Cursul 9 28 .11.

2013

E N Z I M E
Caracteristici generale ale enzimelor
nsuiri caracteristice enzimelor
Complexul ES
Centrul activ al enzimelor



Caracteristici generale ale
enzimelor


Ce sunt enzimele ?

catalizatori ai reaciilor chimice din
organismele vii
nsuirile comune cu catalizatorii
acioneaz n concentraii foarte mici;

nu se consuma n cursul reaciei;

nu modific constantele de echilibru ale reaciilor
pe care le catalizeaz;

grbesc numai atingerea strii de echilibru
pentru reaciile termodinamic posibile.
nsuiri caracteristice enzimelor

A.Sunt macromolecule proteice

B. Au eficien catalitic mult mai mare

C.Au specificitate

D. Activitatea lor poate fi reglat

A.Cu excepia ribozimilor (ARN)
enzimele sunt invariabil
proteine

Structur:
a. enzime cu structura strict proteic:
ribonucleaza
chimotripsina
lizozimul din mucusul nazal i lacrimi;


b. enzime cu structura heteroproteic:
parte proteica numit apoenzim

partea neproteic numit cofactor:

coenzim = component neproteic organic,
legat slab necovalent de apoenzim;

grupare prostetic = component organic
legat puternic de apoenzima (ex. hemul)

metal- legat permanent sau temporar



B.Enzimele asigur viteze mari reaciilor

reaciile enzimatice sunt de 10
6
- 10
12
ori mai rapide ca cele
neenzimatice
a.hidratarea CO
2
este catalizat de anhidraza carbonic ,
cea mai activ enzim:

10
5
molecule/ secund
reacia este de 10
7
ori mai rapid dect reacia necatalizat


CO
2
+ H
2
O H
2
CO
3
b.descompunerea H
2
O
2
catalizat de Fe
3+
i de
catalaz:



activitatea catalazei este de 2x10
6
ori mai
mare ca a Fe
3+


2 H
2
O
2
2 H
2
O + O
2
C.Specificitate

1. de reacie

2. de substrat: -absolut
-relativ: -de grup
-mai larg

3. stereospecificitate
1.Specificitate de reacie

Substrat + Reactant Produi

clasificarea enzimelor:
Oxido-reductaze;
Transferaze;
Hidrolaze;
Liaze;
Ligaze.

2.Specificitate de substrat
(selectivitate n alegerea substratului)
a.Specificitate absolut
E utilizeaz ca S un singur compus chimic:
-ureaza catalizeaz hidroliza ureei:


-acetilcolinesteraza catalizeaz hidroliza esterului colinei cu acidul
acetic:




-anhidraza carbonic

H
2
N CO NH
2
+ 2 H
2
O CO
2
+ 2 NH
3
H
3
C COO CH
2
CH
2
N
+
(CH
3
)
3
+
H
2
O H
3
C COOH + H
2
C CH
2
N
+
(CH
3
)
3
HO
b.Specificitate relativ:
de grup

E catalizeaz un tip de reacie pentru o familie de compui







Enzima are afinitate mare pentru alcoolul etilic
R CH
2
OH
Alcool dehidrogenaza
NAD
+
NADH + H
+
R CH O
O N
N
N
N
NH
2
O
H
2
C
OR OH
O P O
-
O
O P O
-
O
N
+
O
H
2
C
OH OH
CONH
2
N
COOH
Acidul nicotinic Amida acidului nicotinic
(niacina) (niacinamida)
N
CONH
2
Nicotinamid-adenin dinucleotid (NAD
+
)
(R = H formeaz NAD
+
; R = -PO
3
H
2
formeaz NADP
+
)
Vitamina PP
b.Specificitate relativ
mai larg

Glicozidazele










(H, OH)
O
HO
OH
OH
CH
2
-OH
O
OH
OH
CH
2
-OH
O
O
HO
OH
OH
CH
2
-OH
O
O
O H
H
O H
CH
2
OH
H
H
HOH
2
C
1
1
2
5
(H, OH)
O
HO
OH
OH
CH
2
-OH
O
OH
OH
CH
2
-OH
O
Proteazele










NH CH CO NH
R
2
CH CO
R
3
R
3
= fenilalanin, tirozin
metionin, leucin
Pepsin
NH CH CO NH
R
2
CH CO
R
3
R
2
= lizin, arginin
Tripsin
NH CH CO NH
R
2
CH CO
R
3
R
2
= Phe, Tyr, Trp
Chimotripsin
Carboxil esterazele
C
O
O R
1
R
3.Specificitate stereochimic
Enzimele disting
-un enantiomer levogir de cel dextrogir;
-un izomer cis de cel trans.
Lactat dehidrogenaza
NAD
+
NADH + H
+
COOH
C
CH
3
H HO
Acid L-lactic
COOH
C
CH
3
O
Acid piruvic
succinatdehidrogenaza






acidul maleic (izomerul cis) nu se obine nici n urme:
FAD FADH
2
CH
2
CH
2
COOH
COOH
Acid succinic
COOH
C
C
HOOC
H
H
Acid fumaric
CH
2
COOH
Vitamina B2
Conine heterociclul numit izoaloxazin
N N
N
NH
CH
2
O
O
C H
3
C H
3
CH CH CH
OH OH OH
O CH
2
P O
O
-
O
P O
O
-
O
N
N
N
N
NH
2
O
H
2
C
OH OH
lumicrom
lumiflavin
riboflavin
flavin adenin mononucleotid (FMN)
adenozin
adenozin 5`-monofosfat
(AMP)
flavin adenin dinucleotid (FAD)
(H)
(H)
(H)
(H)
(OH)



6.Activitatea catalitic a enzimelor poate fi
modulat de anumii ageni reglatori.
Curs 10 4.12.2013

Centrul activ al enzimelor
Complexul ES
energia liber de activare
Factori care influenteaza activitatea enzimelor
Ecuatia Michaelis Menten
Ec LB
Inhibitia activitatii



Centrul activ al enzimelor
reprezentare reacii enzimatice :
E + S ES E + Produsi
Ce este centrul activ al enzimelor ?

Enzimele sunt macromolecule

care prezint

Centrul activ = entitate tridimensional
unde se leag substratul




Centrul activ al enzimelor =

o regiune restrns din protein
cu structur
chimic i
geometric
bine determinate

Cine confer structura Centrului Activ ?
natura resturilor aminoacidice i
organizarea secundar,
teriar i
cuaternar a proteinei.


Centrului activ al chimotripsinei




His - 57 din lanul B;

Ser - 195 din lanul C;

Asp - 102 din lanul B.
A
B
C
S S
S S
o-chimotripsina contine 5 legturi disulfurice
S S
S S
S S
Structura tridimensional a ochimotripsinei
Triada Asp-His-Ser
Centrul activ
conine resturi aa
ce creaz o entitate tridimensional
complementar cu substratul

Centrul activ al enzimelor
centru de legare prezint resturi aminoacidice care
asigur legarea substratului

centru catalitic prezint resturi aa responsabile de
catalizarea propriu-zis

Resturile de aa din situsurile catalitice ale enzimelor
sunt: Cys, Ser, His, Tyr, acid Glu i Asp, Lys cu
gruprile funcionale:



OH, SH, NH
3
+
, COO
-
HN
+
NH
imidazol
Complexul enzim substrat
(ES)
structuri labile, cu o via foarte scurt
ntre E i S se stabilesc:
- fore necovalente (puni de hidrogen,
interaciuni hidrofobe, interaciuni electrostatice)
sau
-covalente reversibile

Complementaritatea chimic i geometric
determin legarea E-S
Modelul clasic (lact cheie)
al CA al enzimei n raport cu structura substratului,
propus de Emil-Fischer








Este un model rigid.

Modelul lact cheie
Substrat
Enzim Complexul ES
Modelul dinamic centrul indussau
complementaritate indus,
produs de Koshland, este acela de mna n mnu
Modelul indus presupune o flexibilitate a
zonei n care se afl centrul activ
Modelul centrului indus
Substrat
Enzim
Complexul ES

Cum acioneaz enzimele ?
Mecanismul de aciune privit din 2 perspective:
modificarea energiei n timpul reaciei;
rolul centrului activ n realizarea catalizei din punct
de vedere chimic
Ce este energia liber de
activare ?
Toate reaciile chimice sunt nsoite de variaii
ale energiei
In organismele vii temperatura i presiunea ==
constante

Energia liber de reacie AG caracterizeaz reaciile
din lumea vie


Reaciile posibile termodinamic decurg cu
scderea energiei libere a reactanilor
AGprodui AGreactani <0

reacie exergonic, AG<0
reacie endergonic, AG>0



Cum se modific energia n timpul reaciei ?
Virtual, toate reaciile chimice au o barier energetic ce separ
rectanii de produi

Aceast barier numit energie liber de activare este
diferena dintre energia reactanilor i energia intermediarului
care se produce n timpul formrii produsului.





B T A
-
Durata reactiei
Stare de tranzitie
E
n
e
r
g
i
a

l
i
b
e
r

(reactie necatalizat)
Stare de tranzitie
(reactie catalizat)
Stare initial
Energia liber de activare
a reactiei (necatalizate)
Energia liber de activare
a reactiei (catalizate)
Stare final
Energia total
eliberat
Produsi C + D
Reactanti A + B
Enzima nu modific energia liber a reaciei
catalizate (AG
0
), a reactanilor sau produilor, i deci
nu modific echilibrul reciei (constanta de echilibru)

Enzima furnizeaz o cale de reacie alternativ, prin
micorarea energiei libere de activare (ca urmare
a micorrii entropiei substratului)
Formarea strii de tranzitie
Mecanisme chimice folosite de centrul
activ pentru a transforma

Substrat Produi
Centrul activ al E stabilizeaz starea T
*
a
substratului
Cataliza covalent

Enzime care formeaz intermediari covaleni enzim-substrat:

Clasa serinei
Tripsina, Chimotripsina, Elastaza, Acetilcolinesteraza

Clasa cisteinei
Gliceraldehid 3P-dehidrogenaza, Papaina

Clasa histidinei
Glucozo 6-fosfataza, Succinil~CoA sintetaza

Clasa lizinei
D-aminoacid oxidaza, Transaldolaza
Triada Asp-His-Ser
Cataliza acido-bazic
Enzimele conin grupri funcionale care pot
aciona ca donori sau ca acceptori de protoni:
amino, carboxil, sulfhidril, imidazol, hidroxilul
fenolic.


hidroliza esterilor carboxilici i fosforici, reacii de
izomerizare
Glucozo-6-fosfat izomeraza
Exist un factor de tensiune n cataliza
enzimatic ?


legarea S la E poate deforma att enzima ct i
substratul

centrul activ al unor enzime este relativ nepolar
Cinetica enzimatic

Cinetica studiaz reaciile chimice:
desfurarea n timp a reaciei;
factori care influeneaz viteza reaciilor;
etapele intermediare prin care trec
reactanii pn devin produi.
Cum caracterizm cinetic o reacie
chimic ?
Prin viteza de reacie
Viteza unei reacii = variaia n timp a
concentraiei reactanilor sau a
produilor de reacie.

A B



ecuaii cinetice


dt
] A [ d
v =
dt
] B [ d
v + =
Ce postuleaz Legea cinetic ?

Viteza de reacie este proporional cu
produsul concentraiilor reactanilor

Pentru o reacie:
A Produi V = K [A]


Pentru o reacie:
A + B Produi V = K [A][B]

K = constanta de vitez sau viteza specific
(V de reacie la concentraii 1M ale reactanilor)

Activitatea enzimatic
U.I. (unitatea internaional) = activitatea enzimei care
transform 1 mol substrat/minut n cond standard de pH,
temperatur, cofactori

Activitatea molecular = nr. molecule de S transformate n
produs de ctre o molecul de E /secund.

Activitatea specific = nr. de uniti de activitate enzimatic /
mg de protein total.

Constanta catalitic (turn-over number) = nr. de transformri
S P catalizate de fiecare CA al E n unitatea de timp.
Factorii care influeneaz
activitatea enzimatic
Temperatura;
pH;
[E];
[S];
prezena inhibitorilor



Temperatura
T optim = temp. la care activitatea enzimelor
este maxim










50
100
20 40 60
temperatura
activitatea
enzimatic
%
T
optim
pH
pH-uri extreme denatureaz enzimele
Variaii mici de pH n zona de stabilitate a enzimei
modific v.
V
i
t
e
z
a

d
e

r
e
a
c
t
i
e

(
v
)
Pepsina
Fosfataza
alcalin
amilaza salivara
[E]
[S] = constant, v este proporional cu
cantitatea de enzim
activitatea
enzimatic
%
concentratia enzimei
Ecuaia Michaelis Menten


V = f([s]) la [E], temp., pH = constante








Michaelis i Menten au introdus
parametrii cinetici KM i Vmax
activitatea
enzimatic
concentratia substratului
v
max
v
max
2
K
M
saturatie
E + S
K
1
K
2
ES E + Produs
K
3

Unde E, ES i S sunt n echilibru
[E
total
]=[ES]

V
max
=K
3
[E
total
]

La echilibru
v1 = v2 + v3
K1[E][S] = K2[ES] + K3[ES]
K1[E][S] = [ES](K2 + K3)
E + S
K
1
K
2
ES E + Produs
K
3
Etapa rapid Etapa lent
KM
KM este o msur a afinitii dintre E i S
afinitile enzimelor pentru substraturile lor
sunt cu att mai mari
cu ct valorile KM sunt mai mici


M
1
3 2
K
K
K K
] ES [
] S ][ E [
=
+
=
Ecuaia Michaelis - Menten
Ecuaia de vitez a reaciilor enzimatice cu un singur
substrat sau ecuaia lui Michaelis-Menten


reprezentare grafic v = f([S]) este un arc de hiperbol.






] [
] .[
max
S K
S V
v
M
+
=
activitatea
enzimatic
concentratia substratului
v
max
v
max
2
K
M
saturatie




KM este numeric egal cu [S]
la care viteza reaciei este semimaxim

] S [
] S [ K
] S [ V
2
V
M
max max
=
+

=
M
K
Ecuaia Lineweaver Burk
Ecuaia Michaelis-Menten inversat este ecuaia unei drepte.
max max
V
1

] [
1 1
+ =
S V
K
V
M
] [
] .[
max
S K
S V
v
M
+
=
- 1/K
M
0 1/[S]
1/V
1/V
max
Panta = K
M
/V
max

Inhibiia activitii enzimelor
scderea activitii catalitice a enzimei
n prezena unui compus chimic denumit
inhibitor

Inhibitorii pot fi:
endogeni (metabolii)
exogeni (substane toxice,medicamente)


Inhibiia poate fi:
- ireversibil
- reversibil

Inhibiia ireversibil
legturi covalente ntre E i I

Cnd [I] = [E]
activitatea catalitic a enzimei
este redus la zero.

E + I EI
diizopropil-fluorofosfatului (DIFP)
inhib acivitatea serin enzimelor


NH CH CO
CH
2
OH
+
P
F
O
O O HC
CH
3
CH
3
CH
CH
3
CH
3
DIFP
- HF
NH CH CO
CH
2
O
P
O
O O HC
CH
3
CH
3
CH
CH
3
CH
3
acetilcolinesteraza este foarte sensibil
la aciunea DIFP

DIFP este utilizat ca paralizant


Hemoproteinele (citocromi, hemoglobina)
sunt inactivate de ctre:
CO
-
CN
care se leag de ionul de Fe
2+
din hem

Inhibiia reversibil



Ce efecte are Ic

asupra celor doi parametrii cinetici

v
max
i
KM ?

E + I EI
Inhibiia reversibil poate fi:
Competitiv
Necompetitiv
Uncompetitiv


Inhibiia reversibil competitiv
Ic este analog structural al S
se leag n centrul activ al enzimei
prin aceleai grupri ca S;

ntr-un sistem cu: E, S i Ic au loc reaciile:


E + S ES E + Produsi
+
I
EI
1/V
1/V
max
activitatea
enzimatic
concentratia substratului
v
max
v
max
2
K
M
saturatie
- 1/K
M
`
K
M
`
+ Ic
+ Ic
- 1/K
M
1/[S] 0
reacia enzimatic atinge Vmax
dar la concentraii mari de S.

aparent creste KM,
deci afinitatea enzimei pentru S scade i
nu se modific Vmax;
Ic (compui naturali sau de
sintez)
Acizii dicarboxilici: oxalic, malonic,
malic, oxaloacetic, pirofosfat sunt inhibitori
competitivi ai succinat dehidrogenazei
(SD).
FAD FADH
2
CH
2
CH
2
COOH
COOH
Acid succinic
COOH
C
C
HOOC
H
H
Acid fumaric
CH
2
COOH
Succinat dehidrogenaz
Sulfanilamida
Folat sintetaza, la bacterii este pclit i sintetizeaz un
intermediar cu sulfanilamid n locul acidului para-amino-
benzoic care nu se poate transforma n acid folic.
Cum acidul folic este indispensabil bacteriilor, acestea
mor.
NH
2
SO
2
NH
2
NH
2
COOH
Sulfanilamida
Acid p-aminobenzoic
N
N N
N
H
2
N
OH
CH
2
NH CO NH
COOH
CH
2
CH
2
CH
COOH
9 10
5
pterina
acid p-aminobenzoic
acid glutamic
acid pteroic
Analogi structurali ai bazelor
purinice i pirimidinice


se utilizeaz n chimioterapia cancerului.

inhib sinteza de acizi nucleici,
mpiedicnd diviziunea celular care este
mult mai rapid n tumori
Metotrexat


analog al acidului folic se folosete n
chimioterapia leucemiilor.
N CH
2
N
N
N
N C
H
2
N
NH
2
H
R
N CH CH
2
C
O
-
O
H
COO
-
O
R=H aminopterin
R= -CH
3
metotrexat
N
N N
N
H
2
N
OH
CH
2
NH CO NH
COOH
CH
2
CH
2
CH
COOH
9 10
5
pterina
acid p-aminobenzoic
acid glutamic
acid pteroic
N CH
2
N
N
N
N C
H
2
N
NH
2
H
R
N CH CH
2
C
O
-
O
H
COO
-
O
R=H aminopterin
R= -CH
3
metotrexat
Inhibiia reversibil
necompetitiv
Substratul i inhibitorul necompetitiv (In)
nu sunt analogi structurali
nu au dimensiuni comparabile
In nu se leag n centrul activ












E + S ES E + Produsi
+
I
EI + S ESI
+
I




Se modific Vmax

KM nu se modific n prezena inhibitorului

1/v
1/v
max
activitatea
enzimatic
concentratia substratului
v
max
K
M
+ Ic
+ Ic
- 1/K
M
1/[S]
0
v
max
/ 2
v
`
max
/ 2
v`
max
1/v`
max
grupri - SH libere (nu din centrul activ), pot
lega slab:
Ag
+

Hg
2+

Pb care micoreaz sau chiar anuleaz
activitatea enzimelor

aa se explic efectul otrvitor al unor metale grele

Pb inhib ferochelataza

Inhibiia reversibil uncompetitiv
Un astfel de inhibitor modific i
K
M
i
Vmax
E + S ES E + Produsi
+
I
ESI

Curs 12 18.12.2013
Enzime alosterice
Reglarea cantitativ a enzimelor
Reglarea eficienei catalitice
Complexe multienzimatice
Antienzime
Izoenzime


Enzime alosterice

Sunt proteine oligomere (dimeri, tetrameri,
etc.)

Au mai multe centre de legare pentru S
(cte un centru pentru fiecare subunitate).

Curbele v = f([S]) sunt sigmoide

Vmax se atinge atunci cnd toate centrele
active sunt ocupate cu S

Parametrii cinetici pentru enzimele oligomere
sunt:
-Vmax i
-S
0,5
(S
50
) concentraia substratului pentru
care reacia are o vitez semimaxim


activitatea
enzimatic
concentratia substratului
v
max
K
M
v
max
/ 2






Aspectul sigmoid al curbei v = f([S]) reflect o

modificare a afinitii enzimei pentru substrat
Enzimele care dau curbe v=f([s])
sigmoide sunt denumite
alosterice


Liganzii fixai pot fi:
identici (de ex. Substraturi n ambele centre)
sau
diferii


centru izosteric leag substratul


centru alosteric (allos=altul)
(poate fi situat pe acelai lan polipeptidic dar n regiune
diferit)

leag un efector alosteric
Activatori alosterici
Inhibitori alosterici
activitatea
enzimatic
v
max
K
M
50
%
100
1
2
3
[S]

Dup natura centrelor de legare i a liganzilor
pentru aceste centre, efectele alosterice sunt:

Efecte homotrope (presupun cooperarea
ntre dou centre izosterice

Efecte heterotrope (cooperare ntre un centru
izosteric i un centru alosteric)

Alosteria

capacitatea unor liganzi de a modifica funciile
unor proteine
prin
inducerea unor tranziii alosterice (modificri
conformaionale).

Caracteristici eseniale pentru Enzimele
alosterice:

-catalizeaz etape cheie din cile metabolice;

ireversibile, cu AGo < 0

-au structur cuaternar

Dou Modele explic
mecanismul de aciune
al Enzimelor Alosterice

1.modelul concertat (simetric)
2.modelul secvenial


Modelul simetric
Subunitile dimerului, pot avea dou
conformaii;
-R (relaxat) cu afinitate mare pentru
substrat
-T (tensionat) cu afinitate mic pentru
substrat.
Modelul impune simetria dimerului,
care exist numai n forma R sau T.
La enzimele heterotrope:

Activatorii stabilizeaz starea R

Efectorii negativi stabilizeaz starea T
Modelul secvenial



admite interacia strii R cu starea T

Legarea lui S la primul monomer se face
cu dificultate
Ce tip de cooperare am ntlnit la
realizarea rolurilor Hemoglobinei ????
Hemoglobina fixeaz

O
2
prin cooperativitate (homotrop)

coordonat de factorii: H
+
; CO
2
; 2,3-DPG
(heterotrop)


Reglarea activitii enzimelor

Viteza reaciilor enzimatice cheie din cile
metabolice depinde de:

cantitatea de enzim;


eficiena enzimelor

Reglarea cantitii de enzim
prin dinamica proceselor de biosintez
i de degradare



Aminoacizi Proteine
K
s
K
d

Enzimele constitutive: Ks = Kd

Catalizeaz procese fundamentale pentru
existena celulei.
Se gsesc n celule n cantiti relativ
constante.
Ele nu sufer fluctuaii mari n raport cu
factorii de mediu.

Enzimele inductibile: Ks > Kd

Sunt implicate n ci catabolice.

se sintetizat numai n prezena substratului

Substratul acioneaz ca un inductor,
accelernd sinteza enzimelor.
Enzimele represibile: Ks < Kd

Sunt implicate n procese anabolice

Sinteza lor este ncetinit de produsul final al
reaciei catalizate;

Represia se face de obicei, prin intermediul
complexelor corepresori - aporepresori.


Controlul degradrii proteinelor (enzimelor)

-se face independent de controlul sintezei;

-se face prin intermediul ubiquitinei;

-este proces dependent de ATP.


Reglarea eficienei catalitice a enzimelor

Factorii ?????

Activitatea unor Enzime alosterice depinde de concentraia
substratului:





Reglarea printr-un intermediar (feed forward stimulare):





A B C P
E
1
E
2
E
3
A B C D Produsi
E
1
E
2
E
3
Glucoz
Glucozo-6-fosfat
Fructozo-6-fosfat
Fructozo-1,6-bisfosfat
Gliceraldehid-3-fosfat Dihidroxiaceton-fosfat
Etapa hexozelor
ATP
ADP
1
2
3
4
ATP
ADP
1,3-Bisfosfoglicerat
NAD
+
NADH + H
+
H
3
PO
4
3-Fosfoglicerat
5
6
ADP
ATP
Fosforilare la nivel de substrat
2-Fosfoglicerat
7
8
H
2
O
Fosfoenolpiruvat
ADP
ATP
9 Fosforilare la nivel de substrat
Piruvat
Etapa triozelor
activitatea
enzimatic
concentratia substratului
v
max
K
M
v
max
/ 2

Hexokinaza:
-prezent n toate esuturile extrahepatice,
-are afinitate mare pentru glucoza (KM = 0,15 mM)
-esuturile preiau glucoza din snge la orice valoare
a glicemiei

Glucokinaza:
-prezent numai n ficat
-are afinitate mic pentru glucoza (KM = 10 mM)
- este activ dup ingestia de glucide

Glucoz + ATP Glucozo-6-P + ADP
Glucozo-6-fosfat
CH=O
C
C
C
C
C H
2
OPO
3
H
2
H OH
O H H
H OH
H OH
CH=O
C
C
C
C
C H
2
OH
H OH
O H H
H OH
H OH
Glucoz
ATP
ADP
Hexokinaza
Mg
2+
Glucozo-6-fosfat
izomeraza
C H
2
C
C
C
C
C H
2
OPO
3
H
2
O
O H H
H OH
H OH
OH
Fructozo-6-fosfat
Reglarea activitii enzimelor alosterice prin produsul final
(inhibiie de tip feed back)
A B C D Produsi
E
1
E
2
E
3
A B C
E
1
E
2

D P
1
E P
2
E
3
E
4
Reglarea covalent
Apare la organismele superioare

i presupune activare prin

ruperea unor legturi covalente


Conversia are loc prin:

fosforilare-defosforilare;

nucleotidilare

enzime interconvertibile

activare prin proteoliz

proces unidirecional
Enzime interconvertibile prin fosforilare
<==> defosforilare

Fosforilrile:
-sunt catalizate de kinaze
(reglate hormonal, interconvertibile fosfo-defosfo);
-sunt ireversibile;
-necesit ATP

Defosforilrile:
-sunt ireversibile;
-se fac hidrolitic n prezena unor fosfataze;
-fosfatazele sunt supuse unui control hormonal.

Enzim (Ser-OH) Enzim (Ser-OP)
forma defosfo forma fosfo
ATP ADP
P
i
H
2
O
proteinkinaze
fosfataze
enzime active n forma fosforilat
glicogen fosforilaza implicat n catabolismul
glicogenului

Enzime active n forma defosfo
glicogen sintaza implicat n proces anabolic

activarea este implicat ntr-o cascad de evenimente
declanate de legarea unui hormon la o membran celular

Reglarea covalent prin
proteoliz
Proenzimele (zimogenii)

sunt produse la locul de sintez n form
inactiv

activarea se face la locul de aciune.

Activarea se face

sub influena factorilor de mediu i

Autocatalitic
printr-un proces ireversibil de rupere a unor legturi
peptidice specifice.

De ce este necesar existena
zimogenilor ?

se obin foarte rapid
prin transformri minore
cantiti mari de enzime active.

Enzimele proteolitice digestive

secretate de stomac: pepsinogenul

secretate de pancreas: tripsinogenul,
chimotripsinogenul, proelastaza,
procarboxipeptidaza

Enzimele coagulrii sngelui
(secretate de ficat n form de proenzime)

Enzimele sistemului complement


a.Enzimele proteolitice digestive
hidrolizeaz proteine:

Transformarea
HCl
pepsinogen pepsina
(- segment terminal (44 aminoacizi) cu
caracter bazic)


Transformarea
Tripsinogen tripsin
enteropeptidaz
(denumire veche enterokinaz)

(fragment N-terminal de 6 aminoacizi din tripsinogen)

Tripsina activeaz tripsinogenul, chimotripsinogenul,
proelastaza, i procarboxipeptidaza.

Zimogenii pancreatici se activeaz cnd coninutul
stomacal a ajuns n duoden.

Transformarea
chimotripsinogen chimotripsin

este activat de tripsin
se face prin ndeprtarea a dou dipeptide

Chimotripsina cuprinde trei lanuri peptidice i
cinci puni de sulf.

Centrului activ al chimotripsinei




His - 57 din lanul B;

Ser - 195 din lanul C;

Asp - 102 din lanul B.
A
B
C
S S
S S
o-chimotripsina contine 5 legturi disulfurice
S S
S S
S S
Structura tridimensional a ochimotripsinei
Enteropeptidaz
Tripsinogen
Tripsin
Chimotripsinogen
Chimotripsin
Procarboxipeptidaza A
Carboxipeptidaza A
Carboxipeptidaza B
Procarboxipeptidaza B
In intestin
Enzimele coagulrii i fibrinolizei.

Exist dou ci iniiate de activatori diferii
care converg ntr-o cale final comun

calea intrinsec, cu participare de factori
sanguini;

calea extrinsec, la care particip i factori
de origine exclusiv tisular.
Calea intrinsec
Calea extrinsec
Factor XI Factor XI
a
Traum tisular
Factor tisular
Factor VII
a
Factor VII
Factor IX Factor IX
a
Factor X Factor X
a
VIII
a
VIII
Factor X
Protrombina Trombin
II
V
V
a
Fibrinogen Fibrin
I
Retea stabilizat de fibrin
Factor XIII
Factor XIII
a
Factor XII Factor XII
a
Kalikrein, Kininogen

Iniierea procesului de coagulare este urmat de
activarea n cascad a factorilor de coagulare

Care sunt avantajele unui rspuns reglator n
cascad ?

-o cantitate foarte mic de iniiator declanaz un
rspuns amplu.
-fiecare etap a cascadei amplific rspunsul

Fibrinoliza. Componenii necesari
dezagregrii chiagului se gsesc n snge
n form inactiv i se activeaz proteolitic



Plasminogen Plasmin
Cheag de fibrin Peptide solubile
Factor tisular
Care dintre urmtoarele enzime proteolitice este
activat prin hidroliza acid a proenzimei
inactive?
a. tripsina
b. chimotripsina
c. elastaza
d. pepsina
e. carboxipeptidaza
Antienzime (antiproteaze) = proteine
reglatoare

Serpinele sunt inhibitori de serin proteaze
Se leag necovalent n centrul activ al serin
proteazelor:


Antienzimele
antitrombina III

o
1
antiproteaza

(denumit i o1 antitripsina)
inhibitorul pancreatic al tripsinei

inhibitorul proteinei C (proteina C este o
serin proteaz plasmatic dependent de
vitamina K, activat de trombin, care
transform factorii activi VIIIa i Va ai
coagulrii n forme inactive).



Antitrombina III:
-prezent n plasm;

-inactiveaz trombina i ali factori ai coagulrii: IXa, Xa, XIa

Cine mrete viteza de formare a complexelor ireversibile
ntre antitrombina III i serin proteazele coagulrii ?
Heparina

o1-antiproteaza:
-protein plasmatic;
-este o1-globulin

inhib elastaza, tripsina i alte proteaze


o1-antiproteaza sintetizat
de ficat
de monocitele i macrofagele alveolare
are rol n protejarea esuturilor de aciunea elastazei

Elastaza = enzim proteolitic distructiv, secretat de
neutrofilele activate poate distruge elastina din pereii
alveolelor pulmonare

O deficien la nivelul o1-antiproteazei poate
duce la instalarea emfizemului pulmonar


Inhibitorul pancreatic al tripsinei:
-este o protein cu masa mic, produs de
pancreas.

-se leag de tripsin, prevenind distrugerea
pancreasului.


Izoenzimele
Izoenzimele:
- proteine oligomere
-catalizeaz aceeai reacie n toate
esuturile;
-difer prin:
structur
distribuie tisular.
Diferenele structurale pot influenta
proprietile fizico-chimice:

pH izoelectric

mobilitate electroforetic

masa molecular

difereniere prin nsuirile catalitice:

afiniti diferite fa de acelai substrat;
sensibiliti diferite la aciunea unor efectrori
alosterici;

_
specificiti distincte pentru coenzime



Izoenzimele LDH (lactat dehidrogenaza)

enzim intracelular

LDH are structur cuaternar omogen sau
heterogen;
lanuri M (muscle)
LDH = tetramer
lanuri H (heart).


LDH are cinci izoenzime:
H
4
, H
3M
, H
2
M
2
, HM
3
, M
4


sau

dup mobilitatea electroforetic
LDH
1
LDH
5


Reacia catalizat:
Lactat dehidrogenaza
NAD
+
NADH + H
+
Acid L-lactic
COOH C H
3
C
O
Acid piruvic
COOH CH H
3
C
OH
Izoenzimele LDH au afiniti diferite pentru
piruvat (sau lactat):
H4 i H3M
inim
afinitate mic pentru piruvat
(l transform greu n lactat)

M4 i M3H
muchi scheletici i ficat
afinitate mare pentru piruvat



Determinarea activitii enzimelor serice
poate fi folosit n clinic pentru stabilirea
originii esutului lezat

Izoenzimele creatin kinazei
(creatin fosfokinaza)

Creatin kinaza:
-enzim intracelular;
-dimer format din dou subuniti:
B (de la brain)
M (de la muscle)

Are trei izoenzime:
MM (prezent n muchi i miocard)
BB (prezent n creier i muchi)
MB (prezent n urme numai n miocard).


reacia catalizat este reversibil:

Creatin + ATP Fosfo-creatin + ADP

Creterea activitii creatin kinazei-MB n ser,
indic lezarea miocardului
(infarct de miocard)

Infarct
Ore
Activitatea CK2
n plasm la 24
ore dup infarct
Activitatea LDH
n plasm la 36 -
40 ore de la
infarct
Complexe multienzimatice
Asamblri de proteine ntr-un complex, cu
scopul de a crete eficiena global a
procesului.
Rolul lor:
cataliza coordonat a unei succesiuni de
reacii;
minimalizarea unor reacii secundare.

Exempl: acid gras sintaz, complexul piruvat
dehidrogenazei, etc.

Curs 10 7.12.2011

Denumirea enzimelor

Clasificarea enzimelor
Lipide
AG
TG
Fosfatide
Clasificarea i denumirea
enzimelor
Denumirea enzimelor
se pot utilza trei modaliti:
-adugarea sufixului az la numele
substratului (zaharaz, ureaz, glucozidaz)

-denumire dup aciunea specific a enzimei
(guanilat ciclaz, lactat dehidrogenaz, glutation
reductaz)

-denumiri particulare fr legtur cu reacia
catalizat: pepsin, chimotripsin, tripsin.

Numele enzimei cuprinde:
-denumirea substratului,
-tipul reaciei catalizate,
-coenzima

Fiecare enzim este codificat de patru cifre, care
definesc:
-clasa;
-subclasa;
-sub-subclasa;
-numrul de ordine al enzimei din ir.

Clasificarea enzimelor

Sunt 6 clase de enzime dup tipul de reacie
catalizat:
1.Oxidoreductaze
2.Transferaze
3.Hidrolaze
4.Liaze
5.Izomeraze
6.Ligaze
Oxidoreductazele catalizeaz reacii redox
(transfer de electroni sau de hidrogen)
Subclase:
Dehidrogenazele catalizeaz
transferul de hidrogen
de la substrat (SH2)
pe o coenzim redox
(NAD
+
; NADP
+
; FMN; FAD):

SH
2
+ Co S
ox
+ CoH
2
O N
N
N
N
NH
2
O
H
2
C
OR OH
O P O
-
O
O P O
-
O
N
+
O
H
2
C
OH OH
CONH
2
N
COOH
Acidul nicotinic Amida acidului nicotinic
(niacina) (niacinamida)
N
CONH
2
Nicotinamid-adenin dinucleotid (NAD
+
)
(R = H formeaz NAD
+
; R = -PO
3
H
2
formeaz NADP
+
)
Vitamina PP
Vitamina B2
Conine heterociclul numit izoaloxazin
N N
N
NH
CH
2
O
O
C H
3
C H
3
CH CH CH
OH OH OH
O CH
2
P O
O
-
O
P O
O
-
O
N
N
N
N
NH
2
O
H
2
C
OH OH
lumicrom
lumiflavin
riboflavin
flavin mononucleotid (FMN)
adenozin
adenozin 5`-monofosfat
(AMP)
flavin adenin dinucleotid (FAD)
(H)
(H)
(H)
(H)
(OH)

Reductazele catalizeaz transferul de hidrogen de
la o coenzima redus (adesea NADPH) la un
acceptor:



S
ox
+ CoH
2
SH
2
+ Co

Oxidazele catalizeaz
transferul de echivaleni reductori de la un substrat
la dioxigen,
reducndu-l fie la ap, fie la peroxid de hidrogen:



SH
2
+ 1/2 O
2
S
ox
+ H
2
O
SH
2
+ O
2
S
ox
+ H
2
O
2


Peroxidazele catalizeaz transferul de echivaleni
reductori de la un substrat la un peroxid (HOOH
sau R-OOH)




2G-SH + HOOH G-S-S-G + 2 HOH
glutation peroxidaz


SH
2
+ HOOH S
ox
+ 2 H
2
O



Dioxigenazele ncorporeaz dioxigenul n molecula
de substrat (care cuprinde o legtur dubl):


CH CH + O
2
O CH
CH O +
CH
3
CH
3
H
3
C
CH
3
CH
3
H
3
C
H
3
C CH
3
CH
3
CH
3
|-caroten
caroten dioxigenaza
O
2
n prezenta srurilor biliare
OH
CH
3
CH
3
H
3
C
CH
2
CH
3
CH
3
O
CH
3
CH
3
H
3
C
CH
CH
3
CH
3
CH
3
CH
3
H
3
C
COOH
CH
3
CH
3
Retinal (retinalaldehid)
Reducere
Oxidare
Retinol (Vitamina A
1
)
Acid retinoic

Monooxigenazele ncorporeaz numai un atom de
oxigen n substrat, celalalt atom al dioxigenului este
redus la ap.

Multe monooxigenaze sunt hidroxilaze care implic
participarea sistemului redox:
NADP
+
- (NADPH+ H
+
)


R-H + O
2
+ (NADPH + H
+
) R-OH + H
2
O + NADP
+
Transferazele
catalizeaz reacii de transfer a unei grupri de la un donor ctre un
acceptor


Subclase:
Aminotransferaze (transaminaze) catalizeaz transferul
unei grupri amino ntre un amino i un cetoacid.
Coenzima participant este piridoxal fosfatul.



AX + BY AY + BX
COOH CH R
1
NH
2
COOH C R
2
O
COOH C R
1
O
COOH CH R
2
NH
2
+
+
N
CH
2 HO
H
3
C
HC
OH
O
N
CH
2 HO
H
3
C
H
2
C
OH
NH
2
Piridoxal
N
CH
2 HO
H
3
C
HC
O
O
O
-
O
-
O
P
ATP ADP
piridoxal-kinaza
Piridoxalfosfat
Piridoxamina
ATP ADP
N
CH
2 HO
H
3
C
H
2
C NH
2
O O
-
O
-
O
P
Piridoxaminfosfatul
piridoxamin-kinaza
+
COOH
CH
2
CH
2
HC
COOH
NH
2
Acid glutamic
COOH
CH
2
CH
2
C
COOH
O
Acid o-cetoglutaric
H
3
C CH
NH
2
COOH
+
H
3
C C
O
COOH
Alanin
Acid piruvic
GPT
COOH
CH
2
CH
2
C H
COOH
NH
2
Acid glutamic
COOH
CH
2
CH
2
C
COOH
O
Acid o-cetoglutaric
GOT
COOH
CH
2
C H
COOH
NH
2
COOH
CH
2
C
COOH
O +
+
Acid aspartic
Acid oxaloacetic


Aciltransferazele catalizeaz transferul restului acil
de pe compui cu potenial chimic ridicat
(R-CO~SCoA), pe acceptori potrivii cu formare de
esteri, amide, anhidride:

R-CO~S-CoA + R
1
-OH R-CO-OR
1
+ CoA-SH
Acid pantotenic
O CH
2
C CH C NH
CH
3
CH
3
OH
O
CH
2
CH
2
CO
O
N
O
H
2
C
O OH
O P O
-
O
O P O
-
N
N
N
NH
2
NH
SH
CH
2
CH
2
O
-
O
-
O
P
T
i
o
e
t
a
n
o
l
a
m
i
n
a
A
D
P
Coenzima A - SH
Fosforil transferazele (kinaze)
catalizeaz transferul resturilor fosforil
de pe ATP
pe substraturi:




Glucoz + ATP Glucozo-6-P + ADP
Glucozo-6-fosfat
CH=O
C
C
C
C
C H
2
OPO
3
H
2
H OH
O H H
H OH
H OH
CH=O
C
C
C
C
C H
2
OH
H OH
O H H
H OH
H OH
Glucoz
ATP
ADP
Hexokinaza
Mg
2+
Glucozo-6-fosfat
izomeraza
C H
2
C
C
C
C
C H
2
OPO
3
H
2
O
O H H
H OH
H OH
OH
Fructozo-6-fosfat
Metiltransferazele catalizeaz transferul
gruprilor cu un atom de carbon
coenzima care poart aceste grupri este
tetrahidrofolatul (FH4).


N
N N
N
H
2
N
OH
CH
2
NH CO NH
COOH
CH
2
CH
2
CH
COOH
9 10
5
pterina
acid p-aminobenzoic
acid glutamic
acid pteroic
Transport grupri:

metil (-CH3)
hidroximetil (-CH
2
OH)
formil (-CHO)
formimino (-CH=NH)
metilen (-CH
2
-),
transformarea serinei n glicin:
5
COOH
HC
H
2
C
NH
2
OH
Serin
9 10
N
H
N
H
CH
2
NH
+
FH
4
serin hidroximetil
transferaz
COOH
H
2
C NH
2
Glicin
+
N
N
H
CH
2
N
CH
2
N
5
, N
10
-metilen FH
4

formarea gruprilor metil:

N
5
,N
10
-metilen-FH
4
+ (NADH + H
+
) N
5
-metil-FH
4
+ NAD
+
metilarea homocisteinei la metionin
5
COOH
HC
H
2
C
NH
2
H
2
C SH N
N
H
CH
2
NH
CH
3
+
N
5
-metil FH
4 Homocistein
homocistein-
metiltransferaza
metilcobalamina
COOH
HC
H
2
C
NH
2
H
2
C S CH
3
+
N
H
N
H
CH
2
NH
FH
4
Metionin
transformarea deoxiuridilatului n
deoxitimidilat (folosit n sintez de ADN):
O
N
O
H
2
C
H OH
NH
O
-
O
P O
-
O
O
FH
4
+
N
N
H
CH
2
N
CH
2
N
5
, N
10
-metilen FH
4

dUMP
timidilat sintaza
O
N
O
H
2
C
H OH
NH
O
-
O
P O
-
O
O
H
3
C
dTMP
+
Hidrolazele

Subclase
Esterazele care pot fi:
carboxilesteraze (cu substrat R-COOR)
tiolesteraze (cu substrat R-CO -SR)
fosfomonoesteraze (substrat R-O-PO3H2)
fosfodiesteraze sau fosfataze (substrat R-O-PO2H-O-R1)
Glicozidaze
Peptidaze
A-B + H
2
O A-H + B-OH
N
O
H
2
C O
HO HO
P
O
O
-
P
O
O
O
-
O
-
O
-
O
O
P N
N
N
NH
2
ATP
O
H
2
C O
OH
O
N
N
N
N
NH
2
P
O
-
O
Adenilatciclaza
HR
AMPc
O
H
2
C O
OH
O
N
N
N
N
NH
2
P
O
-
O
AMPc
Fosfodiesteraza
Metilxantine
Insulin
Ca
2+
-Calmodulin
5`-AMP
N
O
H
2
C O
HO HO
P
O
O
-
O
-
N
N
N
NH
2
Liazele
catalizeaz reacii de adiie reversibile,
la legturi multiple.
Anhidraza carbonic catalizeaz
hidratarea dioxidului de carbon:


CO
2
+ H
2
O H
2
CO
3
Fumaraza catalizeaz hidratarea acidului
fumaric la acid malic:

+ H
2
O
HC
CH
2
COOH
COOH
OH
Acid malic
COOH
C
C
HOOC
H
H
Acid fumaric
Fumaraza
Izomerazele
catalizeaz reacii de izomerizare:

Racemazele transform un enantiomer
dextrogir n enantiomerul levogir
(+)-Alanina (-)-Alanina
Epimerazele schimb configuraia unui singur
atom de carbon asimetric





D-Glucoz D-Galactoz
D-Galactoz
C H
C
C
O
OH H
C
C
H
H
OH
O H
C H
2
OH
H
O H
C H
C
C
O
OH H
C
C
H
OH
OH
H
C H
2
OH
H
O H
C H
C
C
O
H O H
C
C
H
OH
OH
H
C H
2
OH
H
O H
D-Glucoz
D-Manoz
4
0
2
0
Izomerazele cis-trans modific configuraia unei
duble legturi


Acid fumaric Acid maleic
Mutazele schimb poziia unei grupri n
molecul



HC
H
2
C
OPO
3
H
2
COOH
OH
HC
H
2
C OH
COOH
OPO
3
H
2
Acid 3-fosfogliceric Acid 2-fosfogliceric
mutaz
Ligazele
catalizeaz reacii de condensare cuplate cu scindare de
ATP



Sinteza glutaminei catalizat de glutaminsintetaz:


A-H + B-OH A-B
ATP
ADP + P
i
Acid glutamic + NH
3
Glutamin
ATP
ADP
NH
3
COOH
CH
2
CH
2
HC
COOH
NH
2
Acid glutamic
ATP
ADP+P
i
C
CH
2
CH
2
HC
COOH
NH
2
O
NH
2
Glutamin
Glutamin sintetaz
+


Sintazele catalizeaz legarea a dou molecule fr

implicarea ATP

oaminolevulinat sintaza
glicogen sintaza
NOS - nitric oxid sintaza
Vitaminele care pot fi transformate n coenzime pentru a
participa la reacii de oxido-reducere sunt:
A.Nicotinamida i riboflavina
B.Vitamina C i biotina
C.Biotina i nicotinamida
D.Tiamina i riboflavina
E.Tiamina i Biotina