Marco Terico MICROSCOPA PTICA Y LUPA

Profesor: Dr. Sergio Tapia Mura

Ayudantes: Roco Aravena Nora Contreras Castro Roberto Herrera Jos Infante Prez Daniela Del Valle Almanza David Marn Camila Muoz Leal

Valparaso, 2014

Marco Terico N 1: Microscopia ptica y lupa. 1.- Introduccin: El objetivo de toda ciencia debe ser, el dar explicaciones a los fenmenos observados y establecer principios generales que permiten predecir las relaciones entre estos y otros fenmenos. La palabra microscopio proviene del griego, mikro (pequeo), scopio (observar). Sin duda es un instrumento esencial en el que hacer de la biologa, este nos ha permitido conocer y caracterizar los seres vivos y sus estructuras como las clulas, estas son de pequeo tamao por lo que es imprescindible el uso del microscopio para su visualizacin. Es por esto que es necesario entender y tener muy claro que son los microscopios, para que sirven y cmo funcionan; as como los diferentes tipos que existen y algunas tcnicas de estos instrumentos. La lupa binocular es un instrumento ptico que produce una imagen aumentada del objeto que se observa a travs de ella. La lupa que vas a utilizar forma una imagen de un tamao entre 20 y 40 veces mayor que el objeto que observas. 2.- Objetivos: Reconocer e identificar las distintas partes del microscopio ptico y la funcin de cada una de ellas. Identificar y describir morfolgicamente clulas de catfilo de cebolla Conocer el uso de la lupa mediante la observacin de Drosophila melanogaster.

3.- Marco Terico: Los microscopios son instrumentos que nos permiten observar objetos pequeos que no se pueden ver a simple vista ni con la ayuda de una lupa, por lo que es importante sealar que existen una amplia gama de microscopios, los cuales son especficos para cada funcin y resolucin. Estos son: Microscopio ptico (MO): tambin conocido como microscopio de luz, siendo el tipo de microscopio ms utilizado debido a su fcil acceso y manipulacin. Tiene un lmite de resolucin de cerca de 200 nm, esto se debe a la longitud de onda de la luz, (0.4 0.7 m). Las clulas observadas bajo este microscopio pueden estar vivas, fijadas o teidas. Microscopio electrnico: es aqul que utiliza una fuente de electrones en lugar de fotones, que son generados por un can de electrones, acelerados por un alto voltaje y focalizados por medio de lentes magnticos, obteniendo una imagen ampliada del objeto, generando una mejor visin y ampliacin del mundo microscpico. Existen dos tipos de microscopios electrnicos: Microscopio electrnico de transmisin (MET): proyecta electrones que son dispersados a travs de una fina capa

de tejido o material a observar, fijado y teido con iones de metales pesados, produciendo una imagen en dos dimensiones sobre una pantalla fosforescente. Este tipo de microscopio puede aumentar la imagen de un objeto hasta un milln de veces. Microscopio electrnico de barrido (MEB): Utiliza un haz de electrones para obtener una imagen, tiene una gran profundidad de campo, produciendo imgenes de alta resolucin, donde las caractersticas ms imperceptibles de las muestras se pueden estudiar con gran amplificacin, generando una imagen en tres dimensiones. Microscopio de fluorescencia: las sustancias fluorescentes absorben luz de una determinada longitud de onda, y emite luz de una longitud de onda mayor, por lo tanto si los cortes del tejido son examinados con luz de onda corta (azul o violeta), cerca del lmite inferior del espectro visible, los componentes fluorescentes del preparado emitirn una luz de otro color (amarilla, verde). Este tipo de microscopio permite identificar ciertas sustancias en muy bajas concentraciones, evidenciando molculas naturales presente en la muestra como la vitamina A, algunos neurotransmisores y uniones intercelulares. Microscopio de contraste de fase: permite observar clulas sin colorear, importante para la observacin de clulas vivas. Microscopio de luz ultravioleta: la imagen depende de la absorcin de la luz por las molculas que componen la muestra, la fuente de luz ultravioleta tiene una longitud de onda de 200nm, por lo tanto puede alcanzar una resolucin de 0,1m. Los resultados que se obtienen al trabajar con este tipo de microscopio es por medio de fotografas, las muestras no pueden ser observadas directamente a travs del ocular, ya que la intensidad de la luz ultravioleta puede daar la retina. Este microscopio puede captar la presencia de ciertos cidos nucleicos, protenas y dependiendo de la longitud de onda, se puede cuantificar el DNA y el RNA de cada clula.

Los componentes de un microscopio ptico son: Parte mecnica: Soporte: Mantiene la parte ptica del microscopio, conformada por dos partes, el pie o base: tiene como funcin dar estabilidad y soporte gracias al peso que posee, y el brazo, es el soporte ubicado entre la base y el sistema ptico, cumple la funcin de sostn. Platina: Plataforma metlica horizontal en donde se deposita la muestra histolgica, posee un orificio en el centro permitiendo el paso de los rayos de luz, procedentes de la fuente de iluminacin situada por debajo, adems posee un carro mvil permitiendo de esta manera la movilizacin de la muestra para su observacin, fijado por dos pinzas las cuales retienen el portaobjetos sobre la

platina y un sistema de tornillos de desplazamiento, que permite mover la preparacin de delante hacia atrs o de izquierda a derecha y viceversa. Cabezal: Contiene los sistemas de lentes oculares, siendo monocular o binocular. Revolver: Contiene los sistemas de lentes objetivos, permitiendo girar y cambiar los objetivos. Tornillos de enfoque: Mueven la platina hacia arriba y hacia abajo, estos son: Macromtrico: Se utiliza para conseguir un ajuste aproximado de la imagen a observar, y el micromtrico permite enfocar correctamente la imagen.
Sistema ptico:

Oculares: Son lentes situado cerca del ojo del observador y que se encuentran en el cabezal del microscopio, teniendo como funcin principal captar y ampliar la imagen formada en los objetivos. Podemos encontrar microscopios con un ocular (monocular) o dos oculares (binocular) que estn unidos mediante un mecanismo que permite ajustar la distancia interpupilar. Objetivos: Sistema de lentes que permiten generar una imagen real, invertida y aumentada. Estos se encuentra cerca de la preparacin, sujetos a un revolver que permite el cambio de un objetivo a otro. Generalmente se encuentran 4X, 10X, 40X y 100X lo que indica la cantidad de veces que amplifica una muestra, en este ltimo se utiliza un aceite de inmersin o aceite de cedro. En la superficie de cada objetivo se indican sus caractersticas principales, aumento, apertura numrica y llevan dibujado un anillo coloreado que indica el nmero de aumento (rojo 4x, amarillo 10x, azul 40x y blanco 100x). Condensador: Es un sistema de lentes con gran apertura, que se encuentra entre la platina y la fuente de iluminacin, tiene como funcin concentrar los rayos luminosos sobre la preparacin, generada por la fuente de iluminacin. Diafragma: Se encuentra situado en el interior del condensador, permitiendo regular la cantidad de luz que pasa por el condensador. Foco: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador. Fuente luminosa: Es la luz proporcionada por una lmpara ubicada en la base del microscopio. Se enciende y se apaga con un interruptor y en su superficie externa puede tener una especie de anillo para colocar filtros que facilitan la visualizacin.

Lupa Binocular Parte ptica: Consta de cuatro sistemas de lentes; los dos ms prximos a los ojos del observador se llaman oculares y los dos ms prximos al objeto observado se denominan objetivos. Se llama lupa binocular por tener dos sistemas oculares, para

observar el objeto con los dos ojos a la vez. Esto permite tener una imagen del objeto en relieve: es lo que se llama visin estereoscpica. Los oculares estn insertados en dos cortos tubos. El tubo del lado derecho posee un anillo para corregir la diferencia de visin que tengamos en nuestros ojos. Los cuerpos de los oculares contienen unos prismas inversores que dirigen las imgenes a nuestros ojos y pueden girar a derecha e izquierda para que su separacin coincida con la separacin de nuestros ojos. Partes de una lupa binocular: Base o estativo: Base de la lupa. Platina: Donde se coloca la muestra a observar. Pueden utilizarse de distintos colores para aumentar el contraste. Pinzas: para fijar la muestra Columna: donde se articulan el resto de los componentes Cuerpo de la lupa, que puede desplazarse verticalmente para que el objeto observado quede enfocado. Esta operacin se denomina enfocar y se lleva a cabo con dos tornillos laterales. Anillo de sujecin, para fijar el cuerpo de la lupa a la altura que estimemos. Mando de enfoque: tornillos laterales de movimiento simultneo; stos deslizan el cuerpo de la lupa, lo que permite movimientos el enfoque.

Muestras No es tan simple observar tejidos o clulas vivas, debido a que los tejidos vivos en estudio presentan un espesor con el cual la penetracin de la luz es ms difcil, es por esto que se utilizan generalmente tejidos muertos para su estudio. Los tejidos en general deben ser fijados, deshidratados, embebidos en una sustancia endurecible (inclusin) y cortados en finas lminas, adems de emplear colorantes que tian selectivamente los distintos componentes celulares. Un concepto importante es el poder de resolucin, este es bsicamente el poder de distinguir un objeto de otro, siendo la distancia mnima que debe haber entre dos objetos para que sean percibidos como objetos separados. El poder resolutivo del ojo humano es de hasta 0.2mm (200 m) entre dos puntos, a una menor distancia solo observaramos un punto. El poder resolutivo de un microscopio ptico bordea los 0,2 m.