate organele, ci acioneaz mai specific la nive lul unuia sau a ctorva organe care poart denumirea de organe int. Organul int este fie organul care are o sensibilitate mai mare la aciunea compusului toxic, fie organ ul n care acesta se gsete n concentraie mai mare. De exemplu, neuronii i miocardul, la nivelul crora au loc schimburi transmembranare rapide i care sunt n consecin depende ni de ATP-ul rezultat n urma oxidrilor mitocondriale, sunt deosebit de sensibili la aciunea substanelor care induc hipoxie, cum este monoxidul de carbon. De asemenea , celulele cu diviziune rapid, cum sunt cele ale mduvei hematoformatoare sau ale m ucoasei intestinale, sunt foarte sensibile la aciunea toxicilor mitotici ca medic amentele citostatice.
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 125
O concentraie mai mare a substanei toxice la nivelul unui organ poate fi determina t de particularitile toxicocinetice ale acesteia. Deoarece prin ficat i prin rinichi trece cea mai mare parte a volumului sanguin, aceste organe sunt expuse la conc entraii mari de xenobiotice. Metilmercurul, o substan lipofil, poate strbate bariera hemato-encefalic, producnd efecte la nivelul SNC, spre deosebire de compuii anorgan ici ai mercurului care acioneaz toxic n principal la nivelul tractului gastrointest inal i al rinichilor. n ochi i n urechea intern se gsesc cantiti mai mari de melanin stanele cu afinitate mare pentru melanin, cum sunt clorochinul i kanamicina, se pot acumula la aceste nivele, unde dup expunere prelungit pot induce leziuni. Bioacti varea conduce la formarea unor metabolii mai reactivi, care sunt mai susceptibili s acioneze asupra celulelor adiacente locului de producere. Deoarece ficatul este locul major de biotransformare, el poate fi lezat de numeroase substane toxice. De exemplu, tetraclorura de carbon produce necroz hepatic centrolobular, care poate fi corelat cu un coninut mai mare de citocrom P450 n aceast regiune a ficatului. b) Efecte reversibile i efecte ireversibile Efectele reversibile sunt cele care dis par dup ntreruperea expunerii la substana toxic. Efectele ireversibile sunt efectele care persist, sau chiar progreseaz, dup ntreruperea expunerii. n categoria efectelor ireversibile se ncadreaz cancerul, mutaiile, distrugerea neuronilor i ciroza hepati c. c) Efecte imediate i efecte tardive Efectele imediate apar rapid, dup o expunere unic la substana toxic, de exemplu cele observate n intoxicaiile acute cu substane ca ustice, cu cianuri sau stricnin. Efectele tardive sunt efectele care apar dup o pe rioad de laten, mai mult sau mai puin lung. Exemple sunt efectele carcinogene sau efe ctele observate n intoxicaia cu paraquat. Datorit multitudinii de substane toxice ex istente, i cile prin care acestea ajung s produc efecte toxice sunt diferite (Fig.6. 1.). Uneori simpla prezen a substanei la anumite nivele critice din organism este s uficient pentru a produce toxicitate, cum ar fi precipitarea unor compui n tubii re nali cu instalarea insuficienei renale (calea A). Alteori, xenobioticul trebuie s interacioneze cu un receptor (calea B), sau dup bioactivare interacioneaz cu molecul e endogene, perturbnd funcia sau structura celular (calea C). Afectarea celular poat e declana mecanisme de reparare la nivel molecular, celular sau tisular (calea D) , iar
126 TOXICOLOGIE GENERAL atunci cnd aceste mecanisme sunt depite se instaleaz toxicitatea. Necroza celular, ca ncerul i fibroza sunt fenomene toxice care urmeaz aceste 4 etape. S ubstanta toxica 1 E xpunere A 2 Interactiune cu molecula tinta B 3 Disfunctie celulara Lezare C 4 E secul repararii D T O X I C I T A T E Fig.6.1. Etapele poteniale ale dezvoltrii toxicitii dup expunerea la xenobiotice Efectele toxice se produc deci n majoritatea cazurilor ca urmare a interaciunii mo leculei de xenobiotic sau a unui metabolit activ cu inte moleculare care pot fi: proteine, coenzime, lipide, acizi nucleici.
1. Proteinele a) Proteinele de structur cum ar fi cele din membranele organitelor celulare sunt frecvent lezate. Proteinele din colagen sunt ns afectate mult mai r ar. b) Proteinele cu funcie enzimatic sunt frecvent inta aciunii substanelor toxice. Efectele asupra enzimelor pot fi specifice, reversibile sau nu, cnd xenobioticul trebuie s ndeplineasc anumite cerine structurale pentru a se putea lega de centrul a ctiv al enzimei (ex. insecticidele organofosforice care inhib acetilcolinesteraza ), sau nespecifice, cum este cazul unor metale ca plumbul i mercurul ce pot inhib a foarte multe enzime, indiferent de activitatea lor, datorit legrii de gruprile ti olice ale acestora. c) Transportori, cum ar fi hemoglobina, a crei funcie de trans port al oxigenului poate fi afectat prin legarea monoxidului de carbon sau prin o xidarea la methemoglobin. 2. Coenzimele Coenzimele sunt indispensabile pentru fun cionarea enzimelor. Unele substane toxice le pot inhiba sinteza, n timp ce altele p ot chelata ionul metalic al coenzimei (ex. ditiocarbamaii care chelateaz ioni de Z n sau Cu). 3. Lipidele Lipidele pot fi atacate de radicalii liberi care iniiaz per oxidarea acizilor grai din compoziia lor, producnd necroz. De asemenea, unele aneste zice liposolubile ca halotanul sau eterul se pot acumula n membrana celular prin d izolvare n fraciunea lipidic a acesteia i determin perturbri ale transportului transme mbranar de oxigen sau de glucoz. 4. Acizii nucleici Formarea de legturi covalente n tre acizii nucleici n curs de replicare i substana toxic sau metaboliii activi ai ace steia poate conduce la mutaii, cancere sau teratogenez. Antimetaboliii ca aminopter ina pot fi ncorporai n molecula acizilor nucleici i interfereaz n replicarea acestora. Aceste inte moleculare trebuie s fie accesibile i s prezinte o anumit reactivitate s au configuraie spaial care s le permit interaciunea cu substana toxic (Fig.6.2.). Con ina interaciunii poate fi distrugerea moleculei int, modificarea funciei acesteia sau formarea unui antigen. Deoarece intele moleculare care sunt afectate de substanel e toxice sunt eseniale pentru viaa sau buna funcionare a celulelor, aceste interaciu ni se vor reflecta la nivel celular prin distrugerea structurii celulare sau pri n modificarea funciei celulare. Aceste modificri sunt strns corelate, o leziune cel ular putnd antrena un deficit funcional, iar o alterare funcional putnd conduce la afe ctarea integritii structurale.
128 TOXICOLOGIE GENERAL TIPURI DE REACTII Legare necovalenta Legare covalenta Sustragerea H Transfer de electroni Reactie enzimatica CONSECINTE TOXIC FINAL MOLECULA TINTA Functie anormala Distrugere Formare de ant igeni CARACTERISTICI ALE TINTEI Reactivitate Accesibilitate Functie critica Fig.6.2. Reacia toxicului final cu molecula int I. AFECTAREA STRUCTURII CELULARE Aciunea substanelor toxice asupra structurii celu lare poate conduce la: distrugere celular total (moartea celulei), sau doar la lez area membranei celulare sau a organitelor celulare. MOARTEA CELULAR Moartea celul elor se poate produce prin dou mecanisme: necroza i apoptoza.
1. Necroza este consecina aciunii unor factori externi asupra celulei: cldur, anoxie , substane toxice, i are urmtoarele caracteristici morfologice i funcionale: Este un proces pasiv Afecteaz de obicei mai multe celule individuale adiacente Membrana p lasmatic este pierdut n fazele incipiente ale morii celulare Se produce umflarea cit oplasmei cu degenerarea organitelor celulare Cromatina nuclear devine mai puin den s Conduce de obicei la inflamaie exudativ datorit eliberrii resturilor celulare n es l adiacent Are loc degenerarea celulei 2. Apoptoza este o form de moarte celular p rogramat, care are rolul de a ndeprta celulele nedorite, deci de a menine homeostazi a normal a esuturilor. Apoptoza are urmtoarele caracteristici: Moartea celulei nu s e produce sub aciunea direct a unor factori lezionali, dar stimulii externi pot in duce n celula afectat procese metabolice care declaneaz apoptoza Este un proces acti v Afecteaz de obicei celule izolate dintr-un esut sau un organ Are loc condensarea citoplasmei, structura organitelor celulare fiind puternic afectat Se produce co ndensarea cromatinei nucleare Nu este nsoit de inflamaie Se produce fragmentarea cel ulei, cu apariia corpilor apoptotici n moartea celular prin apoptoz sunt implicate nit enzime specifice denumite caspaze, care sunt nite proteaze intracelulare latente . Semnalul de moarte celular determin clivajul pro-enzimei, formndu-se caspaza acti v tetrameric. Tiolii celulari, cum ar fi glutationul i tioredoxina, favorizeaz activ itatea caspazei inductibile. Celulele nedorite pot fi sensibilizate la moartea c elular de anumite substane nutritive oxidoreductoare ca acidul a-lipoic. Acidul lipoi c ptrunde n celul i este redus la acid dihidrolipoic, un reductor puternic ce poate r egla activitatea caspazei inductibile. n anumite condiii, speciile reactive de oxi gen (ROS) i speciile reactive de azot (RNS), pot inhiba funcia caspazei inductibil e, oprind executarea morii celulare (Fig.6.3.). Dei mult vreme s-a crezut c apoptoza nu este implicat n procesele de origine toxic, tot mai multe date susin rolul stres ului oxidativ n iniierea apoptozei, iar stresul oxidativ la rndul su poate fi indus i de substane toxice. Stresul oxidativ, aa cum s-a vzut, poate fie promova, fie inhi ba apoptoza, dependent de nivelul la care are loc lezarea.
130 TOXICOLOGIE GENERAL Fig.6.3. Reglarea redox a activitii caspazei inductibile
Moartea celulelor se poate produce ca urmare a aciunii caustice, sau ca urmare a legrii ireversibile a unor intermediari reactivi. A) Aciunea caustic Efectul causti c const dintr-o arsur chimic, diferit de cea termic, produs la locul de contact ntre s bstana toxic i esut, care poate fi: pielea, mucoasele externe, digestive, respirator ii, rinichiul, nervul optic, etc. Agenii caustici dezorganizeaz sau chiar distrug arhitectura celular n urma denaturrii proteinelor i pot fi: - substane care creeaz un pH acid sau bazic diferit de cel fiziologic - substane oxidante - substane deshidr atante - soluiile unor cationi organici sau anorganici - anioni aromatici (acid s alicilic) - detergeni cationici. B) Formarea de intermediari reactivi Intermediar ii reactivi sunt : structurile electrofile, radicalii liberi i speciile reactive de oxigen. 1. Structurile electrofile se formeaz de obicei prin reacii catalizate de izoenzimele citocromului P450 i pot fi epoxizi, chinone sau ioni de nitreniu.
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 131 2. Radicalii liberi sunt molecule sau fragmente moleculare care conin unul sau ma i muli electroni nepereche n orbitalul extern. Radicalii liberi se formeaz prin: I. Acceptarea sau pierderea unui electron II. Clivajul homolitic al unei duble legt uri I. a) Reducerea prin acceptarea unui electron, un mecanism prin care multe s ubstane formeaz radicali liberi, este catalizat de NADPH citocrom P450 reductaza mi crozomial. Xenobiotice ca paraquatul (Fig.6.4.), doxorubicina, nitrofurantoina, a ccept un electron de la reductaze pentru a forma radicali. De obicei, aceti radica li transfer electronul suplimentar oxigenului molecular, formnd radicalul anion su peroxid (O2 .-) i regenernd compusul printe, care este astfel disponibil pentru a cti ga un nou electron. Se iniiaz astfel un ciclu redox, n care o molecul de xenobiotic ac ceptoare de electroni poate genera mai multe molecule de O2.-. Alternativ, radic alul xenobiotic cu un electron suplimentar poate reduce i n consecin elibera Fe3+ di n feritin, producnd ioni Fe2+ care sunt toxici. NADPH citocrom P450 reductaza forma oxidata H3C N . N + CH3 O2 NADP citocrom P450 reductaza forma redusa H3C e + N + N CH3 Paraquat O2 .Fig.6.4. Bioactivarea paraquatului I. b) Pierderea unui electron. Xenobioticele nucleofile: fenoli, hidrochinone, a minofenoli, amine, hidrazine, fenotiazine, tioli, sunt susceptibile s piard un ele ctron ntr-o reacie catalizat de peroxidaze, formnd radicali liberi. Unele din aceste substane, de exemplu catecoli, hidrochinone, pot suferi o oxidare n dou etape, pro
ducndu-se nti radicali semichinone, apoi chinone. Chinonele la rndul lor pot partici pa la cicluri redox, cu generarea de radical anion superoxid (Fig.6.5.). II. For marea de radicali liberi prin clivajul homolitic al legturii covalente (clivaj re ductor): poate fi indus prin transferul electronului la molecul. Acest mecanism es te implicat n conversia CCl4 la radical triclormetil printr-un transfer de electr oni
132 TOXICOLOGIE GENERAL de la citocromul P450 sau de la lanul mitocondrial de transport al electronilor ( dehalogenare reductoare) (Fig.6.6.). Clx Clx CYP450, O2 NADPH CYP450 O2 NADPH O Formare directa de aducti cu ADN OH Clx OH Clx CYP450, O2 NADPH HO OH Clx OH Cu(I) O Clx Cu(II) Peroxidaze O O2 Cu(I) + H2O2 + O2 . .HO + HO + Cu(II) Clx . O ADN O Formare directa de aducti cu ADN (hidroxilare) ADN Formare directa de aducti cu ADN Formare directa de aducti cu ADN Fig.6.5. Bioactivarea bifenililor policlorurai (PCB)
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 133 CCl3 . P-450-Fe3+ CCl4 P-450-Fe3+.......CCl4 Cl e P-450-Fe3+.......CCl3 . Fig.6.6. Mecanismul posibil al dehalogenrii tetraclorurii de carbon mediate de ci tocromul P450 3. Speciile reactive de oxigen. Numeroase substane toxice, pe lng faptul c se pot tr ansforma n radicali liberi n cursul metabolizrii, pot participa la ciclurile redox, genernd radical anion superoxid, care la rndul su determin formarea altor specii re active de oxigen (ROS) implicate n numeroase procese citotoxice. Substanele toxice care particip la ciclurile redox sunt de obicei chinone i hidrochinone, iar ciclul redox ncepe cu o etap de reducere care implic un singur electron i care este cataliz at de citocrom P450 reductaza NADPH dependent. Speciile reactive de oxigen sunt pr ezentate n Tabelul VI.1. Generarea peroxidului de hidrogen are loc prin dismutaia superoxidului. De aceea, orice sistem biologic care genereaz radical anion supero xid va produce peroxid de hidrogen. Exist ns i enzime localizate n peroxizomi care pr oduc peroxid de hidrogen fr a necesita radicalul anion superoxid (O2.-) ca interme diar. Spre deosebire de O2.-, peroxidul de hidrogen este capabil s traverseze mem branele, reacionnd n celul cu Fe2+ sau Cu+ pentru a forma radicali hidroxil prin Rea cia Fenton (Fig.6.7.). Reacia Fenton este catalizat de ioni ai metalelor tranziional e, de obicei Fe(II) sau Cu(I), Cr(V), Ni (II) sau Mn(II), i reprezint un mecanism major al toxicitii H2 O2 i al precursorului su O2.-, precum i al metalelor tranziional e, deoarece radicalul hidroxil este unul dintre cei mai puternici i mai reactivi oxidani cunoscui, reacionnd imediat cu orice compus biologic disponibil.
134 TOXICOLOGIE GENERAL Tabel VI.1. Specii reactive de oxigen Specia reactiv de oxigen Oxigen singlet (1O 2) Radical anion superoxid (O2.-) Radicalul perhidroxil (.O-OH) Anionul peroxid (O22-) Radicalul hidroxil (OH.) Modul de formare Excitarea O2 Reducerea oxigenul ui prin adiia unui electron; cicluri redox Protonarea radicalului anion superoxid Reducerea radicalului anion superoxid prin adiia unui electron Din ap, sub aciunea radiaiilor ionizante i din peroxidul de hidrogen, prin dezintegrare catalizat de m etale Din O2, prin fotoliz Ozonul (O3)
Alt surs de peroxid de hidrogen n afar de dismutaia spontan sau cea catalizat de super xiddismutaz (SOD) a radicalului anion superoxid, este aceea de produs secundar, d irect sau indirect, al mai multor reacii catalizate de enzime ca: monoaminoxidaza , xantinoxidaza, acil-coA oxidaza. .SOD HOOH 2H+ Fe(II), Cu(I), Mn(II), Cr(V), Ni(II) O2 O2 O2 .Fe(III), Cu(II), Mn(III), Cr(VI), Ni(III) HO . OH Fig. 6.7. Reacia Fenton
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 135 O alt reacie ce permite formarea radicalului hidroxil este Reacia HaberWeiss (Fig.6 .8.), care este probabil catalizat de ionii de fier liberi (b), sau de fierul sec hestrat n feritin, lactoferin, hemoglobin i mioglobin. .. a) O2 + H2O2 HO + OH + 1O2 b) O2 .Fe3+ OH + HO . 1 O2 Fe2+ H2O2 Fig. 6.8. Reacia Haber-Weiss Mecanisme de aprare mpotriva speciilor reactive de oxigen Organismul dispune de me canisme care i permit s se apere mpotriva agresiunii speciilor reactive de oxigen. Ele pot fi mecanisme enzimatice sau mecanisme neenzimatice. Mecanismele enzimati ce, alturi de modul de generare a acestor compui reactivi, sunt prezentate n Fig.6. 9. a) Mecanismele enzimatice sunt reprezentate de: Superoxiddismutaze (SOD), pro teine ce conin metale i care catalizeaz conversia radicalului anion superoxid la ox igen molecular i peroxid de hidrogen: a) O2.- + SOD-Cu2+ b) O2.- + SOD-Cu+ + 2H+ O2 + SOD-Cu+ H2O2 + SOD-Cu2+ Catalaza (CAT), o enzim ce conine hem i care transform peroxidul de hidrogen n ap i gen. Ea acioneaz numai asupra peroxidului de hidrogen, nu i asupra peroxizilor orga nici. Se gsete n majoritatea esuturilor, n peroxizomi. Glutation peroxidaza (GPX) cat alizeaz i conversia peroxizilor organici (ex. hidroperoxizii lipidici). Enzima est e specific pentru glutation, nu pentru substraturile detoxifiate. Se gsete n majorit atea esuturilor, att n citosol ct i n mitocondrii.
136 TOXICOLOGIE GENERAL b) Mecanismele neenzimatice constau n reacia radicalilor cu substane care i inactive az. Astfel de substane sunt: Vitamina E: lipofil, ncorporat n membrane Vitamina C: rosolubil, se gsete n citosol. RE P450 oxidaza PEROXIZOMI GR oxidaze GPX GSSG H2O O2 GSH NADPH oxidaza NADP+ H+ xantin oxidaza O2 NADPH O2.Cu,Zn-SOD CAT H2O2 H2O Fe /Cu 2+ + O2 .O2 dismutatie MPO spontana 1 . O2 O2 .Fe /Cu 3+ 2+ OH O2 O2 lantul mitocondrial de transport al e .O2 Mn-SOD H2O2 GPX CAT
H2O O2 Fig. 6.9. Generarea speciilor reactive de oxigen i principalele mecanisme enzimat ice de aprare 4. Speciile reactive de azot. O alt specie reactiv care poate induce leziuni ale a cizilor nucleici este oxidul nitric, mai ales n prezena superoxidului, cu care for meaz specii secundare mai reactive. Speciile secundare pot reaciona la rndul lor cu ali constitueni celulari formnd specii teriare, care pot de asemenea leza ADN-ul (F ig.6.10.). 2NO + O2 2NO2
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 137 NO2 + NO N 2 O3
Anhidrida nitroas este mai reactiv i mai susceptibil s produc leziuni dect oxidul nitr c. N2O3 + amine nitrozamine + tioli nitrozotioli N2O3 + H2O2 2HNO2 NO + O2- ONOO (peroxid) (peroxinitrit) Reacia este mai eficient dect cea a superoxidului cu super oxid dismutaza. Candidaii majori la lezarea ADN-ului sunt: anhidrida nitroas i pero xinitritul. Donori de oxid nitric sunt: nitrozureele ex. streptozocina nitroglic erina Oxidul nitric se mai gsete i n atmosfer, unde provine din gazele de eapament ale automobilelor sau din fumul de igar. SPECII SECUNDARE SPECII TERTIARE NITROZAMINE ADUCTI AI GLUCOZEI N2 O 3 +O2 OXID NITRIC ONOO +O2 NITOZOTIOLI LEZARE ADN Fig. 6.10. Aciunea oxidului nitric ca mutagen primar, secundar sau teriar
Implicaiile toxicologice ale interaciunii intermediarilor reactivi cu intele molecu lare Acestea constau n: Legarea covalent de intele moleculare Peroxidarea lipidelor Inducerea stresului oxidativ 1. Legarea covalent de intele moleculare (acizi nucl eici, proteine, cofactori, lipide) poate avea drept consecine: - scderea produceri i de energie - modificarea permeabilitii membranei - inhibarea sintezei de macromo lecule - inhibarea unor enzime - mutagenez, carcinogenez 2. Peroxidarea lipidelor Este un proces iniiat de atacul speciilor reactive de oxigen (radical hidroxil, o xigen singlet) asupra acizilor grai polinesaturai din componena membranelor biologi ce, care poate duce la lezarea acestora i n final la moarte celular. Procesul decur ge n 3 etape (Fig.6.11.): I. sustragerea de ctre radicalul hidroxil sau oxigenul s inglet a unui atom de hidrogen de pe catena unui acid gras nesaturat, la nivelul ntlnirii a dou grupri alil. (iniiere = formarea radicalului) II. reacia radicalului a cidului gras format cu oxigenul molecular (peroxidare) III. oprirea reaciei n lan ( terminare) 3. Stresul oxidativ Este situaia n care producerea speciilor reactive d e oxigen depete eliminarea lor prin sistemul antioxidant natural de aprare, sau cnd a cesta din urm este afectat, n organism existnd o interaciune continu cu ageni oxidani. aceast situaie se utilizeaz mai muli echivaleni reductori dect ar fi cazul pentru fun onarea normal a celulei. Echivalenii reductori depozitai n celule sunt NADPH-ul, glut ationul, proteinele cu grupri tiol, vitaminele C i E. Cauzele principale ale stres ului oxidativ sunt speciile reactive de oxigen i structurile chinoidice. Exist tot mai multe dovezi care vin n sprijinul ipotezei implicrii stresului oxidativ n indu cerea unor boli neurodegenerative, moartea celular producndu-se prin apoptoz indus d e speciile reactive de oxigen. Boli neurodegenerative n care
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 139 I. initierea LH + OH . L + H2O . II. propagarea L + O2 . LOO . LOOH III. terminarea L + L LH . . . . produsi lipsiti de activitate L + LO2 . LO2 + LO2 . LH = acid gras polinesaturat . L = radical lipidic Fig.6.11. Etapele peroxidrii lipidelor exist date cu privire la implicarea stresului oxidativ sunt : Boala Alzheimer, Bo ala Parkinson, Boala Hungtington, scleroza lateral, diskinezia tardiv indus de neur oleptice, tulburrile neurologice induse de substane toxice ca metilmercurul, cadmi ul, toluenul, solvenii organici.
II. TULBURRI ALE FUNCIEI CELULARE INDUSE DE SUBSTANELE TOXICE Tulburrile induse de s ubstanele toxice la acest nivel depind de rolul moleculei int n funcionarea celulei. Astfel, dac molecula int este implicat n reglarea funciei celulare, afectarea ei poate conduce la disfuncii ale exprimrii genice sau la disfuncii ale activitii celulare n d esfurare. Dac molecula int este implicat n homeostazia celular, afectarea ei poate co omite supravieuirea celulei.
1. Disfuncii ale exprimrii genice Acestea se pot produce la nivelul: - elementelor responsabile de transcripie - componentelor cii de transducie a semnalelor - sinte zei, depozitrii sau eliberrii moleculelor de semnalizare: hormoni, citokine, facto ri de cretere, neuromeditori, oxid nitric. Disfuncii la nivelul transduciei semnale lor Celulele individuale dintr-un organism multicelular trebuie s comunice ntre el e pentru a coordona funcia diferitelor esuturi i sisteme de organe. Comunicarea int ercelular const n secreia de ctre o celul a unei molecule care se leag apoi de recepto ii unei a doua celule, inducnd o modificare a activitii biologice a acesteia. Mecan ismul prin care legarea unei molecule de receptorul su din celula int induce o modi ficare a activitii biologice a acesteia din urm poart denumirea de transducie a semna lelor. Moleculele de semnalizare, hormonii sau neuromediatorii, nu ptrund n celule le crora le este adresat mesajul pe care l transport. Mesajele sunt comunicate prin membrana plasmatic prin intermediul unor proteine receptoare integrate membranei , care pot fi receptori cuplai cu proteine G, receptori cuplai cu canale ionice sa u receptori cuplai cu enzime cum sunt tirozin kinazele. Legarea moleculei de semn alizare de receptor va determina eliberarea n citosolul celulei a unor molecule n umite mesageri secundari, care transfer la rndul lor semnalele unor enzime sau alt or proteine din celul, cum ar fi protein kinazele. Principalii mesageri secundari din celule sunt inozitol trifosfatul (IP3 ), 3',5'adenozin monofosfatul ciclic (cA MP) i guanin monofosfatul ciclic (cGMP). Perturbarea transduciei semnalelor indus d e substanele toxice este probabil responsabil de modificarea exprimrii genice dup ex punerea celulelor la stres oxidativ, la metale grele i la compui ce formeaz aduci pr in legturi covalente. De exemplu, s-a dovedit c mecanismul de producere a neurotox icitii plumbului poate fi explicat prin interferarea n transducia semnalelor. Plumbu l poate mima aciunea calciului sau i poate perturba homeostazia, calciul fiind un cofactor n multe procese celulare implicate n transducia semnalelor. Astfel, plumbu l poate activa protein kinaza C (PKC) i o poate transloca din citosol n membrane, fiind chiar mai activ dect calciul. Datorit activrii susinute a enzimei, se poate pr oduce un fenomen de reglare negativ, care n final determin scderea activitii PKC. Acea st scdere a activitii a fost corelat cu deficitul de memorie i cu scderea capacitii care sunt observate la persoanele expuse cronic la plumb.
2. Disfuncii ale activitii celulare n desfurare Celulele cele mai afectate sunt celule le excitabile, cum ar fi neuronii i celulele musculare din muchii scheletici, card iac i netezi. Funciile acestor celule, ca eliberarea neuromediatorilor i contracia m uscular, sunt controlate de transmitori i de modulatori care sunt sintetizai i elibera de celulele adiacente. Substanele toxice pot perturba funcia acestor celule prin alterarea: - nivelelor de neuromediatori - funciei receptorului (legare de recept ori) - procesului de transducie a semnalelor - procesului de ntrerupere a semnalul ui Prin acest mecanism de aciune se explic toxicitatea unor medicamente, pesticide sau toxine din bacterii, plante i animale. 3. Afectarea homeostaziei celulare 3. 1. Decuplarea fosforilrii oxidative Necesarul energetic al organismului este asig urat de oxidarea glucidelor i lipidelor, cuplat cu sinteza adenozin trifosfatului (ATP) prin fosforilare oxidativ. Energia chimic este eliberat prin hidroliza ATP la ADP sau AMP. ADP este refosforilat n mitocondrie de ctre enzima ATP-sintetaz. Aces t proces este cuplat cu oxidarea hidrogenului la ap, necesitnd oxigen (Fig.6.12.). n reducerea oxigenului la ap intervine un sistem de transport al electronilor, ca re const dintr-o serie de reacii redox. Substanele toxice care interfereaz n sinteza mitocondrial a ATP au fost mprite n patru clase: I) Substane care interfereaz n fur ea hidrogenului ctre lanul de transport al electronilor. Un exemplu este fluoroace tatul, care se formeaz n locul acetatului n intoxicaiile cu fluoruri i care inhib cicl ul acidului citric i producerea de cofactori redui. II) Substane care inhib transfer ul electronilor ctre oxigen de-a lungul lanului de transport, cum este cazul cianu rii. III) Substane care afecteaz eliberarea oxigenului ctre citocrom oxidaz, transpo rtorul ultim al electronilor. Toate substanele toxice care produc hipoxie acioneaz n final n acest mod. IV) Substane care inhib activitatea ATP-sintetazei sau sinteza ATP-ului la acest nivel, cum ar fi DDT-ul, pesticidele dinitrofenolice, salicilai i.
142 TOXICOLOGIE GENERAL Substraturi Produsi GLUCOZA ACIZI GRASI O2 2H2O piruvat acizi grasi-CoA Pi ADP A TP AP PDH acetil-CoA CICLUL ACIDULUI CITRIC bOX NAD+ NADH + H+ H+ e LTE O24 4H+ SY Inhibitori I II III IV Fig.6.12. Fosforilarea oxidativ n mitocondrii (AP = transportorul ATP, ADP, LTE = lanul de transport al electronilor, SY = ATP sintetaza, Pi = fosfat anorganic, bOx = boxidarea acizilor grai)
3.2. Afectarea homeostaziei calciului Ionii de calciu au un rol foarte important n funcionarea celulelor, iar nivelele i localizarea lor sunt strict controlate de procese de compartimentare i de mecanisme de transport. Diferite substane toxice p ot perturba aceste mecanisme, producnd efecte duntoare grave la nivel celular. Crete rea concentraiilor intracelulare ale calciului liber poate produce modificri ale c itoscheletului, umflarea i n final perforarea membranei plasmatice, afectarea funci ei mitocondriale i activarea unor enzime de degradare dependente de calciu (prote aze, fosfolipaze, endonucleaze). Substanele toxice pot crete concentraia intracelul ar a calciului fie prin favorizarea ptrunderii n celul (substane care acioneaz prin in ermediul unor
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 143 receptori citosolici care cresc sinteza proteinelor), fie prin impedimentarea tr ansportului calciului. Prin acest ultim mecanism acioneaz majoritatea compuilor chi mici care induc leziuni oxidative, cum ar fi radicalii liberi, chinonele i peroxi zii. GENOTOXICITATEA Genotoxicitatea reprezint efectul substanelor toxice asupra materi alului genetic. Acesta este alctuit din acizii nucleici, acidul dezoxiribonucleic (ADN) i acidul ribonucleic (ARN). ADN-ul este o macromolecul gigantic, a crei struc tur permite stocarea exact a unei mari cantiti de informaii. Codul genetic este compu s din patru litere: dou baze azotate pirimidinice (timina i citozina) i dou baze purin ice (guanina i adenina), care sunt aranjate n codoni, sau triplei, fiecare codon co nstnd dintr-o combinaie de trei litere. Molecula de ADN este alctuit din dou catene, bazele de pe o caten fiind legate ntre ele printr-un schelet de fosfat dezoxiriboz. Cele dou catene sunt legate prin intermediul legturilor de hidrogen stabilite ntre baze. Adenina de pe o caten este ntotdeauna legat de timina de pe catena sor, iar g uanina de citozin. Molecula dublu catenar de ADN are proprietatea unic de a realiza copii identice, n prezena precursorilor, enzimelor corespunztoare i a cofactorilor. Aceasta presupune separarea celor dou catene prin ruperea legturilor de hidrogen, urmat de mperecherea unitilor de dezoxiribonucleotid trifosfat sub aciunea ADN polim erazei, n procesul de replicaie. Un alt proces n care este implicat ADN-ul este tra nscripia, care presupune sinteza unei molecule de ARN mesager pornind de la ADN, sub aciunea enzimei ARN polimeraz. ARN-ul mesager este monocatenar i este constitui t din uracil n loc de timin, i riboz n loc de dezoxiriboz. ARN-ul mesager are rolul de a transmite informaia de la ADN la maina de sintez a proteinelor, acionnd ca o copie cu durat scurt de via a genelor exprimate. n continuare are loc translaia moleculelor de ARN mesager n polipeptide, proces care implic intervenia ARNului de transfer i a ARN-ului ribozomal. Mutageneza reprezint inducerea unor leziuni ale ADN-ului, sa u a altor alterri genetice care se manifest sub forma mutaiilor. Mutaiile sunt modif icri ereditare ale materialului genetic, care determin schimbri ereditare de la o c elul la alta ntre celulele somatice, sau de la un organism la descendeni, atunci cnd sunt afectate celulele germinale. Mutaiile pot fi clasificate n: - 1) Mutaii genic e, cnd se modific prin pierdere, deleie sau transformare, o singur pereche de baze
- 2) Aberaii cromozomiale, cnd se produc modificri majore ale structurii cromozomil or, sau ale numrului de cromozomi. 1) Mutaiile genice se mai numesc i mutaii punctua le, deoarece implic transformarea unei singure perechi de baze. Ele sunt invizibi le n microscopia clasic i pot fi detectate doar pe baza unor modificri fenotipice. S e pot datora substituiei unor perechi de baze sau adiiei sau deleiei unor perechi d e baze. a) Substituia unei perechi de baze poate fi o: - tranziie, atunci cnd o baz purinic este nlocuit cu o alt baz purinic, sau o baz pirimidinic cu o baz pirimidini ansversie, cnd o purin este nlocuit cu o pirimidin Mutaiile punctiforme se pot produce prin trei mecanisme: Transformarea chimic a bazelor, de exemplu sub aciunea acidu lui azotos, care este capabil s transforme citozina n uracil sau adenina n hipoxant in (Fig.6.13.): NH2 O N HNO2 N O HN O N dezoxiriboza dezoxiriboza Fig.6.13. Deaminarea citidinei la uridin
ncorporarea unor analogi anormali ai bazelor. Majoritatea substanelor toxice care acioneaz n acest mod sunt din clasa citostaticelor, care i datoreaz eficiena capacit r de a induce mutaii letale n celulele canceroase cu diviziune rapid (Fig.6.14.). E xemple de astfel de compui sunt: 2-aminopurina, 6-mercaptopurina.
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 145 C-G A-T G-C Bu C-G A - Bu G - Bu G-C Bu - A Bu - A G-C Bu - G Bu - A C-G A-T A-T Fig.6.14. Replicarea unui acid nucleic n prezena analogului bromouraci l (Analogul va forma perechi de baze att cu adenina ct i cu guanina, rezultatul fii nd o tranziie G C la A T)
Aciunea agenilor alchilani. Agenii alchilani sunt substane chimice care pot introduce o grupare alchil n molecula ADN-ului. Ei conin ioni pozitivi de carboniu (ex. CH3 +), care se combin cu bazele azotate bogate n electroni din ADN. Un exemplu de rea cie de alchilare cu semnificaie toxicologic este acela al dimetilnitrozaminei (Fig. 6.15.). H3C N H3C N O H3C N HOH2C N O - HCHO H3C N H N O CH3N2OH LEGARE DE ADN Fig.6.15. Generarea unui agent de metilare din dimetilnitrozamin Pentru alchilare sunt disponibile mai multe poziii ale bazelor purinice i pirimidi nice (Fig.6.16.), i de asemenea i gruprile fosfat din ADN pot fi alchilate.
146 TOXICOLOGIE GENERAL NH2 1 N N 7 H N 6 O N 7 3 N Adenina N H2N 3 N N Guanina NH2 H 3 N 3 N Citozina O 2 N 4 O CH3 O 2 N Timina Fig.6.16. Poziiile de alchilare a ADN-ului n condiii fiziologice b) Adiia sau deleia unei baze determin modificarea grilei de lectur a codului geneti c (Fig.6.17.) i are consecine mai drastice deoarece, dup locul mutaiei, fiecare trip let din ARN-ul mesager este modificat. ACA* AAG AGU CCA UCA ACA AGA GUC CAU CA Fig.6.17. Modificarea grilei de lectur prin deleia bazei A* 1) Aberaiile cromozomiale constau n modificri majore ale cromozomilor, care pot fi detectate n microscopia clasic, prin examinarea cromozomilor n metafaz. Substanele ca re produc aberaii cromozomiale poart
denumirea de substane clastogene. Aceste mutaii se datoreaz unor rupturi, deleii, mo dificri i rearanjri ale materialului cromozomial n cursul ciclului celular, unele di n ele fiind letale pentru celul. Sunt de dou tipuri: a) de tip cromatid, cnd o singu r cromatid prezint aberaii, sau b) de tip cromozom, cnd ambele cromatide sunt afectat e. Majoritatea agenilor chimici clastogeni produc aberaii de tip cromatid. Aberaiile numerice, care constau n modificarea numrului de cromozomi, sunt consecina diviziu nii inegale a cromozomilor i conduc la formarea unor celule ce au fie mai muli, fi e mai puini cromozomi dect normal. Aneuploidia const n ctigarea sau pierderea unuia sa u a ctorva cromozomi i se ntlnete n unele boli genetice cum ar fi sindromul Down (mong olism), care este asociat cu trisomia cromozomului 21. Poliploidia const n prezena n celule a unui multiplu al echipamentului cromozomial complet. Substane chimice c are produc poliploidie sunt colchicina, vincristinul, vinblastinul. TESTE DE MUT AGENEZA Pentru evaluarea potenialului mutagen al substanelor se folosesc teste de mutagenez. La ora actual sunt disponibile peste 100 de teste, att in vivo ct i in vit ro, care se realizeaz pe diferite organisme: - teste in vitro: pe bacterii, cultu ri de celule de mamifere i culturi de celule umane - teste in vivo: pe Drosophila , mamifere, organisme umane Deoarece multe substane acioneaz ca mutageni numai dup b ioactivare i transformare n metabolii electrofili foarte reactivi, iar multe teste de mutagenez se efectueaz in vitro, pentru mimarea metabolizrii se utilizeaz o fraciu ne a ficatului de obolan, S9. S9 este supernatantul obinut dup centrifugarea timp d e 20 de minute la 9000g a unui omogenat de ficat de obolan i conine sistemele enzim atice implicate n metabolizarea xenobioticelor (OFMM). Deoarece enzimele de origi ne microzomal sunt inductibile, se prefer utilizarea unui omogenat de ficat care p rovine de la animale tratate n prealabil cu inductori enzimatici (bifenili policl orurai, 3-metil colantren, fenobarbital). Dup tipul de efect asupra materialului g enetic pe care l evideniaz, testele de mutagenez se clasific n: A) Teste care msoar m ile genice 1) Teste microbiene in vitro Deoarece mutaiile de acest tip nu sunt vi zibile la microscop, aceste teste se bazeaz pe utilizarea de variante biologice c u un caracter specific, sau pe
producerea de mutaii letale recesive. Mutaiile la nivelul unui situs specific se p ot produce n 2 sensuri: n sensul direct: de la un tip slbatec la un tip mutant; mut aiile sunt puse n eviden prin rezistena lor la un agent toxic, care traduce modificar ea unei enzime n sens revers: de la tipul mutant la tipul slbatec de origine. Se u tilizeaz sue auxotrofe, care necesit deci un factor de cretere i care pierd aceast ce rin mutaie, redevenind prototrofe, deci capabile s creasc pe un mediu lipsit de acest factor de cretere. Un exemplu clasic este Testul Ames, care msoar reversia mutante lor histidin-dependente de Salmonella typhimurium la tipul slbatec, histidinindep endent. Se incubeaz suele mutante cu substana de testat ntr-un mediu de cultur srac n istidin, care nu permite deci dezvoltarea mutantelor. Dac substana produce mutaii re verse, se formeaz sue histidin-independente, care se pot dezvolta pe mediul srac n h istidin i pe plac se observ coloniile bacteriene. 2) Teste pe celule de mamifere Se folosesc celule de limfom de oarece, limfoblati umani, celule de plmn sau ovar de ha mster chinezesc. De exemplu, se pot folosi linii celulare de fibroblati de ovar d e hamster chinezesc femel sau linii celulare de fibroblati de plmn de hamster chinez esc mascul. Aceste dou linii celulare au avantajul de a avea un nivel redus de mu taii spontane, iar cariotipul lor este bine definit. Celulele prezint locusul HPRT , care codific enzima hipoxantin-guanin-fosforibozil transferaza, ce intervine n f osforilarea guaninei. Celulele care vor prezenta o mutaie la nivelul locusului HP RT i vor pierde activitatea enzimatic, sau aceasta va fi redus, deci din 6-tioguanin nu se va sintetiza o nucleotid letal, iar colonia se va dezvolta. Testul const n msur area numrului de colonii rezistente la 6tioguanin n prezena i n absena agenilor mutag . 3) Teste microbiene in vivo 4) Teste ce utilizeaz insecte Se folosete musca Dros ophila melanogaster deoarece: - este bine caracterizat din punct de vedere geneti c - metabolizeaz substanele toxice asemntor cu mamiferele - timpul de producere a un ei generaii este doar de 12-14 zile 5) Teste ce evideniaz mutaii genice la oareci B) Teste care detecteaz mutaiile cromozomiale 1) Teste pe insecte 2) Studii citogenet ice pe celule de mamifere: pot fi teste in vitro sau teste in vivo.
Teste in vitro: Se utilizeaz celule de limfom de oarece, ovar de hamster chinezesc sau limfocite umane. Substana se testeaz paralel cu doi martori pozitivi cu activ itate mutagen cunoscut, unul care acioneaz direct (sulfonat de etilmetan) iar altul care acioneaz dup bioactivare (dimetilnitrozamin). Dup o perioad de incubare corespunz oare, diviziunea celular este oprit prin adugare de colchicin, celulele sunt prepara te i se evalueaz anomaliile care apar la nivelul cromatidelor sau cromozomilor. Te ste in vivo: Testul micronucleilor se efectueaz pe mduv hematogen de oarece i se bazea z pe evidenierea unor formaiuni citoplasmatice rotunde, asemntoare ca form, structur roprieti tinctoriale cu nucleul, motiv pentru care au fost denumite micronuclei. nt re formarea micronucleilor i aberaiile cromozomiale exist o strns legtur, deoarece ei ot lua natere fie din fragmente cromozomiale acentrice, care n anafaz nu se mai pot deplasa spre nucleii n formare, fie din cromozomi ntregi, care nu mai sunt inclui n nucleii fii datorit retardrii anafazice produse prin lezionarea aparatului mitoti c. 3) Testul letalitii dominante la roztoare Evideniaz efectele toxice asupra celulel or germinale ale masculilor sntoi (oareci sau obolani). Efectele se pot manifesta sub forma unor implantaii care nu sunt viabile, sau sub forma pierderii pre-implantai ilor la femelele fecundate de masculii tratai. C) Teste care detecteaz repararea i recombinarea ADN-ului 1) Sinteza neprogramat a ADN-ului Indic o reparare a ADN-ulu i care este definit prin cantitatea de timidin radioactiv ncorporat per unitatea de g reutate de ADN, n raport cu valorile determinate la martori. 2) Schimbul ntre crom atidele surori Msoar schimbul reciproc de ADN ntre dou cromatide surori ale unui cro mozom n timpul duplicaiei. Celulele sunt marcate cu 5-BRDU (5-bromodezoxi-uridin). Dup dou cicluri de replicare, celulele sunt colorate i se analizeaz i compar frecvena chimburilor per celul i per cromozom. Celulele folosite pot fi limfom de oarece, ov ar de hamster chinezesc, limfocite umane. Nici unul din testele cunoscute nu pre zint fiabilitate total, nefiind capabil s detecteze toate tipurile de mutaii. De ace ea, se prefer utilizarea mai multor teste din categorii diferite, care sunt grupa te n baterii de teste. Testele de mutagenez sunt mprite n 3 niveluri:
150 TOXICOLOGIE GENERAL Nivelul unu 1) un test de mutaie genic la Salmonella/ microzomi (Ames + activare) 2) un test de mutaie genic pe celule de mamifere 3) un test care evideniaz rupturi c romozomiale pe celule de mamifere (testul micronucleilor) Dac toate testele sunt negative, se presupune absena potenialului mutagen la mamifere. Nivelul doi: se re alizeaz dac este pozitiv un singur test din nivelul 1, cu ajutorul testului mutaiei letale la Drosophila Nivelul trei: pentru evaluarea aprofundat a compuilor care r idic semne de ntrebare: Testul locusului specific (test de mutaie genic la oarece) pe ntru produii care posed potenial mutagen pe celule germinale de mamifere Testul let alitii dominante pentru produii cu efecte cromozomiale.
CARCINOGENEZA CHIMIC Carcinogeneza este un proces n mai multe etape care se produc e prin mai multe mecanisme incomplet elucidate i care conduce la apariia cancerulu i, un tip special de leziune a bolii denumite neoplazie. Neoplazia, sau leziunea sa constitutiv neoplasmul sau tumoarea, reprezint o cretere anormal a unui esut, car e este ereditar i relativ autonom. Prin definiie, neoplazia nu poate s apar dect n or ismele multicelulare, iar caracterul ereditar se poate manifesta la nivelul celu lelor somatice, de la o celul la alta, sau la nivelul celulelor germinale, de la un organism la altul. Neoplasmele se clasific n: - Neoplasme benigne, care sunt cl ar delimitate, adesea ncapsulate, bine difereniate i neinvazive. Creterea lor este r elativ sczut, modificarea organizrii celulare este redus i nu formeaz metastaze. - Neo plasme maligne, care sunt mai puin bine definite i de obicei mai puin ncapsulate. El e sunt relativ nedifereniate, creterea lor este rapid i sunt invazive, formnd n final metastaze. Metastaza reprezint diseminarea sau creterea secundar a neoplasmului la distan de tumoarea primar. Cancerele sunt neoplasme maligne. Nomenclatura neoplasme lor depinde de caracterul benign sau malign al neoplasmului, iar n ultimul caz de tipul de esut, epitelial sau mezenchimal, din care acestea deriv. De exemplu:
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 151 - pentru neoplasmele benigne, denumirea se formeaz din denumirea esutului de origi ne + sufixul om: fibrom, lipom, iar pentru neoplasmele de origine glandular + prefi xul adenom: adenom hepatocelular, adenom pituitar. - pentru neoplasmele maligne o A) derivate din esutul mezenchimal, denumirea se formeaz din denumirea esutului des criptor + sufixul sarcom: fibrosarcom, osteosarcom o B) derivate din esutul epiteli al, denumirea se formeaz din cea a esutului descriptor + carcinom: carcinom hepatoce lular, adenocarcinom gastric. Carcinogeneza chimic reprezint inducerea sau creterea frecvenei leziunilor neoplazice sub aciunea compuilor chimici, iar carcinogenul es te un agent care induce neoplazie.
PATOGENEZA CANCERULUI Carcinogeneza este un proces n mai multe etape, care este i nfluenat n mare msur de variabile cum ar fi vrsta, dieta, balana hormonal, specia anim l i rasa. S-a constatat de asemenea c exist o anumit predispoziie genetic pentru anumi e tipuri de cancere, ceea ce sugereaz faptul c neoplazia ar rezulta dintr-o mutaie recesiv ereditar a ADN-ului. Procesul carcinogenic poate fi divizat n dou secvene (Fi g.6.18.) i anume transformarea neoplazic i dezvoltarea neoplazic. Prima secven de even imente a fost denumit iniiere. 1. Iniierea este prima etap a unui proces carcinogen i const n transformarea unei celule normale ntr-o celul iniiat prin apariia unor defect genetice. Defectele genetice constau n mutaii de tipul mperecherii defectuoase a b azelor, deleiilor sau translocaiilor, i se produc n urma aciunii carcinogenului genot oxic, sau iniiator, asupra moleculei de ADN. Celula rezultat, n care carcinogenul a indus o mutaie, poate evolua n mai multe direcii (Fig.6.19.): - a) repararea ADN-u lui, cnd legtura covalent cu iniiatorul este distrus i populaia celular rmne normal iminarea celulelor modificate prin procesul de apoptoz - c) legtura covalent se pstr eaz, dar la nivelul unor locuri de legare n ADN care nu sunt importante pentru inii erea unei tumori - d) celula iniiat intr ntr-un proces de replicare i mutaia este fixa
152 TOXICOLOGIE GENERAL Secventele carcinogenezei Transformarea neoplazica celula normala Initiere modificari ale ADN aducti cu ADN efecte epigenetice repl icarea celulei Dezvoltarea neoplazica celula neoplazica Promovare expansiune clonala replicarea celulelor celula preneoplazica neoplasm benign Transformare modificare genetica activarea oncogenelor inactivarea genelor supresoare de tumori replicarea celule lor reducerea apoptozei Progresie modificare genetica heterogenitate replicarea celulelor reducerea apoptozei neoangiogeneza celula neoplazica neoplasm malign Fig.6.18. Secvenele carcinogenezei
Dei numrul de gene din ADN este foarte mare, doar un numr redus de gene celulare re prezint inte ale modificrilor genetice ce pot iniia transformarea neoplazic. Acestea sunt proto-oncogenele i genele supresoare de tumori. Mutaia proto-oncogenelor. Pro to-oncogenele sunt gene care codific proteine cu rol n stimularea progresiei celul are n cursul ciclului celular. Produii codificai sunt: - 1) factori de cretere - 2) receptori ai factorilor de cretere - 3) transductori ai semnalelor intracelulare, cum ar fi proteinele G i protein kinazele - 4) factori de transcripie nuclear. Cret eri tranzitorii ale activitii proteinelor codificate de proto-oncogene sunt necesa re pentru reglarea creterii n cursul embriogenezei sau a regenerrii tisulare. Gena mutant rezultat n urma aciunii carcinogenului poart denumirea de oncogen i codific o tein mutant, care prezint o cretere a activitii ce poate iniia transformarea neoplazic celulei. Mutaii ale genelor supresoare de tumori. Genele supresoare de tumori co dific proteine care inhib progresia celulelor n cursul diviziunii celulare. Gena
mutant codific o protein inactiv, care nu mai poate suprima diviziunea celular i n ace t caz apare o proliferare necontrolat a celulelor. Cea mai cunoscut gen supresoare de tumori este gena p53, care codific o protein cu masa molecular de 53000 daltoni. Aceast protein poate opri diviziunea celular in faza G1 permind repararea ADN-ului i de asemenea promoveaz apoptoza, mpiedicnd acumularea de erori genetice i procesul ca re duce la transformarea neoplazic. CA RC IN O G E N G E N O T O XIC S U P R A V I E T U I R E A C E L U L E I lez a r ea A D N rep a ra r e rep lica r ea A D N rep a ra r e M u ta tie silen tio a sa M O A R T E A C E L U L E I A ctiv a re a p ro te in elo r o n c o g e n e In a ctiv a rea p r o te in e lo r su p re so a r e d e tu m o ri T R A N SF O R M A R E A N E O P L A ZIC A A C E LU L E I e xp a n s iu n e c lo n a la TUM O ARE Fig.6.19. Procesul carcinogenezei Acumularea de leziuni genetice sub forma proto-oncogenelor mutante (care codific proteine activate) i a genelor supresoare de tumori mutante (care codific proteine inactive) este principala cauz a transformrii celulelor normale, cu o proliferare controlat, n celule maligne, cu o proliferare necontrolat. Deoarece
154 TOXICOLOGIE GENERAL numrul de celule din esut este controlat de balana dintre mitoz i apoptoz, proliferare a necontrolat rezult din perturbarea acestei balane (Fig.6.20.). SUBSTANTA TOXICA formarea de aducti esecul repararii replicare transcriptie PROT EINA PROTOONCOGENA (activata de semnal) reparare gresita PROTOONCOGENA transcriptie PROTEINA translatie ONCOGENA (activata permanent) translatie MUTATIE ONCOGENA + APOPTOZA MITOZA PROLIFERARE CONTROLATA PROLIFERARE NECONTROLATA APOPTOZA + + + MITOZA + PROTEINA SUPRESOARE DE TUMORI (activa) translatie GENA SUPRESOARE DE TUMORI MUTATIE reparare gresita replicare esecul repararii GENA SUPRESOARE DE TUMORI MUTANTA transcriptie PROTEINA SUPRESOARE DE TUMORI translatie MUTANTA (inactiva) transcriptie formarea de aducti SUBSTANTA TOXICA
Fig.6.20. Cooperarea ntre o proto-oncogen i o gen supresoare de tumori nainte i dup mu aie Modificrile produse de iniiator pot fi latente sptmni sau luni i sunt considerate irev ersibile. O celul care a suferit o modificare ireversibil, ce i permite transformar ea neoplazic, poate fi imposibil de distins din punct de vedere fenotipic de celu lele parenchimului normal adiacent. Se crede c majoritatea neoplasmelor deriv din proliferarea clonal a unei singure celule iniiate. La un anumit moment n expansiune a clonal precoce, celulele devin diferite din punct de vedere fenotipic de celule le parenchimului normal nconjurtor. Dei astfel de
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 155 leziuni nu au nc suficiente caracteristici pentru a fi calificate drept neoplasme, ele sunt considerate drept celule pre-neoplazice. 2. Promovarea este etapa proc esului carcinogen n care are loc selecia i expansiunea clonal a celulelor iniiate, fi ind posibil formarea unui neoplasm. Expansiunea clonal este consecina creterii proli ferrii sau a reducerii morii celulare programate prin apoptoz. O dat cu creterea prol iferrii se produc modificri progresive ale comportamentului biologic al neoplasmul ui (Fig.6.21.). Procesul are un grad crescut de reversibilitate, o celul iniiat tre buind s fie expus mai mult sau mai puin regulat la un promotor pentru a continua s s e multiplice. Tesut normal Celula initiata RASPUNS REGENERATIV Proliferare Moarte celulara Toxicitate Hiperplazie stationara Tumoare benigna Fig.6.21. Conceptul promovrii tumorale 3. Progresia este ultima faz a procesului carcinogen, n care expansiunea clonal a c elulelor iniiate crete probabilitatea apariiei unor modificri genetice suplimentare care sunt necesare pentru progresia ctre cancer. Aceast acumulare de leziuni genet ice este corelat cu modificri morfologice distincte, care progreseaz de la leziuni pre-neoplazice la leziuni pre-maligne i apoi maligne. esuturile sntoase pot fi invad ate, aprnd metastaze. Ca i iniierea, progresia este un proces ireversibil.
156 TOXICOLOGIE GENERAL CARCINOGENE CHIMICE Dup mecanismul lor de aciune, carcinogenele se clasific n: carci nogene genotoxice, care reacioneaz cu ADN-ul formnd aduci ce pot iniia transformarea neoplazic carcinogene epigenetice, care nu au reactivitate chimic i nu pot forma ad uci cu ADN-ul, dar induc n celulele esutului int modificri care conduc indirect la tra nsformarea neoplazic sau favorizeaz dezvoltarea tumorilor din celulele modificate genetic. 1. Carcinogenele genotoxice posed grupri electrofile reactive n molecul, sa u pot fi biotransformate la metabolii electrofili. Au fost astfel identificate o serie de grupri responsabile de aciunea genotoxic, sau grupri toxofore (Fig.6.22.-6. 23.), care au permis realizarea de studii de relaie structuractivitate i elaborarea unor programe informatice pentru prevederea carcinogenitii noilor compui. Marea maj oritate a carcinogenelor genotoxice sunt substane organice de sintez sau substane n aturale i, n funcie de necesitatea sau nu a bioactivrii, sunt subclasificate n carcin ogene primare, sau cu aciune direct, i n pro-carcinogene. Electrofili H R R C H Ion carboniu 1 R N H Ion nitreniu 2 Ion diazoniu 3 Ion aziridiniu 4 Io n episulfoniu 5 R N N OH N R S R Fig.6.22. Structuri electrofile ce pot reaciona cu ADN 1.1. Carcinogenele primare sunt substane electrofile, care se pot lega direct de ADN sau de alte molecule. Exemple de astfel de substane sunt epoxizii, cum ar fi oxidul de etilen, lactonele, clorambucilul. Datorit reactivitii lor deosebite, aces te molecule sunt adesea mai active in vitro dect in vivo.
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 157 Precursori 1 CH3 O O P CH2 alchil esteri ai acidului fosfonic NO2 6 CH2 7 NO2 CH 2 1 N(CH2CH2Cl)2 Cl grupari nitro aromatice 11 N N grupari nitro alifatice CH2 N 2 CH2 Carbamati 3 CH2 H2 C 1 CH2 alchil N-nitrozamine grupari azo aromatice O 1 2 N H3C N CH3 2 O S O N-oxizi aromatici 5 Br 1,2-dibromalcani grupari mono si di alchilamino aromatice 2 CH2 NH N CH3 derivati aziridinil aromatici si alifatici CH3 O CH2 4 NH Br HC X = H, F, Cl, Br, I metani halogenati CH broioultone epox izi de arene O CH 1 CH2 O O broiolactone 1 1 O N N O CH3 CH2 1 H2N O C O O O 1 CH3 O S CH2 alchil esteri ai acidului sulfonic O NH 2 CH2OH 1 CH2Cl derivati N-(hidroximetil) halogenuri de alchil aromatice si alifatice substituit e N-cloramine epoxizi ai alchenelor C(X)4 1 HC alchil hidrazine Fig.6.23. Structurile unor precursori ai gruprilor electrofile
1.2. Pro-carcinogenele sunt substanele care necesit o bioactivare pentru a deveni carcinogene finale. Din aceast clas fac parte majoritatea carcinogenelor cunoscute : hidrocarburi aromatice polinucleare (benzpiren), amine aromatice (benzidina), halogenuri alifatice (clorura de vinil), nitroderivai aromatici (1-nitropiren), a zocolorani (dimetilaminoazobenzen), nitrozamine (dimetil-nitrozamina), micotoxine (aflatoxina B1), toxine din plante (alcaloizii pirolizidinici, cycasin), medica mente (ciclofosfamid, tamoxifen). Ele pot fi iniiatori puri sau substane genotoxic e complete, ce acioneaz att ca iniiatori ct i ca promotori (ex. 2-acetilaminofluorenul ). 1.3. Carcinogenele anorganice includ unele metale: crom, nichel, cadmiu, coba lt, i nemetale ca arsenul. Mecanismul lor de aciune nu este complet elucidat, ele avnd att proprieti genotoxice ct i epigenetice. Astfel, se presupune c metalele pot in uce leziuni oxidative ale ADN, fie prin generarea de specii reactive de oxigen n reacii de tip Fenton, fie prin inactivarea enzimelor implicate n aprarea celulelor m potriva speciilor reactive de oxigen. De asemenea, metalele pot aciona prin mecan ism epigenetic deoarece mpiedic repararea ADN-ului, pot inactiva transcripia anumit or gene, au efecte imunosupresoare sau pot inactiva proteine supresoare de tumor i, cum este proteina p53. Prin acest ultim mecanism se poate explica parial carci nogenitatea cadmiului care, avnd similitudine chimic cu zincul, l poate nlocui n anum ite procese. Legarea zincului este crucial pentru stabilizarea proteinei p53 n for ma slbatec activ. n prezena cadmiului este perturbat conformaia proteinei, care este el inactivat (Fig.6.24.). 2. Carcinogenele epigenetice fac parte n general din cla sa pesticidelor sintetice, a aditivilor alimentari i a medicamentelor i nu prezint structurile moleculare care sunt necesare pentru a forma electrofili, neavnd reac tivitate fa de ADN. Structurile lor sunt foarte diferite, ceea ce face dificil stab ilirea unor relaii structur-activitate, i de obicei necesit bioactivare metabolic. Ef ectele unui anumit compus sunt de obicei limitate la un organ sau la o anume spe cie. Ele produc cancer prin promovarea carcinogenezei iniiate de carcinogenele ge notoxice sau de leziunile spontane ale ADN-ului. Mecanismele prin care acioneaz (F ig.6.25.) sunt diverse i includ: - inhibarea comunicrii intercelulare - inhibarea polimerizrii tubulinei - inhibarea apoptozei - inducerea proliferrii celulare n con cluzie, carcinogenele epigenetice par s acioneze prin stimularea diviziunii celula re i/sau blocarea apoptozei.
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 159 Supresor activ 1620 C N - Oxidare - Cadmiu - Chelatare - Deficienta de Zn - Reducere - Zn 240 N C Pierderea activitatii supresoare Fig.6.24. Inactivarea proteinei supresoare de tumori p53 de ctre cadmiu Carcinogenele epigenetice pot fi clasificate n mai multe grupe: 2.1. Promotorii s unt substane care poteneaz efectul iniiatorilor la administrare simultan sau ulterioa r, dup luni sau chiar ani de zile de la expunere. Ei pot favoriza producerea de tu mori la nivelul: - ficatului: clordan, DDT, pentaclorofenol, fenobarbital, bifen ilii polibromurai, bifenilii policlorurai - rinichiului: acidul nitriloacetic - ve zicii: zaharina - stomacului: butil hidroxianisolul 2.2. Modulatorii endocrini p ot fi: - hormoni estrogeni: 17-estradiol, 4-hidroxi-estradiol - agoniti estrogeni : 17-etinil estradiol, dietilstilbestrol - inductori ai prolactinei - antiandrog eni: finasterid, vinclozolin - inhibitori ai tiroperoxidazei: sulfametazina
160 TOXICOLOGIE GENERAL - inductori ai conjugrii hormonilor tiroidieni: fenobarbital - antagoniti ai recep torilor H2: lansoprazol, omeprazol, pantoprazol CARCINOGEN EPIGENETIC S U P R A V I E T U I R E A C E L U L E I Leziuni spontane ale ADN reparare replicarea ADN reparare Mutatie silentioasa M O A R T E A C E L U L E I Activarea proteinelor oncogene Inactivarea proteinelor supresoare de tumori TRANSFORMAREA NEOPLAZICA A CELULEI expansiune clonala TUMOARE Fig.6.25. Promovarea carcinogenezei de ctre carcinogenele epigenetice 2.3. Imunosupresoare: ciclosporina, analogi purinici 2.4. Citotoxine la nivelul ficatului, rinichiului, vezicii la obolani, care favorizeaz apariia de tumori cu lo calizare specific la anumite specii de roztoare. 2.5. Carcinogenele n stare solid cu m sunt implantele de materiale plastice, metale, sticl, determin de obicei tumori de origine mezenchimatoas printrun mecanism de aciune insuficient cunoscut.
2.6. Proliferatorii de peroxizomi constituie o familie de hepatocarcinogene nege notoxice active la oarece, care includ: - medicamente hipolipemiante: clofibrat, ciprofibrat, benzafibrat, gemfibrozil - plastifiani ca ftalatul de dietilhexil Ac este substane induc n ficatul de oarece o cretere marcat a numrului de peroxizomi, nso de inducerea proliferrii celulare, cu mrirea ficatului i suprimarea apoptozei hepat ocitelor. Efectele sunt mediate prin intermediul unui receptor, identificat n 199 0, receptorul proliferator de peroxizomi alfa (PPARa). Dei acest receptor a fost id entificat att la om ct i la oarece, la om nu se observ proliferarea peroxizomilor i ef ect hepatocarcinogen dup administrarea hipolipemiantelor. Aceast diferen de reactivi tate ntre specii poate fi explicat prin variaia cantitativ a receptorului i printr-o diferen de secven n regiunea promotoare a genelor responsabile de efectul la roztoare.
TERATOGENEZA Teratogeneza nseamn n traducere literar producerea de organisme monstru oase i provine din limba greac, de la teras sau teratos, care semnific monstru sau minune. n diferite culturi din antichitate, apariia copiilor neobinuii sau diformi a fost atribuit unor cauze cum ar fi hibridizarea dintre oameni i zei sau dintre oa meni i demoni. Definiia modern a teratogenezei este fenomenul de apariie a defectelor de natur structural, iar tiina care studiaz aceste defecte este teratologia, termen i ntrodus n 1832 de ctre Geoffroy St. Hilaire. Efectele teratogene se ncadreaz n toxici tatea dezvoltrii, care include efectele adverse induse nainte de atingerea vrstei a dulte, adic cele care se manifest n perioada embrionar i fetal, dar i dup natere. To atea reproducerii reprezint efectele adverse ale diferiilor ageni asupra progenitur ii i/sau afectarea funciilor reproductive la masculi i la femele. Se accept la ora a ctual c aproximativ 2-4% din nou-nscui prezint un defect la natere. Aceast cifr poate ete n lunile de dup natere, cnd devin evidente tulburrile la nivelul organelor interne sau sistemului nervos central. Mai puin de 1% din aceste defecte pot fi atribuit e consumului de medicamente, restul de 99% datorndu-se unor condiii materne cum ar fi diabetul, infeciile, abuzul de alcool (9%), unor cauze genetice clare (20-25% ), n timp ce 65% sunt de origine necunoscut. Pentru ca o substan chimic s fie consider at teratogen, ea trebuie s creasc semnificativ incidena anomaliilor (fie structurale, fie funcionale) n rndul descendenilor, dup ce a fost administrat la unul din prini e de concepie, femelei n timpul sarcinei, sau direct ftului n dezvoltare. Efectul ad vers
162 TOXICOLOGIE GENERAL trebuie s se produc la doze care nu induc toxicitate sever la mam. Compuii care condu c la moartea embrionului sunt considerai mai degrab embriotoxici dect teratogeni. T eratologia i toxicologia dezvoltrii au cunoscut o evoluie exploziv dup incidentul tal idomidei. La nceputul anilor 1960, n lumea ntreag s-au nscut mai mult de 10.000 de co pii cu defecte grave la natere, i n special cu tip foarte rar de malformaie a membre lor. Indivizii afectai prezentau amelie (absena membrelor) i focomelie (reducerea l ungimii oaselor membrelor), braele fiind afectate mai frecvent dect picioarele i fi ind atinse att partea dreapt ct i cea stng, n msur diferit. Alte defecte observate : afeciuni cardiace congenitale, anomalii oculare, intestinale i renale, malformaii ale urechii externe. Studiile epidemiologice efectuate au identificat n 1961 age ntul etiologic, i anume talidomida, un sedativ-hipnotic introdus n Germania n 1956. Pentru c studiile experimentale pe specii de roztoare i testarea clinic evideniaser l ipsa unor efecte adverse i un indice terapeutic mare (doza terapeutic 100-200 mg/z i, iar doza toxic de ordinul gramelor), medicamentul a fost utilizat pe scar larg d e femeile nsrcinate deoarece, n afara faptului c avea efect hipnotic, era eficient i n combaterea senzaiei de grea matinal. Acest incident a fost posibil pentru c talidomi da are o aciune teratogen care este dependent de specie, respectiv este teratogen la om, la primate i la iepuri i nu prezint acest efect la roztoarele care fuseser folos ite pentru testare, oarecii i obolanii. n ciuda interesului suscitat de talidomid, me canismul de producere a efectelor teratogene nu a fost elucidat complet nici pn n p rezent. Se presupune mai nou c n acest mecanism ar putea fi implicai produii de hidr oliz ai talidomidei, respectiv acidul ftalimidoglutaramic, care s-ar putea interc ala n molecula de ADN la nivelul situsurilor bogate n guanin. Stabilirea mecanismul ui de aciune prezint interes datorit potenialului interesant al substanei n tratamentu l eritemului nodular lepros, rejeciei grefelor, scderii ponderale n tuberculoz, repl icrii virusului HIV, cancerului. Tipuri de dezvoltare anormal Exist patru manifestri ale dezvoltrii anormale: - moartea - malformaia - retardarea creterii - anomalia f uncional Defectele structurale, sau malformaii congenitale, sunt considerate de obi cei principalul criteriu de estimare a riscului teratogen, deoarece sunt mai evi dente. Totui, anomaliile funcionale pot fi la fel de incapacitante i prezint o rat de mortalitate la fel de mare ca i anomaliile morfologice. Defectele funcionale sunt mai greu de corelat cu un anumit agent etiologic, deoarece ntre
momentul expunerii i detectarea patologiei funcionale se pot interpune diferii fact ori care pot masca agentul cauzator. De multe ori ns, unii teratogeni comportament ali au putut fi identificai deoarece efectele comportamentale nsoesc alte malformaii congenitale. De exemplu, printre copiii cu retardare a creterii, la 33-50% exist riscul de apariie a unor deficiene de nvare, iar la 26-61% din copiii cu retardare me ntal au fost asociate anomalii congenitale. Printre teratogenii care induc anomal ii comportamentale se numr alcoolul, metilmercurul i plumbul. Perioadele critice pe ntru aciunea agenilor teratogeni Dezvoltarea organismului uman este un ciclu care dureaz ntreaga via. Etapele acestei dezvoltri sunt: 1) Gametogeneza care este procesu l de formare a celulelor germinaleovulul i sperma. 2) Fertilizarea const din fuziu nea gameilor pentru a forma un zigot diploid Expunerea la unele substane chimice c um ar fi oxidul de etilen, etilnitrozoureea, pe o perioad scurt de timp (6 ore) ime diat dup fertilizare, a condus la formarea unor fetui malformai. 3) Preimplantarea implic n principal creterea numrului de celule printro serie rapid de diviziuni celul are, formndu-se blastocitul. Se consider c expunerea n timpul preimplantrii are efect e reduse sau nule asupra creterii sau poate produce moartea. Tratamentul cu unele substane n aceast perioad poate conduce ns la malformaii fetale, cum este cazul metil itrozureei. 4) Gastrularea urmeaz dup implantarea blastocitului n peretele uterin i const n formarea celor trei straturi germinale: ectoderm, mezoderm i endoderm. Acea st perioad este un preludiu al organogenezei i este susceptibil la aciunea teratogeni lor. Malformaiile care apar dup expunerea la unii compui pot fi localizate la nivel ul ochiului, creierului i feei. 5) Organogeneza este perioada n care se formeaz rudi mente ale principalelor structuri din organism i dureaz aproximativ ntre sptmnile a tr eia i a opta de gestaie. Este perioada de maxim susceptibilitate la producerea de m alformaii. 6) Perioada fetal (din ziua 56 pn la natere) se caracterizeaz prin difereni rea esuturilor, cretere i maturare fiziologic. Expunerea n aceast perioad determin ce ai probabil efecte asupra creterii i maturrii funcionale. Rezultatele cele mai proba bile sunt anomaliile la nivelul SNC i a organelor reproductive, incluznd deficiene comportamentale, motorii, mentale i scderea fertilitii.
164 TOXICOLOGIE GENERAL La om, perioada cea mai sensibil la aciunea substanelor teratogene este situat ntre sp tmna a treia i luna a treia de gestaie. Dependent de momentul precis al expunerii, p ot s apar malformaii cu anumite localizri, corelate cu stadiul de dezvoltare a organ ului afectat (Fig.6.26.). Maturarea functionala Histogeneza Organogeneza Sistemul nervos central Inima Urechea Ochii Membrele Palatul Organele genitale saptamani 5 6 1 2 3 4 7 8 12-16 20-38 Implantare Moarte prenatala Perioada embrionara Anomalii morfologice majore Perioada fetala Defecte fiziologice si functionale Fig.6.26. Secvena evenimentelor n dezvoltarea intrauterin la om i perioadele sensibi le pentru defectele congenitate (regiunile haurate) Mecanismele de iniiere a dezvoltrii anormale sunt: mutaiile, anomaliile cromozomial e, interferena n procesul mitotic, interferena n funcia acizilor nucleici, deficienele nutriionale, deficienele energetice, modificrile osmolaritii sau modificrile la nivel ul membranei, inhibiia enzimatic.
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 165 Substane teratogene la om Principale substane teratogene la om sunt medicamentele, dar i alte droguri sau compui din mediu. Clasele recunoscute sunt: - anticonvulsi vante: hidantoine (fenitoin), primidon, dione (trimetadona), acidul valproic, ca rbamazepina - citostatice: ageni alchilani (busulfan, ciclofosfamid, clorambucil, m ecloretamin), antimetabolii (aminopterin, metotrexat, citarabin) - hormoni androge ni: danazol - antitiroidiene: propiltiouracil - antibiotice aminoglicozidice: st reptomicin - anticoagulante cumarinice: warfarina - acizi retinoici: izotretinoin - inhibitori ai enzimei de conversie a angiotensinei: captopril - tetracicline - alte medicamente: dietilstilbestrol, talidomid, penicilamin, litiu - alte substa ne: etanol, cocain, mercurul organic IMUNOTOXICITATEA Imunotoxicologia este o ramur a toxicologiei care studiaz efectel e adverse ce rezult din interaciunea sistemului imunitar cu xenobioticele. Imunoto xicitatea este consecina aciunii directe sau indirecte a unui agent chimic sau fiz ic asupra sistemului imunitar. Funcia i componentele sistemului imunitar Sistemul imunitar are rolul de a proteja organismul mpotriva infeciilor, a proteinelor strin e de organism sau a celulelor neoplazice. El este alctuit din organele limfoide i celulele specializate. Organele limfoide primare: sunt mduva osoas i timusul i au ro lul de a favoriza transformarea celulelor precursoare (stem) n celulele efectoare mature. secundare: sunt nodulii limfatici, splina i esutul limfoid asociat mucoas ei, care formeaz uniti imunoreactive ce rspund la ptrunderea antigenilor. Celulele sp ecializate sunt: Limfocitele T - sunt generate n timus din celule precursoare car e au migrat din mduva osoas. Acestea reprezint aproximativ 80% din limfocitele din snge i 60% din limfocitele din esutul limfoid periferic i au rolul de a activa limfo citele B i macrofagele i de a recunoate antigenul legat de complexul major de histo compatibilitate. O populaie de limfocite T a fost
implicat n combaterea celulelor infectate cu virusuri, printr-un mecanism citotoxi c direct. Limfocitele B sunt generate de celulele precursoare din mduva osoas i sun t capabile s sintetizeze i s secrete anticorpi (imunoglobuline) care sunt de mai mu lte tipuri: IgM, IgA, IgD, IgG i IgE. IgM i majoritatea subclaselor de IgG activea z complementul dup legarea de antigen. Dac acest complex antigen-anticorp este fixa t pe suprafaa unei celule strine, cum este un bacil gram-negativ, activarea va pro duce liza i moartea celulei. Anticorpii IgE se pot lega de receptori specifici de pe suprafaa mastocitelor i a bazofilelor. Deoarece terminaia moleculei de IgE care permite legarea antigenului rmne disponibil, n momentul n care acesta se cupleaz cu a nticorpul are loc eliberarea unor mediatori farmacologici cum ar fi histamina. R olul major al IgE nu const n protejarea imunitar, ci n acela de mediator al reaciei d e hipersensibilitate imediat sau anafilaxie. Celulele ucigae naturale (NK = natura l killer) sunt limfocite granulare mari, care nu conin imunoglobuline i care sunt capabile s lezeze anumite celule int. Una din funciile lor este aprarea mpotriva infec ilor virale i de asemenea pot secreta diferite limfokine, printre care interferon ul. Macrofagele sunt celule mononucleare fagocitare cu origine comun. Sursa princ ipal este esutul hematopoetic din mduva osoas. n afar de fagocitarea particulelor i a ritrocitelor uzate, mai au i funcia de prezentare a antigenilor. Celulele dendriti ce sunt celule fr rol fagocitar, care se gsesc n esuturile limfoide i n esutul inters l al unor organe ne-limfoide, cum ar fi epiteliul. Ele au printre altele rol n pr oliferarea limfocitelor indus de antigeni i n prezentarea antigenilor limfocitelor B. Alte componente ale sistemului imunitar sunt: Citokinele, care sunt mediatori ai sistemului imunitar i sunt produse de celulele sistemului imunitar, dar i de c elulele din mediul adiacent sistemului imunitar. Ele au rol n meninerea funciei imu nitare normale i n controlarea rspunsului imun la antigeni. Complementul este alctui t din proteine secretate n snge i n limf, care particip n reaciile ce mediaz liza ce or strine. Procesul de liz determin producerea de componente active biologic, care induc migrarea limfocitelor i un rspuns inflamator. Efectele substanelor toxice asu pra sistemului imunitar Substanele imunotoxice pot produce dou tipuri de efecte (F ig.6.27.): Imunosupresia, care const n deprimarea sau inhibarea funciei sistemului imunitar i care poate conduce la o cretere a susceptibilitii la apariia tumorilor sau a bolilor infecioase.
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 167 Stimularea rspunsului imun, care poate conduce la hipersensibilitate sau la autoi munitate. Interactiune cu imunizarea profilactica Cresterea sensibilitatii la infectii Cresterea incidentei tumorilor interactiune cu raspunsurile imune pierderea supravegherii imunitare efecte endocrine stres imunosupresie expunere la xenobiotice interactiune cu macromoleculele (direct sau dupa bioactivare) disfunctii imunitare lezare tisulara conjugati ai haptenelor modificari ale proteinelor din organism reactii autoimune raspuns imun impotriva proteinelor normale reactii imune (de tip I, II, III, IV) activarea complementului hipersensibilitate dupa expunerea repetata la substanta toxica leziune tisulara Fig.6.27.Interaciunea substanelor imunotoxice cu sistemul imunitar IMUNOSUPRESIA Unele medicamente sau alte xenobiotice pot inhiba funcia sistemului imunitar, proprietate care a fost utilizat n clinic pentru a nltura respingerea gref elor sau a transplantelor de organe. Acest efect este ns considerat toxic,
168 TOXICOLOGIE GENERAL deoarece crete susceptibilitatea la infecii, reduce eficacitatea imunizrii prin vac cinuri, favorizeaz dezvoltarea neoplaziei i diseminarea cancerelor i poate chiar fa cilita apariia bolilor autoimune. Exist probabil mai multe mecanisme prin care se produce imunosupresia, dar este implicat cu certitudine lezarea organelor limfoid e primare sau secundare, mpiedicndu-se sinteza sau maturarea celulelor sistemului imunitar. Substane imunosupresoare pot fi: Medicamente antineoplazice ageni alchil ani, cum ar fi ciclofosfamida. Acestea acioneaz asupra esuturilor cu capacitate cres cut de proliferare, cum ar fi mduva osoas i esutul limfoid. Hidrocarburi: hidrocarbur i aromatice policiclice, hidrocarburi aromatice halogenate (bifenili policlorurai , bifenili polibromurai, dioxina) Metale grele, compui organometalici: plumb, arse n, mercur, cadmiu, compui organostanici Pesticide: DDT, dieldrin, carbaryl, carbo furan, clordan, maneb Substane ce ptrund pe cale inhalatorie: uretan, fumul de igar, azbestul, iritanii pulmonari, gazele oxidante (O3 , SO2, NO2) Solveni organici i s ubstane nrudite: benzen, nitrotolueni monosubstituii Medicamente: imunosupresoarele corticosteroizi, azatioprin, rapamicina, etc.; medicamentele utilizate n tratame ntul SIDA zidovudina (AZT), zalcitabina, stavudina Droguri: canabinoide, cocaina , heroina, morfina, alcoolul Siliconii STIMULAREA RSPUNSULUI IMUN Acest tip de rsp uns la un xenobiotic este adesea denumit i reacie alergic sau reacie de hipersensibi litate. Rspunsul poate s apar la nivelul unor organe diferite i poate s fie minor (pr urit cutanat), sau fatal (ocul anafilactic). Rspunsul imunotoxic are la baz o react ivitate specific modificat a organismului. Substana toxic trebuie s fie recunoscut de limfocitele cu competen imunologic a fi strin de organism, adic antigen. Antigenii sun t n general molecule mari, cu mas peste 1000-3000 daltoni. i molecule mai mici, cu molecule sub 1000 Da, pot induce un rspuns imun, cu condiia s se lege covalent de p roteine cu mas molecular mare (peste 50.000 Da). Aceste xenobiotice poart denumirea de haptene. Aducii cu proteinele se pot forma prin dou modaliti: reacia direct a xeno bioticului cu proteina sau formarea iniial a unor metabolii electrofili, care pot r eaciona cu gruprile nucleofile ale proteinelor (Fig.6.28.). Aducii haptenelor cu pr oteinele au dou funcii importante: - de semnal imunogen, care stimuleaz proliferare a limfocitelor T
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 169 - de semnal antigenic XENOBIOTIC detoxifiere bioactivare METABOLIT REACTIV HIPERSENSIBILITATE LEZARE CELULARA/TISULARA CONJUGAT XENOBIOTIC-PROTEINA IMUNOGEN ANTIGEN celula tinta ACTIVARE IMUNA ANTICORPI IgE AUTOANTICORPI LIMFOCITE-T Fig.6.28. Implicarea haptenelor n reaciile de hipersensibilitate Un numr redus de substane, cum ar fi penicilinele, cefalosporinele i citostaticele, pot interaciona direct cu gruprile nucleofile ale proteinelor n condiii fiziologice . n cazul penicilinei, rspunsul anafilactic nu este dirijat mpotriva penicilinei ca atare, ci mpotriva unor determinani haptenici care se formeaz prin reacia penicilin ei cu proteinele (Fig. 6.29.). Determinantul antigenic major este restul penicil oil. Dei ciclul blactamic poate reaciona direct cu gruprile lizin din proteine, penic ilina poate suferi o rearanjare intramolecular la acid penicilenic, care nu numai c este mai reactiv dect penicilina ca atare, dar i mai imunogen. S-a demonstrat c l egarea a mai puin de 0,1 din doza de penicilin administrat poate provoca un rspuns p rin IgG. Antigenul interacioneaz cu sistemul imunitar n dou etape (Fig.6.30.): Etapa de sensibilizare care presupune expunerea iniial la antigen. Acesta este recunosc ut de ctre sistemul imunitar ca fiind strin, i organismul va rspunde prin producerea de anticorpi sau activarea celulelor T.
170 TOXICOLOGIE GENERAL Etapa de inducere a rspunsului imun care se declaneaz dup o nou expunere la xenobioti c. Exist patru tipuri de rspuns imun, primele trei fiind umorale, ce implic produce rea de anticorpi, iar ultimul fiind mediat celular, prin intermediul limfocitelo r T sensibilizate specific. S CH 2 CON H O Benzilpenicilina HC C N CH 3 CH 3 COO H S CH 2 CON H O Determinant benzilpeniciloil HC C NH lys proteina HN CH 3 CH 3 COO H raspu ns IgE Eliberarea mediatorilor din m astocite histam in a leucotriene Sim p tom e clinice urticatie angioedem astm soc Fig.6.29. Schema reaciei de hipersen sibilitate indus de penicilin
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 171 Tipuri de reacii de hipersensibilitate (Fig.6.31.): Reacia alergic de tip I (anafil axie, hipersensibilitate imediat). n aceast reacie sunt implicate cel mai adesea IgE . Ca urmare a legrii antigenului de anticorpii care se gsesc fixai pe suprafaa masto citelor, sunt eliberai mediatori ca: histamina, serotonina, bradikinina, heparina , calicreina, prostaglandinele, care sunt responsabili de unele efecte fiziologi ce cum ar fi inflamaia, edemul, vasodilataia. Reacia se poate manifesta la diferite nivele: aparat respirator, piele, tract gastro-intestinal, sistem vascular. EXPUNEREA INITIALA Compusul sau metabolitul (HAPTENA) EXPUNEREA ULTERIOARA Compusul sau metabolitul (HAPTENA) Conjugare cu proteinele (ANTIGEN) Conjugare cu proteinele (ANTIGEN) Antigenul determina formarea de proteine celulare sau umorale (ANTICORPI) REACTIA ANTIGEN-ANTICORP Raspuns celular Fig.6.30. Mecanismul rspunsului de sensibilizare Reacia alergic de tip II (citolitic), implic reacia dintre anticorpii liberi (IgG, I gA, IgM) i antigeni legai de celule ca leucocitele, eritrocitele, trombocitele. Pr in legarea anticorpului, celulele sunt aglutinate. Dac inta este reprezentat de cel ulele sanguine, se pot produce discrazii sanguine. Aglutinarea poate activa comp lementul, determinnd eliberarea de kinine, histamin, enzime lizozomale, care lezea z celulele. Reacia alergic de tip III (Arthus) implic interaciunea dintre antigeni li beri i anticorpi liberi, in special IgG, formndu-se un complex imun care poate pre cipita n vasele sanguine. i n acest caz poate fi activat sistemul complement. Depun erea complecilor i activarea complementului pot
conduce la tromboz, inflamaie i lezare vascular. Principalele inte sunt: pielea, rini chii, plmnii, sistemul circulator, articulaiile. Reacia alergic de tip IV (hipersensi bilitate ntrziat) este mediat celular. O membran celular alterat este inta pentru o c l T activat (limfocit ucigae NK), care atac i distruge celula antigenic. Sunt elibera ediatori ca limfokinele, care pot produce agregarea limfocitelor, macrofagelor i bazofilelor. inta poate fi reprezentat de orice organ sau esut, iar dac acesta este un organ vital, consecinele pot fi severe. n astfel de reacii pot fi implicai poluani din mediu sau substane utilizate n dermatologie sau n cosmetologie. Fig.6.31. Mecanismele de stimulare a rspunsului imun (Timbrell J.A., 1991)
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 173 Substane care pot produce reacii de hipersensibilitate la diferite nivele: Cardiov ascular o Miocardite: antidepresive triciclice, hidroclorotiazid, vaccinuri o Vas culite: barbiturici, cefalosporine, dapsona, griseofulvina, hidantoinul, insulin a, penicilina, fenilbutazona, sulfamidele, vaccinurile, antiveninurile Hematolog ic o Anemie hemolitic: cefalosporine, alfa-metildopa, procainamida, sulfamidele H epatic o Halotan, acid p-aminosalicilic, alfa-metildopa, sulfamide Renal o Nefri te interstiiale: meticilin, peniciline, fenitoin Respirator o Astm: aspirin, cefalo sporine, penicilin, sulfamide, diizotiocianai, anhidrid ftalic, formaldehid, sruri de cobalt, sruri de nichel, sruri de platin Piele o Dermatite de contact: benzocain, sru ri de beriliu, clorpromazin, sruri de crom, izoniazid, neomicin, sruri de nichel, fen oli, piretrine, chinidin o Erupii: numeroase medicamente o Exantem multiform: peni cilin, salicilai, fenitoin, fenilbutazon, sulfamide o Erupii medicamentoase: barbitu rici, fenolftalein, fenilbutazon, chinin, sulfamide, tetraciclin o Vasculite cutanat e: peniciline, fenitoin, pirazolone, sulfamide o Purpur: fenitoin, chinin, chinidi n, sulfamide o Eritem nodular: contraceptive o Epidermoliz: alopurinol, fenitoin, sulfamide AUTOIMUNITATEA Termenul de autoimunitate se refer la rspunsurile autoimune i la bol ile autoimune. Rspunsurile autoimune sunt rspunsuri imune dirijate mpotriva compone ntelor normale ale organismului, sau autoantigeni. Bolile autoimune sunt condiii patologice n care rspunsurile imune mpotriva autoantigenilor produc leziuni structu rale i /sau funcionale. Leziunile structurale se observ atunci cnd
sunt prezente inflamaia i repararea ca urmare a aciunii autoanticorpilor citotoxici , complexelor imune sau limfocitelor T citotoxice. Afectarea funcional se manifest prin stimularea (hipertrofie i /sau hiperplazie) sau inhibarea (atrofie) celulelo r int ca urmare a aciunii autoanticorpilor asupra receptorilor celulari. Autoantico rpii pot fi clasificai n autoanticorpi mpotriva unor antigeni specifici pentru un a numit organ sau celul (ex, anticorpi anti-eritrocite, antitiroidieni), i n autoanti corpi mpotriva unor antigeni ubicuitari, care nu au specificitate de organ (ex. a nticorpi anti-ADN). Autoanticorpii pot produce leziuni prin urmtoarele mecanisme (Fig.6.32.): 1. Liza celulelor mediat de complement, cnd autoanticorpii se leag de antigenii lor fixai pe suprafaa celulei i activeaz complementul, producnd liza celule i. Trombocitele i eritrocitele pot fi lezate prin acest mecanism. 2. Fagocitoz sau citotoxicitate autoanticorpii favorizeaz fagocitoza celulelor de ctre macrofage i celulele polimorfonucleare. Celulele pot fi distruse i datorit citotoxicitii celular e dependente de anticorp. Acest mecanism este de obicei implicat n anemia hemolit ic autoimun. 3. Formarea de complexe imune ntre autoanticorpi i antigenii corespunzto ri in situ, la nivelul organului int, sau n sngele n care se gsesc antigeni circulani. Complexele imune circulante sunt distribuite n organism i pot afecta diferite orga ne cum ar fi pielea, rinichii i vasele sanguine. n momentul n care se depun, ele ac tiveaz complementul i celulele polimorfonucleare. Leziunile sunt induse n special d e mediatorii inflamatori generai n timpul acestor procese. Acest mecanism se obser v n lupusul eritematos. 4. Inhibarea sau activarea receptorilor. Autoanticorpii po t reaciona cu receptori endogeni, producnd diferite disfuncii. De exemplu, n forma i nsulin-rezistent a diabetului zaharat, autoanticorpii blocheaz aciunea insulinei pr in legare de receptorul acesteia. Autoanticorpii legai de receptorii celulari pot i s activeze funcia celulei, cum este cazul tireotoxicozei, cnd receptorul hormonul ui tiroidian este stimulat. 5. Interaciune cu peptidele sau proteinele. Autoantic orpii care se leag de co-factori sau enzime pot modifica activitatea fiziologic, d e exemplu absorbia vitaminei B12 n anemia pernicioas. Boli autoimune La ora actual s e cunosc cel puin 30 de boli care pot fi definite ca autoimune sau care au unele manifestri autoimune. Bolile autoimune afecteaz aproximativ 5% din populaia rilor occ identale industrializate, iar n ultimii ani se constat o cretere a frecvenei unor ma ladii autoimune cum ar fi diabetul zaharat insulinodependent. Cauza acestor boli poate fi de natur infecioas, dar i o serie de xenobiotice au fost implicate n produc erea lor. Manifestarea lor este condiionat
MECANISME DE ACIUNE TOXIC 175 de o serie de factori genetici, rasiali i hormonali i multe din ele se observ mai f recvent la femei dect la brbai. Bolile autoimune sistemice sunt: lupusul eritematos sistemic, artrita reumatoid, polimiozita, dermatomiozita, scleroza sistemic i vasc ulitele. Lupusul eritematos este probabil una din maladiile autoimune frecvent a sociate cu expunerea la medicamente i se ntlnete mai ales la femeile tinere, fiind m ai des Fig.6.32. Patogeneza autoanticorpilor observat la anumite grupuri etnice cum ar fi afro-caraibienii i orientalii. Manife strile clinice includ: artrit, erupie pe obraji i pe nas n form de fluture, fotosensib ilitate, proteinurie, psihoz i tulburri hematologice. n jur de 70 de medicamente au fost asociate cu inducerea unor tulburri de tip lupus eritematos, dar numai proca inamida i hidralazina au fost studiate mai aprofundat. Exist dovezi care susin impl icarea i a altor substane cum ar fi chinidina, carbamazepina, clorpromazina, hidra zina, izoniazida, metildopa, minociclina, penicilamina, fenitoinul. Alte boli au toimune i xenobioticele care le induc sunt: Anemia hemolitic autoimun: alfa-metildo pa, penicilin, penicilamin Boli tiroidiene autoimune: bifenili polibromurai, bifeni li policlorurai, litiu, penicilamin, amiodaron
176 TOXICOLOGIE GENERAL Hepatite autoimune: alfa-metildopa, oxifenacetin, halotan Glomerulonefrite prin d epunere de imunocomplexe: cadmiu, aur, mercur Miastenia gravis: penicilamin, trim etadona Pemfigus: alfa-mercaptopropionilglicina, captopril, penicilamina Polimio zit: penicilamina Sclerodermie: ulei de rapi contaminat cu aniline, praful de silic iu, clorura de vinil.
PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC PATOLOGIA TOXIC A SISTEMULUI NERVOS Structura i funcia sistemului nervos Sistemul n ervos este un sistem complex implicat n comunicarea intercelular, care este alctuit din creier, mduva spinrii i o reea vast de nervi i de organe senzoriale, ce controlea z funciile majore ale organismului. Micarea gndirea, vederea, auzul, vorbirea, funcia cardiac, respiraia i numeroase alte procese fiziologice, sunt controlate de aceast reea complex de procese nervoase, neuromediatori, hormoni, receptori i canale. Sist emul nervos este separat anatomic n dou componente: sistemul nervos central (SNC) i sistemul nervos periferic (SNP). Sistemul nervos central cuprinde creierul i mduv a spinrii, iar sistemul nervos periferic include nervii care vin spre sau pleac de la mduva spinrii, organele senzoriale, glande, vasele sanguine i muchi. Tipurile de celule din sistemul nervos Sistemul nervos este alctuit din patru tipuri de celu le: neuronii, celulele gliale (astrocite, oligodendrocite, celule ependimale), m icroglia i celulele mezenchimale din compoziia capilarelor sanguine. Neuronii sunt singurele celule excitabile din sistemul nervos, funcia lor fiind de a transmite i analiza informaia. Ei sunt responsabili de primirea informaiei senzoriale din ex teriorul organismului, de integrarea i depozitarea acesteia i de controlarea activ itii muchilor i a glandelor. Un neuron (Fig.7.1.) este alctuit dintr-un corp celular (sau pericarion), care reprezint partea cea mai mare a celulei i conine nucleul, i d in axon i dendrite. Dendritele sunt structuri ramificate, care primesc informaia c e vine la neuroni, iar axonul, care se gsete la partea opus a celulei, este o struc tur neramificat, care conduce informaia de la neuron. Un neuron poate avea mai mult e dendrite, dar doar un singur axon. Proteinele structurale ale axonului, n speci al neurofilamentele i microtubulii, sunt adesea inte pentru substanele toxice. Axon ul este de obicei acoperit de un strat de material lipidic ce poart denumirea de teac de mielin, care este o extensie a unui tip special de celule gliale ce se nfoar n jurul axonului. Celulele gliale a) Astrocitele sunt celulele cele mai numeroase din creierul adult. Ele au rol structural, dar i numeroase alte funcii: n metabolis mul neuronal, n meninerea nivelurilor de cationi care s asigure polarizarea membran ei,
178 TOXICOLOGIE GENERAL Fig.7.1. Structura unui neuron (McKimm W., 2000) n sinteza unor substane utilizate de neuroni, precum i n transportul intracerebral, deoarece fac parte din bariera hemato-encefalic. b) Oligodendrocitele din sistemu l nervos central sunt corespondentele celulelor lui Schwann din sistemul nervos periferic. Ambele tipuri de celule formeaz teaca de mielin prin nfurarea progresiv a c itoplasmei n jurul axonului, alctuind o structur concentric bogat n lipide. Coninutul idicat n lipide favorizeaz trecerea compuilor foarte lipofili din snge spre sistemul nervos. c) Microglia este reprezentat de celule mici, care n mod normal nu se gses c n sistemul nervos, dar al cror numr poate crete ca rspuns la leziuni ale esutului. C elulele ependimale cptuesc suprafaa ventriculilor cerebrali. Ele nu prolifereaz ca rs puns la aciunea substanelor toxice, dar pot fi lezate n anumite condiii care produc edem cerebral. Bariera hemato-encefalic are rolul de a proteja fa de ptrunderea subs tanelor toxice n sistemul nervos. Astrocitele formeaz cu celulele endoteliului capi lar jonciuni inter-celulare ngroate, care mpiedic trecerea moleculelor voluminoase
PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 179 sau ionizate din snge n creier. Ftul este parial lipsit de bariera hematoencefalic, a ceasta nefiind complet dezvoltat dect dup a doua jumtate a primului an de via. Sinapsa . Comunicarea inter-celular n sistemul nervos se realizeaz prin intermediul sinapse i (Fig.7.2.), care este spaiul dintre axon i o anumit int, de exemplu un alt neuron, un muchi sau o gland. Mesajele sunt transmise de ctre neuromediatori, cei mai cunos cui fiind: acetilcolina, catecolaminele, serotonina, acidul gama aminobutiric, gl utamatul, encefalinele, endorfinele, etc. Neuromediatorii eliberai de axon strbat fanta sinaptic i se leag de receptorul post-sinaptic din celula int, ceea ce conduce la un rspuns din partea acesteia. Numeroase substane toxice pot interfera n transmi terea impulsurilor la nivelul sinapsei. Fig.7.2. Reprezentarea unei sinapse (Niesink, et al, 1996) Vulnerabilitatea sistemului nervos n ciuda existenei barierei hemato-encefalice i a barierei nervoase periferice, sistemul nervos este deosebit de sensibil la aciun ea a numeroase substane toxice din mai multe motive:
Neuronii aduli sunt celule care nu se divid, deci o dat pierdui nu se pot regenera, iar leziunile sunt de obicei permanente Bariera hemato-encefalic poate fi strbtut d e substane toxice liposolubile, sau acestea pot fi transportate n creier prin meca nisme de transport activ. De asemenea, exist regiuni ale sistemului nervos care s unt lipsite de aceast barier. Neuronii au un necesar energetic foarte ridicat, lip sa oxigenului sau a glucozei putnd conduce la moartea celular selectiv. Lungimea co nsiderabil a axonului unor neuroni ofer o suprafa mare de aciune pentru substanele tox ice. Datorit excitabilitii electrice foarte pronunate, integritatea membranelor neur onale este afectat cu uurin. Deoarece funcionarea normal a sistemului nervos necesit unea unei reele integrate complexe, lezarea chiar i a unei mici poriuni din sistemu l nervos poate determina o afectare grav. Leziunile toxice pot progresa o dat cu na intarea n vrst, datorit pierderii de neuroni i a altor modificri ce au loc treptat n a doua jumtate a vieii. Tipuri de efecte toxice la nivelul sistemului nervos Neuroto xicitatea este definit ca orice modificare duntoare a structurii sau a funciei siste mului nervos, care apare consecutiv expunerii la o substan chimic. Substanele toxice pot afecta n principal sistemul nervos central sau sistemul nervos periferic, sa u pot produce fenomene neurotoxice nsoite de alterri ale altor organe i sisteme. Efe ctele toxice observate sunt foarte variate (Tabel VII.1.) i se datoreaz inducerii unor leziuni structurale directe sau a afectrii metabolismului celulei neuronale. Leziuni structurale Leziunile structurale constau n modificarea celulelor i a str ucturilor subcelulare sau n distrugerea celulelor. La nivel morfologic, substanele toxice par s acioneze selectiv asupra unor componente ale sistemului nervos, cum ar fi: corpul celular, axonul, teaca de mielin sau moleculele receptor de la nive lul sinapselor. Datorit incapacitii de regenerare a sistemului nervos, expunerea la compui chimici poate produce o deteriorare tardiv i progresiv. n tabelul VII.2. sunt prezentate exemple de substane neurotoxice i principalele inte ale aciunii lor.
PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 181 Tabel VII.1. Exemple de efecte neurotoxice Efecte motorii Convulsii Slbiciune Tremurturi, tresriri Ataxie Paralizie Reflexe an ormale Efecte asupra dispoziiei i personalitii Tulburri de somn Excitabilitate Depres ie Iritabilitate Agitaie Delir, halucinaii Nervozitate, tensiune
Efecte cognitive Tulburri de memorie Confuzie Dificulti de vorbire Dificulti de nvare ecte senzoriale Tulburri vizuale Tulburri auditive Afectarea senzaiei de durere Efe cte generale Narcoz Oboseal Pierderea apetitului Stupoare
Afectarea metabolismului celulei neuronale Multe substane toxice pot produce leza rea celulelor prin interferen cu cile metabolice celulare. Pentru a transmite impul surile nervoase, neuronii necesit nivele energetice ridicate, fiind deosebit de s ensibili la lipsa oxigenului, i nu sunt capabili s susin o producere adecvat a ATP-ul ui. 1. Hipoxia i ischemia Creierul nu dispune de un metabolism anaerob care s i per mit s supravieuiasc n caz de hipoxie sau anoxie, situaie n care poate s survin coma. ia total conduce la moarte n cteva minute, datorit stopului respirator prin moarte b ulbar, urmat de stop cardiac. O parte din neuroni mor nainte de ncetarea complet a t ransportului de oxigen. Reanimarea cardiac i reoxigenarea tardiv nu permit rentoarce rea la via a celulelor nervoase, subiectul aflndu-se n stare de moarte cerebral. Dac a noxia a fost doar parial i tratamentul s-a instituit rapid, moartea cerebral este pa rial, supravieuind celulele care nu au suferit de pe urma anoxiei.
182 TOXICOLOGIE GENERAL Tabel VII.2. Substane neurotoxice i intele aciunii lor Toxici la nivelul pericarionului Compui ai mercurului Mangan Aluminiu Glutamat Ci anur MPTP Plumb Toxici la nivelul tecii de mielin Hexaclorofen Trietilstaniu Plumb Telur Toxici la nivelul axonului n-Hexan Sulfur de carbon Taxol Colchicin Acrilamid Piret roizi Toxici la nivelul neuromediatorilor Nicotin Compui organofosforici Insectici de carbamice Amfetamine Cocain Aminoacizi excitani n funcie de mecanismul prin care se produc, hipoxiile se clasific n: A) Hipoxia anem ic. Se datoreaz unui deficit n transportul oxigenului de ctre snge ca urmare a: - blo crii hemoglobinei de ctre substana toxic de exemplu prin formarea carboxihemoglobine i, a methemoglobinei, sau a sulfhemoglobinei - hemolizei (ex. hidrogenul arsenia t) B) Hipoxia stagnant. Este consecina unor deficiene circulatorii i poate s apar n ul instalrii strii de oc. C) Hipoxia hipoxic. Se poate datora unor factori externi s au interni. - Factori externi: lipsa oxigenului din aerul inspirat prezena substa nei toxice n concentraii mari n aer = hipoxie toxic de aport - Factori interni = hipo xii toxice prin alterarea difuziei oxigenului la diferite niveluri: blocarea cen trilor bulbari de ctre substana toxic (ex. derivaii barbiturici, morfina) leziuni br onhopulmonare induse de edemul pulmonar
PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 183
paralizia musculaturii implicate n respiraie (ex. meprobamatul) D) Hipoxia histoto xic rezult n urma imposibilitii utilizrii oxigenului n procesul respiraiei celulare, urmare a interferenei substanei toxice n metabolismul celular prin blocarea unor en zime cheie ale respiraiei celulare (ex. acidul cianhidric, hidrogenul sulfurat, c are blocheaz citocromoxidaza). 2. Hipoglicemie i interferen n procesul glicolizei n ca z de hipoglicemie sever apar leziuni regionale ale creierului. Citotoxicitatea se lectiv asociat hipoglicemiei a fost explicat prin mai multe mecanisme, printre care coninutul crescut de glicogen al unor zone cerebrale, sensibilitatea mai mare a unor zone la neuromediatorii excitani, sau diferene ale necesarului energetic fa de densitatea capilarelor n regiune, deci un aport insuficient de glucoz i oxigen comp arativ cu cererea. 3. Afectarea homeostaziei ionilor Unele substane toxice care p roduc activitate convulsiv crescut determin o ptrundere a calciului n celul, fiind dep capacitatea de sechestrare a ionului n membrana plasmatic, mitocondrie sau reticul ul endoplasmatic. Creterea concentraiei citosolice a calciului pare a fi cauza act ivrii fosfolipazelor i proteazelor, ceea ce conduce la lezarea celulei. Tipuri de patologii induse de substanele toxice Nu exist o clasificare standard a bolilor ne urotoxice, dar cea mai frecvent ntlnit se bazeaz pe inta celular la nivelul creia se p oduce leziunea (Fig.7.3.). Astfel, se pot distinge mai multe tipuri de patologii : 1. NEURONOPATII Neuronopatiile sunt patologiile asociate cu leziuni care apar la nivelul corpului neuronal. Ele se pot explica, aa cum s-a vzut, fie prin defici ene nutriionale sau respiratorii, fie prin lezarea direct a structurilor celulare. Anumite substane toxice acioneaz specific asupra neuronilor, sau uneori asupra unui grup particular de neuroni, producnd lezarea sau chiar moartea lor. Pierderea ne uronului este ireversibil i include degenerarea tuturor extensiilor exoplasmatice, dendritele i axonul, precum i a tecii de mielin. Printre substanele care lezeaz corp ul neuronal se numr: Metilmercurul. Neurotoxicitatea acestui compus organic al mer curului a fost descoperit n mod tragic n urma unor intoxicaii colective soldate cu n umeroi mori n Japonia (Golful Minamata) i n Irak. Metilmercurul reacioneaz cu cisteina formnd un conjugat care mimeaz aminoacidul neutru
184 TOXICOLOGIE GENERAL Fig. 7.3. Tipuri de leziuni neurotoxice metionina i este astfel transportat activ prin bariera hemato-encefalic. Mecanismu l de producere a toxicitii nu a fost complet elucidat, dar se pare c se formeaz radi cali liberi i este afectat profund funcia celular. Consecina este encefalopatia difuz, unele grupe de neuroni fiind mai afectate dect altele. Distribuia leziunilor neur onale pare a nu fi corelat cu distribuia metilmercurului sau cu cea a ionului de m ercur, ci mai degrab cu o sensibilitate crescut a unor neuroni, cum ar fi celulele granulare din cerebel. Aluminiul poate produce o encefalopatie nsoit de degenerare a neurofibrilelor, cu manifestri asemntoare celor din boala Alzheimer. Doxorubicina se intercaleaz n molecula de ADN, distrugnd structura dublu elicoidal, ceea ce dete rmin inhibarea sintezei ARN i a proteinelor neuronale. Sensibilitatea selectiv a ne uronilor fa de alte celule poate fi corelat cu incapacitatea acestora de a repara l eziunile ADN. MPTP (1-metil-4-fenil-1,2,5,6-tetrahidropiridina) este un contamin ant al meperidinei, sau heroina sintetic, ce produce simptome asemntoare cu cele di n boala Parkinson. Dup ce trece bariera hemato-encefalic, substana este metabolizat de MAO-B la nivelul astrocitelor, formnd ionul de metil piridiniu corespunztor, MP P+. Acesta din urm ptrunde n neuronii dopaminergici din substantia nigra prin inter mediul sistemului de captare a dopaminei i acioneaz ca o toxin mitocondrial, blocnd re spiraia celular la nivelul complexului I (Fig.7.4.). Se produce n final lezarea sau moartea neuronilor.
PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 185 Bariera hematoencefalica MAO-B N CH3 MPTP N CH3 N CH3 MPDP+ N CH3 MPP+ Astrocite Neuroni dopaminergici Captare activa Q10 Citocromi O2 NADH NADH DHaza Mitocondrie Fig.7.4. Activarea metabolic i mecanismul neurotoxicitii MPTP Glutamatul este un neuromediator care stimuleaz dendritele anumitor neuroni, prod ucnd depolarizare continu sau repetitiv a membranelor excitabile. Aceasta determin e puizarea resurselor de energie, ceea ce conduce la modificarea permeabilitii membr anei celulare, cu acumularea ionului de calciu i n final moartea celulei. Acest me canism este considerat a fi responsabil de aa-numitul sindrom al restaurantului ch inezesc produs de glutamatul de sodiu folosit ca potenator de arom, i manifestat pri n arsur i mncrime la nivelul feei, gtului i prii superioare a corpului.
2. AXONOPATII Axonopatiile sunt tulburrile de origine toxic n care locul principal de aciune a substanei toxice este axonul. Axonul degenereaz, la fel i teaca de mieli n, dar corpul neuronal rmne intact. Axonopatiile pot fi clasificate n: - a) Axonopat iile proximale, care se produc la nivelul bazei axonului i n prima poriune a axonil or mielinizai. Aceast poriune a axonului este mai vulnerabil, datorit capacitii sale d a genera i propaga potenialele de aciune i a capacitii de a sintetiza proteine. Acest tip de axonopatii este rar ntlnit. - b) Axonopatiile distale sunt cel mai frecven t ntlnite. Axonopatiile distale pot fi considerate ca o secionare chimic a axonului, partea acestuia situat distal fa de leziune fiind separat biologic de corpul celula r, ceea ce conduce la degenerare. Axonii mai lungi sunt mai susceptibili s sufere astfel de leziuni. Regenerarea poate avea loc atunci cnd leziunile se limiteaz la nervii periferici i poate fi complet n axonopatiile n care poate fi identificat i nde prtat evenimentul iniial. Pe plan clinic, axonopatiile toxice sunt asociate cu slbi ciune muscular la nivelul extremitilor i cu ataxie. Ele mai sunt denumite i nevrite ( polinevrite, dac afecteaz mai muli nervi) sau neuropatii periferice, iar n cazurile grave evolueaz cu parestezii (furnicturi i amoreal), durere, anestezie, pierderea ref lexelor, hipotonie, parez i n final paralizie i atrofie. i substanele toxice care prod uc carene vitaminice (B1, B6) pot induce polinevrite. Unele substane toxice ce sun t responsabile de producerea axonopatiilor distale sunt prezentate n Tabelul VII. 3.. Tabelul VII.3. Substane toxice care pot induce axonopatii distale Acrilamida n-He xanul p-Bromfenilacetilureea Zinc piridintiona Triortocresil fosfatul Esterii or ganofosforici Izoniazida Sulfura de carbon Disulfiramul Leptofos g-Dicetonele Acrilmid este un monomer vinilic solubil n ap care are numeroase aplicaii n indust ria chimic i n extragerea minereurilor. Este toxic numai ca monomer, nu i dup polimeri zare. Se crede c toxicitatea se datoreaz inhibrii producerii de energie la nivelul axonului, modificrii vitezei i cantitii
transportului i a depunerii materialelor transportate din corpul celular, precum i afectrii structurii i funciei citoscheletului. Modificrile la nivelul axonului se p roduc numai dup expunerea cronic, ceea ce sugereaz faptul c nu axonul este inta prima r a aciunii neurotoxice a acrilamidei. g-Dicetonele sunt metabolii ai n-hexanului i ai n-butil cetonei, substane utilizate pe scar larg n industrie, n special n producerea de nclminte, i care intr n compoziia adezivilor. Axonopatia se instaleaz lent i nu mplet reversibil dup ntreruperea expunerii. n expunerea cronic se observ apariia la ni elul axonilor a unor umflturi determinate de agregarea neurofilamentelor, sistemu l nervos central i cel periferic fiind afectate concomitent. Mecanismul probabil const n formarea, prin oxidare sub aciunea citocromului P450, a unui metabolit g-dice tonic ce se poate cicliza n prezena unei grupri aminice, rezultnd un compus pirolic. n acest mod se produce o inhibiie ireversibil a terminaiilor aminice (lizin) ale pro teinelor fibrilare din axon (Fig.7.5.). Sulfura de carbon se utilizeaz ca solvent n diferite industrii i mai ales pentru obinerea mtsii artificiale. Ea produce o axon opatie care implic att fibrele senzitive ct i cele motorii, mecanismul de aciune fiin d asemntor cu cel al n-hexanului, respectiv presupune metabolizarea la ditiocarbam ai i formarea unor legturi covalente ntre neurofilamente. Izoniazida produce n expune rea cronic degenerarea nervilor periferici prin interferare n metabolismul vitamin ei B6 . Astfel, ea reacioneaz cu piridoxal fosfatul, formnd o hidrazon (Fig. 7.6.) c are este un inhibitor puternic al piridoxal fosfat kinazei. Hidrazona are o afin itate mult mai mare pentru enzim dect substratul normal, piridoxalul, consecina fii nd depleia esuturilor de piridoxal fosfat. Acest cofactor este deosebit de importa nt n esutul nervos, fiind implicat n reaciile de decarboxilare i transaminare, iar re zultatul este instalarea unei polinevrite cu caracter senzitiv. Esterii organofo sforici includ o serie de insecticide i de aditivi utilizai n masele plastice i n pro dusele petroliere, care inhib acetilcolinesteraza, inducnd o cretere a activitii coli nergice. Triortocresil fosfatul produce axonopatie distal care nu este nsoit ns de fen omene colinergice. Aceste substane induc o polineuropatie tardiv, caracterizat prin degenerarea axonilor lungi, cu diametru mare, din sistemul nervos central i din cel periferic. Se crede c molecula int care intervine n inducerea acestei neuropatii este o protein neuronal cu activitate esterazic, a creia activitate la nivel cerebr al dup administrare acut a fost bine corelat cu activitatea la nivelul leucocitelor , acestea din urm fiind considerate biomarkeri adecvai ai posibilitii de apariie a af ectrii cerebrale. Unii inhibitori ai acestei esteraze in a neuropatiei, cum ar fi c arbamaii i tiocarbamaii, care nu produc polineuropatie tardiv, pot preveni apariia ac esteia dac sunt administrai nainte de compuii organofosforici, fenomen denumit promo varea axonopatiilor.
188 TOXICOLOGIE GENERAL Mecanismul promovrii pare a fi diferit de cel implicat n progresia leziunilor iniia le. H3C-CH2-CH2-CH2-CH2-CH3 hexan OFMM O O H3C-C-CH2-CH2-C-CH3 2,5-hexandiona RNH2 R N R N 2,5-dimetil pirol R'SH R N R'NH2 R N R'S NHR' Fig.7.5. Mecanismul de aciune a n-hexanului asupra proteinelor neurofibrilare
PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 189 O C NHNH2 HO CHO CH2OP O C NHN HO H C CH2OP N Izoniazida H3C N Piridoxal fosfat N H3C Hidrazona N Fig.7.6. Mecanismul de aciune neurotoxic a izoniazidei 3. MIELINOPATII Mielina asigur izolarea electric a proceselor neuronale, distruger ea sa conducnd la afectarea sever sau la absena transmisiei pulsatile. Distrugerea tecii de mielin are loc consecutiv lezrii directe a acesteia, sau n urma afectrii se lective a oligodendrocitelor sau a celulelor Schwann, care sunt responsabile de producerea mielinei n SNC i respectiv n SNP. De asemenea, exist substane toxice care produc o separare a lamelelor de mielin, inducnd edem intramielinic. Compui care pr oduc demielinizare sunt: Trietilstaniul. Compuii organostanici sunt utilizai ca i s tabilizatori n polimerii de material plastic, ca i conservani pentru lemn i textile, ca fungicide, bactericide i insecticide. Trietilstaniul produce edem cerebral cu o vacuolizare a materiei albe, dar care se extinde i n sistemul nervos periferic, i care poate fi atribuit separrii lamelelor de mielin. Hexaclorofenul a fost adugat n spunuri i n detergenii lichizi pentru proprietile sale antimicrobiene. El se absoarbe prin pielea intact i prin membranele mucoase i se cunosc cazuri de neurotoxicitate , n special la nounscui prematuri care au fost mbiai n ap cu aceste produse pentru a ta infeciile stafilococice. Simptomele constau n tulburri vizuale i slbiciune muscula r, care progreseaz spre paralizie i se datoreaz unor leziuni identice cu cele produs e de trietilstaniu. Plumbul produce neuropatie periferic cu demielinizare pronunat, fiind afectai n principal axonii neuronilor motori.
190 TOXICOLOGIE GENERAL n cursul unor intoxicaii care decurg cu anoxie, cum ar fi intoxicaia cu monoxid de carbon, degenerescena mielinic poate mbrca un aspect diferit, n special la nivelul si stemului nervos central, decurgnd cu un edem ce disociaz nveliul mielinic i produce v acuolizare. Fenomenul poart denumirea de degenerescen spongioas. Aceast anomalie poat e preceda simptome retard ca sindromul post-interval, care apare la 7-21 de zile dup intoxicaia acut cu monoxid de carbon. 4. TULBURRI ALE TRANSMITERII IMPULSULUI N ERVOS Substanele toxice pot afecta transmiterea impulsului nervos prin aciune: A) la nivelul sinapselor ca urmare a o Modificrii nivelurilor de neuromediatori o In teraciunii cu receptorii o Interferenei cu nucleotidele ciclice B) la nivelul axon ului prin o Alterarea tecii de mielin o Dereglarea balanei ionice i energetice. Uni i compui, datorit similitudinii structurale cu neuromediatorii endogeni, pot mima procesele de neurotransmisie din sistemul nervos simpatic, fiind denumii compui si mpatomimetici. Substane care pot afecta transmiterea impulsului nervos sunt preze ntate n Tabelul VII.4. Tabel VII.4. Medicamente i toxine care produc neuropatii de transmisie Medicamente i toxine ce acioneaz pre-sinaptic ACTH, corticosteroizi Aza tioprin Toxina botulinic Veninul de Crotalidae Magneziul Verapamilul Medicamente i toxine ce acioneaz post-sinaptic d-Penicilamina Blocanii neuromusculari Nicotina I nsecticidele organofosforice i carbamice Fenotiazinele Medicamente i toxine ce acio neaz att pre- ct i postsinaptic Antibiotice Aminoglicozide Clindamicin Polimixine An tagoniti beta-adrenergici Clorochin Litiu Fenitoin Procainamid Chinidin
PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 191 5. MIOPATII n urma unei leziuni nervoase este afectat i musculatura inervat de nervi i respectivi. Ca urmare a aciunii substanei toxice, muchiul fie nu mai primete stimu li i se atrofiaz, fie primete un stimul exagerat, este hiperpolarizat i meninut contr actat. 6. VASCULOPATII TOXICE Uneori, o dat cu afectarea esutului nervos se produc e i o alterare secundar a endoteliului vaselor sanguine care l irig. Astfel, compuii arsenului, aluminiului, cadmiului, mercurului, plumbului, taliului, staniului, s e pot lega de gruprile tiolice ale celulelor endoteliale, crescnd permeabilitatea peretelui vascular. Consecina este ieirea n spaiul extracelular a sngelui, cu produce rea hemoragiei, sau a plasmei, cu apariia edemului, ceea ce conduce la encefalopa tie i moartea neuronilor. Edem cerebral mai pot produce i substane ca etanolul, mon oxidul de carbon i acidul cianhidric.
PATOLOGIA TOXIC A FUNCIEI PULMONARE Principala funcie a plmnilor este schimbul de gaz e, adic furnizarea de oxigen esuturilor i ndeprtarea dioxidului de carbon. Deoarece s uprafaa plmnului este foarte mare, iar volumul de aer care este implicat n acest sch imb este semnificativ (n medie 10.000-20.000 l/zi pentru un adult), acest organ r eprezint principala interfa dintre organism i mediu, permind ptrunderea oricrei subst toxice prezente n aer sub form de gaze, vapori sau particule solide sau lichide de diferite dimensiuni (Tabel VII.5.). La nivelul sistemului respirator exist o ser ie de mecanisme de aprare, cum ar fi aparatul muco-ciliar i sistemul macrofagelor alveolare, dar acestea sunt frecvent insuficiente, permind producerea diferitelor tipuri de leziuni. Localizarea leziunii i tipul acesteia este rezultatul interaciu nilor complexe ntre agentul toxic i gazd. - n ceea ce privete substana toxic, sunt imp rtante caracteristicile fizicochimice ale acesteia, doza i tipul de expunere, acu t sau cronic. - Sub aspectul particularitilor anatomice i funcionale ale plmnului, sun t importante mai multe aspecte: Sistemul respirator este alctuit dintr-o gam larg d e populaii celulare cu compoziie diferit i cu rspuns diferit la factorii de stres din mediu. n plus, se pare c toate populaiile celulare
rspund la stres atunci cnd o singur subpopulaie este afectat. Astfel, nu numai compar timentele celulare care se afl n contact direct cu agentul lezional sau cu un aler gen vor reaciona, ci vor avea loc modificri semnificative i n alte compartimente. Vo lumul sanguin circulant trece prin plmn ntre o dat i de cinci ori pe minut, organul f iind astfel expus i la substanele toxice din circulaia sistemic. Plmnul prezint o ca itate semnificativ de metabolizare a xenobioticelor, putnd juca un rol n bioactivar ea sau detoxifierea acestora. Rspunsul la substana toxic poate fi modulat de diferii factori: - Vrsta. Nou-nscuii sunt mult mai susceptibili la substanele toxice care s unt bioactivate la nivelul plmnului, probabil corelat cu diferenierea populaiei celu lelor int i cu inducerea sistemelor enzimatice corespunztoare. n acelai timp, se pare c se manifest o deficien a enzimelor de detoxifiere, a cror evoluie urmeaz un tipar di erit. - Sexul pare a reprezenta un factor de difereniere n unele boli pulmonare um ane, cum ar fi cancerul pulmonar i reaciile de hipersensibilitate. Se cunoate c boli le autoimune afecteaz femeile ntr-o proporie mai mare dect brbaii. - Tipul de expunere . Expunerea la aceeai substan n mod repetat modific rspunsul acut la leziune i rezulta ul final al proceselor de reparare. Astfel, o expunere repetat care are loc n timp ul procesului de reparare declanat de lezarea acut iniial reduce susceptibilitatea p opulaiilor celulelor int la leziuni ulterioare. n schimb, dac expunerea repetat a avut loc dup ncheierea procesului de reparare, efectul este contrar, adic de cretere a s usceptibilitii. Aceast constatare este adevrat att pentru expunerea la gazele oxidante , ct i la hidrocarburile bioactivate. Substanele toxice ptrunse pe cale pulmonar pot induce efecte locale sau, dup absorbie i distribuie, efecte sistemice. De asemenea, cile respiratorii pot fi afectate i atunci cnd substana a ptruns n organism pe o alt c le. A. Efecte sistemice Numeroase substane prezente n aerul inspirat pot fi absorb ite i transportate de sngele circulant n diferite regiuni ale organismului, unde i ex ercit efectele, cum este cazul anestezicelor generale.
PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 193 Tabel VII.5. Substane toxice pulmonare din mediu i leziunile asociate Substana toxi c Praf de aluminiu Amoniac Arsen Azbest Beriliu Oxid de cadmiu Clor Crom Praf de crbune Acid fluorhidric Sursa Materiale ceramice, vopsele, artificii Prepararea f ertilizanilor, explozibililor, amoniacului Prepararea pesticidelor, sticlei, pigm enilor, aliajelor Minerit, construcii, construcii navale Extracia minereului, materi ale ceramice, aliaje Sudur, topire, produse electronice, aliaje, pigmeni Obinerea hr tiei, maselor plastice, a compuilor clorurai Prepararea compuilor cromului, pigmeni pentru culori Minerit Prepararea unor substane chimice, materiale plastice, filme fotografice, solveni Sudur, prepararea oelului, minerit, topitorii Extracia nichelu lui i topire, galvanizare Leziunea Fibroz Iritaie Cancer pulmonar, bronite Azbestoz, cancer pulmonar Fibroz, cancer pulmonar Emfizem Iritaie Cancer pulmonar Fibroz Irit aie, edem Oxizi de fier Nichel Fibroz Oxizi de azot Ozon Fosgen Siliciu Dioxid de sulf Talc Tetracloretilen Cancerul nasului, cancer pulmonar, edem Emfizem Sudur, producerea explozibililor Emfizem Sudur, albire, dezodorizare Prepararea pesticidelor, materialelor Edem pl astice Fibroz (silicoz) Minerit, cariere Iritaie Albire, refrigerare, fumigaii, arde rea crbunilor Industria cauciucului, cosmeticelor Fibroz Edem Curare la rece, degres area metalelor
194 TOXICOLOGIE GENERAL B. Efecte pulmonare 1. IRITAIA Iritaia este probabil efectul cel mai frecvent sesi zat al unor compui cum ar fi amoniacul sau clorul. Aceast iritaie, n special dac este grav sau persistent, determin constricia cilor respiratorii, sau conduce la edem pul monar i complicaii bacteriene. Ali ageni iritani care produc frecvent edem pulmonar s unt oxizii de azot, ozonul i fosgenul. 2. EDEMUL PULMONAR Edemul pulmonar este o leziune de tip acut, care poate s apar ca urmare a modificrii hemodinamicii la nive lul vascularizaiei pulmonare (n insuficien cardiac =edem pulmonar cardiogen, sau n lez area acut a sistemului nervos = edem pulmonar neurogen), sau ca urmare a creterii permeabilitii endoteliale, datorit efectului lezional al unor substane toxice (Fig.7 .7.). Lichidul seroalbuminos din capilare trece n spaiul interstiial, producnd edem interstiial, sau n spaiul alveolar producnd edem alveolar. Se reduce volumul de aer din plmn i este profund perturbat schimbul de gaze, instalndu-se insuficiena respirat orie. Prin amestecarea acestui lichid sero-albuminos cu aerul se formeaz o spum pe rsistent. Cel mai adesea, edemul pulmonar atrage dup sine complicaii de natur infecio as, care contribuie la prognosticul negativ al intoxicaiei. i substanele aflate n atm osfer sub form de particule, cum ar fi unii compui ai beriliului, borului i nichelul ui, pot induce apariia edemului pulmonar. 3. ATELECTAZIA Deschiderea alveolelor p ulmonare ce permite schimbul de oxigen necesit o structur biochimic particular, care s evite adeziunea peretelui alveolar. Aceasta este surfactantul, un film bogat n lipide, care reduce tensiunea superficial la o valoare apropiat de zero. El se com port ca un echivalent acelular al membranei i este alctuit din proteine fixate pe l ipide. n cursul anumitor procese toxice, cum ar fi anoxia, hiperoxia, inhalarea d e dioxid de carbon, surfactantul poate s dispar, producndu-se o lipire a celulelor care poart denumirea de atelectazie, sau se poate desprinde de pe suprafaa celular sub presiunea edemului, n acest ultim caz leziunile avnd un anumit grad de reversi bilitate.
PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 195 Capilara Interstitiu Alveola o Arterial o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o Trecerea lichidului si proteinelor prin spatiul interendotelial o Edem int erstitial o o Surfactant o o o Trecerea prin jonctiunile intercelulare dintre ce lulele epiteliale o o o o Edem alveolar o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o Venos o o o o o Lichid si proteine o o o Fig.7.7. Edemul pulmonar
4. PNEUMOPATIILE INTERSTIIALE Pneumopatiile interstiiale constau n intoxicaiile acut e din invadarea esutului interstiial de ctre celulele cu funcie imunitar, ca rspuns la o stare inflamatorie sau iritativ. n intoxicaiile cronice are loc o lezare predomi nant a esutului interstiial interalveolar. 5. PLEUROPATIILE TOXICE Pleuropatiile co nstau dintr-o ngroare a pleurei, cazul cel mai spectaculos observndu-se dup inhalare a prelungit de fibre de silicat, cnd are loc nu numai afectarea pleurei ci i formar ea de colagen i degenerescen canceroas. 6. FIBROZA PULMONAR Fibroza const ntr-o crete a cantitii de colagen din parenchimul pulmonar, nsoit de modificarea acestuia i transf ormarea n esut fibrotic. Este o
boal grav, n care sunt implicai cel mai frecvent siliciul, azbestul i beriliul dup exp unere inhalatorie, i paraquatul i bleomicina dup expunere sistemic. Silicoza, care e ste produs de inhalarea dioxidului de siliciu, este iniiat de captarea particulelor de ctre macrofage i ncorporarea lor n lizozomi. Consecutiv ruperii membranei lizozo male, n citoplasma macrofagelor sunt eliberate enzimele lizozomale, iar celula es te digerat de propriile enzime. Dup liza celulei, particulele de siliciu sunt elib erate i pot fi fagocitate de alte macrofage, relunduse ciclul. Se pare c macrofagel e lezate ar elibera unele substane care stimuleaz formarea colagenului n plmn. Att sil icoza ct i azbestoza sunt considerate a reprezenta condiii premaligne. Alte substane fibrogene sunt: praful de crbune, caolinul, talcul, aluminiul, carbura de titan. 7. EMFIZEMUL PULMONAR Emfizemul const din apariia unor spaii de aer ca urmare a di latrii alveolelor sau a dispariiei pereilor despritori. Suprafaa de schimb al gazelor este distrus, plmnul este dilatat i nu mai poate realiza n mod eficient schimbul de g aze datorit pierderii esutului i a capacitii de a reine aerul. Dei cauza major a emfi ului pulmonar este fumul de igar, i alte substane pot avea acest efect: aluminiul, o xidul de cadmiu, oxizii de azot, ozonul. 8. RSPUNSURI ALERGICE Acest tip de rspuns este n general indus de spori de mucegaiuri, contaminani bacterieni, scame de bum bac, detergeni ce conin enzime derivate din Bacillus subtilis. i unele pulberi orga nice pot declana reacii alergice de tip I, determinnd apariia rinitei, bronhospasmul ui, vasodilataiei. 9. CANCERE PULMONARE Cancerele pulmonare spontane sunt o boal d estul de rar, att la om ct i la animale. n urm cu mai bine de un secol, cancerul pulmo nar reprezenta doar 0,5% din cancerele detectate la autopsie. La nceputul secolul ui XX, s-a constatat o cretere dramatic a incidenei acestei forme de cancer, mai al es dup cel de-al doilea rzboi mondial, iniial la brbai i mai apoi i la femei. La ora a tual, cancerul pulmonar este prima cauz de deces datorit neoplaziei maligne la brbai, iar la femei ncepe s ia locul cancerului de sn.
Studiile epidemiologice au artat c principalul factor de risc este inhalarea fumul ui de igar. Alte substane capabile s induc apariia cancerului pulmonar sunt azbestul, arsenul, cromaii, nichelul, uraniul. Se pare c un rol important n iniierea procesulu i carcinogen, att de ctre particule, ct i de alte substane, l are rspunsul inflamator l plmnului, care conduce la stres oxidativ n celulele expuse. Speciile reactive de oxigen sunt eseniale pentru activarea proto-oncogenelor de ctre fibrele carcinogen e. De asemenea, carcinogenii pot fi activai la nivel pulmonar de atacul speciilor reactive de oxigen sau al celulelor care produc aceste specii, cum sunt celulel e activate de inflamaie, macrofagele i leucocitele polimorfonucleare. C. Efecte as upra cilor respiratorii superioare Unele substane, prin iritarea nervului vag, pro duc constricie i ngreuneaz ptrunderea aerului. Toxicii iritani pot induce edem laringi an sau laringospasm, care au drept consecin asfixia. Afectarea mucusului i a cililo r vibratili de ctre unii compui toxici poate determina apariia unor procese obstruc tive la nivelul broniilor i broniolelor. Astfel, iritantele induc o hipersecreie de mucus care face dificil ptrunderea aerului, n timp ce dioxidul de sulf fluidific muc usul. Oxizii de azot, de sulf, formaldehida, vaporii de cadmiu, crom, nichel, fu mul de igar, acioneaz toxic asupra celulelor ciliate, producnd iniial o paralizie a vi braiei i apoi dispariia cililor, ceea ce antreneaz moartea celulelor. D. Efecte pulm onare consecutiv expunerii pe o alt cale Exist din ce n ce mai multe date care conf irm faptul c unele medicamente pot induce lezare pulmonar care este responsabil de t ulburri funcionale sau chiar de decese. Reaciile pulmonare produse de medicamente p ot fi: bronhospasm, edem, hemoragie, fosfolipidoz, fibroz sau efecte asupra sistem ului vascular ce irig plmnii. Mecanismele prin care se produc aceste reacii sunt dif erite: 1. Generarea de specii reactive de oxigen Prin acest mecanism se explic to xicitatea pulmonar a unor medicamente cum sunt nitrofurantoinul i bleomicina i toxi citatea ierbicidului paraquat, substane care induc fibroz pulmonar. Aceste molecule sufer, n condiii aerobe i n prezena NADPH, o reducere cu un electron, rezultnd un rad cal liber care reacioneaz imediat cu oxigenul pentru a regenera compusul printe i in tr astfel ntr-un ciclu redox, care genereaz specii reactive de oxigen. n cazul bleom icinei, toxicitatea pulmonar este mediat, cel puin parial, de formarea unui complex bleomicin-fier care genereaz specii toxice de oxigen. Se pare c plmnul devine
inta toxicitii acestor substane datorit concentraiilor crescute de oxigen de la acest nivel. i alte citostatice, ca ciclofosfamida i metotrexatul, pot produce fibroz pul monar. 2. Inducerea edemului pulmonar i a insuficienei respiratorii Supradozarea an tidepresivelor triciclice de tipul amitriptilinei poate conduce la edem pulmonar i sindrom de insuficien respiratorie. Dei deprimarea respiraiei a fost ntlnit n 11% cazurile de intoxicaie acut cu antidepresive triciclice, mecanismul responsabil de efectele pulmonare nu este nc elucidat, dar se pare c aceste substane ar determina o cretere a permeabilitii endoteliului. 3. Fosfolipidoza indus de medicamente Fosfol ipidoza reprezint o acumulare excesiv a fosfolipidelor n esut, nsoit de infiltrarea ma rofagelor n alveole. Medicamentele care produc acest efect au anumite caracterist ici structurale, care implic prezena unei poriuni lipofile la un capt al moleculei i a unei grupri aminice cationice la cellalt capt. Mecanismul de producere a fosfolip idozei nu este cunoscut cu certitudine, dar pare a fi direct proporional cu gradu l de acumulare a acestor substane n plmn. Datorit proprietilor fizico-chimice, ele se eag probabil de fosfolipide i le reduc degradarea metabolic, sau au rol direct n inh ibarea fosfolipazelor. Din aceast clas fac parte medicamente cu aciune farmacologic diferit: - anorexigene: clorfentermin, cloforex, fenfluramin - antiaritmice: amio daron - antimalarice: clorochin - neuroleptice: clorpromazin. PATOLOGIA TOXIC A FICATULUI Ficatul, cel mai mare organ din organism, este adesea inta aciunii substanelor toxice. Vulnerabilitatea sa se datoreaz mai multor factori : majoritatea xenobioticelor ptrund n organism prin tractul gastrointestinal i, dup absorbie, sunt transportate de ctre vena port n ficat, care este astfel primul organ expus la substanele toxice la nivelul ficatului se ntlnete cea mai mare concentrare de enzime de metabolizare a xenobioticelor, iar metaboliii activi formai sunt mai susceptibili s reacioneze cu celulele adiacente locului de producere Ficatul are n s o capacitate imens de auto-reparare i regenerare, de aceea multe din leziuni se r efac dup ncetarea expunerii la substana toxic. Totui, n
unele situaii mecanismele de aprare sunt depite i se instaleaz insuficiena hepatic, c za hepatic n cazul expunerii repetate, sau cancerul hepatic. Fiziologia ficatului Structura ficatului const din rnduri de celule hepatice (hepatocite sau celule par enchimatoase), care sunt strbtute de capilare specializate, numite sinusoide. Perei i sinusoidelor conin celule cu capacitate de fagocitoz, celulele Kupffer, al cror r ol este de a ngloba i distruge particulele solide, bacteriile, celulele sanguine m oarte, etc. Principalul aport de snge din ficat provine din vascularizaia intestin al. Aceste vase, mpreun cu cele care vin dinspre splin i stomac, se unesc pentru a fo rma vena port. La intrarea n ficat, vena port se divide, irignd sinusoidele (Fig.7.8 .). Sngele perfuzeaz ficatul i iese prin venele hepatice, care se unesc n vena cav in ferioar, ajungnd apoi n inim. Artera hepatic asigur ficatului sngele arterial oxigenat Acizii biliari i multe xenobiotice trec din hepatocit n canaliculele care transpo rt bila i care se unesc formnd canale ce urmeaz ramurile venei porte. Aceste canale converg n canalul hepatic, prin care bila se vars n duoden. Vezica biliar reine bila pn n momentul cnd este golit n intestin. Ficatul are trei funcii principale: de depozi are, de metabolism i de sintez: - glucoza este convertit n glicogen i este depozitat, iar atunci cnd apare un necesar energetic este convertit din nou n glucoz - lipidele , vitaminele liposolubile i alte substane nutritive sunt depozitate n ficat - acizi i grai sunt metabolizai i transformai n lipide, care se conjug cu proteinele sintetiza te n ficat, fiind eliberai n circulaie sub form de lipoproteine - sunt sintetizate un ele proteine funcionale, cum ar fi enzimele i factorii de coagulare - este princip alul sediu al metabolismului xenobioticelor. Tipuri de leziuni hepatice Substanel e toxice pot afecta toate funciile majore ale ficatului. Tipul de rspuns depinde d e substana toxic, de doz, de populaia celular afectat i de tipul de expunere, acut sa ronic (Tabel VII.6.). i n cazul ficatului exist tot mai multe date care sugereaz rolu l inflamaiei n producerea hepatotoxicitii. Astfel, leziunea iniial determin necroz lo izat i activeaz macrofagele fixate n esut. Acest eveniment declaneaz eliberarea de pro ui inflamatori, printre care i factorul necrozant tumoral, care stimuleaz apoptoza i proliferarea celular, dar i eliberarea sau producerea de specii reactive de oxige n.
200 TOXICOLOGIE GENERAL Fig.7.8. Circulaia sanguin i biliar n ficat (Niesink et al., 1996) A. Leziuni citotoxice acute 1. STEATOZA Steatoza hepatic reprezint acumularea n cit oplasma celulelor parenchimului hepatic a unor vezicule de lipide, ficatul ajungn d s conin mai mult de 5% lipide. Mecanismul de producere a acestei leziuni poate fi diferit, dar n principiu este corelat cu tulburri ale sintezei sau secreiei lipopr oteinelor. Rolul steatozei n lezarea hepatic nu este clar neles. Infiltrarea lipidel or poate induce degenerare hepatocelular, iar acidul valproic poate produce steat oz asociat cu letalitate. 2. DEGENERAREA PARENCHIMATOAS Aceasta este cea mai blnd for m de degenerare hepatic. Hepatocitele se umfl i citoplasma prezint granulaii eozinofil e, ca urmare a umflrii mitocondriilor. Dac lezarea este mai sever, n celule este rein ut apa, uneori chiar i proteinele plasmatice, iar celulele hepatice se umfl conside rabil. Acest tip special de
PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 201 degenerare poart denumirea de degenerare hidropic. Un exemplu de substan care produc e un astfel de efect este halotanul Tabel VII.6. Exemple de substane hepatotoxice i leziunile asociate Necroz i steatoz Tetraclorur de carbon Cloroform Tricloretilen T etracloretilen Brombenzen Tioacetamid Etionin Colestaz Clorpromazin Promazin Tiorida zin Mepazin Amitriptilin Hepatite Iproniazid Izoniazid Imipramin 6-Mercaptopurin Carc inogenez (la animale de experien) Aflatoxina B1 Alcaloizii pirolizidinici Cycasin S afrol Dimetilnitrozamin Ciclohexilamid Tetraciclin Paracetamol Mitomicin Puromicin Acid tan ic Imipramin Diazepam Metandrolon Mestranol Estradiol Metoxifluoran Papaverin Feni lbutazon Colchicin Fosfor Beriliu Alcool etilic Galactozamin Aflatoxin Alcaloizi pirolizidinici Acid valproic Carbazon Clorotiazid Metimazol Sulfanilamid Faloidin Halotan Zoxazolamin Ind ometacin Metildopa Dimetilbenzantracen Dialchil nitrozamine Bifenili policlorurai Clorur de vinil Acetilaminofluoren Uretan B. Leziuni colestatice COLESTAZA este rezultatul suprimrii sau ntreruperii fluxulu i biliar, ce poate avea cauze hepatice sau extrahepatice: Inflamarea sau blocare a canalelor biliare, care conduc la reinerea srurilor biliare i la acumularea bilir ubinei, fapt ce poate produce icter
202 TOXICOLOGIE GENERAL Modificarea permeabilitii membranei hepatocitelor sau a canaliculelor biliare Diag nosticul biochimic este uor de realizat. C. Hepatopatii cronice 1. HEPATITE CRONI CE ACTIVE Acestea se caracterizeaz printr-o inflamaie extins n zona portal i periporta l, cu infiltraii de limfocite i celule plasmatice, asociat adesea cu o necroz unicelu lar. Sindromul apare n general dac, dup producerea unei leziuni hepatice, se continu tratamentul cu aceste medicamente. 2. FOSFOLIPIDOZA Fosfolipidoza se caracterize az prin prezena unor hepatocite umflate, spumoase. Apare numai dup administrare pre lungit i poate evolua la ciroz. 3. CIROZA Ciroza este o boal progresiv care se caract erizeaz prin depunerea de colagen n ntreg ficatul. Arhitectura hepatic normal este tr ansformat n noduli hiperplastici, cu structur anormal. Acumularea de material fibros determin modificri severe ale circulaiei sanguine i ale proceselor metabolice i de d etoxifiere normale. Aceast situaie poate la rndul ei antrena leziuni suplimentare, putndu-se ajunge la insuficien renal. Ciroza nu este reversibil i are un prognostic de supravieuire foarte redus. Rezult de obicei n urma expunerii cronice la substane ch imice, printre care: etanolul, arsenul, alcaloizii pirolizidinici, vitamina A. 4 . TUMORI Adenoamele hepatocelulare sunt tumori benigne, care au fost asociate cu utilizarea contraceptivelor orale. Riscul este minim, dar poate crete cu creterea duratei de utilizare (peste 5 ani) i cu doza administrat. Carcinomul hepatocelula r este forma tipic de tumoare hepatic primar, dei mai pot fi observate i angiosarcom, carcinom glandular sau carcinom nedifereniat al celulelor hepatice. Se caracteri zeaz printr-o mare capacitate de a produce metastaze. Substane care pot induce ast fel de cancere, identificate n principal la animale de experien, sunt prezentate n T abelul VII.6.
PATOLOGIA TOXIC A RINICHIULUI Rinichiul este un organ extrem de complex, att din p unct de vedere anatomic ct i fiziologic. Funcia primar a rinichiului este excreia pro duilor de degradare, dar el are un rol important i n reglarea homeostaziei organism ului, n reglarea volumului lichidului extracelular i a balanei electrolitice. Alte funcii se refer la formarea hormonilor care influeneaz funciile metabolice, cum ar fi renina, implicat n producerea angiotensinei i a aldosteronului, precum i a unor pro staglandine. Substanele toxice renale pot afecta toate aceste funcii. Susceptibili tatea rinichiului la aciunea substanelor toxice Aceasta poate fi atribuit, cel puin parial, trsturilor fiziologice i anatomice unice ale acestui organ: Dei rinichiul con stituie doar aproximativ 0,5% din masa corporal, el primete ntre 20 i 25% din fluxul cardiac, ceea ce face ca orice substan din circulaia sistemic s ajung n acest organ antitate relativ mare. Procesele care intervin n concentrarea urinei servesc i la concentrarea potenialelor substane toxice n lichidul tubular, astfel nct concentraii p lasmatice netoxice pot conduce la concentraii renale toxice. Concentrarea progres iv a substanelor toxice n nefron poate determina precipitarea n lumen a compuilor rel ativ insolubili, producnd insuficien renal acut ca urmare a obstruciei tubulare. Exis ena unor sisteme de transport activ la nivelul celor trei segmente ale tubului re nal poate contribui la acumularea substanelor toxice. Astfel, la nivel renal exis t dou sisteme de transport al anionilor: transportorul anionilor organici 1 (OAT1) , care este specific pentru rinichi, i transportorul anionilor organici 3 (OAT3), care se ntlnete att n rinichi, ct i n ficat i creier, precum i dou sisteme de tra cationilor: transportorul cationilor organici 1 (OCT1), regsit n rinichi i ficat, i transportorul cationilor organici 2 (OCT2), specific rinichiului. OAT1 a fost i mplicat n acumularea la nivel renal a unor substane nefrotoxice cum ar fi antibiot icul cefalosporinic cefaloridina, sau a micotoxinei ochratoxina A, n transportul acesteia din urm intervenind i OAT3. Deoarece majoritatea nefrotoxinelor sunt comp ui hidrofili care ajung n rinichi sau ca substane printe, sau dup metabolizare n ficat , relaia ficat-rinichi trebuie luat ntotdeauna n considerare n cazul nefrotoxicitii (F g.7.9.). Posibilitatea bioactivrii compuilor exogeni la nivel renal, datorit prezene i unor sisteme de metabolizare a xenobioticelor, dei n concentraii mai reduse dect n ficat. Datorit instabilitii unor metabolii reactivi, capabili s se lege covalent de m acromoleculele tisulare din proximitatea locului de
activare, este posibil ca formarea lor s aib loc mai degrab la nivel renal dect hepa tic. Deoarece rinichiul se afl sub controlul sistemului nervos simpatic, substanel e care acioneaz direct asupra nervilor simpatici pot modifica rezistena vascular la nivel renal sau secreia de renin, afectnd funcia renal. i rinichiul, ca i ficatul de a tfel, prezint o capacitate remarcabil de regenerare. Fig.7.9. Relaia hepato-renal ntre principalii transportori prin mecanism activ Mecanismele fiziopatologice ale proceselor nefrotoxice Dei substanele toxice pot l eza oricare parte a nefronului, ele afecteaz de obicei segmentul cel mai activ di n punct de vedere metabolic, i anume tubii renali. Se ntlnesc ns i leziuni la nivel gl omerular. Leziunile se produc de obicei prin: - 1) contact de tip caustic cu per eii diferitelor segmente ale nefronului, care determin alterarea permeabilitii, cons ecina fiind ieirea proteinelor i a hematiilor sau reducerea procesului de filtrare ca urmare a formrii unor zone sclerotice de esut cicatrial - 2) mecanisme obstruct ive, ca urmare a depunerii substanei toxice, a metaboliilor sau a unui imunocomple x n nefron sau n uretere; - 3) alterarea proceselor enzimatice locale implicate n m etabolizare sau n secreia sau reabsorbia activ.
Principalele sindroame toxice renale (Fig. 7.10.) 1. INSUFICIENA RENAL ACUT Insufic iena renal acut este una din cele mai frecvente manifestri ale lezrii nefrotoxice. Ea se caracterizeaz prin deteriorarea brusc a funciei renale, cu incapacitatea rinich iului de a menine balana metabolic. Se poate datora urmtorilor factori: - 1. Insufic ienei acute pre-renale, cum ar fi pierderea sngelui sau lichidelor, ocului sau insu ficienei cardiace congestive - 2. Necrozei acute tubulare, care este fenomenul ne frotoxic cel mai frecvent i este asociat cu o necroz patologic, localizat de obicei l a nivelul tubilor proximali. Ea se poate datora lezrii toxice directe, lezrii isch emice consecutive hipoperfuziei renale sau pigmenturiei (mioglobinurie datorit ra bdomiolizei sau hemoglobinurie ca urmare a hemolizei). Toxicitatea direct este ca uza a aproximativ 35% din cazurile de necroz tubular. Funcia renal se deterioreaz rap id, aprnd azotemie. Evoluia este n general trifazic, cu o faz de iniiere ca urmare a e punerii la toxic, cnd se produc modificri importante ale funciei renale, urmat de fa za de stare, caracterizat prin deprecierea continu a funciei renale, i n final, dac le ziunea nu a fost prea sever, de faza de recuperare, nsoit de proliferare celular. - 3 . Obstruciei tractului urinar ca urmare a cristaluriei, cum este cazul oxalatului de calciu depus n intoxicaia cu etilenglicol - 4. Nefritei interstiiale acute, car e are similitudini clinice cu necroza tubular acut, dar care se caracterizeaz print r-un infiltrat celular ce separ structurile tubulare. Majoritatea nefritelor inte rstiiale acute sunt cauza hipersensibilitii i pot fi nsoite de reacii alergice sistemi e, cum ar fi febr, eritem sau eozinofilie. Cei mai muli pacieni prezint hematurie i l eucociturie. - 5. Vasculitelor acute, care de obicei sunt tot de natur alergic. 2. INSUFICIENA RENAL CRONIC Insuficiena renal cronic este definit ca orice boal care de min scderea progresiv a funciei renale pe o perioad lung de timp. Cauzele insuficienei renale cronice pot fi: - 1. Nefrita interstiial cronic. Aceasta implic distrugerea t ubilor renali ntr-o perioad lung de timp, fiind nsoit de atrofie tubular, fibroz i u iltrat celular variabil, uneori asociat cu necroza papilar. Tubii renali nu se pot adapta la modificarea funciei renale i se produc tulburri metabolice,
206 TOXICOLOGIE GENERAL Arteriola aferenta Glomerul Parenteral Amfotericina Antihipertensive Ciclosporin e Diuretice AINS Vasculite (hipersensibilitate) Amfetamine Peniciline Sulfamide AINS Nefrita interstitiala acuta Antibacteriene beta-lactamice rifampicina vanco micina sulfamide AINS Alopurinol Tub proximal Arteriola eferenta Sindrom nefrotic Metale (Au, Hg) AINS Penicilamina Necroza tu bulara acuta (proximala) Metale (As, Bi, Cr, Hg, U) Aminoglicozide Glicoli Anest ezice fluorurate Substante de contrast Pigmenti Citostatice A N S A L U I H E N L E Necroza tubulara acuta (distala) Amfotericina Glicoli Cisplatin Nefrita interstitiala cronica Combinatii de analgezice Metale (Pb, Cd, Be, Li, G e) Ciclosporine Nitrozuree Tub distal C A N A L C O L E C T O R Obstructie Anticolinergice Bromcriptina Ergotamina Fluorochinolone Metotrexat Su lfamide Aciclovir Fig.7.10. Procesele nefrotoxice majore i segmentul din nefron implicat
PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 207 cum ar fi acidoza metabolic hipercloric, depleia de sodiu, sau hiperkalemia n faza d e debut. Fiind lezate celulele ce secret eritropoetina, apare anemia. Se observ pr oteinurie moderat. - 2. Necroza papilar - 3. Glomeruloscleroza cronic 3. SINDROMUL NEFROTIC Sindromul nefrotic se caracterizeaz prin proteinurie masiv (mai mult de 3 g/zi la adult), hipoalbuminemie, edem i hiperlipidemie. Mecanismul const n lezarea barierei glomerulare care n mod normal mpiedic trecerea acestor macromolecule din lumenul capilar n urin. Leziunile glomerulare pot progresa la insuficien renal dac pro cesul patologic continu. Substanele toxice induc acest sindrom prin eliberarea n sng e de antigeni mascai sau prin dereglarea balanei imunitare. PATOLOGIA TOXIC A SNGELU I I A MDUVEI HEMATOFORMATOARE Substanele toxice pot aciona asupra sngelui prin: Afect area mduvei osoase hematoformatoare Afectarea elementelor figurate din sngele circ ulant Ambele procese. A. Afectarea hematopoezei Datorit timpului de via redus al ce lulelor sanguine, la nivelul mduvei osoase are loc un proces intens de producere a celulelor, care este foarte sensibil la aciunea substanelor toxice. Proliferarea celulelor n mduva osoas poate fi afectat de deficiene nutriionale, de factori imunolo gici, sau de efecte directe ale substanelor toxice. Rezultatul poate fi : - o pro ducie anormal a elementelor figurate = displazie - o producie sczut = hipoplazie - in hibarea complet a produciei = aplazie sau pancitopenie - producia unor celule malig ne, datorit modificrilor ADN. Uneori sunt afectate toate liniile celulare, alteori este afectat una singur.
1. INHIBAREA HEMATOPOEZEI Inhibarea hematopoezei are drept rezultat reducerea nu mrului celulelor sanguine circulante, cel mai adesea ca urmare a incapacitii celule lor precursoare din mduv de a produce elemente mature. 1. 1. Anemia aplastic Anemia aplastic este definit drept sindromul de pancitopenie (anemie, leucopenie, trombo citopenie), determinat de hipoplazia mduvei hematoformatoare, n care celulele hemat opoetice normale sunt nlocuite de celule adipoase. n mod normal, nici n sngele perif eric, nici n mduv nu se regsesc celule anormale. Substane care induc anemie aplastic s unt: cloramfenicolul, fenilbutazona, srurile de aur, benzenul. Alte substane care au fost corelate cu apariia acestei afeciuni sunt: antitiroidienele, unele anticon vulsivante (difenilhidantoin, trimetadon), sulfamidele, antimalaricele (mepacrin), antidiabeticele (clorpropamid, tolbutamid), lindanul, toluenul. 1.2. Aplazia he matiilor se caracterizeaz prin anemie i este observat consecutiv unor infecii virale , n special cu membri ai familiei parvovirusurilor, dar i dup administrarea unor me dicamente i substane chimice. Patogeneza bolii nu este cunoscut. 1.3. Aplazia linie i albe produce n general o reducere semnificativ a numrului granulocitelor, nsoit de c reterea sensibilitii la infecii. 1.4.Absena megacariopoezei conduce la trombocitopeni e nsoit de tendin crescut de apariie a hemoragiilor cu diferite localizri: piele, rin i, retin, creier. 2. BOLI MALIGNE ALE SNGELUI 2.1. Leucemia acut se caracterizeaz pr intr-o acumulare de celule medulare tinere (mieloblati, promielocite, monoblati, l imfoblati) la nivelul mduvei hematoformatoare i de obicei i n snge sau chiar n alte or ane. Acestea provin din mutaia unei singure celule tinere. Proliferarea celulelor leucemice n mduv suprim hematopoeza normal, simptomele care se observ fiind: anemia, sensibilitatea crescut la infecii, creterea tendinei de producere a hemoragiilor. n a bsena unui tratament corespunztor, decesul poate surveni n cteva sptmni. 2.2. Leucemia cronic apare de obicei la o vrst mai trzie i pacienii pot supravieui mai mult de 10 an fr tratament. Este aproape invariabil fatal, deoarece se transform n leucemie acut.
PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 209 2.3. Limfoamele maligne constau ntr-o proliferare a celulelor limfatice n nodulii limfatici sau n esutul limfatic extranodal. Primele semne ale bolii sunt inflamare a de obicei nedureroas a nodulilor limfatici periferici i boala poate evolua rapid sau poate rmne asimptomatic perioade lungi de timp. Limfoamele maligne pot disemin a n aproape toate organele, iar exemple de astfel boli sunt: boala Hodgkin, mielo amele multiple, limfoamele nonHodgkin. Substane care produc boli maligne ale sngel ui sunt: benzenul, azbestul, oxidul de etilen, metalele grele, stirenul, clorofe nolii, clorura de vinil, citostaticele, acestea din urm n special la asociere cu r adioterapia. B. Afectarea sngelui periferic Celulele cele mai afectate din sngele periferic sunt hematiile. Substanele toxice pot produce distrugerea rapid a celule lor din circulaie prin hemoliz, sau pierderea funciei de transport al oxigenului pr in aciune asupra hemoglobinei. 1. HEMOLIZA const n distrugerea rapid a hematiilor di n circulaie i poate fi intravascular sau extravascular. Ea se poate produce datorit: - formarii unei hemoglobine anormale - formarii unor hematii cu structur anormal a membranei - deficienei enzimelor glicolitice - legrii antigenului de membrana eri trocitar urmat de fixarea complementului i reacia cu anticorpii, prin intermediul co mplexelor imune sau datorit producerii de autoanticorpi - lezrii fizice sau chimic e a membranei hematiilor prin mecanism oxidativ. Substane care pot induce anemie hemolitic prin mecanisme neimunitare sunt: hidrogenul arseniat, sulfatul de cupru , plumbul, veninurile de arpe sau de pianjeni. Deficitul de glucozo-6-fosfat dehid rogenaz joac de asemenea un rol important n producerea anemiilor hemolitice. 2. ACIU NE ASUPRA HEMOGLOBINEI Aceasta se poate produce prin: - transformarea hemoglobin ei n compui care nu mai pot transporta oxigenul: carboxihemoglobin (CO), cianhemogl obin (HCN), methemoglobin (oxidani), sulfhemoglobin (H2 S), sau descompunerea hemogl obinei sub aciunea acizilor - perturbarea sintezei hemului de ctre substane toxice cum ar fi plumbul, care produce anemie saturnin.
PATOLOGIA TOXIC A PIELII Pielea, care acoper aproape n ntregime corpul uman i cel al animalelor, este expus la numeroase substane chimice cum sunt: produsele cosmetice , produsele menajere, medicamentele de uz topic, poluanii industriali. Leziunile la nivelul pielii apar n urma expunerii cutanate la substana toxic, sau sunt efecte ce apar consecutiv ptrunderii substanei toxice pe o alt cale. Majoritatea compuilor acioneaz numai asupra pielii, dar unii pot s afecteze i structurile anexe: prul, gla ndele sebacee, glandele sudoripare. Principalele leziuni induse de substanele tox ice la nivelul pielii sunt: 1. IRITAIA PRIMAR Iritaia primar const dintr-un rspuns inf lamator al pielii, cu caracter local i reversibil, ce apare n urma contactului cu o substan chimic care are una din urmtoarele caracteristici: - produce un pH diferit de cel fiziologic - are aciune oxidant - are aciune deshidratant - are aciune degres ant Astfel de compui sunt acizii i bazele caustice, solvenii i detergenii. Iritaia se roduce la locul de contact, gravitatea fiind variabil, de la hiperemie, edem sau apariia de vezicule, pn la ulceraie. 2. COROZIUNEA Coroziunea const din dezintegrarea sau alterarea ireversibil a pielii n regiunea de contact cu substana toxic, producnd u-se ulcere, necroz i cicatrici. Substanele incriminate sunt aceleai ca i n cazul irit aiei primare, dar se gsesc n concentraii mai mari i timpul de contact este mai lung. 3. DERMATITELE ALERGICE Aceste leziuni se produc printr-un proces imun n care sub stana toxic acioneaz ca un antigen sau o hapten. Consecina este apariia unei reacii l ocul de contact (eritem, eczem), sau a unei urticarii generalizate. Dermatitele a lergice de contact sunt diagnosticate n aproximativ 25% din bolile de piele profe sionale, iar mecanismul de producere implic o reacie imun de tip IV. Substane care p ot produce astfel de reacii sunt: neomicina, antihistaminicele, anestezicele loca le (benzocaina), antisepticele (mertiolat)
aplicate local, unele vegetale, compui metalici (nichel, beriliu), colorani, cosme tice, produse industriale. 4. URTICARIA Urticaria este o reacie n general local, ca re apare la cteva minute sau ore de la contactul cu pielea a anumitor substane chi mice i care produce hiperemie i plac urticarian ce dispare de obicei dup 24 de ore. E a se poate explica printr-un mecanism imun sau nu. Cnd reacia este mediat de un mec anism imunologic, leziunea poate fi localizat sau situat i n alte zone, i poate fi nso t de simptome respiratorii sau gastrointestinale i chiar de anafilaxie. Substane ca re pot determina apariia urticariei sunt: animale i plante (unii peti, usturoiul, l atexul de cauciuc, lichenii, henna), unele alimente (ou, nuci, fructe de mare), m etale (clorura de cobalt, nichelul, cuprul), balsamul de Peru, salicilatul de me til, esterii acidului nicotinic, acidul benzoic, formaldehida, terebentina, aspi rina, unele antibiotice. 5. LUPUSUL ERITEMATOS DE ORIGINE TOXIC Este o boal consid erat autoimun, care se manifest sub forma unor plci eritematoase localizate cu predi lecie pe obraji, ce au aspectul de fluture sau de liliac. 6. REACII TOXICE INDUSE DE LUMIN Aceste reacii implic expunerea la lumin i se manifest la nivel cutanat, n urm ptrunderii pe o alt cale sau a aplicrii topice a substanei toxice. Dup mecanismul pr in care se produc, pot fi de dou tipuri: fotoalergie sau fototoxicitate. 6.1. Fot otoxicitatea este mai frecvent ntlnit. Substana toxic, n urma absorbiei de radiaii UV enereaz specii reactive de oxigen, care la rndul lor declaneaz o cascad de reacii ce i mplic activarea protein kinazei C i a tirozin kinazei, apoi a ciclooxigenazei i n fi nal producerea de prostaglandine care determin apariia unui proces inflamator la n ivelul pielii. Reaciile cutanate care se observ sunt eritemul tardiv, urmat de hip erpigmentare i de descuamare. Substane care acioneaz n acest mod sunt: chinolonele, c lorotiazida, fenotiazinele, unele sulfamide, derivaii acidului aminobenzoic. 6.2. Fotoalergia presupune transformarea substanei toxice n prezena luminii ntr-un antig en sau o hapten. Clinic se observ uneori apariia imediat a urticariei, n timp ce n alt e cazuri apar papule sau eczeme dup o perioad de laten.
212 TOXICOLOGIE GENERAL Substane incriminate sunt : clorpromazina, prometazina, clorpropamidul, sulfanila mida, unele tiazide. Se pare c expunerea concomitent la radiaii UV poate favoriza i apariia unor cancere cutanate n cazul antibioticelor chinolonice sau a psoralenulu i. 7. CANCERE CUTANATE Acestea pot fi induse de substane de tipul gudroanelor, de rivailor de creozot, arsenului, hidrocarburilor aromatice policiclice. 8. EFECTE ASUPRA STRUCTURILOR ANEXE ALE PIELII 8.1. Efectele asupra prului, constau n pierde rea acestuia (alopecie) i sunt determinate de citostatice, arsen, hormoni androge ni, antitiroidiene, captopril, carbamazepin, cimetidin, clorochin, hexaclorobenzen , sruri de aur, plumb, mercur, tiocianai, acid valproic, unele AINS. 8.2. Efectele asupra glandelor sebacee constau n general dintr-o cretere a capacitii lor de a sec reta sebumul, ceea ce conduce la apariia acneei. Substanele cele mai frecvent impl icate sunt hidrocarburile clorurate, care produc cloroacnee dup contact sau n urma expunerii sistemice.
BIBLIOGRAFIE 1. ANDERSEN H.R., NIELSEN J.B., GRANDJEAN P.: Toxicologic evidence of developmen tal neurotoxicity of environmental chemicals, Toxicology, 144:121-127, 2000 AQUI LANTE C.L., LETRENT S.P., POLLACK G.M., BROUWER K.L.R.: Increased brain P-glycop rotein in morphine tolerant rats, Life Sciences, 66(4):47-51, 2000 BALLANTYNE B. , MARRS T., TURNER P.: General & Applied Toxicology. Abridged Edition, MacMillan Press, London, 1995, p.1-1005 BARTHE L., WOODLEY J., HOUIN G.: Gastrointestinal absorption of drugs: methods and studies, Fundam.Clin.Pharmacol., 13:154-168, 1 999 BAUD F.J.: Pharmacokinetic-pharmacodynamic relationships. How are they usefu l in human toxicology?, Toxicology Letters, 102-103:643-648, 1998 BHATNAGAR V.K. , TALASKA G.: Carcinogen exposure and effect biomarkers, Toxicology letters, 108 :107-116, 1999 BIGAZZI P.E.: Autoimmunity caused by xenobiotics, Toxicology, 119 :1-21, 1997 BOOBIS A.R.: Interindividual variability in metabolic activation in humans in vivo, Environmental Toxicology and Pharmacology, 2:161-163, 1996 BORM P.J.A., DRISCOLL K.: Particles, inflammation and respiratory tract carcinogenesi s, Toxicology Letters, 88:109-113, 1996 BOUNIAS M.: Trait de toxicologie gnrale, Sp ringer-Verlag France, 1998, 777p. BURCHELL B., SOARS M., MONAGHAN G., CASSIDY A. , SMITH D., ETHELL B.: Drug-mediated toxicity caused by genetic deficiency of UD P-glucuronosyltransferases, Toxicology Letters, 112-113:333-340, 2000 CALABRESE E.J.: Toxicological consequences of multiple chemical interactions: a primer, To xicology, 105:121-135, 1995 COLLINS J.M.: Inter-species differences in drug prop erties, Chemico-Biological Interactions, 134:237-242, 2001 COMBES R.D.: The use of structure-activity relationships and markers of cell toxicity to detect non-g enotoxic carcinogens, Toxicology in Vitro, 14:387-399, 2000 COSTA L.G., GUIZZETT I M., LU H., BORDI F., VITALONE A., TITA B., PALMERY M., VALERI P., SILVESTRINI B.: Intracellular signal transduction pathways as targets for neurotoxicants, To xicology, 160:19-26, 2001 COSTA L.G.: Biochemical and molecular neurotoxicology: relevance to biomarker development, neurotoxicity testing and risk assessment, Toxicology Letters, 102103:417-421, 1998 COTRAU M., POPA L., STAN T., PREDA N., KINCSES-AJTAY M.: Toxicologie, Editura Didactica si Pedagogica, Bucuresti, 1991, 63 p. D'ARCY P.F., MCELNAY J.C., WELLING P.G.: Mechanisms of Drug Interactions, S pringer-Verlag, Berlin, 1996, 363p. D'CRUZ D.: Autoimmune diseases associated with drugs, chemicals and environmental factors, Toxicology Letters, 112-113:421-432 , 2000 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19.
214 TOXICOLOGIE GENERAL 20. DALY A.K., FAIRBROTHER K.S., SMART J.: Recent advance s in understanding the molecular basis of polymorphism in genes encoding cytochr ome P450 enzymes, Toxicology Letters, 102-103:143-147, 1998 21. EMMENDOERFFER A. , HECHT M., BOEKER T., MUELLER M., HEINRICH U.: Role of inflammation in chemical -induced lung cancer, Toxicology Letters, 112113:185-191, 2000 22. ENDOU H.: Rec ent advances in molecular mechanisms of nephrotoxicity, Toxicology Letters, 102103:29-33, 1998 23. EYSTER K.M.: Introduction to Signal Transduction, Biochemica l Pharmacology, 55:1927-1938, 1998 24. FONNUM F., LOCK E.A.: Cerebellum as a tar get for toxic substances, Toxicology Letters, 112-113:9-16, 2000 25. FOURNIER E. : Toxicologie, Ellipses, Paris, 1993, 848 p. 26. GANEY P.E., ROTH R.A.: Concurre nt inflammation as a determinant of susceptibility to toxicity from xenobiotic a gents, Toxicology, 169:195-208, 2001 27. GHERSI-EGEA J.F., LEININGER-MULLER B., CECCHELLI R., FENSTERMACHER J.D.: Blood-brain interfaces: relevance to cerebral drug metabolism, Toxicology Letters, 82/83:645-653, 1995 28. GILGUN-SHERKI Y., M ELAMED E., OFFEN D.: Oxidative stress-induced neurodegenerative diseases: the ne ed for antioxidants that penetrate the blood brain barrier, Neuropharmacology, 4 0:959-975, 2001 29. GLATT H., ENGELKE C.E.H., PABEL U., TEUBNER W., JONES A.L., COUGHTRIE M.W.H., ANDRAE U., FALANY C.N., MEINL W.: Sulfotransferases: genetics and role in toxicology, Toxicology Letters, 112-113:341-348, 2000 30. GLATT H.: Sulfotransferases in the bioactivation of xenobiotics, Chemico-Biological Intera ctions, 129:141-170, 2000 31. GLOOR S.M., WACHTEL M., BOLLINGER M.F., ISHIHARA H ., LANDMANN R., FREI K.: Molecular and cellular permeability control at the bloo d-brain barrier, Brain Research Reviews, 36:258-264, 2001 32. GOLDFRANK L.R., FL OMENBAUM N.E., LEWIN N.A., WEISMAN R.S., HOWLAND M.A., HOFFMAN R.S.: Goldfrank' T oxicologic Emergencies, 6th edition, Appleton&Lange, Stamford, 1998, p.1-513 33. GUSTAFSSON J.-A.: Receptor-mediated toxicity, Toxicology Letters, 82/83:465-470 , 1995 34. HALL A.H.: Computer modeling and computational toxicology in new chem ical and pharmaceutical product development, Toxicology Letters, 102-103:623-626 , 1998 35. HALLIDAY A.J., BARTLETT S.E., COLDITZ P., SMITH M.T: Brain region-spe cific studies of the excitatory behavioral effects of morphin-3-glucuronide, Lif e Sciences, 65(2):225-236, 1999 36. HALSTENSEN T.S.: Why we are not all allergic : basic mechanisms for tolerance development, Environmental Toxicology and Pharm acology, 4:25-31, 1997 37. HARTWIG A.: Carcinogenicity of metal compounds: possi ble role of DNA repair inhibition, Toxicology letters, 102-103:235-239, 1998 38. HASCHEK W.M., ROUSSEAUX C.G.: Handbook of Toxicologic Pathology, Academic Press , San Diego, 1991, 1047p. 39. HEIN D.W.: N-Acetyltransferase genetics and their role in predisposition to aromatic and heterocyclic amine-induced carcinogenesis , Toxicology Letters, 112-113:349-356, 2000
BIBLIOGRAFIE 215 40. HELLEDAY T.: Signal Transduction, Toxicology in Vitro, 12:5 19-522, 1998 41. HODGSON E., LEVI P.: A Textbook of Modern Toxicology, Appleton &Lange, Stamford, 1997, 496 p. 42. HODGSON E., RYU D.-Y., ADAMS N., LEVI P.E.: B iphasic responses in synergistic interactions, Toxicology, 105:211-216, 1995 43. INGELMAN-SUNDBERG M.: Functional consequences of polymorphism of xenobiotic met abolizing enzymes, Toxicology Letters, 102-103:155-160, 1998 44. INGELMAN-SUNDBE RG M.: Genetic variability in susceptibility and response to toxicants, Toxicolo gy Letters, 120:259-268, 2001 45. IONESCU C.: Biotransformarea medicamentelor, E ditura Medicala Universitara Iuliu Hatieaganu Cluj/Napoca, 2001, 171p. 46. JAEGER A., VALE J.A.: Intoxications aigus, Elsevier, Paris, 1999, p.13-61 47. JAMES N.H. , GILL J.H., BRINDLE R., WOODYATT N.J., MACDONALD N., ROLFE M., HASMALL S.C., TU GWOOD J.D., HOLDEN P.R., ROBERTS R.A.: Peroxisome proliferator-activated recepto r (PPAR) alpha-regulated growth responses and their importance to hepatocarcinog enesis, Toxicology Letters, 102-103:91-96, 1998 48. JONES D.P., BROWN L.A.S., ST ERNBERG P.: Variability in glutathione-dependent detoxication in vivo and its re levance to detoxication of chemical mixtures, Toxicology, 105:267-274, 1995 49. KARARLI T.T.: Gastrointestinal absorption of drugs, Critical Reviews in Therapeu tic Drug Carriers Systems, 6(1):39-86, 1989 50. KLAASEN C.D., AMDUR M.O., DOULL J.: Casarett and Doull' Toxicology. The Basic Science of Poisons 5th edition, McG raw-Hill, New York 1996, 1111 p 51. LETRENT S.P., POLLI J.W., HUMPHREYS J.E., PO LLACK G.M., BROUWER K.R., BROUWER K.L.R.: P-Glycoprotein-mediated transport of m orphine in brain capillary endothelial cells, Biochemical Pharmacology, 58:951-9 57, 1999 52. LEWIS D.F.V., DICKINS M.: Factors influencing rates and clearance i n P450mediated reactions: QSAR for substrates of the xenobiotic-metabolizing hep atic microsomal P450s, Toxicology, 170:45-53, 2002 53. LEWIS D.F.V.: On the Reco gnition of Mammalian Microsomal Cytochrome P450 Substrates and Their Characteris tics, Biochemical Pharmacology, 60:293-306, 2000 54. LISON D.: Importance of bio transformation pathways for interpreting biological monitoring of exposure, Toxi cology Letters, 108:91-97, 1999 55. LO E.H., SINGHAL A.B., TORCHILIN V.P., ABBOT T N.J.: Drug delivery to damaged brain, Brain Research Reviews, 38:140-148, 2001 56. LOOMIS T.A., HAYES A.W.: Loomis' Essentials of Toxicology, 4th edition, Acad emic Press, San Diego, 1996, 263 p. 57. LOPACHIN R.M.: Redefining toxic distal a xonopathies, Toxicology Letters, 112113:23-33, 2000 58. LOTTI M.: Mechanisms of toxicity and risk assessment, Toxicology Letters, 77:9-14, 1995 59. LU F.C: Basi c Toxicology, 2nd edition, Hemisphere Publishing Corporation, Washington, 1991, 361 p. 60. LUSTER M.I., SIMEONOVA P.P., GALLUCCI R.M., BRUCCOLERI A., BLAZKA M.E ., YUCESOY B.: Role of inflammation in chemical-induced hepatotoxicity, Toxicolo gy Letters, 120:317-321, 2001
216 TOXICOLOGIE GENERAL 61. MANSON M.M., BENFORD D.J: Factors influencing the car cinogenicity of food chemicals, Toxicology, 134:93-108, 1999 62. MARKS F., MLLERDECKER K., FRSTENBERGER G.: A causal relationship between unscheduled eicosanoid signaling and tumor development: cancer chemoprevention by inhibitors of arachid onic acid metabolism, Toxicology, 153:11-26, 2000 63. MASTERS C.J.: On the Role of the peroxisome in the Metabolism of Drugs and Xenobiotics, Biochemical Pharma cology, 56:667-673, 1998 64. MATES J.M., SANCHES-JIMENEZ F.M.: Role of reactive oxygen species in apoptosis: implications for cancer therapy, International Jour nal of Biochemistry & Cell Biology, 32:157-170, 2000 65. MCCONKEY D.J.: Biochemi cal determinants of apoptosis and necrosis, Toxicology Letters, 99:157-168, 1998 66. MCKIM W.A.: Drugs and Behavior. An introduction to behavioral pharmacology, 4th edition, Prentice-Hall, New Jersey, 2000, p.1-115 67. MEPLAN C., RICHARD MJ, HAINAUT P: Redox signaling and transition metals in the control of the p53 pa thway, Biochemical Pharmacology, 59:25-33, 2000 68. MORETTO A.: Promoters and pr omotion of axonopathies, Toxicology Letters, 112113:17-21, 2000 69. NAKADATE M.: Toxicity prediction of chemicals based on structure-activity relationships, Tox icology Letters, 102-103:627-629, 1998 70. NELSON B.K.: Evidence for Behavioral Teratogenicity in Humans, Journal of Applied Toxicology, 11(1):33-37, 1991 71. N EUBERT R., MERKER H.-J., NEUBERT D.: Developmental model for thalidomide action, Nature, 400:419-420, 1999 72. NIESINK R.J.M., VRIES D., HOLLINGER M.A.: Toxicol ogy. Principles and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1996, 1284 p. 73. OMIEC INSKI C.J., HASSETT C., HOSAGRAHARA V.: Epoxide hydrolasepolymorphism and role i n toxicology, Toxicology Letters, 112-113:365-370, 2000 74. OPPERMANN U.C.T., MA SER E.: Molecular and structural aspects of xenobiotic carbonyl metabolizing enz ymes. Role of reductases and dehydrogenases in xenobiotic phase I reactions, Tox icology, 144:71-81, 2000 75. PALLARDY M., KERDINE S., LEBREC H.: Testing strateg ies in immunotoxicology, Toxicology Letters, 102-103:257-260, 1998 76. PARK B.K. , KITTERINGHAM N.R., POWELL H., PIRMOHAMED M.: Advances in molecular toxicologytowards understanding idiosyncratic drug toxicity, Toxicology, 153:39-60, 2000 7 7. PARK B.K., NAISBITT D.J., GORDON S.F., KITTERINGHAM N.R., PIRMOHAMED M.: Meta bolic activation in drug allergies, Toxicology, 158:11-23, 2001 78. PLOPPER C.G. , BUCKPITT A., EVANS M., VAN WINKLE L., FANUCCHI M., SMILEY-JEWELL S., LAKRITZ J ., WEST J., LAWSON G., PAIGE R., MILLER L., HYDE D.: Factors modulating the epit helial response to toxicants in tracheobronchial airways, Toxicology, 160:173-18 0, 2001 79. RAVINDRANATH V., BHAMRE S., BHAGWAT S.V., ANANDATHEERTHAVARADA H.K., SHANKAR S.K., TIRUMALAI P.S.: Xenobiotic metabolism in brain, Toxicology Letter s, 82/83:633-638, 1995
BIBLIOGRAFIE 217 80. RAVINDRANATH V.: Metabolism of Xenobiotics in the Central N ervous System, Biochemical Pharmacology, 56:547-551, 1998 81. RENWICK A.G.: Inte r-ethnic differences in xenobiotic metabolism, Environmental Toxicology and Phar macology, 2:165-170, 1996 82. REPETTO M.: Toxicologia avanzada, Diaz de Santos, Madrid, 1995, p.87-116 83. REPETTO M.: Toxicologia fundamental, Segunda edicin, E ditorial cientifico-medica, Barcelona 1988, 407 p 84. RITTER J.K.: Roles of gluc uronidation and UDP-glucuronosyltransferases in xenobiotic bioactivation reactio ns, Chemico-Biological Interactions, 129:171-193, 2000 85. ROBERTS R.A., JAMES N .H., HASMALL S.C., HOLDEN P.R., LAMBE K., MACDONALD N., WEST D., WOODYATT N.J., WHITCOME D.: Apoptosis and proliferation in nongenotoxic carcinogenesis: species differences and role of PPARa, Toxicology Letters, 112-113:49-57, 2000 86. ROZMAN K.K., DOULL J.: Dose and time as variables in toxicity, Toxicology, 144:169-178 , 2000 87. SCHLEDE E., MISCHKE U., ROLL R., KAYSER D.: A national validation stu dy of the acute-toxic-class method an alternative to the LD50 test, Arch Toxicol , 66:455470, 1992 88. SCHOFIELD P.N., JOYCE J., LAM W.K., GRANDJEAN V., FERGUSON -SMITH A., REIK W., MAHER E.R.: Genomic imprinting and cancer; new paradigms in the genetics of neoplasia, Toxicology Letters, 120:151-160, 2001 89. SEN C.K., R OY S.: Redox control of caspases, Environmental Toxicology and Pharmacology, 10: 215-220, 2001 90. SHIMODA K.: Mechanisms of quinolone phototoxicity, Toxicology Letters, 102103:369-373, 1998 91. SIMMONS J.E.: Chemical mixtures: challenge for toxicology and risk assessment, Toxicology, 105:111-119, 1995 92. SQUADRITO G.L ., PRYOR W.A.: Oxidative chemistry of nitric oxide: the roles of superoxide, per oxynitrite and carbon dioxide, Free Radical Biology & Medicine, 25(4/5):392-403, 1998 93. STEPHENS T.D., BUNDE C.J.W., FILLMORE B.J.: Mechanism of Action in Tha lidomide Teratogenesis, Biochemical Pharmacology, 59:1489-1499, 2000 94. STERN R .S.: Photocarcinogenicity of drugs, Toxicology Letters, 102-103:389-392, 1998 95 . STERN R.S.: Photocarcinogenicity of drugs, Toxicology Letters, 102-103:389-392 , 1998 96. STOPPER H., MLLER S.O.: Micronuclei as a Biological Endpoint for Genot oxicity: A Minireview, Toxicology in Vitro, 11:661-667, 1997 97. THOMAS S., LOWE J.E., KNOWLES R.G., GREEN I.C., GREEN M.H.L.: Factors affecting the DNA damagin g activity of superoxide and nitric oxide, Mutation Research, 402:77-84, 1998 98 . TIMBRELL J.A.: Principles of Biochemical Toxicology, 2nd edition, Taylor&Franc is, London, 1991, 415 p. 99. TROSKO J.E., CHANG C-C., UPHAM B., WILSON M.: Epige netic toxicology as toxicant-induced changes in intracellular signaling leading to altered gap junctional intercellular communication, Toxicology Letters, 102-1 03:71-78, 1998 100. VAN BLADEREN P.J.: Glutathione conjugation as a bioactivatio n reaction, ChemicoBiological Interactions, 129:61-76, 2000
218 TOXICOLOGIE GENERAL 101. VASILIOU V., PAPPA A., PETERSEN D.R.: Role of aldehy de dehydrogenases in endogenous and xenobiotic metabolism, Chemico-Biological In teractions, 129:1-19, 2000 102. VERDIER F., PATRIARCA C., DESCOTES J.: Autoantib odies in conventional toxicity testing, Toxicology, 119:51-58, 1997 103. VIALA A .: Elments de Toxicologie, Tec&Doc Lavoisier, Paris, 1998, p.1-141 104. WALKER J. R., KING M., IZZO M., KOOB G.F., PASTERNAK G.W.: Antagonism of heroin and morphi ne self administration in rats by morphine-6bglucuronide antagonist 3-O-methyl na ltrexone, European Journal of Pharmacology, 383:115-119, 1999 105. WALKER R.: Mo dulation of toxicity by dietary and environmental factors, Environmental Toxicol ogy and Pharmacology, 2:181-188, 1996 106. WEBSTER W.S., FREEMAN J.A.D.: Is this drug safe in pregnancy, Reproductive Toxicology, 15:619-629, 2001 107. WELTZIEN H.U., MOULON C., MARTIN S., PADOVAN E., HARTMANN U., KOHLER J.: T cell immune r esponses to haptens. Structural models for allergic and autoimmune reactions, To xicology, 107:141-151, 1996 108. WENNING R.: Threshold values in toxicology- use ful or not?, Forensic Science International, 113:323-330, 2000 109. WERMUTH C.G. : The Practice of Medicinal Chemistry, Academic Press, London, 1996, p. 615-670 110. WILLIAMS D.A., LEMKE T.L.: Foye' Principles of Medicinal Chemistry, Lippinco tt Williams&Wilkins, 2002, p.174-233 111. WILLIAMS G.M., ARUOMA O.I.: Molecular Drug metabolism and Toxicology, OICA International, London, 2000, 277 p. 112. WI LLIAMS G.M.: Mechanism of chemical carcinogenesis and application to human cance r risk assessment, Toxicology, 166:3-10, 2001 113. XXX: Environmental Health Cri teria 212: Principles and methods for Assessing Allergic Hypersensitization Asso ciated with Exposure to Chemicals, World Health Organization, Geneva, 1999 114. YANG R.S.H.: Some current approaches for studying combination toxicology in chem ical mixtures, Food and Chemical Toxicology, 34:1037-1044, 1996 115. ZIMNIAK P., PIKULA S., BANDOROWICZ-PIKULA J., AWASTHI Y.C.: Mechanisms for xenobiotic trans port in biological membranes, Toxicology Letters, 106:107-118, 1999

Toxicologie Generala Corectata Format Final

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Toxicologie Generala Corectata Format Final

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Felicia Loghin TOXICOLOGIE GENERAL Editura Medical Universitar Iuliu Haieganu Cluj-Napoca 2002

SUBSTANE TOXICE I TIPURI DE INTOXICAII 11

SUBSTANE TOXICE I TIPURI DE INTOXICAII 13

SUBSTANE TOXICE I TIPURI DE INTOXICAII 17

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 63 RCHO + NAD+ RCOOH + NADH + H+

NOIUNI DE TOXICOCINETIC 85 Gly R S Cys g Glu R S C C NH3 b-liaza + COO

RELAII DOZ-EFECT N TOXICOLOGIE 89

RELAII DOZ-EFECT N TOXICOLOGIE 95

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 99

102 TOXICOLOGIE GENERAL

104 TOXICOLOGIE GENERAL

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 105

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 109

110 TOXICOLOGIE GENERAL

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 111

112 TOXICOLOGIE GENERAL

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 113

114 TOXICOLOGIE GENERAL

116 TOXICOLOGIE GENERAL

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 117

118 TOXICOLOGIE GENERAL

FACTORII CARE INFLUENEAZ TOXICITATEA 121

122 TOXICOLOGIE GENERAL

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 125

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 127

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 129

130 TOXICOLOGIE GENERAL Fig.6.3. Reglarea redox a activitii caspazei inductibile

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 137 NO2 + NO N 2 O3

138 TOXICOLOGIE GENERAL

140 TOXICOLOGIE GENERAL

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 141

144 TOXICOLOGIE GENERAL

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 147

148 TOXICOLOGIE GENERAL

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 149

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 153

158 TOXICOLOGIE GENERAL

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 161

MECANISME DE ACIUNE TOXIC 163

166 TOXICOLOGIE GENERAL

172 TOXICOLOGIE GENERAL

174 TOXICOLOGIE GENERAL

180 TOXICOLOGIE GENERAL

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 183

186 TOXICOLOGIE GENERAL

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 187

192 TOXICOLOGIE GENERAL

196 TOXICOLOGIE GENERAL

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 197

198 TOXICOLOGIE GENERAL

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 199

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 203

204 TOXICOLOGIE GENERAL

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 205

208 TOXICOLOGIE GENERAL

210 TOXICOLOGIE GENERAL

PROCESE PATOLOGICE DE ORIGINE TOXIC 211

S-ar putea să vă placă și