Sunteți pe pagina 1din 15

CAPITOLUL 9 Separarea cromatografic aspecte generale

9.1. Clasificarea metodelor cromatografice nceputurile separrilor cromatografice se datoreaz lui vet (1903), care a realizat primele separri de colorani vegetali pe coloan umplut cu carbonat de calciu. Termenul de eluie cromatografic a fost introdus mai trziu, de ctre Reichstein i van Euw (1938), care s descrie principial procesul cromatografic de separare a componenilor probei la trecerea printr-o faz staionar. Tot n acelai an, Izmailov i Shraiber i-au publicat rezultatele privind primele separri cromatografice pe strat subire. Separarea cromatografic are la baz interacia difereniat a componenilor unei probe fa de dou faze, numite: faza staionar i faza mobil (aflat n micare fa de faza staionar). Procesul se petrece ntr-o coloan cromatografic, sau pe suprafaa plan a unei plci pe care este depus faza staionar. Analiza cromatografic este un proces cuplat ntre separarea cromatografic i determinarea (detecia) compuilor separai (proces care se bazeaz pe msurarea unei proprieti fizice). Din aceast prezentare, rezult c separrile cromatografice pot fi clasificate fie din punct de vedere al naturii celor dou faze (staionar i mobil), fie din punct de vedere al mecanismului de separare, sau fie din punctul de vedere constructiv al ansamblului de faze. Din punct de vedere al naturii celor dou faze distingem urmtoarele clase de separri cromatografice: - cromatografie de gaze (GC) n care faza mobil este un gaz inert; n funcie de natura fazei staionare se disting urmtoarele tehnici gaz-cromatografice: a) separarea gaz-lichid n care faza mobil este un gaz inert, iar faza staionar este un lichid, depus pe un suport inert, sau pe peretele unei coloane cromatografice; b) separare gaz-solid (SGC), n care faza mobil este un gaz inert, iar faza staionar este un solid; - separare prin cromatografia de lichide (LC), n care faza mobil este un lichid, iar faza staionar este de regul un solid; - cromatografie n fluide supercritice (SFC), n care faza mobil este un fluid supercritic. Mecanismul care st la baza de separrii cromatografice se poate baza pe: 1) adsorbie; 2) repartiie; 3) schimb ionic; 4) excluziune steric, etc. Adeseori, procesele cromatografice pot decurge printr-o combinaie a acestor mecanisme. In funcie de mecanismul de separare cromatografia de lichide (n care polaritatea i hidrofobicitatea analiilor, a fazei staionare i a fazei mobile joac un rol determinant) se mparte n trei variante: i) cromatografia de lichide n faza normal (denumit aa mai degrab din punctul de vedere istoric), n care faza staionar este polar, iar faza mobil este nepolar; ii) cromatografia de lichide n faza invers, n care faza staionar este nepolar i hidrofob, iar faza mobil este polar. iii) cromatografie de lichide prin mecanism de schimb ionic, n care faza staionar
133

este un schimbtor de ioni, iar faza mobil este apoas cu pH controlat. Din punct de vedere constructiv se disting: cromatografia pe coloan i cromatografia planar (pe hrtie sau pe strat subire). In prezent, cromatografia pe coloan, n una din clasele menionate anterior reprezint una dintre cele mai importante tehnici de investigare a probelor multicomponent n chimia analitic. Dup cum spune i denumirea, rolul central n separarea cromatografic l are coloana cromatografic, n care se gsete faza staionar. 9.2. Parametrii unei separri cromatografice Cromatograma reprezint dependena n timp a proprietii msurate de detectorul sistemul cromatografic. Intr-o cromatogram ntlnim picuri cromatografice i o linie de baz (constant sau variabil). O separare cromatografic a unui amestec de n componeni trebuie s conduc la o cromatogram cu n picuri cromatografice. De exemplu, n figura 9.1 este redat cromatograma HPLC a unei probe coninnd 14 hidrocarburi aromatice polinucleare n acetonitril. Dup cum se poate observa, numrul de picuri cromatografice este egal cu 14; dintre acestea doar picurile 10 i 11 nu sunt perfect separate n linia de baz.

Absorbanta (mAU)

60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 0 2 4

3 4 8

9 2 1 56 12 13 7 10 11 14

10

12

14

16

18

20

22

24

26

28

30

32

T im p (m in )

Fig. 9.1. Cromatograma unui amestec de 14 compui. (amestec de 14 hidrocarburi aromatice polinucleare separate prin HPLC n faz invers i detecie prin spectrometrie de absorbie molecular UV).

Semnalul cromatografic este numit pic cromatografic, a crui form red de fapt o imagine a echilibrelor de distribuie ale moleculelor de analit ntre faza mobil i faza staionar, care se petrec n coloana cromatografic. Parametrii matematici ai unui pic cromatografic ideal (picul 5 din Fig. 9.1, apropiat de forma Gauss) sunt dai n figura de mai jos, care la rndul lor sunt utilizai la determinarea aa-numiilor parametri cromatografici ai unei separri.[85]
134

Semnal

15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 7.2 7.3 7.4 7.5

Punct de inflexiune

Y0

w1/2 Y0/2

Y0/10

Linia de baz w10%

tR 7.6 w

7.7

7.8

7.9

8.0 min

Fig. 9.2. Parametrii unui pic cromatografic ideal (de form Gauss).

Forma ideal a picului cromatografic este descris de ecuaia de tip Gauss, n forma urmtoare:
4( t t R ) 2 ln 2 w1/ 2

Y = Y0 e

(9.1)

, n care Yo este nlimea maxim a picului cromatografic, msurat la valoarea timpului, numit timp de retenie (tR), w1/2 este semi-limea picului (limea picului msurat la jumtatea nlimii); ln 2 = 0,693. Forma unui picul cromatografic simetric, dar mai larg n baz poate fi descris la fel de bine i de funcia Cauchy:
Y= Y0 2( t t R ) 2 1+ [ ] w1 / 2

(9.2)

unde, de asemenea: Y0 este nlimea picului pentru t = tR, iar w1/2 este limea picului la jumtatea nlimii (semi-lime).[87] Forma celor dou funcii nu difer foarte mult, aa dup cum se poate observa din regresiile respective aplicate unui pic real n figura urmtoare, prelucrat din cele redate n Fig 9.1.

135

65 60

Gauss
Semnal

65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0

Cauchy

55

Semnal

50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 4.3 4.4 4.5 4.6 4.7 4.8 4.9 5.0 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5

4.3

4.4

4.5

4.6

4.7

4.8

4.9

5.0

5.1

5.2

5.3

5.4

5.5

Timp de retentie (min)

Timp de retentie (min)

Fig. 9.3. Modelarea unui pic cromatografic real (punctat gros) prin funcia Gauss, respectiv prin funcia Cauchy (linie continu).

Pentru un pic simetric de tip Gauss, limea acestuia msurat ntre punctele de inflexiune este 2. Cum punctele de inflexiune sunt mai dificil de evideniat, se prefer a se msura limea picului la jumtatea nlimii acestuia, notat mai sus cu w1/2. Intre w1/2 i exista relaia simpl:
w1/2 = 2,35

(9.3)

Aria picului (A) care este o mrime cantitativ, ce depinde de cantitatea de analit injectat n coloana cromatografic, se obine din integrarea funciei Gauss:[88]
A= 1 Y0 w1 / 2 2 ln 2

(9.4)

sau a funciei Cauchy:


A= Y0 w1 / 2 2

(9.5)

In practic, integrarea picurilor se face n mod automat cu ajutorul soft-ul sistemului de achiziie i prelucrare a datelor cu care este dotat sistemul cromatografic. Analistul trebuie s precizeze aria minim de pic care poate fi msurat. Sub aceast limit picurile cromatografice din cromatograma nregistrat nu vor fi raportate de ctre soft-ul sistemului de achiziie i prelucrare a datelor. Integrarea se poate face i manual de ctre analist. Problema alegerii liniei de baz (baseline), fa de care se va face integrarea, este dificil atunci cnd picurile cromatografice se apropie ca mrime de semnalele din linia de baz (analitul se gsete n proba injectat la limita de detecie a detectorului cromatografic). In acest caz, analistul trebuie ntr-o bun aproximaie vizual s stabileasc media semnalului de baz fa de care vor alege punctele X i Y n care se
136

va integra picul cromatografic. Aceast situaie este ilustrat n figura de mai jos, cu alegerea greit i corect a punctelor de integrare.
Semnal Pic cromatografic de integrat X Linia medie de baz Y

Linie de baz greit

tR (min)

Fig. 9.4. Fereastra unei poriuni dintr-o cromatogram n care picul cromatografic este corect integrat prin alegerea punctelor X i Y n linia media a semnalului de baz (ales neconstant cu drift).

In general, ntre aria picului (Apic) i cantitatea de analit injectat n coloan ( Q injectat analit , exprimat n g, sau n ng, sau n pg, etc) exist o relaie de linearitate n conformitate cu funcia de rspuns 1.3 i a discuiei asupra domeniului de linearitate din cap. 1.2:
A pic = a + b Q injectat analit

(9.6)

Mrimea Q poate fi substituit i prin concentraia probei injectate, cu condiia ca n procedura de calibrare i cea de analiz, volumele de soluii standard, respectiv de prob analizat, s fie identice. Factorul de rspuns (Fi) al unui detector fa de un anumit analit i detectat la ieirea din coloana cromatografic este dat de raportul dintre aria picului corespunztor analitului i i cantitatea de analit (uniti de mas) injectat n coloan:
Fi = A pic,i Qinjectat analit , i

(9.7)

137

Atunci cnd picul cromatografic crete ca arie, poriunea de arie rezultat prin integrarea mai puin corect, ilustrat n figura de mai sus, devine nesemnificativ n raport cu aria acestuia, astfel c n practic nu se mai mrete imaginea semnalului de fond pentru a gsi punctele corecte de integrare. De foarte multe ori, forma picurilor este asimetric. In acest caz, alegerea unei funcii utile n descrierea formei picului cromatografic este mai dificil. De regul, asimetria se datoreaz unei aa-zise cozi (tailing) a picului cromatografic, care poate fi n faa picului (pre-tailing) sau n spatele picului (post-tailing).[89] Simetria unui pic cromatografic (notat cu Sim) poate fi exprimat n mai multe moduri. Dac aceasta se msoar n punctele de inflexiune a curbei picului redat n Fig. 9.2, Sim devine:
Sim = '

(9.8)

Simetria poate fi msurat mai exact la jumtatea nlimii picului cromatografic, atunci cnd w1/2 este mprit de verticala din maximul picului n dou pri: B n partea dreapt i C n partea stng. In acest caz simetria devine:
Sim = B C

(9.9)

In mod practic, cozile picurilor cromatografice se evideniaz dup jumtatea nlimii maxime a picului cromatografic. In acest caz simetriile redate de ec. 9.8 sau 9.9 nu mai sunt corecte. De aceea, se prefer msurarea lui B i C, la o nlime a picului cromatografic ct mai aproape de linia de baz, dar suficient de mare ca s se evite erorile legate delimitarea picului (msurarea lui w este afectat de erori). In acest caz, cea mai recomandat msurare este la 10% din maximul nlimii picului, cnd parametrii B i C sunt notai cu B10%, respectiv C10%, iar simetria are expresia:
B Sim = 10% C10%

(9.10)

Un parametru important a unei separri cromatografice este timpul mort (notat cu t0). Acesta semnific durata de timp n care faza mobil parcurge coloana cromatografic. Acest parametru se poate msura cunoscnd debitul fazei mobile i lungimea coloanei (n cromatografia de gaze) sau introducnd n proba injectat un component total inert fa de faza staionar (n cromatografia de lichide), care va elua astfel din coloana cromatografic la timpul de retenie notat cu t0. Cu ajutorul acestui parametru se pot calcula ali doi parametrii foarte importani ai unei separri cromatografice: timpul de retenie ajustat, numit i timp de retenie net (tR) i factorul de capacitate (k), definii prin relaiile:
t 'R = t R t 0 t t t' k' = R 0 = R t0 t0

(9.11) (9.12)

138

Din punct de vedere practic, minimul separrii cromatografice a doi compui injectai (notai n ordinea eluiei cresctoare cu i i j) n coloana cromatografic se obine atunci cnd picurile lor cromatografice ajung n semnalul liniei de baz. Gradul de separare cromatografic este exprimat prin rezoluia cromatografic (Rs). Pentru picuri simetrice formula de calcul a acestui parametru este dat de expresia:
Rs = ( t R , j t R ,i ) 0,5 ( w i + w j ) = 2 ( t R , j t R ,i ) ( w1 + w 2 )

(9.13)

In felul acesta se poate deduce c minimul lui Rs pentru ca cele dou picuri cromatografice i i j s fie separare n linia de baz este 1. Dac picurile nu sunt separate, msurarea pentru wi i wj nu poate avea loc. innd cont c: wi = 2w1/2,i i wj = 2w1/2,j, formula rezoluiei devine:
Rs = t R , j t R ,i w 1 / 2, i + w 1 / 2, j

(9.14)

O msur a selectivitii cromatografice este dat de factorul de separare (notat cu ij) a doi compui i i j (elund n aceast ordine), care este definit prin relaia:[90]
ij = t 'R , j t 'R , i = k' j k 'i 1

(9.15)

Eficiena unei separri cromatografice se reflect n lrgimea picului cromatografic: cu ct picul cromatografic este mai ngust, cu att mai mare este eficiena separrii cromatografice. Cantitativ, eficiena unui proces de separare se exprim prin numrul de talere teoretice (notat cu N). Conceptul de taler teoretic este mprumutat din teoria distilrii, care n cazul unei separri cromatografice s-ar traduce prin poriunea din coloana cromatografic n care se stabilete echilibrul de distribuie al analitului ntre faza mobil i faza staionar. Formula de calcul a numrului de talere teoretice Ni corespunztor unui analit i este urmtoarea:[90]
Ni = ( t R ,i 2 ) i

(9.16)

innd cont de relaia 9.3, formula de calcul a parametrului N devine:


N i = 5,54 ( t R ,i w 1 / 2, i )2

(9.17)

nlimea talerului teoretic (notat cu h) se poate calcula cunoscnd lungimea coloanei cromatografice L: h = L/N. Cu aceste ultime noiuni, se poate reveni la formula de calcul a rezoluiei. innd cont de relaiile anterioare se poate deduce formula de calcul a rezoluiei, pentru picuri cromatografice de arii aproximativ egale i caracterizate ntr-o bun aproximaie de aceiai eficien (N):
139

Rs =

N k 'i ( ij 1) 4,7 k 'i +1

(9.18)

Ecuaia de baz pentru rezoluia ntre 2 picuri cromatografice inegale ca arie, notate cu i i j poate fi propus prin modificarea celei de mai sus, n forma:
Rs = N k' ( ij 1) 4,7 k '+1

(9.19)

, unde k ' este media aritmetic a celor doi factori de capacitate pentru analiii i i j, ki i respectiv kj. Cu aceste precizri, rezoluia dintre cele dou picuri cromatografice devine:
Rs = N k ' j k 'i k 'i + k ' j 4,7 k 'i k 'i + k ' j +2
k 'i + k ' j k 'i + k ' j +2

(9.20)

Maximul raportului

este 1, atunci cnd ki i kj sunt foarte mari. Pe de alt parte,

pentru k mare, picurile cromatografice devin foarte largi, cu timp de retenie foarte mare, uneori greu de integrat. De aceea, valoarea lui k ntre 1 i 20 este considerat ca acceptabil. 9.3. Teoria talerelor Aceasta teorie este una dintre cele mai importante teorii n modelarea procesului cromatografic, iniiat de Martin i Singh i apoi dezvoltat de Said.[91] Teoria talerelor descrie practic curba de eluie (cromatograma) unui anumit compus chimic. Aceast teorie propune c un analit participant la un proces cromatografic particip la un echilibru de repartiie (distribuie) ntre faza mobil i faza staionar, pe o poriune mai mult sau mai puin ngust din coloana cromatografic. Aceast imagine (modelare) conduce imediat la o conexiune cu teoria distilrii, care consider c o coloan este structurat ntr-un numr de celule sau talere, numite n cazul procesului cromatografic talere teoretice. Fiecare taler are o lungime finit, n care analitul se gsete (staioneaz) un anumit interval de timp. Cu ct un taler are dimensiunea mai mic, cu att mai eficient este procesul de partiie al analitului ntre cele dou faze; cu micorarea dimensiunii unui taler, numrul acestora atribuit unei coloane cromatografice crete. Ca urmare, numrul de talere teoretice atribuit unei coloane cromatografice a fost identificat cu eficiena coloanei. Teoria talerelor arat c limea unui pic cromatografic (dispersia unui pic cromatografic) este invers proporional cu rdcina ptrat a eficienei, sau altfel spus: cu ct eficiena este mai mare, cu att picul cromatografic este mai ngust. Pentru aceasta s considerm echilibrul de repartiie cromatografic a unui analit X, ntre o faz mobil (notat cu indicele m) i o faz staionar (s): Xm Xs (9.21)

140

Acest echilibru este caracterizat de constanta respectiv de echilibru (K), dat de ecuaia:
K= [ X]s [X]m

(9.22)

Prin [X] este notat concentraia analitului X n faza staionar sau mobil indicat prin indicele respectiv. Prin diferenierea ecuaiei 9.22 se va obine urmtoarea relaie:
d[X ]s = K d[X ]m

(9.23)

Teoria talerelor i propune s stabileasc o relaie ntre concentraia analitului X n faza mobil dup parcurgerea a n talere din coloana cromatografic. Pentru aceasta s considerm 3 talere teoretice consecutive, notate cu (p 1), p i (p + 1), iar parametrii eluiei cromatografice n aceste talere redai n Fig. 9.5.
Taler (p-1) Faza staionar vs [X]s,p-1 Faza mobil vm [X]m,p-1 Taler p Faza staionar vs [X]s,p Faza mobil vm [X]m,p Taler (p+1) Faza staionar vs [X]s,p+1 Faza mobil vm [X]s,p+1

Fig. 9.5. Reprezentarea a trei talere teoretice succesive dintr-o coloan cromatografic.

Prin dv se noteaz variaia de volum de faza mobil ce trece din talerul (p 1) n talerul p, iar dm reprezint variaia de mas de analit din talerul p. Variaia dm reprezint diferena de mas de analit X, atunci cnd volumul dv de faz mobil iese din talerul (p 1) i intr n talerul p. In acest caz se poate scrie:
dm = ([X]m, p 1 [X ]m, p )dv

(9.24)

In condiii de echilibru de distribuie a analitului X ntre faza mobil i faza staionar valoarea lui dm poate fi scris:
dm = v s d[ X]s, p + v m d[X ]m, p

(9.25)

Substituind pe d[X]s,p din ec. 9.23 se va obine:


dm = ( v m + Kvs ) d[X]m, p

(9.26)

Din ec. 9.24 i 9.26 se obine urmtoarea ecuaie:

141

d[X]m, p dv

[X]m, p 1 [X]m, p v m + vs K

(9.27)

Numitorul din aceast ecuaie este definit ca volumul talerului i este notat cu vt. Numrul de talere () din coloana cromatografic avnd volumul V devine:
= V V = v t v m + K vs

(9.28)

De unde prin difereniere se va obine:


d = dV v m + K vs

(9.29)

Cu aceasta, ecuaia 9.27 devine:


d[X ] m,p d = [X ] m,p1 [ X] m,p

(9.30)

Aceasta ecuaie diferenial descrie viteza de modificare a concentraiei unui analit n faza mobil din talerul notat cu p, la trecerea fazei mobile prin el. Soluia acestei ecuaii red concentraia analitului X n faza mobil din talerul notat cu p, pentru un numr de talere teoretice din coloana cromatografic notat cu :
[ X ]m , p = [X]0 e p p!

(9.31)

, unde [X]0 reprezint concentraia iniial a analitului X, la injectarea sa n coloana cromatografic, care se gsete n faza mobil. Ecuaia (9.31) arat c modelul distribuiei continue ntre faza mobil i faza staionar este unul de tip Poisson. Pentru valori mici ale lui distribuia este asimetric, devenind simetric pentru valori mari ale lui . In practic este mult mai mare dect 100, iar distribuia de mai sus devine una Gauss, n acord cu forma experimental obinut pentru picurile cromatografice. nlimea unui taler teoretic este notat cu H. Numrul de talere teoretice dintr-o coloan cu lungimea L fiind notat cu N, rezult c H va fi:
H= L N

(9.32)

nlimea redus a talerului teoretic este dat de raportul H/dp, unde dp este diametrul particulelor fazei staionare. 9.4. Ecuaia van Deemter Teoria talerelor red din punct de vedere cantitativ o imagine asupra proceselor care au loc n coloan i exprim calitatea unei coloane prin numrul de talere teoretice
142

atribuite procesului cromatografic pentru un anumit analit injectat n coloan. Cu toate acestea, aceast teorie nu red i o explicaie asupra mecanismelor i fenomenelor care stau la baza echilibrelor de distribuie ale analiilor ntre faza mobil i faza staionar. Teoria dispersiei frontului de analit n coloana cromatografic studiaz fenomenele care au loc la transferul probei n coloana cromatografic. Aceasta se bazeaz pe viteza fazei mobile i a parametrilor procesului, precum viteza transferului de mas ntre cele dou faze participante la procesul cromatografic, viteza de difuziune a moleculelor de analit (solut) de-a lungul coloanei i hidrodinamica fazei mobile. O reprezentare a acestui fenomen este redat n figura urmtoare.

Fig. 9.6. Reprezentarea lrgirii frontului de analit la trecerea prin coloana cromatografic.

Glueckauf a studiat efectele a trei factori asupra procesului cromatografic, descrii n continuare:[92] 1) difuzia obinuit n faza mobil n direcia de deplasare a acesteia; acest proces are loc de regul atunci cnd exist o regiune de concentraie mare i una de concentraie mic, n acord cu legea lui Fick; 2) difuzia longitudinal n faza mobil, n special datorit ciocnirilor moleculelor de analit cu particulele fazei staionare (pentru coloane umplute) i ntre moleculele de analit i cele ale fazei mobile; 3) mrimea particulelor fazei staionare. Msura mprtierii zonei dup o distribuie normal Gauss este dat de deviaia standard. Aceast mprtiere este definit de modelul deplasrii aleatoare ale moleculelor de analit prin numrul de pai efectuai (n) i lungimea fiecruia (notat cu l):
= l n

(9.33)

Aceast relaie simpl arat c mprtierea zonei este proporional cu lungimea porilor i rdcina ptrat a numrului acestora. Din teoria statistic se tie c deviaia standard nu este o mrime aditiv, n cazul influenei mai multor factori. In schimb, ptratul deviaiei standard este aditiv i este demonstrat de teoria propagrii erorilor (vezi cap. 1.5):

2 = i2
i

(9.34)

143

, unde i reprezint deviaia standard pentru fiecare din cele 3 procese discutate ca influennd lrgirea zonei moleculelor de analit. Termenul procesului de difuziune obinuit (d) este definit prin ecuaia de difuziune a lui Einstein:
2 d = 2Dt

(9.35)

, n care D este coeficientul de difuziune, iar t reprezint intervalul de timp n care o molecul de analit o petrece n faza mobil i este dat de relaia:

t=

L u

(9.36)

(L lungimea total a deplasrii, u viteza fazei mobile). De aici rezult c:


2 = d

2DL u

(9.37)

Difuzia turbulent descrie modificarea traseelor (canalelor) i a vitezei moleculelor de solut n raport cu zona central. Aceasta poate fi imaginat prin traseele dintre particulele fazei staionare prin care se pot mica moleculele de solut. Dac o molecul se gsete ntr-un canal rapid aceasta va migra n faa frontului, iar dac aceasta se gsete pe un canal ncet, atunci molecula va rmne n spatele zonei centrale a frontului. Numrul pailor (notat cu n) pe care molecula i strbate prin parcurgerea coloanei de lungime L va depinde de diametrul particulelor (notat cu dp):
n= L dp

(9.38)

Deviaia standard atribuit acestui proces (E) poate fi derivat din ec. 9.33:
E = dp ( L 1/ 2 ) = (L d p )1 / 2 dp

(9.39)

Pentru a evalua efectele de ne-echilibru, referitoare la intervalele de timp n care moleculele de solut se afl n una din cele dou faze, s considerm urmtoarele mrimi cinetice necesare: k1 viteza de tranziie a unei molecule de solut din faza mobil n faza staionar (adsorbie); 1/k1 intervalul de timp pentru ca adsorbia s aib loc; k2 viteza de tranziie a unei molecule de solut din faza staionar n faza mobil (desorbie); 1/k2 intervalul de timp pentru ca desorbia s aib loc. O molecul de solut n faza mobil se mic mai repede dect centrul zonei. Viteza zonei va fi u, n care este fracia de molecule de solut n faza mobil, iar u este viteza fazei mobile. Prin urmare, (1 - ) va fi fracia de molecule din faza staionar cu o
144

vitez de deplasare 0. Astfel, moleculele de solut se deplaseaz n fa sau n spatele zonei centrale la fiecare transfer ntre faze. Intervalul de timp necesar zonei solutului s se deplaseze prin coloana de lungime L la o vitez u este:

t=

L u

(9.40)

Intervalul de timp n care fracia (1 - ) de molecule se gsete n faza staionar va fi:

t=

(1 ) L u

(9.41)

Numrul de desorbii (ndes) care au loc n acest interval de timp va fi dat de intervalul de timp, dat de relaia 9.41, mprit la 1/k2:

n des =

(1 ) L 1 u k2

(9.42)

Numrul de transferuri interfazic (n) va fi dublu celui de desorbie:

n des =

2 (1 ) L 1 u k2

(9.43)

In intervalul de timp n care o molecul de solut este n faza staionar, zona central a frontului solutului se deplaseaz n fa cu lungimea de u/k2. Folosind ec. 9.33 prin substituia lui l cu u/k2 i n cu expresia de mai sus, se va obine deviaia standard (k) caracteristic procesului de transfer de mas ntre cele dou faze (contribuia de neechilibru):
k = [ 2 (1 ) L u 1 / 2 ] k2

(9.44)

Aceast ecuaie arat c prin creterea vitezei de curgere u (imprimat de faza mobil), efectele de ne-echilibru cresc, msura acestei creteri fiind dat de k. Introducnd expresiile lui d, E i k n rel. 9.34 se obine expresia:
2 = L [d p + 2 (1 ) 1 u + 2D ] k2 u

(9.45)

Martin i Synge au introdus nlimea echivalent a talerului teoretic H, dat de relaia:


H= 2 L

(9.46)

Cu aceasta, expresia lui H devine:

145

H = dp +

2 (1 ) 1 u + 2D k2 u

(9.47)

Minimul nlimii talerului, Hmin, se stabilete din condiia dH/du = 0 i conduce la expresia vitezei fazei mobile pentru care valoarea nlimii talerului teoretic este minim:

u =[

k 2 D 1/ 2 ] (1 )

(9.48)

Ecuaia 9.47 este cunoscut ca ecuaia van Deemter i scris n forma simplificat:
H=A+ B + Cu u

(9.49)

Termenul A reprezint constanta de difuziune turbulent (datorit neomogentitii mediului prin care curge faza mobil), B este constanta difuziei longitudinale, iar C constanta transferului de mas al analitului n faza staionar.
H

Hmin

A uoptim u (cm/s)

Fig. 9.7. Reprezentarea grafic a ecuaiei van Deemter.

Reprezentarea grafic a acestei ecuaii este dat n figura de mai sus. Din aceast dependen a nlimii talerului teoretic (H) determinat din mrimi ale separrii cromatografice funcie de viteza fazei mobile (u) se stabilete valoarea optim uoptim pentru care H este minim, i prin urmare separarea are o eficien maxim. 9.5. Semnificaia cinetic i termodinamic a factorului de capacitate Factorul de capacitate pentru un compus i (ki) este definit ca raportul cantitilor de analit n faza staionar i faza mobil, la un moment dat. Experimental valoarea sa este stabilit prin msurarea parametrilor cromatografici de retenie, dai de ec. 9.12. Din punct de vedere cinetic, acesta poate fi exprimat de ecuaia urmtoare, derivat din
146

definiia de mai sus:


k 'i = n i,s n i, m = [i]s Vf .s. = Ki [i]m Vf .m.

(9.50)

, n care: ni,s numrul de moli de analit i din faza staionar; ni,m numrul de moli de analit i din faza mobil; Vf.s. volumul fazei staionare din coloana cromatografic; Vf.m. volumul fazei mobile din coloana cromatografic; - raportul de volume al celor dou faze (Vf.s./Vf.m.); Ki constanta de echilibru a partiie analitului i ntre faza mobil i faza staionar. Din punct de vedere termodinamic trebuie inut cont de relaia general a constantei de echilibru Ki:

Ki = e
0

G 0 RT

(9.51)

G reprezint variaia de entalpie liber standard Gibbs pentru transferul speciei i din faza mobil n faza staionar i la rndul su poate fi scris n funcie de variaie de entalpie standard (H0) i variaia de entropie standard (S0):

G 0 = H 0 T S0

(9.52)

Prin introducerea lui Ki i G0 n ecuaia 9.51, urmat de logaritmare rezult ecuaia fundamental n cromatografie, ce descrie dependena factorului de capacitate de temperatura la care are loc procesul de retenie cromatografic (temperatura din coloana cromatografic):

ln k 'i = ln +

S0 H 0 1 R R T

(9.53)

Prin urmare, factorul de capacitate scade prin creterea temperaturii coloanei cromatografice. Dependena valorii ln k este linear n raport cu inversul temperaturii absolute, iar ecuaia de mai sus este cunoscut n literatura de specialitate din domeniu ca ecuaia vant Hoff. Din regresia ln k ~ 1/T se poate stabili variaia de entalpie standard H0 din panta dreptei, iar din intersecia cu ordonata (T ) se poate determina cu o bun aproximaie (cunoscnd parametrul constructiv ) valoarea variaiei de entropie standard S0 a procesului de transfer al analitului din faza mobil n faza staionar.

147