REGLAREA ACTIVITII ENZIMATICE Enzimele care catalizeaz reacii din organismele vii sunt de dou tipuri: - enzime constitutive

se gsesc n cantitate constant n organism i prezint activitate constant indiferent de cantitatea de substrat aflat n mediul de reacie, - enzime inductibile sunt enzime a cror concentraie crete n condiiile creterii concentraiei substratului. Aceste enzime se ntlnesc n ci metabolice i prin intensificarea activitii se evit acumularea substratului n anumite compartimente ale organismului i consecinele negative ale acestei acumulri. Reglarea activitii enzimatice se realizeaz prin: - sinteza de proenzime, - legare covalent, - enzime alosterice. Sinteza de proenzime Se mai numesc i zimogeni i sunt forme inactive ale enzimelor care sunt astfel sintetizate pentru a proteja locul de sintez de aciunea lor nociv sau pentru c sunt greu de sintetizat de novo n momentul ptrunderii substratului n organism sau n celul. Activarea proenzimelor se realizeaz prin hidroliz limitat. Procesele de activare sunt ireversibile i se desfoar n aa fel nct structura de baz a enzimei s se pstreze i s nu fie afectat aciunea sa biologic. Activarea se realizeaz pe cale: - chimic n mediu acid pepsinogenul este hidrolizat cu formarea pepsinei i eliminarea unui fragment de 42 de aminoacizi de la captul N-terminal; - catalitic const n transformarea proenzimei sub aciunea unei enzime. Exemple: activarea n cascad a factorilor coagulrii
F XII (Hageman) F XIIa F IV (Ca2+)

F IV (Ca2+) FV (proaccelerina) F Va (accelerina) F IV (Ca2+) F IIa (trombina)

F II (protrombina)

FI (fibrinogen)

F Ia

fibrina

enterokinaza catalizeaz la nivelul intestinului subire, la pH 8, hidroliza tripsinogenului cu formarea tripsinei. tripsina catalizeaz transformarea chimotripsinogenului n chimotripsin
tripsinogen enterokinaza + tripsina

autocatalitic tripsinogenul este transformat n tripsin sub aciunea primelor molecule de tripsin formate.

Legare covalent Activitatea unei enzime este reglat prin fixarea sau ndeprtarea din centrul activ a unei grupri chimice, ceea ce va determina activarea sau inhibarea enzimei respective. n funcie de natura grupelor care particip la procesul de reglare a activitii enzimei prin legare covelent, aceasta poate fi de tipul: a. fosforilare-defosforilare procesul de fosforilare are loc la nivelul gruprii OH a serinei din centrul activ al enzimei, mai rar la nivelul gruprii OH din treonin sau tirozin. n funcie de tipul enzimei forma fosforilat sau cea defosforilat poate fi activ din punct de vedere catalitic. Procesul de fosforilare este stimulat de mesagerii secunzi, cum sunt AMPc sau ionii de Ca2+, care determin activarea unor kinaze ce catalizeaz reacia de fosforilare. Procesul de defosforilare este catalizat de fosfataze care sunt activate tot de substane endo- sau exogene. kinaza + ATP - ADP E-OH E-O-PO3H2 + H2O fosfataza - H3PO4 O enzim a crei funcionare este controlat prin fosforilare-defosforilare este piruvat dehidrogenaza din sistemul multienzimatic piruvat dehidrogenza. Enzima este blocat prin fosforilare i activat prin defosforilarea formei fosforilate. b. acetilare-deacetilare controlul activitii enzimei se realizeaz prin acetilarea restului de lizin din structura centrului activ al enzimei, sau deacetilarea resturilor de lizin acetilate. O enzim a crei activitate este controlat prin acetilare-deacetilare este acetil-coenzima A sintetaza 2 mitocondrial, care este inactivat prin acetilare i activat prin deacetilare. c. metilare-demetilare prin metilare activitatea enzimei este blocat, iar acest proces are importan n terapia anticanceroas cnd metilarea sau n general alchilarea enzimelor alturi de alchilarea acizilor nucleici determin blocarea diviziunii celulelor canceroase; d. adenilare-deadenilare este procesul prin care n centrul activ al enzimei se fixeaz, sau din centrul activ al enzimei se ndeprteaz un rest de adenin. Enzime alosterice Enzimele alosterice sunt enzime cu structur cuaternar care pot realiza interaciuni necovalente cu liganzi, n centri diferii de centrul activ al enzimei. Aceast interaciune va influena n sens pozitiv sau negativ activitatea enzimei.

a b Structura general a unei enzime alosterice (a forma activ, b forma inactiv) Aceste enzime catalizeaz reacii dintr-o cale metabolic i conin doi centri alosterici unul cu rol activator i cellalat cu rol inhibitor. Datorit prezenei celor doi centri, enzimele alosterice nu respect ecuaia Michaelis-Menten. Enzimele alosterice sunt alctuite din mai muli monomeri, fiecare prezentnd centri alosterici i centrul activ. Fixarea ligandului alosteric (numit i modulator alosteric) pe enzim va determina modificarea conformaiei acesteia cu facilitarea sau blocarea fixrii moleculelor de substrat. n funcie de structura i proprietile substratului i ale ligandului alosteric interaciunile dintre enzim i liganzi pot fi: - homotrope ligandul alosteric are structur identic cu a substratului care se fixeaz n centrul activ;
2

heterotrope liganzii alosterici au structur diferit de a substratului, ceea ce determin apariia altor dou tipuri de interaciuni: - de tip K n acest caz interaciunea enzimei cu ligandul determin modificarea valorii constantei KM n timp ce valoarea vmax rmne constant sau aproape constant; - de tip V interaciunea enzimei cu ligandul alosteric determin modificarea valorii vmax n timp ce valoarea constantei KM rmne constant. Enzimele alosterice se prezint sub dou forme n funcie de modul lor de funcionare: forma R sau relaxat este forma activ a enzimei, care poate fixa i determina transformarea substratului. Pe aceast form se pot fixa liganzi alosterici cu rol activator sau inhibitor; forma T sau tensionat este forma inactiv a enzimei i permite fixarea doar a liganzilor alosterici fr a permite fixarea substratului.

COFACTORI ENZIMATICI ACIDUL LIPOIC

COOH S S S S

COOH

acid R-(+)-lipoic acid S-(-)-lipoic Se prezint sub form de cristale de culoare galben cu solubilitate moderat n ap i lipide. Izomerul R-(+) este forma activ biologic, n timp ce izomerul S-(-) nu are aciune biologic n condiii normale, dar devine toxic la pacienii cu deficit de tiamin (vitamina B1). Surse - exogene alimente de origine animal (organe de animale, extract din drojdii) sau vegetal (spanac, brocoli) i suplimente nutritive; - endogen poate fi sintetizat n organismul uman, iar cu naintarea n vrst aceast sintez scade. Absorbie i metabolism Acidul lipoic din alimente este absorbit la nivelul intestinului subire n proporie de 20-40%, prezena alimentelor determin reducerea absorbiei datorit competiiei pentru sistemele de transport. n organism este depozitat n cantiti mai mari la nivelul ficatului, miocardului, muchilor scheletici i a sistemului nervos central. La nivel celular este prezent n mitocondrie, nucleu i n structura membranei celulare. Efecte biologice Este grupare prostetic pentru enzimele care catalizeaz reacii de transfer: - transcetolaze enzime care catalizeaz transferul unui rest cetonic de la donor la acceptor n procesul de metabolizare a monozaharidelor, - sistemul piruvat-dehidrogenaza care catalizeaz transformarea acidului piruvic n acetaldehid i sistemul -cetoglutarat dehidrogenaza care catalizeaz transformarea acidului -cetoglutaric n succinil-CoA. - Este utilizat ca supliment nutritiv sub forma izomerului R sau a amestecului racemic la pacienii cu: diabet, neuropatie diabetic, hepatit, intoxicaii cu metale.

TETRAHIDROBIOPTERINA
O HN H2N N H N OH OH CH-CH-CH3 N H
3

CH3

Absorbie i metabolism Absorbia tetrahidrobiopterinei necesit prezena srurilor biliare i este favorizat de alimente. Din lumenul intestinal n enterocite, tetrahidrobiopterina este transportat prin intermediul unui sistem transportor. Organismul uman poate sintetiza tetrahidrobiopterin la nivelul ficatului. Efecte biologice Tetrahidrobiopterina este coenzim pentru enzimele implicate n hidroxilarea aminoacizilor aromatici: - fenilalanin-4-hidroxilaza - catalizeaz transformarea fenilalaninei n tirozin, - triptofan-5-hidroxilaza - catalizeaz transformarea triptofanului n 5-hidroxi-triptofan.
Hidroxilarea fenilalaninei sub aciunea fenilalanin-4-hidroxilazei
O N H2N N N H H N OH OH CH-CH-CH3 CH3 O2 NADP+ dihidropterin reductaza NADPH + H+ O N H2N N N H2O OH OH CH-CH-CH3 N H CH3 pterin-4a-carbinolamin dehidraza fenilalanin-4H N hidroxilaza H O 2 2 tirozina N N O OH H N OH OH CH-CH-CH3

fenilalanina

tetrahidrobiopterina

CH3 N H tetrahidrobiopterin-4acarbinolamina

Deficitul de tetrahidrobiopterin Cauze Deficitul de tertahidrobiopterin este determinat de: - afectarea enzimelor care catalizeaz sinteza tetrahidrobiopterinei afeciunea este transmis genetic autozomal recesiv, - afectarea dihidropterin reductazei, enzim care catalizeaz reducerea dihidrobiopterinei la tetrahidrobiopterin, n procesul de refacere a acesteia afeciunea este transmis autozomal recesiv. Simptomatologie Deficitul de tetrahidrobiopterin determin: afectarea transformrii fenilalaninei n tirozin cu apariia fenilcetonuriei caracterizat prin: tulburri neurologice, micri necontrolate, retardare mintal, i tulburri de comportament. Dac afeciunea este diagnosticat la natere i este determinat cauza, se administreaz tetrahidrobiopterin exogen sub forma preparatului farmaceutic Sapropterin; depresie prin deficit de serotonin i dopamin; S-ADENOZIL METIONINA
NH2 CH3 HOOC-CH-CH2-CH2-S-CH2 O NH2 N N N N

OH
4

OH

Absorbie i metabolism Este sintetizat n ficat din ATP i metionin sub aciunea metionin-adenozil transferazei. Tot la nivelul ficatului are loc regenerarea acesteia n cadrul ciclului S-adenozil metioninei.
PP + Pa R-H metil transferaza R-CH3 SAM ATP metionina tetrahidrofolat metionin sintaza N5-metil-tetrahidrofolat

metionin adenozil transferaza

S-adenozil homocisteina H 2O

homocisteina S-adenozil homocistein adenozina hidrolaza

Ciclul S-adenozil metioninei (SAM) Efecte biologice S-adenozil metionina este coenzim pentru enzimele care catalizeaz reacii de transfer a gruprilor metil, fiind astfel implicat n: - metilarea aminelor cu sinteza poliaminelor spermina i spermidina importante pentru diviziunea i creterea celulelor, - sinteza adrenalinei din noradrenalin, - sinteza dopaminei i a serotoninei. Efectul su benefic este evident n condiiile existenei n organism a unor cantiti optime de vitamine B6, B9 i B12. Dac acestea sunt deficitare, administrarea de SAM determin creterea concentraiei de homocistein cu favorizarea aterosclerozei, a infarctului de miocard i a afeciunilor hepatice.