Prin regiune craniofaciala se intelege: Exterior : fata si capul cu exceptial regiunii arcadelor caudale faringiene Intern: creierul ,craniul

, scheletul craniofacial, dinti , tesuturi asociate, inclusiv tesuturile musculare vasculare si conective. Embrionii rozatoarelor si pasarilor se intelegea adesea echivalti cu Gallus domesticus , Mus musculus , Rattus sp , majoritatea studilor asupra dezvoltarii craniofaciale facandu-se pe aceste specii

Origini celululare Dezvoltarea craniofaciala este caracterizata extern prin formarea de celule mezenchimale ce formeaza procesul craniofacial( procesele mandibulare si maxilare din care se dezvolta maxilarul inferior si superior , proces frontonasal din care se dezvolta partea mediana a fetei(inclusiv nasul la rozatoare) si placode epiteliale si gropi ce marcheaza locul unde se vor dezvolta organele de simt. Aceste structuri se vad cel mai bine cand sunt studiate la microscopul electronic fig1 In interior se observa ca procesele craniofaciale sunt compuse din celule mezenchimale , majoritate dintre ele apar in tubul neural ca si celulele crestelor neuronale. Migrarea celulelor crestelor neuronale din tubul neuronal creaza procesele faciale Celulele crestelor neuronale migreaza din tubul neural de-a lungul lungimii creierului exceptie facand cea mai mare parte a portiunii rostrale a prozencefalului. La pui epiteliu portiunii rostrale a prozencefalului furnizeaza marea partea a ectodermului ce acopera capul deci prin urmare este intim asociata cu placodele. Transcriptia factorului AP-2 este esentiala pentru inchiderea tubului neural deci joaca un rol important in migrarea celulelor crestelor neurale Celulele crestelor neuronale ce migreaza sunt mezenchimale( initiarea migratiei implica transformarea celulara din celule epiteliale in cele mezenchimale si concomitenet reorganizare citoscheletului si modificarea produsilor matrixului extracelular) Muschii craniofaciali sunt produsi ai mezodermului dar sunt moderati de celulele crestelor neuronale ce formeaza tesutul conjunctiv al muschilor , Celulele crestelor neuronlae joaca un rol important si in angiogeneza Markeri moleculari pentru investigarea celulelor crestelor neurale.

Anticorpul HNK-1 indentifica celulele crestelor neurale ce migreaza , dar nu marcheaza toate celulele neurale., dar marcheaza mezenchimul derivat din mesoderm.. HOx-2 si Hox-11 marcheaza distinc subpopulatii de celulele crestelor neurale ce migreaza din rombencefal . Tesuturi Celulele derivate din crestele neuronale sunt supuse proliferarii extensive pentru a forma condensari de celule din care se vor forma oase, cartilaje, ligamente , dinti si tesut conjunctiv.. Stabilirea a marimii minime a unui celule pentru condensare este cruciala pentru initierea citodiferentierii. Multe mutatii la rozatoare si pasari ce afecteaza dezvoltarea craniofaciala au condensarea ca locul initial de actiune. Interactiunile dintre tesuturile mesodermale , mezenchimul derivat din crestele neuronale si epiteliu sunt critice pentru initierea diferentierii si regleaza forma si marimea tesuturilor formate prin efectul asupra condensarii.

Abordari alr dezvoltarii craniofaciale Prezentare generala a 12 abordari Rezolutii obtinute prin vizualizare embrionilor intregi sau a regiunii craniofaciale . 1.Observarea embrionilor vii : Desi pare o metoda invechita , sau prea evidenta pentru a fi mentionata, se pot afla multe prin observarea atenta a embrionilor vii disecati fie de coaja sau de uter. Este necesar un microscop pentru disectie de buna calitate cu oculare de x10 sau x15, penseta , perie cu par de camila sau sonda de sticla cu care se manipuleaza embrionii. Embrionii se pot observa cel mai bine in solutie salina , dupe ce se inlatura sangele si albusul cu ajutorul unei pipete Embrionii vor devenii opaci si vor pierde mult din detaliu dupa ce se aplica solutia de fixare . 2. A stii varsta si stagiul de dezvoltare a embrionilor pare simplu , dar dezvoltarea embrionilor de pui este dependenta de temperatura , la rozatoare pot exista diferente de 12 ore intre embrioni chair daca imperecherea a avut loc in acelasi timp peste noapte . Imperecherea pentru numai 2 ore , chiar daca decreste rata sucesului si sunt necesare mai multe femele pentru imperechere , diferentele intre embrioni sunt minime.

Cu Toate acestea , stadiile morfologice de dezvoltare pot varia la embrionii de pui, chiar daca ouale au fost incubate in aceleasi conditii si deschise in acelasi timp, sau intre rozatoarele nascut ein acelasi timp. Aflarea varstei se face cel mai bine pe embrioni ce nu au fost fixati

3. Microscopul electronic cu scanare Au fost realizate multe studii asupra dezvoltarii craniofaciale prin aceasta metoda Studiile realizate de Sulik pe soareci netratati sau tratati cu alcool si vitamina sunt cele mai bune aplicatii ale sem pentru studierea dezvoltarii craniofaciale 4 Vizualizare embrionilor intregi , mai ales cand sunt aplicate coloratii specifice ale organelor sau tesuturilor , ofera o metoda puternica de analiza a structurarii si morfogenezei . Decolorand specimenele , si colorarea diferentiata a scheletului este o metoda ce permite examinarea intr-un stadiu timpuriu a osteogenezei si condrogenezei(formarea cartilajului). Prin metode mai recente se pot vizualiza tesuturi individuale chiar si tipuri de celule ce contin molecule specifice de care se ataseaza embrionii.. In acest mod , anticorpii tipului 2 de colagen pot fi folositi pentru a vizualiza stadiile timpurii a dezvoltarii cartilajului, anticorpii miozina sau actinina pentru vizualizarea miogenezei si proteinele neurofilamentelor celule nervoase 5. Histologie Vizulaizare probelor la microscopul fotonic dupa incorporare in plastic si parafina, prezinta metoda de baza a analizei dezvoltarii craniofaciale . Pentru a analiza celule individuale sau grupuri mici de celule este intodeauna necesar efectuarea analizelor histologice , adesea pe embrioni sectionati in serie unde se pot urmarii structurile pe fiecare sectiune . Modele vazute in embrionii intregi pot induce in eraore , in special atunci cand diferite populatii de celule sunt adiacente asa cum sunt in cea mai mare parte a dezvoltarii craniofaciale: . 6. reconstructia 3d Reconstructia 3d a fost utilizata pentru a observa o conexiune, ce anterior era necunoscuta, intre populatii celulare mezenchimale derivate din crestele neuronale care cuprind arcadele mandibulare i maxilare n embrioni de pui, celule pentru ambele arcade se acumuleaza la baza arcadelor. Cunoasterea acestor condensar comune furnizeaza explicatii pentru momentul similar a interactiunilor dintre celulele epiteliale si mezenchimale ce reguleaza mezenchiul maxilar si mandibular( aceste celule

sunt induse ca si populatii individuale in interactiuni individuale) si o explicatie pentru acumularea celulelor la baza arcaelor la puii tratati cu vitamina A- deplasarea in arcade individuale este inhibata. S-a folosit reconstructia 3d pentru a vizualiza dezvoltarea regiunilor craniofaciale complexe cum ar fi urechea mijlocie , cartilajul arcadei si precursorii osteogenici. Microscopia confocala asigura vizualizare si recontructia tesuturilor cu o rezolutie de oridinul 0.1m. Datorita rezolutiei marite si necesitatea de a face sectiuni optice , aceasta metoda este cel mai bine aplicata specimenelor considerabil mai mici decat decat cele ce sunt in mod normal analizate in stiudiul dezvoltarii craniofaciale. 7. Histochimie, reconstructia precursorilor ostegenici timpurii a arcadei mandibulare(fig 4 5) a fost posibila pentru ca celulele au fost vizualizate folosind o procedura histochimica pentru fosfataza alcalina. Aceasta este una dintre procedurile folosite pentru vizualizarea constituientilor celulari. 8. Imunohistochimia si imunocitochimia Similar, abilitatea de a lega anticorpi de molecule specifice sau parti ale moleculelor si de a vizualiza complexul anticorpi-ligand prin colorare histochimica sau folosind un marker fluorescent sunt metode ce au o gama larga de aplicatii in dezvoltarea craniofaciala. 9. Hibridizare in situ Hibridizare in situ cu probe de ARN reprezinta un mijloc de a localiza produsii ARNm a genelor individuale. Este important de retinut faptul ca prezenta ARNm nu trebuie sa insemne ca mesajul este tradus in proteina. Deci este important ca sa se combine hibridizarea in situ cu vizualizarea produsilor genelor , de obicei prin abordari imunohistochimice. 10.Manipulari genetice Utilizarea mutantilor de soareci ( si intr-o masura mai mica ,a pasarilor) are o lunga istorie in dezvoltarea craniofaciala , multe dintre cunostintele asupra mecanismelor devoltarii normale au fost dobandite in urma analizei mutantilor . Prin dezactivarea unor gene individuale de la embrionii rozatoarelor s-a putut analiza mutatii intamplatoare/aleatore , sau mutatii ce afecteaza multe gene sau intregul cromosom. 11 Etichetarea celulelor si interventii chirugicale Disponibilitatea colorantilor lipofilici ce pot fi injectati in celule individuale sau intr-un numar mic de celule au ajutat la cunoasterea pupulatiilor celulare ce cuprind regiunea craniofaciala. Se pot face multe observatii si prin inlaturarea sau transpatarea de tesuturi 12. Tehnica culturilor

..............