Determinarea activitattii -amilazei -Amilaza sau -1,4-D-glucan-maltohidrolaza cliveaza legaturile -1,4-glicozidice (indepartand resturile de maltoza de la capete) de la capetele nereducatoare

ale substratului polizaharidic. Dat fiind faptul ca nu cliveaza legaturile -1,6-glicozidice (din glicogen sau amilopectina) hidroliza este incompleta rezultand deasemenea dextrine.

Amilaza este frecvent intalnita in tesutul plantelor, dar mai ales in semintele incoltite, unde functia sa este aceea de a initia clivarea amidonului in glucoza, compus care este necesar in procesul de germinatie. -Amilaza se intalneste si la bacteria sau drojdii si din acest motiv este utilizata in scopuri industriale in fermentatia berii. De asemenea, amilaza este folosita in industria textila sau a detergentilor (in balsamul de rufe). Materiale Petriuri din plastic continand amidon-agar (0,2 % amidon solubil, 2% agar). Autoclava pentru sterilizare. Marker colorant rezistent la apa. Reactivi 5 mM KI/I2 in apa (Solutia trebuie sa fie portocalie) Apa distilata. Mod de lucru Se sterilizeaza petriurile cu mediu solid; Se noteaza petriurile astfel: seminte incoltite, seminte fierte, seminte uscate, saliva(contine -amilaza); Cu ajutorul unui lame se taie boabele longitudinal si se plaseaza cu partea sectionata pe mediul solid (distanta dintre boabe trebuie sa fie de cel putin 2-3 cm); Se incubeaza timp de 30 min; Se indeparteaza boabele si se clateste usor petriul cu apa distilata; Se acopera pertiul cu solutie de iodura, se arunca solutia in momentul in care culoarea se intensifica dupa care se clateste petriul cu apa distilata. Suportul solid va avea o culoare purpuriu inchis in portiunile in care amidonul nu a fost clivat enzimatic. In locurile pe care au fost plasate seminte moarte sau uscate (unde se afla o cantitate foarte mica de amilaza) culoarea va ramane neschimbata. Portiunile pe care s-au pus picaturi de saliva sau seminte incoltite vor fi transparent deoarece amidonul este convertit in maltoza care nu da reactive cu iodura. Intrebari: a) Unde a fost degradat amidonul?

a) b) c) d) e) f)

b) Ce indica decolorarea zonelor roz-rosii? c) Ce tip de amilaza se afla in saliva umana? Referinte 1. Thoma, J.A. and Koshland, D.E. (1960) Stereochemistry of enzyme, substrate and products during -amilase action, JBC, 235, 2511-2517. 2. Wang, S.-M., Wu, S.-Y. And Chen, J. (1992) Purification and characterization of beta-amylase in maize kernel, Bot. Bull. Acad. Sin., 33, 359-367. 3. Hong, M. M. (1998) The discovery of amylase In Discoveries in Plant Biology, vol I, Kung, S.-D., Yang, S.-F. (Eds), Word Scientific Publishing, Singapore. 4. Laloknam, S. Et al. (2009) Study of detection of amylase activity from vegetables and fruits in an undergraduate classroom, International conference on the role of Universities in hands-on education Rajamangala University of Tehnology Lanna,Chiang-Mai, Thailland, 23-29 August. 5. Gamper, H.A. and Boller, T. (2010) Praktikum in Pflanzenphysiologie und wurzelsymbiotischer kophysiologie, Botanisches Institut der Universitat Basel, Basel, Switzerland. 6. Domade, P., Lab Workbook in Lab Course M. Sc. (Bio-Technology) Shri. S.P. Kowale, Registrar, Y.C.M. Open University, Nashik. 7. http://www.righthealth.com/topic/Beta-amylase