CULTIVAREA VIRUSURILOR Conf. Dr. G.

Bancescu
V: PARAZITISM INTRACEL. (IN CELULE RECEPTIVE, CAPABILE SA LE REPLICE) I. CULTURI DE CELULE

= CELULE PROVENITE DIN TESUTURI : UMANE ADULTE NORMALE ANIMALE EMBRIONARE NEOPLAZICE IN MEDIU ADECVAT : NUTRIENTI, PH, T0 RAMAN VIABILE + [X] 1. CULTURI DE ORGAN = RA!MENTE MICI DE : TRAHEE, BRONHII, INTESTIN SUBTIRE PROXIMAL, TROMPE UTERINE ETC. MENTINUTE IN MEDIU ADECVAT ISI PASTREAZA STRUCTURA + UNCTIA : ZILE " IN STUDIUL MECANISMELOR PATO!ENICE ALE UNOR: V. ENTERICE (ROTA V) V. RESP. (CORONA V) 2. CULTURI (PRIMARE) DE CELULE DISPERSIE ENZIMATICA (TRIPSINA) + MECANICA (A!ITATOR ELECTROMA!.) SUSPENSIA CEL. A#USTATA LA $%0 000"&00 000 CEL'ML, IN MED. DE CRESTERE TAMPONAT + SER S!., REPARTIZATA IN TUBURI SAU PLACI STERILE CELULELE ADERA DE STICLA, [X], CONTACT SUNT IN ECTATE CU V. SUBCULTIVATE DE %"( ORI ORMEAZA UN ILM CONTINUU DE CELULE IN MONOSTRAT INCETEAZA DATORITA INHIBITIEI DE

3. TULPINI DE CELULE DIPLOIDE DIN TESUTURI EMBRIONARE MOR OLO!IE + CARIOTIP DIPLOID NORMAL SUBCULTIVATE : )0"%0 ORI

4. LINII (PERMANENTE) DE CELULE DIN TESUTURI CANCEROASE + MUTANTE SPONTANE SAU INDUSE (A!. CARCINO!ENI) MOR OLO!IE ALTERATA (* CELULELOR CANCEROASE) INOCULATE LA ANIMALE SENSIBILE TUMORI AU PIERDUT INHIBITIA DE CONTACT POT CRESTE IN SUSPENSII POT I SUBCULTIVATE UN NR. NELIMITAT DE !ENERATII POT I CONSERVATE TIMP + (CON!ELARE)

MEDII PENTRU CC MEDII DE CRESTERE HAN,S, EA!LE, IC"$(, IC"(% SOLUTII APOASE +NUTRIENTI (AA, VITAMINE, !LUCOZA, MINERALE) + SIST. TAMPON, PH -,) + INDICATOR CULOARE (ROSU ENOL) + SER ETAL VITEL %"(. ( ACTOR DE CRESTERE) CELULELE SE INCUBEAZA &)")/ ORE, 0-0C DUBLAREA NR. SARURI

INOCULAREA CC CU V. MEDIUL DE CRESTERE E INDEPARTAT SE SPALA ILMUL CELULAR SE DEPUNE PRODUSUL PATOLO!IC PRELUCRAT (OMO!ENIZARE, INDEPARTAREA DEBRIURILOR + BACTERIILOR PRIN CENTRI U!ARE DI ERENTIALA + ANTIBIOTIC) DUPA ADSORBTIA V. PE RECEPTORII CELULARI INDEPARTAREA INOCUL. SI ACOPERIREA ILMULUI CU MEDIU DE INTRETINERE INCUBARE PENTRU REPLICAREA V.

URMARIREA REPLICARII V. 1. E ECT CITOPATIC (ECP) - LA MICROSCOP - ENTERO V.: CEL. ROTUN#IRE, RE RIN!ENTA, DESPRINDERE DE PE STICLA - VRS, V RU#EOLIC, V. HERPETICE SINCITII 2. APARITIA HEMA!LUTININELOR IN SUPERNATANT - V. !RIPALE + V. PARA!RIPALE + ARBO V. 3. HEMADSORBTIA (ADSORBTIA H PE MB. MODI ICATA A CEL. CE AU REPLICAT V.) 4. INCLUZIUNI VIRALE (ACUMUL. PARACRISTALINE DE VIRIONI + COMP. VIRALE IN ARIA DE REPLICARE SI ASAMBLARE A V.) + COL. !IEMSA SAU HEMALAUN"EOZINA - LOCALIZ., ORMA, A INIT. TINCT. CRIT. DE D!. PT. IN . CU V. - EX. " HERPES V. : IZ. INTRANUCL., CEL. IN . ORM. SINCITII " REO V.: IZ. INTRACIT. ACIDO ILE PERINUCL. " V. RU#.: IZ.. INTRACIT. + INTRANUCL., CEL. IN . ORM. SINCITII %. COL. I DEPIST. A!. V. IN CEL. IN ECTATA (. INTER ERENTA VIRALA (INCAPACIT.CEL. IN . DE"A REPLICA UN V. PATO!EN) " DEPIST. INDIR. A: V. RUBEOLIC, ADENO V. ECP=0 -. TRANS ORMAREA CEL. N. IN CEL. CANCEROASE (TRANS . MALI!NA) PRIN V. ONCO!ENE (SV)0, V. SARCOM. ROUS): PIERDEREA INHIB. CONTACT + OCARE DE A!LOMERARI CELULARE

II. EMBRIONII DE !AINA (OUA EMBRIONATE DE !AINA = OE!)

Conf. Dr. G. Bancescu

= TESUTURI EMBRION. DE !AINA IN VARSTA DE ("$) ZILE. + MB. EMBRIONARE OVOSCOP TRANSILUMINARE: OBS. VIABILIT. EMB. INOCUL. PE: MB. CHORIOALANTOIDA (VASC., OR!. RESP.), Z. $$"$& : V. VACCINIA, POX V., V. HERPETICE, V. ONCO!ENE CAV. ALANTOIDIANA: V. !RIPALE, Z. 1"$& CAV. AMNIOTICA: V. !RIPALE, Z. 1"$0, V. URLIAN, Z. %"SAC. VITELIN (ATASAT EMB., REZERVA NUTRITIVA): RIC,, CHLAMIDII, V. HERPETICE (Z. %) INCUBARE 0%0C, 0"% ZILE )0C, PESTE NOAPTE RECOLTARE: LICHIDE, MB., TES E ECTE OBS. MOARTEA EMB. (V. URLIAN, HERPES V.) ACUMUL. HA IN LICHID ALANTOID. + AMNIOTIC (V. !RIPALE) PUSTULE (POC,S) PE MB. CHORIOALANT.

III. ANIMALE DE EXPERIENTA Conf. Dr. G. Bancescu

CAND RECEPTIVITATEA CELORLALTE !AZDE = NESATIS ACATOARE PT.: V. RABIC, ARBO V., V. COXSAC,IE A, HIV REPLICAREA V. DEMONSTRATA PRIN: " BOALA MANI ESTA +'" DECES " URMARIREA V. IN OR!ANUL TINTA PRIN: " HEMA!LUTINARE: ARBO V. " IN ECTIOZITATEA OMO!ENATELOR: V.COXSAC,IE " EX. HISTO2PATOLO!IC: " LEZIUNI IN LAMATORII " LEZIUNI DE!ENERATIVE " INCLUZII VIRALE (EX. CORPUSCULII BABES"NE!RI IN NEURONII IN ECTATI CU V. RABIC) IN: " D!. VIROZELOR " OBTINERE REA!ENTI BIOLO!ICI " PREPARARE VACCINURI (EX. V. ANTIRABIC PE CREIER DE SOARECE) " STUDII DE PATO!ENEZA + IMUNITATE ANTIVIRALA SURSE DE ANIMALE 2 SPECII OLOS. EXPERIMENTAL: MAMI ERE MICI (SOARECI, SOBOLANI, HAMSTERI, COBAI, IEPURI, MAIMUTE, DIHORI) EXPERIENTE CURENTE MAMI ERE MARI (CAPRE, OI, CAI, VITEI) PT. PREPARATE BIOLO!ICE PASARI : !AINI, PREPELITE, PORUMBEI, RATE, CURCANI

SELECTIONARE IN UNCTIE DE: " SUSCEPTIBILITATEA LA V. (SOARECE V. CORIOMENIN!ITEI LIM OCITARE3 CIMPANZEU HIV3 MAIMUTA V. RU#EOLIC, VHB) " VARSTA " STARE DE SANATATE " OMO!ENITATEA LOTULUI EXPERIMENTAL DEZAVANTA#E " COST + " RECEPTIVITATEA VARIAZA IN UNCTIE DE: SPECIE, LINIA !ENETICA, VARSTA " EXISTENTA V. LATENTE INTER ERA CU V. INOCULAT SAU SE POT REACTIVA

1. ANIMALE SPF (SPECIFIC PATHOGEN-FREE) " ARA LORA PATO!ENA " CRESCUTE IN RE!IM DE BARIERA SANITARA: CONDITII DE MEDIU (HRANA, AER) CE PREVIN CONTAMINAREA CU !ERMENI PATO!ENI &. ANIMALE GERM-FREE (FARA FLORA ASOCIATA CONTAMINANTA) " HRANITE IN CONDITII DE CRESTERE RESTRICTIVE IN IZOLATOARE SPECIALE (AER + HRANA STERILA) 0. ANIMALE INBRED, IZOGENE " SE OBTIN PRIN [X] CONSAN!VINA " IDENTICE DPV. !ENETIC CU PERECHEA DE STRAMOSI COMUNI " IMPERECHERI CONTROLATE SORA 2 RATE (MINIMUM &0 !ENERATII) " IN STUDII DE " IMUNITATE ANTIVIRALA " TRANSPLANT " ONCO!ENEZA 4. ANIMALE TRANGENICE " AU IN !ENOM O !ENA TRANS ECTA (STRAINA) CE SE VA EXPRIMA ENOTIPIC (IN#ECTAREA UNEI !ENE IN PRONUCLEUL UNUI OU ECUNDAT PROVENIT DE LA PARENTALII IZO!ENI IMPLANTAREA OULUI IN OVIDUCT) 5. SOARECII NUZI 4 ABSENTA CON!ENITALA A TIMUSULUI CULTIVAREA V. PE ANIMALE DE LABORATOR $. PRE!ATIREA ANIMALELOR PENTRU INOCULARE &. INOCULAREA : ALE!EREA CAII OPTIME DE ACCES LA TESUTURILE SI OR!ANELE PENTRU CARE V. ARE A INITATE (5.6., 7.8, 7.9.., 7.:;<7=>?;@A, 7. 6;<;B<@A, C7D;5=79@ ;=6.) V. NEUROTROPE (V. RABIC, ARBO V.) 7. 6;<;B<@A V. RESPIRATORII (V. !RIPAL) 7.?@E@A@ V. DERMOTROPE (V. VACCINIA) 7.C.

0. SUPRAVE!HEREA ANIMALELOR INOCULATE - =0 - STARE !ENERALA (ANOREXIE, BLANA ZBURLITA) - !F - SEMNE CLINICE CARACTERISTICE (PARALIZII, TREMURATURI) ). RECOLTAREA PRODUSELOR PATOLO!ICE ANIMALE MOARTE: EX. MACROSCOPIC + PRELEVARE TESUTURI, OR!. EX. MICROSCOPIC ROTIURI + AMPRENTE (H"PAT.) ANIMALE ARA SEMNE DE BOALA 0 PASA#E OARBE LA ALTE ANIMALE