1.

1 OBIECTUL DE STUDII AL MICROBIOLOGIEII

Din cele mai vechi timpuri oamenii au fost preocupai de cunoaterea organismelor ce i nconjoar din curiozitate sau pentru relaiile stabilite cu acestea, unele fiind valorificate, iar altele, n primul rnd animalele, fiind adeseori dumani n lupta pentru supravieuire. Cunotinele iniiale empirice au fost ulterior sistematizate i vieuitoarele au fost ncadrate ntr-o riguroas structur taxonomic n cele dou mari regnuri: plante i animale. Pentru plantele i animalele macroscopice taxonomia i poziia sistematic erau relativ clare nc de pe timpurile lui Linne, care a introdus i nomenclatura binar. ns n afara de organismele macroscopice oamenii ntotdeauna au fost nconjurai de organisme invizibile. Aceste organisme aveau un impact vadit asupra veii omului, oameii foloseau produsele activitii lor vitale, sufereau cnd aceste organisme le provocau boli sau le alterau rezervele de produse Odat cu descoperirea microscopului au putut fi observate un numr mare de organisme invizibile cu ochiul liber. Datorit dimensiunilor reduse ele au fost numite microorganisme i grupeaz astzi specii cu morfologie, poziie sistematic, caracteristici metabolice foarte diferite, precum i entiti corpusculare lipsite de atributele structurale i funcionale ale organizrii celulare. Considernd dimensiunea ca principal element de unitate a vieuitoarelor studiate de tiina numit microbiologie, specialitii includ n aceast disciplin bacteriile, ciupercile microscopice, algele microscopice i protozoarele. Ca obiect de studiu se adaug la acestea i virusurile, alctuite din componentele chimice eseniale pentru organismele vii (proteine i acizi nucleici) dar lipsite de un metabolism propriu i obligate, din acest motiv, la o via parazitar intracelular absolut. ns noiunea microorganisme (obiectul de studiu al microbiologiei) nu are rol taxonomic, i reprezint organisme forte diverse din punct de vedere morfologic i fiziologic, unite doar de dimensiunile mici i ca rezultat de metode de investigaie asemntoare Deci cu toate c tradiional n obiectul de studiu al microbiologiei intr toate organismele microscopice (alge, ciuperci, protozoare, bacterii, virusuri) n cursul de fa noi vom studia doar bacteriile i virusurile care sint obicte de studiu ale subdiviziunilor microbiologiei, bacteriologia i respectiv virusologia, deoarece celelalte grupe de organisme microscopice au fost studiate la cursurile de botanic (algele i ciupercile) i zoologie (protozoarele)

Microbiologia general, ca i botanica i zoologia, este o tiin biologic fundamental. Ea studiaz caracterele generale ale microorganismelor, morfologia, structura, fiziologia, sistematica, ecologia, ereditatea, originea i evoluia lor. Microbiologia studiaz de asemenea relaiile dintre microorganisme, dintre acestea i macroorganisme, producerea bolilor infecioase i cile prin care macroorganismul se apr, utilizarea microorganismelor n biotehnologiile moderne, etc.

1.2 ISTORIA DEZVOLTRII MICROBIOLOGIEII

Una dintre cele mai importante descoperiri din istoria biologiei a fost nregistrat n 1665 cu ajutorul unui microscop relativ grosolan, de ctre englezul, Robert Hooke. Acesta a constatat c unitile structurale cele mai mici ale lumii sunt nite mici cutiue sau celule. Hooke a reuit s vad aceste celule individuale cu ajutorul unui microscop realizat de el, o variant mbuntit a microscopului compus. Descoperirea lui Hook a marcat nceputul teoriei celulare teorie conform creia toate vieuitoarele sunt compuse din celule. Cercetrile ulterioare asupra structurii i funciilor celulelor s-au bazat pe aceast teorie. Microscopul lui Hooke permitea observarea protozoarelor i probabil a bacteriilor. Antony van Leeuwenhoek, (16321723) negustor i cercettor amator, a fost unul dintre primii observatori ai microorganismelor cu ajutorul lentilelor mritoare. ntre 1674-1723 el a scris o serie de lucrri pe care le-a trimis Societii Regale din Londra, descriind animalele pe care le-a observat cu ajutorul propriului microscop simplu, format dintr-o singur lentil. Rezultatele cercetrilor au fost sintetizate n cartea intitulat Tainele naturii descoperite cu ajutorul microscopuluipublicat n 1675. Dup descoperirea lumii invizibile de ctre Leeuwenhoek comunitatea tiinific a nceput s se intereseze de originea acestor vieuitoare. Pn n a doua jumtate al secolului al XVIII muli cercettori i filosofi au crezut c unele forme de via pot aprea spontan din materie moart. Acest ipotez a fost numit ipoteza generaiei spontane. Un oponent serios al teoriei generaiei spontane, fizicianul italian Francesco Redi, a demonstrat n 1668 c viermii de carne nu apar spontan, aa cum se credea n mod curent el a realizat urmtoarea experien: n dou borcane a introdus buci de carne fiart; unul a fost lsat liber, permind ptrunderea mutelor care au depus ou, din care s-au dezvoltat apoi larve. n primul vas asemenea larve nu au aprut.

Anii de glorie a microbiologieii

Cercettorul Louis Pasteur

ara Frana

Descoperirea Introducerea teoriei microbiene a bolilor (1857) Descoperirea fermentaiilor realizate de drojdii (1857) Spulberarea teoriei generaiei spontane (1861) Utilizarea pasteurizrii ca mijloc de sterilizare (1864) Elaborarea tehnicilor de imunizare (1880) Descoperirea lui Streptococus pneumoniae, ca agent al pneumoniei (1880)

Joseph Lister Robert Koch

Anglia Germania

Dezvoltarea tehnicilor de chirurgie aseptic (1867) Demonstrarea originii infecioase a bolilor (1867) Descoperirea lui Bacillus anthracis, agent provocator al boli numit antrax (1877) Obinerea culturilor pure i tehnicilor de colorare (1881) Descoperirea lui Mycobacterium tuberculosis, agentul unei boli mortale la aceea vreme tuberculoza (1882) Descoperirea lui Vibrio cholerae, agentul etiologic al holerei (1883)

Albert Neissler Martinus Beijerinck Ilia Mecinikov Hans Christian Gram Arthur Nicolaiev i Shibasaburo Kitasato Theodor Escherich

Germania

Descoperirea speciei Neisseria gonorrhoeae, agentul etiologic al gonoreei (1879) Descoperirea bacteriilor fixatoare de azot simbionte pe rdcinile plantelor (1880) Descrierea fagocitozei i elaborarea teoriei celulare a imunitii (1884) Dezvoltarea tehnicilor de colorare difereniat a bacteriilor, numite ulterior coloraia Gram (1884)

Olanda

Rusia Danemarca

Germania Japonia

Descoperirea speciei Clostridium tetani, agentul etiologic al tetanosului (1884)

Germania

Descoperirea speciei Escherichia coli, agentul etiologic al diareei i infeciilor urinare (1885)

Richard Petri

Germania

Introducerea plcilor Petri pentru cultivarea microorganismelor pe medii solide (1887) Descoperirea virusului mozaicului tutunului (1892)

Dimitri Ivanovski Serghei Vinogradski Paul Erlich

Rusia

Rusia

Izolarea bacteriilor responsabile de circuitul sulfului (1893)

Germania

A propus teoria imunitii cu ajutorul anticorpilor (1890); A descoperit tratamentul pentru sifilis (1910).

ntr-o variant modificat a acestui experiment, un vas a fost lsat deschis, iar cellalt acoperit doar cu un tifon, permeabil pentru aer dar mpiedicnd ptrunderea mutelor. Efectul a fost similar. Rezultatele obinute de Redi au dat o lovitur serioas adepilor teoriei generaiei spontane, dar unii au continuat s o susin la nivelul organismelor microscopice de tipul celor descoperite de Leeuwenhoek. Acestora le-a rspuns savantul francez Louis Pasteur n 1861 printr-un experiment de referin. Pasteur a umplut un numr de baloane cu mediu de cultur (bulion de carne) i le-a sterilizat prin fierbere. O parte din baloane au rmas deschise i s-au contaminat cu microorganismele prezente n atmosfer, care au degradat mediul de cultur. La baloanele cu gt de lebd, unde depunerea microbilor a fost prevenit de forma lor special, contaminarea nu s-a produs i mediul nutritiv a rmas nealterat. Dup experiena lui Pasteur a urmat o perioad fertil descoperirilor n domeniul microbiologiei. Ea a fost denumit Anii de glorie ai microbiologiei i s-a ntins ntre 1857 i 1914. n cursul acestei perioade progresele rapide s-au datorat descoperirilor realizate de Pasteur i Robert Koch, care au impus microbiologia ca tiin. n aceti ani au fost descoperii agenii a numeroase boli, relaiile dintre microorganisme i boli, precum i rolul imunitii n prevenirea i tratarea acestora. n aceast perioad fertil cercettorii au studiat activitile biochimice ale microorganismelor, au conceput tehnici noi de microscopie i cultur a microorganismelor, au dezvoltat domeniul producerii i utilizrii vaccinurilor (tabelul 1).

Unul din momentele cheie care au dus la descifrarea relaiilor dintre microorganisme i boli s-a derulat atunci cnd Pasteur a fost solicitat s explice ncrirea vinului i berii. Contrar opiniei specialitilor c aerul ar fi responsabil de convertirea zahrului n alcool. Pasteur a artat c acest proces este determinat de activitatea unor microorganisme numite drojdii. Acrirea i degradarea acestora, ce se constat mai trziu, sunt cauzate de alte grupe de microorganisme, respectiv de bacterii. n prezena aerului acestea transform alcoolul din butur n acid acetic. Pentru a rezolva problema degradrii Pasteur a propus nclzirea produselor alcoolice pentru a omor majoritatea bacteriilor. Procesul nu afecteaz evident calitile buturii i se folosete n mod frecvent

pentru a distruge bacteriile duntoare din lapte, ca i din unele buturi alcoolice. Acest proces aprimit denumirea de pasteurizare Prima dovad c bacteriile pot cauza mbolnviri a fost prezentat de Robert Koch n 1876. el a descoperit specia Bacillus anthracis, bacterie care produce antraxul, boal mortal la acea vreme. El a cultivat bacteria pe medii nutritive i apoi a injectat inoculum la animale sntoase. Cnd animalele s-au mbolnvit i au nceput s moar Koch a izolat bacteriile din sngele acestora i le-a comparat cu cele inoculate, constatnd c sunt identice. Paul Erlich, a fost primul care a declanat revoluia chimioterapeutic. n anul 1910, dup testarea a sute de substane, el a gsit un agent chimioterapeutic numit salvarsan, un derivat arsenic eficient mpotriva sifilisului. Dup 1930 cercettorii au obinut numeroase alte medicamente sintetice capabile s omoare microorganismele. Sulfamidele au fost unele dintre cele mai importante grupuri de medicamente descoperite n acest timp. Spre deosebire de sulfamide, antibioticele au fost descoperite ntmpltor de ctre Alexander Fleming, fizician i bacteriolog scoian. El i-a aruncat privirea asupra unor plci coninnd culturi de bacterii, infectate cu ciuperci. Pe una dintre ele a constatat o dezvoltare curioas; n zona infectat, n care a aprut colonia de mucegai, cultura bacterian nu s-a dezvoltat dect pn la o anumit distan. Aceasta demonstra c mucegaiul elimin n mediu o substan inhibant pentru bacterii, numit de ctre Fleming n 1928 penicilin, dup numele speciei excretoare Penicillium notatum. Utilizarea practic a penicilinei pentru combaterea bolilor infecioase a nceput abia n 1940, de atunci declanndu-se i cercetrile intense de descoperire i testare chimic a altor antibiotice. Una dintre consecinele descoperirii i izolrii agenilor patogeni a fost apariia unei noi tiine imunologia. Studiind holera ginilor Pasteur a observat c odat cu mbtrnirea culturii agentul patogen i pierde virulena, respectiv capacitatea de a provoca boala prin inoculare la animalele sntoase. n acelai timp, psrile care au fost infectate cu agenii din culturile mbtrnite devin rezistente i n cazul inoculrii cu ageni patogeni din cultur proaspt. Prin aceste cercetri Pasteur a pus bazele tiinifice ale vaccinrii, domeniu n care marele savant a produs numeroase vaccinuri pentru boli deosebit de periculoase, cum ar fi vaccinul anticrbunos (1881) i vaccinul antirabic (1885). n aceeai perioad (1884) Ilia Mecinikov descoper fagocitoza i pune bazele imunologiei celulare. n anul 1892 Ivanovski a demonstrat c boala numit mozaicul tutunului este produs de un agent patogen invizibil la microscop, care traverseaz filtrele bacteriologice i poate fi transmis de la o plant bolnav la una sntoas. n 1898 Beijerinck confirm filtrabilitatea agentului patogen i descoper c poate fi precipitat cu etanol fr s-i piard puterea infecioas. Intuiia i descoperirile sale l atest pe el ca adevratul ntemeietor al virusologiei. Dezvoltarea ulterioar a virusologiei i n special perfecionarea tehnicilor de lucru au permis purificare virusurilor, determinarea compoziiei chimice i a dimensiunilor lor, cultivarea, izolarea i identificarea diferitelor virusuri patogene pentru plante, animale i om, inclusiv a unor virusuri productoare de tumori maligne.

Istoricul microbiologiei n Romnia.

Victor Babe

Ion cantacuzino

Constantin Levanditi

Fondatorul microbiologiei romneti a fost Victor Babe (1854-1926). Nscut la Viena din prini romni, studiaz medicina la Budapesta i Viena. Lucreaz la Paris, mpreun cu profesorul francez V. Cornil, cu care public n 1885 primul tratat de bacteriologie din lume intitulat Bacteriile i rolul lor n anatomia i histologia patologic. Victor Babe vine n ar n 1886, unde organizeaz un institut de bacteriologie i patologie (astzi Institutul Victor Babe din Bucureti). Paralel funcioneaz i ca profesor la Facultatea de Medicin din Bucureti. El a studiat structura bacilului difteric, a fcut cercetri asupra tuberculozei, pneumoniei. El prepar dup o metod proprie vaccinul antirabic i introduce vaccinarea populaiei mpotriva acestui agent.. Un alt reprezentant de seam al microbiologiei romneti a fost Ion Cantacuzino (1863-1934). A obinut doctoratul n medicin n 1884. lucreaz la Institutul Pasteur din Paris pn n 1901, cnd este numit profesor la Facultatea de Medicin din Bucureti. Ion Cantacuzino a ntemeiat Institutul de microbiologie, parazitologie i epidemiologie din Bucureti, care astzi i poart numele. n cercetrile sale s-a ocupat de vibrionul holeric, a dovedit natura streptococic a scarlatinei, a fcut studii aprofundate asupra tuberculozei i febrei tifoide. A introdus pentru prima dat n Romnia vaccinarea antituberculoas. Constantin Levaditi (1874-1953) a lucrat la nceput la Institutul Pasteur din Paris. De numele lui se leag numeroase descoperiri n domeniul virusologiei, bacteriologiei i imunologiei. Face numeroase studii asupra sifilisului i pune bazele tratamentului acestei boli. tefan S. Nicolau (1869-1967), elev i colaborator al lui Levaditi, a fost creatorul colii romneti de inframicrobiologie i a institutului cu acelai nume. S-a remarcat prin studii efectuate asupra bolilor produse de virusuri i ecologia agenilor virali.

1.3 RAMURILE I IMPORTANA MICROBIOLOGIEI.

Microbiologia s-a diversificat odat cu acumularea cunotinelor proprii i din domeniile conexe. Posibilitile inepuizabile ale microorganismelor a revoluionat, de asemenea, industrii tradiionale i au creat noi tehnologii. Progresele obinute prin nlocuirea total sau parial a unor tehnologii i procese fizice sau chimice cu tehnologii i procese microbiene definesc aria extrem de larg a

biotehnologiilor contemporane. Astzi sunt cunoscute deja urmtoarele ramuri ale microbiologiei, cu valenele lor economice i sociale: 1. Microbiologia medical uman vizeaz producia preparatelor biologice profilactice i de diagnostic, cu ajutorul crora se asigur controlul bolilor infecioase umane; 2. Microbiologia medical veterinar urmrete controlul bolilor comune omului i animalelor, precum i controlul microbiologic al alimentelor de natur animal; 3. Microbiologia sanitar urmrete controlul microbiologic al mediului apei, aerului i mbuntirea calitii acestora. Apeleaz la soluii microbiologice de epurare i tratare a deeurilor urbane i industriale; 4. Biotehnologii pentru produse alimentare i furaje - utilizeaz microorganisme n vederea obinerii unor produse alimentare clasice: bere, alcool, pine, carne, conserve etc., sau pentru obinerea de proteine microbiene cu utilizare alimentar sau furajer. 5. Biotehnologii pentru produse chimice i medicamente. Cu ajutorul microorganismelor se obin medicamente i alte produse necesare n medicin, cum sunt: antibiotice, vitamine, hormoni, aminoacizi, acizi organici, activatori de cretere, enzime, alcaloizi, polizaharide etc.; 6. Microbiologia apelor se ocup de ecologia microorganismelor acvatice i rolul lor n bioproducie i recircularea elementelor biogene; 7. Microbiologia solului studiaz rolul biochimic al microorganismelor n asigurarea fertilitii naturale a solului i utilizarea preparatelor microbiene n calitate de biofertilizani; 8. Microbiologia geologic studiaz procesele geomicrobiene de formare a unor zcminte utile i utilizarea modern industrial a microorganismelor pentru extragerea elementelor utile, prospectarea i recuperarea petrolului; 9. Microbiologia insectelor studiaz speciile de virusuri, bacterii i fungi care populeaz corpul insectelor i utilizarea lor pentru combaterea biologic a insectelor duntoare; 10. Microbiologia coroziunii metalelor, materialelor de construcie, materialelor plastice, monumentelor de art, hrtiei etc.; 11. Ingineria genetic tehnologia obinerii microorganismelor cu proprieti optime pentru biotehnologii actuale sau viitoare.

Virusurile snt particule de material genetic (AND sau ARN ) mpachetate n proteine, cu dimensiuni submicroscopice (20 300nm)care snt lipsite de structura celular i metabolism propriu Virusurile parcurg n existena lor 2 faze: a) b) Extracelular virusurile exist n form cristalin inert numit virion, Intracelular n care virusurile pot vi evideniate prin replicarea aciduli su nucleic.

Virusurile snt parazii intracelulari obligatorii care au urmtoarele caracteristici:

o o o o

Conin un singur tip de acizi nucleici (AND sau ARN) niciodat ambii (recent sau depistat uni virui cu ambii acizi nucleici, dar aceste excepii doar confirm regula) Acidul este nconjurat de un nveli proteic numit capsid, iar la unii virui mai exist un nveli extern numit peplos. Virusurile snt incapabile s se automultiplice, aceast funcie este preluat, sub aciunea genomului viral de ctre celula gazd Virusul deregleaz metabolismul celulei gazd , orientndul spre sinteza substanelor din care const el.

Organismele parazitate de virui fac parte din toate regnurile cunoscute (bacterii, fungi, protiste, plante i animale). Am menionat deja c un virion clasic are n structura sa genomul viral, capsida i n unele cazuri peplosul. Genomul viral poate fi constituit din AND dublucatenar sau monocatenar sau din ARN dublucatnar. Partea de mas agenomului viral poate varia de la 1% la Influienza virus la 50% la Bacteriofagi. Lungimea molecule de acid nucleic este foarte variabil pentru diverse specii. Genomul viral poate conine de la cteva zeci pn la cteva sute de gene. Genomurile ANDvirusurilor de obicei snt liniare dar uneori se ntlnesc i genomuri inelare. Genomul viral poart informaia necesar pentru devierea metabolismului cellular i sinteza constisuenilor proprii. n dependen de structura genomului viruii sunt clasificai dul Baltimor conform schemei de mai jos.

Virusurile snt particule de material genetic (AND sau ARN ) mpachetate n proteine, cu dimensiuni submicroscopice (20 300nm)care snt lipsite de structura celular i metabolism propriu Virusurile parcurg n existena lor 2 faze: a) Extracelular virusurile exist n form cristalin inert numit virion,

b) Intracelular n care virusurile pot vi evideniate prin replicarea aciduli su nucleic. Virusurile snt parazii intracelulari obligatorii care au urmtoarele caracteristici:
o o o

Conin un singur tip de acizi nucleici (AND sau ARN) niciodat ambii (recent sau depistat uni virui cu ambii acizi nucleici, dar aceste excepii doar confirm regula) Acidul este nconjurat de un nveli proteic numit capsid, iar la unii virui mai exist un nveli extern numit peplos. Virusurile snt incapabile s se automultiplice, aceast funcie este preluat, sub aciunea genomului viral de ctre celula gazd

Virusul deregleaz metabolismul celulei gazd , orientndul spre sinteza substanelor din care const el.

Organismele parazitate de virui fac parte din toate regnurile cunoscute (bacterii, fungi, protiste, plante i animale). Am menionat deja c un virion clasic are n structura sa genomul viral, capsida i n unele cazuri peplosul. Genomul viral poate fi constituit din AND dublucatenar sau monocatenar sau din ARN dublucatnar. Partea de mas agenomului viral poate varia de la 1% la Influienza virus la 50% la Bacteriofagi. Lungimea molecule de acid nucleic este foarte variabil pentru diverse specii. Genomul viral poate conine de la cteva zeci pn la cteva sute de gene. Genomurile AND-virusurilor de obicei snt liniare dar uneori se ntlnesc i genomuri inelare. Genomul viral poart informaia necesar pentru devierea metabolismului cellular i sinteza constisuenilor proprii. n dependen de structura genomului viruii sunt clasificai dul Baltimor conform schemei de mai jos.

n schema original propus de Baltimor lipsete poziia a VII , virusuri cu genom ADN d.c. lacunar ntlnit la Hepadnaviridae (necunoscute atunci). Capsida reprezint un strat proteic care nconjoar genomul viral. Proteinele capsidei nimite capsomere pot fi identice sau diferite. La majoritatea virusurilor plantelor proteinele capsidale snt identice. Aplevirusuri ca SV40 conin 3 tipuri de protein, adenovidusurile conin 12 tipuri de capsomere iar Poxivirusul peste 30.

Autoasamblarea capsidului decurge n strns legtur cu legile cristalografiei, deacea numrul i forma capsidelor este strict reglat genetic. Proteinele virale protejiaz genomul viral , iniiaz mulriplicarea n celula infectat ,particip la asamblarea virionului, constituie antigenele virusurilor. nveliul extern numit i peplos se formeaz la o serie de virui n momentul cnd ei prsesc celula gazd i-i strbat membrane plasmatic. Peplosul este format dintr-un strat de fosfolipide la suprafaa cruia se observ nite proeminene de glicoproteide numite spiculi. Iar spre interior stratul de lipide este tapetat cu un strat de proteine. n funcie de arhitectura capsidului virusurile pot fi: a) Virusuri helicale Virusul mozaicului tutunului, maxovirusurile, poxivirusurile. Cel maibine a fost studiat virusul mozaicului tutunului. Acesta are forma unei baghete cu lungimea de 300 0 i diametru de 17 . Capsometele snt dispuse n form de spiral (2130 capsomere) fiecare capsomer constituit din 158 de aminoacizi

b) Virusurile poliedrice adic capsida prezint circa 20 de fee triunghiulare echilaterale. Au diametrul de 200 - 1400 . Asemenaea capside ntlnim la adenovirui i polivirui.

c) Virusurile complexe Au structur mai complicat de exemplu bacteriofagii au un cap cu structur poliedric i un cap cu structur helicoidal. Tot n aceast grup intr i virusurile genului Pox cunoscute ca cele mai complexe virusuri patogene unane. Virionul poxiviruilor are form de crmid cu colurile rotungite , n centru se afl un virion care conine AND-ul, lateral de virion se afl nite corpi ovoidali. Nucleoidul i corpii laterali snt acoperii cu o membran superficial .

Din cauza dificultii de observare i izolare taxonomia viruilor a evoluat foarte ncet. Astzi virusurile snt grupate n genuri i familii (familia fiind taxonul superior acceptat) Speciile nu snt deocamdat dine difereniate i reprezint un grup de virui cu caracteristici asemntoare. Genul se transcrie prin adaugarea sufuxului virus la numele virusului (Ex. Herpesvirus, Adenovirus). Familia reprezint un grup de genuri cu caracteristici comune i se scrie prin adugarea terminaiei viridae (Ex: Herpesviridae, Adenoviridae).

n schema original propus de Baltimor lipsete poziia a VII , virusuri cu genom ADN d.c. lacunar ntlnit la Hepadnaviridae (necunoscute atunci).

Capsida reprezint un strat proteic care nconjoar genomul viral. Proteinele capsidei nimite capsomere pot fi identice sau diferite. La majoritatea virusurilor plantelor proteinele capsidale snt identice. Aplevirusuri ca SV40 conin 3 tipuri de protein, adenovidusurile conin 12 tipuri de capsomere iar Poxivirusul peste 30. Autoasamblarea capsidului decurge n strns legtur cu legile cristalografiei, deacea numrul i forma capsidelor este strict reglat genetic. Proteinele virale protejiaz genomul viral , iniiaz mulriplicarea n celula infectat ,particip la asamblarea virionului, constituie antigenele virusurilor. nveliul extern numit i peplos se formeaz la o serie de virui n momentul cnd ei prsesc celula gazd i-i strbat membrane plasmatic. Peplosul este format dintr-un strat de fosfolipide la suprafaa cruia se observ nite proeminene de glicoproteide numite spiculi. Iar spre interior stratul de lipide este tapetat cu un strat de proteine. n funcie de arhitectura capsidului virusurile pot fi: a) Virusuri helicale Virusul mozaicului tutunului, maxovirusurile, poxivirusurile. Cel maibine a fost studiat virusul mozaicului tutunului. Acesta are forma unei baghete cu lungimea de 300 0 i diametru de 17 . Capsometele snt dispuse n form de spiral (2130 capsomere) fiecare capsomer constituit din 158 de aminoacizi b) Virusurile poliedrice adic capsida prezint circa 20 de fee triunghiulare echilaterale. Au diametrul de 200 - 1400 . Asemenaea capside ntlnim la adenovirui i polivirui.

c) Virusurile complexe Au structur mai complicat de exemplu bacteriofagii au un cap cu structur poliedric i un cap cu structur helicoidal. Tot n aceast grup intr i virusurile genului Pox cunoscute ca cele mai complexe virusuri patogene unane. Virionul poxiviruilor are form de crmid cu colurile rotungite , n centru se afl un virion care conine AND-ul, lateral de virion se afl nite corpi ovoidali. Nucleoidul i corpii laterali snt acoperii cu o membran superficial .

Din cauza dificultii de observare i izolare taxonomia viruilor a evoluat foarte ncet. Astzi virusurile snt grupate n genuri i familii (familia fiind taxonul superior acceptat) Speciile nu snt deocamdat dine difereniate i reprezint un grup de virui cu caracteristici asemntoare. Genul se transcrie prin adaugarea sufuxului virus la numele virusului (Ex. Herpesvirus, Adenovirus). Familia reprezint un grup de genuri cu caracteristici comune i se scrie prin adugarea terminaiei viridae (Ex: Herpesviridae, Adenoviridae).

2.2 MULTIPLICAREA VIRUSURILOR

Virusurile nu au capacitatea s se automultiplice. Virionul pentru a genera descendeni trebuie s ptrund n celula gazd, pe care o oblig -i schimbe metabolismul pentru sinteza componenilor virionului. Replicarea virusurilor este condiionat de infectarea celulei cu civa virioni. Procesul de replicare are cteva etape:

1. Adsorbia virusurilor pe celula gazd. Pentru fixarea virusurilor pe celula gazd funcioneaz un mecanism de atracie care cuprinde dou compartimente: prezena pe celula gazd a unor substane structurale normale care acioneaz ca receptori specifici pentru virui; i structuri speciale de la suprafaa virusurilor capabile s recunoasc receptorii celulari. Cea mai exact structur de recunoatere-fixare o au bacteriofagii, iar bacteriile dispun de un numr mare de receptori specifici pentru virui . Pn n prezent nu sau depistat receptori virali pe pereii celular ai celulelor vegetale, oricum virusul nu poate strpunge aceast barier. Deacea infectarea celulelor vegetatle are loc numai prin leziuni mecanice. Virusurile animalelor se fixeaz tot graie receptorilor dar acetea nu snt att de specifici ca n cazul bacteriofagilor. 2. Ptrunderea virusului n celul. Ptrunderea virusului n celula gazd are loc prin mecanisme diferite n funcie de natura viruilor i a celulei receptoare. n cazul bacteriofagilor ptrunderea acizilor nucleici virali n celula bacterian presupune traversarea peretelui celular rigid. Pentru aceasta bacteriofagii au un aparat complex de injectare a genomului viral Virusurile animalelor ptrund n celula gazd prin dou mecanisme endocitoz i fuziune. Endocitoza procesul de nglobare a virusurilor prin intermediul unor vezicule din membrana plasmatic a celulei gazd. Fuziunea const n contopirea suprafeii virusurilor cu membrana celular. Acest mecanism se ntlnete numai la virusurile cu peplos. Unele virusuri folosesc ambele ci. 3. Decapsidarea. Dup ptrunderea n citoplasm virusurile se debaraseaz de nveliurile care nu conin informaie genetic (capsid i peplos) Astfel se elibereaz genomul viral care trece n stare activ numit virus vegetativ. La unele virusuri genomul este eliberat de capsid n apropierea membranei celulare. La majoritatea viruilor decapsidarea are loc dup ptrunderea viruilor n celul. Capsomerele rmase, probabil, snt integrate n metabolismul celular. 4. Transmiterea i traducerea informaiei genetice. Ptrunderea genomului viral n celula gazd provoac devierea metabolismului celular normal, favoriznd replicarea materialului genetic viral. Sistemul genetic viral poate bloca complet sistemul genetic al gazdei n cazul infeciilor litice sau poate coexista cu acesta n cazul infeciilor avirulente. (temperate) Genomul viral se poate include n structura genomului celulei sau poate rmne desinestttor. Oricum la cteva ore dup ptrunderea virusului n celul ncepe sinteza ARNm viral. n baza ARNm viral ribozomii celulei gazd sintetizeaz proteine virale. Proteinele virale timpurii snt de obicei proteine care inhib sinteza ADN i ARN celular i faciliteaz sinteza componenilor virali. Proteinele tardive (trzii) reprezint capsomerele virale. Concomitent cu sinteza proteinelor tardive are loc replicarea genomului viral care poate fi constiruit din ADN sau ARN. Ca model pentru replicare sarvete catena iniial (infectant). Replicarea dureaz de obicei cteva ore i se sintetizeaz mii de uniti genomice din care doar cteva sute vor deveni virioni. 5. Asamblarea virusurilor. n momentul cnd elementele structurale au fost sintetizate ncepe procesul de morfozenez care are 2 faze: 1. Faza de asamblare n care se asambleaz o precapsid. 2. Faza de maturare are loc ptrunderea acidului nucleic n precapsid i consolidarea capsidului. La unele virusuri are loc i o condensare a acidului nucleic.

Nucleocapsida poate fi asamblat n nucleu la herpesvirus i adenovirus, sau n citoplasm la majoritatea virusurilor. 6. Eliberarea particulelor virale. Virusurile asamblate prsesc celula gazd. De obicei virusurile cu ADN snt mai mult timp reinute n celula gazd, iar ARN virusurile snt eliminate rapid. Eliberarea pote fi efectuat prin exocitoz sau prin ruperea membranei celulareca de exemplu la bacteriile infectate cu fagi, care practic exploadeaz n momentul eliminrii virusurilor Virusurile care au pelos snt eliminate prin exocitoz (nmugurire) fiind c anume atunci din membrana plasmatic modificat a celulei se formeaz peplosul. Exemplu a ciclului de replicare a virusului gripei A

Legenda: ( PASUL 1 ) Un virus se ataseaz de membrana celulei gazd prin intermediul proteinei specifice HA i intr n citoplasma prin endocitoz mediat de receptor , formnd astfel un endosom. O enzim celular de tipul tripsinei desface proteina HA n dou segmente HA1 i HA2 ( nereprezentat pe desen) . ( PASUL 2 ) HA2 promoveaz fuzionarea anvelopei virusului i membranei endosomului. O protein dinanvelopa virusului M2 (pe desen mici dreptunghiuri de culoare verde) acioneaz ca un canal de ioni H+ fcnd astfel interiorul virionului mai acid. Ca rezultat proteina major a nucleocapsidei M1 (pe desen cercuri mici oranj) disociaz i elibereaz particolele de ARN viral transportate n nucleu prin mecanisme celulare. ( PASUL 3 ) n nucleu , complexele polimerazei virale transcriu ( 3a ) i replic ( 3b) particolele de ARN viral.

( PASUL 4 ) ARNm nou sintetizat migreaz n citoplasma ( PASUL 5 ) n citoplasm are loc translaia (sinteza proteinelor de pe matricea de ARNm). Prelucrarea posttranslational a proteinelor include i trecerea prin Aparatul Golgi pn la memmbrana celular ( proteinele HA , NA , i M2) (5b) sau transportarea nnapoi n nucleu ca exemplu proteinele ( NP , M1 , NS1 - proteine nestructurale de reglementare - nu apare pe desen i NEP ( proteine de export nuclear - nu apare pe desen),aceste proteine de regul se leag cu proaspt formatele copii de ARN viral (5a). ( PASUL 6 ) Nucleocapsidele nouformate n nucleu migreaz n citoplasma (printr-un proces de NEP - dependent) i n cele din urm interacioneze prin M1 cu o regiune de membran celular unde sunt deja inserate proteinele HA , NA i M2 . ( PASUL 7 ) Celula infecta elimin virionul nou format prin exocitoz (nmugurire) proteina NA distruge fragmentul de acid sialic al receptorilor celulari , elibernd astfel virioni descendeni.

2.3 RELAIILE VIRUSURILOR CU ORGANISMUL GAZD Virusurile prezint anumite afiniti pentru celulele i esuturile organismelor vegetale i animale. Unele virusuri snt foarte selective pentru gazd (poliovirusul, virusul gripal numai la om) iar altele paraziteaz un numr mare de specii. n funcie de atracia selectiv pentru. n funcia de atracia selectiv pentru pentru anumite esuturi ale gazdei deosebim: 1. Virusuri dermatotrope - cu afinitate pentru pele i mucoas. (poxivirusul) 2. Virusuri neurotrope. cu afinitate pentru sistemul nervos central (virusul rabieii, virusul poliomielitei) 3. Virusuri dermoneurotropice cu afinitpi pentru piele i sistemul nervos central (herpes virusul) 4. Virusuri organotrope cu afiniti pentru organele interene (virusul febrei galbene) Virusurile ptrunse n organism pot determina reacii de rspuns din parte gazdei numite infecii. Infeciile pot fi: 1. Infecii acute se ntlnesc n special la om i animale. Ele au o durat limit, timp n care virusul ptruns n organism se multiplic activ putnd cauza moartea celulelor gazd. n funcie de virulna (puterea de infecie) i reacia de aprare a gazdei, virusul poate fi eliminat cu dbndirea reaciei imune. 2. Infecii persistente - snt infecii de lung durat . Producerea de virioni continu civa ani. Virusurile se replic mai intens imediat dup infectarea gazdei, dup care numrul lor se menine constant, i manifestrile clinice snt foarte slabe. Infeciile persistente la rndul lor pot fi:
o

Lente produse de virui cu perioada de incubaie foarte lung, nu apar fenomene clinice

Cronice Au o evoluie de lung durat datorit incapacitii organismului de a nltura virisul (ex: virusul hepatitei B) Latente snt provocate de virusuri din grupul herpes care infecteaz aproape toate animalele terestre . La om paraziteaz Herpes simplex (HSV-1 i HSV-2) infecia cu HSV-1 are loc n primii 5 ani de via, iar infecia cu HSV-2 la nceputul vieii sexuale. Dup vindecarea primei infecii viruii care se multiplic n neuroni se pstreaz n celulele senzitive i la inretvenia unui factor de stres fizic sau emoional, infecuia revine cu leziuni n zona buzelor, cornee, sau zona genital. 3. Infecii inaparente. n acest caz virusurile se multiplic n organismul gazdei provocnd o infecie real dar fr manifestri clinice. De multe ori sistemul imun reuete s elimine

virusul i astfel de infecii snt nregistrate numai dup prezena anticorpilor.

2.4 TIPURI DE VIRUSURI

Viruii n funcie de natura gazdei i particularitile de stuctur a lor se mpart n.

Bacteriofagi - Virusurile bacteriilor au fost semnalate de Twort n 1915. Bacteriofagii snt numii dup specia gazdei i poart simboluli T1, T2, - T7, , x174. Bacteriofagii snt foarte specifici i paraziteaz doar o singur specie sau gen de bacterii. Exist ns i bacteriofagi care paraziteaz genuri diverse. Bacteriofagii snt grupai n 10 familii. n funcie de structura molecular a genomului exist fagi ADN i fagi ARN. Majoritatea fagilor sunt ADN majoritatea fagilor ADN cunoscui (T, )au ADN bicatenar, dar snt i fagi cu ADN monocatenar (x174). Ei pot avea forma clasic mixt sau pot fi lipsii de coad ori snt n form de bastonae Fagii cu ARN fac parte din cele mai mici virusuri i infecteaz numai bacteriile cu caracter mascul (care poart o plasmid de sex). Ei se pot fixa numai pe suprafaa pililor de sex. Cei mai cunoscui fagi snt f2, MS2, Q, care paraziteaz pe Escherichia coli. Virionii snt lipsii de coad. Molecula de ARN poate fi dubl sau monocatenar, de obicei conin doar 3 5 gene care codific proteina capsidal, proteina de asamblare, i enzima necesar replicrii. Exist dou tipuri de relaii ntre fagi i bacteria infectat : n primul caz infectarea duce la formarea de noi virioni, bacteria este lezat i fagul i fagul se elibereaz n mediu aceast infecie se numete infecie litic sau ciclul litic, iar fagul se numete fag vegetativ. n al boilea fag genomul viral se ntegreaz n

genomul bacterian i se multiplic concomitent cu acesta i se transmite celulelor fiice, fr a distruge celula. Acest tip de infecie este numit infecie lizogen iar ciclul de multiplicare lizogen. Bacteriofagii se ntlnesc n toate mediile unde exist bacterii. Prin capacitatea de integrare n genomul bacterian, fagii pot stimula apariia mutaiilor, ei snt capabili s transporte fragmente de genom bacterian de la o bacterie la alta, n cazul infeciilor lozogene. Fagii litici pot fi utilizai n mediciniar n biotehnologie ei reduc productivitatea bacteriilor. Fagii pot fi utilizai pentru identificarea bacteriilor. Virusurile plantelor n prezent snt cunoscute cteva sute de virui ai plantelor. Viruii plantelor de obicei nu snt specufici i pot paratita specii nenrudite taxonomic. Genomul viral la majoritatea viruilor plantelor este constituit din ARN monocatenar. Ptrunderea viruilor n esuturile vegetale este posibil dac acestea snt lezate, deoarece ele nu pot strbate peretele celular ai celulelor vegetale. Contactul viruilor cu plantele este favorizat de o serie de vectori (insecte nematode sau ciuperci parazite). Virusurile plantelor se transmit: Mecanic prin contactul direct dintre planta sntoas i cea bolnav. n cazul contactului fizic i frecrii pot apra microleziuni pe unde are loc infecia o Prin vectori- exist peste 400 specii de insecte cunoscute ca vectori de transmitere a viruilor . virusurile se pot localiza pe organele de supt ale insectei sau pot ptrunde n sistemul circulator unde se pot pstra toat viaa insectei o Prin semine- circa 30% dintre virui se pot rspndi prin sevine. n acest caz virusurile se depun n embrion i mai rar n endosperm. La plante doar o singur particul viral poate provoca infecia care se transmite prin vasele plantei. Viroizii snt cele mai mici uniti cunoscute. Morfologic se aseamn cu nite baghete cu lungimea 50nm i grosimea 2nm. Viroizii snt alctuii din ARN fr capsid i nveli extern. ARN este monocatenar i circular. Viroizii produc boli grave la multe plante de cultur i la animale. Transmiterea viroizilor se face pe cale mecanic sau prin polenul i ovulele plantelor infectate. Ei nu snt specifici pentru gazd. Ei se multiplic n celula gazd dereglnd metabolismul propriu al acestuia. Originie viroizilor nu este clarificat.
o

Virusurile animalelor au fost descrise n ntrebrile precedente . deacea vom descrie numai virusurile cancerigene.

Virusurile i Cancerul. Multiplicarea celulelor ce alctuiesc diferitele esuturi ale organismelor este un proces controlat genetic. La celulele normale diviziunea nu depete anumite limite cantitative, astfel c esuturile i conserv structura morfoanatomic i funciile metabolice. Sub impactul anumitor factori fizici, chimici sau de natur viral , unele celule i perd controlul funciei de multiplicare. Rezultatul este o sporire exagerat a funciilor acestora, ddnd natere la tumori maligne. nc de la nceputul secolului trecut a fost demonstrat c leucemia spontan a psrilor poate fi transmis la ali indivizi din aceiai specie prin filtrate care conin particule virale. Ulterior s-a constatat c apariia tumorilor la foarte multe anumale inclusiv la om, pot fi rezultatul unor infecii virale. Cancerul, ca manifestare patologic poate s apar n condiiile unei infecii de lung durat. Apariia tumorilor este cauzat cel mai adesea de factorii genetici favorabili i funcionarea deficitar a sistemele imune. Virusurile oncogene au capacitatea de a produce o transformare a celulelor organismului gazd, sub aspect morfologic, biochimic, fiziologic, genetic. Celulele maligne au o morfologie deosebit: dimensiuni mai mici, forme mai rotungite i nuclee anormale. Metabolismul celular este modificat, snt stimulate funciile de sintez a ADN, glicoliza anaerob, producerea de acid lactic. Celulele tumorale se multiplic anarhic, nentrerupt fr control. Dac la celulele normale funcionaz controlul prin inhibiia de contact, la celulele tumorale acesta dispare. n plus, celulele rezultate au o coieziune redus ntre ele i din acest motiv se pot deplasa n interiorul esuturilor i ntre acestea prin micri ameboidale.

3.1 MORFOLOGIA BACTERIILOR

Dimensiunile bacteriilor variaz destul de mult ntre specii, chiar dac aceast variaie se cantoneaz n domeniul microscopiei optice i electronice. Dac n medie, dimensiunile oscileaz ntre 0,5-1m x 3-6m, bacteriile mari pot ajunge la 10-20 m lungime, unele sulfobacterii (Beggiatoa alba) - au 50 m,Achromatium oxaliferum are 100 m n lungime, iar unele spirochete pot atinge i 250 m. Cele mai mici procariote cunoscute snt bacteriile din grupa micoplasmelor. Snt cunoscute specii de micoplasme cu diametru celulei de 0,10,15 m. Cunoscnd dimensiunile moleculelor se poate de calculat c ntr-o celul cu diametru 0,15 m se pot conine circa 1200 molecule de proteine capabile s execute circa 100 reacii enzimatice. Contitatea tioretic minim de macromolecule necesare supraveuirii unei celule este de 50. Astfel n grupa micoplasmelor se gsesc specii care au dimensiuni aproape de minimil teoretic.

Cele mai mici bacterii se suprapun, ca dimensiune, virusurilor mari, iar cele mai mari depesc mrimea celor mai mici protiste eucariote. Sub acest aspect dimensiunea bacteriilor nu poate fi luat ca un criteriu absolut de discriminare fa de celelalte entiti microscopice, dei ca valori medii bacteriile se situeaz clar ntre virusuri i microorganismele eucariote Dac ncercm s nalizm reprezentani ai microorganismelor de diferite dimensiuni, observm o dependen a complexitii structurale de dimensiunile celulei. Dimensiunile minime snt mrginite de pachetul de enzime care sint strict necesare existenei independente a individului. Pragul de sus a dimensiunilor microorganismelor este limitat de relaia dintre volumul celulei i suprafaa ei. Odat cu cretere dimensiunilor celulei suprafaa crete n progresie aritmetic (X2) iar voluml n progresie geometric (X3), deacea raportul dintre aceste dou mrimi se deplaseaz considerabil (odata cu creterea celulei) spre volum. Raportul dintre suprafaa celulei i volum reprezint o caracteristic foarte important n lumea bacteriilor. Datorit dimensiunilor microscopice, acest raport este mult mai mare dect la microorganismele eucariote i metazoare. Raportul foarte mare dintre suprafa i volum are o importan deosebit pentru favorizarea metabolismului celular. Circulaia substanelor ntre mediu i celul se face cu mare rapiditate n cazul microorganismelor, datorit volumului redus al acestora n comparaie cu suprafaa de contact reprezentat de peretele celular. n lipsa unor structuri interne de transport a substanelor, chiar i a curenilor citoplasmatici prezeni la celulele eucariote, dimensiunile bacteriilor nu pot depi o anumit limit maxim, care s permit aprovizionarea cu substane necesare proceselor metabolice normale i eliminarea produilor de metabolism.

n microbiologie cel mai des se folosesc urmtoarele dimensiuni: 1 milimetru (mm) = 103 micrometri (m) = 106 nanometri (nm) = 107 angstrem () Forma celulelor procariote se studiaz pe mediile de cultur i mai puin pe probele prelevate din mediile naturale. Deoarece condiiile de cultur se modific n timp, putnd cauza apariia unor forme aberante, observaiile asupra morfologiei celulelor bacteriene se fac numai pe culturi tinere (proaspete). Marea diversitate a lumii bacteriene poate fi grupat n urmtoarele tipuri morfologice: sferice, cilindrice, spiralate, filamentoase, ptrate i stelate.

1. 1. Bacteriile sferice. n terminologia curent aceste bacterii poart numele de coci. Ele au o form sferic, ovoid, elipsoidal, reniform, uneori neregulat sau parial poliedric. n marea majoritate a cazurilor diametrele sunt aproape egale. Prin diviziuni repetate ale celulelor rezult populaii de bacterii care se individualizeaz dup planurile de diviziune i modul de asociere n urmtoarele subtipuri morfologice: a. Cocul simplu sau izolat, la care celulele rezultate din diviziune rmn independente. (1) 1. b. Diplococul rezult prin diviziunea celulelor dup un singur plan, celulele fiice grupndu-se cte dou.(2) 2. c. Streptococul la care diviziunea se face de asemeneadup un singur plan, dar celulele rezultate rmn legate, formnd lanuri de lungimi variabile. (4) 3. d. Tetrada se formeaz prin diviziunea unei celule dup dou planuri perpendiculare, din care rezult o grupare alctuit din patru celule. Ea mai poart i denumirea de tetracoc. (3) 4. e. Sarcina apare n urma unor diviziuni repetate n trei planuri perpendiculare ntre ele. Rezult o grupare n form de cuburi sau pachete. (3) 5. f. Stafilococul la care planurile succesive de diviziune sunt supuse n cteva direcii iar organismele rezultate se grupeaz neregulat, sub form de ciorchine. (5)

2. Bacteriile cilindrice. Au form de bastona i sunt cunoscute mai ales sub denumirea de bacili (6). Raportul dintre cele dou axe variaz foarte mult, unele bacterii lund un aspect aproape filamentos iar altele apropiindu-se de forma sferic-oval, fiind numite din acest motiv cocobacili. Bacilii pot fi drepi sau uor ncurbai la mijloc sau una dintre extremiti, avnd capete tiate drept, rotungit sau ascuit. Diviziunea bacililor are loc dup un singur plan, trasversal pe axul longitudinal. Dup diviziune celulele pot rmne izolate sau se grupeaz cte dou, formnd diplobacili, sau n lanuri de diferite lungimi, formnd streptobacili.

La unele specii dup diviziune celulele formeaz o structur numit palisad, asemntoare cu scndurile unui gard. Aezarea lor rezult dintr-o micare de basculare a celulei fiice, avnd punct de sprijin peretele transvers format prin diviziune. 3. Bacteriile spiralate sau elicoidale. Exist trei subtipuri morfologice de bacterii spiralate, n funcie de numrul de spire i flexibilitatea peretelui celular.

1. Vibrionul, la care celula este nvrtit ntr-o singur spir, lund aspectul de virgul. n cursul diviziunii celula fiic rezultat este poziionat cu spirala n sens opus fa de celula mam, putnd crea aparena unui spiril dac cele dou celule nu se separ. (8) 2. Spirilii adevrai, care au mai multe spire i un perete celular rigid, ceea ce le confer stabilitate morfologic i dimensional. (7) 3. Spirocheta, alctuit de asemenea din mai multe spire, dar cu perete elastic, ceea ce le asigur o mare flexibilitate, permind contractarea i relaxarea necesare pentru imprimarea unei deplasri active din mediu. (7) 4. Bacteriile filamentoase. (11) Prototipul acestor bacterii l reprezint actinomicetele, microorganisme foarte asemntoare cu fungii sub raport morfologic. Ele formeaz numeroase hife cu tendin de ramificare, ceea ce le confer aspect de miceliu. n aceast categorie se pot include i unele specii de bacterii bacilare. n ultimul timp n afar de formele clasice au fost puse n eviden diverse forme de bacterii ntlnite mai rar n diverse medii. Unele bacterii au forma de inele (9) inchise sau deschise n dependen de vrst, altele snt vermiforme (11).

Procariotele care se nmulesc prin inmugurire au de la 1 la 8 excrescene celulare prosteci (10). Bacterii ptrate, eu fost puse n eviden n probe de ap prelevate din apa hipersalin a unor bli din Peninsula Sinai. Cercetri recente au descoperit existena unor bacterii cu form de stea(12), care se nmulesc prin sciziparitate. Ele au fost ncadrate n genul Stella.

3.2 POZIIA MICROORGANISMELOR N SISTEMATICA LUMII VII

ncepnd de la Aristotel (384-322 .e.n.), care primul a ncercat s sistematizeze organismele cunoscute pe atunci, majoritatea savanilor mpreau organismele vii n 2 regnuri plante i animale. Antony van Leeuwenhoek care a descoperit microorganismele era convins c ele erau animalicule, deatunci i pn n sec.XIX microorganismele deobicei erau considerate animale. n adoua jumtate a sec. XIX biologul german . Haeckel ajunge la concluzia c microorganismele se deosebesc att de plante ct i de animale, i nu pot fi incluse nici ntr-unul din aceste regnuri. . Haeckel a propus crearea unui regn nou Protista- care ar include toate organismele la care lipsete diferenierea n esuturi i organe (protozoare, alge, ciuperci, bacterii) n prezent exist mai multe concepii privitor la sistematica lumii vii. Conform unei dintre aceste concepii nu are rost s ncercm clasificarea strict a organismelor vii deoarece orice clasificare este artificial i nu reflect adevratele interaciuni filogenetice dintre organisme. Astfel este logic ca sistema lumii vii s conin ct mai puine regnuri i deci nparte lumea vie n animale i plante. Conform altei concepii mai acceptate microorganismele pot pretinde la un regn aparte numit de Haekel Protista. ns regnul protista (n varianta lui Haekel) sa dovedit a conine organisme foarte diverse, iar termenul microorganisme nu are rol taxonomic. Acumularea datelor despre microorganisme a permis diviziunea microorganismelor n Protiste inferioare i Protiste superioare. La protistele superioare se refer (algele microscopice cu excepia cianofitelor, protozoarele, ciupercile microscopice). Caracterul esenial pentru mprirea in protiste inferioare i superioare era lipsa (procariote) sau prezena (eucariote) nucleului. Diferenele dintre procariote i eucariote este att de bine definit nct ia permis lui R. Murray n 1968 s mpart organismele vii n dou supra regnuri Prokaryotae i Eukaryotae. Procariotele se deosebesc de Eucariote prin mai multe caractere indicate n tab 2

Tab 3 Deosebirile dintre celulele eucariote i procariote

Nr. 1 Celula procariot Nu are nucleu difereniat (este prezent nucleoidul-molecul de ADN inelar) Lipsete membrana nuclear Lipsete nucleolul Molecula de ADN este dublu circular, necompletat cu proteine histone. Nu este caracteristic discontinuitatea genelor (lipsesc intronii); Celula eucariot

Au unul sau mai multe nuclee Este prezent membrana nuclear Sunt prezeni unul sau mai muli nucleoli Molecula de ADN este dublucatenar, liniar completat cu proteine histone.

2 3 4

Este caracteristic discontinuitatea genelor (n ADN secvenele informaionale (exonii) alterneaz cu segvene neinformaionale (intronii) care n procesul de transcriere a informaiei genetice se elimin) Materialul ereditae este concentrat n mai muli cromozimi Genomul extranuclear este prezentat de genomul mitocondrial, cloroplastic .a.

Este prezent un singur cromozom bacterian - nucleoid n afar de genomul nucleoidic exist i genomul plasmidic, prezentat prin ADN-ul din plasmide Lipsete diviziunea mitotic i meiotic (se divide prin diviziune direct)

Snt caracteristice mitoza i meioza dar se ntlnete i amitoza

Lipsesc o serie de organite celulare (membranare); mitocondrii, reticol endoplasmatic, aparat agolgi, plastide, lizozomi. Snt prezeni mezozomii (invaginri ale membranei plasmatice ce au funcii energetic - ATP)

n diferite tipuri de eucariote aceste organite snt prezente

10

Nu s-au identificat n celulele eucariote (sinteza ATP are loc n mitocondrii)

11

Citoplasma este permanent n stare de gel cea ce exclude micarea ei Ribosomii snt de tip 70S Peretele celular conine peptidoglucan (murein)

Citoplasma toate fi att gel ct i sol i de obicei este mobil Ribosomii st de tip 80S Peretele celular conine chitin (la ciuperci) celuloz (la plante) sau lipsete (la animale) Nu se pot ncapsula Nu pot exista n lips de oxigen Falgelii compui din microtubuli aranjai dup modelul 9+2 , snt nconjurai de membran plasmatic, diametru 200nm

12 13

14 15 16

Se pot ncapsula Pot exista i n lips de oxigen Flagelii snt simpli, alctuii din subuniti proteice aranjate spiralat, i nu snt nconjurate de membran, diametru 20nm Unele specii snt capabile s fixeze azotul atmosferic

17

Nici o specie nu poate fixa azotul atmosferic.

n prezent nu exist o sistem a viului recunoscut unanim. Dar totui mai des este acceptat sistema propus de Whittaker n 1969. R. Whittaker a mprit lumea vie n cinci regnuri (fig2). Aceast sistem permit s se observe trei niveluri generale de organizare a lumii vii. Regnurile propuse de R. Whittaker snt:
o

o o o

Monera include organisme care se gasesc la cel mai inferior nivel de organizare celular, i cuprinde procariotele (bacteriile i cianobacteriile) Protista include organisme, eucariote, microscopice majoritatea unicelulare sau pluricelulare cu celule nedifereniate n esuturi i organe. Plante Ciuperci Animale

Fig. 2 Sistemul lumii vii dup . Whittaker Ultimile trei regnuri includ organisme eucariote, pluricelulare cu corpul difereniat n esuturi i organe, i se deosebesc ntre ele prin tipul de nutriie. Modul de nutriie fotoautotrof este caracteristic pentru plante; Ciupercile n general snt osmotrofe (adic se hrnesc cu substane organice dizolvate); Animalele au nutriie de tip holozoic (care const n prinderea i digerarea hranei solide) Tipurile de nutriie specifice plantelor i animalelor au aprup la nivelul regnului monera, ear la protiste sau dezvoltat, tot la protiste a aprut i nutriia holozoic specific animaleleor. De fapt regnul Protista este un regn care include organisme foarte diferite ca structur i mod de via. Aici se includ i unele grupe care se aseamn cu ciupercile (oomicetele) i algele care traniional snt clasificate la plante, i protozoarele care snt considerate animale. De la aceast diversitate de organisme au aprut cele trei regnuri care se afl pe treapta superioar a evoluiei (plante,ciuperci,animale). n ultimii ani datorit datelor din biologia molecular sa depistat o grup de organisme care structural se aseamn cu procariotele dar biochimic i fiziologic se deosebesc mult , aceast grup a primit denumirea de Arhebacterii. Iar bacteriile propriuzise au fost plasate n grupa Eubacteriilor.Mulii savani clasific Arhebacteriile ca supraregn desinestttor (Deci ei evideniaz supraregnurile. Arhebacterii, Procariote i

Eucariote), altii grupeag arheobacteriile n regnul monera de o potriv cu eubacteriile i cianobacteriile Numrul speciilor de arheobacterii este mult mai mic dect al speciilor de eubacterii iar cianobacteriile au fost studiate la cursul de sistematic a plantelor de acea n cursul dat vor fi descrise mai ales proprietile eubacteriiilor.

3.3 SISTEMATICA PROCARIOTELOR

Sitematica sau Taxonomia este tiina care caut s identifice legturile reciproce dintre diverse organisme. Unul din scopurile sistematicii ca tiin este clasificarea multitudinii de organisme n grupe (taxoni). Dar nainte de a realiza clasificarea este nevoie s fie caracterizat i identificat obiectul supus clasificrii. Pentru clasificarea organismelor sunt folosite diferite caracteristici: morfologice, citologice, culturale, fiziologice, biochimice, imunologice .a. n principiu caracteristica uneori poate fi foarte voluminoas alte ori se cunoate foarte puin despre obiectul de clasificat. Sistematica microorganismelor se bazeaz pe principiul nomenclaturii binare (fiecare specie are denumirea alctuit din 2 cuvinte n latin -Streptococcus pneumoniae, Escherichia coli). Unitatea structural de baz a sitematicii este specia. de regul specia este definit a un grup de organisme care au aceiai origine i caracteristici morfologice, fiziologice, biochimice i ecologice asemntoare, se ncrucieaz liber i dau urmai fecunzi. Din pcate, ultimul principiu nu este posibil de aplicat pentru bacterii, deoarece ele nu au nmulire sexuat. Din aceast cauz clasificarea unui microorganism la un anumit taxon este mai mult impiric, i se ia n consideraie cit mai multe caracteristici ale speciei date. Speciile sunt grupate n taxoni superiori: gen, familie, ordin, clas, filum, regn. n microbiologie sunt utilizate pe larg noiunile de "su" i "clon". Prin sue se nelege culturi bacteriene de aceiai specie, izolate din diferite medii de via, deosebirile dintre sue nu es din limitile speciei. Clona este o cultur de microorganisme provenite de la o singur celul. Dar n diferite domenii aplicative ale microbiologiei se mai identific grupuri inferioare specieii ca de exemplu: serovar (dup prezena anumitor antigeni),chemovar (dup sensibilitatea la anumite substane chimice), fagovar (dup sensibilitatea la bacteriofagi).a. Dac sistemele taxonomice ale organismelor superioare identific att asemnarea morfo-anatomic ct i legturile evolurive, atunci la microorganisme putem deosebi 2 tipuri de sisteme ale microorganismelor:

1. Sisteme filogenetice (naturale) - care au ca scop identificarea relaiilor genetice i evolutive ntre microorganisme 2. Sisteme utilitare (artificiale) - care au ca scop diferenierea i identificarea rapid a microorganismelor. Un exemplu de sistem taxonomic utilitar a bacteriilor este Determinatorul Bergey care a fost iniiat n 1923 de un grup de bacteriologi americani sub conducerea lui D. H. Bergey. Prima ediie a constat din 4 volume, pe parcursul istorieii acest determinator a suferit numeroase ediii i respectiv modificti. Ediia curent a zecea include 5 volume publicate din 2001 (volumul 1) pn n 2012 (vol. 5). Principiul acestui determinator este imparirea bacteriilor n grupe uor identificabile, de exemplu: Coci anaerobi Gram negativi (grupa 8) sau bacili i coci gram pozitivi cu endospori (grupa 13). Astfel se asigur identificarea uoar a microorganismelor. Din aceast caz respectiva sistem este acceptat de majoritatea speialitilor mai ales n microbiologia aplicat ncercrile de a crea o sistem care ar demonstra relaiile filogenetice (evolutive) dintre speciile de bacterii nu sau soldat cu succes. Probabil acesta se explic prin specificitatea obiectelor de studiu, bacteriile sunt prea mici i variate i este greu de a determina gradul lor de rudenie doar dup criterii morfologice, fiziologice i culturale. Un criteriu aprut relativ recent - analiza structurii moleculare a ADN sau ARN ribosomal, poate da o speran ca astfel de sistem s poat fi creat vre-o dat.

4.1 PERETELE CELULAR

Peretele celular al bacteriilor este o structur complex, semirigid, care confer stabilitate formei celulare. El asigur protecia componentelor interne celulare, ncepnd cu membrana plasmatic, fa de aciunea factorilor nocivi. Aproape toate organismele procariote au perete celular. Deoarece majoritatea bacteriilor veuiesc n medii cu concentraii mai mici dect cele din citoplasma celulei ele risc s fie distruse de presiunea osmotic creat de apa care ptrunde mereu n celul. Funcia major a peretelui celular este conservarea integritii bacteriei fa de creterea exagerat a presiunii osmotice interne, ce ar putea cauza explozia celulei. El asigur, de asemenea, meninerea formei bacteriei i servete ca suport de fixare a cililor. n faza de cretere a volumului celular are loc o extensie a membranei citoplasmatice i a peretelui celular.

Peretele celular al procariotelor se deosebete evident de de structurile similare ale eucariotelor. Peretele celular la bacterii este format dintr-o reea de molecule de murein (peptidoglican). Peptidoglicanul este o mucopolizaharid ntlnit doar la bacterii, alctuit din iruri de dizaharide, legate printr-un numr de patru-cinci lanuri de aminoacizi. Cele dou monozaharide sunt reprezentate de N-acetil-glucozamin (NAG) i acidul N-acetil-muramic (NAM). Majoritatea eubacteriilor se mpart n dou grupe dup structura peretelui lor celular. n 1884 savantul danez Christian Gram a observat c dac bacteriile fixate sunt prelucrate cu soluie de genian violet i apoi cu soliie ce conine iod se formeaz un complex colorant care n dependen de structura peretelui bacterian poate: 1) s fie decolorat cu alcool sau aceton -aceste bacterii mai tirziu au fost numite Gram negative (G-) 2) s nu se decoloreze cu alcool datorit reinerii complexului colorant n citoplasma celulei- aceste bacterii au fost numite Gram pozitive (G+) La majoritatea bacteriilor Gram-pozitive peretele celular este alctuit din straturi de peptidoglican (circa 40%-90%) legate prin puni de lanuri peptidice, structur ce confer peretelui o mare rigiditate. Straturile de peptidoglican sunt mult mai groase la bacteriile Gram-pozitive fa de cele Gram-negative. La multe bacterii Gram-pozitive peretele celular conine i acizi teicoici, alctuii dintr-un alcool i un fosfat. Aceti acizi sunt legai de straturile de peptidoglican sau membrana plasmatic i de multe ori strbat straturile de peptidoglican pn la suprafaa peretelui celular, constituind probabil principalii antigeni ai bacteriilor G+. Datorit ncrcrii lor negative (cauzat de grupul fosfat) acizii teicoici pot limita i regla deplasarea cationilor spre interiorul sau exteriorul celulei. Ei de asemenea au un anumit rol n creterea celular i recepia bacteriofagilor. Bacteriile Gram-negative conin de asemenea peptidiglican, dar n cantitate foarte mic (1-10%), fiind lipsite total de acid teicoic. Peretele celular la Bacteriile Gram-negative este mult mai complex. Peptidoglicanul se gsete n spaiul periplasmatic ntre dou membrane fosfolipidice i este legat covalent de membrana extern. Membrana extren are structur similar cu membarana celular intern se deosebeste doar dup compoziie. Membrama extern conine un numr mare de proteine majoritatea din ele formeaz pori membranari prin care pot trece chear i unele molecule mai mari (glucide, aminoacizi, i chiar mici peptide i oligozaharide). Spaiul periplasmatic reprezint un mediu

gelatinos ce conine o cantitate mare de enzime litice i transportatoare. Datorit grosimii reduse a stratului de peptidoglican peretele celular al bacteriilor Gramnegative este mult mai sensibil la aciunea factorilor mecanici.

Perei celulari deosebii: n diversa lume a microbilor sunt i forme cu structura pereiolor celulari deosebit de formele clasice. De exemplu grupa mixobacteriilor sunt capabile s se deplaseze pe substrat schimbndui forma, cea ce nu pot face bacteriile cu perei rigizi de peptidoglican. Totui pereii acestor microbi tot peptidoglican conin dar probabil acest peptidoglican deosebit de flexibil are mai puine legturi ntre lanurile sale. Sunt cunoscute bacterii cu structura peretelui celular absolut diferit de exemplu arhebacteriile care au cele mai diverse compoziii pentru pereii lor celulari. Unele au perei proteici, altele au peptidoglican modificat sau heteropolizaharide diverse. Sunt i microorganisme procariote lipsite total de perete celular de exemplu micoplasmele care n mod normal sunt parazii intracelulari i fiind n interiorul celulei nu sunt supuse ocului osmotic. dar sunt i forme lipsite de perete celular pe cale experimental cu ajutorul penicilinei sau lizocimei, aceste forme pot supraveui doar n condiii artificiale n mediu izotonic. Dac aceste formele transmit lipsa peretelui celular urmailor (este vorba de mutaii) ele se numesc L-forme, dac perete celular reapare la urmai aceste forme se numesc protoplati (peretele lipsete total) sau sferoplati (peretele lipsete parial).

Structura deosebit a aperetelui celular al procariotelor fa de eucariote a permis crearea i utilizarea preparatelor medicale care acioneaz doar asupra celulei procariote la nivel de perete celular. Apariia la beacteriile Gram- negative a membranei externe a dus la eficientizarea realizrii funciilor peretelui celular. Aceast membran extern are permiabilitate selectiv, adic permit ptrunderea unor substane necesare i nu permite ptrunderea substanelor toxice sau antibioticelor. Astfel se explic rezistena mai bun la antibiotice a bacteriilor Gram-negative dect a celor Grampozitive.

4.2 STRUCTURI EXTRAPARIETALE DE PROTECIE (CAPSULA I STRATUL MUCOS)

La unele bacterii se formeaz n jurul celulei o structur extraparietal numit capsul sau strat mucos, n funcie de structur. Sub raport chimic acestea sunt de natur polizaharidic, cu un ridicat grad de polimerizare. Aceste caracteristici le confer o consisten vscoas, gelatinoas. n funcie de ultrastructur i morfologie materialul capsular poate mbrca urmtoarele forme: Microcapsula care se prezint ca un strat foarte fin, de pn la 0,2 m, invizibil la microscop, dar care poate fi pus n eviden prin metode imunologice. Capsula sau macrocapsula are o grosime de peste 0,2 m. Ea nconjoar n mod egal ntreaga celul sau perechi de celule i poate fi pus n eviden prin metode citologice. (Fig 1. 1) Stratul mucos se prezint ca o mas amorf neorganizat n jurul celulei, fr structur anatomic specific (Fig 1. 2). Zooglea reprezint o mas amorf de natur polizaharidic care poate cuprinde simultan mai multe celule, constituite n adevrate colonii mucilaginoase. Denumirea este utilizat dar improprie pentru bacterii, fiind preluat din domeniul zoologiei.(Fig1.3 )

Prezena stratului mucos i a capsulei confer culturilor realizate n medii lichide un caracter vscos, siropos, ca urmare a difuzrii n mediu a unor substane specifice capsulei. Pe mediu solid coloniile au un aspect umed, lucios, mucoid.

Capsula i stratul mucos joac un anumit rol n viaa celulelor bacteriene, dei nlturarea lor nu pune n pericol existena acestora, i deci prezena lor nu este obligatorie. Speciile capsulate beneficiaz totui de prezena capsulei n diferite moduri. n primul rnd, capsula reprezint un factor de colonizare pe suprafee inerte (n medii acvatice, pe suprafaa dinilor cnd se formeaz placa dentar), pe culturi de celule i esuturi epiteliale mucoase. n al doilea rnd, capsula joac un rol de protecie mpotriva factorilor nefavorabili. Acetia pot fi: uscciunea, fa de care bacteriile capsulate se protejeaz prin capacitatea higroscopic ( de a absoarbe apa) a acestui nveli; aciunea fagocitelor, pe care bacteriile capsulate o anihileaz direct prin mpiedicarea adeziunii la acestea, evitarea ptrunderii fagilor. Datorit acestor proprieti bacteriile patogene capsulate au o virulen mai mare fa de om i animale.

4.3 STRUCTURI EXTRAPERIETALE DE LOCOMOIE ( CILII)

Cilii reprezint apendici filamentoi extraparietali care joac un rol important ca organite de locomoie a unor specii de bacterii. Prezena lor nu este general fiind ntlnii mai ales la bacteriile alungite bacili, virioni i spirili i mult mai rar la formele cocoide. Prin analogie funcional cu organite asemntoare de la microorganismele eucariote cilii mai sunt numii i flageli. Cilii sunt structuri filamentoase subiri, flexibile i fragile. Lungimea lor este variabil. Numrul i poziia cililor pe suprafaa celulei bacteriene difer n funcie

de specie. Dup aceste caracteristici se pot ntlni urmtoarele categorii de bacterii:

Bacterii atriche lipsite de cili, imobile; Bacterii monotriche care au un singur cil; Bacterii amfitriche cu cili la ambele capete ale celulei; Bacterii lofotriche cu cili la un singur capt; Bacterii peritriche cu cilii amplasai pe toat suprafaa celulei. Structura cililor evideniaz trei componente morfologic distincte: structur bazal, numit i corp bazal sau complex bazal; o structur n form de crlig; filamentul principal.

Corpul bazal reprezint componenta cilului prin care acesta se ataeaz la celula bacterian. El are o structur mai simpl la bacteriile Gram-pozitive i mai complicat la bacteriile Gram-negative. Corpul bazal este alctuit din 4 discuri interconectate, numite i inele: discul M (de la membran) dispus n membrana plasmatic i montat rigid pe axul de transmisie, dar care se rotete liber n spaiul membranar; discul S, localizat n regiunea supramembranar; discul P, inclavat n stratul de peptidoglican; discul L, legat de membrana extern lipopolizaharidic a peretelui celular. Crligul reprezint o structur situat n afara celulei bacteriene i are o form mai mult sau mai puin ndoit. Filamentul flagelar principal reprezint partea flexibil, n general spiralat a cilului. El este alctuit din proteine numite flageline. Cilii reprezint organite de locomoie i de aceea, prin analogie cu organitele similare de la protozoare au fost numii i flageli de tip procariot. Aceast funcie se realizeaz printr-o micare de rotaie a filamentului flagelar n raport cu corpul celulei, asemntoare unei nurubri, care are ca rezultat propulsarea bacteriei. n cazul bacteriilor multiciliate micarea se realizeaz prin rotaia la unison a unor grupuri de cili.

4.4 ALTE STRUCTURI EXTRAPARIETALE (FIMBRII, GLICOCALIX, SPINI)

Pilii sunt apendici filamentoi neflagelari, prezeni n numr mare pe suprafaa unor bacterii. Dimensiunile pililor variaz n funcie de specie i chiar la aceeai celul. Ei sunt structuri tubulare uniforme, cu diametrul de 3-10 nm i lungimea de 0,2-20 m. Ei se mpart n dou categorii: pilii de conjugare (de sex) i pilii comuni (pili somatici). Pilii de conjugare (de sex) sunt codificai de plasmide transmisibile i sunt implicai n conjugarea bacteriilor. Sunt n numr de 1-10 la o celul. Ei sunt formai din molecule de pilin (fosfoglicoprotein) care se asambleaz dup o simetrie helical rezultnd structura tubular cu un canal axial (la pilii de tip F) sau fr canal axial (la pilii de tip I). La extremitatea liber unii pili reprezint un buton terminal, a crui form i structur pot fi diferite: ca un disc, ca o cup sferic-vezicular. Fimbriile (pilii somatici) sunt dispuse pericelular, uneori polar sau bipolar: sinteza lor este controlat de gene cromozomale. Numrul lor variaz n funcie de specie, fiind cuprins ntre 1-1000 pe o celul. Fimbriile au o structur tubular cu un diametru constant, care variaz dup specie ntre 3-14 nm. Lungimea lor,

variabil chiar la aceeai celul, este cuprins ntre 1-2 nm. Sunt formate din molecule de fimbrilin, asamblate dup o simetrie helical. Rolul pililor este important n urmtoarele domenii: att pilii ct i fimbriile conin receptori specifici pentru bacteriofagi, situai la vrf pentru bacteriofagii filamentoi sau pe suprafaa lateral pentru bacteriofagii izometrici; o pilii de sex sunt necesari iniierii procesului de conjugare; o pilii favorizeaz ptrunderea ADN-lui fagic n celula bacterian pe calea canalului axial al pilului, reprezentnd n acest caz un factor de sensibilitate; o pilii sunt responsabili pentru formarea unor pelicule bacteriene la suprafaa culturilor statice; o pilii mediaz aderena unor specii bacteriene la hematii, inducnd fenomenul de hemaglutinare; o pilii reprezint organite adezive, care mediaz ataarea unor bacterii la celulele epiteliale ale mamiferelor, favoriznd colonizarea. Ei pot fi astfel considerai ca factori poteniali de virulen. Spinii, numii i spicule bacteriene, reprezint apendici pericelulari rigizi, cu structur tubular, prezeni la unele specii Gram-negative. Numrul lor mediu este de 6 la o celul, variind ns n funcie de specie ntre 1-15 spini. Structura lor este tubular, cu diametrul de 65 nm, realizat dintr-un filament rsucit helical. Din punct de vedere chimic spinii au o structur proteic, fiind alctuii din molecule de spinin, asemntoare cu flagelina i pilina.Semnificaia biologic a spinilor este puin cunoscut.
o

Glicocalixul se prezint ca o mas de filamente polizaharidice ataate de lipopolizaharidele prezente pe suprafaa bacteriilor Gram-negative. El formeaz o structur asemntoare unei psle ce nconjoar ntreaga bacterie i care asigur fixarea celulei bacteriene de alte celule sau substraturi din mediu. Glicocalixul favorizeaz fixarea de substrat i dirijarea ctre acesta a enzimelor hidrolitice care descompun structurile organice ale substratului, antrenate apoi spre bacterii.. n unele cazuri, n interiorul glicocalixului se formeaz microcolonii bacteriene care se fixeaz de celulele vegetale sau animale, crend condiii favorabile de nutriie prin meninerea i concentrarea enzimelor degradative eliberate de bacterii.

Glicocalixul reprezint i un sistem eficient de aprare a bacteriilor fa de aciunea prdtorilor (bacteriofagi, protozoare), a leucocitelor polimorfonucleare i a anticorpilor organismului infectat. n mediile naturale glicocalixul favorizeaz fixarea bacteriilor pe substrat, ferindu-le de aciunea curenilor activi din ruri i asigurnd astfel stabilitatea lor n biotopii respectivi.

5.1 MEMBRANA PLASMATIC A PROCARIOTELOR

Membrana plasmatic reprezint o structur fin care separ peretele celular de citoplasm. Prezena membranei plasmatice este obligatorie pentru toate celulele vii. La procariote ca de altfel i la eucariote aceast membran este alctuit n principal din fosfolipide (15 - 45%), proteine (50 - 75 %) i o cantitate mic de glucide. Proteinele membranare pot fi parial afundate n stratul bilipidic (semiintegrate), pot strpunge acest strat (integrate), sau pot fi situate la suprafaa membranei (periferice). De regul proteinele membranare snt globulare i exist cteva mii de tipuri de proteine membranare. Proteinele au diverse funcii: Unele snt transportatoare a diverse substane prin membrana plasmatic, formeaz pompe de ioni sau pori prin care trec moleculele polare care nu pot trece prin bistratul lipidic. Iar altele au funcii enzimatice, receptoare sau snt acceptori de electroni, i snt implicat activ n cele mai diverse procese fiziologice. Lipidele tot variaz ca compoziie de la o membran la alta. Totui majoritatea lipidelor membranare snt asociate cu grupe fosfat (fosfolipide). Fosfolipidele snt nite molecule polare, adic au un capt hidrofil i unul hidrofob. n mediu apos aceste molecule formeaz un strat monomolecular la suprafaa apei, astfel n ct capetele hidrofobe s fie situate spre exterior iar capetele hidrofile spre ap. Deci fosfolipidele n mediu apos se organizeaz automat n pelicule la suprafaa apei. Dar membranele plasmatice snt nconjurate din ambele pri de ap, aici lipidele n conformitate cu legile termodinamici formeaz un strat dublu, astfel cozile hidrofobe snt pzite de mediul apos. Fosfolipidele snt esteri ai glicerolului cu dou catene de acizii grai

i cu acidul fosforic. Restul fosforic de obicei este i el esterificat cu un aminoacid sau glucid. Cele dou catene de acizi grai repezint capul hidrofob iar glicerolul i restul fosfat capul hidrofil. Catenele de acizi grai pot fi saturate sau nesaturate (adic unii atomii de carbon din caten nu snt saturai cu hidrogen i intre aceti atomi se formeaz legturi duble). Legturile duble au alt unghi i astfel ele modific puin direcia catenei. Cu ct mai muli acizi grai nesaturai conine membrana cu att ia are o densitate mai mic, i i menine starea fluid i activitatea metabolic la temperaturi mai sczute. La procariote de regul se ntlnesc acizi grai mononesaturai (cu o singur legtur dubl), dar excepie fac cianobacteriile care au o cantitate mare de acizi grai polinesaturai. La eucariote la micorarea densitii mai servete i o grup de substane numite steroli, dar la majoriatea bacteriilor sterolii lipsesc (cu excepia unor micoplasme i cianobacterii). n schimb unele bacterii au acizi grai ramificai n structura fosfolipidelor ceea ce deasemenea micoreaz densitatea. Fluiditatea bistratului fosfolipidic presupune mobilitatea mare a moleculelor de fosfolipide, ele se pot deplasa n limitele stratului sau (mai rar) pot migra dintr-un strat n altul (micare flip-flop). Modelul de structur propus de Singer-Nicolson n 1972 poart numele de modelul mozaicului fluid. Conform acestuia, fosfolipidele formeaz un bistrat semifluid n care plutesc proteinele.

Funcia principal a membranei plasmatice este cea de barier fa de substanele care intr i ies din celul. Permeabilitatea membranei este selectiv, motiv pentru care uneori este numit semipermeabil. Membrana citoplasmatic este implicat, de asemenea, n metabolismul nutrienilor i producerea energiei. Ea conine enzime capabile s catalizeze reacii chimice de hidroliz a nutrienilor i producerea de ATP. La fel este demonstrat implicarea membranei plasmatice

n replicarea cromozomului bacterian. La unele bacterii se ntlnesc diverse invaginri ale membranei plasmatice care sunt implicate n diverse funcii fiziologice.

5.2 STRUCTURI MEMBRANARE INTRACELULARE LA PROCARIOTE

La procariote lipsesc organitele celulare care defapt reprezint compartimente delimitate de membrane care execut concomitent cele mai diverse reacii biochimice. n multe din celulele procariote sau depistat formaiuni membranare intracelulare care ndeplinesc diverse funcii i care se presupune c sau format n urma nvaginrii membranei plasmatice. Dup funciile ndeplinite putem deosebi:
o

Structuri fotosintetizatoare- care pot avea forme de vezicule (cromatofori) sau forme lamelare (tilacoizi).Sistema de membrane fotosintetice este destul de plastic, adic i schimb uor forma i dimensiunile n dependen de factorii de mediu (intensitatea luminii, concentraia de oxigen .a.). La bacteriile fotosintetizatoare verzi i la unele cianobacterii invaginaiile cu funcie de fotosintez nu sau observat, aceast funcie este realizat de membrana plasmatic. Structurile fotosintetizatoare de cele mai multe ori pstreaz legtura cu membrana plasmatic, doar pentru cianobacterii se afirm c n unele cazuri aceste structuri au devenit independente.

Mezosomii - reprezint invaginri neregulate ale membranei plasmatice. La organismele eucariote asemenea structuri nu se ntlnesc. Din punct de vedere morfologic, exist trei tipuri de mezosomi, interconvertibili: Lamelari formai prin plierea membranei plasmatice invaginate n form de spiral sau ghem;Tubulari de forma unor tubuoare lungi;

Veziculari sau saciformi sub forma unor vezicule aproape sferice. Mezosomii au caracteristicile structurale ale membranei plasmatice din care deriv. Sunt mai numeroi i mai bine dezvoltai la bacteriile Grampozitive. Dei rolul exact al mezosomilor nu este cunoscut, se accept implicarea lor n metabolism i procesul multiplicrii. Ei stimuleaz formarea septumului tansversal n timpul diviziunii, fixarea ADN-lui bacterian de membrana plasmatic i apoi separarea acestuia n dou entiti care vor forma materialul nuclear al celulelor fiice. Mezosomii ar fi implicai, de asemenea n sinteza ATP i secreia unor enzime celulare. Se afirm c mesosomii nu sunt structuri obligatorii sau permanente, ei apar sau dispar dup caz, mrind suprafaa de lucru a membranei plasmatice cnd este nevoie. Sunt i alte structuri membranare, de exemplu membrana extern a celulelor Gram-negative care se deosebete ca componen de membrana plasmatic sau reelele de membrane care se ntlnesc la unele bacterii azotfixatoare i care se deosebesc de mezosomi

5.3 CITOPLASMA I INCLUZIUNILE EI

Citoplasma bacterian este considerat ca un sistem coloidal complex care se afl n interiorul celulei. Partea omogen a citoplasmei format din acizi nucleici, enzime, produsele de reacie i substratele acestor reacii, ap i sruri minerale, se numete citozol. Fizic, citozolul se comport ca un gel, n care elementele componente i pstreaz poziia, n lipsa unor cureni citoplasmatici. Alt parte a citiplasmei include membrane intracelulare (dac sunt prezente), aparatul genetic, ribozomii, vacuole i tot felul de incluziuni. Citoplasma conine o cantitate mare de ARN, care i confer proprieti bazofile, mai ales la celulele tinere. Ribosomii - reprezint elemente de baz ale structurii citoplasmei, n care apar ca mici granule relativ sferice, cu dimensiuni cuprinse ntre 10-20 nm. n faza de cretere activ a celulei bacteriene numrul lor poate fi cuprins ntre 15000-100000. Numele lor deriv de la acidul ribonucleic, prezent n procent ridicat n particulele ribozomale. Ribozomii sunt alctuii din dou subuniti diferite ca dimensiune i vitez de sedimentare subunitatea mare (50S) i subunitatea mic (30S), care se asambleaz spontan. Ribosomii la procariote (tip 70S) se deosebesc de

ribosomii eucariotelor (80S). Ambele tipuri de ribosomi dar i ambele subuniti conin att proteine ct i ARN-ribozomal. Din punct de vedere chimic ribozomii sunt alctuii din acid ribonucleic (65-75%) i proteine (30-35%). Acidul ribonucleic se prezint sub trei tipuri, deosebite prin constantele de sedimentare: 23S, 16S, 5S. proteinele i acizii sunt strns asociate, ceea ce face dificil disocierea i izolarea lor. La celulele aflate n faza de cretere activ, ribozomii se asociaz n grupuri numite polizomi sau poliribozomi.

Semnificaia biologic a ribozomilor se remarc n traducerea informaiei genetice preluate de la ADN, prin intermediul ARN-mesager i ordonarea aminoacizilor ce vor alctui viitoarele proteine. Prin aceast activitate ribozomii i n primul rnd poliribozomii sunt rspunztori de sinteza moleculelor proteice, ce reprezint elementele fundamentale n structura i metabolismul celular. Incluziuni citoplasmatice - n categoria incluziunilor sunt cuprinse o serie de substane inerte depuse n citoplasma celulei, cu rol de substane de rezerv. n funcie de natura lor, ele se grupeaz n trei clase mai importante: Incluziuni de polimeri organici. n aceast clas intr incluziunile polizaharidice (glicogen i amidon) i cele de acid poli--hidroxibutiric, ultima fiind ntlnit numai la organismele procariote. o Incluziuni de polimeri minerali. Aici intr incluziunile de volutin, formate din polifosfai minerali, avnd aspectul unor granulaii sferice, cu diametrul de pn la 0,5 nm. o Incluziuni minerale (de sulf). Acestea se ntlnesc la dou grupe de bacterii sulfuroase: 1. Bacteriile fotosintetizante purpurii, care utilizeaz H2S ca donator de H, acumulnd sulful n interiorul celulei; 2. Bacteriile sulfuroase filamentoase, incolore, la care H2S reprezint o surs de energie oxidativ, iar sulful se acumuleaz n celul sau ntr-o teac ce nconjoar trichomele (lanurile) celulare.
o

Incluziunile sunt legate de activitatea celulei bacteriene i reprezint, n majoritatea cazurilor, materiale de rezerv. n absena unor surse exogene de energie, microorganismele utilizeaz rezervele de energie intracelulare. n citoplasm se desfoar procesele metabolice de baz ale celulei, n cursul crora sursele de hran i energie preluate din mediu sunt transformate n elemente de structur celular, substane de rezerv sau reziduale.

Vacuolele - sunt structuri relativ sferice, cu diametrul de 0,3-0,5 m, mai slab refringente dect citoplasma, nconjurate de un nveli lipoproteic unistratificat de 0,3 nm grosime numit tonoplast, ce apar n celul n faza ei de cretere activ. Numrul lor variaz ntre 6-20, n funcie de compoziia mediului de cultur. n funcie de coninut se cunosc dou categorii de vacuole: cu suc celular i cu gaze. Vacuolele cu suc celular conin diferite substane organice i minerale solvite sau picturi lipidice. Vacuolele cu gaze sunt ntlnite la bacteriile imobile fotosintetizante i au o form n general alungit. Dup unii cercettori vacuolele reprezint o structur permanent a celulei, numit vacuom cu rol vital n viaa acesteia. Dup alii vacuola este o structur temporar care apare sub influena condiiilor de mediu. Vacuolele ar ndeplini rolul de reglatori ai presiunii osmotice n raport cu mediul extern, precum i pentru depozitarea unor substane de rezerv n perioada premergtoare formrii incluziunilor. Ele acumuleaz din celul o serie de produi toxici rezultai n procesele metabolice, pentru evacuarea lor ulterioar n mediu.

Magnetosomii - se ntlnesc la unele bacterii acvatice apar n interiorul cellei o serie de incluziuni care conin fier i determin o anumit orientare i deplasare a acestora, sub influena cmpurilor magnetice slabe. Ele au fost descoperite de Blakemore n 1975, iar bacteriile ce conin asemenea incluziuni au primit denumirea de magnetotactice. Magnetosomii sunt grupai n 1-2 lanuri intracelulare, formate din 5-41 de particule, care au forma unor cuburi cu coluri rotunjite sau octaedre cu

dimensiuni de 40-100 nm. Ei sunt alctuii dintr-o zon central bogat n fier, nconjurat de un strat transparent clar, cu grosimea de 1,6 nm i unul electronoopac de 1,4 nm. Fierul se prezint sub forma oxidat de magnetit. Toate bacteriile care conin magnetosomi sunt Gram-negative, au pili sau glicocalix pentru a favoriza fixarea de substrat. Magnetosomii acioneaz ca o busol biomagnetic, asigurnd orientarea pozitiv i deplasarea bacteriilor n cmpurile magnetice.

6.1 STRUCTURA APARATULUI GENETIC LA PROCARIOTE

Structura aparatului genetic al procariotelor mult timp a fost obiectul unor discuii aprinse ntre specialiti. Era cunoscut c materialul genetic const din ADN ca i la eucariote, dar spre deosebire de acestea procariotele nu aveau un nucleu propriuzis. La procariote aparatul genetic este mai compact i ocup o naumit poziie n citoplasm, de care nu este delimitat prin membran cum se ntimpl la eucariote. Aparatul genetic al procariotelor deregul se numete nucleoid. La microscopul electronic se observ c nucleoidul n ciuda lipsei membranei nucleare este delimitat de citoplasm, i format din fire de ADN de diametru 2 nm. Nucleoidul ocup de obicei partea central acelulei. Toat informaia genetic (obligatorie) se conine ntr-o singur molecul de ADN, circular care se numete cromozomul bacterian. Lungimea acestei molecule despiralizate poate atinge 1 mm, ceea ce depete de 1000 ori

lungimea celulei bacteriene. Pentru ca s fie mai compact cromozomul bacterian are cteva (20-100) anse superspiralizate. Dimensiunile i masa cromozomului bacterian variaz mult de la un microorganism la altul. LaMycoplasme care sunt cele mai mici microorganisme, se intilnete cel mai mic cromosom (0,5 x109 Da), iar la cianobacterii cel mai mare (8,5 x109 Da). Cu toate c fiecare celul procariot are un singur cromosom n cazul dividerii rapide sau influena antibioticelor sau altor factori stresani se pot observa 2 i mai mui cromozomi ntr-o celul, dar odat cu revenirea la normal acest numr se reduce pn la unu. la eucariote molecula de ADN este asociat cu proteine histone care neutralizeaz sarcinile negative ale grupelor fosfat i ajut la compactizarea moleculei de ADN. La marea majoritatea a procariotelor nu s-au identificat proteine histone, iar funcia de neutralizare o au poliaminele (spermin i spermidin) i Mg2+. Raportul cantitativ de baze azotate complimentare A+T i G+C n molecula de ADN este o valaore constant pentru o specie anumit, deacea este un criteriu important de clasificare. Replicarea moleculei de ADN are loc nainte de diviziunea celular, dup metoda semiconservativ. Adic mai inti se despart cele dou catene de ADN iar mai apoi ele sunt folosite ca matrice pentru catenele formate "de novo". Sa stabilit c replicarea ADN-ului se ncepe de la punctul de contact dintre cromosom i membrana plasmatic, i continu n ambele direcii. Aceasta se explic prin faptul c n acest punct se afl enzimele care asigur replicarea. Cele dou copii fiice ale cromozomului rmn o vreme fixate de membrana plasmatic. Deregul odat cu replicarea cromozomului are loc i sinteza membrane care desparte celula n dou celule fiice, atfel ca fiecrei si revin cte o copie a moleculei de ADN.

Uniti structurale ale genomului bacterian - neobligatorii sunt: 1) Segmente - IS; 2) Transpozoni; 3) Plasmide. Segmente IS sunt segmente scurte de ADN care nu conin gene structurale, dar conin doar gene responsabile de transpozare. Transpozarea reprezint proprietatea de a se mica dealungul cromozomului i a se insera n difeite locuri, ceea ce poate modifica expresia anumitor gene.

Transpozoni - sunt segmente de ADN mai mari dect segmentele IS, dearece ei conin i gene structurale, la fel au capacitatea de a se deplasa dealungul cromozomei. Spre deosebire de segmentele IS, transpozonii pot exista i autonom - n afara comozomului dar nu se pot replica n acest caz. Plasmidele - reprezint o molecul circular de ADN extracromozomial, care codific proprieti suplimentare, i pot aduce un avantaj selectiv celulei. Plasmidele sunt capabile s se replice autonom, independent de cromozomul bacterian. datorit acestui fapt plasmidele pot provoca procesul deamplificare atunci cnd se replic de mai multe ori i amplific expresia caracterului pe care l codific. Plasmidele nu sunt indispensabile pentru celulele bacteriene. Dac nlturm plasmidele celulele rmn vii. n aceai celul se pot gsi mai multe tipuri de plasmide. n dependen de caracterele codificate deosebim urmtoarele tipuri de plasmide: 1) Plasmidele R. Asigur rezistena la chimiopreparate i antibiotice, pot codifica enzime care distrug chimiopreparatele, sau pot schimba permiabilitatea membranelor; 2) Plasmidele F. Codific "sexul " bacterian. Convenional celulele "masculine" (F+) conin plasmida F, iar cele "feminine" (F) nu conin aceast plasmid. Aceast plasmide porticip la procesul de schimb genetic numit conjugare. 3) Plamide Col. Codific sinteza bacteriocinelor. Bacteriocinele sunt substane bactericide care omoar sau stopeaz dezvolratea bacteriilor nrudite care pretind la aceeai surs de hran. 4) Plasmide Tox. Codific sinteza exotoxinelor cu efect similar cu cel al bacteriocinelor; 5) Plasmide de biodegradare. Codific sinteya enzimelor capabile s descompun substane noi xenobionte.

6.2 REPRODUCEREA BACTERIILOR

Reproducerea sau nmulirea bacteriilor reprezint creterea numrului de indivizi ntr-o populaie. Bacteriile se nmulesc prin diviziune direct Creterea celulei bacteriene de obicei este limitat de diviziune celular. Pentru marea

majoritate a procariotelor este caracteristic diviziunea direct transversal, n urma crea se obin 2 celule identice. La majoritatea bacteriilor G+ i la cianobacterii diviziunea are loc prin sinteza membranei transversale care se formeaz de la periferie spre centru, Aa de exemplu la Bacillus subtilis la ecuatorul celulei are loc mai nti invaginri inelare a membranei plasmatice i formri de mezosomi de cele mai diverse forme. Membranele acestor mezosomi formeaz cu timpul membrana transversal care separ citoplasma celor 2 celule i tot aceti mezosomi particip la sinteza peptidoglicanului i altori componeni ai peretelui celular.

Celulele majoritii bacteriilor G- se divid prin strangulare, La Escherichia coli de exemplu celula se stranguleaz la mijloc cele dou pri ndeprtnduse una de alta. Una din modificrile diviziunii directe este nmugurirea, n acest caz la unul din capetele celulei mam se formeaz o mic excescen (mugure), care crete cu timpul, pn atinge dimensiunile celulei materne apoi se desprinde de ea.

Peretele celular al mugurelui se formeaz din nou n ntregime. n cazul diviziunii binare simetrice se formeaz din celula mam dou celule fiice identice, iar celula mam dispare. Dar n cazul nmuguririi celula mam formeaz celula fiic care se poate deosebi morfologic i fiziologic de ia. nmugurirea se ntlnete la diverse grupe de procariote foto- i chemotrofe. Pentru unele grupe de cianofite este specific diviziunea multipl, care ncepe cu replicarea repetat a cromozomului i creterea volumului celulei mam. Apoi n interiorul celulei mam se formeaz "de novo" perete celular n jurul fiecrui cromozom nou format, astfel obinnduse cteva celule fiice n interiorul celulei mam. Eliberarea acestor celule poate avea loc doar prin ruperea peretelui celulei mam.

Diviziunea celulelor procariote ncepe de regul dup scurt timp de la replicarea ADN-ului cromozomial, dar pn n prezent nu se cunoate exact mecanismul interrelaieii dintre aceste dou procese.

6.3 SPOROGENEZA LA BACTERII

Un grup restrns de bacterii au dobndit n timp capacitatea genetic de a forma ntr-un anumit stadiu al ciclului lor de via, o formaiune intracelular denumit endospor, care asigur perpetuarea speciei datorit rezistenei mari la temperaturi ridicate i la lipsa de ap.

Dup capacitatea de sporogenez bacteriile se clasific n dou grupuri mari: - asporogene, care se reproduc numai prin diviziune direct (sciziune) i sunt n form vegetativ - sporogene, care se pot ntlni fie n forma lor vegetativ, form n care se reproduce prin sciziune pn cnd n mediu apare un factor defavorizant, de obicei epuizarea unui nutrient necesar, atuci se induce formarea sporului. Bacteriile sporogene, incluse n clasificarea general n familia Bacillaceae, formeaz intraceluiar un singur endospor; de aceea, sporularea este considerat ca o form de rezisten a celulei i nu o form de nmulire. Etape de formare a endosporilor. n ciclul de viaa al unei bacterii sporogene, n condiiile apariiei unor factori defavorizani ai nmulirii, celula vegetativ sufer anumite transformri direcionate de cele peste 50 de gene care induc,sporularea. ntr-o prim etap are loc o concentrare a materialului citoplasmatic i nuclear, apoi n celul ncepe s se formeze un protoplast, iar membrana plasmica nconjoar celula sporal asigurnd condiii de protecie i cretere. n etapa urmtoare, n jurul celulei sporale, se formeaz cortexul, apoi nveliul sporal propriu-zis. Endosporul matur poate fi pus n libertate prin solubilizarea peretelui celulei sporogene. Endosporul eliberat, n condiii favorabile, germineaz transformndu-se din nou n celul vegetativ, capabil de reproducere. n funcie de dimensiunile endosporului i de localizarea sa n celula de tip bacterium,sporii bacterieni pot fi de 2 tipuri:
o

tip bacillus, n care diametrul endosporului este apropiat cu al celulei, cu o poziie central sau subterminal (n fig. 6.1; 1,2); tip clostridium, n care diametrul endosporului este mai mare dect al celulei vegetative; celula n urma sporulrii se deformeaz i capt forma de suveic, atunci cnd poziia endosporului este central, sau de beclumnare, atunci cnd endosporul este format terminal. (fig. 6.1; 3,4,5,6)

Fig 6.1 Poziia i forma endosporului

Structura i proprietile endosporilor bacterieni. Cu ajutorul microscopului electronic s-a stabilit c endosporul prezint un nveli sporal tristratificat, n compoziia cruia au fost evideniate proteine cu un procent ridicat n aminoacizi cu sulf, care pot forma uor legturi disulfidice, cu rol n mrirea rezistenei la denaturarea pe cale termic. Sub nveliul sporal se constat o zon transparent - cortex, de natur peptidoglucanic, ce asigur o rezisten mecanic i are rol important n reglarea presiunii osmotice. Partea central a endosporului denumitcore" (miez) este format din: sporoplasm, nucleoplasm i un numr mare de ribozomi. n exteriorul endosporului se pot pune n eviden microtubuli ce menin endosporul ntr-o anumit poziie. Carcasa celulei vegetative n care s-a format endosporul poart denumirea de exosporium i acesta poate rmne ataat de endospor sau prin rupere sau liz s l elibereze n mediu. Prin studiul microscopic al bacteriilor sporogene, n frotiu, formele vegetative apar uniform colorate, n timp ce la formele sporulate endosporul este incolor, iar colorantul este prezent nexosporium. n endospor au loc importante modificri de compoziie i activitate metabolic comparativ cu celula vegetativ, nainte de sporulare. Din punct de vedere fizic, endosporul ocup 1/7-1/17 din volumul celulei vegetative, iar masic aproximativ 1/3 din cea a celulei productoare. n endospor, cantitatea de ap se reduce de la 80 la aproximativ 15%.Forma n care se gsete apa n endospor este cea de ap legat de diferite componente structurale, ap care nu favorizeaz reaciile biochimice. Datorit lipsei de ap liber, enzimele sporale sunt inactive, iar din punct de vedere metabolic endosporul se afl n stare de anabioz. n endospor este prezent n concentraie ridicat o substan specific - acidul dipicolinic, care prin cele dou grupri carboxilice formeaz cu uurin chelai cu ionii de calciu i magneziu. Se consider c aceste modificri arhitecturale n structura sporoplasmei contribuie la proprietile deosebite ale bacteriilor sporogene. O proprietate remarcabil a endosporilor este termorezistena. n timp ce celula vegetativ este inactivat termic la temperaturi de 80C/1-5 min, ca urmare a denaturrii proteinelor/enzimelor din citosol, sub form de endospori inactivarea

poate avea loc la temperaturi de 120C/10-20 min, n mediu umed, sau la 180C/45-60 min, n mediu uscat.Termorezistena este explicabil prin coninutul redus n ap, prezena proteinelor cu sulf i a acidului dipicolinic, compui care protejeaz enzimele sporale, n anumite limite, de o inactivarea ireversibil. O alt proprietate important este rezistena la uscciune, deoarece n stare de anabioz, enzimele i menin calitatea de biocatalizatori un timp ndelungat, prelungind starea latent de via a celulelor sporale (zeci/sute de ani). n condiii favorabile sau prin reactivare prin nclzire la 60C/10 min, are loc germinarea sporilor. Se produce o absorbie a apei, are loc activarea enzimelor, crete activitatea de respiraie i fermentaie i sunt eliminate substane specifice cum ar fi acidul dipicolinic i unele peptide. Se formeaz tuburi germinative n poziie polar i celula vegetativ rezultat are caracterele genotipice originare. Sporularea reprezint un caracter de specie, este o form de difereniere celular i trebuie privit ca o strategie de adaptare a procariotelor, deoarece sporii sunt forme de rezisten ce pstreaz caracterele genetice ale celulei sporogene.

6.4 VARIABILITATEA BACTERIILOR

MECANISMELE DE VARIABILITATE BACTERIAN Variabilitatea bacterian presupune apariia, la un moment dat, a unor modificri n caracterele celulei bacteriene sau a descendenilor si. Exist dou variante de variabilitate: fenotipic i genotipic. Variabilitatea fenotipic: reprezint modificri morfologice sau fiziologice de tip adaptativ. n acest caz genomul nu este afectat i modificrile aprute sunt reversibile i nu se transmit descendenilor. Variabilitate genotipic: reprezint modificri aprute brusc, definitive ale materialului genetic cromozomial sau extracromozomial. Variaia genotipic determin modificarea unuia sau a mai multor caractere ale unei bacterii i se transmite descendenilor. Mecanismele prin care apar variaiile genotipice sunt: mutaia sau transferul genetic urmat de recombinare genetic. 1. Mutaia: Const n schimbri ale mesajului genetic aprute ca urmare a unor modificri accidentale n secvena nucleotidic a unei gene. Mutaiile pot aprea prin substituii la nivelul materialului genetic, inserii, inversii, deleii.

Mutaia spontan mutaia care apare n condiii de mediu obinuite fr a se putea identifica intervenia unui factor. Mutaia indus mutaia care se produce sub aciunea unor factori fizici (raze UV, radiaii ionizante etc.) sau chimici (agenii alchilani, colorani etc.). Factorii care induc mutaia se numesc ageni mutageni. Rata mutaiilor induse este mult mai mare dect rata mutaiilor spontane. Mutaia punctiform este alterat un singur nucleotid; Mutaia extins sunt alterate mai multe nucleotide, afectnd secvene mai mari ale uneia (monogenic) sau mai multor gene (mutaie poligenic). Mutaie nainte afecteaz tulpina slbatic ducnd la pierderea unu caracter metabolic esenial. Mutaie regresiv afecteaz celula bacterian mutant. Const n restabilirea secvenei nucleotidice originare ceea ce face ca bacteria s revin la caracteristicile iniiale. Astfel de mutaii se mai numesc i retromutaii. Mutaie supresoare cu toate c are loc o modificare a secvenei bazelor nucleotidice gena afectat si exprim funcia pe care o exprima i anterior modificrii suferite. 2. Transferul de material genetic de la o bacterie donor la o bacterie acceptoare de material genetic se poate realiza prin transformare, transducie sau conjugare. ADN-ul donat de celula F+ se numeste exogenot iar ADN-ul bacteriei receptoare se numeste endogenot.
o

Transformarea - este procesul prin care bacteria acceptoare dobndeste un fragment de ADN din exterior provenit de la alt bacterie distrus sau de la plasmide eliberate n exterior. Acest ADN extern poate nlocui prin recombinare genetic o secven nucleotidic omolog. Bacteria acceptoare dobndeste astfel un caracter genetic nou. Transducia transferul unui fragment genetic cromozomal sau extracromozomal de la o bacterie la alta prin intermediul unui bacteriofag. Fagul de numeste fag transductor iar celula bacterian acceptoare se numeste transductant. n cursul maturrii sale fagul intracelular poate ncorpora un segment din genomul celulei bacteriene. Exist: transducie restrictiv (transducie specializat) fagul transductor transfer un numr mic de gene aflate n imediata apropiere a situsului de legare a profagului n cromozomul bacterian; i transducie nerestrictiv (transducie generalizat) oricare

din genele cromozomului, indiferent de poziia lor, pot fi ncorporate accidental n structura fagului matur care le poate transmite altor bacterii acceptoare. Acest tip de transducie poate fi realizat de un numr mare de fagi neintegrai n cromozomul bacterian atunci cnd intr n ciclul litic.
o

Conjugarea - este procesul de transfer al materialului genetic cromozomial sau extracromozomial prin intermediul unei legturi intercelulare numit pil de conjugare sau punte de legtur. Acest pil este codificat de factorul F care trebuie s fie prezent n celula bacterian donatoare. Alt condiie necesar pentru procesul de conjugare este aceea ca att bacteria donoare ct si cea receptoare s posede receptori de suprafa care s permit recunoasterea reciproc. Dup un numr de ciocniri ntmpltoare, bacteriile F+ si F- formeaz perechi de recombinare ntre ele formndu-se un canal de conjugare. Prin acest canal se transfer material genetic de la celula "mascul"(F+) la celula "femel" (F-). Materialul transferat poate fi apoi integrat par'ial sau total n genomul celulei receptoare conferind acesteia noi caractere care se pot sau nu manifesta.

7.1 METABOLISMUL PLASTIC LA PROCARIOTE

Viaa procariotelor se rezum n reproducerea continu a proprieii biomase. Totalitatea proceselor care asigur aceast cretere a biomasei se numete schimb de substane sau metabolism. Pentru desfurarea normal a proceselor metabolice bacteriile au nevoie de o serie de substane nutritive care s acopere dou necesiti vitale: elementele chimice necesare pentru sinteza constituenilor celulari i activitatea enzimatic pe de o parte (Metabolism plastic), i substanele necesare pentru producerea de energie util pe de alt parte (Metabolism energetic). Metabolismul plastic (anabilism, biosintez) - reprezint o serie de reacii consecutive, n rezultatul crora, din substane exterioare se formeaz substanele proprii ale celulei. Metabolismul plastic ntotdeauna este consumator de energie liber nmagazinat n moleculele de ATP sau alte substane macroergice. Att cile metabolismului plastic ct i cele ale metabolismului energetic constau dintr-un numr mare de reacii care pot fi delimitate formal n 3 etape:

1. Etapa primar sau periferic - n care se acioneaz asupra substanelor care constituie substratul primar. 2. Etapa intermediar - include mai multe reacii enzimatice care duc fa formarea substanelor intermediare 3. Etapa final - se formeaz produsul final care, n metabolismul plastic se folosete pentru construcia celulei iar n metabolismul energetic se elimin n afara celulei Reaciile celor dou tipuri de metabolism de cele mai multe ori decurg concomitent, i sunt strns legate ntre ele, mai ales la procariote. Interrelaia dintre metabolismul plastic i cel energetic se identific cel mai bine la nivelul dependenei proceselor de biosintez de energia produs de metabolismul energetic. Dar sunt i alte interrelaii, de exemplu: pentru multe reacii de biosintez este necesar afluxul unor substane care ar servi ca reductori (cedeaz electroni), aceste substane pot fi generate de metabolismul energetic. i n final ambele ci metabolice pot avea la anumite etape aceai compui (amfibolii), ceea ce este comod dearece aceleai substane pot fi utilizate n cele mai diverse reacii biochimice. n general metabolismul procariotelor se deosebete prin diversitatea extrem de mare, ceea ce permite acestor organisme s folosesc n calitate de substarat nutritiv cele mai diverse substane. Aceasta se datoreaz i diversitii enzimelor din etapa primar care sunt capabile s transforme marea diversitate de substraturi n compui intermediari, care la rndul lor nu sunt att de diveri. Monomerii necesari pentru construcia substanelor celulare de baz pot i sintetizai de celul sau pot ptrunde n ea din exterior.

7.2 TIPURI DE NUTRIIE LA PROCARIOTE

Procesul de nutriie la bacterii este destul de specific i se cararcetrizeaz prin difuzia elementelor nutritive prin toat suprafaa corpului i prin viteza mare a metabolismului i a adaptrii la condiiile noi de via. Rspndeirea foarte larg a procariotelor n mare parte se datoreaz diversitii mari de tipuri de nutriie la ele. Totui la nivel de elemente cele mai importante pentru bacterii sunt: carbon, azot, fosfor, sulf, potasiu .a. Sursele de Carbon. n metabolismul plastic cel mai important element este carbonul, deaorece marea majoritate a compuilor din care sunt formate organismele vii sunt compui ai carbonului. Procariotele sunt capabile s utilizeze n metabolismul su, practic majoritatea compuilor carbonului. n dependen de sursa de carbon pentru metabolismul plastic, procariotele pot fi devizate n :

Autotrofe - organisme capabile s sisntetizeze toate componentele celulare din CO2 . Bacterii autotrofe sunt: bacteriile nitritificatoare- din sol; sulfobacteriile - din apele bogate n H2S, Ferobacteriile- din ape bogate n oxizi de fier; cianobacteriile; .a. Heterotrofe - organisme pentru care ca sursa de carbon servesc cele mai diverse substane organice.

Dac noiunea de autotrof este destul de ngust i clar, atunci noiunea heterotrof este foarte larg i include organisme destul de diferite dup necesitile nutritive. Grupa de organisme heterotrofe de regul se mparte n: 1. Parazii intracelulari obligatorii - organisme parazite care pot trii doar n interiorul celulelor vii. La aceste procariote datorit vieii parazitare sau redus anumite ci metabolice ceia ce lea fcut dependente total de metabolismul celulei gazd. De regul sunt bacterii patogene pentru om, animale i plante ( Exemplu: Rickettsia, Chlamydia, Mycobacterium, - nu pot fi cultivate pe medii artificiale.) 2. Parazii facultativi - sunt bacterii condiionat patogene care pot fi cultivate n afara celulei gazd dar mediile de cultur sunt destul de complexe (ele conin vitamine, aminoacizi, diverse peptide, .a.). 3. Saprofii - sunt organisme care nu depind direct de alte organisme vii dar au nevoie de substane organice deja existente. Aceste organisme pot folosi produsele de excreie a altor organisme sau descompun esuturi animale i vegetale moarte. Cerinele fa de substrat la bacteriile saprofite sunt foarte variate, unele bacterii pot crete doar pe substrate complexe (lapte, animale moarte) adic ele au neaprat nevoie de glucide, peptide, proteine, vitamine, nucleotide sau baze azotate i pentoze penru sinteza lor. Dar exist i saprofite care au nevoie doar de un numr minim de compui organici mai ales unii aminoacizi i unele vitamine pe care nui pot sintetiza. i n sfrit exist bacterii care au nevoie doar de un singur compus organic ca surs de carbon (de regul un alcool, aminoacid sau glucid). De exemplu bacteriile din genulPseudomonas pot folosi ca surs unic de carbon circa 200 de compui organici, iar Bacillus fastidiosus doar acidul uric, i nimic altceva. Astfel de organisme au un sistem biosintetic att de perfect n ct le permite s i sintetizeze absolut toate substanele necesare. Dar organismele heterotrofe pot fi clasificate i dup cantitatea de substan organic prezent n substrat:

Oligotrofe - sunt bacterii de regul acvatice, care sunt capabile s creasc n mediu cu concentraie mic a nutrienilor (1-15 mg de carbon organic/l). De regul concentraii mai mari de substane nutritive sunt nocive pentru astfel de organisme. Copiotrofe - Sunt bacterii care pentru o dezvoltare normal au nevoie de concentraii mari de substane organice n mediu ( circa 10g de carbon organic/l).

n dependen de substana care servete ca donor de electroni ori protoni de H (reductor), microorganismele por fi grupate n:
+

Litotrofe - care utilizeaz n calitate de reductor substane anorganice (H2O, H2S, .a.) o Organotrofe - utilizeaz n calitate de reductor substane organice. Dup sursa de energie utilizat microorganismele pot fi:
o

Fototrofe - utilizeaz ca surs de energie lumina, care de fapt sunt capabile de fotosintez (cianobacteriile, .a.) o Chemotrofe - utilizeaz energia eliberat n urma reaciilor chimice, ferobacteriile, .a.) Serse de Azot. Azotul ca i carbonul i oxigenul este absolut necesar oricrui organism viu. El constituie circa 10 % din masa uscat a bacterieii. Marea majoritate a bacteriilor utilizeaz forme reduse de azot (sruri de amoniu, urea, aminoacizi i peptide), dar i forme oxidate (nitrai). Dar nitraii odat nimerii n celul trebuie s fie redui la amoniac (NH3) care intr n compuii organici. Reducerea nitrailor (NO3-) pn la amoniac se realizeaz cu ajutorul a dou enzime specifice; nitrat- i nitritreductaza. Nitratreductaza catalizez reducerea (transmiterea pe NO3- a doi electroni) nitrailor pn la nitrii:
o

NO3- + NAD.H2 NO2- + NAD+ + H2O Iar nitritreductaza asigur trecerea a 6 electroni la nitrii (NO2- ) pn la formarea NH3 NO2- +3NAD.H2 + H+ NH3 + 3NAD+ + 2H2O i unii compui organici ca urea tot sub aciunea enzimelor sunt transformate n amoniac.

Alt surs de azot accesibil dor pentru unele procariote este azotul atmosferic (N2) care la fel este redus pn la amoniac. Surse de sulf i fosfor. Sulful ntr n componena unor amonoacizi (metionin, cistein), vitamine i cofactori (biotin, Coenzima A, .a.), iar fosforul intr n componena acizilor nucleici, fosfolipidelor, cofermenilor. n natur gasim sulful n form de sruiri anorganice (sulfai) i substane organice. Majoritatea microorganismelor folosesc ca surs de sulf sulfaii care se reduc pn la sulfii (SO3-). Principala surs de fosfor n natur este fosfatul (PO43-) care spre deosebire de ali ioni anorganici nu sufer transformri n celul,el doar este alipit (fosforilare) sau dezlipit (defosforilare) de la diferite molecule organice. Sursa de ioni de metale. Toate procariotele au nevoie de ioni de metale, n cantiti mai mari (Mg, Ca, K, Fe) sau mai mici ( Zn, Mn, Na, Mo, Co, V, .a.). Rolu acestor metale const n includerea lor n diverse enzime, pigmeni i cofactori, Factorii de cretere. Unele procariote au neaprat nevoie de un anumit compus organic (vitamine, aminoacizi, compui ai azotului) pe care din anumite motive nu pot sl sintetizeze singure. Astfel de substane se numesc factori de cretere. Organismele care au nevoie de astfel de factori de cretere se numesc auxotrofe. ear cele care i pot sintetiza toate substanele necesare se numesc prototrofe

7.3 SINTEZA COMPONENTELOR CELULARE DE BAZ LA PROCARIOTE

Practic toate substanele organice din celulele procariote fac parte din polizaharide, proteine, acizi nucleici i lipide, care cu excepia lipidelor sunt polimeri. Polimerii sunt molecule organice mari, formate din una sau mai multe tipuri de molecule mai mici (monomeri) care se repet de mai multe ori formnd molecule gigantice. Sinteza polimerilor de regul este precedat de sinteza monomerilor, n cazul n care aceti monomeri nu sunt obinui din mediul. Vom examina pe scurt sinteza principalilor compui organici ai celulei. Biosinteza glucidelor. n celulele procariotelor, ca de altfel i a eucariotelor cele mai utilizate glucide sunt pentozele (cu 5 atomi de carbon n molecul)

i hexozele (cu 6 atomi de carbon). La majoritatea bacteriilor autotrofe, care au ca surs de carbon doar CO2, sinteza glucidelor are loc prinCiclul Calvin (ciclu pentozofasfat). La procariotele heterotrofe care utilizeaz ca surs de carbon compui organici cu 3-4 atomi de carbon, este nevoie de reacii suplimentare. De regul n aceste situaii se folosesc reaciile similare cu cele catabolice (de descompunere), dar sunt i reacii enzimatice specifice care permit n final, sinteza glucidelor necesare. Unele bacterii pot sintetiza monomeri ai glucidelor din amin

oacizi, glicerin, acid lactic .a. Asemenea reacii sunt originale i se ntlnesc doar la procariote. Biosinteza lipidelor. Lipidele de fapt nu sunt polimeri, dar tot sunt compuse din molecule de acizi grai, glicerin i grupe fosfat (n cazul fosfolipidelor) sau alte componente. Lipidele n celulele proceriote sunt componentele de baz a membranelor, i peretelui celular, sunt substane de rezerv, servesc ca componente ale fotosistemelor i lanurilor transportatoare de electroni. n structura majoritii lipidelor la eubacterii intr acizi grai cu 14-18 atomi de carbon n caten (C14- C18), care se sintetizeaz prin alipirea consecutiv la grupa iniial a atomilor de carbon pn la completarea catenei. La bacterii acizii grai sunt ori saturai (far legturi duble) ori mononesaturai (cu o singur legtur dubl), doar la cianobacterii sau identificat acizipolinesaturai. Legtura dubl care modific forma spaial a catenei de acid gras este format prin eliminarea din caten a unei molecule de ap (reacie de dehidratare). Sinteza acizilor grai la procariote ncepe cu aldehida fosfogliceric (care este un

component intermediar la descompunerea glucozei), care se transform n 3fosfogicerin la care se pot anexa catene de acizi grai i alte substane. Biosinteza aminoacizilor. Aminoacizii sunt monomerii proteinelor, fr care nu ne putem imagina viaa. Majoritatea procariotelor sunt capabile s-i sintetizeze desinestttor toi aminoacizii necesari, avnd ca precursori un numr mic de glucide obinute ca substane intermediare n diverse alte reacii biochimice. Alipirea direct la molecula unor acizi organici a amoniacului duce la formarea aminoacizilor. De exemplu la alipirea NH3 la acidul -cetoglutaric se formeaz aminoacidul - glutamic. Dar de cele mai multe ori totui este nevoie de un numr mare de reacii pentru a forma un aminoacid. O prioritate este c pentru sinteza celor 20 de aminoacizi ntlnii n proteine, procariotele utilizeaz doar 6 ci metabolice. Adic civa acizi se fabric pe aceai "linie tehnologic". Majoritatea acizilor se formeaz prin reacia de transaminare - adic transmiterea grupei NH2 de la acidul glutaric la alt acid organic cu formarea unui nou aminoacid. Biosinteza mononucleotidelor. Mononucleotidele sunt monomerii acizilor nucleici care la rndul su sunt formate din o baz azotat specific (adenin, guanin, citozin, timin i uracil), o glucid cu 5 atomi de carbon (riboz sau dezoxiriboz) i o grup fosfat (PO43-). Mononucleotidele mai intr i n componena cofermenilor, vitaminelor i ATP-ului. Multe bacterii pot sintetiza nucleotidele necesare dar le pot absorbi i din substart datorit enzimelor specifice care pot descompune acizii nucleici coninui n resturile organice sau n celulele vii.

7.4 ETAPELE CRETERII BACTERIILOR

n urma nutriiei bacteriilor i a activitilor lor de metabolism are loc crestereacelulei bacteriene ca mrime i ca mas. ntruct cresterea volumului celularraportat la cresterea suprafeei este mai mare la un moment dat se ajunge la un punct critic ce impune restabilirea echilibrului optim ntre cele dou variabile. Acest lucru se realizeaz prin diviziune binar, mecanismul de nmulire pentru majoritatea bacteriilor. nmugurirea sau ramificarea este caracteristic unui numr foarte mic de specii bacteriene. Pentru c bacteriile sunt prea mici cresterea este studiat la nivel de populaie bacterian i nu la nivel de celul. Prin urmare cnd vorbim de cresterea bacterian facem referire la cresterea numrului de celule ntr-o populaie bacterian si nu la mrimea celulei bacteriene.

nsmnate n mediu adecvat, incubate la 37 C, urmrite din or n orbacteriile vor urma 4 faze caracteristice ale multiplicrii populaiei bacteriene:
o

Faza de laten (faza de lag): reprezint perioada de adaptare abacteriilor la condiiile de mediu, perioad n care numrul germenilor rmnenemodificat sau scade. Bacteriile au un metabolism activ de sintez al enzimelorceea ce face ca celula bacterian s creasc n dimensiuni. n aceast faz bacteria este foarte sensibil la ageni antibacterieni. Durata acestei faze este de aproximativ 2 ore, cuprins ntre momentul nsmnrii mediului i momentul n care bacteria ncepe s se multiplice. Faza de crestere logaritmic (faza exponenial): celulele bacteriene ncep s se divid permanent, ritmic. Timpul de generaie n aceast faz este caracteristic pentru o anumit specie: 10 minute pentru V. cholerae, 20-30 minute pentru majoritatea bacteriilor patogene, 18 14 ore pentru M. tuberculosis. Numrul bacteriilor creste n progresie geometric. Bacteriile aflate n faz exponenial au toate caracteristicile speciei: proprieti biochimice i de metabolism, structura antigenic, virulena i toxigeneza sunt tipice speciei respective. Sunt sensibile la aciunea agenilor antibacterieni. Este etapa optim pentru studierea bacteriilor sau pentru recoltarea lor n vederea preparrii de vaccinuri i pentru testarea sensibilitii la antibiotice. Durata fazei este de 8-12 ore. Faza staionar (faza de concentraie "M"): mediul de via devine mai puin favorabil prin consumul substanelor nutritive, acumularea de metabolii toxici. Numrul bacteriilor vii rmne constant prin: - persistena bacteriilor vii, absena multiplicrii datorit epuizrii unui nutrient din mediu (factor limitant al cresterii); - echilibru ntre bacteriile care mor i cele care iau nastere prin diviziune datorit acumulrii de catabolii toxici i a pH-ului mediului. Bacteriile au morfologia caracteristic speciei dar sunt mai puin sensibile la aciunea agenilor antibacterieni. n aceast faz realizm identificarea germenilor. La speciile sporogene ncepe formarea sporilor. Durata acestei faze variaz n raport cu specia i condiiile de cultur, de la o or la cteva zile, pentru unele bacterii poate dura cteva sptmni. Faza de declin: substratul nutritiv srceste, metaboliii toxici sunt n cantitate mare ceea ce face ca bacteriile moarte s depseasc progresiv numrul celor vii, pn la autosterilizarea culturii. n aceast faz

bacteriile prezint modificri morfo-tinctoriale, ale caracterelor biochimice i de metabolism, de virulen i toxigenez. Apar forme de involuie. La bacteriile sporulate fenomenul de sporogenez devine foarte intens. Durata fazei depinde de specia microbian (N. gonorrhoeae 2-3 zile, la M. tuberculosis 2-3 sptmni).