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1.1.- INTRODUCCIN
Las Micotoxinas son metabolitos secundarios de los hongos, que se producen en determinadas condiciones medioambientales, generalmente de elevada actividad de agua y temperatura. Las micotoxinas poseen estructuras qumicas muy diversas, aunque todas son compuestos orgnicos de masa molecular relativamente baja (1). Las principales micotoxinas que afectan a los alimentos son: Aflatoxinas (producidas por hongos del gnero Aspergillus), Ocratoxinas (producidas por hongos de los gneros Aspergillus y Penicillium), Tricotecenos, Fumonisinas y Zearalenona (producidas por hongos del gnero Fusarium) y Patulina (producidas por hongos del gnero Penicillium). (2) Las micotoxinas ejercen efectos txicos sobre los seres humanos y sobre los animales. Esta toxicidad est influenciada por toda una serie de factores, como los que se detallan a continuacin: Tipo de micotoxina, biodisponibilidad y concentracin de la misma en el alimento. Sinergismos entre las micotoxinas presentes. Cantidad de alimento consumido y continuidad o intermitencia en la ingestin. Peso del individuo, edad y estado fisiolgico del mismo. Las micotoxinas pueden producir una bajada de las defensas inmunitarias en el ser humano y en los animales, pudiendo aumentar la susceptibilidad a determinadas infecciones. As mismo, las micotoxinas pueden actuar sobre el metabolismo de los glcidos y de los lpidos, as como sobre la actividad de diversas enzimas participantes en dichos metabolismos. Tambin tienen efectos sobre determinados rganos diana, que suelen ser: Sistema Nervioso Central, sistema gastrointestinal, hgado, rin y piel. (2)
2.2.- AFLATOXINAS
2.1. Introduccin
Las aflatoxinas son un grupo de metabolitos secundarios generalmente txicos producidos principalmente por dos especies de hongos del gnero Aspergillus. Aspergilus spp requiere ciertas condiciones especiales para su crecimiento y produccin de aflatoxinas. El hongo puede crecer desde 4C hasta 45C, mientras que la toxina puede ser producida desde 11C hasta 35C, con una temperatura ptima de 22C y una humedad relativa del 80-90%. Las especies ms relacionadas con la produccin de aflatoxina son A. parasiticus, que produce aflatoxinas B y G y A. flavus, que slo produce aflatoxinas B, ste ltimo encontrado frecuentemente en las partes areas de las plantas (flores, hojas), mientras que A. parasiticus se aisla principalmente del suelo. Los Aspergillus crecen saprofticamente y los productos alimenticios pueden servir como sustrato. Factores como la temperatura, el pH, la humedad, la luz, la atmsfera de almacenamiento y factores de tipo qumico como la presencia de minerales o carbohidratos, o la presencia de inhibidores como la lactosa, pueden influir en su crecimiento y produccin de aflatoxinas.
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Las aflatoxinas M1 y M2 son metabolitos oxidativos de las aflatoxinas B1 y B2 producidos por los animales tras la ingestin de stas, aparecen en la leche materna (tanto animal como humana), la orina y las heces. Las aflatoxinas son producidas antes y despus de la cosecha de cereales, principalmente, bajo ciertas condiciones de temperatura, humedad y disponibilidad de nutrientes y pueden ser encontradas en productos agrcolas de regiones tropicales o subtropicales. En Europa, la contaminacin de los productos agrcolas ha sido desestimada durante muchos aos, sin embargo, la formacin de aflatoxinas se ha observado en productos europeos recientemente. Han ocurrido contaminaciones con aflatoxinas en maz de origen italiano; altas temperaturas, sequas e insectos han causado en algunas provincias del valle del Po las condiciones adecuadas para el crecimiento de A. flavus y por consiguiente la produccin de aflatoxinas. Por lo tanto, aunque la formacin de aflatoxinas generalmente se considera que puede ocurrir en materias primas importadas, ya que las condiciones climticas en los pases tropicales (20-35 C y 85% de humedad relativa) son ptimas para el desarrollo del hongo en cualquier producto, especialmente maz, algodn, arroz y cacahuete, no hay que excluir la contaminacin en productos agrcolas europeos.
2.2. Aflatoxina M1
La aflatoxina M1 (AFM1) es el derivado 4-hidroxi de la AFB1 (Figura 1) y es excretada en la leche de las hembras de mamferos que consumen AFB1 en la dieta. En vacas lecheras, el paso de AFB1 a la leche en forma de AFM1 est relacionado de manera lineal con la produccin de leche. Tanto la AFB1 como la AFM1 son compuestos hepatotxicos y carcinognicos y sus efectos sobre la salud pblica constituyen una permanente preocupacin. La presencia de AFM1 ha sido reportada en leche materna y su deteccin es considerada como un biomarcador de exposicin a AFB1. (1)
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junto con ms Acetil CoA van a formar un compuesto policetnico, luego sufriendo ciclizacin y aromatizacin para formar antrona y su compuesto oxidado que es el cido norsolnico; despus de otra serie de reacciones puede dar formacin a las aflatoxinas. Aunque han sido identificados al menos 20 tipos diferentes de aflatoxinas, las ms comunes son la B1, B2, G1 y G2, M1 y M2, siendo las cuatro primeras las ms relacionadas con los efectos txicos. Las aflatoxinas B y G emiten luz ultravioleta de onda larga, excitndose a 225-365 nm y emitiendo a 425-450 nm, con lo cual pueden ser observadas con una lampara fluorescente, produciendo luz azul o verde, de donde toman el nombre de B (blue) y G (green) segn el caso. (4)
3. Toxicidad.
La Aflatoxina B1 es considerada un carcingeno humano, clasificada por la Agencia Internacional de Investigaciones para el Cncer (IARC) en el grupo 1 cancergenas para el hombre, y claramente genotxica. Otras enfermedades relacionadas posiblemente con la exposicin de Aflatoxina B1 incluyen hepatitis txica y fibrosis heptica, atrofia del crecimiento en nios y sndrome de Reye. Para la Aflatoxina M1 la informacin sobre posibles efectos adversos para la salud es escasa. Los estudios experimentales en animales llevados a cabo para determinar la toxicidad y la carcinogeneicidad de Aflatoxina M1 parecen indicar
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que sta tiene potencial hepatotxico y hepatocarcinognico. La toxicidad aguda de la Aflatoxina M1 parece similar o ligeramente inferior a la de la Aflatoxina B1, pero su potencial carcinognico es probablemente uno o incluso dos ordenes de magnitud inferior a la de Aflatoxina B1. La IARC clasifica a la Aflatoxina M1 como grupo 2B posiblemente carcinognica para el hombre. (7) El Comit mixto FAO/OMS de Expertos en Aditivos Alimentarios calific las Aflatoxinas como potentes carcingenos humanos, pero consider que no exista suficiente informacin para establecer una cifra del grado de exposicin tolerable, recomendando que se rebajaran al mnimo las ingestas dietticas para reducir el riesgo potencial. (2) En la Tabla 1 se observa las principales micotoxinas y las evidencias de carcinogenicidad, tanto en la salud humana y la salud animal, as como su clasificacin en la IARC.
Micotoxina
Clasificacin IARC 1 2B 2B 2B 2B 2B 3 3 3 3 3
Aflatoxinas Aflatoxina M1 Esterigmatocistina Griseofulvina Ocratoxina A Fumonisinas Ac. Peniclico Citrinina Patulina Toxina T-2 Toxinas de F. graminearum (zearalenona y tricotecenos)
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combinndose con protenas a los diferentes tejidos y provocando las diferentes clases de intoxicaciones.
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permeabilidad de las membranas de la clula de los alvolos y las concentraciones ms altas de aflatoxina M1 excretada por las vacas con mastitis tambin se poda deber a la permeabilidad creciente de las membranas. Una relacin lineal entre el consumo de la aflatoxina B1 y el contenido de la aflatoxina M1 fue se encontr para consumos de aflatoxina B1 del 5-80 g (2):
As, la produccin de la leche que contiene la aflatoxina M1 en 0,05 g/kg requerira que el producto medio de la aflatoxina B1 por las vacas lecheras est limitado a aproximadamente 40 g/da/vaca. En base a un consumo diario de 12 kg/vaca de alimentacin compuesta, el contenido de la aflatoxina B1 en la alimentacin tendra que ser 3,4 g/kg. Estudios de transferencia conducidos en los aos 90 de vacas produciendo 10-20 litros de leche por da (Harvey et al., 1991; Galvano et al., 1996b) demostraron mucha menos tasa de transferencia del 0,5-0,6%. Segn se recoge en la Opinin del Panel de Contaminantes de la EFSA (1), sobre la Aflatoxina B1, y de acuerdo con los estudios de Pettersson et el al. (1990), Veldman et el al. (1992), y Veldman (1992) de vacas con la alta produccin de leche demostraron porcentajes a partir del 2,6 a 6,2%. Petterson (1998) present un modelo de clculo usando todas los datos publicados desde 1985 (10 observaciones de 5 experimentos controlados) de la transmisin de aflatoxina B1 a M1 en leche alimentando con piensos complementarios conteniendo concentraciones de aflatoxinas alrededor del mximo permitido. (1) Aflatoxina M1 (ng/kg leche)=10,95+0,787x (g aflatoxina B1/productos/da)
Figura 3: Anlisis de Regresin de la transformacin de aflatoxinas en la leche (1)
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Esto significa que un ganadero no puede confiar tericamente en que los niveles mximos existentes para la aflatoxina B1 en los alimentos para el ganado proporcionen un aseguramiento del 100% de que la leche de animales individuales no superaran el lmite legal de 0,05 g/kg de aflatoxina M1. (Figura 3).
4. LEGISLACIN APLICABLE
Los contenidos mximos de Aflatoxinas en alimentacin humana se rigen segn el Reglamento 466/2001 de la Comisin, de 8 de Marzo, (12) por el que se fija el contenido mximo de determinados contaminantes en productos alimenticios y sus posteriores modificaciones. En lo que respecta a la leche, tanto leche cruda como leche para la fabricacin de productos lcteos y leche tratada trmicamente, el contenido mximo en Aflatoxina M1 se fija en 0,05 g/kg. En lo que respecta a la alimentacin animal, la Directiva 2002/32/CE, de 7 de Mayo, (13) incorporada al ordenamiento jurdico estatal a travs del Real Decreto 465/2003, de 25 de Abril, (14) cuyo Anexo fue posteriormente modificado por la Orden PRE/1422/2004, de 20 de mayo (15), establece las sustancias y productos indeseables en la alimentacin animal. Actualmente solo se contemplan lmites mximos para la Aflatoxina B1 tanto para materias primas de alimentacin animal como para piensos. Para alimentacin de ganado vacuno lechero se fija el lmite de 0,005 mg/kg de Aflatoxina B1 y para todas las materias primas 0,02 mg/kg. Por otro lado, en la Recomendacin de la Comisin de 2 de marzo de 2005 (2005/187/CE) (16), relativa a los programas coordinados de controles en el mbito de la alimentacin animal para el ao 2005, recomienda vigilar la frecuencia de aparicin y la concentracin de las siguientes micotoxinas en piensos y materias primas: Aflatoxina B1, Deoxinivalenol, Ocratoxina A, Zearalenona y Fumonisinas.
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Italia indic que en las dos regiones de prevalencia de aflatoxina M1 en leche, el lmite increment como resultado de la incorporacin de maz a la alimentacin animal en la explotacin (6% de muestras testadas en la primera mitad de 2003, aumentando al 7,8% en julio y octubre de 2003).
UK Portugal Espaa Italia Grecia Grecia Alemani a Alemani a Chipre Austria Finlandi a Francia Irlanda Pases Bajos Suecia TOTAL
a
2001 1999 2000/01 1996 1999/00 2000/01 1999 2000 19922003 1999 1999 1999 1999 1999 1999
100 102 92 161 166 132 6537 3618 270 20 296 234 62 30 11 11.831
3 57 3 13 71 50 211 4 26 0 1 0 0 5 0 444
0 2a 0 0 3b 2c 0 0 0 0 0 0 0 0 0 7
FSA, 2001 Martins&Martins, 2000 Rodriguez et al, 2003 Galvano et al, 2001 Roussi et al, 2002 Roussi et al, 2002 NN Bluthgen and Ubben, 2000 Ioannou eta al., 1999 NN NN NN NN NN NN
Leche entera UHT y semidesnatada Leche concentrada y productos crudos c Leche cruda de oveja y productos crudos d No detectable con un lmite de deteccin de 0,03g/kg e No detectable con un lmite de deteccin de 0,02g/kg NN Datos procedentes de los Estado Miembros de la UE
b
De total de 11.831 muestras, el 96,2% se encuentran por debajo de 0,01; el 3,7% entre 0,1-0,05 y el 0,06% por encima del lmite legal de 0,05 g/kg. Espaa La Facultad de Veterinaria de la Universidad Complutense de Madrid, Departamento de Microbiologa e Inmunologa llev a cabo un estudio sobre la presencia de aflatoxina M1 en leche tratada a alta temperatura (en 1985) (3)
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En dicho estudio se cogieron 47 muestras de lecheras de la provincia de Len (130 a 150C de 2 a 10 s), se escogi esta zona por el clima hmedo que podra favorecer el crecimiento de mohos de los alimentos para el ganado y en consecuencia a la contaminacin de leche con aflatoxinas. Las muestras se recogieron los das 1, 7, 14, 21 y 28 de cada mes excepto durante junio y septiembre.
Tabla 3: Distribucin por meses de la concentracin de aflatoxina M1 en muestras de leche comercial (3) N de muestras Negativas Dudosas 3 5 5 3 1 3 4 2 1 2 1
Mes Enero Febrero Marzo Abril Mayo Julio Agosto Octubre Noviembre Diciembre
Probadas 5 5 5 5 5 5 5 3 4 5
Positivas 1
1 4 1 1 3 3
1 1
0,025 0,02; 0,025; 0,032; 0,08 0,04 0,032 0,02;0,025;0,05 0,022; 0,04; 0,1
La ms alta concentracin de aflatoxina fue registrada en una muestra del mes de diciembre (0,1 ng/ml). Las muestras con contenidos ms altos se encontraron en primavera y otoo, ya que los animales entre verano y otoo son alimentados con mezclas. El nmero de detectado en el estudio en invierno es bajo comparado con los datos de otros pases. En este estudio, se concluye, que, debido a los bajos niveles de aflatoxina M1 detectados se puede indicar que los alimentos ingeridos por las animales lecheros no exceden del contenido de aflatoxina B1 permitidos y se sugiere que la leche contaminada tendra que provenir de productos en los cuales la concentracin de aflatoxina B1 es superior a 20 g/kg. En el estudio tambin se concluye que los bajos niveles encontrados responden al efecto de la dilucin de leche contaminada en la central lechera cuando se mezcla con leche no contaminada. Existen otros dos estudios previos de aflatoxina M1 en leche, en los que no se detectaron aflatoxina M1 en 330 muestras de leche esterilizada (1984) y en cambio, en el sur de Espaa (regin de Andaluca) son ligeramente inferiores a los encontrados por la Universidad de Veterinaria de la Complutense de Madrid; las muestras positivas fueron encontradas en invierno y primavera (estas diferencias se pueden deber a los diferentes climas entre el sur y el norte de Espaa). (3)
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Basndose en las concentraciones medias de aflatoxina M1 en leche en 5 regiones, el consumo fue de 0,1 ng/da en la dieta de Africa, 0,6 ng/da en Oriente Medio;3,5 ng/da en Amrica Latina, 6,8 ng/da en la dieta europea y 12 ng/da en la dieta de Extremo Oriente. Cuando esos consumos son expresados como nanogramos de aflatoxina M1 por kg de peso corporal y calculado para un peso de 60 kg, los consumos son 0,002 para la dieta africana, 0,010 para Oriente Medio, 0,058 para Amrica Latina, 0,11 para la dieta Europea y 0,20 para la dieta de Extremo Oriente.
Dieta
Promedio Consumo aflatoxina ng/persona ng/kg/da /da (60 kg) 6,8 0,11 3,5 0,058 12 0,6 0,1 0,20 0,010 0,002
Efecto de los niveles mximos propuestos en alimentos en la ingestin diettica de la aflatoxina M1 Una aproximacin para determinar el efecto de los lmites mximos propuestos en la ingestin diettica es generar las curvas de distribucin para las concentraciones de la aflatoxina M1 en leche con los datos regionales (Figura 4). La curva de distribucin para la dieta regional europea demuestra que fijar el nivel mximo en 0,05 o 0,5 g/kg no tendra ningn efecto para el consumo. La curva de distribucin para las muestras de leche en la regin de Extremo Oriente, para la cual haba relativamente pocos datos, es similar a la de la regin europea. Para la dieta de Amrica Latina, la seleccin de un nivel mximo de 0,5 g/kg tampoco tendra ningn efecto; sin embargo, el uso de un nivel mximo de 0,05 g/kg reducira probablemente el consumo. En la regin de Oriente Medio, donde la leche est ms contaminada, el consumo de aflatoxina M1 disminuira en ambos niveles propuestos (se observa, sin embargo, que el consumo de leche es bajo).
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Figura 4: Curva de distribucin para la concentracin de aflatoxina M1 en leche de acuerdo al GEMS/Foods para las cuatro dietas regionales
La validez y la confiabilidad de estas estimaciones del consumo de la aflatoxina M1 en la leche son limitadas por un nmero de factores:escasos datos sobre las concentraciones de la aflatoxina M1 para las cinco regiones geogrficas y especialmente para Oriente Medio y frica. Como la mayora de los datos sometidos no fueron acompaados por la informacin sobre control de calidad, la validez o la confiabilidad de las estimaciones del consumo que resultan no puede ser determinada. Adems, se dio poca informacin sobre el procedimiento de muestreo usado, y los datos no eran representativos del rea de la cual las muestras fueron tomadas y la concentracin de la aflatoxina M1 en leche poda variar considerablemente dentro de cada regin geogrfica. El uso de diversos mtodos analticos de los varios investigadores afect probablemente las concentraciones divulgadas de la aflatoxina M1 en leche, pues algunos mtodos son ms sensibles que otros.
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mayora indican que tales tratamientos de calor no cambian la cantidad de la aflatoxina M1 y la estabilidad de la aflatoxina M1 en leche durante el almacenamiento en fresco o congelado dieron resultados, pero el almacenamiento de la leche contaminada congelada y otros productos lcteos por algunos meses no aparecan afectar el contenido de la aflatoxina M1. (2) La fabricacin de productos lcteos cultivados, tales como kfir y yogur, tampoco disminuyen perceptiblemente el contenido de la aflatoxina M1. (2)
7. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Este informe ha sido basado teniendo en cuenta los siguientes estudios: 1. EFSA, 2004. Opinion of the Scientific Panel on Contaminants in the Food Chain on a request from the Commission related to Aflatoxin B1 as undesirable substance in animal feed, The EFSA Journal (2004) 39:1-2 (Request N EFSA-Q-2003-035). http://www.efsa.eu.int/science/contam/contam_opinions/294/opinion_cont am_02_en_final1.pdf Henry et al., 2001. Aflatoxin M1. Join Expert Comit on food additivesJECFA 47. http://www.inchem.org/documents/jecfa/jecmono/v47je02.htm
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Jose L. Blanco, Lucas Domnguez, Esperanza Gmez-Luca, Jose F.F Garayzabal, Jose A. Garca and Guillermo Surez (1988) Presence of Aflatoxin M1 in Commercial Ultra-High-Temperature Treated Milk. Applied and Environmental microbiology 54(6): 1622-1623 Importancia y Efectos de la Aflatoxina en los Seres Humanos. Oscar Mauricio Santos Chona. Universidad Autnoma de Bucaramanga. M. Kortabitarte, L. Villegas, J. Masaya - Instituto Lactolgico de Lekunberri, 2001. Determinacin de Residuos Ambientales en leche cruda de vaca y posterior elaboracin de mapa indicativo, considerando las concentraciones de estos contaminantes, por zonas geogrficas. Memorias-resumen de proyecto Contaminantes Ambientales. Resultados de los controles oficiales realizados por la Direccin de Poltica e Industria Agroalimentaria y las DDFF de lava, Bizkaia y Gipuzkoa. International Agency for Research on Cancer, 1993. Monographs Programme on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans, IARC monographs vol. 56 http://www-cie.iarc.fr/htdocs/monographs/vol82/8204.html FAO. Manual on the Aplication of the HACCP System in Mycotoxin Prevention and Control Vicente Sanchis, Sonia Marn y Antonio J.Ramos. Control de micotoxinas emergentes. Situacin legislativa actual. CeRTA (2000)
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7.
8.
9.
10. Directiva 98/53/CE de la Comisin, de Julio de 1998, por la que se fijan mtodos de toma de muestra y de anlisis para el control oficial del contenido mximo de algunos contaminantes en los productos alimenticios. 11. Real Decreto 90/2001, de 2 de Febrero, por el que se establecen los mtodos de toma de muestras y de anlisis para el control oficial del contenido mximo de aflatoxinas en cacahuetes, frutos de cscara, frutos desecados, cereales, leche y los productos derivados de su transformacin. 12. Reglamento (CE) N 466/2001 de la Comisin, de 8 de Marzo de 2001, por el que se fija el contenido mximo de determinados contaminantes en los productos alimenticios. 13. Directiva 2002/32/CE del Parlamento Europeo y del Consejo, de 7 de Mayo de 2002, sobre sustancias indeseables en la alimentacin animal. 14. Real Decreto 465/2003, de 25 de Abril, sobre las sustancias indeseables en la alimentacin animal. 15. Orden PRE/1422/2004, de 20 de Mayo, por la que se modifica el anexo del Real Decreto 465/2003, de 25 de Abril, sobre las sustancias indeseables en la alimentacin animal. 16. Recomendacin de la Comisin 2005/187/CE, de 2 de marzo de 2005, relativa a los programas coordinados de control en el mbito de la alimentacin animal para el ao 2005, de conformidad con la Directiva 95/53/CE del Consejo.
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