CURS 13

18.12.2012

Acizi nucleici Componenii structurali ai acizilor nucleici Distribuia i dimensiunile ADN Replicare Revers transcriere Mutaii

Ce sunt acizii nucleici ?

Sunt produi de policondensare a nucleotidelor;

Pstreaz i mijlocesc transferul de informaie

genetic n lumea vie.

Dogma central a biologiei moleculare

ADN conine informaia genetic sub forma unor secvene de nucleotide
Replicare
Transcriere Traducere

ADN

ARNm

Proteine

Revers transcriere

Toat informaia din celula parental este transferat celulelor fiice.

Tipuri de acizi nucleici

ADN ARN
ARNm, ARNt, ARNr, ARN de mici dimensiuni, miARN, siARN

Componenii structurali ai acizilor nucleici

Pentoza sub forma ciclic b-furanozic
Acidul fosforic (H3PO4) Bazele azotate: purine i pirimidine

Nucleotidele
Sunt esteri fosforici ai nucleozidelor
NH2 O O- P OO b O P OO O P OO 5` O 4` 1` 2` 3` OH X AMP (adenozinmonofosfat) ADP (adenozindifosfat) ATP (adenozintrifosfat) N N N X=H Dezoxiriboz X=OH Riboz N Adenin Adenozin sau Dezoxiadenozin (nucleozide)

Structura primar covalent a acizilor nucleici

Nucleozidele legate fosfat diesteric formeaz: -oligonucleotide -polinucleotide Polinucleotidul ARN conine:
b-Riboz i A, G, C, U

Polinucleotidul ADN conine:

b-Dezoxiriboz i A, G, C, T

N
O O
-

NH
G

P
O
-

5`

5` GCA 3`
NH2

N
O
3`

NH2

X
O O C O
-

N CH 2
3`

P
O

N
O

NH2
X O

N
A O

NH

P
O
-

CH 2

N
O

3` 3`

OH

 Cine determin diversitatea polinucleotidelor ???

Conformaia moleculei de ADN; tipuri de conformaii

Structura secundar de dublu-helix a ADN

a fost propus de

Watson i Crick

Dou catene antiparalele (una cu polaritate 5-3 i cealalt antiparalel cu polaritatea 3-5) complementare nu identice
formeaz o dubl helice cu orientare dreapt
O H2 C O N O H Dezoxiguanozin H G N N H O O Dezoxicitidin CH 2 O H O H2 C O N O H O Dezoxiadenozin O Dezoxitimidin H2 C O N A N H N T N H O N N H O N H N C N H O N O H N H

ADN forma B
3,4 ; 34 ; 20

Polaritatea catenei
5`

O CH 2 5` 3` B1 B1 3` P B2 B2 5` P B3 B3 5` O 5`

3`

P
5` 3` 3`

P
5`
3`

3` O

3` CH 2 O

5`

O H2 C O N O H Dezoxiguanozin H G N N H O N H N N O H N

C N O

H O

Dezoxicitidin CH 2 O

H O H2 C O N
HO

N A N

N N

O H N T N O O H2 C Dezoxitimidin

Denaturarea ADN

Ruperea legturilor de hidrogen i a interaciunilor van der Waals dintre catenele moleculei ADN aflate n soluie.

Renaturare ADN

Denaturare ADN

Hidroliza enzimatic
Nucleaze: -exonucleaze (ADN polimerazele I i III) -endonucleaze endonucleaze de restricie (restrictaze) evideniate la bacterii recunosc secvene nucleotidice numite palindroame taie ADN dublu catenar nemetilat la resturile de A sau C

Enzima Secvena recunoscut BamH I 5`-G GATCC-3` BglII EcoR I 5`-A GATCT-3`
5`-G 5`-GAT 5`-A 5`-GTT 5`-CAG 5`-T

Sursa Bacillus amyloliquefaciens H Bacillus globigii Escherichia coli RY13

5`-G AATTC-3`

EcoRV

5`-GAT ATC-3`

Escherichia coli B946

Haemophilus influenzae Rd Thermus aquaticus

Hind III 5`-A AGCTT-3` Taq I 5`-T CGA-3`

5`---AAGCTT---3` 3`---TTCGAA---5` Hind III 5`---A 3`---TTCGA 5`

5`

5`---TGGCCA---3` 3`---ACCGGT---5` Bal I

5`---GAGCTC---3` 3`---CTCGAG---5` Sst I 5`---GAGCT3` C---3` 3`---C 3`TCGAG ---5`

AGCTT---3` A ---5`

5`---TGG 3`---ACC

CCA---3` GGT---5`

Formare ADN recombinant

ADN1 5`---GAATTC---3` 3`---CTTAAG---5` EcoRI 5`---G 3`---CTTAA AATTC---3` G---5` 5` 3` 5` 3` ADN2 GAATTC CTTAAG EcoRI G AATTC CTTAA G 3` 5` 3` 5`

Renaturarea fragmentelor ADN si sudarea lor de ctre ADN-ligaz 5`---GAATTC 3`---CTTAAG 3` 5` 5` 3` GAATTC---3` CTTAAG---5`

Molecule de ADN recombinant

Separarea fragmentelor ADN rezultate din aciunea enzimelor de restricie

Electroforaza pe gel de poliacrilamid pentru fragmente <500 perechi de baze Electroforaza pe gel de agaroz pentru fragmentele cu dimensiuni mai mari

Hri de restricie

Distribuia i dimensiunile ADN

ADN are form liniar sau circular

Moleculele ADN dintr-o celul alctuiesc cromozomii acelei celule.

 Ce sunt genele ? secvene nucleotidice care conin informaia cu privire la sinteza unui singur lan polipeptidic sau a unei singure molecule de ARNr sau ARNt

Genom = totalitatea genelor din cromozomii unei celule.

Distribuie ADN
La procariote:
-ADN cromozomial

Plasmide (ADN extracromozomial, circular)

-molecule mici care trec uor prin membrana celulei gazd -conin o cantitate redus de informaie genetic -conin gene care specific proteine, ce confer bacteriei rezistent la antibiotice -se autoreplic extrem de rapid i autonom fa de ADN cromozomial.

La eucariote
ADN se afl n nucleu.
1% din ADN celular total se afl n mitocondrii i este circular 5-10% din ADN este codificator pentru proteine i ARN

Genele sunt formate din exoni i introni (discontinuitatea

genelor); excepie histone i interferon

 Dup gradul de repetare al secvenelor nucleotidice:

60% din ADN celular sunt secvene ADN nerepetitive, unice; codific proteine 20% din ADN sunt secvene cu grad mediu de repetare (zecisute copii/celul); codific ARNr, ARNt, histone

10% din ADN cu grad foarte mare de repetare (mii de copii/celul); se afl n centromere i telomere;
au rol structural n cromozomi

Dimensiunile ADN
La procariote,
ADN circular = un cromozom cu

4 x 106 p.b.

E. coli ADN ~ 1,6 mm diametrul celulei ~ 2 mm

La om: cel mai scurt cromozom 34 x 106 cel mai lung 263 x 106

p.b.

Lungimea moleculelor ADN dintr-o singur celul uman este de ~ 2 m

Structura superhelicoidal a ADN

Suprarsucirea moleculei ADN n jurul axei proprii

Suprarsuciri spre stnga (superhelix negativ)

Suprarsuciri spre dreapta (superhelix pozitiv)

Helix circular normal

Axa de suprarsucire

Axa de suprarsucire

Topoizomerazele
Topoizomeraza I, nu necesit ATP
Topoizomeraza I Tyr OH P Incizie si legare la enzim Topoizomeraza I Tyr 5` O P OH 3` Rotirea captului 3` Topoizomeraza I Tyr 5` O P OH 3` Enzima Disocierea enzimei P

Giraza (Topoizomeraza II)

Necesit ATP i face incizii n ambele catene; introduce suprarsuciri negative

Etapa 1

Etapa 2

Etapa 3

ADN suprarsucit

 Topoizomerazele I i II menin n celulele vii un grad potrivit de superhelicitate negativ.

antibiotice care inhib ADN-giraza suprim creterea i dezvoltarea bacterian:

acid nalidixic (negram) derivaii si fluorurai (norfloxacin, ciprofloxacin),

Cromozomii eucariotelor
Cromatina (cromozomii interfazici)=material amorf prezent n nucleu n interfaz; conine ADN, proteine, ARN

Cromozomii sunt complexe ADN-proteine rezultate prin condensarea cromatinei n timpul mitozei
Fiecare cromozom conine o molecul ADN liniar Nr. Cromozomilor variaz de la o specie la alta (celulele somatice umane conin 46 cromozomi; 23 perechi)

 Histonele = proteine bazice

interacioneaz ionic cu anionii fosfat din

ADN

Sunt 5 tipuri de histone

Histone bogate n lizin: H 2 A i H 2B Histone bogate n arginin: H 3 i H 4 care intr n structura nucleozomului Histone de legtur H1 care leag nucleozomii ntre ei.

Nucleozomii = unitatea de baz a cromatinei

grad de compactare pentru ADN egal cu 7 Cilindru: 11x11x5,5 nm 140 pb se rsucesc de 2 ori n jurul octamerului histonic

Miezul nucleozomului ADN de legtur

(H2A, H2B, H3, H4)2

ADN Histona H1

Solenoizii asigur o scurtare de 40 de ori a formei B a ADN

Protein nuclear Fibra de 30 nm

Cromozom

ADN

Octamerul histonic Histone + ADN

Histona H1

ADN

Dogma central a biologiei moleculare

ADN conine informaia genetic sub forma unor secvene de nucleotide
Replicare
Transcriere Traducere

ADN

ARNm

Proteine

Revers transcriere

Toat informaia din celula parental este transferat celulelor fiice.

BIOSINTEZA ADN

REPLICAREA

 Replicarea este -semiconservativ -bidirecional -semidiscontinu

Caten parental

Caten parental

Caten parental

Catene fiice

Caten parental

Catene parentale

Catene fiice

Replicarea este semiconservativ

Prin replicarea unei molecule ADN se formeaz dou
molecule ADN fiice identice cu parentala

replicare

diviziune celular

fiecare celul fiic primete

caten parental de ADN
caten nou sintetizat, complementar cu parentala.

Unde ncepe replicarea ADN bacterian ?

Originea replicrii

n regiuni origine (ori C) care

conin secvene consens bine conservate de-a lungul evoluiei,
bogate n A=T, uor de denaturat

 La E.coli
o molecul unic de ADN, alctuiete un cromozom
exist o singur regiune Ori C care direcioneaz nceperea replicrii.

 Replicarea poate fi uni sau bi-direcional

Cromozomul circular initial

ORI

ADN initial 1 2 Bifurcatii de replicare

Puncte de initiere replicare

Originea replicrii ADN dup replicare

Replicarea este bidirecional n cele mai multe organisme ADN circular se replic simultan n ambele direcii.

Cromozomul bacterian are n timpul replicrii forma literei theta ()

Bucla de replicare formeaz o structur n ADN circular

O singur bifurcatie de replicare

Dou bifurcatii de replicare

Ce este Bifurcaia de replicare ?

bifurcaia de replicare reprezint regiunea

activ n replicare care se deplaseaz de-a

lungul duplexului parental

Sensul de deplasare al bifurcatiei

3` 5` Catena leading ARN primer

5` 3`

Catena lagging Fragmente Okazaki ARN primer 3` 5`

Replicarea ADN bacterian este bidirecional

Ori Cromozomi

Ori

Terminarea replicrii

Ori

Bifircatiile de replicare Catene fiice

Cromozomul circular initial

Catene parentale

 Terminarea replicrii

are loc atunci cnd

cele dou bifurcaii de replicare se ntlnesc ntr-o regiune opus regiunii Ori

Elementele necesare pentru sinteza de ADN

Substraturi dATP, dGTP, dCTP, dTTP i ATP, GTP, UTP, CTP necesari sintezei de ARN n cursul replicrii. Matria (template) ARN iniiator sau primer necesar iniierii sintezei de ADN

Enzimele implicate n replicare

ADN polimeraze-ADN dependente Helicaza Topoizomeraze (giraza) ADN ligaza ADN primaza

ADN polimeraze ADN dependente

La procariote sunt 3 polimeraze: I, II i III
Caracteristici comune ale celor 3 polimeraze: -au activitate polimerazic -necesit caten ADN matri -sintetizeaz catene ADN numai cu directia 5` 3` -ADN polimerazele nu iniiaz catene ADN, necesit ARN primer -prezint activitate exonucleazic 3` 5`

Atribute specifice celor 3 polimeraze

ADN polimeraza I are activitate polimerazic redus
(comparativ cu ADN polimeraza III) catalizeaz formarea a 20 de legturi fosfodiesterice nainte de eliberarea matriei ADN p I (10 nucleotide pe secund) ADN p III (1000 nucleotide pe secund).

5` ARN primer (10-12 nucleotide)

O
-

Catena parental
ADN

3`

5` Catena complementar
-

3`

P O

O O

P O

CH 2

U
O

CH 2

U
O

O O
-

OH
O

OH
O

P O

O O

P O

CH 2

U
O

CH 2 PPa

U
O

3`
OH .. O O
-

OH
O O
-

O O
-

O O
-

OH
O

P O

P O

P O

P O

CH 2

T
O

CH 2

T
O

OH

5`

OH

5`

 are activitate exonucleazic:

3`5` i
5`3`

Fragment 36 Kd H2N Exonucleaz 5` 3`

Fragment 67 Kd Exonuclez 3` 5` Polimeraz COOH

5` T ...... A T ...... A T ...... A

3` 5` C C C A A A

3`

Locul de hidroliz al exonucleazei 3` 5`

3` HO

T ...... A C A A A

Locul de hidroliz al exonucleazei 5` 3`

T ...... A T ...... A T ...... A T ...... A

a)

5`

3`

5`

b)

ADN polimeraza I ndeprteaz ARN primer ca urmare a activitii exonucleazice 5` 3` i l nlocuiete cu ADN ca urmare a activitii polimerazice.

ADN polimeraza III are rol central n procesul de replicare n vivo

are o procesivitate mare adic leag strns i elibereaz catena matri numai dup replicarea complet a acesteia; are o eficien catalitic foarte mare n calitate de polimeraz (polimerizeaz 1000 nucleotide pe secund);

prin activitatea exonucleazic 3 de corector (proofreading).

5 are rol

ADN polimeraza III asigur fidelitatea procesului de replicare pe dou ci:

respectarea principiului complementaritii bazelor; (acuratee de 104 perechi de baze)

activitatea de corector (proofreading).

Helicazele

Desfac duplexul ADN pe portiuni mici, cu consum de ATP, introducnd suprarsuciri pozitive

ADN suprarsucit

ADN-giraza
ADN-giraza (topoizomeraza II),

cu consum de ATP,
introduce suprarsuciri negative n ADN

cu scopul de a contracara n avans suprarsucirile

pozitive introduse de helizaz n procesul de

replicare.
Este prezent numai la procariote.

ADN ligaza
ADN ligaza catalizeaz
formarea unei legturi fosfo diesterice ntre

gruparea 3`-OH de la captul unei catene ADN, cu

gruparea 5`-fosfat de la captul altei catene ADN

ADN 5` 3` 5` O P 5`

ADN 3` O P

A AMP R P P

ADN 5` 3`

OH 3`

3` Ligaz Ligaz-AMP 3`

OH P-R-A 5` AMP 3` 5`

5`

 ADN-ligaza necesit AMP

Sursa de AMP este: ATP pentru eucariote i NAD pentru E.coli i alte bacterii. ADN ligaza NU poate cataliza

legarea a dou fragmente

monocatenare de ADN

 Enzima are rol n: -sinteza catenelor de ADN; -repararea ADN; -recombinarea genetic.

Unete endergonic fragmentele ADN din

catena lagging (sintetizat discontinuu)

ADN primaza
Sintetizeaz fragmente scurte de ARN, 8-10 nucleotide Este o ARN polimeraz -ADN dependent
Pentru sinteza catenei leading (continu) este necesar un singur ARN primer. n cazul catenei lagging (discontinu), fiecare fragment Okazaki necesit un ARN primer.

Sensul de deplasare al bifurcatiei

3` 5` Catena leading ARN primer

5` 3`

Catena lagging Fragmente Okazaki ARN primer 3` 5`

Replicarea este semidiscontinu

ADN polimerazele, din orice surs, sintetizeaz numai catene cu direcia 5` 3`
Cum are loc sinteza catenei avnd ca matri catena cu direcia 5` 3` ? Okazaki a propus un model, conform cruia replicarea este semidiscontinu

Sensul de deplasare al bifurcatiei

3` 5` Catena leading ARN primer

5` 3`

Catena lagging Fragmente Okazaki ARN primer 3` 5`

catena n avans sau catena leading este sintetizat continuu, n direcia 5` 3`, de ctre ADN polimeraza III catena n ntrziere sau catena lagging este sintetizat discontinuu de ctre ADN polimeraza III.
Enzima sintetizeaz fragmente Okazaki (150-200 nucleotide), n direcia 5` 3` fiecare cu ARN primer.

Replicarea se desfoar in vivo cu viteze

egale pentru ambele catene

5` 3` Catena "lagging" ADN ligaza ADN polimeraza I
Primaza Helicaza Primozom

3` ADN polimeraza III Catena "leading" 5` 3` 5` ADN giraza

Replicarea cromozomului bacterian

Iniiere Elongare Terminare Iniierea replicrii presupune formarea replizomului ( enzimele i factorii replicrii ) In regiunea ori C helicaza + primaza formeaz primozomul. Primozom + ADN polimeraza III + ADN giraza + proteine replizomul

ADN
Ori C
1

Segment ADN

ATP-dnaA

responsabil de corectitudinea iniierii replicrii

dnaB dnaC-ATP 3 dnaC dnaB

Helicaza

4 Replicare

Iniierea
Helicaza denatureaz ADN parental n regiunea OriC
Proteine stabilizatoare mpiedic renaturarea ADN Primaza iniiaz sinteza unui ARN primer Primerii, furnizeaz gruparea 3`-OH necesar iniierii sintezei de ADN de ctre ADN polimeraz

Catena leading

Proteine care se leag la ADN monocatenar

Catena lagging

Polimeraza Helicaza Primaza

Elongarea ARN iniiator

ADN polimeraza III catalizeaz adugarea dezoxiribonucleozid trifosfailor, la captul 3` al ARN primer, n ordinea dictat de matri. ADN polimeraza III sintetizeaz ADN n direcia 5` 3` Deoarece catenele ADN sunt antiparalele, polimeraza funcioneaz asimetric

5` ARN primer (10-12 nucleotide)

O
-

Catena parental
ADN

3`

5` Catena complementar
-

3`

P O

O O

P O

CH 2

U
O

CH 2

U
O

O O
-

OH
O

OH
O

P O

O O

P O

CH 2

U
O

CH 2 PPa

U
O

3`
OH .. O O
-

OH
O O
-

O O
-

O O
-

OH
O

P O

P O

P O

P O

CH 2

T
O

CH 2

T
O

OH

5`

OH

5`

Replicarea se desfoar in vivo cu viteze

egale pentru ambele catene

5` 3` Catena "lagging" ADN ligaza ADN polimeraza I
Primaza Helicaza Primozom

3` ADN polimeraza III Catena "leading" 5` 3` 5` ADN giraza

Terminarea replicrii
Proteine specifice se leag la secvena terminatorie mpiedicnd helicaza (proteina dna B)

s desfac duplexul ADN

Fidelitatea replicrii ????

Crearea unei catene noi complementare cu matria Activitatea de corector a ADNp III Necesitatea unui primer Alegerea unui sens unic al replicrii 5`3` Existena unui sistem reparator constitutiv post-replicativ Existena unui sistem inductibil de reparare

Replicarea la eucariote
Replicarea la eucariote: -este semiconservativ -se desfoar bidirecional -din mai multe origini. Replicarea la eucariote are loc n faza S, de sintez, a ciclului celular (durata 8 ore)

 Diviziunea celular la eucariote are loc n patru faze distincte

G2 Mitoza Faza S G1 G0

 Faza S este separat de faza mitotic prin perioadele de gol sintetic, G1 i G2 Faza G0, de nondiviziune (resting phase). Trecerea G0 G1 S mitoz

este reglat de kinaze activate de

cicline proteine a cror concentraie crete sau

scade dramatic n cursul ciclului celular.

 Celulele tumorale tiu s evite faza G0 a ciclului celular.

La eucariote s-au identificat cinci polimeraze

, b,,die. i d sunt implicate n replicarea ADN nuclear.
pentru sinteza catenei lagging

d pentru sinteza catenei leading.

(Are aciune 3` 5` exonucleazic)

b i e sunt implicate numai n repararea ADN

 La eucariote 100 de bifurcaii de replicare

pe cromozom
la procariote: 1000 perechi de baze/secund la eucariote: 100 perechi de baze/secund), ca urmare a interferenelor cu nucleozomii i proteinele cromozomiale.

ADN

La eucariote ADN nuclear este replicat n ntregime i o singur dat per ciclu celular.

ADN replicat este marcat prin

metilarea, n general a citozinei, la 5-metilcitozin pentru a se evita o nou replicare pn la mitoz.

Gradul de metilare este de 3-5% pentru regnul animal.

Terminarea replicrii la cromozomii liniari

Indeprtarea primerului din captul 5` al catenei lagging i degradarea ADN monocatenar rmas
duce la scurtarea cromozomului la fiecare rund de replicare i pierderea de informaie genetic de la capetele cromozomilor.

 Cromozomii eucariotelor conin la ambele capete telomere. Cromozomii fr telomere sunt instabili:
fuzioneaz cu ali cromozomi sunt degradai.

Telomerele sunt secvene de cca. 1000 nucleotide bogate n G care se repet n tandem.
oligonucleotid telomeric (GGGGTTTTGGGG)

quadruplex telomeric, regleaz activitatea telomerazei

T T T G G G G G G G T T T G G T
T

G G G G

G G G

Telomerazele sunt ribonucleoproteine

Telomeraza funcioneaz astfel similar cu o revers transcriptaz

 Absena telomerazei, care permite trunchierea gradual a cromozomilor la fiecare rund de replicare a ADN, poate contribui la senescena normal a celulelor. Creterea activitii telomerazei poate permite replicarea i creterea celular necontrolat, proces care se produce n cancer.

Reconstituirea cromatinei
In faza S cantitatea de ADN i histone se dubleaz n timpul replicrii:
histonele existente se asociaz cu duplexul care conine catena fiic leading

cele nou sintetizate se asociaz cu duplexul care conine catena fiic lagging.

Compui care afecteaz replicarea

folosii ca medicamente antibacteriene i antivirale Antimetaboliii (5-fluorouracilul, metotrexatul, 6mercaptopurine) reduc sau inhib producerea de substrate (dNTP) pentru replicare. Substratele analoage (azidotimidina, citozin arabinozidul) pot fi ncorporate n molecula de ADN de ctre ADN polimeraze inhibnd viitoarea replicare.

Inhibitori ai ADN girazei (acidul nalidixic i fluorochinolonele), enzim care elimin torsiunile introduse de giraz n procesul replicrii.

Reverstranscrierea Sinteza de ADN pe matri de ARN

Revers transcriptaza este prezent n virusurile oncogene care conin ca material genetic ARN Enzima este o ADN polimeraz ARN dependent, care se activeaz numai la ptrunderea n celula gazda. Primerul folosit de revers transcriptaz est un ARNt nglobat n particular viral Enzima prezint activitate de revers transcriptaz: activitate ribonucleazic (ribonucleaza H); activitate ADN polimerazic ADN dependent.

Virus cu 2 molecule ARN si revers transcriptaz

Ptrundere n calula gazd ARN legat de revers transcriptaz Sinteza ADN de ctre revers transcriptaz ARN-ADN hibrid ARN viral ADN dublu catenar Genom gazd ADN din celula gazd Sinteza ADN dublu catenar Integrarea ADN n genomul celulei gazd

 Revers transcriptaza nu prezint activitate

exonucleazic 3`

5`, putnd face greeli n

replicare, ceea ce explic numrul mare de

tulpini virale.

 HIV este un virus versatil rspunztor de SIDA (virusul conine genele: pol, env i gag) Revers transcriptaza poate utiliza ca matri orice ARN pe care construiete un ADNc (complementar), aceast posibilitate putnd fi utilizat n obinerea unor gene sintetice.

MUTAII. REPARAREA ADN

Notiunea de mutatie a fost elaborata in anul1901 de catre Hugo de Vries care este autorul binecunoscutei teorii mutationiste. Mutaiile sunt modificri permanente ale secvenei nucleotidice a ADN Mutaiile punctiforme= modificri ale unei singure perechi de baze

Mutaiile pot fi produse prin:

Substituia unei baze cu alt baz

tranziia A..T G.C

transversia

AT CG

Deleia Inseria

Cauzele care determin apariia mutaiilor

a.Erori n procesul de replicare care scap celor 2 sisteme:

-activitate de corector a ADN polimerazei III.
-sistemele specializate de reparare postreplicative

5` T ...... A T ...... A T ...... A

3` 5` C C C A A A

3`

Locul de hidroliz al exonucleazei 3` 5`

3` HO

T ...... A C A A A

Locul de hidroliz al exonucleazei 5` 3`

T ...... A T ...... A T ...... A T ...... A

a)

5`

3`

5`

b)

ADN polimeraza I ndeprteaz ARN primer ca urmare a activitii exonucleazice 5` 3` i l nlocuiete cu ADN ca urmare a activitii polimerazice.

 b.Factori chimici
Agenii nealchilani: formaldehida (H2C=O): reacioneaz cu gruprile amino; hidroxilamina (NH2-OH) reacioneaz specific cu citozina; acidul azotos (HNO2) determin dezaminarea oxidativ a citozinei, adeninei, guaninei modificnd mperecherea bazelor deoarece o amin se transform n ceton. Agenii alchilani. etilmetan sulfonatul, adaug o grupare metil la azotul din nucleul purinic labiliznd legtura N-glicozidic prin a crei hidroliz apare un loc depurinat;

 c.Analogi structurali ai bazelor azotate pot fi ncorporai n catena de ADN.

5-bromuracilul, se mperecheaz de obicei cu adenina. Forma enolic se leag cu guanina. Tranziia produs este AT cu G..C 2-amino purina se mperecheaz de obicei cu timina. Forma sa tautomer normal (amino), se poate lega cu citozina producnd mutaia prin tranziie GC la AT.

O HN O N
H

Br N H2N 2 N

N NH

5-bromo uracil

2-amino purina

 d.Factori fizici Radiaiile ultraviolete (200-400 nm) induc formarea dimerilor de timin TT

UV

Formarea dimerului de timin ntr-o caten ADN

Structura unui dimer de timin intracatenar

Radiaiile ionizante Razele X, radiaiile , determin deschiderea nucleului purinic, depurinarea i ruperea legturilor fosfo-diesterice.

 e.Depurinri-Hidroliza legturilor glicozidice f.Dezaminri spontane CU G Xantin A Hipoxantin

 g.Inserie: h.Deleie:

Acridin pH i temperatur

Repararea ADN
Prin: a.excizie -excizia dimerilor de timin -excizia unei secvene ce conine o baz dezaminat b.direct -fotoreactivare -dealchilarea guaninei c.prin recombinare.

Repararea prin excizie a.Repararea ADN la procariote prin excizia dimerilor de timin 5` 3`
3` 5` Excizia unui fragment de 12 nucleotide

Sinteza de ADN de ctre ADN polimeraza I

Formarea unei legturi covalente de ctre ADN ligaz

 Repararea ADN n cazul dezaminarii uneia

dintre bazele azotate

prin dezaminarea citozinei uracil adeninei hipoxantina guaninei xantina se face analog reparrii prin excizie

DE ce timin n ADN i nu uracil ?

Prezenta timinei i nu a uracilului n ADN permite repararea ADN ce conine citozina dezaminat (uracil).

Folosirea timinei n structura ADN i nu a uracilului mrete fidelitatea mesajului genetic.

Repararea direct a ADN

prin fotoreactivare ADN fotoliaza,
o enzim care se afl n toate organismele i care este activat de radiaiile din domeniul vizibil (l = 400-600 nm).

cliveaz legtura covalent timin-timin din dimerii de timin

Absena genetic a fotoliazei duce la creterea riscului de apariie a cancerului de piele.