Sunteți pe pagina 1din 4

Hrtie - P 09 , n : V.S. Magar i ME Kelley ( eds. ) , in situ i On - site Bioremediere - 2003 .

Proceedings al aptelea International in situ i On- Site bioremediere Simpozion ( Orlando , FL , iunie 2003). ISBN 1-57477-139-6 , publicat de Battelle Press , Columbus , OH , www.battelle.org / librrie . Posibilitatea de a folosi DEGRADAREA biologice pentru TRATAMENT ON- SITE DE amestecuri de deeuri William T. Stringfellow ( WStringfellow@lbl.gov ) , Tatsuyuki Komada , i Li - Yang Chang ( Lawrence Berkeley National Laboratory , Berkeley , California , SUA ) REZUMAT : Acest studiu a fost efectuat pentru a investiga posibilitatea de a aplica biodegradare microbian ca o tehnologie de tratare pentru deeuri cu coninut radioactiv elemente i solveni organici ( deeuri mixte ) . n acest studiu , ne-am concentrat eforturile noastre pe tratarea deeurilor generate de cercetarea biomedical , ca rezultat al purificare tritiu etichetate compui prin cromatografie lichid de nalt performan ( HPLC ) . aceste deeuri sunt, de obicei 80 % ap , cu 20% acetonitril sau metanol sau un amestec din ambele. Obiectivul a fost de a determina potenialul de utilizare a biodegradare pentru a trata solvent componenta de deeuri mixte tritiat la o concentraie sub restricia de eliminare a terenurilor standard (1 mg / l de acetonitril ) . Odat ce se ajunge lastandardul , restul de eurilor radioactive nu mai este clasificat ca deeuri mixte i poate fi apoi solidificate i plasat ntr-un depozit sigur . Aceasta investigatie axat pe tratarea o acetonitril 10 % soluie , care a fost folosit ca un surogat neradioactiv de deeuri HPLC , ntr- un bioreactor . Rezultatele au indicat faptul cprocesul de biodegradare poate trata aceast soluie pn la mai mult de 1 mg / L pentru a satisface standardul restricie de eliminare teren . INTRODUCERE A existat un interes n cretere n curs de dezvoltare alternative la tratamentul curent tehnologie de nivel sczut de deeuri mixte ( LLMW ) ca reglementri mai stricte la nivel sczut deeurilor radioactive ( LLRW ) au cauzat o cretere semnificativ a costurilor sale de eliminare (NRC , 2001) . LLMW , care este compus din LLRW i a deeurilor periculoase ( de exemplu organic solveni ) , este generat n principal ca un produs secundar al diferitelor activiti asociate cercetare biomedicala , proceduri medicale , operaiuni de centrale nucleare , i nuclear cercetare arme ( USEPA , 2002) . Problema principal de eliminare este c LLMW conine att radioactive i periculoase elemente . Prin urmare , dispoziia Teren de restricie ( LDR ) reglementrile sub Conservarea resurselor i de recuperare Act ( RCRA ) trebuie s fie mai nti ndeplinite nainte de componentele radioactive pot fi solidificate i plasat ntr-un depozit sigur ( USEPA , 2002; Chang i colab . 2001 ) . Acest studiu a fost realizat pentru a investigafezabilitatea n aplicare a unui Procesul de biodegradare spre tratarea componenta deeuri periculoase de LLMW . noi concentrat eforturile noastre cu privire la tratamentul de o pierdere de cercetare biomedicala generate n timpul purificarea tritiu compui marcai prin cromatografie lichid de nalt performan ( HPLC ) . Deeurile mixte HPLC conine , n general, 40-90 % ap i 10-40 % organic coninut ( de obicei, dominat de acetonitril i metanol ) , mpreun cu relativ sczut radioactivitate . Cultur de bacterii au fost dezvoltate , care ar putea crete pe metanol i acetonitril, la concentraii mari ( Chang et al . , 2001) . Degradareaprincipale Solveni HPLC , acetonitril i metanol , de aceast cultur a fost gsit s urmeze bine cunoscute modele cinetice ( Monod sau Haldane ) n timpul o cretere la scar banc i substrat cinetica de oxidare msurtori ( Chang et al . , 2001) . Acest lucru a indicat c o scara mai mare a proces de biodegradare pentru a-pilot sau de tratament pe scar larg poate urma inginerie standard, protocoale . Mai mult dect att , acetonitril sa dovedit a fi un substrat inhibitor care a fost mai dificil s se degradeze n afar de metanol ( Chang et al . , 2001) . Acest studiu a analizattratamentul biologic al unei soluii acetonitril 10 % ca HPLC surogat deeuri mixte . Aceast soluie a fost alimentat continuu cu rate variabile la un semicontinuu , bioreactor cu amestecare continu coninndbacteriene dezvoltat anterior cultur . Au fost monitorizate concentraiile de acetonitril , biomas , i amoniac de-a lungul acestei anchete . Scopul nostru a fost de a realiza mai mult de 1 mg / l acetonitril concentraie nreactor pentru a ndeplini standardele LDR , fr a recurge la excesiv diluare afluxului de deeuri . 1

MATERIALE I METODE Materiale . Cultura mbogire acetonitril utilizat n acest studiu a fost dezvoltat ca descrise de Chang i colab . ( 2001) . 10 ml deacetonitril a fost cultura imbogatita inoculat ntr- un litru de azot media minim ( NFMM ) . Dou seturi de aceast cultur au fost preparate ( total de doi litri ) . Concentraiile acetonitril din acestea Culturile au fost inute ntre 100 i 200 mg / L. Dup 17 de zile de la aceast ntreinere , 200 ml de NFMM a fost adaugat in ambele culturi pentru a compensa volumul total de 1,2 litri pe cultur . 300 ml trage - umple de ntreinere a fost realizat pe aceste culturi la fiecare patru zile. NFMM constat de 1000 mg / l KH2PO4 , 860 mg / l Na2HPO4 , 120 mg / l MgSO4 , 60 mg / l CaCl2 , i 1 ml / l de soluie de metal urme . Soluia de metal urme a fost format din 3,3 mg / l MnSO4 - H2O , 6,2 mg / l CuSO4 - 5H2O , 7,6 mg / l ZnSO4 7H2O , 11,7 mg / l Na2MoO4 - 2H2O , 64,6 mg / l FeSO4 7H2O , i 4,15 ml / l HCI . Metode . Testul acetonitril epurare biologic a fost realizat ntr-un New Brunswick Bioflo 3000 bioreactor . Reactorul a fost umplut cu doi litri de cultur bacterian suspendate n NFMM . Fluxul de oxigen n reactor variaz ntre 4 i 5 ml / min i o agitaie vitez de 150 rpm a fost angajat . Temperatura n reactor a fost meninut la 25o C. nainte de a fi inoculate n reactor ,cultura mbogire acetonitril a fost splat de trei ori cu NFMM . Splarea a fost realizat prin centrifugareambogirea cultur ( volum total de 2,4 litri ) cu Beckman J2 - HS se centrifugheaz la 8000 rpm timp de 10 minute pentru fiecare splare . JLA 10.500 rotor a fost utilizat pentrucentrifugare . Acest rotor a avut loc ase 500 ml recipiente de capacitate . 400 ml din cultura de mbogire a fost distribuit n fiecare container pentruprima splare . Peletele cultur a fost resuspendat n fiecare recipient cu NFMM , i apoi combinate n dou din cele ase recipiente de 500 ml . Volumul resuspendare pentru fiecare container a fost de 250 ml . Cea de a doua splare a fost realizat prin centrifugarea aceste dou containere . Peletele de cultur au fost resuspendate din nou cu 250 ml de NFMM pentru fiecare recipient , i apoi centrifugat din nou pentru a treia splare . pelete au fost resuspendate cu 50 ml de NFMM pentru fiecare recipient , i s-au inoculat direct nbioreactor . 10 % ( n greutate ) acetonitril influentul fost alimentat n reactor cu Ismatec IPC ( 16 canale , 8 - role ) pompa tub la ratele variind ntre dou i ase ml / zi folosind tuburi Masterflex Norprene alimentare , marimea L / S 16 ( Cole - Parmer Instruments , Vernon Hills , Illinois ) . Debitul a fost nceput imediat dupcultura mbogire inoculare . Fluxul iniial influent a fost stabilit la 4 ml / zi . Eantionarea reactor a fost fcut n scopul de a efectua acetonitril , densitatea optic analize ( de concentraie biomas ) , i amoniac . Probele au fost trase de la o prelevarea de probe de port (port capac cu filet pe partea de sus a vasului reactor ) cu sticl de unic folosin de 10 ml pipete n tuburi de cultur de 13 mm . NFMM fost adugat dup fiecare prelevare de probe , astfel nct Volumul nreactor a fost meninut constant la doi litri . Densitatea optic ( DO) a eantionului reactor a fost obinut prin citirea acestuia absorbanta la 590 nm la HACH DR/2000 Direct Reading Spectrofotometru . 10 ml de proba reactorului a fost transferat ntr-un tub de cultur de 13 - mm , iar citirile au fost luate de introducerea directn tubul de cultur spectrofotometrului . OD a fost convertit la mg / l biomas , folosind un factor de conversie stabilit de la msurtorile de greutate uscat . Pentru analiza amoniac , o prob dinreactor a fost diluat la 1/250 ( 2 ml n 500 ml ) timp de pn la Ziua 2 , 1/500 ( 1 ml n 500 ml ) de la Ziua 3 Ziua 11 , 1/ 1000 ( 1 ml n 1000 ml ) pentru Ziua 12 n ziua 97 , 1/ 2000 ( 1 ml n 2000 ml ) pentru Ziua 98 a Ziua 138 , i 1/ 4000 ( 0,5 mL n 2000 mL ) pentru Ziua 138 pn la sfritul studiului . amoniacul lectur a fost fcut pe probele diluate prin metoda HACH Nessler ( Metoda 8038 , HACH Analiza apei Handbook , 3rd Edition , p825 ) . Perkin Elmer UV / VIS Spectrometru Lambda 20 a fost utilizat pentru a citi absorbanta de probe ( de la HACH Metoda Nessler ) la lungimea de und de 425 nm . Analiza acetonitril a reactorului i influentul fost efectuat prin utilizarea de gaze HP6890 cromatograf dotat cu un detector cu ionizare n flacr ( FID ) . 5 ml de prob din reactor este de nti introdus ntr -un tub de cultur de 13 - mm . Aceast prob a fost acidulat cu dou picturi de Soluie de acid clorhidric 6N . 1,6 ml decultur acidulat a fost introdus ntr -un 2

tub de centrifugare i se centrifugheaz la o vitez de 9100 rpm timp de 3,5 minute. 1,5 ml de faza supernatant a fost apoi transferat ntr-un 2 - ml Kimble Cromatografie Robovial pentru analiza GC acetonitril . Au fost analizate trei probe . REZULTATE I DISCUII Acest studiu a fost realizat de peste 250 de zile n carereactorul a fost operate continuu . Acetonitrilul ( teoretic i real ) i biomasa concentraiile nreactor , pentru ntreaga durat de studiu sunt prezentate n Figura 1 i Figura 2 , respectiv . Figura 3 este prezentat graficul datelor din Ziua 34 Ziua 75 prin pentru concentrare acetonitril n reactorul cu privire la reglarea pH-ului . Figura 1 prezint o comparaie ntreacetonitril teoretic i cea concentraiile dinreactor . Concentraia teoretic indic ce concentraia de acetonitril ar fi fost n reactorul n cazul n care nu s-au biodegradare . Concentraia real n figur esteconcentraia real msurat prin GC . Diferena ntre aceste dou concentraii stabilete gradul de biodegradare . n un experiment separat pierdere fizic , sa constatat c pierderea fizic a acetonitril din reactorul nu a fost semnificativ . Regiunile plate de pe teren teoretic sunt zile cnd alimentarea influentului fost nchidere . In ziua a 250 ,acetonitril real concentraie nreactor a fost de < 1 mg / l , care ndeplinesc standardele LDR , i concentraia teoretic a fost de 25855 mg / L. Prin urmare , aproximativ 52 g de acetonitril fost biodegradat n timpul acestui studiu . Figura 2 prezint modelul de interesant cre terii biomasei n reactor. A existat o creterii biomasei constant pentru primele 10 zile. Biomasa oprit n cretere de la Ziua 12 nainte i concentraia de acetonitril n reactor a nceput s creasc, indicnd c tratarea biologic a ncetat. Datele de biomas i concentrare n acetonitril Figurile 2 i 3, respectiv, indic faptul c a fost puin n cazul n care orice biodegradare n reactor de la Ziua 12 pn n ziua 59. Alimentarea influent a fost oprit n ziua de 19 ca concentraia de acetonitril a fost de 280 mg / L. Pn n ziua 54, acetonitril avut doar dus pn la 146 mg / L. ntre Ziua 19 i Ziua 54, am investigat daca inhibarea amoniac a fost responsabil pentru pierderea activitii biomasei. Sa constatat c concentraia de amoniac n reactor a fost cuprins ntre 723 mg / l i 808 mg / l n timpul Ziua 12 a Ziua 54. acest lucru este nu o concentraie neobinuit de mare de amoniac, prin urmare inhibarea amoniac a fost exclus afar. Am testat urmtorsensibilitatea pH-ului reaciei acetonitril biodegradare . producia de amoniac de la degradare acetonitril a ridicatpH reactor de la 6,9 la 7,5 ntre Ziua 10 i Ziua 17 . Pn n ziua 54a ajuns la pH 7,84 . Cu toate pH-ul a fost mai bine n limitele acceptate pentru tratarea biologic , am ajustat pH-ul ncepe n jos n ziua 54 . Am adugat periodic de acid clorhidric 6N soluie n reactor pentru a menine pH-ul la aproximativ 7,1 . Aproape imediat , ca pH-ul a fost ajustat ,concentraia de acetonitril nreactor a nceput s scad dramatic . Figura 3 prezint n mod clar aceast scdere de concentrare . acetonitrilul concentraie nreactor a sczut de la 194 mg / l n Ziua 56 (concentraia avut a crescut de la 146 mg / l n ziua de 54 , deoarece alimentarea influent a fost pornit din greeal pe la Ziua 55 Ziua 56 ) , pn la 12,9 mg / l n ziua 67 . Pn n ziua 75 ,acetonitril concentrare a sczut mult sub 1 mg / l. Aceste date arat cbiodegradarea reacie este foarte sensibil la pH . Concentraia de biomas nu a crescut din nou pn n ziua de 75 , cnd influentul hrana pentru animale a fost ntors pe . Dup cum este indicat n figura 2 , concentraia de biomas a srit de la 380 mg / l n Ziua 75 - 703 mg / l n ziua 78 . Din ziua 75 ,biomasa concentraie crescut n mod constant n timp acetonitrilul s-a degradat n mod eficient . creterea biomasei continuat pn n ziua 164 , cnd aceasta a atins o concentraie de 2346 mg / l. Influentul fost nchidere n ziua 187 , deoarececoncentraia de acetonitril nreactor a ajuns la 746 mg / l , i a fost evident crata de degradare nu a fost meninerea cu rata de alimentare influent . n acest moment , alimentarea a fost nchidere i reacia a fost permis s mearg la finalizare . Concentraia acetonitril n cele din urm a ajuns sub 1 3

mg / l n ziua 229 . Pn n ziua 195 , concentraia de amoniac a depit 6.000 mg / l n reactor . De aceea, de data aceasta ,activitatea de biodegradare a fost cel mai probabil ncetinit datorit inhibrii amoniac . CONCLUZII Obiectivul principal al acestei investigaii a fost realizat , aa cuma fost acetonitril biodegradat nreactor pn la concentraia final de mai puin de 1 mg / L. rezidual Materialul a atins standardul LDR , i, astfel, ar putea fi eliminate ntr-un depozit de deeuri . ea a fost gsit n acest studiu c reacia de degradare acetonitril a fost sensibil la pH , n care Intervalul optim de pH pentru procesul de biodegradare a fost de aproximativ ntre 6,5 i 7.1 . Deasupra pH 7,5 , reacia a fost grav inhibat . Motivul pentru aceasta fiziologic inhibare nu este cunoscut n acest moment . Datele dinteoretic acetonitril concentrare complot n figura 1 indic faptul c concentraia final de acetonitril nreactorul ar fi fost 25855 mg / l , dac exist au existat biodegradare nreactor . Aceasta a nsemnat c tratamentul ar fi necesar numai o de aproximativ 4 ori diluare volum a materialului iniial , care este un acceptabil schimbare de volum pentru acest flux de deeuri . Aceste rezultate indic faptul cdezvoltarea unei proces de biodegradare pentru un amestec de solvent i fluxurilor de deeuri radioactive este n ntregime fezabil . MULUMIRI Acest proiect a fost parial susinut de Management de Mediu ( EM ) i Programe Office of Science ( SC ) , prin Departamentul de Energie Contract DE - AC03 76SF00098 cu Universitatea din California . Compoziiile de deeuri HPLC au fost cu amabilitate furnizate de Dr. Philip Williams i Chit dect de National Tritium etichetare Facilitatea de LBNL. Aceasta cercetare a fost parial susinut de Centrul pentru Stiinta si Ingineria Educaie la LBNL. Mulumiri speciale pentru Jeremy Hanlon de asisten su la acest proiect.