CURS GENETIC V. EXPRESIA I transmiterea informaiei eREDITARE ef.L.dr.

Oana DARAB 2010

Expresia informaiei genetice se realizeaz prin dou procese corelate funcional: transcripia i translaia, datorit existenei: unui sistem de transfer al informaiei genetice din nucleul celulei (unde informaia este stocat n ADN) n citoplasm, la nivelul ribosomilor (unde sunt sintetizate proteinele); unui cod genetic, care reprezint un sistem de coresponden ntre secvena nucleotidelor din ADN i aminoacizii care alctuiesc proteinele.

n cursul expresiei genice se realizeaz un transfer intracelular de informaie, care alturi de replicare constituie una din cele dou componente fundamentale ale dogmei centrale a biologiei moleculare.

Dogma central a biologiei moleculare

n celulele umane pot exista dou categorii de transfer de informaie: 1. transferul general se manifest n toate celulele, fiind reprezentat de: transferul informaiei de la ADN la ADN n timpul replicrii; transferul de la ADN la ARNm n timpul transcripiei; transferul de la ARNm la proteine, care este caracteristic translaiei; 2. transferul special are loc numai n anumite celule, n condiii speciale, fiind reprezentat de: transferul ARN ARN din cursul replicrii unor virusuri, care au stocat informaia genetic sub form de ARN; transferul de la ARN la ADN (transcripia invers) care se produce n celulele infectate cu retro virusuri.

Transferul informaiei genetice de la ADN la proteine implic mai multe etape: Transcripia - copierea secvenei nucleotidice a genei sub forma unei molecule complementare de ARN mesager precursor (pre ARN m); formarea ARNm matur; transportul ARNm din nucleu la ribosomi; Translaia - decodificarea informaiei genetice din molecula de ARNm cu sinteza unei proteine cu o anumit secven de aminoacizi; procesarea post-translaional i asamblarea proteinei ntr-o structur spaial caracteristic, necesar pentru desfurarea normal a activitii biologice.

TRANSCRIPIA Transcripia este procesul de sintez a unei molecule monocatenare de ARN mesager pe baza informaiei genetice coninute de un segment limitat dintr-o molecul de ADN. Astfel, gena, pe lng calitatea de unitate de structur, funcie i mutaie, poate fi considerat i unitate de transcripie. TIPURI DE ARN Expresia informaiei genetice implic intervenia mai multor tipuri de acizi ribonucleici - ARN. ARN-ul are o structur chimic asemntoare cu ADN-ul, fiind o polinucleotid, care prezint trei diferene eseniale: 1. componenta glucidic - pentoza - este riboza, n loc de deoxiriboz; 2. n ARN, timina din ADN este nlocuit de uracil, astfel cele patru baze azotate ale unei molecule de ARN sunt: adenina, guanina, citozina i uracilul; 3. moleculele de ARN sunt monocatenare.

Exist trei tipuri importante de ARN: 1. ARN mesager (ARNm) 2. ARN ribosomal (ARNr) 3. ARN de transfer (ARNt) toate fiind implicate n sinteza peptidelor

MECANISMUL TRANSCRIPIEI Transcripia implic copierea unui segment limitat din molecula de ADN. Deoarece cele dou catene de ADN sunt complementare, dac transcripia s-ar face concomitent pe ambele catene ar rezulta molecule de ARNm i, implict, proteine diferite. Astfel, transcripia se face pe o singur caten a moleculei de ADN. Totui, catena transcris nu este aceeai la toate genele de pe un cromosom, iar la unele gene pot fi transcrise alternativ ambele catene, rezultnd proteine diferite. Formarea ARNm prin transcripia genelor care codific proteine se desfaoar n dou etape: formarea preARNm i maturarea ARNm.

TRANSLAIA Translaia este procesul de decodificare a informaiei genetice coninut de o molecul de ARNm matur. Translaia se realizeaz n citoplasm la nivelul ribosomilor, fiind necesar ndeplinirea a dou condiii: celula trebuie s aib un aparat de translaie; ntre secvena nucleotidelor din ARNm matur i secvena aminoacizilor din proteine trebuie s existe un sistem de coresponden, reprezentat de codul genetic. APARATUL DE TRANSLAIE Aparatul de translaie este constituit din totalitatea componentelor care intervin n sinteza proteinelor. Acestea sunt reprezentate de: ribosomi, ARNt, proteine i surse energetice. ARNm matur este purttorul informaiei genetice codificate. El este alctuit din dou categorii de secvene: translate i netranslate.

CODUL GENETIC Codul genetic este un sistem de coresponden ntre o anumit succesiune de nucleotide din structura unei molecule de ARNm i un anumit aminoacid din structura peptidei sintetizat pe baza informaiei genetice a moleculei de ARNm. Codul genetic are o serie de particulariti, Codul genetic este triplet - fiecare unitate de cod din structura este constituit din trei nucleotide nvecinate. Existena unui cod triplet este dictat de necesitatea existenei a cel puin unui codon pentru fiecare din cei 20 de aminoacizi din proteine.innd cont c n molecula de ARNm exist patru baze azotate - adenin (A) guanin (G) C) i uracil (U) care se pot asocia liber, rezult obligativitatea a cte 3 nucleotide, pentru a fi posibil formarea a cel puin unui codon pentru fiecare aminoacid. Astfel, prin asocierea de tip triplet se formeaz 4 = 64 de codoni diferii.

Codul genetic are o serie de codoni speciali. Acetia sunt: AUG care codific metionin i reprezint codonul iniiator, codonii UAA, UAG i UGA, care reprezint semnalele pentru ntreruperea citirii informaiei genetice, fiind considerai codoni stop. ETAPELE TRANSLAIEI Translaia decurge n trei etape: iniiere, elongaie i ncheiere 1. Iniierea translaiei Translaia ncepe prin activarea complexelor aminoacid-ARNt. Acest proces se desfoar n prezena aminoacil-ARNt-sintetazei i a ATP, ca surs energetic. Enzima prezint trei situsuri funcionale n care se fixeaz: aminoacidul, ARNt i AMP. Ulterior, se formeaz complexul poliribosomic prin fixarea complexului metionil-ARNt (ce corespunde codonului iniiator al translaiei) la subunitatea mic a ribosomului (40S) la nivelul captului 5 al ARNm.

Dup fixare, complexul se deplaseaz spre captul 3' al moleculei de ARNm, pn cnd ntlnete codonul iniiator AUG. n acest moment, se ataeaz i subunitatea mare a ribosomului (60S) iar ribosomul este complet activat, rezultnd trei situsuri funcionale: aminoacil, peptidil i enzimatic. Situsul peptidil este liber, iar la nivelul situsului enzimatic se fixeaz peptidil-transferaza. 2. Elongaia ncepe prin fixarea, la nivelul situsului peptidil, a complexului aminoacid2-ARNt. n prezena peptidiltransferazei, ntre gruparea aminic a aminoacidului 2 i gruparea carboxil a metioninei se formeaz o legtur peptidic, rezultnd compexul metionilaminoacil2-ARNt, ataat la situsul peptidil. n continuare, la nivelul situsului peptidil se fixeaz complexul aminoacil3-ARNt i ciclul elongaiei se reia..

Terminarea translaiei n momentul n care situsul peptidil ajunge n dreptul unui codon stop, la acest nivel se fixeaz factorul de eliberare (RF - Releasing Factor) care pe baza energiei furnizate de GTP determin desprinderea complexului peptidil-ARNt de pe ribosom i trecerea acestuia n citoplasm. n citoplasm, complexul se desface, eliberndu-se peptida i ARNt corespunztor ultimului aminoacid. n momentul n care la nivelul situsului aminoacil nu se mai gsete nici un complex peptidil-ARNt ribosomul activ se desface n cele dou componente: subunitatea de 40 S i cea de 60S, care sunt refolosite la sinteza altei peptide.

REGLAREA EXPRESIEI GENICE Reglarea expresiei genice este un proces complex care implic o multitudine de factori care intervin n mai multe etape. Astfel, reglarea expresiei genice poate fi mprit n mai multe etape: 1. reglare global (pretranscripional), 2. reglare transcripional, 3. reglare translaional, 4. reglare posttranslaional.

REGLAREA GLOBAL A EXPRESIEI GENICE Mecanismele de reglare global a funciei genei nu sunt complet elucidate. Totui, a fost posibil identificarea unor factori care influeneaz mai multe gene din acelai domeniu cromosomic. Dintre aceste mecanisme pot fi enumerate: 1. semnalizarea localizat dependent de poziia celulei, 2. amprentarea genetic, 3. recombinrile somatice, 4. competiia pentru activator/inhibitor.

Semnalizarea localizat dependent de poziia celulei - intervine n cursul embriogenezei i al organogenezei, cnd anumite celule prezint o dezvoltare particular datorit activrii specifice doar a anumitor gene. Activarea acestor gene pare a fi dependent de interaciunea celulei cu factori extracelulari, a cror aciune este corelat cu poziia celulei n organism. n acest mod este posibil trecerea de la dezvoltarea simetric, istic primelor etape ale embriogenezei, la dezvoltarea asimetric, care permite organogeneza.

Amprentarea genetic Amprentarea genetic, numit i gametic sau parental, este un mecanism care acioneaz doar n anumii loci din organism. Amprentarea genetic se caracterizeaz prin marcarea specific a alelei care ocup locusul respectiv n cursul spermatogenezei sau ovogenezei. Prin aceast marcare din cele dou gene ale unei perechi doar una rmne activ. n cursul transmiterii informaiei genetice prin mitoz amprentarea genic nu se pierde, n schimb, n cursul gametogenezei, ntr-o prim etap, amprentarea ambelor alele se terge, pentru ca n final toate alelele s fie marcate specific sexului respectiv, masculin sau feminin.

Amprentarea gametic

Tabelul V.2. Relaia dintre locii supui amprentrii i patologia uman DUP - disomie uniparental
Locus 15ql1-13 Gen SNRPN Alela activ Matern Anomalie cromosomic Microdeleie patern DUP matern Sindrom asociat Prader Willi

15ql 1-13

UBE3A

Patern

Microdeleie matern DUP patern

Angelman

llpl5.5 llpl5.5

IGF2 H19

Patern Matern

DUP patern Microdeleie matern

Beckwith Wiedeman Beckwith Wiedeman

Inactivarea cromosomului X

Inactivarea cromosomului X este consecina unui mecanism de compensaie a dozajului genic. Acest mecanism este necesar pentru a prentmpina apariia unui dezechilibru genic ntre femei (care au doi cromosomi X) i brbai (care au un singur cromosom X). Mecanismul se bazeaz pe inactivarea aproape complet a transcripiei pe unul din cei doi cromosomi X ai femeii. Aceast inactivare este controlat de gena X1ST, care este activ doar pe cromosomul care se inactiveaz. Gena XIST determin sinteza unui ARNm care nu este translat, dar se fixeaz specific pe ADN-ul cromosomului inactivat, blocndu-i activitatea.

Recombinrile somatice
Recombinrile genetice somatice au fost identificate doar n cazul ctorva gene, active n limfocitele B i plasmocite. Prin recombinarea genelor imunoglobulinelor i ale receptorilor limfocitelor T este asigurat polimorfismul proteinelor sintetizate de aceste gene i devine posibil aprarea organismului mpotriva agenilor exogeni sau endogeni modificai.

Competiia pentru activator/inhibitor n cazul unor domenii cromosomice, care conin gene diferite sau gene ale aceleiai familii, a fost identificat o competiie ntre gene pentru utilizarea aceluiai factor activator/inhibitor. De exemplu, n regiunea 1lpl5.5 genele IGF2 i HI9 concur pentru acelai activator. n condiii normale, pe cromosomul de origine patern este activat gena IGF2 (codific un factor de cretere celular) n timp ce pe cromosomul de origine matern este activat gena HI9 (codific o gen supresoare de tumori), Un alt exemplu l constituie familiile genelor a i globinelor, a cror activitate depinde de centri regionali de control, care acioneaz ca un stimulator selectiv al unei singure gene ntr-o anumit perioad ontogenetic.

TRANSMITEREA INFORMAIEI GENETICE Din cele mai vechi timpuri a fost observat existena unei similitudini ntre prini i copii. n plus, n cazul gemenilor, uneori, asemnrile deosebit de marcante, fac imposibil identificarea indivizilor. Aceste similitudini au fost explicate la jumtatea secolului XIX cnd Gregor Mendel,studiind transmiterea de la o generaie la alta a caracteristicilor mazrei, a stabilit legile fundamentale ale transmiterii informaiei ereditare. Ulterior, prin dezvoltarea geneticii i a tehnicilor de analiz genetic, au fost stabilite toate etapele prin care informaia genetic, stocat sub form de cromosomi, se transmite de la o generaie de celule la urmtoarea, n aceluiai organism, respectiv de la o generaie de organisme la urmtoarea.

Transmiterea informaiei genetice implic dou procese corelate direcional: replicarea ADN-ului (dublarea cantitii de material gnetic a celulei i diviziunea celulei (mprirea total i egal a materialului genetic replicat, cu formarea a dou celule fiice identice sau nu cu celula de origine). LEGILE MENDEL Legile Mendel sau legile transmiterii caracterelor ereditare monogenice, au fost stabilite de Gregor Mendel pe baza studiului mazrei de grdin (Pisum sativatum). Studiile botanistului ceh au fundamentat principiile segregrii i asortrii independente a factorilor ereditari (denumii ulterior gene) i au definit fenotipic noiunile de dominan i recesivitate.

Experiment 1 Cercettorul a observat c la mazre pot exista 4 tipuri de boabe, care difer prin aspect (netede i zbrcite) i culoare (verde i galben). n cazul fecundrii ncruciate a plantelor cu caracteristici diferite (generaia P -parental) de exemplu, mazre cu boabe netede i mazre cu boabe zbrcite, Mendel a observat c toate plantele obinute prin aceast hibridare au numai boabe netede (generaia F1 - filial). n plus, prin autofecundarea plantelor din generaia F1, n generaia F2 a reaprut caracterul absent n generaia F1, iar proporia ntre boabele netede i boabele zbrcite a fost de 3:1.

Experiment 2, Mendel a fcut o dubl hibridare ntre mazare cu boabe netede de culoare galben i mazre cu boabe zbrcite de culoare verde (generaia P). Prin aceast dubl ncruciare, n prima gneraie filial (F1) toate boabele erau netede i aveau culoare galben. Prin autofecundarea plantelor din generaia FI, n generaia F2 a reaprut mazrea cu boabe zbrcite i de culoare verde, dar totodat au aprut doi hibrizi noi: mazre cu boabe netede de culoare verde i mazre cu boabe zbrcite de culoare galben. Proporia celor patru tipuri de mazre a fost: bob neted i galben : bob neted i verde : bob zbrcit i galben : bob zbrcit i verde = 9:3:3:1.

Pe baza acestor experimente Mendel a stabilit cele dou legi care-i poart numele: Legea puritii gameilor - n cursul meiozei, cei doi membri ai unei perechi de gene segreg, iar gameii au numai una din aceste gene, fiind "puri" din punct de vedere genetic; Legea asortrii independente a genelor - n cursul meiozei, alelele parentale, care ocup loci diferii au tendina de a se asorta n gamei, n mod independent unele de altele; astfel transmiterea alelei unui anumit locus nu este influenat de transmiterea alelei altui locus. Cele dou legi sunt universal valabile la toate speciile de animale i plante cu reproducere sexuat, inclusiv la om.

Demonstrarea primei legi a lui Mendel

Demonstrarea celei de-a doua legi Mendel

MUTAIILE GENETICE Mutaiile genetice sunt definite ca modificri: 1. accidentale, 2. permanente, 3. ereditare ale materialului genetic. CLASIFICAREA MUTAIILOR Clasificarea mutaiilor poate fi realizat utiliznd mai multe criterii: n raport cu genomul interesat pot fi identificate dou tipuri de mutaii: 1. nucleare - cnd este afectat ADN-ul nuclear 2. mitocondriale este interesat genomul mitocondrial. Dependent de gradul de afectare al materialului genetic nuclear pot fi identificate: 1. mutaii genomice - reprezentate de poliploidii i aneuploidii; 2.mutaii cromosomice - determinate de rearanjamentele cromosomice care induc diverse anomalii cromosomice structurale (deleii, duplicaii, translocaii, inversii etc);

3. mutaii genice - determinate de modificarea structurii unei singure gene (substituii, inserii, deleii, duplicaii etc). n raport cu numrul de celule afectate mutaiile pot fi: 1. mutaii omogene - prezente n toate celule organismului, care sunt rezultatul unei mutaii prezent n genomul zigotului i care a fost motenit de la unul dintre prini; 2. mutaii n mozaic - rezultate ca urmare a modificrii materialului genetic pe parcursul vieii; acestea la rndul lor pot fi de dou tipuri: a. mutaii somatice (modificarea materialului genetic este prezent ntr-un singur esut, deseori sunt implicate n carcinogenez i procesele de degenerescet tisular, dar nu se transmit la descendeni). b. mutaii germinale (modificarea materialului genetic s-a produs la nivelul uneia dintre gonade (ovar sau testicul) nu modific fenotipul purttorului, dar se pot transmite la descendeni, cauznd tulburri de reproducere).

Dependent de efectul fenotipic mutaiile pot fi clasificate n: 1. mutaii neutre - acest tip de mutaii sunt cele mai frecvente; ele sunt localizate fie la nivelul unei regiuni intergenice, fie n secvenele netranslate ale genelor, fiind rspunztoare de polimorfismul populaional al fragmentelor de ADN; 2. mutaii nefavorabile (morbide) - aceste mutaii produc modificri particulare ale fenotipului, fiind rspunztoare de manifestrile diverselor tipuri de boli genetice; 3. mutaii favorabile - sunt rarisime, existnd doar cte una la mii de generaii; acest tip de mutaii a permis evoluia speciilor i apariia de specii noi.

Mecanismele de producere a mutaiilor genomice Poliploidiile pot rezulta prin erori: meiotice, mitotice sau de fecundare. Triploidiile pot rezulta prin erori meiotice sau erori de fecundare. Eroarea meiotic const n nesepararea citelor de ordin II i poate afecta, att meioza feminin, ct i cea masculin. Neexpulzarea celui de-al doilea globul polar, n timpul meiozei II feminine, conduce la formarea unui ovul anormal diploid, fenomen denurm DIGINIE. Afectarea meiozei masculine duce la formarea unui spermatozoid diploid anormal, fenomen numit DIANDRIE. Prin fecundarea unui gamet diploid cu un gamet normal haploid rezult un zigot triploid.

Aneuploidiile omogene sunt consecina unor erori produse n cursul meiozei: nedisjuncia cromosomic, nedisjuncia cromatidian i ntrziere anafazic. Nedisjuncia cromosomic este un fenomen ce poate aprea n cursui meiozei I, fiind caracterizat prin migrarea celor doi cromosomi omologi la acelai pol al fusului de diviziune. Consecina acestei erori de distribuie a materialului genetic este formarea a doi gamei anormali: unul disomic (n+l=24 cromosomi) iar cellalt nulisomic (n-l=22 cromosomi). Fecundarea acestor gamei de ctre gamei normali (n=23 cr) conduce la formarea de zigoi aneuploizi trisomici, respectiv monosomici. Nedisjuncia cromatidian poate aprea n meioza II i se caracterizeaz prin migrarea celor dou cromatide surori ale unui cromosom la acelai pol al fusului de diviziune. Consecina acestei erori este apariia a doi gamei anormali: unul disomica, iar cellalt nulisomic. Fecundarea acestor gamei de ctre gamei normali conduce, de asemenea, la formarea de zigoi trisomici ,respectiv monosomici.

ntrzierea anafazic este un accident care se poate produce n anafazele ambelor meioze (mai frecvent n anafaza II) i const n blocarea migrrii sau reducerea vitezei de migrare a unor cromosomi (cromatide) normal segregai(te). Cromosomul sau cromatidele "ntrziate" nu vor mai putea fi integrate ntr-unul din nucleii celulelor fiice i vor rmne n citoplasm sub forma unui micronucleu, care se va pierde n cursul diferenierii sau diviziunilor ulterioare. Efectul ntrzierii anafazice este apariia unor gamei nulisomici, care prin fecundare cu gamei normali vor conduce la zigoi cu monosomie.

Etiologia mutaiilor genomice Un fapt cunoscut de mult timp este concordana dintre creterea vrstei materne n momentul concepiei i creterea incidenei trisomiilor. Cel mai clar efect al vrstei materne asupra incidenei trisomiilor a fost dovedit n cazul sindromului Down (trisomia 21) dar efecte similare au fost identificate i n cazul trisomiilor 13 i 18. Se presupune c efectul vrstei materne asupra incidenei trisomiilor are la baz dou fenomene: - reducerea ratei recombinrilor intracromosomice (crossingover) n meioza I - formarea unui fus de diviziune anormal. n ceea ce privete originea parental a cromosomilor suplimentari abseni, observaiile efectuate, folosind markeri pentru ADN-ul centromeric, au artat c majoritatea au origine matern (de obicei eroarea survine n meioza I). Singura excepie este trisomia XYY care este exclusiv patern, provenind din nedisjuncia cromatidelor cromosomului Y n meioza II patern.

MUTAIILE CROMOSOMICE Mutaiile cromosomice induc modificarea morfologiei i/sau coninutului genic normal al unuia sau mai multor cromosomi, determinnd anomalii cromosomice structurale. Dependent de gradul de modificare al fenotipului acestea pot fi echilibrate (fenotip normal) sau neechilibrate (fenotip anormal). Cauzele mutaiilor cromosomice Mutaiile cromosomice sunt favorizate de expunerea postnatal (rareori prenatal) la ageni mutageni fizici (radiaii ionizante) chimici (substane alchilante) sau biologici (unele virusuri). Aceti ageni acioneaz n timpul replicrii ADN-ului (faza S a interfazei) i determin rupturi n ambele catene ale ADN-ului (ageni clastogeni) urmate de reunirea anormal a fragmentelor cromosomice. 1. Anomalii cromosomice echilibrate 2. Anomalii cromosomice neechilibrate (din Lp)