Apoptoza.

Implicatii in patologia maligna

DANIELA NICOLETA PETRUSCA*, OLIVIA MIHAELA POPA**, L. MESTER***
*

Centrul de Imunologie, Institutul de Virusologie Stefan S. Nicolau, Bucuresti Institutul de Genetica al Universitatii din Bucuresti, Aleea ortocalelor Nr. !"#, Sector $, Bucuresti *** Universitatea din Bucuresti, %acultatea de Biologie
**

1.Introducere
Moartea celulara fiziolo ica e!te e!e"tiala #e"tru $ez%oltarea !i fu"ctio"area "or&ala a or a"i!&elor &ulticelulare. Celulele "o"'"ece!are, $eteriorate !i #ote"tial "oci%e tre(uie i"laturate $i" &icrocli&atul celular !a"ato! #e"tru a!i urarea )o&eo!taziei !tructurale !i fu"ctio"ale a te!utului. E*e&#le ale &ortii celulare fiziolo ice au fo!t o(!er%ate la a#roa#e toate ti#urile celulare #e #arcur!ul $ez%oltarii !i &aturarii. Pe #arcur!ul $ez%oltarii e&(rio"are &o$elarea celulara !#ecifica !i or a"o e"eza !u"t a!i urate $e u" #ro ra& !#atiote&#oral $efi"it e"etic $e #roliferare !i &oarte celulara. I" te!uturile a$ulte, &oartea celulara fiziolo ica a#are $e a!e&e"ea #roe&i"e"t i" i"teriorul te!uturilor ciclic !ti&ulate !au $e#e"$e"te )or&o"al, cu& !u"t e"$o&etrul, #ro!tata !i la"$a &a&ara, $ar !i i" tur"o%erul +!ta$,'!tate- al &ultor alte te!uturi. Moartea !electi%a a celulelor e!te fu"$a&e"tala #e"tru $ez%oltarea, re larea !i fu"ctio"area !i!te&ului i&u", i"cluza"$ eli&i"area ti&ocitelor auto' reacti%e, !electia "e ati%a a li&focitelor T !i . !i $i!tru erea celulelor realizata $e li&focitele T citoto*ice. Celulele ce au !uferit $eteriorari e"etice ire#ara(ile !u"t $e a!e&e"ea $etectate $e #roce!e e"$o e"e, #ro(a(il li&ita"$u'!e a!tfel $i!e&i"area leziu"ilor e"etice #ote"tial "oci%e. Li&focitele ce i"%a$eaza te!uturi #ri%ile iate $i" #u"ct $e %e$ere i&u"olo ic !u"t ra#i$ eli&i"ate, a!tfel #rote/a"$u'!e re iu"ile !e"!i(ile $e o $eteriorare #ro$u!a #ri"tr'u" ra!#u"! i"fla&ator 012. Co"ce#tul u"ificator al tuturor ace!tor circu&!ta"te $i%er!e e!te acela ca #roce!ul $e &oarte celulara e!te &e$iat $e u" !et co&u" $e e%e"i&e"te !i !e $e!fa!oara #e cai (ioc)i&ice !i&ilare co"$uca"$ la o $i!#u"ere !tereoti#a a &o$ificarilor !tructurale. Acea!ta &oarte celulara e!te "u&ita a#o#toza. A#o#toza e!te u" #roce! i""a!cut, co"!er%at $i" #u"ct $e %e$ere e%oluti%, #ri" care celulele !i!te&atic i!i i"acti%eaza, i!i $eza!a&(leza !i i!i $e ra$eaza #ro#riile co&#o"e"te !tructurale !i fu"ctio"ale #e"tru $e!a%ar!irea #ro#riului lor $ece!. Ace!t #roce! #oate fi acti%at i"tracelular #ri"tr'u" #ro ra& $e $ez%oltare $efi"it e"etic !au e*tracelular #ri" i"ter&e$iul #rotei"elor e"$o e"e, cito3i"elor !i )or&o"ilor ca !i $e co&#o"e"te *e"o(iotice, ra$iatii, !tre!ul o*i$ati% !i )i#o*ia. A(ilitatea u"ei celule $e a i"tra i" a#o#toza ca ra!#u"! la u" !e&"al $e +&oarte- $e#i"$e $e !tatu!ul !au #roliferati%, #ozitia ciclului celular !i $e e*#re!ia co"trolata a e"elor care #ro&o%eaza, i")i(a !i afecteaza #ro ra&ul $e &oarte. Re larea !tricta a ace!tor #ara&etri &o$ulatori ai &ortii tre(uie &e"ti"uta #e"tru a!i urarea co"te*tului fiziolo ic #ro#ice a#aritiei a#o#tozei. Di!fu"ctiile ce a#ar i" oricare $i"tre #u"ctele caii $e
145

A#o#toza. I&#licatii i" #atolo ia &ali "a

&oarte #ro ra&ata, #ot $uce la u" #roce! a#o#totic ero"at $eter&i"a"$ a!tfel la e*#ri&area u"or co"$itii fizio#atolo ice. I&#orta"ta a#o#tozei $eri%a $i" "atura !a acti%a !i $i" #ote"tialul !au $e a co"trola !i!te&ele (iolo ice. Moartea celulara a fo!t co"!i$erata la i"ce#ut u" #roce! )aotic. Totu!i, a!a cu& o celula i!i #oate ec)ili(ra &eta(oli!&ul, #e"$ula"$ i"tre a"a(olic !i cata(olic, tot a!tfel u" or a"i!& &ulticelular tre(uie !a ec)ili(reze ratele $e #roliferare celulara !i $e &oarte celulara #e"tru &e"ti"erea )o&eo!taziei. De a!e&e"ea, u" or a"i!& tre(uie !a i"$e#arteze celulele !e"e!ce"te, $eteriorate !au a"or&ale care ar #utea !a i"terfere cu (u"a fu"ctio"are a u"ui or a" !au !'ar #utea tra"!for&a &ali ". Ca ur&are, alterarile !ur%e"ite i" $o&e"iul re larii &ortii celulare ar #utea co"tri(ui la #ato e"eza (olilor $e e"erati%e !i "eo#lazice. De!i &oartea celulara +fiziolo ica- !e cu"oa!te $e $ece"ii, i"tere!ul #e"tru acea!ta #ro(le&a a fo!t reactualizat i" 1657, ca"$ 8err, 9,llie !i Currie au $e!cri! i" $etaliu &o$ificarile ultra!tructurale caracteri!tice celulelor &uri(u"$e !i au #ro#u! ter&e"ul $e a#o#toza #e"tru $e!crierea ace!tui #roce! 072. Ei au e%i$e"tiat fa#tul ca &oartea celulara fiziolo ica "u e!te u" #roce! ra"$o&ic, ci are tra!aturi &orfolo ice $i!ti"cte. De o(icei a#o#toza afecteaza celule i"$i%i$uale !i, o$ata i"itiata, !e #ro#a a ra#i$. I" e!tia celulelor a#o#totice $e catre &acrofa e "u i"$uce eli(erarea e"zi&elor #roteolitice !au a o*i e"ului !i" let care e to*ic. :ra &e"tarea celulelor are loc fara !cur erea co"ti"utului celular i" !#atiul e*tracelular, iar i"$e#artarea celulelor a#o#totice "u #ro%oaca u" ra!#u"! i"fla&ator. A(!e"ta i"fla&atiei re#rezi"ta o tra!atura cruciala #er&ita"$u'!e a!tfel &oartea celulei fara $eteriorarea celulelor a$iace"te.

2. Apoptoza versus necroza

Moartea celulara #oate fi acci$e"tala !au #ro ra&ata i"tr'u" or a"i!& &ulticelular. Do%ezile !#ri/i"a i#oteza e*i!te"tei u"ui +#ro ra& $e !i"uci$ere- i"ere"t i" celulele %erte(ratelor care e!te acti%at atu"ci ca"$ &oartea celulei e!te $orita #e"tru (i"ele re!tului co&u"itatii celulare. I" te!uturile %erte(ratelor !'au $e!cri! $oua &o$ele $e &oarte celulara cu &orfolo ie $i!ti"cta; a#o#toza !i "ecroza 0<, =2, i"!a &eca"i!&ele lor la "i%el &olecular "u !u"t i"ca co&#let i"tele!e. NECRO>A #oate fi $e!cri!a ca !i cola#!ul &eta(olic celular !i a#are ca"$ celula "u'!i &ai #oate &e"ti"e )o&eo!tazia io"ica. Pe &a!ura ce "i%elurile $e ATP !e e#uizeaza !i ra$ie"tul io"ic tra"!&e&(ra"ar !e $i!i#a, celulele !e u&fla !i or a"itele i"tracelulare !e $ilata. I"itial !e o(!er%a i"&u uriri re%er!i(ile ale &e&(ra"ei, &o$ificari ti&#urii i" co"for&atia !i fu"ctia &itoco"$riilor !i celula $e%i"e ra#i$ i"ca#a(ila $e a &e"ti"e )o&eo!tazia. De#a!i"$ u" #ra , #roce!ul $e%i"$e ire%er!i(il. Me&(ra"a celulara #oate $e%e"i !itu!ul &a/or al alterarilor #ierza"$u'!i a!tfel ca#acitatea $e re lare a #re!iu"ii o!&otice, celula !e u&fla !i cra#a. Deteriorarile &e&(ra"elor i"ter"e #er&it eli(erarea e"zi&elor lizozo&ale, co"ti"utul celulei e!te i&#ra!tiat i" !#atiul ti!ular i"co"/urator !i #ro%oaca u" ra!#u"! i"fla&ator "e!#ecific. Necroza e!te i"$u!a ti#ic $e &o$ificari e*tre&e i" &e$iul i"co"/urator al celulei, ce $eter&i"a leziu"i !e%ere !i (ru!te, #ro%ocate $e e*e&#lu $e i!c)e&ie, )i#erter&ie &e"ti"uta !au trau&e fizice !au c)i&ice. Se #re!u#u"e ca "ecroza "u e!te i"flue"tata e"etic 042, 0figura 12.

14?

DANIELA NICOLETA PETRUSCA, OLIVIA MIHAELA POPA, L. MESTER

Figura 1. Ilu!trarea !ec%e"tei $e &o$ificari ultra!tructurale care au loc i" a#o#toza 07'@2 !i "ecroza 05 !i ?2. 012Celula "or&ala. A#o#toza ti&#urie 072 !e caracterizeaza #ri" co&#actarea !i &ar i"alizarea cro&ati"ei, co"$e"!area cito#la!&ei !i #lierea &e&(ra"elor, "ucleara !i #la!&atica 0<2. I" ulti&a eta#a, "ucleul !e fra &e"teaza !i #rotu(era"tele for&ate #e !u#rafata celulei !e !e#ara #e"tru a for&a cor#ii a#o#totici, care 0=2, !u"t fa ocitati $e celulele %eci"e !i 04 !i @2 $e ra$ate i" lizozo&i 052. Necroza e!te a!ociata cu ru#area "ere ulata a cro&ati"ei, u&flarea or a"itelor !i $i!tru erea focala a &e&(ra"elor 0?2. A#oi &e&(ra"ele !e $ezi"te reaza $ar, i" e"eral, celula i!i &e"ti"e i"trea a co"for&atie #a"a la i"$e#artarea ei $e catre fa ocitele &o"o"ucleare.

APOPTO>A e!te o for&a $e &oarte celulara i" care #roce!ul e!te &ult &ai !u(til. E!te a$e!ea ec)i%alata cu &oartea celulara #ro ra&ata, $ar e!te (i"e !a &e"ti"e& cele $oua co"ce#te $i!ti"cte ' cel &orfolo ic !i cel e!catolo ic. A#o#toza !e refera la o !erie $e &o$ificari &orfolo ice #e #arcur!ul #roce!ului $e &oarte celulara, &o$ificari $iferite $e cele o(!er%ate i" "ecroza, fii"$ a!ociata cu #roce!ul "or&al $e re lare a te!uturilor 0fi . 12. La %erte(rate, &oartea celulara e!te acce#tata ca u" #roce! o(i!"uit !i c)iar acce"tuat #re%izi(il, $ar +#ro ra&area- ei "u !e face i" !e"!ul acce#tat la "e%erte(rate, ca o &oarte a celulelor i"$i%i$uale, care i" a"u&ite cazuri #oate fi a#reciata, cu &are acuratete, ca fii"$ #ro ra&ata 0@, 52. I" ulti&a %re&e !u"te& fortati !a acce#ta& o(!er%atia, a#are"t #ara$o*ala, ca &oartea celulara e!te atat #ro ra&ata cat !i !to)a!tica. De e*e&#lu, #e #arcur!ul $ez%oltarii #o#ulatiilor $e celule ., a#ro*i&ati% 64 A $i" celule %or &uri $i"tr'u"ul $i"tr'o %arietate $e &oti%e 0reara"/a&e"t e"ic i&#erfect !au a(!e"ta !ti&ularii2 $ar e!te i&#o!i(il $e #re%azut $i"ai"te care $i"tre ele !e %a #ro$uce.
146

A#o#toza. I&#licatii i" #atolo ia &ali "a

A#o#toza a#are i" celule i"$i%i$uale $i!#er!ate, "u i" ru#uri $e celule i"%eci"ate, a!a cu& !e i"ta&#la i" "ecroza. Se #are ca a#o#toza #rezi"ta cea &ai co&u"a &orfolo ie atu"ci ca"$ &oartea celulara e!te $eter&i"ata fiziolo ic. Referi"$u'"e la &a&ifere, e*e&#lele i"clu$ &oartea celulelor cu #erioa$a $e i"/u&atatire !curta 0"eutrofile2B eli&i"area celulelor T autoreacti%eB i"%olutia celulelor li#!ite $e factorii $e cre!tere "ece!ariB &oartea &orfolo ica a celulelor #e #arcur!ul e%olutiei e&(rio"are !i #o!te&(rio"are ti&#uriiB !i o&orarea celulelor care !er%e!c $re#t ti"te celulelor T, celulelor "atural uci a!e 0N82, !au &eca"i!&e citoto*ice &e$iate celular $e#e"$e"te $e a"ticor#i. Moti%ul #e"tru care celulele tre(uie !a &oara e!te $iferit $e la u" ti# celular la altul la fel !i &eca"i!&ul $e $ecla"!are. De!eori !e&"alul $e !i"uci$ere #ro%i"e $i" &e$iul i"co"/urator, ca i" e*#u"erea la !au retra erea $i"tr'u" &e$iu cu )or&o"i !au factori $e cre!tere. Ace!t a!#ect e!te i"cita"t $i" #u"ct $e %e$ere co"ce#tual, atata %re&e cat !e tra$uce #ri" fa#tul ca !oarta u"ei celule e!te $e#e"$e"ta $e acti%itatea alteiaB c)iar $aca &oartea e!te #ro ra&ata, locu!ul #ro ra&ului e!te i" afara celulei care tre(uie !a &oara. I" alte cazuri, $e e*e&#lu tur"o%erul "eutrofilelor, !e #are ca celula are u" cea! i"ter" auto"o& care ar co"trola #ro ra&ul $e &oarte a celulei 0a$e%aratul #ro ra& $e &oarte celulara auto"o& a fo!t i$e"tificat la "e&ato$e !i e"ele ce co"troleaza ace!t #roce! au fo!t eluci$ate 0?2. Caile $e acti%are a a#o#tozei %or fi $iferite i" $iferite celule, $ar &eca"i!&ul $e &oarte i" !i"e %a fi &ereu acela!i, ceea ce i"!ea&"a ca e*i!ta o cale fi"ala co&u"a. E!te foarte i&#orta"t ca i" !tu$iul a#o#tozei !a i"cerca& !a face& $i!ti"ctia $i"tre #roce!ele care !u"t !#ecifice celulei $e cele care !u"t !#ecifice &ortii. Se #are ca e*i!ta &ulte &eca"i!&e $ecla"!atoare ale cailor $e !i"uci$ere, c)iar !i i"tr'u" !i" ur ti# $e celula. Nu toate ace!tea %or fi recu"o!cute i&e$iat ca fii"$ +#ro ra&ate-. De e*e&#lu, #e"tru a acti%a calea a#o#totica, ti&ocitele #ot fi !e&"alizate $e catre lucocorticoizi !au $e o cro!!'li"3are a rece#torului #e"tru a"ti e", i" ace!t caz, a&(ii !ti&uli fii"$ co"!i$erati fiziolo ici. Dar, ti&ocitele %or !uferi u" #roce! a#o#totic i$e"tic $u#a e*#u"erea la o $oza &ica $e ra$iatii io"iza"te !au la o otra%a. Deoarece "ici u"ul $i"tre ace!ti a e"ti "u e!te fiziolo ic, i" ace!t caz &oartea celulelor "u #oate fi !trict $efi"ita ca fii"$ #ro ra&ata. Totu!i $efi"itia #oate fi lar ita i" !e"!ul ca i" a"u&ite celule, ca"$ !u"t $eteriorate "e!#ecific, !e #oate acti%a fiziolo ic o +&oarte #ro ra&ata-. Acea!ta #re!u#u"e ca $eteriorarea !a "u fie foarte !e%era #e"tru ca #ro ra&ul !a #oata fi e*#ri&at; $aca ti&ocitele !u"t &e"ti"ute la =<CC %or &uri #ri" "ecroza, $ar $aca !e re%i"e, !uficie"t $e ra#i$, la o te&#eratura $e <5CC, %or &uri #ri" a#o#toza. S'a !u erat ca, ar fi #rea #ericulo! #e"tru li&focite !a i"cerce re#ararea u"or a!tfel $e ti#uri $e leziu"i, atata %re&e cat o re#arare i&#erfecta ar #utea $uce la i"!talarea autoi&u"itatii !au a leuce&iei i" a!tfel $e cazuri celulele acti%a"$u'!i &eca"i!&ul a#o#totic.

3. Fazele procesului apoptotic

Co"trolul e"eral al "u&arului $e celule ce !e efectueaza #ri" i"ter&e$iul ciclului celular e!te co&#u! $i"tr'u" !i!te& &ultico&#arti&e"tat i" i"teriorul caruia celula are cel #uti" < o#tiu"i #o!i(ile 0fi .72. Celula #oate fi; 12 &eta(olic acti%a $ar "u $e!fa!oara "ici #roce!ul $e #roliferare !i "ici cel $e a#o#toza 0celula aflata i" faza DE2B 72 i" cur! $e $e!fa!urare a #roce!ului $e #roliferare 0DEFD1FSFD7F&itoza2 <2 #e #u"ctul $e a $e!fa!ura #roce!ul $e &oarte celulara fie #e calea #ro ra&ata 0DEFD1F:FD7Ffra &e"tare celulara a#o#totica2, fie #e calea "e#ro ra&ata 0"ecroza2 0figura 22.
1@E

DANIELA NICOLETA PETRUSCA, OLIVIA MIHAELA POPA, L. MESTER

Figura 2. Sc)e&a $e!fa!urarii ciclului celular care arata o#tiu"ile u"ei celule aflate i" faza D E. D1 $efi"e!te #erioa$a #e #arcur!ul careia !e acti%eaza "oi e"e a caror e*#re!ie #roteica e!te ceruta #e"tru i"$ucerea fra &e"tarii ADN 0faza :2. D7 $efi"e!te #erioa$a i"!a!i celula !e fra &e"teaza i" cor#i a#o#totici.

Celulele #ot fi i"$u!e !a i"tre #e calea &ortii celulare #ro ra&ate $i" orice faza a ciclului celular $e #roliferare 0D1, S !au D72. Se&"alele locale !au !i!te&ice ale factorilor $e cre!tere ce re leaza #ro re!ia i" i"teriorul ciclului celular !u"t !#ecifice ti#ului celular !i !u"t i"$e#e"$e"t $eter&i"ate ca #arte a fe"oti#ului $e $ifere"tiere a celulei i" cauza. A!tfel, acela!i factor $e cre!tere 0e*; factorul tra"!for&a"t $e cre!tere G H12 #oate a%ea efecte a o"i!te !au a"ta o"i!te i" ca$rul ciclului celular al $iferitelor ti#uri $e celule 0e*; i"$uctor al #roliferarii celulare i" celulele &eze&)i&ale !au i"$uctor al are!tului i" D E !au #ro re!ia #ri" fazele a#o#tozei #e"tru celulele e#iteliale2. Proce!ul a#o#totic #oate fi i&#artit i" trei eta#e $i!ti"cte; ' anga&area, i" care celula care a #ri&it u" !ti&ul a#o#totic letal $e%i"e ire%er!i(il a" a/ata #e calea &ortiiB ' e'ecutarea, #e #arcur!ul careia a#ar &a/oritatea &o$ificarilor !tructuraleB ' clearance'ul, i" ca$rul caruia re!turile celulare !u"t i"$e#artate #ri" fa ocitoza. Mo$ificarile !tructurale ce a#ar #e #arcur!ul fazei e*ecutorii au fo!t $e!cri!e #e"tru #ri&a $ata $e 8err !i cola(oratorii 072, iar acu& !u"t $i" ce i" ce &ai (i"e i"tele!e $i" #u"ct $e %e$ere al &eca"i!&ului.

4. Morfologia apoptozei
Pe #arcur!ul fazei $e e*ecutie, a#ar &o$ificari &orfolo ice !i (ioc)i&ice coor$o"ate i" i"teriorul "ucleului, cito#la!&ei, or a"itelor !i &e&(ra"ei #la!&atice. Mo$ificarile &orfolo ice care !e o(!er%a cel &ai u!or !u"t cele care a#ar i" i"teriorul "ucleului. Cro&ati"a co"$e"!eaza !i for&eaza a re ate $e'a lu" ul #eriferiei "ucleare rele%a"$ u" &o$el co"for&atio"al !e&ilu"ar. Caracterizarea &orfolo ica a cro&ati"ei $e&o"!treaza o $e ra$are or$o"ata a ADN'ului $e catre o "ucleaza e"$o e"a $e#e"$e"ta $e catio" 062, i"tai i" fra &e"te &ari $e <E'4E 3ilo(aze 01E2 #a"a la fra &e"te "ucleozo&ale $e 1?E'7EE #erec)i $e (aze 0112. Totu!i, cli%area cro&ati"ei la fra &e"te "ucleozo&ale "u are loc i" toate ti#urile celulare !i #oate fi i")i(ata fara a (loca celelalte &o$ificari ale a#o#tozei 017,1<2.
1@1

A#o#toza. I&#licatii i" #atolo ia &ali "a

O$ata cu co"$e"!area cro&ati"ei e!te alterata ultra!tructura "ucleara. La&i"a "ucleara !i reteaua $e fila&e"te i"ter&e$iare care &e"ti"e i"te ritatea a"%elo#ei "ucleare !i $i!tri(utia #orilor "ucleari !u"t cli%ate #roteolitic 01='1@2. A!tfel, $i!tru erea !tructurii retelei "ucleare ar #utea #er&ite alaturarea #orilor "ucleari 0152 !i fara&itarea "ucleului i" fra &e"te ce co"ti" cro&ati"a, care, &a/oritatea &e"ti" %e!ti ii ale &e&(ra"ei "ucleare. Celelalte or a"ite cito#la!&atice ra&a" i"tacte $i" #u"ct $e %e$ere !tructural cu toate ca $ifu"ctiile &itoco"$riale !u"t a!ociate cu a#o#toza 01?2 0figura 32. Mo$ificarile "ucleare !u"t #rece$ate $e re$ucerea #ote"tialului tra"!&e&(ra"ar &itoco"$rial, "ecu#larea tra"!#ortului $e electro"i $e la !i"teza ATP'ului !i cre!terea e"erarii $e !#ecii reacti%e $e o*i e". I" cito#la!&a a#are cro!!'li"3area $e #rotei"e #ri" actiu"ea tra"! luta&i"azelor 0162, fila&e"tele cito!c)eletale !e a re a i" for&atiu"i #aralele !i reticulul e"$o#la!&ic !e $ilata !i fuzio"eaza cu &e&(ra"a #la!&atica crea"$ cratere i" for&a $e !ac la "i%elul fuziu"ii. Se #oate !#ecula fa#tul ca celula !ufera o alterare #rofu"$a a cito!c)eletului. Cu toate ca, #a"a i" &o&e"tul $e fata, acea!ta #ro(le&a "u a fo!t !tu$iata i" $etaliu, e*i!ta e*e&#le i" care $i!tru erea cito!c)eletului $uce la a" a/area celulei #e calea a#o#totica, i" ti&# ce, !ta(ilizarea cito!c)eletului i")i(a a#o#toza. I" a#o#toza, &e&(ra"a celulara !e u&fla !i !e cuteaza i"tr'o &a!ura &ult &ai &are $ecat i" "ecroza, fe"o&e"ul a fo!t "u&it zeioza. I"te ritatea !tructurala a &e&(ra"ei e!te ulterior co&#ro&i!a #ri" #ier$erea a!i&etriei fo!foli#i$ice, a &icro%ililor !i a /o"ctiu"ilor i"tercelulare. Celula !e !fericizeaza, !e i"$e#arteaza $e %eci"ii !ai !i !e co"tracta $ra&atic !i e*#ulzeaza #rotu(era"te care !e !e#ara i" +cor#i a#o#totici- i"%eliti i" &e&(ra"a. I" i"teriorul te!uturilor, celulele a#o#totice !i cor#ii a#o#totici !u"t recu"o!cuti !i fa ocitati ra#i$ $e catre celulele %eci"e !au &acrofa e.

Figura 3. Sta$iile a#o#tozei i"tr'u" li&focit. Ace!te !ta$ii !u"t o(!er%ate &ai (i"e i" culturi izolate atata %re&e cat i" %i%o ar i"ter%e"i fa ocitoza; 0a2 Celula "or&ala are o cito#la!&a $i!#er!ata !i cro&ati"a "ucleara )etero e"a. Volu&ul celulei e $e a#ro*i&ati% 6E fL. 0(2 Celula a #ier$ut o #arte $i" %olu& !i or a"itele cito#la!&atice !u"t !tra"! i&#ac)etate, !e o(!er%a i" ra&a$iri ale cro&ati"ei. I" ace!t !ta$iu !u"t #reze"te &o$ificarile &e&(ra"are care $uc la fa ocitoza. 0c2 Celula etaleaza zeioza. 0$2 Cola#!ul cro&ati"ei cu ara"/area ei i" for&a $e !e&ilu"a $e'a lu" ul a"%elo#ei "ucleare. Volu&ul celular e!te acu& $e 5E fL. 0e2 Nucleul are acu& a!#ectul u"ei auri "e re. 0f2 Nucleul !e fra &e"teaza i" !fere, iar &e&(ra"a !e cuteaza %or&a"$ %ezicule. 0 2 :ra &e"tele celulare co"ti"ute i" cor#ii a#o#totici care, #e"tru o %re&e, co"ti"ua !a e*clu$a colora"tul %ital.

Recu"oa!terea celulelor a#o#totice $e catre fa ocite #oate i&#lica i"teractii ale lecti"elor &acrofa elor e"$o e"e cu re!turi za)ari$ice N'acetil !#ecifice e*#ri&ate #e
1@7

DANIELA NICOLETA PETRUSCA, OLIVIA MIHAELA POPA, L. MESTER

!u#rafata celulelor a#o#totice, i"teractiile !#ecific &e$iate $e rece#tori cu fo!fati$il!eri"a $i" !tratul e*terior al &e&(ra"ei #la!&atice !i i"teractiile tro&(o!#o"$i"aIrece#tori $e !u#rafata celulara, ce co"ti" re!turi i"co&#let caracterizate, $e #e !u#rafata celulelor a#o#totice 07E2. E*i!ta e%i$e"te ce !u ereaza ca &eca"i!&ul $e recu"oa!tere #oate fi $iferit i" fu"ctie $e #o#ulatia $e fa ocite. Se&"ificati% #e"tru !trate ia ce"trala a ace!tui ti# $e &oarte celulara e!te clera"ce'ul ra#i$ !i eficie"t al re!turilor a#o#totice $e catre fa ocitele %eci"e, a&atoare !au #rofe!io"i!te, $eoarece #re%i"e ra!#u"!ul i"fla&ator care, alt&i"teri, ar ur&a calea $i!tru erii celulare !i $e%er!area #rotei"elor i"tracelulare !i a acizilor "ucleici i" !#atiul e*tracelular. O$ata ce faza $e e*ecutie a a#o#tozei e!te acti%ata, i"tre ul #roce! $e&areaza ra#i$ !i e!te co&#let ter&i"at i" cate%a ore 0712. Durata ace!tei faze e!te relati% i"%aria(il i" ra#ort cu ti#ul celular !i !ti&ulul a#o#totic !u era"$ ca !ta$iul fi"al al a#o#tozei trece #ri"tr'o cale co&u"a. Totu!i, !ta$iul $e a" a/are, ti&#ul $e la rece#tarea !ti&ulului a#o#totic #a"a la i"itierea fazei ire%er!i(ile $e e*ecutie e!te e*tre& $e %aria(il !i $e#i"$e $e ti#ul celular, $e !ti&ulul a#o#totic, $e !ituarea i" ca$rul ciclului celular !i $e e*#re!ia $i%er!ilor factori &o$ulatori ai &ortii. Multi factori care i"flue"teaza a" a/area !au !u!ce#ti(ilitatea celulara la a#o#toza !u"t i&#licati $irect i" rece#tia !i tra"!&iterea !e&"alului a#o#totic. Ace!ti factori re latori !u"t frec%e"t !electati #e"tru a (loca #roce!ul #e #arcur!ul tra"!for&arii "eo#lazice !au $ez%oltarii rezi!te"tei la &e$ica&e"te !i !u"t !u(iectul &o$ificarii %irale. Perioa$a $e fra &e"tare a ADN 0figura 2, faza F2 #oate fi utilizata #e"tru $i%i$erea i" !erii te&#orale a e%e"i&e"telor i&#licate i" a#o#toza &ai &ult $ecat #erioa$a !i"tezei $e ADN 0figura 2, faza S2 ce e!te utilizata #e"tru i&#artirea ciclului celular #roliferati% 0772. Pe #arcur!ul fazei D1 a#o#totice, celula !ufera o re#ro ra&are e"etica, #roce! #e #arcur!ul caruia e"e care erau "or&al e*#ri&ate acu& !u"t !u#re!ate !i i"%er! 07<'7@2. Ace!te &o$ificari e#i e"etice au ca rezultat fra &e"tarea $u(lu cate"ara a ADN #e #arcur!ul fazei :. Pe #arcur!ul ace!tei faze : &orfolo ia "ucleara !e !c)i&(a 0&ar i"alizarea "ucleara a cro&ati"ei ur&ata $e co"$e"!area "ucleara !i e%e"tual $e fra &e"tarea "ucleului i"!u!i2, cu toate ca &e&(ra"ele #la!&atica !i lizozo&ala !u"t i"ca i"tacte !i &itoco"$ria i"ca fu"ctio"ala. Pe #arcur!ul ur&atoarei faze, #ortiu"ea D 7, a#are i"&u urirea &e&(ra"ei !i e%e"tual fra &e"tarea celulara i" clu!tere $e cor#i a#o#totici i"%eliti i" &e&(ra"a.

5. ioc!imia apoptozei
Celulele care !ufera a#o#toza, !e co"tracta co"!i$era(il, iar electro"o'&icro rafiile e%i$e"tiaza o cito#la!&a e*tre& $e co"$e"!ata cu or a"ite ce #ar a fi "or&ale. Cea &ai #lauzi(ila e*#licatie ar fi aceea ca celula a #ier$ut a#a !i, cu& "u !e e%i$e"tiaza o u&flare i&e$iata, #ro(a(il a #ier$ut io"i izoo!&otic. De a!e&e"ea, "u au fo!t $e!cri!e leziu"i !#ecifice ale or a"itelor cito#la!&atice, !au ele "u au fo!t cautate i"tr'u" &o$ a$ec%at. A fo!t o(!er%ata u&flarea ci!ter"elor reticului e"$o#la!&ic. .ioc)i&ic, i" celula are loc re$ucerea !i"tezei $e ARN !i #rotei"e ur&ata $e $e ra$area lor, $ar !i"cro"izarea ace!tor e%e"i&e"te i" ra#ort cu &o$ificarile &orfolo ice "u e!te i"ca (i"e caracterizata. Totu!i, i"itial !'a crezut ca tra"zitia $e la "or&al la co"tractarea a#o#totica !e realizeaza atat $e ra#i$ i"cat "u #oate fi o(!er%ata o !tare i"ter&e$iara, cito&etria i" flu* #oate a/uta la caracterizarea &o$ificarii !i i" co&(i"atie cu !ortarea celulara #oate i"le!"i o #atru"$ere &ai #rofu"$a i" or$i"ea e%e"i&e"telor. De!i a#o#toza e!te u" #roce! o#u! "ecrozei, re#reze"ta"$ calea fiziolo ica $e &oarte celulara, #oate fi $e a!e&e"ea #ro%ocata $e !ti&uli #atolo ici. I" e"eral, orice !ti&ul ce #ro$uce "ecroza #ri" $i!tru ere celulara $irecta #oate i"$uce a#o#toza, i" cazul i" care celula i"itial !u#ra%ietuie!te. I" ace!t !e"!, a#o#toza re#rezi"ta u" ra!#u"! celular coor$o"at la
1@<

A#o#toza. I&#licatii i" #atolo ia &ali "a

!ti&uli %ata&atori care "u !u"t i&e$iat letali. Nu !e #oate %or(i $e o !erie i"%aria(ila $e e%e"i&e"te &eta(olice ce au loc i" cur!ul a#o#tozei. Totu!i, ti&#uriu, i" a#o#toza, i" &ulte ti#uri celulare a#are o cre!tere !u!ti"uta a "i%elului $e calciu io"izat cito!olic. Calciul, #oate acti%a late"t e"zi&e care co"tri(uie la &o$ificarile !tructurale $i" cur!ul a#o#tozei. Ace!te e"zi&e i"clu$ o e"$o"ucleaza "ucleara calciu $e#e"$e"ta care cli%eaza i"%aria(il ADN !i o tra"! luta&i"aza care cro!!li"3eaza #rotei"e cito!olice. Proteazele calciu $e#e"$e"te 0cal#ai"a2 $e ra$eaza cito!c)eletul 0figura 42 075'762. I" e"eral, #roce!ul a#o#totic are "e%oie $e e"er ie !u( for&a $e ATP, recla&a !i"teza acti%a a ARN !i #rotei"a $e#i"$e $e ti#ul celular !i !ti&ulul a#o#totic. I" li&focitele &ature, a e"tii care i")i(a ARN'ul !au !i"teza #roteica i" e"eral $uc la (locarea a#o#tozeiB $i" co"tra, i" "eutrofilele i&ature !i i" u"ele li"ii celulare leuce&ice, aceea!i co&#u!i a&#lifica a#o#toza. U"a $i" e*#licatiile ace!tei co"tra$ictii e!te ca &a/oritatea celulelor co"ti" #rotei"e re latoare care #ot i")i(a !au #ro&o%a &oartea celulara fiziolo ica. I"tr'u" ti# #articular celular, co&#ara"$ ratele cata(olice ale i")i(itorilor !i #ro&otorilor !e #oate $eter&i"a $aca !i!tarea !i"tezei $e ARN !i #roteice #re%i"e !au i"$uce a#o#toza.

Figura 4. E%e"i&e"te &eta(olice ce au loc i" a#o#toza.

I" celulele $e!ti"ate !a !ufere a#o#toza cre!te &RNA #e"tru H'tu(uli"a i"ai"te $e a#aritia &o$ificarilor &orfolo ice !i a cli%a/ului DNA. I"tr'o eta#a ulterioara, a#ar !i i" cito#la!&a ca"titati cre!cute $e H 'tu(uli"a. Pro(a(il ca, e"ele #e"tru H'tu(uli"a !u"t $e ra$ate i&#reu"a cu re!tul DNA'ului "uclear i"$ata ce e"$o"ucleaza $e%i"e acti%a 0<E2. A e"tii care i"terfera cu #oli&erizarea acti"ei, cu& ar fi citocala!i"a ., !'a aratat ca #re%i" i"&u urirea celulara ce $uce la for&area cor#ilor a#o#totici fara a (loca fra &e"tarea "ucleului !au cli%a/ul DNA 0<12.
1@=

DANIELA NICOLETA PETRUSCA, OLIVIA MIHAELA POPA, L. MESTER

5.1. Activitatea endonucleazica, structura cromatinei si degradarea A"# in apoptoza Nucleul e!te locul #ro$ucerii &a/oritatii &o$ificarilor $ra&atice ce au loc i" a#o#toza. Mo$ificarile !u"t !tu$iate &ai (i"e cu a/utorul &icro!co#iei electro"ice $e tra"!&i!ie 0figura 52, $ar au fo!t $e/a %izualizate i" celule %ii i" ur&a utilizarii colora"tilor fluore!ce"ti cu& !u"t acri$i" ora"/ul !au Hoec)!t <<<=7. Mo$elul &o$ificarilor $ifera $e la u" ti# celular la altul $ar, i" e"eral, "ucleul !e co"tracta !i cro&ati"a $e%i"e foarte $e"!a, !e fra &e"teaza !i, i" fi"al !e lea a !tra"! $e a"%elo#a "ucleara. Acea!ta &o$ificare e!te a$e!ea aco&#a"iata $e fra &e"tarea ADN i" !u(u"itati re ulate ce for&eaza o +!cara- ca rezultat al ru#erii $u(lu cate"are, a#are"t ra"$o&ice la "i%elul re iu"ilor li"3er $i"tre &iezurile "ucleozo&ale. I" fiecare celula e*i!ta #e!te u" &ilio" $e a!tfel $e ru#turi ceea ce rele%a o !ituatie i&#o!i(il $e re#arat !i ca ur&are are loc !i!tarea tra"!cri#tiei 0<72. I" ulti&ii a"i a e*i!tat o co"tro%er!a cu #ri%ire la $i&e"!iu"ile fra &e"telor $e ADN, #ro$u!e #e #arcur!ul a#o#tozei, re!#o"!a(ile $e a" a/a&e"tul ire%er!i(il #e calea &ortii celulare.

Figura 5. Mo$ificarile !tructurale ale celulei #e #arcur!ul a#o#tozei. I&a i"ea !u#erioara re#rezi"ta o celula "or&ala. I&a i"ea i"ferioara re#rezi"ta o celula i" cur!ul #roce!ului $e a#o#tozaB !a etile i"$ica fra &e"te $e cro&ati"a co"$e"!ata. 1@4

A#o#toza. I&#licatii i" #atolo ia &ali "a

E*i!ta o !erie $e ra#oarte ce #recizeaza ca atu"ci ca"$ celula i"tra i" a#o#toza ADN' ul e"o&ic e!te $e ra$at i" fra &e"te &ici "ucleozo&ale 0re#etari $e cate 7EE #(2. Totu!i au e*i!tat ra#oarte ce !u!ti"eau ca celulele #ot i"tra i" a#o#toza #e criterii &orfolo ice fara #ro$ucerea +!carii- $e ADN "ucleozo&al 0<<'<@, <52. O !erie $e i"%e!ti atii au !u erat ca #rotei"ele re!#o"!a(ile $e fra &e"tarea letala a ADN i" a#o#toza !u"t e"$o"ucleaze $e ti# DNaza I care, #e"tru acti%are, $e#i"$ $e calciu 0Ca7J2 011, <?2. De a!e&e"ea, i"tr'o !erie $e ti#uri celulare, i" care a fo!t i"$u!a a#o#toza !u( $iferite for&e, !'a $e&o"!trat ele%area !u!ti"uta a "i%elului $e io"i li(eri $e calciu i"tracelular 0Cai2 0<6'=<2 care !'a !u erat ca ar fi "ece!ari #e"tru acti%area e"$o"ucleazelor $e a#ro*i&ati% 7< 3D 0==, =42. Celulele ra!#u"$ la o cre!tere a Ca i #ri" #o&#area calciului i" i"teriorul u"ei or a"ite i"tracelulare !au i" afara celulei #ri" &e&(ra"a cito#la!&atica. A!tfel $e tra"!#ort $e Ca7J e!te catalizat $e !c)i&(ul &e&(ra"ar $e Na7J ' Ca7J !i $e #rotei"ele ATP' aze Ca7J. Deoarece ATP'aze Ca7Jcere u" #roto" #e"tru tra"!#ortul %ectorial al Ca 7J i" afara celulei u" a!tfel $e tra"!#ort ar #utea aci$ifia celula $aca "u ar fi i&e$iat ta&#o"at !au tra"!#ortat i" afara celulei 0=@2. I" &o$elul #ro#u! $e :ili#!3i i" 166E 0figura $2 e!te #ri%it ca fii"$ or$o"at i" (ucle $e cro&ati"a (i"e !ta(ilizate $e cate 4E 8(, ace!te (ucle !u"t i"fa!urate i" !tructuri )e*a&erice "u&ite rozete !i co"ti"a"$ a#ro*i&ati% <EE 8( $e ADN. Rozetele for&eaza !u(u"itatea $e (aza a cro&ati$ei ra!ucite. Au fo!t !tu$iate acti%itatile e"$o"ucleolitice a!ociate cu fra &e"tarea ADN cu &a!a &oleculara &are cu a/utorul te)"icii P:DE 0#ul!e$ fiel$ ra$ie"t el electro#)ore!i!2. S'a o(!er%at, i" toate ti#urile $e celule !tu$iate, o acti%itate $e#e"$e"ta $e M 7J ca#a(ila $e #ro$ucerea fra &e"telor $e la 4E 8( la <EE 8(, iar io"ii $e Ca au fo!t "ece!ari #e"tru fra &e"tarea ulterioara la oli o"ucleozo&i 0=5'=62. Acea!te e*#eri&e"te au !u erat ca ar #utea fi "ece!are $oua e"zi&e !e#arate #e"tru fra &e"tarea co&#leta a ADN #e #arcur!ul a#o#tozei. Totu!i, utiliza"$ c)elatori ai Ca 7J i"tracelular 04E2 !'a o(!er%at ca #e"tru $e ra$area ADN $e &a!a &oleculara &are !u"t $e a!e&e"ea "ece!are ca"titati "a"o&olare $e calciu, co&#lica"$ a!tfel e*#licatia fe"o&e"ului $e cli%are. De a!e&e"ea !'a o(!er%at ca fra &e"tarea i"ter"ucleozo&ala $e ADN #oate fi (locata $e catre zi"c, cu"o!cut i")i(itor al e"$o"ucleazelor Ca7J !i M 7J $e#e"$e"te 041, 472. I" co"ti"uare !'a $e&o"!trat fa#tul ca fra &e"tarea i"ter"ucleozo&ala a ADN i" a#o#toza "u e!te ra"$o&ica 04<2. :ra &e"tarea a#are #refere"tial i" ele&e"tele re#etate ale ADN care au u" rol i" or a"izarea !tructurala a cro&ati"ei.

Figura $. Mo$elul :ili#!3i et al. 0166E2 ce #rezi"ta !tructura cro&ati"ei. Sa etile core!#u"$ !itu!urilor $e cli%are ale cro&ati"ei. 1@@

DANIELA NICOLETA PETRUSCA, OLIVIA MIHAELA POPA, L. MESTER

De a!e&e"ea, !e #are ca "ucleozo&ii !u"t eli(erati $e #referi"ta $i" re iu"ea $o&e"iilor +rozeta- !iI!au +(ucla- ce co"ti" ele&e"te re#etiti%e ale ADN #e #arcur!ul fazei !ecu"$are $e $e ra$are. S'a aratat ca !e"!i(ilitatea e"erala a cro&ati"ei la "ucleaze "u e!te alterata #e #arcur!ul a#o#tozei 04=2. Acea!ta i"$ica fa#tul ca i" co"$itiile u"ui "i%el ri$icat $e Ca7J fra &e"tarea $e ADN are loc i" i"teriorul +(uclelor- $e ADN la u" "u&ar !trict $e loci !i "u e $e#e"$e"t $e ra$ul $e #liere al fi(rei $e <E'"& care $eter&i"a acce!i(ilitatea e"erala a re iu"ilor li"3er 0442. Lua"$ i" co"!i$erare toate ace!te $ate !e #oate !#u"e ca fra &e"tarea e"$o e"a a ADN #e #arcur!ul a#o#tozei !e #ro$uce i" < eta#e 0fi . @2. Pri&a eta#a i"ce#e cu acti%area u"ei e"$o"ucleaze le ata co"!tituti% $e o cla!a $e SAR 0re iu"i $e ata!are a &atricei !i cito!c)eletului2 (o ate i" le aturi A'T, care ata!eaza $o&e"ii &ari ale cro&ozo&ului la &atricea "ucleara. Co"ce"tratia "ucleara e"$o e"a $e M 7J e!te !uficie"ta #e"tru acti%itatea ei. Nu e!te "ici o ceri"ta $e Ca 7J atat ti&# cat ADN e!te &o"ocate"ar. S'au e%i$e"tiat a!tfel o !erie $e fra &e"te &o"ocate"are $e ADN #e #arcur!ul #roce!ului $e a#o#toza. A $oua eta#a i&#lica #ro#a area ace!tei $e ra$ari la alte cla!e $e SAR. Acea!ta #ro#a are are o $e#e"$e"ta $e Ca7J !u era"$ ca !itu!urile !i'au i&(o atit co&#ozitia i" C'D !i toata cro&ati"a e!te re$u!a la fra &e"te $e K <EE 3(. I" eta#a a treia !e cli%eaza ADN i"ter"ucleozo&al la re iu"ile li"3er $i" i"teriorul +(uclelor- !i e"ereaza +!cara- ADN. Acea!ta cli%are e!te relati% i"$e#e"$e"ta $e !ec%e"ta 0i" ter&e"i le ati $e !itu!urile ce lea a "ucleaza2 $ar "ece!ita Ca7J #e"tru ci"etica. De a!e&e"ea, acea!ta eta#a "ece!ita #roteoliza 04@2. :actorii a$itio"ali i&#licati i" acea!ta eta#a ar #utea realiza e*te"!ia fi"ala a fra &e"tarii ADN ce $ifera &ult $e la u" ti# celular la altul. Toate ace!te eta#e $e $e ra$are !u"t catalizate $e o e"zi&a !au $oua #ool'uri $e e"zi&e cu #ro#rietati DNaza'I li3e. A"#%ul mitocondrial "u !ufera fra &e"tare 0452. Se #re!u#u"e ca acea!ta cli%are a ADN'ului "uclear, i"tr'o eta#a ti&#urie a #roce!ului, #oate a%ea u" rol #rotector #ri" e%itarea tra"!ferului $e &aterial e"etic #ote"tial acti% celulelor %eci"e $u#a fa ocitarea cor#ilor a#o#totici 04?2. E*i!ta !i ti#uri celulare i" care a#o#toza ti#ica, care i"clu$e &o$ificarile "ucleare, e!te o(!er%ata &icro!co#ic ca fii"$ li#!ita $e cli%a/ul "ucleozo&ilor ADN. Totu!i, i" #uti"ele !i!te&e i" care a fo!t !tu$iata, au fo!t o(!er%ate a"u&ite for&e $e $eteriorare a ADN 0ru#tura &o"ocate"ara e*ti"!a, rare fra &e"tari $u(lu'cate"are2, "ece!are &o$ificarilor &orfolo ice #rofu"$e. Nu e*i!ta u" co"!e"! #ri%i"$ rolul #e care il /oaca fra &e"tarea ADN ce are loc i"ai"tea &ortii celulare. De!i tra"!cri#tia e!te o#rita, ea i"!a!i "u e!te atat $e ra#i$ letala #recu& e!te a#o#toza, ceea ce i"!ea&"a ca !u"t i&#licate !i alte #roce!e. S'a co"!tatat fa#tul ca aci$ul auri" tricar(o*ilic, care i")i(a "ucleaza, e!te u" i)i(itor al tuturor a!#ectelor le ate $e a#o#tozaB $ar e!te i"corect !a co"cluzio"a& ca, #ri" ur&are, $i!tru era ADN e!te #a!ul critic i" #roce!ul a#o#tozei, atata %re&e cat auri"ul i")i(a &ulte alte reactii &eta(olice celulare. 5.2. Modificarile mem&ranei plasmatice :a ocitarea ra#i$a a cor#ilor a#o#totici $e catre celulele a$iace"te, cat ti&# &e&(ra"ele lor celulare !u"t i"tacte 0#e"tru #re%e"irea i"fla&atiei !i lezarii te!uturilor i" care !e for&eaza, i" !#ecial ca"$ #roce!ul a#are i" co"$itii fiziolo ice2 i&#lica o#erarea u"ui &eca"i!& $e recu"oa!tere foarte !#ecific !i e*i!ta $o%ezi care !u!ti" e*i!te"ta &ai &ultor a!tfel $e &eca"i!&e 0462. I" &o$ "or&al, fo!foli#i$ele &e&(ra"ei #la!&atice !u"t $i!tri(uite a!i&etric. Li#i$ele ce co"ti" coli"a, cu& ar fi fo!fati$ilcoli"a 0:C2 !i !fi" o&ieli"a !u"t co"ce"trate #e fata e*ter"a a &e&(ra"ei #la!&atice i" ti&# ce a&i"ofo!foli#i$ele cu& !u"t fo!fati$ileta"ola&i"a 0:EA2 !i fo!fati$il!eri"a 0:S2 a(u"$a #e fata i"ter"a a &e&(ra"ei #la!&atice. Di"tre toate fo!fati$il!eri"a 0:S2 e!te re!trictata i" &a/oritatea celulelor e*clu!i% la fata i"ter"a a &e&(ra"ei 0@E2. Pier$erea a!i&etriei fo!foli#i$ice !i e*#u"erea :S a fo!t #ri&a oara
1@5

A#o#toza. I&#licatii i" #atolo ia &ali "a

$e&o"!trata #e"tru li&focite 0@12 $ar acea!ta $e!co#erire a fo!t co"fir&ata i"tr'o !erie $e ti#uri celulare 0@72. E*ter"alizarea :S e!te ra#i$a !u era"$ &ai $e ra(a u" tra"!#ort facilitat $ecat o $ifuzie #a!i%a a li#i$elor #ri" (i!trat. Acea!ta acti%itate !e #re!u#u"e ca e!te &e$iata $e o #rotei"a e"zi&atica acti%ata $e calciu, ATP i"$e#e"$e"ta !i "e!#ecifica $i" #u"ct $e %e$ere al fo!foli#i$elor tra"!#ortate 0@<2. Di" #u"ct $e %e$ere (iolo ic, e*#u"erea :S la !u#rafata e co"!i$erata a fi u" li a"$ #e"tru i"laturarea ra#i$a a celulelor ce'l e*#ri&a. O alta co"!eci"ta (iolo ica e!te le ata $e fa#tul ca :S !er%e!te $re#t cofactor #e"tru ca!ca$a $e coa ulare 0@=2 $o&e"iu i" care $atele i"ce# !a !e co"tureze !u era"$ ca :S #oate a%ea o !erie $e efecte a"ti'i"fla&atoare !au i&u"o!u#re!i%e.

$. 'ecunoasterea si inlaturarea celulelor apoptotice

E%e"i&e"tul fi"al, co&u" #e"tru &a/oritatea celulelor a#o#totice e!te re#reze"tat $e recu"oa!terea !i i"$e#artarea lor $e catre fa ocite. Celulele a#o#totice !u"t i"$e#artate i"ai"tea lizei lor, ace!t e%e"i&e"t !u era"$ ca ele e*#ri&a &o$ificari !#ecifice #e !u#rafata ce !e&"alizeaza fa ocitelor le area !i i" lo(area lor. Ace!te fa ocite #ot fi #rofe!io"i!te 0&acrofa ele2 !au a&atoare 0fi(ro(la!te, celule e#iteliale !i celule &u!culare "ete$e $i" #eretii %a!elor $e !a" e2. Pa"a acu& au fo!t $e!cri!i &ai &ulti rece#tori #e &acrofa e !i alte celule ce lea a celulele a#o#totice !i &e$iaza i" lo(area lor. Ace!tia !u"t re#reze"tati $e rece#tori lecti"'li3e 0@42, rece#torul #e"tru %itro"ecti"e L%H< 0@@2, CD<@, rece#torul $e recu"oa!tere al fo!fati$il!eri"ei 0@52, i"ca "ecaracterizat, CD1= 0@?2 !i rece#tori !ca%a" er 0@62. De cura"$, !'a $e&o"!trat ca tra"!#ortorul A.C1, $e a!e&e"ea i&#licat i" i" lo(area celulelor &a&alie"e a#o#totice, &e$iaza tra"!#ortul a"io"ic fii"$ o&olo e"ei ce$'5 a!ociata cu fa ocitoza cor#ilor a#o#totici i" C. ele a"!. Meca"i!&ul #ri" care ace!ti rece#tori &e$iaza fa ocitoza celulelor a#o#totice "u e!te cu"o!cut, iar li a"zii ace!tor rece#tori "u !u"t i"ca (i"e caracterizati. Cu toate ace!tea co&u" &ultor celule ra&a"e e*#u"erea fo!fati$il!eri"ei #e fata e*ter"a a &e&(ra"ei #la!&atice, ace!t fo!foli#i$ #ara"$ a fi recu"o!cut i"tr'o &a"iera !tereo!#ecifica $e catre !u(!eturi $e &acrofa e, $e catre celule &ela"o&a, $e celule &u!culare "ete$e $i" #eretii %a!elor $e !a" e !i $e celule Sertoli. I" &o$ "or&al, fo!foli#i$ele $e &e&(ra"a !u"t $i!tri(uite a!i&etric. Macrofa ele !u"t +fa ocite #rofe!io"i!te- ce i"$e#arteaza celulele !i cor#ii a#o#totici, $ar la ace!t #roce! #ot #artici#a !i alte ti#uri celulare, ca $e e*e&#lu celule e#iteliale !i tu&orale ce #ot i" lo(a celule a#o#totice %eci"e. I" ti&#ul i" lo(arii celulelor a#o#totice, &acrofa ele "u eli(ereaza a e"ti $e ti#ul eico!a"oizilor !i cito3i"elor 05E2. Li#!a ace!tui ra!#u"! #are a fi $eter&i"ata $e &eca"i!&ul #ri" care celulele a#o#totice !u"t i" erate, $at fii"$ ca celulele a#o#totice, o#!o"izate #e"tru a #utea fi #reluate $e rece#torii :c ai &acrofa elor, i"$uc, $e e*e&#lu, eli(erarea $e tro&(o*a". Totu!i, $aca celulele a#o#totice "u !u"t #reluate $e catre &acrofa e, ele !e u&fla !i !e $ezi"te reaza eli(era"$u'!i co"ti"utul. Daca ar a%ea loc u" a!tfel $e e%e"i&e"t #e #arcur!ul cleara"ce'ului "eutrofilelor $i" !itu!urile i"fla&ate, eli(erarea co"ti"utului ra"ulelor cito#la!&atice ar a%ea co"!eci"te "efa!te. Mai &ult $ecat atat, e%a$area "e$orita a &aterialului "uclear $i" leucocitele &oarte, #oate fi $e a!e&e"ea #ericuloa!a, "ucleozo&ii eli(erati $i" li&focitele a#o#totice "ei" erate #ot !ti&ula !i"teza $e ADN !i i&u"o lo(uli"e i" li&focitele %ia(ile 0512. Pri" ur&are, e!te #o!i(il ca $ezi"te rarea li&focitelor a#o#totice 0#re!u#u! "ei" erate2 !a co"!tituie o !ur!a $e ADN "ucleozo&al circula"t, o(!er%at $e altfel la a"u&iti #acie"tii cu lu#u! !i!te&ic erite&ato!, co"tri(ui"$ la !ti&ularea #oliclo"ala a celulelor . ti#ica #e"tru acea!ta afectiu"e autoi&u"a !i
1@?

DANIELA NICOLETA PETRUSCA, OLIVIA MIHAELA POPA, L. MESTER

ti"ti"$ autoa"ticor#i catre #aturile %a!culare, cu& ar fi lo&erulii re"ali, i" care co&#o"e"tele "ucleozo&ale circula"te !'ar #utea le a 0572. E*i!ta &ai &ulte &eca"i!&e #o!i(ile $e recu"oa!tere a celulelor a#o#totice $e catre fa ocite !i $e a!e&e"ea, &ai &ulte !tatu!uri ti"ta etalate $e celulele a#o#totice. (ectinele fagocitelor U" &eca"i!& o(i!"uit $e i"teractie i"tercelulara il re#rezi"ta le area car(o)i$ratilor $e la !u#rafata celulara a u"ei celule $e lecti"ele altei celule, &eca"i!& ce #oate fi i")i(at !#ecific $e catre za)aruri !i&#le recu"o!cute $e lecti"e. U"ele $i" co"!eci"tele a#o#tozei !u"t re#reze"tate $e &o$ificarile !#ecifice ale car(o)i$ratilor $e #e !u#rafata &e&(ra"ei celulare. Se #re!u#u"e ca #ier$erea, #ri"tr'u" &eca"i!& i"ca "ecu"o!cut, a u"ui rezi$uu ter&i"al $e aci$ !ialic $i" la"turile laterale lico#roteice ar #utea !a e*#u"a N'acetil lucoza&i"a, N'acetil alactoza&i"a !i alactoza, &a!cate i" co"$itii "or&ale, re!titui"$ ace!te rezi$uuri acce!i(ilitatii i"teractiu"ii cu #re!u#u!ele lecti"e &acrofa ice 05<2 0figura )2.

Figura ). Trei &eca"i!&e #ri" i"ter&e$iul carora fa ocitele ar #utea recu"oa!te celulele ce i"tra i" a#o#toza.

'eceptori trom&ospondinici ai fagocitelor Macrofa ele u&a"e $eri%ate $i" &o"ocite 0HMDM2 #ot recu"oa!te "eutrofile !i li&focite u&a"e a#o#totice #ri" i"ter&e$iul rece#torilor #e"tru %itro"ecti"a 0V"R2 L%H< !i rece#torii !ca%e" er $i" cla!a . 0CD<@2 05=2. Ace!ti rece#tori !e lea a $e tro&(o!#o"$i"a ce !er%e!te $re#t #u"te i"tre &acrofa e !i celulele a#o#totice. Se #are ca acea!ta recu"oa!tere
1@6

A#o#toza. I&#licatii i" #atolo ia &ali "a

e!te i"$e#e"$e"ta $e e*#u"erea fo!fati$il!eri"ei le !u#rafata &e&(ra"ei celulei a#o#totice !i #are a fi le ata $e fe"oti#ul &acrofa ului !i "u $e ti#ul celulei a#o#totice. 'eceptorii pentru fosfatidilserina E!te clar ca &acrofa ele #ot recu"oa!te fo!fati$il!eri"a i"tr'o &a"iera $e#e"$e"ta $e $oza !i $e !tereo!#ecificitate, fa#t ce !u ereaza e*i!te"ta rece#torului #e"tru :S. Au fo!t $e!cri!i o !erie $e rece#tori cu rol i" &e$ierea recu"oa!terii :S !i a"u&e CD@?, CD1=, a"e*i"ele, rece#torii !ca%e" er, (eta7 lico#rotei"a I !i a!'@. E*i!ta !i $ate care !u ereaza recu"o!terea :S $e #e celulele a#o#totice $e catre fa ocite +a&atoare-. Nu !e !tie totu!i $aca ace!ti rece#tori !u"t !#ecifici #e"tru :S. Cel &ai #ro(a(il e!te ca &ai &ulti rece#tori #ot le a :S, $ar ra&a"e i"ca !u( !e&"ul i"tre(arii $aca ei #ot recu"oa!te :S #e !u#rafata celulara. :oarte &ulti a"i !e&"ificatia fa ocitarii celulelor i"tacte +"e$orite- a fo!t !u(e!ti&ata. Pa"a "u $e&ult, i" lo(area celulelor a#ototice a fo!t co"!i$erata ca o i"laturare #rotecti%a a celulelor "e$orite 0542. Rece"t cleara"ce'ului celulelor a#o#totice i'a fo!t atri(uit o "oua !e&"ificatie. I" fu"ctie $e co"te*t, i"laturarea celulelor a#o#totice $e catre fa ocite #oate !u#re!a i"fla&atia, #oate &o$ula $eletia $irectio"ata a celulelor az$a !au a #arazitilor i"%a$a"ti $e catre &acrofa e !i #oate re la ra!#u"!ul i&u" 0figura *+.

Figura *. Cleara"ce'ul fa ocitic al celulelor a#o#totice.

). ,enetica apoptozei
I" #ofi$a "u&eroa!elor #ro re!e ce !'au realizat i" cercetarea !tii"tifica e!te foarte $ificila i$e"tificarea &oleculelor re!#o"!a(ile $e a#o#toza cu a/utorul $e&er!urilor (ioc)i&ice !i &oleculare i" !i!te&ele &a&alie"e. Di" fericire, "e&ato$ul Cae"or)a($iti! ele a"! re#rezi"ta u" &o$el #articular $e !tu$iu al re larii e"etice a a#o#tozei e*tre& $e util 05@2. Pe #arcur!ul $ez%oltarii e&(rio"are !i lar%are a "e&ato$ului !u"t eli&i"ate 1<1 $i" 1E6E celule i" ca$rul u"ui #ro ra& foarte (i"e caracterizat, i"%aria"t $i" #u"ct $e %e$ere !#atio' te&#oral. A!tfel, !'a i$e"tificat u" "u&ar &are $e &utatii ce afecteaza !ta$ii !#ecifice ale #roce!ului a#o#totic !i e"ele core!#u"zatoare care au fo!t or$o"ate i"tr'o !c)e&a e"etica
15E

DANIELA NICOLETA PETRUSCA, OLIVIA MIHAELA POPA, L. MESTER

0figura -2. Ace!te e"e !u"t i&#licate i" $ecizia $e a i"tra #e calea &ortii, i" e*ecutia ace!tei cai, i" i" lo(area celulelor &uri(u"$e !i i" $e ra$area re!turilor celulare $i" ca$rul i" lo(arii. Doua $i"tre ace!te e"e, ce$'< !i ce$'= !u"t "ece!are #e"tru toate for&ele $e a#o#toza $i" ca$rul $ez%oltarii !i !e co"!i$era a co$ifica efectorii fi"ali ai cai a#o#totice. O alta e"a re latoare c)eie, ce$'6, e!te "ece!ara #e"tru !u#re!ia a#o#tozei i" celulele #ro ra&ate !a !u#ra%ietuia!ca 0552. Acea!ta e"e co$ifica o #rotei"a o&olo a cu fa&ilia .cl' 7 $i" !i!te&ul u&a". Mai &ult $ecat atat, e*#re!ia lui .cl'7 #oate i")i(a a#o#toza i" "e&ato$e !i #oate c)iar !u(!titui #artial #ier$erea fu"ctiei lui Ce$'6, ceea ce i"$ica fa#tul ca cel #uti" cate%a co&#o"e"te ale caii a#o#totice !u"t co"!er%ate i" e%olutie. Mutatiile !ur%e"ite i" @ e"e afecteaza i" lo(area cor#ilor a#o#totici $e catre celulele %eci"e "o"' #rofe!io"ale. Protei"ele i"tracelulare Ce$'7, Ce$'4 !i Ce$'1E !e&"alizeaza i"tr'o &a"iera co&#ara(ila cu o&olo ii lor &a&alie"i Cr3ll, DOC8 1?E !i Rac &e$ii"$ reor a"izarea !i e*te"!ia cito!c)eletului celulei i" lo(atoare. Ce$'5, o&oloa a cu A.C'1 acti%eaza atat i" celula &uri(u"$a cat !i i" cea i" lo(atoare, #o!i(il i" tra"!#ortul tra"!&e&(ra"ar $e li#i$e. Ce$'1 e!te a"alo rece#torilor !ca%e" er $i" !i!te&ul &a&alia"B Ce$'5 !i Ce$'1 #ro&o%eaza, #ro(a(il, i" lo(area i"teractio"a"$ cu #rotei"a a$a#toare $e !e&"alizare Ce$'@ 05?2.

Figura -. Sc)e&a e"etica a a#o#tozei i" C. ele a"!. Au fo!t izolate &utatiile $i" 1= e"e $iferite ce afecteaza a#o#toza i" $iferitele ei eta#e. Mutatiile ce i"flue"teaza $ecizia $e a &urii afecteaza $oar u" "u&ar &ic $e e"e. De"ele i&#licate i" eta#ele ulterioare !u"t co&u"e tuturor celulelor !o&atice $i" or a"i!& a" a/ate #e calea &ortii. Acti%itatea lui ce$'< !i ce$'= #ro&o%eaza &oartea celulara, iar ce$'6 #re%i"e ace!t #roce!.

*. Semnificatia apoptozei in cancer si in terapia cancerului

Implicatiile apoptozei in patologie Dere larea #roce!ului a#o#totic, ce are ca rezultat o &oarte celulara e*ce!i%a, i"!uficie"ta !au #re&atura, co"!tituie fu"$a&e"tul i"itierii !i #ro re!iei &ultor &ala$ii u&a"e. Se #re!u#u"e ca o e*acer(are a a#o#tozei celulelor "euro"ale ar #utea co"tri(ui la #ro re!ia !i !e%eritatea &ai &ultor $ere lari "euro$e e"erati%e ce i"clu$ &ala$ia Alz)ei&er, !cleroza laterala a&iotrofica, atrofia &u!culara !#i"ala, &ala$ia Par3i"!o", &ala$iile "euro&otorii !i c)iar atacul cere(ral. A#o#toza e*ce!i%a la "i%elul celulelor T circula"te e!te corelata cu !i"$ro&ul i&u"o$eficie"tei !e%ere !i SIDA, i" %re&e ce &a"ife!tarea i"!uficie"ta a ace!tui #roce! co"!tituie &eca"i!&ul $e $ecla"!are al a"u&itor (oli autoi&u"e !i li&fo#roliferati%e. I")i(area #roce!ului a#o#totic #ri" #ier$erea &utatiilor fu"ctio"ale i" e"ele acti%atoare ale &ortii !au ca!ti area u"or &utatii fu"ctio"ale i" e"ele !u#re!oare $e
151

A#o#toza. I&#licatii i" #atolo ia &ali "a

&oarte e!te i"cri&i"ata i" tra"!for&area "eo#lazica. Viru!urile !i'au $ez%oltat &eca"i!&e care &a"i#uleaza calea a#o#totica #e"tru a'!i a!i ura #er#etuarea #ro#riei !u#ra%ietuiri, i")i(a"$ a#o#toza celulelor i"fectate #e"tru a #er&ite re#licarea %irala !i acti%a"$ a#o#toza &eca"i!&elor celulare $e a#arare ale az$ei. Ti"a"$ co"t $e ace!te realitati, &a"i#ularea cailor a#o#totice #ri" i"ter%e"tie far&acolo ica !au e"etica #ro&ite "oi o#ortu"itati tera#eutice #e"tru o !erie $e &ala$ii. Circu&!ta"tele a#aritiei a#o#tozei !e i&#art i" $oua &ari cate ori. A#o#toza a#are i" te!uturile "or&ale, u"$e ra!#u"$e $e $eletia celulelor !i e!te $e a!e&e"ea o(!er%ata i" co"te*te #atolo ice !#ecifice. Cel #uti" i"tr'o #arte $i" !ituatiile $i" cate oria a $oua, #oate fi !u!ti"ut teoretic fa#tul ca %i"e i" !#ri/i"ul u"ei !e&"ificatii (iolo ice. Su#ra%ietuirea celulelor i" cur! $e $i!tru ere ar #utea fi "oci%a az$ei. I" co"tra!t, "ecroza e!te tot$eau"a #atolo ica fii"$ co"!eci"ta lezarii &a/ore a celulei !i "u ii #oate fi atri(uita "ici o fu"ctie )o&eo!tatica 062. Celulele ra!#u"$ la leziu"e, $aca #ot, #ri" a#o#toza. Daca u" &e$ica&e"t i"$uce a#o#toza i"tr'u" li&focit, $e o(icei "e fur"izeaza &ai &ulte $ate $e!#re celula $ecat $e!#re &e$ica&e"t, $eci a!tfel $e e*#eri&e"te tre(uie i"ter#retate cu #recautie. I&#licatiile ace!tui #roce! i" tera#ie !u"t e%i$e"te; u" &e$ica&e"t care i")i(a a#o#toza #oate fi folo!it i" #re%e"irea #ier$erii celulei acor$a"$ ti&# altor for&e $e tera#ie !a i"lature i"fectia. I" ca"cer, $i&#otri%a, %a a%ea %aloare tera#eutica o cale $e !ti&ulare a a#o#tozei i" celulele &ali "e. Mo$ul $e o(ti"ere al ace!tui efect cu !#ecificitate a$ec%ata re#rezi"ta o #ro%ocare la fel ca i" cazul a e"tilor c)e&otera#eutici uzuali. De!i ur, celulele T citoto*ice, u"a $i" cele &ai !tralucite i"%e"tii ale "aturii, !tiu cu& !a uci$a !#ecific. O alta #ote"tiala tera#ie e re#reze"tata $e a"ticor#ii $ecla"!atori ai a#o#tozei, $ar foarte i&#orta"te !u"t !i i&u"oto*i"ele ce a!cu"$ li a"zi ce i"$uc a#o#toza. Co"co&ite"t cu e*#lorarea #ote"tialului tera#eutic al a#o#tozei e!te "ece!ara $e!co#erirea &eca"i!&elor !i &oleculelor i&#licate. E%olutiei i'au tre(uit &ilioa"e $e a"i #e"tru $ez%oltarea u"ui !i!te& $e!a%ar!it, ca#a(il !a eli&i"e celulele "e$oriteB "oua "e re%i"e $ificila !arci"a $e a $e!co#eri cu& !a i"$uce& or a"i!&ului co&utarea #roce!ului #e +o"- !au +off-, la co&a"$a. Le aturile i"tercelulare caracteri!tice for&elor !u#erioare $e %iata "u ar fi #o!i(ile fara u" &eca"i!& $e i"$e#artare i"$i%i$uala a celulelor care "u &ai !u"t "ece!are !au care "u &ai fu"ctio"eaza "or&al. Re larea $efecti%a a &ortii celulare #ro ra&ate ar #utea /uca u" rol i" etiolo ia ca"cerului, SIDA, (olilor autoi&u"e !i (olilor $e e"erati%e ale !i!te&ului "er%o! ce"tral. Ma"i#ularea far&acolo ica a a#o#tozei ofera "oi #o!i(ilitati $e #rofila*ie !i trata&e"t ace!tor &ala$ii. .ransformarea maligna Deoarece o celula tre(uie !a !ufere o !erie $e &o$ificari &oleculare #e"tru a ati" e fe"oti#ul &ali " !i $atorita fa#tului ca ace!te !c)i&(ari !u"t $e!eori i"$u!e $e a e"ti !au trata&e"te care, i" ti&#, altereaza celula, orice acti%eaza !u#ra%ietuirea celulelor $eteriorate !au i"itiate #ro&o%eaza carci"o e"eza. I" &a/oritatea cazurilor, celulele ca"ceroa!e !u"t $iferite $e celulele "or&ale $i" #u"ct $e %e$ere &orfolo ic. Variatiile le ate $e &ari&ea !i for&a celulelor !i a "ucleilor lor core!#u"$ #leo&orfi!&ului celulelor tu&orale. Nucleul e!te $e!eori &arit, cu $e"!itati i"e ale 0)i#er' !au )i#ocro&ati!&2, o &e&(ra"a "ucleara "ere ulata, a" ulara, "ucleoli #roe&i"e"ti, !i" ulari !au &ulti#li. E*i!ta o cre!tere a ra#ortului "ucleo'cito#la!&atic. Se o(!er%a !i celule +(izare-, cu "uclei #olilo(ati !au &ulti#li !i celule i a"tice. Ace!te &o$ificari re#rezi"ta !e&"ele citolo ice ale &ali "itatii. E*i!ta !i e*ce#tii, i" a"u&ite %arietati $e ca"cer, celulele tu&orale au u" a!#ect &orfolo ic foarte a#ro#iat $e celulele "or&aleB ca ur&are $ia "o!ticul
157

DANIELA NICOLETA PETRUSCA, OLIVIA MIHAELA POPA, L. MESTER

$e &ali "itate e!te $ificil $e )otarat !i i" a!tfel $e !ituati !e a#eleaza la alte criterii, i" #articular ar)itecturale. Ma/oritatea ca"cerelor !e caracterizeaza #ri"tr'u" "u&ar &are $e celule i" $i%iziu"e. Ace!te &itoze !u"t u"eori a"or&ale, &itoze tri' !au &ulti#olare. I"$icele &itotic, $efi"it #ri" "u&arul $e &itoze #e u"itatea $e ca&# &icro!co#ic, are o %aloare $ata co"tri(ui"$ la e%aluarea #ro "o!tica a tu&orilor. I" realitate, ca"cerele "u #o!e$a u" i"$ice &itotic ri$icat, ca cel care !e #oate o(!er%a i" #atolo ia "o"tu&orala. Totu!i, i" a"u&ite ti#uri $e ca"cer, $ia "o!ticul $e &ali "itate !e (azeaza #e i"$icele &itotic 0562. Apoptoza si cancerul O"colo ii au fo!t tra$itio"al #reocu#ati i" #ri"ci#al $e #roliferarea celulara, cu toate ace!tea i" ulti&ul ti&# ate"tia lor !e i"$rea#ta, cu u" i"tere! $i" ce i" ce &ai &are, !#re !tu$iul a#o#tozei 07, 11, ?E2. O(!er%atia le ata $e a#aritia a#o#tozei i" tu&ori "u e!te rece"ta. Cu #e!te 7E $e a"i i" ur&a !'a !u erat ca a#o#toza e!te re!#o"!a(ila $e o &are #arte $i" #ier$erile celulare ce a#ar i" tu&ori, o(!er%atii o(ti"ute i" !tu$iile ci"etice, !i "u &ai e!te o "outate e*ti"$erea ei !i acti%area i" tu&ori ca ur&are a a#licarii (i"e cu"o!cutelor &eto$e tera#eutice; ira$ierea, c)e&otera#ia citoto*ica, a(latie )or&o"ala 0?1,?72. Totu!i, i" ulti&ii a"i, e*ti"$erea cu"o!ti"telor $e!#re co"trolul a#o#tozei la "i%el &olecular a $u! la lar irea !e&"ificatiei ei #ote"tial o"colo ice $e#a!i"$ !i&#la ali&e"tare a u"ei e*#licatii &eca"ici!te #e"tru $eletia celulelor tu&orale. I" #articular, $e!co#erirea fa#tului ca a#o#toza #oate fi re lata $e #ro$u!ii u"or a"u&ite #roto'o"co e"e !i $e e"a !u#re!or tu&oral #4<, a $e!c)i! "oi $ru&uri %iitoarelor cercetari. Atu"ci ca"$ &o$ificarile $e la "i%elul ADN cauzeaza acu&ularea a"or&ala $e celule !e #ro$uce tra"!for&area &ali "a. Ratele co&#arati%e, ale &ortii celulare !i ale $i%iziu"ii celulare, $eter&i"a %iteza $e cre!tere a ca"cerului. A"u&ite celule ca"ceroa!e !e $i%i$ &ult &ai i"cet $ecat celulele "or&ale, $ar, ca"cerul co"ti"ua !a !e e*ti"$a $atorita #relu" irii ti&#ului $e %iata al celulei. Multi carci"o e"i #ro%oaca ru#turi ADN !au i"terfera cu e"zi&ele "ece!are #e"tru re#licarea corecta a ADN. Celula #oate ra!#u"$e la ace!t ti# $e alterare i" &ai &ulte feluri; #oate i"tarzia $i%iziu"ea celulara #a"a la rer#ararea leziu"ii, #oate !uferii a#o#toza !au #oate #ro re!a fara i"treru#ere i" ciclul $e cre!tere celulara. A#o#toza e!te o &eto$a eficie"ta $e #re%e"ire a tra"!for&arii &ali "e $eoarece ea i"$e#arteaza celulele care #o!e$a alterari e"etice. A#o#toza a"or&ala #oate #ro&o%a $ez%oltarea ca"cerului, atat #ri" #er&iterea acu&ularii $e celule i" $i%iziu"e, cat !i #ri" (locarea i"$e#artarii %aria"telor e"etice cu #ote"tial &ali " ri$icat. I"ca "u !e cu"o!c factorii care $eter&i"a celula !a ur&eze u"a $i" cele trei cai; i"trarea i" a#o#toza $u#a leziu"e, re#ararea $eteriorarii !au co"ti"uarea ciclului celular. Para$o*al, a"u&ite e"e care !ti&uleaza $i%iziu"ea celulara, cu& e!te c'&,c, #artici#a la $eci$erea caii $e ur&at 0?12. Co"ce"tratiile $e ARN !i #rotei"a #e"tru c'&,c cre!c ti&#uriu i" a#o#toza !i !u#rae*#ri&area ace!tor o"co e"e i"$uce a#o#toza i" fi(ro(la!te 0?72. O"co e"a (cl'7 ar #utea fi +!u#re!orul e"eral al &ortii celulare- #e"tru e"ele care re leaza $irect a#o#toza 0?<2. Toate celulele )e&ato#oetice !i li&foi$e, &ulte celule e#iteliale !i "euro"ii co"ti" e"a (cl'7, i"tal"ita i" !#ecial i" &e&(ra"a &itoco"$riala, "ucleu !i reticul e"$o#la!&ic. Li&foa&ele foliculare $e celule . #o!e$a o co"ce"tratie cre!cuta $e #rotei"a .cl'7, $atorita tra"!locatiei Mt01=;1?2N care #la!eaza e"a (cl'7 !u( co"trolul u"ui #ro&otor #uter"ic, cel al e"ei ce co$ifica #e"tru la"tul reu al i&u"o lo(uli"ei. Protei"ele %iru!ului E#!tei"'.arr cre!c "i%elul e*#re!iei e"ei (cl'7 i" celulele li&fo&ului .ur3itt 0?=2. Co&#arati% cu li&focitele . "or&ale, acelea care e*#ri&a (cl'7 !u#ra%ietuie!c &ai &ult i" cultura $u#a #ri%area $e factori $e cre!tere !i !u"t rezi!te"te atat la ra$iatii io"iza"te
15<

A#o#toza. I&#licatii i" #atolo ia &ali "a

cat !i la lucocorticoizi. De a!e&e"ea, co"ce"tratiile cre!cute $e .cl'7 #rote/eaza celulele $e a#o#toza i"$u!a $e catre c'&,c 0?42. Soarecii tra"! e"ici, care au fo!t i" i"erizati #e"tru a !u#ra#ro$uce #rotei"a .cl'7, i" li&focitele ., $e!eori $ez%olta li&foa&e i&u"o(la!tice cu celule &ari !i $ifuze. La /u&atate $i" ace!te tu&ori cu ra$ a%a"!at $e $ez%oltare !e re&arca tra"!locatia e"ei c'&,c 0?@2. Pro$u!ul #roteic al e"ei !u#re!oare tu&orale #4< #oate i"tarzia #ro re!ia ciclului celular i"ai"tea i"itierii !i"tezei re#licati%e $e ADN. Multe ca"cere u&a"e #o!e$a &utatii !au $eletii la "i%elul e"ei #4< 0?52. Protei"ele co$ificate $e %iru!urile o"co e"e #ot $e a!e&e"ea le a !i i"acti%a #rotei"a #4<. Proa!ta fu"ctio"are a #4< #oate #ro&o%a $ez%oltarea ca"cerului #ri" #er&iterea $u#licarii DNA i" celulele cu &utatii !ecu"$are, i"ai"te $e o re#arare co&#leta. Totu!i, #4< e!te $oar u" i")i(itor al $i%iziu"ii celulare, i" alte !ituatii !e co&#orta ca o +a#o#to e"a- $irecta 0o e"a ce cauzeaza a#o#toza2. Su#er#ro$ucerea #rotei"ei #4< "or&ale, i" li"ia celulara leuce&ica &ieloi$a, i"$uce ra#i$ &oartea celulara #ri" a#o#toza 0??2 0figura 1/2.

Figura 1/. Relatia $i"tre #roliferarea celulara !i a#o#toza.

I" &ulte ti#uri celulare, #roliferarea "ece!ita cel #uti" $oi !ti&uli e*ter"i, u"eori "u&iti !e&"ale $e co&#ete"ta !i #ro re!ie. Se&"alele $e co&#ete"ta $ecla"!eaza e%e"i&e"tele &eta(olice co&u"e atat re#licarii cat !i a#o#tozeiB !e&"alul $e #ro re!ie a(ate celula !#re re#licare, alt&i"teri !ur%i"e a#o#toza.
15=

DANIELA NICOLETA PETRUSCA, OLIVIA MIHAELA POPA, L. MESTER

A#o#toza #oate fi co"!i$erata o cale alter"ati%a care $i!tru e celulele i"ca#a(ile !a !tra(ata +#u"ctul $e %a&a- i"ai"te $e re#licarea ADN !i !e #etrece i" celulele co&#ete"te acti%ate, ca"$ u" !e&"al $e #ro re!ie e!te a(!e"t !au a"or&al !au ca"$ o celula "u'!i re#ara o leziu"e i"tr'o #erioa$a critica. Ma/oritatea &e$ica&e"telor a"tica"ceri e"e; i")i(itori ai to#oizo&erazei, a e"ti alc)ila"ti, a"ti&eta(oliti !i )or&o"i a"ta o"i!ti, #ro$uc a#o#toza i" celulele !e"!i(ile 0?62. I" ur&a ace!tor o(!er%atii e!te !u(a"tele! fa#tul ca eficie"ta lor "u $e#i"$e tot$eau"a $oar $e i"teractia cu o ti"ta (ioc)i&ic !#ecificaB u" efect a!u#ra e%e"i&e"telor &eta(olice co"$uca"$ la a#o#toza #oate, $e a!e&e"ea, i"flue"ta ra!#u"!ul la c)e&otera#ie. S'a $e!co#erit fa#tul ca, i" $iferite ca"cere u&a"e, co"ce"tratia e"$o"ucleazelor calciu $e#e"$e"te, care $e ra$eaza ADN #e #arcur!ul a#o#tozei, %ariaza e"or&. Te"$i"ta u"ei celule ca"ceri e"e $e a !uferi a#o#toza #oate fi i&#orta"ta i" !#ecial #e"tru tera#ia tu&orilor &ali "e cu o rata !cazuta $e cre!tere, care !u"t $e o(icei rezi!te"te la a e"ti cito!tatici. Aparitia spontana a apoptozei in tumori A#o#toza #oate fi a!ita i" toate tu&orile %irtuale, "etratate. De!i !'au efectuat #uti"e !tu$ii ca"titati%e #reci!e 06E2, e%aluarile )i!tolo ice i"$ica fa#tul ca e*ti"$erea a#o#tozei i" a"u&ite tu&ori u&a"e !e a#ro#ie $e ceea ce !'a o(!er%at i" te!uturile cu i"%olutie ra#i$a e%i$e"tii"$ !e&"ificatia !a ci"etica, u"eori co"!i$era(ila. :actorii re!#o"!a(ili #e"tru a#aritia !#o"ta"a a a#o#tozei i" tu&ori !u"t, i"$u(ita(il, $i%er!i. A#o#toza, $e!eori e!te #roe&i"e"ta &ai ale! la locu!ul $e co"flue"ta cu "ecroza, u"$e !e #re!u#u"e ca i!c)e&ia &o$erata e!te i&#licata i" i"itierea ei, acea!ta e!te o cauza cu"o!cuta a acti%arii a#o#tozei i" te!uturile "o"'"eo#lazice 061, 672. S'a aratat ca, TN:L 0factorul $e "ecroza tu&oral2 i"$uce a#o#toza i" li"iile $e celule tu&orale i" %itro, a!tfel, o !erie $e fe"o&e"e a#o#totice o(!er%ate i" %i%o i" tu&ori ar #utea fi atri(uite eli(erarii ace!tei cito3i"e $e catre &acrofa ele i"filtra"te. I" alte cazuri, a#o#toza #oate fi rezultatul atacului tu&orii $e catre li&focitele T citoto*ice. Totu!i, u" "i%el ri$icat al a#o#tozei e!te o(!er%at !i i" locu!urile #re"eo#lazice !i i" "o$ulii ce !e $ez%olta i" ficat $u#a a$&i"i!trarea $e carci"o e"i c)i&ici 06<2, e!te i&#ro(a(il ca factorii &e"tio"ati ar #utea fi o#erati%i i" ace!te circu&!ta"te. E!te #o!i(il ca #rezu&ti%ele &eca"i!&e re latoare ale #o#ulatiilor celulare, $e!cri!e &ai !u!, actio"eaza i"tr'o eta#a ti&#urie a #roce!ului $e carci"o e"eza, cu o a#o#toza cre!cuta ce ec)ili(reaza te&#orar cre!terea #roliferarii celulare. I" !far!it, "i%elurile cre!cute $e a#o#toza i" tu&ori #ot fi rezultatul u"ui #roce! i"tri"!ec al ace!tor celule. Ratele $e a#o#toza a!ite i" tu&ori !i&ilare $ifera fii"$ rezultatul e*#re!iei $iferitelor o"co e"e.

i&liografie
1. T.S. Driffit), T. .ru""er, S.M. :letc)er, D.R. Dree", a"$ T.A. :er u!o", Science 2)/, 11?6'1167 016642. 7. O.:.R. 8eer, A. H. 9,llie, a"$ A. R. Currie, Br. (. Cancer 2$, 7<6'745 016572. <. A. H. 9,llie, Cell deat) in Biolog* and at)olog*, 6'<= 016?12 =. C. Di%e a"$ O.A. Hic3&a", Br. (. Cancer $4, 167'16@ 016612 4. C. Di%e, C.D. Dre or,, D.O. P)i##!, D.L. E%a"!, A.E. Mil"er a"$ A. H. 9,llie, Bioc). Bio+)*. Acta 1133, 754'7?7 016672 @. H.M. Elli!, a"$ H.R.Hor%itz, Cell 44, ?15'?76 016?@2 5. R.S. Mal,a#a, a"$ S. SaPa$a, ,adiat. ,es.,125 , 1<='1=E 016612 ?. O.Q. Qua", a"$ H.R. Hor%itz, -ev. Biol. 13*, <<'=1 0166E2 6. A. H. 9,llie, O.:.R. 8eer, a"$ A. R. Currie, Int. ,ev. C*tol. $*, 741'<E4 016?E2.
154

A#o#toza. I&#licatii i" #atolo ia &ali "a

1E. :. O(er)a&&er, O. 9. 9il!o", C. Di%e, I. D. Morri!, O. A. Hic3&a", A. E. 9a3eli" , P. R. 9al3er, a"$ M. Si3or!3a, ./B0 (. 12, <@56'<@'?= 0166<2. 11. A. H. 9,llie, Nature 2*4, 444'44@ 016?E2. 17. M. D. Oaco(!o", O. :. .ur"e, a"$ M. C. Raff, ./B0 (. 13, 1?66'161E 0166=2. 1<. 8. Sc)ulze'O!t)off, H. 9alcza3, 9. Dro e, a"$ P. H. 8ra&er, (. Cell Biol. 12), 1='7E 0166=2. 1=. S. H. 8auf&a"", Cancer ,es.4-, 4?5E'4?5? 016?62. 14. D. S. Uc3er, O. Ma,er, a"$ P. S. O(er&iller, (. Immunol.14-, 14?<'1467 016672. 1@. Q. A. Laze("i3, S. Cole, C. A. Coo3e, 9. D. Nel!o", a"$ 9. C. Ear"!)aP, (. Cell Biol. 123, 5'77 0166<2. 15. S. Rai#ert, ..M. Rai#ert, O.A. Hic3&a" a"$ T.D. Alle", Cell -eat) -iffer., 3, 1<1'1<6 0166@2 1?. D. 8roe&er, P. Petit, >. Naofal, O.'L. Va,!!iere a"$ .. Mi "otte, %AS.B (., -, 1755'17?5 016642 16. L. :e!u!, V. T)o&az, a"$ A. :alu!, %AS.B (., 224, 1E='1E? 016?52 7E. O. Sa%ill, Bioc)em. Soc. 1rans. 224, 1E@4'1E@6 71. 9. .urc), S. Pafe, .. Putz, D. .art)el, a"$ R. Sc)ulte'Her&a"", Carcinogenesis 11, ?=5' ?4< 0166E2 77. R. .er e!, a"$ O.T. O!aac!, Clin. C)em. 3-, 7'? 0166<2 7<. O.T. O!aac!, P.I. Lu"$&o, R. .er e!, P. Marti3ai"e", N. 8,#ria"o!, a"$ H.:. E" li!), (. Androl., 13, =45'=@= 016672 7=. D.8. Ar&!tro" , O.T. O!aac!, Q.L. Otta%ia"o, a"$ N.E. Da%i$!o", Cancer ,es., 52, <=1?' <=7= 016672 74. R.O. S&e,"e, M. Ve"$rell, M.Ha,Par$, S.O. .a3er, D.D. Miao, 8. Sc)illi" , L.M. Ro(ert!o", T. Curra", a"$ O.I. Mor a", Nature, 3$3, 1@@'1@6 0166<2 7@. D.E. De" , a"$ E.R. Po$ac3, roc. Natl. Acad. Sci U S A, -/, 71?6'716< 0166<2 75. S. Orre"iu!, D.O. McCo"3e,, D. .ello&o, a"$ P. Nicotera, 1rends )armacol. Sci., 1/, 7?1'7?4 016?62 7?. M.O. Are"$!, R.D. Morri!, a"$ A.H. 9,llie, Am .( at)ol., 13$, 46<'@E? 0166E2 76. C.R. 8"i )t, R.C. Rec!, a"$ M. Driffi", Bioc)im. Bio+)is. Acta, 1/-$, <17'1? 016612 <E. S.M. Pitt&a", M. De,#, S.O. T,"a", C.M. Dra&ac)o, D.H. Stric3la"$, a"$ M.O. :ra!er, 1u2ulin in a+o+totic cells, HarPoo$ Aca$e&ic Pu(li!)er!, <14'<7< 0166<2 <1. T.D. Cotter, S.V. Le""o", O.M. Dl,"", a"$ D.R. Dree", Cancer ,es., 52, 665'1EE4 016672 <7. :. O(er)a&&er, O.9. 9il!o", C. Di%e, I.D. Morri!, O.A. Hic3&a", a"$ A.E. 9a3eli" , ./B0 (, 12, <@56'<@?= 0166<2 <<. :. O(!e)a&&er, 9. .urc), 9. Parzefall, P. .rett, E. Er(e", M. Sta$ler, a"$ R. Sc)ulte' Her&a"", Cancer ,es., 51, 7=5?'7=?4 016612 <=. D.S. Uc3er, P.S. O(er&iller, 9. Ec3)art, O.R. A# ar, N.A. .er e a"$ O. Me,er!, /ol. Cell. Biol., 12, <E@E'<E@6 016672 <4. D. .ar(ieri, L. Troia"o, E. Dra!!illi, C. A "e!i, E.A. Cri!tofalo, D. Mo"ti, M. Ca#ri, A. Co!!ariza a"$ C. :ra"ce!c)i, Bioc)em. Bio+)*. ,es. Commun., 1*), 174@'17@1 016672 <@. L.D. To&ei, O.P. S)a#iro a"$ :.O. Co#e, roc. Natl. Acad. Sci U S A, -/, ?4<'?45 0166<2 <5. D.D. .roP", R'M. Su" a"$ D.M. Co)e", (. Biol. C)em., 2$*, <E<5'<E<6 0166<2 <?. O.O. Co)e" a"$ R.C. Du3e, (. Immunol., 132, <?'=7 016?=2 <6. P. Nicotera, P. Hartzell, D. Da%i! a"$ S. Orre"iu!, %.BS 3ett., 2/-, 1<6'1=E 016?@2 =E. M. Poe"ie, R.Q. T!ie" a"$ A'M Sc)&itt'Ver)ul!&, ./B0 (., $, 77<<'77<? 016?52 =1. N.L. All(ritto", C.R. Verret, R.C. 9oole, a"$ H.N. Ei!e", (. .'+. /ed., 1$), 41='416 016??2 =7. D.O. McCo"3e,, P. Hartzell, Nicotera a"$ S. Orre"iu!, %.BS 3ett., 3, 1?=<'16=6 016?62
15@

DANIELA NICOLETA PETRUSCA, OLIVIA MIHAELA POPA, L. MESTER

=<. M.Perotti, :. To$$ei, :. Mira(elli, M. Vairetti, D. .ello&o, D.O. McCo"3e, a"$ S. Orre"iu!, %.BS 3ett., 2$-, <<1'<<= 0166E2 ==. R.A. Sc)Partz&a" a"$ O.A. Ci$loP!3i, .ndocrinolog*, 133, 461'466 0166<2 =4. M.C. Peit!c), .. Polzar, H. Ste#)a", T. Cro&#to", H.R. MacDo"al$, H.D. Ma""erz a"$ O. T!c)o##, ./B0 (., 12, <51'<55 0166<2 =@. O.T. I!!ac!, Curr. 0+in. Biol., $, ?7'?6 0166=2 =5. O. :ili#!3i, O. Le(la"c, T. Qou$ale, M. Si3or!3a a"$ P.R. 9al3er, ./B0 (., -, 1<16'1<75 0166E2 =?. P.R. 9al3er, V.M. 9ea%er, .. Lac), O. Le(la"c a"$ M. Si3or!3a, Bioc)em.Cell.Biol., 213, 1EE'1E@ 0166=2 =6. R.M. Su" a"$ D.M. Co)e", (.Biol.C)em., 2$-, 1=?45'1=?@E 0166=2 4E. .. >)i%oto%!3,, .. Ce$er%all, S. Oia" , P. Nicotera a"$ S. Orre"iu!, Bioc)em.Bio+)*s.,es.Commun., 2/2, 17E'175 0166=2 41. C. Dia""a3i!, I.O. :or(e! a"$ P.D. >aleP!3i, Bioc)em.Bio+)*s.,es.Commun., 1*1, 614' 67E 016612 47. P.D. >aleP!3i, I.O. :or(e! a"$ 9.H. .ett!, Bioc)em. (., 2-$, =E<'=E? 0166<2 4<. M. Lou33a&a3i, 8. Ser%o&aa a"$ T. R,to&aa, Int. (. ,adiat. Biol., $3, 7E5'71< 0166<2 4=. M.O. Are"$!, R.D. Morri! a"$ A.H. 9,llie, Am. (. at)ol., 13$, 46<'@E? 0166E2 44. P.R. 9al3er a"$ M. Si3or!3a, Bioc)emistr*, 25, <?<6'<?=4 016?@2 4@. 9.M. 9ea%er, .. Lac), P.R. 9al3er a"$ M. Si3or!3a, Bioc)em. Cell Biol., )1, =??'4EE 0166=2 45. M. Mur ia, P. Pizzo, D. Sa"$o"a, P. >a"o%ello, R. Rizzuto a"$ :. Di Vir ilio, (. Biol. C)em., 2$), 1E6<6'=1 016672 4?. M.O. Are"$!,R.D. Morri! a"$ A.H. 9,llie, Am ( at)ol., 13$, 46<'@E? 0166E2 46. O. Sa%ill, V. :a$o3, P. He"!o" a"$ C. Ha!lett, Immunol 1oda*, 14, 1<1'1<@ 0166<2 @E. V.A. :a$o3, D.L. .ratto", S.C. :ra!c), M.L. 9ar"er a"$ P.M. He"!o", Cell -eat) -iffer., 5, 441'4@7 0166?2 @1. V.A. :a$o3, D.R. Voel3erP.A. Ca&#(ell, O.O. Co)e", D.L. .ratto" a"$ P.M. He"!o", (. Immunol., 14*, 77E5'771@ 016672 @7. A. S)irat!uc)i, M. U&e$a, Q. O)(a a"$ Q. Na3a"i!)i, (. Biol. C)em., 2)2, 7<4='7<4? 016652 @<. .. Ver)o%e", R.A. Sc)le el a"$ P. 9illia&!o", (. .'+. /ed., 1*2, 1465'1@E1 016642 @=. R.:.A. >Paal a"$ A.O. Sc)roit, Blood, *-, 1171'11<7 016652 @4. L. :ala!ca, A. .er a&i"i, A. Serafi"o, C. .ala(au$ a"$ L. Di"i, .'+. Cell ,es., 224, 147' 1@7 016652 @@. O. Hu )e!, Q. Liu, O. Va"Da&&e a"$ O. Sa%ill, (. Immunol., 15*, =<?6'=<65 016652 @5. D. Pra$)a", S. 8ra)li" , P. 9illia&!o" a"$ R.A. Sc)le el, /ol. Cell Biol., *, 5@5'55? 016652 @?. A. De%itt, C. Ra,3u"$alia, O.D. Moffatt, O.D. Ca#ra, D.L. Si&&o"! a"$ C.D. Dre or,, Nature, 0166?2 @6. 8. Murao, V. Ter#!tra, S.R. Dree", N. 8o"$rate"3o, D. Stei"(er a"$ O. Sue)e"(er er, (. Biol. C)em., 2)2, 15441'15445 016652 5E. S.O. 9ei!!, Ne4 .ngl. (. /ed., 32/, <@4'<54 016?62 51. D.A. .ell a"$ .. Morri!o", Clin. Immunol. Immuno+t)., $/, 1<'7@ 016612 57. S.R. .at!for$, A /IS, --, 1'6 016612 5<. R.D. Mori!, A.D. Har rea%e!, E. Du%all a"$ A.H. 9,llie, Am. (. at). , 115, =7@'=<@ 016?=2 5=. O.S. Sa%ill, N. Ho , Q. Re" a"$ C. Ha!lett, (. Clin. Invest., -/, 141<'1477 016672 54. R.E. Elli!, O. Qua" a"$ R.H. Hor%itz, Annu. ,ev. Cell Biol., ), @@< 016612 5@. H. Steller, Science, 2$), 1==4'1==6 016642
155

A#o#toza. I&#licatii i" #atolo ia &ali "a

55. O. Sa%ill a"$ V. :a$o3, Nature, 4/), 5?='5?? 07EEE2 5?. N. Platt, R.P. $a Sil%a a"$ S. Dor$o", 1rends Cell Biol., *, <@4'<57 0166?2 56. O.Au$oui", M.A. $e Mau(la"c a"$ T. Maoli"a, Cancerologie Au&ourd5)ui, 4 072, 41'@6 016642 ?E. P. Dol$!tei", D.M. O/ciu! a"$ O.D. Qou" , Immunol ,ev., 121, 76'@4 016612 ?1. M. Ore" M, Cancer /etastasis ,ev., 11, 1=1'1=? 0166E2 ?7. D.I. E%a", A.H. 9,llie a"$ C.S. Dil(ert, Cell, $-, 116'17? 016672 ?<. S.O. 8or!&e,er, Surve*s, 15, 1E4'11? 016672 ?=. O. :i"3e, R. :irtze" a"$ P. Te&e!!, Blood, */, =46'=@6 016672 ?4. R.P. .i!!o"ette, :. Ec)e%erri, A. Ma)(ou(i a"$ D.R. Dree" DR, Nature, 35-, 447'44= 016672 ?@. T.O. McDo""el a"$ S.O. 8or!&e,er, Nature, 34-, 74='74@ 016612 ?5. A.O. Le%i"e, O. Mo&a"$ a"$ C.A. :i"la,, Nature, 351, =4<'=4@ 016612 ??. E. Qio"i!)'Rouac), D. Re!"it!3,, O. Lote&, L. Sac)a, A. 8i&c)i a"$ M. Ore", Nature, 353, <=4'<=5 016612 ?6. O.A. Hic3&a", Cancer /etastasis ,ev., 11, 171'1<6 016672 6E. C.E. Sarraf a"$ I.D. .oPe", Cell 1issue 6inet., 21, =4'=6 016??2 61. O.:.R. 8err, ( at)ol., 1/5, 1<'7E 016512 67. D.C. Do(e, R.A. A*el!e" a"$ O.9. Searle, 3a2 Invest., $3, 55E'556 0166E2 6<. A. Colu&(a"o, D.M. Le$$a'Colu&(a"o, P.M. Rao, S. Ra/ala3!)&i a"$ D. Sar&a, Am. (. at)ol., 11$, ==1'==@ 016?=2

15?