LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA PRACTICA # 1 TEMA: SIEMBRA DE AEROBIOS MESOFILOS POR EL MTODO DE VERTIDO EN PLACAS.

OBJETIVO: DETERMINAR LA PRESENCIA O AUSENCIA DE AEROBIOS MESOFILOS EN MUESTRAS LIQUIDAS. MATERIALES: AGUA DESTILADA AGUA PECTONADA AGAR MATRAZ BALANZA PROBETA PIPETA AGITADOR Y PASTILLA AGITADORA AUTOCLAVE ENCUBADORA CONTADOR DE COLONIAS CABINA DE FLUJO LAMINAR CAJA PETRI MORTERO MUESTRAS (TECNIAGUA; AGUA DE RIO) MUESTRA (PAN)

PROCEDIMIENTO 1. 2. Esterilizar muy bien los materiales (previo a la prctica). Preparar una solucin de 300 ml de AGAR (medio de cultivo slido), en agua des ionizada (el envase contiene 23.4g de medio de cultivo slido para 1 litro de agua); para esta prctica tomamos 7.1g de Agar. 23.4g.. 1L X.. 0.3L X=7.1g

3. 4.

Hervir esta solucin para que se disuelva completamente. No sobre calentar. Una vez listo el AGAR se lo lleva a un autoclavado a una temperatura de 121 0C por un tiempo de 15min (el tiempo corre a partir de que se alcance la temperatura deseada).

5.

Realizado este paso se lo retira del autoclave y se lo deja enfriar a una temperatura de entre 45 y 52 0C. 6. Se lo lleva a la cabina de flujo laminar junto con la muestras previamente preparadas (si son liquidas se coge 1ml de dicha muestra en una caja Petri y si son slidas se trabaja 1 en 10; quiere decir 1g de muestra en 10 ml de agua pectonada). 7. Una vez en la cabina se procede a colocar AGAR en las muestras. La cantidad de AGAR no se mide (3/4 de la placa de la muestra). Las cajas Petri se las coloca de revs. 8. Se la lleva a la incubadora por un periodo de 24 horas a 30 0C (despus que se hace solida). 9. Pasado este tiempo se retira de la incubadora y se procede a realizar el conteo de las colonias de aerobios mesfilos.

MARCO TEORICO
Un mesfilo es un organismo cuya temperatura de crecimiento ptima est entre los 15 y los 35C El recuento de microorganismos mesfilos aerbicos, conocido tambin como recuento de placas aerbicas (APC), es el mtodo ms usual para la estimacin del nmero de microorganismos viables en alimentos, aunque frecuentemente es usado mal. El APC no mide el total de la poblacin de bacterias en una muestra de comida, sino la fraccin de la flora microbiana que es capaz de producir colonias en el medio de cultivo bajo las condiciones predominantes en la incubacin de la placa. Este trabajo hace un anlisis de los microorganismos mesfilos aerbicos, su significado y cmo interpretar su presencia en los alimentos. Dependiendo de las caractersticas del medio utilizado (medio rico, medio limitado en nutrientes para medida de la flora no lctica de alimentos fermentados) y de las condiciones de incubacin (mesfilos, psicrfilos) los microorganismos analizados sern miembros de poblaciones diferentes. En general se investiga la presencia de microorganismos aerobios o aerotolerantes (anaerobios facultativos); aunque, en ciertas situaciones (alimentos envasados al vaco), puede ser de inters hacer recuentos de anaerobios totales. Este mtodo es uno de los indicadores microbiolgicos de calidad ms utilizado y Se aplica a todos los alimentos con excepcin de los productos fermentados o madurados tales como algunos quesos, ciertos tipos de embutidos, yogurt, etc. Los resultados de este anlisis permiten: Verificar la efectividad de los procedimientos de limpieza y desinfeccin. Determinar si las temperaturas aplicadas en los procesos fueron las adecuadas.

Se denominan aerobios o aerbicos a los organismos que pueden vivir o desarrollarse en presencia de oxgeno diatmico, mientras que si lo necesitan se denominan aerobios estrictos. El adjetivo "aerobio" se aplica no slo a organismos sino tambin a los procesos implicados ("metabolismo aerobio") y a los ambientes donde se realizan. Un "ambiente aerobio" es aquel rico en oxgeno, a diferencia de uno anaerobio, donde el oxgeno est ausente, o uno microaeroflico, donde el oxgeno se encuentra a muy baja concentracin. El metabolismo aerobio (respiracin) surgi en la evolucin despus de que la fotosntesis oxignica, la forma ms comn de fotosntesis, liber a la atmsfera oxgeno, el cual haba sido muy escaso hasta entonces. Inicialmente represent una forma de contrarrestar la toxicidad del oxgeno, ms que una manera de aprovecharlo. Como la oxidacin de la glucosa y otras sustancias libera mucha ms energa que su utilizacin anaerobia por ejemplo, la fermentacin, los seres aerobios pronto se convirtieron en los organismos dominantes en la Tierra. El antepasado comn de los organismos eucariontes (con clulas nucleadas) adquiri la capacidad de realizar el metabolismo aerobio integrando a una bacteria aerobia como orgnulo permanente, la mitocondria (teora de la endosimbiosis). Aerobiosis, es un proceso conocido como respiracin celular, usa el oxgeno para oxidacin del sustrato (por ejemplo azcares y grasas para obtener energa). BIBLIOGRAFIA http://www.respyn.uanl.mx/viii/3/articulos/calidad_de_agua.htm http://es.answers.com/Q/Que_son_los_mesofilos_aer%C3%B3bicos

RESULTADOS
MUESTRA # 1 PAN72 UFC/ml MUESTRA # 2 TECNIAGUA...41UFC/ml MUESTRA # 3 AGUA DE RIOCHICO481UFC/ml

CONCLUSIONES
Al terminar la presente prctica podemos concluir: Al utilizarel agua potable como materia prima para la elaboracin de productos de consumo humano, la concentracin de aerobios mesfilos, no deber ser superior a 100 UFC/ml.
Norma Tcnica Ecuatoriana NTE INEN 1108 Agua Potable Requisitos. Instituto Ecuatoriano de Normalizacin. Quito, 2006-03

Los lmites microbiolgicos permitidos o aceptables para el consumo seguro de los emparedados y panes son: Recuento Total de Aerobios Mesfilos hasta 105 UFC/g

RECOMENDACIONES
Se recomienda: Utilizar lo EPP en todo el momento de la practica Realizar correctamente las prcticas para obtener ptimos resultados y verificar estos con los estndares ya establecidos. Tratar de minimizar al mximo el margen de error posibles en mediciones Consumir aguas de embotelladoras que tengan registros sanitarios o certificados. Estar atentos a los imprevistos puedan ocurrir en el laboratorio.

ANEXOS
PREPARACION DEL AGAR O MEDIO DE CULTIVO

AGAR

PESAR EL AGAR

MEDICION DEL AGUA DESTILADA

MEDIO DE CULTIVO LISTO PARA LLEVARLO AL AUTOCLAVE

LLEVADO AL AUTOCLAVE

TAPADO DEL AGAR

COLOCADO EN EL AUTOCLAVE

ESPERANDO QUE ALCANCE LA TEMPERATURA DESEADA PREPARACION DE LAS MUESTRAS

MUESTRAS

PESADO DE LA MUESTRA SOLIDA (PAN)

MUESTRA DE PAN

MEDICION DE LA MUESTRA LIQUIDA (AGUA)

COLOCACION DEL MEDIO DE CULTIVO A LAS MUESTRAS EN LA CABINA DE FLUJO LAMINAR

SE LLAVA LAS MUESTRAS A LA INCUVADORA POR 24 HORAS

CONTADOR DE COLONIAS