Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
ca bazata pe reactia de precipitare in mediu solid imunodifuzie radiala dubla. Metoda latex metoda imunochimica bazata pe reactia de aglutinare. PROTEINA C REACTIVA - CRP Definitie Este o proteina clasica de faza acuta a inflamatiei, care apare ca raspuns rapid la bolnavii cu: - diferite infectii microbiene (cu streptococ, pneumococ etc.) - in inflamatii (reumatism), - in infarctul miocardic, in tumori, etc. Rolul Proteina C reactiva este sintetizata in ficat si initiaza opsonizarea si fagocitoza celulelor care patrund in organism, dar - rolul ei principal rezida in fixarea si neutralizarea substantelor toxice endogene provenite din leziunile celulare. Proteina C reactiva este o proteina care nu exista in mod normal in serul uman. Semnificatie clinica - Ea are importanta alaturi de alte teste cum ar fi VSH si fibrinogen. - Toate cele trei indica prezenta unui sindrom inflamator (este marker al inflamatiei). - Prin proteina C reactiva se poate masura si riscul ca un pacient sa prezinte o boala cardiovasculara. Astfel, daca el are o concentratie de sub 1mg/l atunci riscul este practic 0, iar daca are peste 3mg/l atunci riscul este foarte ridicat. Dozarea CRP e utila in:
depistarea proceselor inflamatorii sistemice (cu exceptia lupusului eritematos diseminat, si a rectocolitei hemoragice) aprecierea eficacitatii tratamentului antiinfectios, sau antiinflamator
detectia precoce a unor complicatii postoperatorii (infectii ale plagii, tromboze, pneumonie) diferentierea intre infectie si reactie de rejet dupa transplant de maduva osoasa
Reactia prin care se pune in evidenta proteina C reactiva este o reactie in urma caruia are loc un fenomen de precipitare (imunodifuzia dublu radiala-Ouchterlony) sau aglutinare (metoda latex). Proteina C reactiva precipita prin testarea serului de cercetat cu un antiser specific in caz de boli inflamatorii. 1. Testul de imunodifuzie dubl radial (Ouchterlony) Aceast metod se bazeaz pe difuzia antigenului i a anticorpilor unul ctre cellalt, ntr-un mediu gelozat, care iniial nu are ncorporat nici un reactant (Rpuntean, 1994). n dou godeuri alturate, decupate dintr-un gel de agar se umplu, unul cu protein anticorp i unul cu protein antigel omoloag, Ag i Ac vor difuza unul spre cellalt iar la locul de ntlnire va aprea o linie de precipitat. Pentru realizarea acestei metode se utilizeaza urmtoarele: - ser de examinat, proaspt sau pstrat la 20oC. - ser de referin (conine PCR Ag standard) - gel de agar - lam de microscop sau cutii Petri - antiser monospecific Mod de lucru - Agarul topit se toarn pe lama de microscop n cantitate de 3,5 ml gel. - Dup solidificare s-au decupat godeuri de 3 mm diametru, n model radial, unul central i 6 periferice. - Godeurile se umplu cu reactani cu ajutorul micropipetei, astfel: n godeul central se pune antiser iar n celelalte se repartizeaz: n I i IV ser de referin iar n II, III, V i VI serurile de cercetat. - Placile au fost puse la termostat, n cutii umede, pentru a se mpiedeca uscarea agarului. - Citirea se face n camer obscur, la o surs de lumin, (dup 2 ore sunt vizibile, dup 4 ore sunt clare, dup 24 ore sunt mult ntrite). Rezultatele se exprim n prezent sau absent
2. Determinarea proteinei C-reactiv (CRP) prin metoda LATEX Este un test calitativ sau semicantitativ. CRP este o -globulin, al crui nivel crete n procesele inflamatorii, n faza acut a unor afeciuni i dup operaii chirurgicale. Principiul metodei Reactivul CRP-Latex este o suspensie de particule de polistiren sensibilizate cu anticorp uman de protein C-reactiv. Cnd reactivul ajunge n contact cu serul care contine anticorpi de CRP, are loc o reacie antigen-anticorp usor de vizualizat, fiind o reactie de aglutinare a latexului. Reactivi i materiale - Reactiv CRP Latex: 2 sau 4 ml de reactiv latex - Control pozitiv: 0,5 ml ser uman, CRP>15mg/l - Control negativ: 0,5 ml ser uman, CRP1mg/l - Lame i baghete de unic folosin - Plci de reacie cu 6 locuri Proba: ser proaspt sau conservat, nehemolizat, fr impuriti Mod de lucru - Se aduc reactivii i serurile de analizat la temperatura camerei - Se pune o pictur (40-50l) de prob i 1 pictur din fiecare control n godeuri separate de pe plac - Se adaug 1 pictur reactiv latex - Se amestec cu bagheta picturile - Se observ prezena sau absena aglutinrii n 3 min Rezultate 1. Rezultat pozitiv apare aglutinare vizibil a particulelor de latex Aceasta reprezint un nivel de CRP 6mg/l n serul testat 2. Rezultat negativ nu apare aglutinare n interval de 3 min Aceasta reprezint un nivel de CRP <6mg/l n serul testat
Valori normale 6 8 mg/l Valoarea CRP crete foarte mult n fazele acute ale bolii, atingnd o valoare de 500 mg/l