Sunteți pe pagina 1din 45

CUPRINS

INTRODUCERE.3 CAPITOLUL I: CADRUL NATURAL I INSTITUIONAL N CARE SE VOR DESFURA CERCETRILE I OBSERVAIILE 1.1.Cadrul natural.........4 1.2. Cadrul instituional7 CAPITOLUL II: DESCRIEREA I TEHNOLOGIA DE CULTUR A SPECIEI ARACHIS HYPOGAEA L. 2.1. Particularitile morfologice ..11 2.2. Particularitile biologice14 2.3. Cerinele fa de clim i de sol..16 2.4. Tehnologia de cultur a alunelor de pmnt...16

CAPITOLUL III: DESCRIEREA SUBSTANELOR MUTAGENE 3.1. Sulfatul de dimetil...23 3.2. Azida de sodiu.....24 3.3. Etil metansulfonat...25

CAPITOLUL IV: PROIECTAREA PLANULUI EXPERIMENTAL PENTRU REALIZAREA TEMEI PROPUSE 4.1. Obiectivele tezei de doctorat...26 4.2. Materialul biologic folosit.......................................................................................................28 4.3. Metodele de cercetare.30 4.3.1. Metoda de efectuare a tratamentelor la semine i aezarea experienei n cmp...30 4.3.2. Metode statistice de prelucrare a datelor........................................................................32 4.3.3. Metode citogenetice ...32
1

4.3.3.1. Efectul substanelor chimice mutagene asupra facultii i energiei germinative a seminelor.......................................................................................................................................32 4..3.2. Efectul substanelor chimice mutagene asupra ritmului de cretere n lungime a rdcinielor i tulpinielor ............................................................................................................33 4.3.3.3. Identificarea i frecvena aberaiilor cromozomice n mitoz...............................34 4.3.4. Metode fiziologice...........................................................................................................37 4.3.4.1. Determinarea coninutului de pigmeni asimilatori din frunze pe cale spectrofotometric .........................................................................................................................37 4.3.4.2. Efectul indus de tratamentul cu substane chimice mutagene asupra intensitii fotosintezei ....................................................................................................................................39 4.3.4.3. Determinarea intensitii transpiraiei...39 CONCLUZII .42 BIBLIOGRAFIE........43

INTRODUCERE ara de origine a arahidelor este America de Sud. Ct privete zona exact de origine persist incertitudinea. Unii consider a fi Argentina i anume n partea muntoas unde se gsesc nc specii strict nrudite. Dup alte preri zona de origine ar fi platoul nalt central al Braziliei, unde se gsesc tipuri slbatice bienale de arahide sau regiunea andin a Argentinei. Indiferent de zona de origine, un lucru este cert, c n aceste pri ale lumii arahidele s-au cultivat din vremuri foarte ndeprtate (Pop L. i colab., 1986). Astfel, fructe de arahide s-au gsit n grotele peruane din Ankona, de lang Lima, iar cltorul portughez Gabriel Suarez de Suza meniona n anul 1570, c arahidele au fost cultivate de ctre indienii din Peru, care le denumeau anhuc (Pop L. i colab., 1986). n Europa arahidele au fost aduse de marinarii portughezi n secolul al XVI-lea, din India i s-au rspndit n zonele sudice mai calde, favorabile pentru cultivare. Arahidele (alunele de pmnt, alunele americane) prezint o importan deosebit datorit coninutului ridicat al seminelor n proteine (25-34%) i grsimi (45-60%). n producia mondial de ulei, arahidele ocup locul al treilea (peste 3 milioane tone anual), situndu -se dup soia, floarea soarelui i naintea bumbacului. n hrana oamenilor, arahidele au folosine multiple. Uleiul (de o calitate foarte bun, coninut ridicat n vitamina B1) se folosete n alimentaie, n industria conservelor, a margarinei i a untului, iar seminele proaspete i ntregi se consum prjite sau n diferite preparate culinare, la obinerea pinii, biscuiilor, ciocolatei etc. Cojile rezultate n urma decojirii pstilor de arahide i dup mcinare se folosesc la prepararea de nutreuri furajere, iar frunzele i tulpinile pot constitui un nutre valoros pentru animale dar pot fi ntrebuinate i ca ngrmnt verde (Marin . i Constantinescu Emilia, 2011). Arahidele au utilizri variate i valoroase, iar cultura acestora prezint o serie de avantaje, care i sporesc importana, cum ar fi: - posibilitatea de a obine producii mari la unitatea de suprafa i relativ constante; - solicit un consum redus de ngrminte; - constituie o plant bun premergtoare pentru alte culturi, oferind posibilitatea de a forma asolamente i succesiuni raionale; - valorific superior solurile cu o capacitate de producie mic, cum sunt de exemplu cele nisipoase.

CAPITOLUL I CADRUL NATURAL I INSTITUIONAL N CARE SE VOR DESFURA CERCETRILE I OBSERVAIILE Cercetrile care fac obiectul tezei de doctorat se vor desfura att n cmp, la ferma Ezreni, din cadrul Staiunii Didactice a Universitii de tiine Agricole i Medicin Veterinar Ion Ionescu de la Brad Iai unde se vor cultiva alune de pmnt n vederea realizrii observaiilor pe parcursul perioadei de vegetaie, ct i n cadrul laboratorului LECOM, unde se vor efectua toate analizele citogenetice i morfo-fiziologice. 1.1. Cadrul natural Aezarea Fermei Ezreni Ferma Ezreni aparine Staiunii Didactice a Universitii de Stiine Agricole i Medicin Veterinar Ion Ionescu de la Brad i se afl situat la 2,5 km sudvest de oraul Iai, fiind aezat n extremitatea sudvestic a Cmpiei Moldovei. Caracteristici generale ale reliefului i climei Relieful Relieful zonei este strns legat de alctuirea geologic. n urma studiilor efectuate s-a constatat prezena n aceast zon a unui fundament precambian, puternic cutat i metamorfozat. Categoriile de relief specifice zonei, rezultate n urma eroziunii difereniate, sunt alctuite din dou etaje structurale principale, distincte att prin conformaie ct i prin genez: un etaj inferior, constituit din roci cristaline, cutate i un etaj superior de cuvertur, care cuprinde depozite sedimentare, necutate. Relieful actual al Fermei Ezreni se integreaz n aspectul geomorfologic general al cmpiei Moldovei. Solul. Conform modificrilor Structurii Sistemului Romn de Taxonomie a Solurilor (S.R.T.S) tipurile de sol formate pe teritoriul fermei Ezreni sunt: cernoziomul cambic, solul aluvial molic i gleiosolul salinic (Blaga i Filipov, 2005).

Solul pe care a fost amplasat experiena este un cernoziom cambic mezoalcalic, slab degradat, luto - argilos, ce prezint o morfologie de tipul Ap, Atp, Am, AB, Bv1, Bv2, Bv3k Cca1, Cca2, II Ck (figura 1.1) (Rus i Jitreanu, 2007).
I Ap 0-19 cm; lut argilos; brun cenuiu foarte nchis (10YR 3/2); glomerular medie; frecvent-macropori fini i medii; cervotocine rare; rdcini frecvente, nu face efervescena cu acid clorhidric; trecere clar. Atp 19-25; lut argilos; brun foarte nchis (10YR 2/2); structura poliedric angular mare; moderat compact; distribuia rdcinilor neuniform, preferenial pe feele elementelor structurale; cervotocine rare ; nu face efervescena cu acid clorhidric; trecere clar, ondulat. Am 25-32 cm; lut argilos; brun fo arte nchis (10YR 2/2); structura glomerular mare; rdcini frecvente distribuite relativ uniform att pe feele elementelor strucurale ct i n interiorul agregatelor structurale; nu face efervescena cu acid clorhidric; cervotocine rare; trecere treptat. AB 32-40 cm; lut argilos; brun glbui nchis (10YR 3/4); structura columnoid prismatic; rdcini frecvente n interiorul i preferenial pe suprafaa elementelor structurale; cervotocine rare; nu face efervescena cu acid clorhidric; distribuia humusului uniform descrescnd; trecere treptat. Bv1 40-51 cm; lut argilos; brun glbui nchis (10YR 4/4) structura columnoid prismatic medie; slab-moderat compact; distribuia rdcinilor preferenial pe feele elementelor structurale; melanocornevine rare; nu face efervescena cu acid clorhidric; trecere difuz. Bv2 51- 78 cm; lut argilos; brun glbui nchis (10YR 4/4) structura columnoid prismatic medie; slab-moderat compact; distribuia rdcinilor preferenial pe feele elementelor structurale; melanocornevine rare; nu face efervescena cu acid clorhidric. Bv3k 78-90 cm; lut argilos; brun glbui (10YR 5/4); structura columnoid prismatic medie; slab - moderat compact; rdcini rare distribuite preferenial pe feele elementelor structurale; melanocornevine rare; efervescena moderat spre puternic; eflorescene i pseudomicelii de CaCO3; trecere treptat. Cca1 92-108 cm; lut mediu; galben bruniu (10YR 6/6); structura masiv; efervescena foarte puternic cu acid clorhidric; rdcini foarte rare; trecere difuz. Cca2 108-138 cm; lut mediu; galben bruniu (10YR 6/6); structura masiv; efervescena foarte puternic cu acid clorhidric; eflorescene, pete i vinioare frecvente de carbonat de calciu; rdcini foarte rare; trecere difuz. II Ck 138 160 cm; lut mediu; galben bruniu (10YR 6/6); structura masiv; efervescena foarte puternic cu acid clorhidric; concreiuni i ppui de loess frecvente de carbonat de calciu.

Figura 1.1 - Profilul de sol (Rus i Jitreanu, 2007)

(Rus and Jitreanu, 2007)

Vegetaia Situat n zona de contact dintre limita nordic a bazinului pduros din Podiul Moldovei i Cmpia Jijiei i Bahluiului, ferma Ezreni se ncadreaz din punct de vedere geobotanic n formaiunea floristic de silvostep. Acest fapt explic prezena unor elemente specifice stepei i silvostepei caracterizate printr-o vegetaie ierboas, xeromezofil i mezofil.

Clima Zona geografic a Iaului se caracterizeaz printr-un climat temperat continental cu particulariti determinate de influena climatului stepei ruseti. Ferma Ezreni face parte din provincia climatic Dfdx (dup clasificarea lui Koppen), sau IIDps (dup clima Romniei), caracterizat prin clim boreal, cu ierni geroase i friguroase, cu temperatura celei mai reci luni sub 33C i temperatura celei mai calde luni de 25 27 C. Temperatura medie multianual (la staia meteorologic Miroslava) este de 9,6C, cu minima de 8,1C nregistrat n luna ianuarie, iar maxima de +28,4 C realizat n luna iulie. Temperatura maxim absolut a fost de +40,2 C (27 iulie 1909), iar minima absolut a fost de 30,6 C (21 ianuarie 1997) (Administraia Naional de Meteorologie, 2011). Precipitaiile Precipitaiile medii multianuale n ecosistemul agricol Iasi sunt de 517,8 mm (la staia meteorologic Miroslava), lunile cele mai ploioase fiind: mai, iunie, iulie i august. Precipitaii reduse cantitativ cad n lunile: ianuarie, februarie, martie, noiembrie i decembrie. Precipitaiile sunt repartizate neuniform de-a lungul anului cu un maxim n luna iunie i un minim n luna februarie. Evapotranspiraia potenial medie anual determinat pentru perioada de vegetaie a culturilor agricole este de 648,7 mm, cu valori maxime n luna august (115,7 mm) i minime n luna octombrie de 65,6 mm. Indicele de ariditate are valoarea de 26,4, corespunznd condiiilor climatice de silvostep. Regimul eolian n timpul iernii, dinamica atmosferic se caracterizeaz prin preponderena vnturilor de la nordvest i nord ce bat cu o vitez medie de 2,8 m/s. Vara vnturile au direcie sudic i sud
6

estic i o vitez de 5,1 m/s. Vnturile cu o vitez de peste 2,5 m/s au o frecven medie de 78,0%, activnd puternic evaporarea apei din sol. n general, frecvena maxim a vnturilor coincide cu perioada cea mai ploioas a anului. Primvara cunoate cea mai sporit frecven a vnturilor, care bat din toate direciil e, ceea ce diminueaz procesul de calm. Toamna, cnd n estul arii ncepe s se simt influena anticiclonului siberian, se nregistreaz o evident scdere a frecvenei vnturilor dinspre nord vest. Iarna, dei frecvena vnturilor este mai mic, se manifest destul de activ crivul, care bate din estul Europei, producnd frig i viscole puternice. Luminozitatea i nebulozitatea Nebulozitatea medie a zilei este de 6 ore. Nebulozitate mic au lunile iunie i iulie cu valori de 3,45,6 ore, iar cea mai mare nebulozitate se nregistreaz n lunile decembrie, ianuarie i februarie. Durata de strlucire a soarelui este de 2050 ore anual ceea ce reprezint 44,5% din durata teoretic posibil. Lunile cu cea mai lung durat de strlucire a soarelui sunt n ordine descresctoare: iulie, august i iunie, la care durata de strlucire a soarelui este de 294 ore. Durata cea mai redus de strlucire a soarelui este ntlnit n cursul lunilor noiembrie, decembrie i ianuarie.

1.2. Laboratorul L.E.C.O.M Laboratorul pentru expertiza i controlul organismelor modificate genetic i a produselor agro-alimentare obinute (L.E.C.O.M.) este parte integrant a Departamentului de Cercetare al Universitii de tiine Agricole i Medicin Veterinar Ion Ionescu de la Brad Iai . A fost creat n anul 2006, n contextul intrrii Romniei pe piaa unic european, avndu-se n vedere necesitatea existenei unor laboratoare care s poat certifica conformitatea i calitatea produselor agricole pentru consumul regional, dar i celor care ptrund pe piaa european. Suportul tehnic, personalul calificat al laboratorului permit efectuarea de analize genetice att la plante ct i la ADN ul extras din produse alimentare i furajere. Aparatura asigur realizarea analizelor conforme cu metodele de referin agreate de directivele i reglementrile Uniunii Europene. Fluxul laboratorului este realizat astfel:
7

Camera de primire a probelor - este destinat recepionrii materialului ce urmeaz a fi analizat. Camera este utilat cu calculator PC, pentru evidena probelor primite i nregistrarea lor. Camera de mcinare a probelor - este dotat cu o moar de laborator de tip RETSCH MM400 i un aparat de tip Smasher. Moara este prevzut cu 4 capsule metalice, iar mcinarea se realizeaz cu ajutorul bilelor metalice. Se pot prelucra probe de soia, porumb boabe, fasole boabe s.a. De asemenea, moara permite mcinarea cu ajutorul criogenei. Folosind acest tip de mcinare se poate mojara i material vegetal ngheat n vederea extragerii ADN. Aparatul de tip Smasher se folosete la mrunirea butonilor florali, n vederea realizrii culturilor de microspori la diverse plante. Camera de extragere ADN - probele supuse mcinrii sunt aduse aici n vederea extragerii ADN ului. Camera are n dotare toate echipamentele necesare acestei operaiuni, i anume: Nia chimic cu rol de protecie a operatorului i a mediului nconjurtor n cazul manipulrii substanelor i pulberilor periculoase, prin utilizarea filtrelor de crbune activat i a filtrelor HEPA; Ultracentrifug cu rcire (HETTICH MIKRO 200R) folosit pentru centrifugarea tuburilor eppendorf la o temperatura de 4C; Balana analitic (KERN) utilizat la cntrirea materialului vegetal; Baie marin utilizat pentru incubarea probelor la temperatura de 65C; Incubator (etuva) folosit() la uscarea pelletului de ADN; Agitatoare magnetice cu nclzire folosite pentru prepararea substanelor necesare n cadrul procesului de extragere; Vortexuri de laborator utilizate la amestecarea componentelor biologice i chimice n tuburi de 1,5 ml. Camera de realizare a amestecului PCR ADNul extras i dizolvat n soluie de TBE buffer, este adus aici n vederea realizrii amestecului PCR, pentru amplificarea lui. n acest scop, camera este dotat cu: - Hota cu flux laminar funcioneaz pe principiul recirculrii aerului din interior. Aerul circul descendent prin filtrul principal montat deasupra spaiului de lucru;

- Centrifuga (HETTICH MIKRO 120) - folosit pentru centrifugarea tuburilor de 1,5 ml, n vederea separrii compuilor cu greutate specific diferit; - Fluorospectometru (NanoDrop 3300) utilizat pentru aflarea concentraiei de ADN dup extragere. Camera de amplificare - dup cititrea concentraiilor i realizarea amestecului pentru reacia PCR, probele sunt supuse ciclurilor necesare amplificrii fragmentelor de ADN. Camera este utilat cu: - Sistem de electoforez n gel vertical utilizeaz gel acrilamidic, n timp real, pentru analiza rapid a fragmentelor de ADN; - Sistem pentru apa ultrapur utilizat pentru obinerea apei cu grad foarte nalt de puritate, necesar n diferite diluii sau medii de reacie. Camera de electroforez utilizat pentru realizarea gelurilor de agaroz n plan orizontal, n vederea vizualizrii fragmentelor de ADN amplificate n urma reaciei PCR. Camera este dotat cu: - Centrifug pentru plci folosit la centrifugarea plcilor PCR nainte de ncrcarea probelor pe gelul de agaroz, pentru amestecarea probelor cu colorant; - Cuptor cu microunde utilizat pentru prepararea gelului de agaroz; - Balana analitic folosit la cntrirea diferitelor substane chimice folosite n laborator; - Cuve de electroforez cu sursele aferente, de diferite mrimi permit separarea fragmentelor de ADN din soluia de reacie pe principiul vitezei diferite de deplasare, invers proporional cu masa molecular a acestora n gelul de agaroz. Camera de secveniere dotat cu: - Secveniator ADN (ABI PRISM 310 Genetic Analyzer) este un analizor cu un singur capilar ce permite realizarea unui numr mare de aplicaii (secveniere, analiza fragmentelor ADN, genotipizare, obinerea de grupe linkage). - Real time PCR este un termocycler care permite vizualizarea curbelor de amplificare ADN. Are 4 detectori, fiind capabil s suporte multiple aplicaii, inclusiv cuantificarea relativ i genotipizarea SNP. Florocromii calibrai care pot fi detectai sunt SYBR Green, FAMTM VICTM, JOETM, NEDTM, TAMRATM, ROXTM. Poate detecta de la 10 copii de ADN, iar gradul de confiden este de 99,7%.

Camera de preluare imagini - vizualizarea fragmentelor de ADN ncrcate pe gelul de agaroz se face n camera destinat special pentru aceast operaie, principiul de vizualizare a fragmentelor bazndu-se pe efectul bromurii de etidium. - Sistemul de preluare a imaginilor este format din transiluminator, sistem de fotodocumentare i computer.

10

CAPITOLUL II DESCRIEREA I TEHNOLOGIA DE CULTUR A SPECIEI ARACHIS HYPOGAEA L. 2.1. Particularitile morfologice Arachis hypogaea L.(figura 2.1) face parte din ordinul Leguminales, familia Leguminosae, tribul Arachidineae, genul Arachis. Genul Arachis prezint o singur specie cultivat, Arachis hypogaea L., aceast specie nu prezint forme slbatice.

Figura 2.1. Alune de pmnt - Arachis hypogaea L. (www.plant-pictures.de)

Rdcina este pivotant i ptrunde la mare adncime n sol. Pe cernoziomurile din Podiul Caucazului se citeaz o adncime de ptrundere de 186 cm. Din rdcina principal pornesc multe rdcini secundare, care permit explorarea unui volum mare de sol. Rdcinile teriare sunt puin evidente, subiri i scurte, rolul de ptrundere a solului revenind, n acest caz rdcinilor primare i secundare. Sistemul radicular al arahidelor nu posed rizoderm i n consecin nici peri absorbani adevrai. Absorbia apei i a elementelor chimice se face direct
11

prin parenchimul cortical. Pe rdcinile laterale, n special n primii 15 cm de sol, apar numeroase nodoziti, ca urmare a prezenei i activitii bacteriilor simbiotice. Nodozitile sunt mici, sub 4 mm diametru, n numr de 400-700 la o plant i de culoare maro-rocat. Apar la 15-20 zile de la rsrire i sunt rotund-sferice sau angular (Gillier P. i Silvestre P., 1969). Tulpina arahidelor este ierboas i erect sau trtoare, n funcie de subspecie. n seciune, tulpina prezint 5 muchii cnd plantele sunt tinere i devine cilindric ntr-o faz mai naintat de vegetaie. nlimea tulpinilor variaz n funcie de subspecie i soi. La formele cu port erect nlimea tulpinilor poate ajunge la 60-70 cm, pe cnd la cele cu port trtor nu depesc 20-25 cm (Pop L. i colab., 1986). Frunzele la arahide sunt compuse, paripenate i formate din dou perechi de foliole opuse. Foliolele sunt ovale, ovoide sau elipsoidale i ascuite sau rotunjite la vrf. Forma i mrimea foliolelor depinde mult i de poziia pe care o ocup frunzele pe plant. Astfel foliolele situate pe frunzele de la baza plantelor sunt mai mici dect cele situate spre vrful plantei. Faa superioar a foliolelor este lucioas, iar cea inferioar este acoperit cu o reea deas de periori (Pop L. i colab., 1986). Florile sunt situate la arahide la subsuoara frunzelor i pot fi solitare sau grupate n inflorescene de tip racem (figura 2.2).

Figura 2.2 Floarea la arahide

Florile au o culoare galben sau galbenportocalie i sunt de dou tipuri: flori chasmogame (de la chayymosdeschis) care se deschid i sunt poziionate mai mult la vrful tulpinii, de obicei sterile (mascule dup Gillier P. i Silvestre P., 1969) i flori cleistogame care
12

sunt situate spre baza tulpinii i nu se deschid (trec din faza de boboc la cea de fructificare i se autopolenizeaz). Exist flori cleistogame i pe baza subteran a tulpinii, dar numai la soiurile precoce (Pran P., 1998). Gillier P. i Prevot P. (1960) susin c androceul este alctuit din 8 stamine i 2 rudimente. Anterele staminelor sunt de dou tipuri: 4 de form sferic i uniloculare i 4 n form de sac, dispuse altern n jurul stilului i stigmatului. Pistilul este alctuit dintr- un ovar unilocular, cu un stil lung filamentos i un stigmat de form globular. Ovarul este situat la baza tubului caliciului i are cteva ovule. Corola este alctuit din 5 petale, stindardul este bine dezvoltat, larg i rotunjit, iar carena este alctuit din 2 petale ncovoiate (Pop L. i colab., 1986). Fructul arahidelor este o pstaie, de form mai mult sau mai puin cilindric, indehiscent i care prezint la suprafa un desen reticular caracteristic (figura 2.3). La unele soiuri desenul reticular este abia vizibil, n timp ce la altele este puternic pronunat. La unele soiuri, conformaia pstilor este asemntoare cu aceea a gogoilor viermilor de mtase.

Figura 2.3- Fructul la arahide

Lungimea pstilor variaz ntre 1-8 cm, iar limea ntre 0,5-2 cm. Masa a 1000 de psti variaz n funcie de tipul i soiul de arahide, ntre 10001900 g, iar masa hectolitric este de 2025 kg. Pstile de arahide prezint un numr variabil de boabe, ntre 14 boabe, iar n unele cazuri se ajunge chiar i la 7 boabe ntr-o pstaie. Culoarea boabelor variaz n funcie de soi: glbuie, galben deschis, alb, roie cu diverse nuane i neagr. Boabele prin pstrare mai ndelungat primesc treptat o nuan nchis i si pierd luciul caracteristic iniial (Pran P., 1998).

13

2.2. Particularitile biologice Arahidele, n special comparativ cu celelalte specii de plante cultivate n ara noastr, prezint o serie de particulariti biologice. Germinaia. La unele soiuri de arahide seminele germineaz numai dup parcurgerea repausului germinal. Soiurile care aparin tipurilor Valencia i Spaniol, germinaia poate avea loc la maturitatea tehnologic. n condiii favorabile de umiditate a boabelor aflate n psti, i anume de 8% i de temperatur de 15C, boabele i pstreaz capacitatea germinativ timp de 5 ani. Boabele decojite i pierd repede capacitatea germinativ dac nu sunt pstrate n cele mai bune condiii de umiditate i temperatur (Pop L. i colab., 1986). Temperatura minim de germinare este de 1215 C. n cazul soiurilor sensibile, temperaturile sub 15C, din perioada ncolirii, duneaz obinerii unei semnturi viguroase. La ncolire, prima care iese din boabe este radicela, care este foarte viguroas i n condiii de cmp se nfinge de la nceput puternic n sol. Tulpinia apare mai trziu, iar radicela nfipt n sol nlesnete strbaterea solului de cele dou cotiledoane i apariia tulpiniii la suprafaa solului (Pran P., 1998). Creterea sistemului radicular este relativ lent la nceputul perioadei de vegetaie i la sfritul perioadei de vegetaie. Rdcinile reprezint un procent ridicat din greutatea total a plantelor la nceputul perioadei de vegetaie. Pe msura naintrii n creterea plantelor, ponderea rdcinilor scade ca urmare a dezvoltrii accentuate a prii vegetative supraterestre i a formrii organelor de fructificare. Apariia nodozitilor i activitatea bacteriilor simbiotice. Nodozitile apar pe rdcinile de arahide ncepnd cu cca. 1520 zile de la rsrire. Pn la apariia nodozitilor plantele au o culoare verdepal i perioada corespunde cu o cretere vegetativ slab. Apariia i numrul nodozitilor sunt influenate de condiiile de sol i de clim. Astfel, arahidele nu formeaz nodoziti pe terenurile fertile. Minchevici A. I. i Borcovschi E. V. (1953) arat c, pe cernoziomurile levigate din nordul Caucazului, arahidele nu formeaz nodoziti pe rdcini, n schimb numrul lor este mai mare la culturile de pe terenurile nisipoase. Cercettorii indieni Nair S. K. et al., (1972) arat c insuficiena fosforului determin o slab apariie a nodozitilor, precum i o slab aprovizionare cu magneziu. Creterea tulpinilor. Dup ajungerea cotiledoanelor la suprafaa solului se dezvolt mai nti mugurele terminal, urmat de cei 2 muguri laterali. nlimea i greutatea la care ajung
14

tulpinile plantelor de arahide depind de soi, condiiile climatice, de sol i de condiiile de cultur (Pran P., 1998). Creterea frunzelor. Ritus G. I. (1952) a gsit c pentru formarea frunzelor soiurile precoce au nevoie de mai mult cldur dect cele tardive i formeaz un numr mai mic de frunze. Un numr mai mare de frunze poate avea un rol important asupra produciei obinute. n acelai timp prezena unui numr mai mare de frunze n masa supraterestr a plantelor are o influen favorabil i asupra calitii acesteia ca furaj. Acest lucru se datoreaz coninutului ridicat de proteine (Pop L. i colab., 1986). nflorirea. n condiiile climatice din zona de cultivare a arahidelor, n ara noastr, nflorirea ncepe la 2530 zile de la rsrire, mai devreme la soiurile timpurii i mai trziu la soiurile tardive i dureaz o perioad mai mare de timp la soiurile tardive pn la recoltare. Durata medie de nflorire a unei flori este scurt. n mod normal florile se deschid dimineaa nainte de rsrirea soarelui i rmn desfcute pn la prnz, cnd ncepe ofilirea. n cea de a treia zi floarea se usuc i cade (Pop L. i colab., 1986). Datorit aezrii stigmatului n carena inchis a corolei, nu este n general posibil polenizarea alogam. Autopolenizarea este mult uurat i de faptul c, anterele se matureaz nainte de deschiderea florilor. De aici rezult posibilitatea pe care o au arahidele de a realiza fructe din flori situate la nivelul solului. Totui polenizarea ncruciat poate avea loc foarte rar datorit unor specii de albine (Hera Cr. et al., 1980). La nceput ginoforii au o cretere orientat n sus, iar dup ase zile se orienteaz spre sol, n care ptrund i unde ncep dezvoltarea fructelor. Fructele ncep s creasc cnd ginoforii ajung la o adncime de 27 cm. Pstile cresc n poziie orizontal. n situaia cnd florile se afl la o nlime prea mare pe plante, ginoforii nu pot s ajung la sol i nu are loc formarea fructelor (Pop L. i colab., 1986). Formarea pstilor. n condiiile de cultur a arahidelor din ara noastr, formarea pstilor are loc foarte lent la nceput i accelerat spre sfritul perioadei de vegetaie. Culoarea cojilor de arahide n curs de formare este albglbuie. Pe msur ce se apropie de momentul recoltrii arahidele primesc o culoare specific soiului. La nceputul formrii pstilor, cojile sunt netede. Pe msur ce cresc i se apropie de maturizare, apare la suprafaa lor un desen reticular. Desenul reticular ncepe s se contureze din momentul n care seminele au mrimea unor boabe de mazre i ncepnd de la locul de legtur al pstii cu ginoforul. Apariia
15

desenului reticular se ncheie la vrful pstii. Mrimea boabelor este un caracter de soi, dar la acelai soi se nregistreaz diferene mari n funcie de condiiile pedoclimatice i de tehnologia aplicat (Pran P., 1998). 2.3. Cerinele fa de clim i de sol Temperatura: n perioada de la semnat la rsrire, temperaturile extreme sunt de 15C i 45C, temperatura optim fiind de 30C. n aceast perioad nevoile de cldur sunt n general mai mici. Pentru o rsrire rapid, n 4 -5 zile, are loc numai dac se realizeaz o temperatur de 3234C (Gillier P. i Silvestre P., 1969). n timpul creterii i mbobocirii nevoile de cldur sunt mai mari, temperatura minim fiind de 18C. La temperaturi inferioare valorii de 10C creterea plantelor se oprete, iar la 0,5C plantele mor. Cele mai mari pretenii privind cldura, alunele de pmnt le prezint n perioada nflorirefructificare (temperatura minim fiind de 20C), n perioada de maturare temperatura poate s scad pn la 10 -12C, optim fiind 25C (Pop L. i colab., 1986). Umiditatea: Consumul direct de ap variaz ntre 370-570 mm, iar nevoile de precipitaii sunt cuprinse ntre 450 700 mm, cu o bun repartizare pe parcursul perioadei de vegetaie. Umiditatea solului este foarte important pentru ptrunderea ginoforilor i formarea pstilor. n perioada recoltrii este de dorit ca pmntul s fie reavn, pentru a nu adera la psti (Pran P., 1998). Lumina: Arahidele nu sunt fotoperiodice. Lungimea zilei nu provoac modificri n ceea ce privete parcurgerea fazelor de vegetaie. Pop L. et al. (1986) au constatat c perioadele intermitente de soare sunt benefice pentru nflorire, fecundare i creterea pstilor. Solul: Alunele de pmnt au nevoie de soluri profunde, uoare i fertile. Compoziia textural lutonisipoas i nisipolutoas este foarte important pentru ptrunderea n sol a rdcinilor i a ginoforilor. Solurile acide i alcaline, de asemenea, nu sunt prielnice pentru cultura arahidelor. Valoarea pH- ului trebuie s fie cuprins ntre 6,57,5 (Pop L. i colab., 1986). 2.4. Tehnologia de cultur a alunelor de pmnt Locul n asolament: n condiiile rii noastre este indicat ca arahidele s urmeze n cultur dup pritoare la care s-a asigurat o foarte bun combatere a buruienilor. Bune
16

premergtoare pentru arahide sunt cerealele pioase (grul i orzul). Leguminoasele pentru boabe nu sunt indicate ca plante premergtoare pentru alunele de pmnt, att datorit bolilor i duntorilor comuni ct i ca urmare a faptului c arahidele nu pot valorifica calitatea acestora ca premergtoare. n cazul folosirii ca premergtoare a porumbului, trebuie avut n vedere sensibilitatea mare a arahidelor la aciunea remanent a atrazinului. Pentru a preveni atacul de boli i duntori arahidele nu pot reveni pe aceeai sol dect dup 3-4 ani (Pop L. i colab., 1986). Fertilizarea: Alunele de pmnt prezint un consum relativ moderat de elemente chimice nutritive, mai ales n zonele calde. Azotul este elementul nutritiv necesar n cea mai mare cantitate, care se asigur pe cale simbiotic. Dup azot urmeaz potasiul, calciul, magneziul i fosforul. Potasiul, calciul i magneziul sunt exportate prin tulpini i frunze, fosforul n principal prin boabe i azotul prin psti (62%), tulpini i frunze (Pran P., 1998). ngrmintele chimice cu azot. Azotul simbiotic nu asigur n totalitate necesitile plantelor. ngrmintele chimice cu azot sunt importante mai ales n primele faze de vegetaie. Kornienko M. T., citat de Zamfirescu N. et al. (1958) menioneaz obinerea n regiunea Cherson din U.R.S.S., a unui spor de recolt de 600 kg/ha cu ajutorul dozei de N60. ngrmintele cu azot se aplic nainte de semnat i ncorporarea n sol s se fac prin lucrrile de pregtire a patului germinativ (Pop L. et al., 1986). ngrmintele chimice cu fosfor. Fosforul este absorbit din sol prin sistemul radicular, dar n proporie nsemnat, de 39%, dup Chahal S.R. i Virmani M. S. (1973) prin ginofori i psti, iar majoritatea fosforului absorbit pe aceast ultim cale se gsete n zona fructifer. Experienele efectuate n Senegal de ctre Giller P. i Prevot P. (1960) au artat c diferenele de producie ntre aplicarea localizat i cea prin mprtiere sunt mari la doze mici de ngrmnt i scad pe msur ce dozele cresc. Cnd fosforul se administreaz sub form de ngrminte chimice complexe, aplicarea lui se poate administra i premergtor semnatului, iar ncorporarea n sol se face cu grapa cu discuri. ngrmintele chimice cu potasiu. Arahidele extrag cantiti mari de potasiu din sol. Cu toate acestea, dat fiind aprovizionarea bun a solurilor din ara noastr cu acest element nutritiv, nu n toate zonele aplicarea lui ca ngrmnt este nsoit de sporuri de recolt. Aplicarea ngrmintelor cu potasiu este indicat s se fac premergtor efecturii arturii de baz i s se ncorporeze odat cu aceasta (Pop L. i colab., 1986).
17

Lucrrile solului: Arahidele necesit un sol afnat, care s permit ptrunderea rdcinilor i mai trziu a ginoforilor, curat de buruieni, n special n prima parte a perioadei de vegetaie, cnd plantele cresc ncet i pot fi uor nbuite de buruieni. Artura adnc trebuie fcut toamna i lsat n brazd crud, n cazul terenurilor nisipoase pentru a nu favoriza spulberarea nisipului. Primvara cnd ncep s rsar buruieni, artura se lucreaz cu grapa cu discuri. Ultima lucrare cu grapa cu discuri nu trebuie s depeasc adncimea de 10 cm pentru c la semnat boabele s nu fie introduse prea adnc n sol, ceea ce ar ntrzia rsrirea arahidelor. Cu 12 zile nainte de semnat terenul se lucreaz cu combinatorul. Lucrarea cu combinatorul perfecteaz patul germinstiv necesar unui semnat de calitate (Pran P., 1998). Smna i semnatul: Smna folosit pentru semnat trebuie s aparin unor soiuri superioare, caracterizate prin productivitate ridicat, randament mare de boabe, compoziie chimic favorabil proteinelor sau grsimilor. Materialul semincer trebuie s fie pstrat pn n preajma semnatului sub form de psti. Se va reduce astfel atacul de Plodia interpunctella Hubner (molia fructelor) (Pop L. i colab., 1986). Boabele folosite la semnat trebuie s fie sntoase, mari, cu o puritate i capacitate germinativ ridicat i s fie tratate mpotriva bolilor i duntorilor care pot ataca seminele introduse n sol la semnat. Mrimea boabelor folosite la semnat influeneaz nivelul recoltei. n Argentina se recomand boabele de mrime mijlocie, care reprezint, n general, 7080% din producie (Pietrarelli R. J., 1971). nainte de semnat, seminele se trateaz cu insectofungicide care dimunueaz pierderile la germinare, amelioreaz rsrirea, nlesnete realizarea desimii stabilite i asigur obinerea unor recolte ridicate (Saese H. i Fahey G., 2006). Pentru tratarea seminelor de arahide se folosesc urmtoarele produse: Captan 80 WDG 2 g/kg i Vitavax 1 g/kg. nainte de semnat, semna se trateaz cu biopreparatele Rhizobium, cu deosebire n zonele noi de cultivare a arahidelor (Pop L. i colab., 1986). n condiiile din Romnia, epoca optim de semnat este determinat de realizarea pe adncimea de semnat a unei temperaturi minime de ncolire a seminelor de 12 C i de nclzirea progresiv a vremii. Calendaristic, epoca de semnat corespunde cu u ltimele zile din luna aprilie i primele zile din luna mai. Semnatul mai timpuriu prelungete rsrirea, aceasta fiind neuniform i plantele mucegiesc n sol. Semnatul realizat cu ntrziere conduce

18

ntotdeauna la reducerea numrului de psti ajunse la maturitate, mai ales n cazul soiurilor tardive (Pran P., 1998). Arahidele au capacitatea de a compensa o parte din producie atunci cnd au o densitate mai sczut, printr-o cretere mai viguroas i printr-un numr sporit de psti ajunse la maturitate. Rehm S. i Espig G. (1976) au recomandat desimi de 220440 mii plante la hectar. n India, produciile ridicate s-au obinut la desimi de peste 200 mii plante la hectar (Saini J.S. et al., 1971). n cercetrile efectuate la S.D.E. Tmbureti (Pop L., Chichea I. i Piti S., 1976), produciile au crescut cnd s-au semnat mai multe boabe n cuib. Cantitatea de boabe la semnat variaz ntre 6070 kg/ha, obinut din 100120 kg psti. Distana ntre rnduri fiind de 50 cm i 16-20 cm ntre plante pe rnd, n funcie de vigurozitatea de cretere a soiului cultivat. Adncimea de semnat se realizeaz la 3-5 cm n zonele calde i umede i de 5-7 cm n zonele cu un climat mai rcoros i mai puin umed (Pop L. i colab., 1986). n unele ri din zonele calde, semnatul se efectueaz n teren plan, iar altele pe teren bilonat n prealabil. Semnatul n teren nebilonat se practic n rile din Africa. Semnatul n biloane se practic n rile cu precipitaii multe i pe terenuri mai grele i cu pante de peste 3-5% (Pran P., 1998). Lucrrile de ngrijire Combaterea buruienilor: Plantele de arahide prezint o cretere foarte nceat n primele aproximativ 45 de zile de la rsrire, perioada cnd pot fi uor nbuite de buruieni. De aceea, n aceast perioad trebuie asigurat o combatere eficient a buruienilor. Combaterea buruienilor se poate face prin praile i cu ajutorul erbicidelor. Prima prail se aplic n primele 15 zile de la rsrire. Praila a doua se efectueaz n momentul n care ncepe nflorirea (la 3040 de zile) i urmrete s asigure luminozitatea necesar n acest stadiu vegetativ (Pop L. i colab., 1986). La arahide bilonarea este necesar pentru realizarea unui strat de sol afnat capabil s permit ptrunderea ginoforilor i formarea pstilor. Bilonarea este necesar mai ales dac solul este predispus tasrii i formrii de crust la suprafa. Nu este necesar bilonarea la soiurile trtoare, care aparin subspeciei procumbens. Bilonarea se face la nceputul nfloririi i nainte de a forma primii ginofori. ntrzierea bilonrii poate determina vtmarea ginoforilor i poate lipsi plantele de posibilitatea de a forma psti din primele flori, care au ansele cele mai mari de a ajunge la maturitate (Pran P., 1998).
19

Combaterea chimic a buruienilor, metod folosit pe scar larg n agricultura modern, se folosete i n cultura arahidelor. La pregtirea patului germinativ pot fi ncorporate n sol erbicidele Stomp 330 E 4 l/ha i Dual Gold 960 EC 1-1,5 l/ha. Dup semnat, n timpul perioadei de vegetaie se folosesc erbicidele Basagran forte 2-2,5 l/ha i Fusilade forte 0,8 l/ha pentru buruienile monocotiledonate anuale (Pop L. i colab., 1986). Bolile i mijloacele de combatere a lor: Cercosporioza este boala provocat de Cercospora arachidicola Hori i de Cercospora personata. Plantele bolnave prezint pe frunze pete ntunecate sau negre. Boala se transmite prin rezidurile plantelor bolnave, care rmn n sol, prin plantele spontane i prin inoculri la psti. Sporii ciupercii pot fi transportai pe distane mari de vnt i insecte. Pentru prevenirea atacului de Cercospora se recomad cultivarea de soiuri rezistente, revenirea culturii pe acelai teren numai dup 24 ani, ngroparea rezidurilor plantelor bolnave adnc n sol sau arderea lor (Pop L. i colab., 1986). Botritis cinerea Pers. provoac putregaiul cenuiu. Boala se manifest prin putrezirea bazei tulpinilor i ramurilor, pe care apare ca un puf de culoare cenuieviolacee, alctuit din miceliul i organele de fructificare a ciupercii. Pe psti atacul se manifest c nd ntrzie recoltarea i le imprim acestora un gust amar. Apariia bolii se poate preveni prin rotaie raional, arturi adnci, distrugerea resturilor vegetale bolnave i prin tratamente cu Captan 50 0,3% la apariia primelor simptome de atac (Pop L. i colab., 1986). Ascochyta arachidis War. produce ptarea brun a frunzelor. Boala se manifest prin apariia pe frunze de pete circulare brune, apoi cenuii i delimitate de o dung brun nchis. Atacul se previne prin revenirea arahidelor pe acelai teren dup 3 ani, arturi adnci, ndeprtarea resturilor la recoltare i prin tratarea seminelor cu formalin 0,25% (Pop L. i colab., 1986). Fusarium vasinfectum Atk. produce fuzarioza arahidelor sau vetejirea plantelor. Primele simptome ale bolii apar n perioada nfloririi i constau n aplecarea brusc sau treptat a frunzelor. La suprafaa tulpinii, n zona coletului, apare pe vreme umed un mucegai alb sau roz format din miceliul i fructificaiile ciupercii. Se previne i se combate prin: folosirea la semnat de smn sntoas, rotaie care s asigure revenirea arahidelor pe acelai teren numai dup 3 4 ani i soiuri rezistente i tratamente la sol (Pop L. i colab., 1986).

20

Sclerotium omnivorum V.d. Wolk produce putrezirea rdcinilor i tulpinilor.

Atacul se manifest pe tulpini, rdcini i fructe, printr- un mucegai albicios, ce reprezint miceliul ciupercii, n care apar mai trziu scleroii sub forma unor corpuoare negre, mici, de 2 -3 mm diametru i tari. Se previne i se combate prin: o rotaie raional a culturilor, agrotehnic superioar, eliminarea plantelor bolnave i prin tratarea seminelor cu Captan 80 n doz de 250 g la 100 kg semine (Pop L. i colab., 1986). Fusarium martii Bark. provoac putrezirea rdcinilor. Acesta atac plantele n toate fazele de dezvoltare, efectnd mai mult sistemul radicular. Rdcinile plantelor atacate se acoper cu un puf albrocat format din miceliul ciupercii i n final putrezesc. Se previne i se combate prin: o rotaie raional a culturilor, agrotehnic superioar, eliminarea plantelor bolnave i prin tratarea cu fungicide (Pop L. i colab., 1986). Duntorii i mijloacele de combatere a lor: Melolontha hypocastanea Fabr. (viermii albi) atac arahidele prin roadere total sau parial a rdcinilor sau tulpinilor la civa centrimetri sub nivelul solului. Atacul ncepe odat cu nclzirea mai accentuat a timpului i respectiv a solului. n condiiile nisipurilor din sudul Olteniei, atacul viermilor albi se manifest intens pe vrful dunelor. Viermii albi se pot combate cu insecticide la sol pe toat suprafaa cultivat sau numai localizat n zonele cunoscute ca foarte infestate (Pop L. et al., 1986). Plodia interpunctella Hubner. sau molia fructelor se ntlnete n spaiile de depozitare a arahidelor. Are 2-3 generaii pe an. Fluturele i depune ponta pe boabe. Cnd acestea sunt decojite, atacul este foarte mult nlesnit, n schimb cnd recolta se gsete depozitat sub form de psti sunt atacate numai pstile care prezint crpturi ce ofer posibilitatea fluturilor s i depun oule pe boabe. Se combate prin msurile preventive ce privesc produsele agricole depozitate (Pop L. i colab., 1986). Nematozii provoac pagube mari culturilor de arahide n numeroase ri cultivatoare. n S.U.A. se apreciaz c 80 % din suprafaa cultivat cu arahide este infestat cu nematozi (Wells C.J, 1972). Careydon fuscus Goeze. ( sin. gonagra) este un coleopter care se gsete n cmp i se aduce n locurile de depozitare odat cu recolta, produce pagube mari n Africa Occidental la arahidele nedecortificate. Larvele tinere ptrund n psti i guresc boabele. Larvele ajunse la
21

maturitate se metamorfozeaz n psti sau ntre psti nvecinate. Pentru prevenirea atacului este necesar dezinfectarea depozitelor (Pop L. i colab., 1986). n zonele nisipoase din sudul Olteniei, n funcie de regimul precipitaiilor din cursul verii, sunt necesare 8 udri a cte 300-350 m3/ ha. Pe solurile cernoziomice, numrul udrilor se reduce pn la 5, ns norma de udare va fi de 400-500 m3/ ha (Pran P., 1998). Recoltarea, condiionarea i pstrarea recoltei Epoca optim de recoltare a arahidelor este nainte de venirea brumelor, cnd temperaturile medii zilnice ncep s scad sub 12C. Aceasta corespunde cu ultima decad a lunii septembrie. Recoltarea se face prin smulgerea tufelor i culegerea pstilor de p e vreji. Se vor reine numai pstile ajunse la maturitate deplin. Pe solurile uoare i reavene, la smulgerea manual nu rmn, n mod obinuit, psti mature n sol. Cnd pmntul este uscat i la smulgere se rup tulpini i rmn psti n sol se recomand folosirea dislocatorului premergtor smulgerii plantelor (Pop L. i colab., 1986). La recoltare, pstile au un coninut foarte mare de ap (40-50%) i din acest motiv ele mucegiesc uor. Pentru a preveni acest lucru, este necesar uscarea ptilor la soare n strat subire i usctorii. O pstrare bun se poate asigura dac n momentul depozitrii pstile au un coninut de ap dub 8-10% (Pran P., 1998).

22

CAPITOLUL III AGENII MUTAGENI UTLIZAI N CADRUL STUDIULUI 3.1. Sulfatul de dimetil DMS Sulfatul de dimetil (sulfat neutru de metil figura 3.1) este un lichid incolor sau uor glbui, cu uor miros de ceap. Substana este toxic, corosiv i mutagen (Vyskocil A., 1999; Rippey J. C. R. i Stallwood M. I., 2005; Pohanish R. P., 2008). Dimetil sulfatul este un compus chimic cu formula (CH3O)2SO2 i cu greutatea molecular de 126,14 g/mol (Brown Terry A., 1998; Pohanish R. P., 2008). Cercetrile au artat c, sulfatul de dimetil a determinat inhibarea ADN-ului, deteriorarea celulelor somatice umane i schimburile dintre cromatidele surori n celulele fibroblaste umane (Pohanish R. P., 2008). Nu are un miros puternic sau iritaii imediate pentru a putea depista concentraia letal din aer. Expunerea pe termen lung la acest reactiv poate determina afeciuni ale rinichilor, ficatului i sistemului nervos la om, n timp ce, la animale poate produce cancerul (Pohanish R. P., 2008). Acest agent mutagen este solubil n ap, eter, alcool, aceton, hidrocarburi aromatice i puin solubil n hidrocarburile alifatice (National Toxicology Program, 2011).

Figura 3.1. Sulfat de dimetil - formula stuctural (http://en.wikipedia.org/wiki/Dimethyl_sulfate)

Utilizat n sinteze organice, este cunoscut ca reactiv de metilare a fenolilor, aminelor i tiolilor (IARC, 1999; National Toxicology Program, 2011). De asemenea acest reactiv este utilizat ca solvent pentru separarea uleiurilor minerale, pentru analiza fluidelor auto (National Toxicology Program, 2011).

23

Sulfatul de dimetil poate afecta clivajul specific de baz, la guanina din ADN prin ruperea inelelor de imidazol prezente n guanin (Cartwright I. L i Kelly S. E., 1991; Rippey J. C. R. i Stallwood M. I., 2005). Unii cercettori consider aceast substan a fi o posibil arm chimic (National Toxicology Program, 2011). 3.2. Azida de sodiu SA Azida de sodiu (NaN3) (figura 3.2.) se obine prin reacia protoxidului de azot cu amidura sodic sau din hidrazin, nitrit de etil i sod caustic. Se prezint sub form de paiete cristaline, incolore. Este solubil n ap, puin alterabil la umiditate, dar alterabil n contact cu dioxidul de carbon din aer. Este sensibil la oc, ca fulminantul de mercur, ea este mai puin sensibil dect acesta la cldur. Utilizat la prepararea explozivilor de amorsare pentru detonatoare. Poate exista pericolul de explozie sau formare de gaz toxic cu urmtoarele substane: acizi, metale grele, sruri de metale, brom, dimetilsulfat, cupru, diclormetan, disulfur de carbon i acid sulfuric. Este iritant pentru ochi, piele, mucoase i tractusul respirator. Pregtirea soluiei de azid de sodiu trebuie realizat cu echipament de protecie pentru a preveni inhalarea. Formula chimic: NaN3

Figura 3.2.- Azid de sodiu - formula structural (http://en.wikipedia.org/wiki/File:Sodium_azide.svg)

Azida de sodiu este considerat a fi un agent mutagen chimic foarte puternic n cultura plantelor. Plantele mutante rezultate n urma tratamentulului cu azid de sodiu sunt capabile s supravieuiasc n condiii de mediu diferite, au un randament mai bun i sunt tolerante la stres n comparaie cu plantele normale (Fahad Al. Q i Salim K., 2009).

24

Efectul mutagen reiese din producerea unui metabolit anorganic din azida de sodiu. Acest metabolit intr n nucleu, interacioneaz cu ADN- ul i creeaz mutaii punctiforme n genomul plantelor (Owais W.M. i Kleinhofs A., 1988). 3.3. Etil metansulfonat - EMS Etil metansulfonatul (figura 3.3.) determin introducerea n structura nucleotidelor a unor grupri alchil: la nivelul atomului din poziia 7 din structura guanidinei (cel mai adesea), n poziia 3 a adeninei, foarte rar n poziia 1 a adeninei. De asemenea, prezena gruprii alkil la nivelul guanidinei, slbete legtura - glucozidic i determin eliminarea guaninei (depurinare), cu formarea unor bree n structura ADN. Bazele azotate pirimidinice sunt mai rezistente la aciunea agenilor alkilani, dei etil metansulfonatul poate determina uneori alchilarea citozinei. Alkilarea este nsoit de fenomene de denaturare a ADN -ului sau de formarea unor legturi ncruciate sau transversale ntre nucleotide, ceea ce mpiedic mperecherea normal. Etil metansulfonatul prezint o eficien crescut n modificarea materialului genetic, att al celulelor procariote ct i al celor eucariote. Etil metansulfonatul este un lichid incolor. Este iritant pentru ochi, piele, mucoase i tractusul respirator. Pregtirea soluiei de etil metansulfonat trebuie realizat cu echipament de protecie pentru a preveni inhalarea. Formula chimic: CH3SO3C2H5

Figura 2.3 Etil metansulfonat- formula structural (http://en.wikipedia.org/wiki/File:Ethyl-mesylate-2D-skeletal.svg)

Masa molar: 124,2 g/mol.

25

CAPITOLUL IV

PROIECTAREA PLANULUI EXPERIMENTAL PENTRU REALIZAREA TEMEI ALESE

4.1. Obiectivele tezei de doctorat n prezent, se cunosc un numr foarte mare de substane chimice cu efect mutagen. Modificrile produse de ele sunt asemntoare cu cele ale mutaiilor spontane. Nici una nu posed specificitate pentru inducerea unui anumit tip de mutaie. Aciunea acestor substane provoac n organismul n care au ptruns modificri biochimice i fiziologice. La nivelul cromozomilor se produc ruperi cromozomice i ca urmare reconstrucii de diferite tipuri, corelate cu modificri fenotipice. La nivelul genei se produc mutaii genice. ntreaga aciune a substanelor depinde de foarte muli factori. Scopul principal al cercetrilor este urmrirea efectelor tratamentelor cu substane chimice att n condiii de cmp ct i de laborator, n ideea surprinderii diferenelor de sensibilitate a speciei la aciunea substanelor mutagene, efecte surprinse prin aplicarea unor metode fiziologice, biochimice i citogenetice. n selecia i ameliorarea plantelor cu importan economic, un prim pas l constituie obinerea unui material biologic foarte divers, inducerea unei variabiliti individuale de larg amplitudine. n practic s-a dovedit c tendina spre variabilitate, manifestat la orice specie, crete n urma interveniei cu diveri factori fizici, chimici sau biologici, cunoscui sub denumirea de factori mutageni. Prin programul de ameliorare se va urmri obinerea unor linii care s aib nsuiri valoroase privind productivitatea, calitatea produciei, precocitate, rezistena la temperaturi sczute, secete, boli i duntori i pretabile pentru mecanizare. Capacitatea de producie este controlat de mai multe gene i este dat de numrul de psti ajunse la maturitate n momentul recoltrii, de mrimea acestora i de procentul de boabe din greutatea pstilor.

26

Calitatea recoltei se urmrete sub aspectul compoziiei chimice, i anume a procentului de grsimi, cnd se urmrete realizarea de soiuri pentru extragerea uleiului i a procentului de proteine ridicat i de grsimi mai moderat (sub 47%) cnd scopul ameliorrii este obinerea de soiuri pentru consumul sub form prjit. De mare importan este i prezena cantitativ a aminoacizilor eseniali i valori sczute ale indicelui sodic i al aciditii. n cazul arahidelor cultivate pentru consum sub form prjit, calitatea intereseaz i sub aspectul procentului de psti cu un anumit numr de boabe i culoarea boabelor, n privina creia exist preferine ridicate n anumite ri i pentru anumite categorii de consumatori. Precocitatea constituie un obiectiv de ameliorare important, att n rile cu climat n care alterneaz perioadele ploioase cu secetoase, ct mai ales n rile situate la limita nordic a arealului de cultivare a arahidelor. Precocitatea se apreciaz dup numrul de zile de la rsrire la nflorire, procentul de psti ajunse la maturitate din totalul pstilor i dac boabele din pstaie prezint sau nu repaus germinativ ( soiurile timpurii nu au repaus germinativ i deci boabele din psti pot s ncoleasc n sol nainte de recoltare). Rezistena tinerelor plante la temperaturi sczute i la oscilaii brute de temperatur constituie un obiectiv de ameliorare pentru rile situate la limita nordic a arealului de cultivare a arahidelor, cum este i ara noastr. Un obiectiv al ameliorrii pentru toate zonele de cultur a arahidelor l constituie realizarea de soiuri rezistente la secet, cu deosebire n perioada nfloririi i formrii fructelor. n vederea recoltrii mecanizate este necesar ajungerea la maturitate a unui numr ct mai mare de psti. Cercetrile i observaiile realizate au urmrit atingerea urmtoarelor obiective: evaluarea cadrului natural, a condiiilor pedoclimatice, n vederea aprecierii gradului de inducerea unor mutaii cu ajutorul substanelor chimice n vederea creterii variabilitii studiul efectului unor substane chimice mutagene asupra particularitilor morfocomportarea unor mutante n ceea ce privete identificarea de forme biologice valoroase,

favorabilitate pentru cultura arahidelor;

speciei Arachis hypogaea L.;

fiziologice la specia Arachis hypogaea L.; n scopul productivitii;

27

4.2. Materialul biologic folosit n calitate de material biologic pentru cercetri au fost folosite semine de Arachis hypogaea L., soiurile Tmbureti, Jelud, Braziliene negre i linia L 9184 de la Universitatea din Craiova din cadrul Facultii de Agricultur. Soiul Tmbureti a fost obinut prin selecie individual din populaia Tmbureti. Face parte din subspecia fastigiata, subtipul Natal Spaniol. Plantele au nlimea cuprins ntre 30-45 cm, n medie 35 cm i un numr de 7 tulpini. Portul plantei este erect, frunzele sunt de culoare verde, compuse din dou perechi de foliole lungi de pn la 8,6 cm i late de pn la 4,3 cm. Numrul de flori la o plant variaz ntre 250-350 i sunt de culoare galben-portocalie. Ginoforii au o lungime de pn la 21 cm. La recoltare o plant prezint ntre 16-35 de psti, iar greutatea medie a unei psti este de 1,43 g. Pstile au o lungime variabil, cuprins ntre 0,9 i 4,7 cm i o lime de 0,7 i 1,9 cm, o culoare brun-deschis i sunt de form cilindric. Numrul de boabe n psti variaz de la 1 la 3, majoritatea pstilor avnd 2 boabe. Ct privete nsuirile biologice, soiul Tmbureti este semitimpuriu, avnd o perioad de vegetaie de 130-140 de zile. Primele flori apar, n funcie de data semnatului i de condiiile climatice din perioada dup semnat, ntre 5-10 iunie. nflorirea continu apoi n tot cursul verii pn spre sfritul lunii august. Plantele sunt rezistente la boli i pstile nu ncolesc n sol n perioada premergtoare recoltrii. Boabele au un coninut n grsimi de pn la 51,1% i 28% proteine (figura 4.1).

Figura 4.1Soiul Tmbureti

Soiul Jelud a fost obinut la Institutul de cercetri pentru cultura plantelor uleioase din U.R.S.S. i aparine subspeciei fastigiata. Plantele au talie mic i portul erect. Aparatul foliar este redus, numrul de flori la o plant variaz ntre 160-210 i sunt de culoare galbenportocalie. Ginoforii sunt scuri, iar la recoltare pe o plant se gsete un numr de 10 -30 psti,
28

din care mature circa 85%. Pstile au o culoare brun-deschis spre galben i form cilindric. Majoritatea pstilor au dou boabe i sunt puternic reticulate, iar la recoltare acestea rein o cantitate mare de pmnt.Bo abele au form cilindric i o culoare brun ctre roz ( figura 4.2.).

Figura 4.2 - Soiul Jelud

Soiul Jelud este timpuriu avnd o perioad de vegetaie de 120-135 de zile. Primele flori apar la cca. 20 de zile de la rsrire n ultimele zile ale lunii mai -nceputul lunii iunie. nflorirea continu pn la sfritul lunii iulie. Partea supraterestr a plantelor acoper mai slab solul, iar ciorile provoac pagube mari prin scoaterea pstilor din pmnt i consumarea boabelor n perioada imediat premergtoare recoltatului. Dac se ntrzie cu recoltarea i timpul este cald, iar solul este umed, unele psti putrezesc i un procent ridicat de boabe din psti ncolesc, de unde reiese lipsa unui repaus germinativ al seminelor. Boabele au cca. 50% grsimi i cca. 25% proteine. Soiul Braziliene negre prezint plante cu talie nalt, un numr mai mare de tulpini i port erect. Plantele asigur o foarte bun acoperire a solului. La recoltare numrul de psti n medie este de 24-28, acestea au o form cilindric, foarte fin reticulate i cu un rostru uor ncovoiat. Numrul de boabe la o pstaie variaz ntre 1 i 4, majoritatea 3 boabe, iar MMB-ul n medie 400g (figura 4.3).

Figura 4.3 Soiul Braziliene negre

29

Boabele sunt negre, cu o form apropiat de cilindric, cu unele fee turtite, determinat de poziia pe care o ocup n psti. Soiul braziliene negre este timpuriu, cu o perioad de vegetaie de 130-140 zile. Plantele au o cretere uniform i o rezisten mare la boli. Vegetaia plantelor este ntrerupt de coborrea temperaturii medii zilnice sub 12C, care are loc la nceputul lunii octombrie. Boabele au un coninut de grsimi ntre 47-51 % i de proteine ntre 27-28%.

4.3. Metodele de cercetare

4.3.1. Metoda de efectuare a tratamentelor la semine i aezarea experienei n cmp Pentru realizarea obiectivelor de cercetare propuse s-a stabilit un program de lucru necesar parcurgerii tuturor etapelor ce s-au desfurat n cmp i n laborator. n urma documentrii, am constatat c literatura de specialitate strin este destul de bogat n ceea ce privete cercetrile privind sistematica, tehnologia de cultivare i compoziia chimic a acestei plante. n Romnia, cercetrile referitoare la ameliorarea speciei Arachis hypogaea L., sunt destul de puine. Pentru a testa rezistena formelor biologice luate n studiu, i de asemenea pentru a provoca o variabilitate ct mai mare n cadrul acestora, seminele au fost tratate cu cele trei substane chimice mutagene. Etilmetansulfonatul i sulfatul de dimetil au fost n doze de 0,2%, 0,4%, 0,6% i 0,8%, iar azida de sodiu a fost n doze de 0,02%, 0,04%, 0,06% i 0,08%, fiecare concentraie avnd ca timp de aciune de ase ore. Dup efectuarea tratamentelor cu substane chimice mutagene seminele au fost uscate, apoi semnate n cmpul experimental al disciplinei de Ameliorarea plantelor, din cadrul fermei Ezreni, n blocuri randomizate cu trei repetiii (figura 4.4).

30

Figura 4.4. Aspecte din cmpul experimetal Ferma Ezreni, 2012

Semnatul s-a efectuat manual, primvara cnd pe adncimea de semnat se nregistreaz 12C i vremea este spre nclzire. Combaterea buruienilor s-a realizat manual, prin praile i pliviri. Nu s-au folosit erbicide sau substane chimice de sintez pentru combaterea bolilor sau duntorilor. n cadrul experienei, n generaia M1 i M2, s-au fcut observaii privind influena agenilor mutageni chimici asupra urmtoarelor caractere: gradul de rsrire al plantelor n cmp gradul de supravieuire al plantelor n cmp nlimea plantelor numrul de ramuri principale pe plant numrul de boabe pe plant numrul de psti pe plant greutatea boabelor pe plant masa a o mie de boabe

31

4.3.2. Metode statistice de prelucrare a datelor Datele obinute n urma observaiilor i determinrilor efectuate au fost prelucrate statistic conform modelelor consacrate, menionate n literatura de specialitate (Snedecor, 1968, Sulescu N. A., 1967, Ardelean, 1994, Onisie, 1992, Jitreanu, G., 1994, Leonte C., 1997). Semnificaia diferenelor dintre variantele tratate i martor se vor determinate prin metoda diferenelor limit ( DL 5%, 1% i 0,1%). Caracterele cantitative se vor interpreta statistic cu ajutorul analizei varianei i al coeficientului de variabilitate (s%) ( Sulescu N. A., 1967).

4.3.3. Metode citogenetice Investigaiile citogenetice vor fi realizate pe meristeme radiculare obinute prin germinarea seminelor provenite de la specia Arachis hypogaea L., soiurile Tmbureti, Jelud, Braziliene negre i linia L 9184. Pentru colorarea materialului nuclear, respectiv a cromozomilor, se va folosi metoda rapid Feulgen, elaborat n anul 1924 de F. Feulgen i H. Rossenbeck i modificat de J. A. Tomasi n 1936 (Tudose, 1996). Metoda se bazeaz pe faptul c n celulele aflate n diviziune numai cromatina cromozomilor se coloreaz selectiv n rou-violet cu fuxin bazic, n timp ce ARN-ul din nucleoli i din citoplasm, precum i toate celelalte elemente celulare nu se coloreaz. 4.3.3.1. Efectul substanelor chimice mutagene asupra facultii i energiei germinative a seminelor Germinaia reprezint procesul fiziologic de trecere a seminelor din starea de repaus, de via latent, n stare de viaa activ i se pune n eviden prin transformri biochimice intense, prin creterea embrionului. Acest proces nu presupune acumularea de substane organice din mediul extern, ci o nou repartiie a celor de rezerv depozitate n smn n timpul formrii ei. Facultatea germinativ msoar capacitatea seminelor de a germina, exprimat prin procentul numeric de semine germinate normal n condiii optime i ntr-un timp stabilit pentru fiecare specie n parte (Mogrzan Aglaia i colab., 2004).
32

Energia germinativ reprezint testul prin care se determin viteza de germinare a seminelor i se exprim prin procentul de semine germinate ntr-o perioad egal cu 1/3 din durata stabilit pentru determinarea facultii germinative (Starodub, 2008). Numrul de zile stabilit pentru determinarea energiei germinative a fost de 3 zile, iar cel pentru stabilirea facultii germinative a fost de 9 zile. Dup 3 zile se vor numra i vor fi eliminate din fiecare prob seminele care vor germina i se va calcula valoarea procentual a energiei germinative (figura 4.5.). Media seminelor germinate normal, aflat la prima numrare, reprezint energia germinativ, care se exprim n procente deoarece corespunde la 100 de semine.

Figura 4.5. Semine de arahide germinate

Se vor ndeprta la prima numrare seminele germinate normal ct i cele mucegite. Restul seminelor se vor lsa n continuare la germinat pn la urmtoarea numrtoare. Dup 9 zile se vor numra restul seminelor, iar la fiecare prob se va aduga numrul de semine obinut la prima citire. La a doua numrtoare, media aritmetic a numrului total de semine germinate normal reprezint facultatea germinativ (Boldor i colab., 1983). 4.3.3.2. Efectul substanelor chimice mutagene asupra ritmului de cretere n lungime a rdcinielor i tulpinielor Ritmul de cretere a rdcinielor i tulpinielor plantelor provenite din boabe tratate cu ageni mutageni fizici, chimici sau biologici constituie un criteriu de apreciere a sensibilitii materialului biologic, relativ expeditiv, deoarece poate fi urmrit nu numai n cmp ci i n laborator sau case de vegetaie (rdea Gh., 1984).

33

Pentru determinarea ritmului de crete n lungime a rdcinielor i tulpinielor s e vor realiza msurtori la intervale constante de timp. Intensitatea creterii se va exprima prin sporul parametrilor analizai, raportai la unitatea de timp (o zi, 3 zile), n funcie de periodicitatea msurtorilor efectuate. n cazul nostru pentru a pune n eviden modificrile aprute n procesul de cretere al rdcinielor precum i influena substanelor folosite asupra intensitii procesului de cretere se vor efectua msurtori liniare la un interval de 3, 6 i 9 zile (figura 4.6).

Figura 4.6. - Msurarea rdcinielor de arahide

4.3.3.3. Identificarea i frecvena aberaiilor cromozomice n mitoz. Pentru identificarea aberaiilor cromozomice i a frecvenelor acestora se va utiliza metoda clasic care presupune urmtoarele etape (rdea i Leonte, 2003): fixarea; hidroliza; colorarea; efectuarea preparatelor microscopice; examinarea preparatelor la microscop.

Fixarea Cnd rdciniele vor ajunge la lungimea de 1-1,5 cm acesteavor fi introduse n fixatorul Carnoy I (soluie de alcool etilic absolut: acid acetic glacial n proporie de 3:1) la temperatura camerei, timp de 24 de ore (figura 4.7.).

34

Fixarea are rolul de a omor celulele n starea n care se afl n acel moment, proces care are loc foarte repede, aproape instantaneu. Prin fixare trebuie s se pstreze structura fin a tuturor organitelor celulare. n afar de aceasta, prin fixare biocoloizii celulei se coaguleaz i ca urmare, constituenii celulari se pot colora cu diferii colorani. Pn n momentul prelucrrii rdcinielor n vederea colorrii, acestea vor fi pstrate n frigider, n soluie de alcool etilic 70%.

Figura 4.7. Fixarea rdcinielor recoltate la Arachis hypogaea L.

Hidroliza Are drept scop macerarea esuturilor prin dizolvarea parial a substanelor pectice dintre celule, prin care se uureaz procesul de colorare i apoi de etalare a celulelor ntre lam i lamel. Rdciniele fixate vor fi splate cu ap distilat, apoi introduse n soluie de HCl 1 N i lsate timp de 14 minute la etuv la temperatura de 60C (figura 4.8.).

Figura 4.8. Hidroliza rdcinielor de arahide

35

Colorarea materialului biologic Se va efectua prin meninerea rdcinielor n soluie de carbol-fuxin modificat 10% (Carr i Walker, 1961), la frigider, pn n momentul n care vrful acestora devine mai intens colorat (circa 24 de ore). Zona apexului radicular se va colora mai repede i mai intens ntruct aici majoritatea celulelor se afl n diviziune, n timp ce restul rdciniei, unde frecvena diviziunilor este sczut (celulele sunt mari i alungite) rmne vizibil necolorat. Acest colorant determin colorarea nucleelor i cromosomilor n rou-violaceu, citoplasma fiind roz-pal. Principiul acestei metode de colorare const n reacia grupelor aldehidice ale ADN eliberate prin hidroliza HCl 50% cu fuxina bazic din colorantul Carr (figura 4.9.).

Figura 4.9 Colorarea rdcinielor de arahide

Efectuarea preparatelor microscopice-metoda squash Pe o lam de microscop curat, uscat i degresat, ntr-o pictur de colorant Carr cu ajutorul unei pensete se pun rdciniele unui bob de arahid. Cu ajutorul unui ac spatulat sau a unei lame de brbierit se vor tia 1-2 mm din vrful colorat al rdcinielor (ale unui singur bob) peste care se pune o lamel curat i degresat. Cu ajutorul unei hrtii de filtru se fixeaz lamela pe lam astfel nct s se absoarb excesul de colorant Carr i n acelai timp s se evite glisarea lamelei pe lam. Cu ajutorul unui b de chibrit se lovete lamela (n zona unde se afl rdcinia) la nceput mai slab, apoi mai puternic, pentru a se asigura o etalare perfect a celulelor i cromozomilor metafazici.

36

Dup etalare, ntre lam i lamel, trebuie s se observe cu ochiul liber un strat foarte fin, abia perceptibil, de material colorat n rou-violet. i aceast operaiune trebuie efectuat cu mare grij pentru a se evita glisarea lamelei pe lam. De la locul iniial, fapt ce duce la rostogolirea celulelor i compromiterea parial sau total a preparatului.

Examinarea preparatelor la microscop Observarea preparatelor la microscop se va efectua n lumin puternic, la nceput cu obiectivul 10x, cu ajutorul cruia se examineaz preparatul n mare, iar citirea preparatului se va face la obiectivul 40x. Datele obinute vor ajuta la calcularea indicelui mitotic i a frecvenei tipurilor de celule aflate n diviziune mitotic.

Efectuarea fotografiilor. Fotografiile se vor realiza cu ajutorul aparatului digital Cannon, adaptat microscopului optic Hund Wetzlar, aflat n dotarea laboratului L.E.C.O.M. la obiectivul de 100x cu imersie. Se vor realiza fotografii celulelor aflate n interfaz, profaz, metafaz, anafaz i diferitelor tipuri de aberaii cromosomiale ntlnite. n urma analizei fazelor mitozei se va determina indicele mitotic. Acesta reprezint procentul de celule aflate n diviziune, fa de numrul total de celule analizate (rdea i Leonte, 2003). Indicele mitotic se va calcula utiliznd urmtoarea formul: Im% = Im = indicele mitotic; Nm = numrul de celule aflate n diviziune; Nt = numrul total de celule analizate. , unde

4.3.4. Metode fiziologice 4.3.4.1. Determinarea coninutului de pigmeni asimilatori din frunze pe cale spectrofotometric Pentru experimentare se va utiliza material vegetal recoltat n fenofaza de cretere a frunzelor, nflorire i coacerea boabelor.
37

Se cntresc 0,2-1g material proaspt i se introduc ntr-un mojar. Se adaug nisip de cuar i un vrf de cuit (amestec n pri egale) de CaCO3 i MgCO3. Carbonatul de calciu este folosit n vederea neutralizrii sucului celular vacuolar rezultat n urma distrugerii celulelor i care, prin aciditatea sa, fixeaz Mg din moleculele de clorofil, transformndu-le n feofitine (Boldor i colab., 1983). Materialul, n care se adaug 2-3 ml aceton 85%, se tritureaz bine timp de cteva minute. Cu ajutorul unei hrtii pH se controleaz reacia extractului, care nu trebuie s fie acid. Dup tritrurarea complet a esutului vegetal asimilator, acest omogenat se filtreaz printr-o plnie cu rondele de hrtie de filtru Watmann. Omogenatul se spal de mai multe ori pn la completa decolorare a esutului vegetal (1g-10ml aceton). Se adaug apoi ali 4-5 ml aceton 85%, iar coninutul se filtreaz n balon cotat de 25 ml. Se aduce la semn cu aceton. Extractul astfel obinut se introduce n cuva aparatului, iar ca martor se folosete numai soluie de aceton 85% (Jitreanu Carmen i colab.; 2011) (figura 4.10).

Figura 4.10 - Extragerea pigmenilor clorofilieni din frunzele de Arachis hypogaea L.

38

Mai nti se face o determinare pentru soluia martor (numai cu reactivi) i apoi pentru cea de clorofil, cte dou citiri, iar media va reprezenta valoarea pentru clorofil/carotenoizi. Coninutul de pigmeni foliari va fi apreciat pe baza absorbiei luminii, determinat prin metoda spectrofotometric, asistat de calculator. Cunoscnd gradul de absorbie la diferite lungimi de und, se va stabili tipul pigmentului i cantitatea acestuia. Astfel, clorofila a 663 absoarbe lumina n = 663 nm, clorofila b 646 n = 646 nm, iar pigmenii carotenoizi absorb lumina n = 470 (Jitreanu Carmen, 2006). Pentru determinarea cantitii de clorofila a, clorofila b i carotenoizi din frunzele de arahide s-au utilizat formulele de calcul propuse de ctre Lichtenthaler i Welburn n anul 1983 (Lichtenthaler i Wellburn, 1983): Clorofila a (g/ml) = 12,21 (A663) 2,81 (A646) Clorofila b (g/ml) = 20,13 (A646) 5,03 (A663) Carotenoizi (g/ml) = (1000A470 3,27 [clorofila a] 104 [clorofila b]) / 227 Se vor determina n acest fel coninutul de pigmeni asimilatori i carotenoizi, raportul dintre clorofila a i clorofia b i raportul dintre pigmenii clorofilieni i cei carotenoizi n dinamica dezvoltrii ontogenetice, n funcie de fenofaza plantelor. 4.3.4.2. Efectul indus de tratamentul cu substane chimice mutagene asupra intensitii fotosintezei Sistemul LC pro+ asigura un control complet asupra mediului din interiorul frunzei. Controlul automat al parametrilor se va realiza n orice condiii de ambient respectiv: controlul CO2, controlul H2O, controlul temperaturii respectiv controlul radiaiei.

Figura 4.11 - Determinarea intensitii fotosintezei cu aparatul LC pro+

39

Pentru determinarea intensitii fotosintezei s-au realizat cte 3 determinri pe plant n fenofaza de cretere a frunzelor, nflorire i coacerea boabelor, rezultatele obinute reprezentnd media aritmetic a citirilor efectuate (figura 4.11). 4.3.4.3. Determinarea intensitii transpiraiei Plantele elimin prin transpiraie cantiti considerabile de ap. n condiii normale aceasta ajut la desfurarea optim a proceselor fiziologice. n cazul apariiei unui deficit de ap n substrat, dei intervin mecanisme fiziologice de diminuare a transpiraiei, plantele prezint simptome de suferin. De aceea, avnd n vedere efectele favorabile ale acestui proces n viaa plantelor, transpiraia a fost considerat de K. A. Timiriazev ca un ru necesar (Boldor, 1991). Transpiraia propriu-zis se raporteaz fie la suprafa, fie la masa (proaspt sau uscat) materialului vegetal. n funcie de suprafa se exprim n grame ap/dm2/h, iar n funcie de mas n mg ap/g/h. Pentru determinarea intensitii transpiraiei se va folosi metoda indirect prin msurarea scderii masei materialului vegetal. Procedeul cntririlor rapide (procedeul de moment a lui L. A. Ivanov) (Boldor i colab., 1983) const n cntrirea frunzelor detaate folosind balana de torsiune. Pierderile din masa vegetal, ca urmare a transpiraiei, se msoar prin cntrirea iniial a materialului vegetal i recntrirea lui dup intervale scurte de timp (1-2, maximum 3 minute), considerndu-se c n acest timp intensitatea transpiraiei nu este denaturat prea mult prin detaarea frunzei. Pentru calcularea intensitii transpiraiei voi folosi urmtoarea formul:
(mi m f ) 60 P T

n care: mi masa iniial a frunzei (n grame); mf - masa final (dup 1, 2 i 3 minute) a frunzei (n grame); 60 = factor de raportare a intensitii transpiraiei la unitatea de timp (o or); P = parametrul frunzei fa de care se face raportarea intensitii transpiraiei (masa ei iniial sau suprafaa ei foliar n dm2);
40

T = durata determinrii Pentru fiecare variant se va efectua cte 3 cntriri (C1; C2 i C3) pe baza crora am realizat o medie. Acest lucru ne-a permis i stabilirea ritmului de deshidratare a frunzelor. Prima cntrire (C0) se va echivala cu 100% iar celelalte cntriri ne furnizeaz valorile de deshidratare a esuturilor, conform relaiei:
100 C1 C0 100 C 2 C0 100 C 3 C0

X1 =

X2 =

X3 =

41

CONCLUZII n selecia i ameliorarea plantelor cu importan economic, un prim pas l constituie obinerea unui material biologic foarte divers, inducerea unei variabiliti individuale de mare amplitudine. Practica a demonstrat c tendina spre variabilitate, manifestat la orice specie, crete n urma interveniei cu diveri factori fizici, chimici sau biologici, cunoscui sub numele de factori mutageni. Studiul mutagenezei la specia Arachis hypogaea L. reprezint un ansamblu de lucrri de cercetare, care include formarea unei baze teoretice ample, prin informaii privind: cadrul natural n care este amplasat experiena, tehnologia de cultivare i biologia speciei, ct i un volum crescut de metode practice pentru realizarea etapelor din protocolul de lucru. La final se vor sintetiza rezultatele i se vor interpreta n urma calculului statisc. Prin acest studiu ne-am propus investigarea unor particulariti anatomice i morfologice, deoarece considerm c fenotipizarea unor trsturi morfologice ale suprafeelor foliare, a boabelor, genic determinate, n urma tratamentelor cu substane chimice mutagene, poate reprezenta un criteriu suplimentar pentru selecie.

42

BIBLIOGRAFIE

1. Ardelean M., 1994 - Ameliorarea plantelor horticole- curs. Tipo. Agronomia, Cluj Napoca. 2. Blaga Gh., Filipov F., 2005 Pedologie. Ed. AcademicPres, Cluj-Napoca. 3. Boldor O., Raianu O., Trifu M., 1983 Fiziologia plantelor lucrri practice, Ed. Did. i Pedag., Bucureti:74 -77. 4. Boldor O., Raianu O., Trifu M., 1991 - Fiziologia plantelor, Ed. Did. i Pedag., Bucureti: 16 18. 5. Brown Terry A., 1998 - Molecular biology Labfax: Gene analysis, vol. II. Academic Press, California, USA. 6. Carr D. H., Walker J. E., 1961 Carbol-fuchsin, a dye for human chromosomes. Stain Technol., 36: 233 236. 7. Cartwright I. L, Kelly S. E., 1991 - Probing the nature of chromosomal DNA protein content by in vivo footprinting. Biotechniques, Nr. 11, pag. 188190. 8. Chahal S.R. i Virmani M. S., 1973 - Rev Olagineux. Revue gnrale des corps gras, nr. 4. 9. Cmpeanu M. M., Maniu M., Surugiu I. I., 2002 Genetica metode de laborator, Ed. Corson, Iai. 10. Doni M., Ivan Doina, 1975 Metode practice pentru studiul ecologic i geografic al vegetaiei, Ed. Univ. Bucureti: 37-39. 11. Fahad Al. Quarainy and Salim Khan., 2009 Mutagenic effects of sodium azide and its application in crop improvement. World Applied Sciences Journal. 6, pp. 1589-1601. 12. Gillier P. i Silvestre P., 1969 - Larachide. Maisonneuve et Larose, Paris. 13. Hera Cr., Toncea I., Ghinea L., 1980 Rev. Probleme de agrofitotehnie teoretic i aplicat. Vol. II, nr. 1. 14. IARC, 1999 Dimethyl sulfate. In Re-evaluation of some Organis Chemicals, Hydrazime and Hydrogen Peroxide, vol. 71. International Agency for Research on Cancer, Lyon, France, pag. 575-588. 15. Jitreanu Carmen D., Toma Doina L., Slabu Cristina, Marta Alina E., 2011 Lucrri practice de fiziologia plantelor. Editura Ion Ionescu de la Brad, Iai.
43

16. Jitreanu G., 1994 Tehnic experimental- curs. Editura Universitii Agronomice, Iai. 17. Leonte C., 1997 Ameliorarea plantelor horticole i tehnic experimental - lucrri practice. Editura Universitii Agronomice, Iai. 18. Lichtenthaler H. K., Wellburn A. R., 1983 - Determinations of total carotenoids and chlorophylls a and b of leaf extracts in different solvents. Biochemical Society Transactions, Nr. 11, pag. 591 - 592. 19. Marin . i Constantinescu Emilia, 2011 Fitotehnie-Manual universitar pentru nvmnt la distan, Craiova. 20. Mogrzan Aglaia, Morar G., tefan M., 2004 - Fitotehnie. Curs. Editura Ion Ionescu de la Brad, Iai. 21. Nair S. K., Ramaswami P. P., Pemmal R., 1972 Rev Olagineux. Revue gnrale des corps gras, nr. 3 22. National Toxicology Program, 2011 - Report on Carcinogens (12th Ed.). U. S. Department of Health and Human Services, Public Health Service, pag. 174-175. 23. Onisie T., Jitreanu G., 1992 - Tehnic experimental- lucrri practice, U.S.A.M.V. Iai. 24. Owais W. M. i Kleinhofs A., 1988 - Metabolic activation of the mutagen azide in biological systems. Mutat. Res. 197, p. 313-323. 25. Pietrarelli R. J., 1971 - Rev Olagineux. Revue internationale des corps gras, nr. 8-9. 26. Pran, P., (1998). Leguminoase pentru boabe. Ed.Mirton,Timioara. 27. Pohanish R. P., 2008 - Sittig's Handbook of Toxic and Hazardous Chemicals and Carcinogens, William Andrew Inc. 28. Pop L., Brnaure V., Marghitu Valeria i Chichea I., 1986 Cultura alunelor de pmnt, Editura Ceres, Bucureti. 29. Pop L., Chichea I. i Piti S., 1976 Rev. Producia Vegetal. Cereale i plante tehnice, nr.4 30. Rus L., Jitreanu G., 2007 Corelaii ntre unii indicatori ai strii de compactare a solului i producia culturilor de gru, fasole i porumb. Compactarea solurilor proecese i consecine. Ed. Risoprint, Cluj-Napoca. 31. Rippey J. C. R., Stallwood M. I., 2005 - Nine cases of accidental exposure to dimethyl sulphate -a potential chemical weapon. Emergency Medicine Journal, Nr. 22, pag. 878879.
44

32. Ritus G.I., (1952) Fitotehnie, Moscova. 33. Saese H. and Fahey G., 2006 - Comparison of seed dressing treatments of peanut (Arachis hypogaea L.) at cleanwater in the lower Markham Valley, Papua New Guinea. ACIAR Proceedings No. 122, p. 5153. 34. Sulescu N. A., Sulescu N. N., 1967- Cmpul de experien. Ediia a II- a. Editura Agro-Silvic Bucureti. 35. Snedecor G. W., 1968 -Metode statistice aplicate n cercetrile de agricultur i biologie, Editura Didactic i Pedagogic. 36. Starodub V., 2008 Tehnologii n fitotehnie. Ed. UASM, Chiinu. 37. rdea Gh., 1984 Contribuii la crearea unor linii noi de linte (Lens esculenta Moench) prin folosirea agenilor mutageni. Tez de doctorat, Institutul Agronomic, Iai, pag. 138141. 38. rdea Gh., Leonte C., 2003 Citogenetic vegetal metode de laborator. Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai. 39. Tsuschiya T., 1971 An improved aceto-carmine squash method, with special reference to the modified Rattemburys method of making a preparation permanent. Barley Genet. News, 1: 71-72. 40. Tudose I. Gh., Bra I. I., Tudose M., 1996 - Cytogenetic effects induced by nicotine in Vicia faba (2n=12), Analele tiinifice ale Universitii Al. I. Cuza din Iai (Serie nou) Seciunea II a. Biologie ,volum: v. 42 pagina: p. 95-99. 41. Vyskocil A., 1999 - Dimethyl sulphate: review of toxicity. Central European Journal of Occupational and Environmental Medicine, Nr. 5, pag. 7282. 42. Zamfirescu N., Velican V., Valu Gh., Sulescu N., Canr F., 1958 Fitotehnia vol. II, Editura Agro-Silvic de Stat, Bucureti.

45