Sunteți pe pagina 1din 13

230

Sistem
de vid
Introducerea
probei
Sursa de
ionizare
Analizorul
de mas
Detector
de ioni
Computer

Control
hardware

Achiziie de
date,
procesare i
interpretare
Analiza ionilor
rezultai
Izolarea
ionului
(anumite
specii ionice)
Izolarea ionului
(fragmentarea
ionului indus
colizional)
n
Etapa (1)
Etapa (2) Etapa (3) Etapa (4) Etapa (5)



CAPITOLUL 13

Spectrometria de mas utilizat ca tehnic de detecie n cromatografie

13.1. Introducere

Spectrometria de mas (MS) este o tehnic de investigare cu largi aplicaii n
chimia analitic, cum ar fi: determinarea maselor atomice i moleculare; compoziia
izotopic a elementelor; sau identificarea compuilor organici. Pe lng aceste aplicaii,
ea a devenit una dintre cele mai importante tehnici de detecie n cromatografie, fiind
utilizat att la identificarea analiilor care elueaz din coloana cromatografic, ct i la
determinarea lor cantitativ. nceputul acestei tehnici este datorat lui Thompson (1912),
cel care a nregistrat primele spectre de mas i a sugerat posibila utilizare a acestora n
identificarea substanelor.
[132]
Curnd dup aceast dat, Aston i Dempster ntreprind
primele cercetri bazate pe aceast tehnic privind compoziia izotopic a unor elemente.
Primele spectre de mas pentru compui organici sunt nregistrate n anul 1930, utiliznd
experimente de ionizare i fragmentare a unor hidrocarburi gazoase sub aciunea unui
fascicul de electroni. Primele instrumente MS comercializate apar dup anul 1950, fiind
utilizate n industria de prelucrare a petrolului. Dup anii 1960, spectrometria de mas
devine cea mai important tehnic de detecie att n cromatografia de gaze, ct i n
cromatografia de lichide.

13.2. Componentele unui spectrometru de mas

Principalele componente ale unui spectrometru de mas, redate n figura de mai
jos, sunt: camera de ionizare; separatorul (analizorul) de ioni; detectorul de ioni. In cazul
cuplrii sistemul MS cu unul cromatografic interfaa dintre ele realizeaz etapa 1.


















Fig. 13.1. Schema de baz a unui spectrometru de mas.
[133]


231
Anumite aplicaii pot impune dezvoltarea etapei (3) n sensul mbuntiri cantitii
de informaie care poate fi extras din procesul de ionizare, i n consecin, o cretere
corespunztoare a selectivitii. Secvena de operaii dintre parantezele drepte din figur
alternativa de mai sus poate fi repetat de un numr de ori (n).
Deoarece spectrometria de mas are ca scop caracterizarea fragmentelor
moleculare ionice produse de ctre analit n condiii controlate, i c aceste fragmente
ionice sunt sau ncrcate cu sarcin electric pozitiv sau cu sarcin electric negativ,
maniera de lucru n condiii reale va trebui s defineasc n mod univoc semnul sarcinii
ionilor analizai (+) MS sau (-). n spectrometrele moderne de mas, analiza ionilor
pozitivi i negativi poate fi realizat alternativ, pe durata aceluiai proces, dar niciodat
ntr-o manier simultan.
Va trebui de asemenea menionat faptul c formarea, separarea i caracterizarea
fragmentelor ionice trebuie realizate ntr-un mediu lipsit de interferene de orice natur, cu
alte cuvinte, spectrometrul de mas va trebui s opereze n condiii de vacuum avansat
(funcie de caracteristicile constructive ale analizorului de mas, nivelul vidului poate
varia n intervalul 10
-5
i 10
-12
torri).

13.3. Spectrul de mas

Spectrul de mas este reprezentarea bidimensional a abundenelor individuale
ale fragmentelor moleculare ionice generate n procesul de ionizare n funcie de
rapoartele mas/sarcin corespunztoare (m/z). Fragmentele ionice sunt produse n
etapa de ionizare a unei probe ce poate reprezenta un compus pur sau un amestec de
componeni individuali.
Masa ionilor poate fi descris n urmtoarele trei moduri distincte: (1) masa medie
a ionului reprezentnd suma maselor medii ale atomilor ce l formeaz; masele atomice
medii sunt calculate ca i medie ponderat a maselor izotopice, prin raportarea la
distribuia lor n natur; (2) masa monoizotopic a ionului, reprezint suma maselor
atomice exacte corespunztoare celor mai abundeni izotopi naturali ai atomilor ce intr
n compoziia ionului respectiv; (3) masa ionic nominal reprezint suma celor mai
abundeni izotopi naturali ai atomilor care intr n compoziia ionului n cauz, exprimat
ca numr ntreg. Masele ionice se vor exprima n Daltoni (Da). z reprezint numrul total
de sarcini acumulate de fragmentul molecular ionic n cauz, exprimat n uniti
elementare de sarcin (e).
In Fig. 13.2 este prezentat un detaliu din spectru de mas al atrazinei (intervalul
cuprins ntre 197 i 220 Da). Maniera de prezentare de tip profil spectral presupune o
rezoluie dat
[133]
, caracteristic pentru analizorul de mas utilizat, pe cnd maniera de
reprezentare de tip linie spectral reprezint un mod idealizat, prin care sunt figurate
intensitile doar pentru valorile ntregi ale rapoartelor m/z. Ionul cu cea mai mare
abunden n spectrul de mas se va numi ionul major (este acel ion cu cea mai mare
stabilitate i probabilitate de a se obine). Raportarea abundenelor individuale a tuturor
celorlali ioni la abundena ionului major va conduce la msurtori de abunden relativ
(RA%) n lungul axei Oy. Ionul molecular este ionul produs de ctre moleculele analitului
prin ndeprtarea sau captura unuia sau mai multor electroni.
Interpretarea spectrului de mas poate fi utilizat la identificarea structurii unui
compus organic investigat prin aceast tehnic. Identificarea structural presupune de
regul compararea unui spectru de mas experimental cu spectre MS dintr-o librrie
spectral, stocat n memoria sistemului de procesare a datelor cu care este dotat

232
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
A
b
u
n
d
e
n


i
o
n
i
c


r
e
l
a
t
i
v



(

R
.
A
.

%
)

1
9
7
1
9
8
1
9
9
2
0
0
2
0
1
2
0
2
2
0
3
2
0
4
2
0
5
2
0
6
2
0
7
2
0
8
2
0
9
2
1
0
2
1
1
2
1
2
2
1
3
2
1
4
2
1
5
2
1
6
2
1
7
2
1
8
2
1
9
2
2
0
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Raport mas / sarcin (m/z)
N
N
N
Cl N H
N H
ATRAZIN
Formula molecular: C8H14ClN5
Masa medie Mw = 215.69
Masa monoizotopic Mw = 215.09377
Masa ionic nominal Mw = 215
1
9
8
1
9
9
2
0
0
2
0
1
2
0
2
2
0
3
2
0
4
2
0
5
2
0
6
2
0
7
2
0
8
2
0
9
2
1
0
2
1
1
2
1
2
2
1
3
2
1
4
2
1
5
2
1
6
2
1
7
2
1
8
2
1
9
2
2
0
Spectrul de
linii
Profil Spectral
spectrometrul de mas.





































Fig. 13.2. Detalii ale spectrului de mas al atrazinei pe domeniul m/z [197; 220].


13.4. Sistemul de introducere a probelor n spectrometrul de mas

Probele de interes pot fi aduse n zona de ionizare att n faz gazoas, ct i n
faz condensat (lichid sau solid). Probele supuse analizei prin spectrometria de mas
pot fi n egal msur de natur organic sau anorganic. Probele de natur organic
sunt supuse analizei prin spectrometrie de mas pentru a obine informaia structural
sau confirmarea acesteia, de cele mai multe ori plecnd de la cantiti extrem de reduse.

233
n cazul n care informaia structural reprezint scopul declarat, ionizarea simultan a
mai multor specii moleculare este de dorit a fi evitat. Rezult deci necesitatea separrii
compuilor individuali din amestecurile multicomponent naintea analizei lor prin
spectrometrie de mas. Toate tehnicile de separare (cromatografia n strat subire,
cromatografia de gaze, cromatografia de lichide, cromatografia de fluide n stare
supercritic, cromatografia electrocapilar, cromatografia electrocinetic micelar
tehnic de imobilizare a miceliilor i electroforeza capilar) au fost cuplate cu succes la
spectrometrele de mas, n mod direct sau prin intermediul unor interfee specializate.
Pentru probele de natur anorganic, informaia produs de spectrometria de mas, se
refer la identificarea i determinarea calitativ a atomilor, inclusiv a ponderilor naturale
izotopice asociate. n asemenea cazuri, introducerea probei nu necesit o structur/
construcie special, doar modalitile practice de ionizare sunt mult mai complexe
(bombardarea cu ioni accelerai, plasm cuplat inductiv, etc).

13.5. Ionizarea n spectrometria de mas

Ionizarea prin impact electronic

Ionizarea prin impact electronic presupune coliziunea moleculelor analitului de
interes aduse n stare gazoas cu un flux focalizat de electroni accelerai, n zona de
ionizare. Energia electronilor accelerai este mai mare dect potenialul de ionizare al
moleculelor de analit (n mod curent aceasta este de 70 eV). In urma acestui proces este
probabil ca un electron s ciocneasc o molecul pe care o ntlnete, transfernd o
parte a energiei sale moleculei i provocnd expulzarea unui electron (ionizarea
moleculei). Procesul de ionizare a unei molecule de analit M conduce ntr-o prim etap
la un ion molecular:

M + e
-
M
+
+ 2e
-


Ionul molecular M
+
se poate apoi fragmenta printr-o suit de reacii ce decurg n paralel:

M
+
A
i
+ B
i
+
(i = 1,2,...)

, sau n serie:

M
+
A + B
+

B
+
A + B
+

B
+
A + B
+



Procesele de fragmentare decurg n acord cu structura chimic a moleculelor i vor fi
reluate n cap. 13.8. O caracteristic important a ionilor, moleculari sau formai, este
dat de stabilitatea acestora, care se va regsi n spectrul de mas nregistrat.
Cele mai importante procese de ionizare a unei specii moleculare decurg din
impactul unui electron cu dubletul de electroni , dubletul de electroni , sextetul de
electroni ai unui sistem aromatic, sau electronii neparticipani p ai unui atom (halogeni,
oxigen, azot, fosfor, sulf, etc), reprezentate astfel:

234
C C + e
-
+ e
-
C C
.
+
+ e
-
X:
+ 2e
-
+ 2e
-
X
.
+
C Y + e
-
C Y
.
+
+ 2e
-
+ 2e
-
+
N
S
Introducerea
probei (vapori)
Gaz reactiv
(CI)
Valva
Manometru
Ctre
analizorul
de mas
Vid
Magnet
Magnet
Electrod
de
redirecionare
Anod
Filament
de Reniu
Electroni
primari(70 eV)
Zon de
ionizare
Ecran i fant pentru
focalizarea i accelerarea
electronilor primari
incideni
Surs de
ionizare
Sistem de ecrane cu
fante pentru accelerarea
i focalizarea ionilor ctre
analizorul de mas













In urma proceselor de ionizare de mai sus se formeaz ioni moleculari, cu
sarcin pozitiv distribuit pe atomul sau atomii de la care a avut loc expulzarea unui
electron, a cror stabilitate depinde de prezena substituenilor, dar i a energiei
electronului de impact care a produs ionizarea.
Din punct de vedere instrumental, att ionizarea prin impact electronic (EI
electron ionization), ct i ionizarea chimic (CI chemical ionization), discutat n
continuare, se pot realiza n surse de ionizare avnd construcii foarte asemntoare, aa
cum se prezint n Fig. 13.3.


























Fig. 13.3. Schema de baz a unei surse de ionizare utilizate pentru EI sau CI.
[133]


235
Electronii produi prin nclzirea filamentului de reniu sunt focalizai i accelerai
datorit polilor magnetului, anodului i a ecranului de focalizare / accelerare. Fascicolul
de electroni intr n coliziune cu moleculele de analit (sau moleculele de gaz reactiv) n
aria de ionizare. Modul de alimentare cu gaz reactiv include un robinet de control al
debitului i un manometru. n acest mod, se poate controla numrul ionilor formai n
interiorul sursei. Electrodul de redirecionare este utilizat pentru eliminarea anumitor
electroni a cror apariie este nedorit (electrodul va fi ncrcat cu sarcin pozitiv n
cazul n care se dorete eliminarea ionilor negativii formai prin ruperea moleculelor de
analit i va fi negativ n cazul n care ioni care trebuie nlturai au sarcini pozitive).
Sistemul de ecrane ajut la focalizarea i accelerarea ionilor formai n zona de ionizare
spre analizorul de mas (ecranele sunt ncrcate cu voltaje cresctoare de semn opus
ionilor care se doresc a fi analizai). ntreaga surs de ionizare este funcioneaz n vid
corespunztor prin intermediul pompelor turbomoleculare sau de difuzie.
In ionizarea negativ, datorit formrii ionului molecular ncrcat electric negativ i
n stare energetic superioar (M
-
*), pot avea loc ruperi de legturi n molecula analitului
cu formarea unor fragmente mai mici, ncrcate la rndul lor cu sarcin negativ, aa
dup cum este sugerat n secvena urmtoare:

M + e
-
M
-


M + e
-
M
-
*

M
-
* A
i
-
+ B
i
, i=1,2,

In practic, cel mai utilizat mod de ionizare este cel cu producerea ionilor pozitivi.

Ionizarea chimic

Ionizarea chimic reprezint modalitatea de ionizare a moleculelor de analit ca
urmare a coliziunii lor cu ali ioni produi prin impactul cu electroni ai moleculelor de gaz
reactiv, introduse direct n sursa de ionizare. Existena moleculelor de gaz reactiv n
exces mare n raport cu moleculele analitului de interes (10000 : 1) impune o cretere
substanial a energiei electronilor primari (500 eV). Ionizarea chimic este cunoscut i
sub denumirea de ionizare blnd (soft ionization), deoarece transferul energetic
rezultat ntre ionii gazului reactiv i moleculele analitului nu depete 5 eV. Produii
rezultai n urma ionizrii chimice prezint o stabilitate mai bun din cauza strii
electronice pare (prin comparaie cu starea electronic impar care, de regul, rezult
pentru ionii produi prin impact electronic). Urmtoarele substane sunt folosite n mod
curent ca i gaze reactive (ionii acestora sunt menionai ntre paranteze): H
2
(H
3
+
); CH
4

(CH
5
+
); C
2
H
6
(C
2
H
7
+
); H
2
O (H
3
O
+
); CH
3
OH (CH
3
OH
2
+
); CH
3
CN (CH
3
CNH
+
); NH
3
(NH
4
+
);
CH
3
NH
2
(CH
3
NH
3
+
); H
2
NCH
2
CH
2
NH
2
(H
2
NCH
2
CH
2
NH
3
+
). Pentru ionizarea chimic, mod
negativ, urmtoarele substane sunt utilizate ca i gaze reactive (ionii acestora sunt
menionai ntre paranteze): NH
3
(NH
2
-
); N
2
O n amestec cu CH
4
; CH
4
+ He; H
2
+ He (OH
-
; N
2
O sau amestecat cu N
2
(O
-.
); NF
3
(F
-
); CHF
3
(F
-
); O
2
(O
2
-.
); CH
2
Br
2
(Br
-
); CH
2
Cl
2
(Cl
-
);
CHCl
3
(Cl
-
); CF
2
Cl
2
(Cl
-
).
Interaciile posibile pe durata ionizrii chimice cu ajutorul amoniacului, prin care
agentul de colizionare i inducere a ionizrii devine ionul amoniu (NH
4
+
) sunt ilustrate mai
jos:

:NH
3
+ e
-
NH
3
+
+ 2e
-


236
NH
3
+
+ :NH
3
NH
4
+
+ :NH
2


Interaciile care pot avea loc n sursa de ioni sunt exemplificate pentru cazul n
care drept gaz reactiv se folosete metanul:








Avantajele modului de ionizare chimic sunt: ionizare blnd, posibiliti multiple
de confirmare a masei moleculare a analitului datorit unei game extrem de variate de
interacie respectiv modaliti de producere a ionilor, o aciune selectiv sau universal,
depinznd de natura gazului reactiv, formarea relativ uoar a ionilor negativi, permind
evaluri structurale i termochimice.
Att ionizarea prin impact electronic ct i ionizarea chimic se pot realiza n surse
de ionizare avnd construcii foarte asemntoare, aa cum s-a prezentat n Fig. 13.3.

Ionizarea n cmp electric

Prin metoda de ionizare n cmp electric, moleculele analitului n stare gazoas
sunt aduse n vecintatea unei suprafee curbe (cum ar fi de pild vrfuri sau lame)
supuse unui cmp electric intens (10
7
- 10
8
Vcm
-1
). Moleculele analitului vor fi ionizate
datorit efectului de tunel cuantic al electronilor de valen ctre suprafaa metalic.
Aceast modalitate trebuie s fie considerat ca o ionizare blnd, avnd drept neajuns
major un randament de ionizare relativ sczut.

Ionizarea din faze condensate - faza lichid
Bombardarea cu atomi rapizi (FAB)

Moleculele analitului de interes sunt dispersate ntr-un mediu lichid i cu volatilitate
redus, la nivelul unei suprafee solide poroase i sunt supuse coliziunii (bombardrii) cu
atomi sau ioni caracterizai prin energii cinetice mari (domeniul keV). Utilizarea atomilor
de Xe sau a ionilor de Cs conduce la obinerea unor spectre foarte asemntoare. n
zona din imediata apropiere a suprafeelor solide poroase, molecula de analit
interacioneaz ntr-o manier foarte asemntoare cu ionizarea chimic, prin
producerea speciilor [M+H]
+
sau [M-H]
-
. Cel mai frecvent utilizat mediu lichid de dispersie
este glicerina. FAB este aplicabil moleculelor polare cu mas molecular inferioar
valorii de 20,000 Da. Dac ionii de energie mare nlocuiesc atomii, tehnica de ionizare
este cunoscut i sub denumirea LSIMS (spectrometria de mas a ionilor secundari
2 5 3 4 3 2
6 2 5 2 2 5 2 4 3
5 3 5 3
.
3 5 4
.
4
5 2 5 2
5 5
.
2 3 2 4
.
2
4 3 5 3 2
.
2
.
4
4 2 5 2
.
3
.
4
4 5
-
s
.
4
-
p 4
H H C CH H C
H C H] - [M M H C H H C CH CH
] H [MC M H C CH CH CH CH
] H [MC M H C
] [MCH M CH H H H C CH CH
H C [MH] M H C H CH CH
H C [MH] M H C H CH CH
CH [MH] M CH ; e 2 CH e CH
+ +
+ + + +
+ + +
+
+ + + +
+ + +
+ + +
+ + + +
+ +
+ + + +
+ + + +
+ +
+ + + +
+ + + +
+ + + +
+ + +

237
Introducerea
probei lichide
Introducerea
suportului lichid
vscos
Suprafa solid
poroas (frit)
Tun de atomi /
ioni
Optic pentru
extracia ionilor
Ctre analizorul
de mas
Vid
generai din faz lichid). Sursa de ionizare prin coliziune cu atomi rapizi este redat n
mod schematic n figura urmtoare.




















Fig.13.4. Schema unei surse de ionizare prin coliziune cu atomi rapizi.


Ionizarea chimic la presiune atmosferic (APCI)

Un flux de lichid coninnd moleculele analitului de interes este pompat printr-un
sistem de vaporizare. Jetul de vapori rezultat coninnd de asemenea picturi de lichid
(aflate n continu evaporare sub influena cldurii) va fi orientat ctre zona de
descrcare. Descrcarea electric generat este de tip coroan i se realizeaz ntre
vrful ascuit al unui ac i un contraelectrod discoidal, meninut la un potenial de 1 4kV.
Descrcarea electric ionizeaz moleculele de solvent existente n stare gazoas. O
serie de coliziuni i reacii cu transfer de sarcin ntre ionii generai de solvent i
moleculele de analit, conduce n final la ionizarea acestora din urm. Generarea ionilor
moleculari protonai sau deprotonai [M+H]
+
; [M-H]
-
este n consecin posibil. Ionii
rezultai sunt extrai ctre analizorul de mas prin intermediul unui tub capilar. Maniera
de ionizare chimic la presiune atmosferic este reprezentat schematic n Fig. 13.5
(construcie ortogonal).
Ionizarea chimic la presiune atmosferic se poate utiliza pentru o gam destul de
larg a polaritii moleculelor de interes i tolereaz relativ bine srurile nevolatile sau
tampoanele anorganice din lichidul purttor. Cu toate acestea ionizarea chimic la
presiune atmosferic se folosete cu predilecie pentru compuii apolari. Maniera de
ionizare nu este prea mult influenat de interaciile n soluie ale moleculelor de analit
(prin intermediul fazei purttoare). Ionizarea chimic la presiune atmosferic nu se poate
utiliza n cazul compuilor cu labilitate termic i doar foarte rar poate genera ioni cu
sarcin multipl. Precursorul sistemului de ionizare APCI este cunoscut i sub denumirea
de thermospray (TSP). Varianta thermospray nu a cunoscut niciodat o alternativ cu
aplicabilitate n mod uzual la analize de serie i cu timpul a fost total nlocuit de APCI.

238
Flux de lichid
Flux de N2
Sistem de vaporizare
(pn la 600

C)
+
Descrcare
electric de tip
coroan
+
+
+
+
Electrod ac
Contraelectrod
Curent de N2 nclzit
Capilar de extracie a
ionilor formai
Ctre
analizorul
de mas
Vid
Faz gazoas
Descrcare electric de tip coroan


























Fig. 13.5. Sursa de ionizare chimic la presiune atmosferic (construcie ortogonal).

Ionizarea de tip electrospray (ESI sau AP-ESI)

Un flux de lichid coninnd moleculele analitului de interes este amestecat cu azot
i forat s treac printr-un tub capilar din oel inoxidabil meninut la un potenial de 3-4
kV. Se formeaz astfel un con de detenie (cunoscut sub denumirea de con Taylor)
coninnd picturi de lichid suspendate n faz gazoas. n contra curent se va aplica un
flux de azot nclzit, care determin micorarea continu a volumului picturilor. Acest
proces are ca rezultat o cretere substanial a densitii cmpului electric pe suprafaa
picturii pn n momentul n care se atinge limita Reyleigh. Ionii rezultai sunt extrai din
picturi i orientai prin intermediul unui tub capilar ctre analizorul de mas. Principiul de
funcionare al ESI este ilustrat n Fig. 13.6.
Maniera de ionizare de tip electrospray reprezint cea mai blnd tehnic de
ionizare cunoscut. Este destinat compuilor polari, chiar i n cazul unui caracter relativ
nevolatil al acestora. Ionii sunt ejectai din picturile ncrcate cu sarcin sub form
protonat [M+H]
+
sau deprotonat [M-H]
-
. Randamentul de ionizare este puternic
influenat de chimia n soluie a analitului situat n fluxul purttor. ESI accept cu greu
sruri nevolatile i tampoane anorganice. Poate genera uor ioni cu sarcin multipl,
motiv pentru care este des utilizat la caracterizarea compuilor cu mase moleculare
mari.
Performane analitice superioare ale manierei de ionizare prin electrospray se pot
obine prin reaciile ion-ion n sursele de ionizare multipl. Aceste soluii tehnice conduc

239
Flux de lichid
Flux de N2
Contraelectrod
Curent de N2
nclzit
Capilar de extracie a
ionilor formai
Ctre
analizorul
de mas
Vid
4 kV
Dispersia picturilor
ncrcate electric
(con Taylor)
Limit Reyleigh
Reducere
de volum
+ -
+
- +
-
+
+
- +
-
+
+
-
+
-
-
+
+
+
-
+
-
+
-
+
+
-
+
-
+
+
-
+
-
-
+
+
+
-
+
-
+ +
-
+-
-
-
+
-
+
+
+
-
+
-
+
+
Pictura iniial
(+ ioni predominai)
Explozie
Cluster
solvent-ion
Extracia ionului
la simplificarea spectrelor ESI i la urmrirea n detaliu a mecanismelor de reacie.
Sursa de ionizare de tip electrospray poate fi relativ uor miniaturizat.
Nanosprayul i reeaua de emitori electrospray pot ameliora n manier considerabil
creterea vitezei de prelucrare a probelor. Realizarea la nivel micro a proceselor de
preparare, concentrare i separare a probelor este astfel mult nlesnit.
Manierele de lucru n sistem tandem APCI / AP-ESI au fost de asemenea testate,
conducnd la nalt sensibilitate a determinrilor i la o vitez crescut de procesare a
datelor.



















Fig. 13.6. Schema de funcionare a unei surse de ionizare de tip AP-ESI.

Ionizare multifoton (MPI)

Moleculele analitului de interes sunt dispersate ntr-un flux lichid, care amestecat
cu azot, genereaz efectul de separare. Att moleculele de solvent ct i cele de analit
sunt vaporizate apoi ntr-un tub de cuartz i sunt aduse n zona de iradiere n faz
gazoas omogen. Fotoionizarea direct a moleculelor analitului de interes este din
punct de vedere statistic puin probabil, ceea ce ar conduce la randamente de ionizare
reduse. Introducerea n fluxul de azot utilizat pentru sprayere a unui dopant poate avea
repercursiuni importante asupra randamentului de ionizare. Moleculele dopantului sunt

240
Flux de
lichid
Flux de
N2
Sistem de vaporizare
Tub de cuartz
Zona de iradiere
Curent de N2 nclzit
Optic pentru
extracia
ionilor
Ctre
analizorul
de mas
Faz gazoas
omogen
Surs de fotoni
Flux de
dopant
cele care ionizeaz primele, iar mai apoi ionii respectivi interacioneaz cu moleculele
analitului.
Utilizarea unui laser acordabil emind n regim pulsat poate conduce la o cretere
substanial a randamentului de ionizare. Vor trebui considerate cel puin dou etape
distincte: 1. fotoni de tip n vor excita n mod coerent moleculele analitului de interes,
aducndu-le pe un nivel electronic intermediar (proces de rezonan); 2. iradierea
secvenial a acestor intermediari cu fotoni de tip m care conduce la ionizare.
Prin creterea puterii (intensitii) radiaiei laser este posibil s se controleze
procesul de ionizare, plecnd de la un proces blnd i ajungndu-se, dac se dorete, la
o fragmentare molecular avansat. Schema unei surse de ionizare MPI este prezentat
n Fig. 13.7.
















Fig. 13.7. Schema de funcionare a unei surse de ionizare multifoton (MPI).


Faza solid - Ionizarea prin desorbie din matrice asistat Laser (MALDI)

Proba se amestec iniial cu o matrice lichid (de exemplu acid sinapinic) aleas
tocmai datorit proprietilor sale de a absorbi i a disipa energia transferat de fasciculul
laser. Raportul molar analit matrice este un parametru operaional important de care
analistul trebuie s in seama. Odat preparat proba se va transfera la nivelul unei
suprafee solide. Caracteristicile acestei suprafee i geometria sa trebuie de asemenea
s fie considerate ca influennd rezultatul analizei. Dup aplicare, att proba ct i
matricea sunt convertite la o faz condensat (solid) prin evaporare sub flux de gaz sau
vacuum. Astfel, apare fenomenul de cocristalizare a probei cu matricea. Variaia de
dimensiune i de distribuie spaial a clusterilor sunt fenomene ce pot apare frecvent la
nivelul suprafeei de depunere. Instrumentele moderne ncorporeaz un dispozitiv
microscopic permind n egal msur micarea probei, pentru a se permite astfel
selectarea acelor cristale care sunt ulterior supuse excitrii Laser. Selectarea zonei de
impact (sweet spots) poate fi asistat cu ajutorul unei camere digitale.
Fasciculul modulat de laser genereaz un volum de particule ejectate din suprafaa
solid, coninnd ioni i molecule neutre aparinnd n egal msur matricei i analitului.
Acest volum este n continu expansiune (cu viteze supersonice) plecnd de la suprafaa
probei n unghi drept. Laserele UV sunt cele mai folosite (N
2
la 337 nm sau Nd-YAG).

241
x
y
+
-
H
+

Desorbie
Desolvarea
Ctre
analizorul
de mas
Transfer de
protoni
Camer
digital
Suprafa de
depunere
Prob
Matrice
Surs laser
Cocristalizarea probei
cu matricea
Distribuie
spaial
Laserele IR (CO
2
sau Er-YAG) sunt utilizate pentru situaii cu totul speciale. Durata unui
puls este de 1 la 10 ns i suprafaa de impact este de circa 0.01 mm
2
. Excitarea laser
este repetat la intervale determinate de timp (frecvena este de circa o excitare pe
secund - 1 Hz ). Frecvena de excitare va trebui aleas n acord cu tipul de analizor de
mas utilizat. Analizorul timpului de zbor (TOF) este frecvent cuplat la sursa de ionizare
MALDI.
MALDI (prezentat n Fig. 13.8) reprezint o manier de ionizare blnd, avnd
tendina de a produce ioni ncrcai cu o singur sarcin electric. Ambele moduri de
ionizare (+) i (-) pot fi realizate, dei maniera (+) este de departe cea mai comun.
Urmrirea ionilor negativi este ns des utilizat n analiza acizilor nucleici. n mod
normal, MALDI nu produce fragmentare molecular. Studiile biochimice de investigare
structural utiliznd MALDI vor presupune n consecin fragmentarea moleculei
precursor pe cale enzimatic sau chimic, nainte de ionizarea propriu zis. Aplicaiile
MALDI acoper domenii de interes extrem de variate, plecnd de la identificarea aditivilor
n industria alimentar i caracterizarea compuilor macromoleculari n analiza de mediu
(corelarea datelor analitice cu structura i impactul asupra mediului).



























Fig. 13.8. Sursa de ionizare MALDI.

Direciile principale de evoluie ale tehnicii de ionizare MALDI pot fi rezumate dup
cum urmeaz:
1) cuplarea interfeelor n regim de presiune atmosferic peste caracteristicile

242
MALDI, avnd ca rezultat apariia unor noi tehnici denumite AP MALDI sau Laser
Desorption (LD APCI). Aceste tehnici separ n ultim instan procesele de desorbie
de cele de ionizare, eliminnd astfel impunerea legat de substratul care trebuie s
nlesneasc desorbia i ionizarea n acelai timp, simplific modalitatea de preparare a
probelor i mresc n mod sensibil randamentul de ionizare.
2) Tehnica MALDI fr suport matricial presupune depunerea probei ca atare pe
un suport de siliciu poros confecionat din material cu rezistivitate joas (0.001 - 0.005
x cm) de tip n
+
. O astfel de soluie tehnic simplific n mod substanial procedura de
preparare a probelor, reduce la minim zgomotul (mai ales n intervalul m/z mic) i
favorizeaz astfel analiza ionilor cu mas redus. Cu toate acestea, absorbia optic,
conductibilitatea termic, dimensiunile porilor i porozitatea total reprezint tot atia
parametrii critici pentru suportul din siliciu.
3) cuplarea metodelor de separare n faz lichid cu sistemul MALDI MS s-a
putut realiza prin electrodepunerea unui film de lichid pe o plac aflat n continu
micare. Aplicarea unor pulsuri de tensiune negativ (-2 kV) cu durat scurt (circa 20
ms) mpiedic distribuia efluentului provenit din coloana cromatografic pe o suprafa
pre extins. Acizii dihidroxibenzoic i respectiv -ciano-4-hidroxicinamic sunt utilizai ca
matrice n astfel de cazuri. Interfeele care realizeaz depunerea continu n regim de
vacuum a efluentului sunt de asemenea disponibile.
4) Dezvoltarea unor suprafee de afinitate pentru interfeele MALDI, care s
permit concentrarea selectiv i ndeprtarea interferenelor n probe complexe. Astfel
de suprafee pot fi modificate chimic (hidrofobice, ionice, amfionice sau cu metal
imobilizat) sau biochimic (anticorp imobilizat, ADN imobilizat, enzim sau receptor
imobilizai).

Ionizarea cu fragmente rezultate din fisiune sau ionizarea prin desorbie din plasma

Moleculele analitului de interes sunt depuse pe o suprafa de Ni (foi subire).
Pulsuri cu fragmente de fisiune ale izotopului
252
Cf vor fi orientate i focalizate asupra
probei. ocul termic va avea ca rezultat vaporizarea ionilor mobili (H
+
, Na
+
, i H
-
). Ionii
astfel produi vor interaciona cu moleculele de prob, imediat dup ocul termic,
transformndu-le n ioni. PDI poate fi aplicat la studiul structural al moleculelor mari
(pn la 50.000 Da). Depunerile pe film de nitroceluloz conduc n egal msur la
formarea de ioni cu sarcin egal cu unitatea, ct i la ioni cu sarcini multiple. PDI este
considerat a fi ca un precursor MALDI.

Spectrometria de mas a ionilor secundari (SIMS)

Un flux de ioni (monoatomici sau poliatomici, pozitivi sau negativi, provenind de la
gazele inerte sau de la elemente cu accentuat caracter pozitiv / negativ) colideaz proba
depus pe o suprafa metalic. Ionii secundari produi prin ejecia din suprafaa probei
vor fi apoi colectai i analizai. Aceast tehnic poate opera att cu probe de natur
organic ct i anorganic. n primul caz, sunt formai ioni moleculari i aduci cu sodiu.
Imagistica la nivelul suprafeei (SIMS static) ct i harta tridimensional de distribuie
(SIMS dinamic) a ionilor int sunt posibile. Natura ionilor primari alei poate determina
pe cei secundari, care sunt transferai n analizorul de mas. Teoriile cinetic i de
chemosorbie explic ejecia diferiilor ioni din prob, plecnd de la natura i proprietile
ionilor primari.