ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE

PLANTAS (Sci)
Publicado el 21 enero, 2012 por admin
ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE PLANTAS
(REVISTA CIENTFICA (2008)
de la Universidad Cientfica del Sur, Lima Per
Jorge Araujo Daz ; Ramss Salas Asencios)
RESUMEN
Se realiza una revisin de los principales compuestos con actividad antimicrobiana que se pueden obtener a
partir de extractos de plantas y derivados de ellas. Adems, se describen las caractersticas y algunos
resultados obtenidos a partir del uso de los dos principales mtodos de evaluacin de la actividad
antimicrobiana: el turbidimtrico y el ensayo por difusin en placa.
Palabras clave: Actividad antimicrobiana, extractos de plantas, ensayo turbidimtrico, difusin en placa.

INTRODUCCIN
Desde hace unos aos, el empleo de plantas medicinales y de productos derivados de las mismas est
aumentando de manera importante. Esto se debe a una serie de factores, entre los cuales debemos destacar
en muchos casos el conocimiento preciso de su composicin qumica, y el hecho de que en la actualidad
dicha utilizacin se fundamenta en numerosos ensayos farmacolgicos in vivo como in vitro, as como en
ensayos qumicos.
De esta forma, el uso de las especies vegetales medicinales que se ha venido haciendo en forma emprica y
basada en la tradicin tiene hoy una base cientfica.
Una planta medicinal es considerada como un complejo laboratorio de sntesis y degradaciones en el que
generalmente coexisten componentes con diversas estructuras qumicas, y su efecto en muchas ocasiones se
debe a varios de estos componentes. Adems de los principios activos que son en su mayor parte metabolitos
secundarios, en las plantas se encuentran los metabolitos primarios y una serie de sustancias consideradas
inertes con funcin plstica.
La farmacopea peruana tiene muchas plantas con aplicaciones curativas. Diversos investigadores han
sealado que existen ms de 3,000 especies, por lo que la cantidad abrumadora de medicinas originadas por
este tipo de plantas debiera convencer a los cientficos del valor y alcance de la investigacin etnobotnica,
ecolgica, fitogeogrfica, fitoqumica y farmacolgica, a fin de lograr su validacin cientfica.
El objetivo del presente trabajo es resaltar la importancia de las plantas como productoras de compuestos
antimicrobianos, presentando los principales componentes qumicos que se pueden aislar con esta actividad,
as como la principal metodologa para analizarla experimentalmente.
I. PLANTAS ANTIMICROBIANAS
Aproximadamente, el 60% de la poblacin mundial utiliza plantas y productos derivados de ellas en su
medicacin. Estos productos naturales hoy en da son considerados como una de las medicinas de gran
importancia por su efectividad teraputica. De las 520 nuevas drogas aprobadas entre 1983 y 1984, el 39%
fueron productos naturales o derivados de productos naturales, y el 60 a 80% de drogas antibacterianas y de
anticancergenos son derivados de productos naturales.
Por ejemplo, del desarrollo de drogas no proteicas se han obtenido derivados generados de productos
naturales como la sinvastatina, lovastatina, enalapril, ciprofloxacina y ciclosporina, entre otros, y agentes
anticancergenos como el taxol y docetaxol (Harvey, 2000).
Sin embargo, la actividad teraputica no slo se puede conseguir luego de procesos de extraccin y
purificacin de principios activos, sino directamente de la planta misma o de algunos extractos relativamente
simples de obtener. Por ejemplo, el jugo de arndano tiene una accin de prevencin de las recurrencias
sintomticas de infeccin al tracto urinario; el consumo diario de 300 ml reduce la bacteriuria en mujeres post-
menopusicas pero no en nias con vejiga neurognica (Kontiokari y col., 2001).
En un estudio de accin inhibitoria de crecimiento antimicrobiano, se mostr que la asociacin de extractos
acuosos de 2 plantas, Erythroxilum novogranatense variedad truxillense Hoja de Coca de Trujillo y Plantago
major, presentaron sinergismo, comparado con el estudio realizado por separado de cada uno de los
extractos; se realizaron las determinaciones fitoqumicas en muestras de ambas especies y los extractos
acuosos fueron esterilizados separadamente mediante filtros Milipore para realizar las determinaciones de
accin inhibitoria de crecimiento frente a bacterias y hongos, encontrndose una proporcin de asociacin
para los dos extractos acuosos empleados de 50:50, considerndose como ptimo para este estudio (Bazalar
y col., 1998).
Ocinum micranthum W., planta conocida como sanialbahaca, es utilizada para tratar infecciones respiratorias
en regiones amaznicas de Amrica del Sur, Mxico y el Caribe. Se determin la composicin qumica del
aceite esencial de las hojas de dicha planta, y tambin se la enfrent a bacterias como Klebsiella pneumoniae,
S. aureus, E. coli, Bacillus cereus, Shigella sp., y hongos del gnero Aspergillus, confirmndose que dicho
aceite puede ser considerado como un buen agente antibacteriano y antifngico (Fuertes y col., 1997).
Los cidos ceantico y ceanotrico, provenientes de la planta Ceanothus americanus, han demostrado
efectos inhibidores del crecimiento de Streptococcus mutans, Actinomyces viscosus, y Porphyromonas
gingivalis; y los extractos etanlicos del propleo han mostrado buena actividad antimicrobiana contra estos
mismos microorganismos orales (Katsura y col., 2001).
Los extractos crudos de Psoralea corylifolia, un rbol nativo de China, poseen actividades reportadas
antimutagnicas, antimicrobianas y de hormona juvenil de insectos; adems, un extracto aceitoso en hexano
obtenido a partir de sus semillas present actividad antimicrobiana contra Staphylococcus aureus. Se ha
considerado que el responsable de estas actividades es el bakuchiol, un isoprenoide fenlico aislado de las
semillas y hojas de esta planta (Katsura y col., 2001).
Es comn el empleo de partes vegetales con la finalidad de obtener varios efectos teraputicos y que han sido
respaldados por estudios cientficos. Entre las variadas aplicaciones teraputicas de los vegetales se incluye
la accin antibacteriana. Los hallazgos obtenidos del estudio de vegetales con potencial teraputico podrn
servir como instrumento de apoyo mdico-social para un mayor grupo poblacional, principalmente el ms
carente, estando tambin la industria farmacutica ms interesada en los conocimientos de esta rea (De
Paula y Martnez, 2000).
Nuevas fuentes de productos antimicrobianos, especialmente fuentes vegetales, estn siendo investigadas. El
pblico hoy en da tiene ms problemas con la sobreprescripcin y el mal uso de antibiticos tradicionales.
Adems, mucha gente est interesada en tener ms autonoma sobre su cuidado mdico. Una multitud de
componentes vegetales se encuentra fcilmente disponible a travs de los comercializadores de plantas y
productos naturales, tiendas naturistas, con lo que la automedicacin con estas sustancias se hace cada vez
ms comn. El uso de extractos de plantas, como tambin de otras formas alternativas de tratamientos
mdicos, tom gran popularidad a finales de la dcada de 1990. En 1996 se report que las ventas de
medicinas botnicas se incrementaron en un 37% con respecto a 1995 (Cowan, 1999).
II. GRUPOS PRINCIPALES DE COMPONENTES ANTIMICROBIANOS DE LAS PLANTAS

Las plantas tienen una casi ilimitada habilidad de sintetizar sustancias aromticas, gran cantidad de ellas son
fenoles o sus derivados de oxgenos sustituidos. Muchos son metabolitos secundarios de los cuales por lo
menos 12000 han sido aislados, un nmero estimado menor en un 10% del total.
En numerosos casos estas sustancias sirven como mecanismos de defensa de las plantas contra la predacin
por microorganismos, insectos y herbvoros. Algunos, tales como los terpenoides, dan a las plantas sus
olores; otros (quinonas y taninos) son responsables del pigmento de las plantas. Muchos componentes son
asimismo responsables del sabor de las plantas (el terpenoide capsaicina en caso del aj), y algunas de las
hierbas y especies usados por los humanos para sazonar los alimentos producen compuestos medicinales
tiles.
Los compuestos fitoqumicos antimicrobianos tiles pueden ser agrupados en varias categoras, como las
siguientes:
a. Fenoles y Polifenoles: El cido cafeico (Fig. 1) y el cinmico son representantes de estos grupos, ambos
con accin antimicrobiana, antiviral y antifngica. Tambin se pueden mencionar a los fenoles simples y
cidos fenlicos, catecoles y eugenoles (estos ltimos considerados bacteriostticos).
La actividad antimicrobiana del catecol y del pirogallol est directamente relacionada con el nmero de grupos
hidroxilos que tiene el derivado fenlico. Tambin estn las quinonas (como las antraquinonas con accin
bactericida para Pseudomonas), flavones, flavonoides, flavonoles y catequinas. Parte de los flavonoides
inhiben in vitro el crecimiento de V. cholerae, Streptococcus y otras bacterias. Los flavonoides tambin
exhiben actividad antiviral; los taninos presentan actividad astringente. Se considera que la accin de los
fenoles y polifenoles contra los microorganismos se debe a la inhibicin enzimtica posiblemente por accin
sobre los grupos sulfihidrilos de sus aminocidos de cistena o por medio de reacciones ms inespecficas con
protenas bacterianas.
Los compuestos fenlicos que poseen una cadena lateral a nivel de C3 en un bajo nivel de oxidacin y que no
contienen oxgeno, son clasificados como aceites esenciales y a veces se citan como agentes antimicrobianos
bacteriostticos contra hongos y bacterias (Cowan, 1999).
Katsura y col. (2001) purificaron bakuchiol a partir de semillas de Psoralea corylifolia y en solucin con DMSO
al 5%. El anlisis de la actividad antimicrobiana se realiz leyendo absorbancias a 610 nm (turbidez) de
cultivos microbianos incubados por 24 hrs. Para determinar un posible crecimiento posterior al enfrentamiento
con bakuchiol (conteo de clulas viables), se tomaron alcuotas de estas muestras diluidas en presencia de
Tween 80 (para inactivar el bakuchiol) y se sembraron en placa, incubndose por 48 horas para leer Unidades
Formadoras de Colonias (UFC).
Hubo una inhibicin de crecimiento de S. mutans directamente proporcional a la concentracin de bakuchiol,
encontrndose una actividad bacteriosttica in vitro a una concentracin de 5 g/ml y una actividad bactericida
in vitro a 20 g/ml. El efecto bactericida del bakuchiol fue dependiente del tiempo y la produccin de glucanos
insolubles en agua (principal factor de virulencia para S. mutans) fue prcticamente inhibida.
Tambin se analiz la actividad antimicrobiana del bakuchiol contra diferentes especies de bacterias,
incluyendo Streptococcus mutans, S. sobrinus, Porphyromonas gingivalis, Enterococcus faecalis, E. faecium,
Lactobacillus acidophilus, L. plantarum, L. casei, S. sanguis, S. salivarius, Actinomyces viscosus, generando
diversos valores del MIC que van desde 1.0 hasta 4.0 g/ml y una concentracin esterilizante entre los 5.0
hasta los 20.0 g/ml.
b. Quinonas: Son anillos aromticos con dos sustituciones cetnicas. Se encuentran en amplia distribucin
en la naturaleza y son altamente reactivos en reacciones de xido-reduccin. Producen radicales libres y
generan complejos irreversibles con aminocidos nucleoflicos de las protenas, generando su inactivacin.
El rango de la actividad antimicrobiana de las quinonas es amplio, actuando posiblemente sobre las
adhesinas expuestas en la superficie de las bacterias, sobre los polipptidos de la pared celular y sobre las
enzimas unidas a membranas (Cowan, 1999). Por ejemplo, una antraquinona proveniente de Cassia italica,
un rbol de Paquistn, tiene accin bacteriosttica sobre Bacillus anthracis, Corynebacterium
pseudodiphthericum y Pseudomonas aeruginosa, y tiene accin bactericida sobre Pseudomonas
pseudomalliae. La Hipericina (Fig. 2) es una antraquinona extrada de Hypericum perforatum que ha sido
descrita como un antidepresivo, pero tiene tambin actividades antimicrobianas.
Plantas de la familia Borragincea se han caracterizado por producir naftoquinonas en sus races, las cuales
han sido utilizadas en numerosas culturas indgenas como colorantes en cosmticos y alimentos, y para
aplicaciones medicinales por su actividad antitumoral, antiinflamatoria y antimicrobiana (Brigham y col., 1999).
c. Flavonas, flavonoides y flavonoles: Son estructuras fenlicas que contienen un solo grupo carbonilo.
Estos compuestos son sintetizados por las plantas en respuesta a la infeccin antimicrobiana, y su actividad
sobre las bacterias probablemente se deba a su capacidad de generar complejos con protenas extracelulares
y protenas solubles, as como una actividad sobre la pared celular muy similar a la de las quinonas. Los
flavonoides lipoflicos pueden perturbar la integridad estructural de la membrana celular (Fuertes y col., 1997).
Las catequinas derivados de los flavonoides, han sido estudiadas como los compuestos que generan la
actividad antimicrobiana in vitro en el t verde, sobre Vibrio cholerae O1, Streptococcus mutans y Shigella,
principalmente. Las catequinas tienen una actividad inactivadora sobre la toxina de Vibrio cholerae e inhibe las
glicosil transferasas en S. mutans.
Ratas de laboratorio que recibieron en su dieta 0.1 % de catequinas del t, redujeron en un 40% la presencia
de caries inducida (Cowan, 1999).
d. Taninos: Conforman un grupo de sustancias fenlicas polimricas capaces de precipitar gelatina en
solucin, una propiedad conocida como astringente. Estn divididas en dos grupos: hidrolizables y
condensados. Los taninos hidrolizables estn basados en el cido glico, usualmente como steres mltiples
con la D-glucosa, mientras que los taninos condensados ms importantes (a veces llamadas
proantocianidinas) son derivados de monmeros flavonoides.
Se ha considerado que los taninos, en muchas bebidas como el t verde y el vino, tienen actividades
reforzadoras de la salud (estimulacin de la actividad fagocitaria, actividad antitumoral mediada por el
hospedero y un amplio rango de actividad antiinfecciosa). En las plantas, los taninos tienen una accin
inhibitoria del crecimiento de insectos y perturban la digestin de rumiantes. Se cree que la actividad
antimicrobiana de estos compuestos se debe a su interaccin sobre las adhesinas, protenas de la pared
celular, y a su capacidad de unirse a polisacridos (Cowan, 1999).
Las plantas de las especies de Vaccinium contienen taninos condensados llamados proantocianidinas. Estas
sustancias son compuestos fenlicos estables que pueden prevenir la expresin de las fimbrias P de E. coli
dentro de sus actividades antibacterianas, y adems tienen actividades antivirales, antiadherentes o
antioxidantes (Kontiokari y col., 2001).
e. Cumarinas: Son compuestos de los cuales se conoce muy bien su accin antitrombtica, antiinflamatoria y
vasodilatadora. Un gran ejemplo de estos compuestos es la warfarina (Fig. 4), usada como un anticoagulante
oral y como un rodenticida. Se ha visto que tiene accin antiviral, asimismo, otras cumarinas tienen actividad
antimicrobiana sobre Candida albicans en trabajos in vivo en conejos.
Estos trabajos fueron realizados en vista de las crnicas que, en 1954, indicaban el uso de cumarinas en
lavados vaginales para el tratamiento de candidiasis en mujeres gestantes. Sin embargo, su uso interno es
discutido por sus efectos contraceptivos en animales (Cowan, 1999).
f. Terpenoides y aceites esenciales: Los terpenos o terpenoides son activos contra bacterias, virus, hongos
y protozoarios. Se ha reportado que los terpenoides actan contra Listeria monocytogenes. Se cree que esta
actividad antimicrobiana se debe a una perturbacin de la estructura de la membrana celular por su naturaleza
lipoflica. La capsaicina (Fig. 5) tiene actividad bactericida sobre Helicobacter pylori; aunque tiene un poder
muy irritante sobre la mucosa gstrica, se ha demostrado que afecta el sistema nervioso, el cardiovascular y
el digestivo. Se ha sugerido que la capsaicina tambin podra incrementar el crecimiento de Candida albicans.
El cido betulnico es un triterpenoide que muestra actividad inhibitoria del virus VIH. El petalostemumol
presenta una actividad excelente contra Bacillus subtilis y Staphylococcus aureus, aunque tiene una menor
actividad sobre bacterias Gram negativas y Candida albicans. Por otro lado, los terpenos previenen la
formacin de lceras gstricas y disminuyen la severidad de las lceras existentes, aunque no se sabe a
ciencia cierta si esta actividad se debe o no a su accin antimicrobiana (Cowan, 1999).
g. Alcaloides: Los Glicoalcaloides de especies de Solanum podran ser tiles contra la infeccin por VIH y
tambin contra las infecciones intestinales relacionadas con el SIDA. Otros alcaloides tienen efecto contra
parsitos como Giardia y Entamoeba. La berberina (Fig. 6) es un alcaloide representativo por su actividad
potencialmente efectiva contra Tripanosoma y Plasmodium. Se ha descrito que tiene actividad microbicida
(por ejemplo, sobre Giardia y Entamoeba), pero se cree que su accin antidiarreica probablemente se deba a
sus efectos sobre el tiempo de trnsito del bolo alimenticio en el intestino delgado (Cowan, 1999).
h. Lectinas y Polipptidos: La actividad antimicrobiana de los pptidos fue descrita por primera vez en 1942.
Tienen a veces grupos con carga positiva y contienen enlaces disulfuro entre residuos de cistena. Su
mecanismo de accin principalmente se explica como la formacin de canales inicos en la membrana del
microorganismo o la inhibicin competitiva de la adhesin de protenas a los receptores polisacridos del
hospedero. Un reciente inters se ha enfocado en estudiar la actividad antiVIH de pptidos y lectinas. Las
tioninas son pptidos txicos para levaduras y bacterias Gram positivas y Gram negativas, como por ejemplo
las Fabatinas que inhiben el crecimiento de Pseudomonas, E. coli, Enterococcus, etc.
Los pptidos cclicos son pequeos en tamao y nmero de aminocidos (por lo general menos de 15
aminocidos) y son sintetizados por bacterias y plantas. Tambin se han encontrado pptidos grandes cclicos
unidos por los extremos de 29 a 31 aminocidos en plantas de la familia Rubiaceae (caf).
Estos pptidos contienen seis residuos de cistena que pueden ser alineados y comparten un 45% de
homologa de secuencia (Fig. 7). Entre ellos se tiene a la circulina A y B del rbol tropical africano Chassalia
parviflora, la ciclopsicotride de la planta tropical de Sudamrica Psychotria longipes, y la kalata de la planta
africana Oldenlandia affinis (Tam y col., 1999).
Estos pptidos macrocclicos tienen tambin en comn un tipo inhibidor de motivo estructural nudo de
cistena, el cual contiene un patrn de enlaces disulfuro entre los residuos de cistena I-IV, II-V, y III-VI. Estos
motivos estructurales, junto con una estructura de hoja beta con tres cadenas, tambin han sido hallados en
toxinas peptdicas e inhibidores de proteasas de diversos orgenes.
Las circulinas A y B fueron descubiertas durante un programa de pruebas de actividad anti-VIH de diversos
compuestos, al igual que la kalata y la ciclopsicotride en pruebas de nuevas sustancias antibiticas. Aunque la
kalata present accin uterotnica y la ciclopsicotride present inhibicin de la unin de la neurotensina a su
receptor, no se sabe mucho de la funcin que cumplen estos pptidos en las plantas. La kalata mostr una
fuerte actividad antimicrobiana contra bacterias Gram positivas, particularmente S. aureus (MIC 0.26 M),
mientras que su actividad fue moderada contra Gram negativas del gnero Klebsiella y hongos del gnero
Candida. La circulina A tuvo una actividad similar a la kalata, pero mostr una accin ms potente contra S.
aureus (MIC 0.19 M), aunque no tuvo actividad contra Micrococcus luteus.
Estos pptidos macrocclicos son diferentes a las defensinas vegetales de cadena abierta, que son de mayor
tamao. Los macrocclicos son ms pequeos, compactos y rgidos en cuanto a estructura (Friedrich y col.,
1999).

III. OTRAS ACTIVIDADES ANTIMICROBIANAS
Recientemente, investigaciones qumicas llevadas a cabo sobre algas marinas (rodofitas o algas rojas, feofitas
o algas pardas, clorofitas o algas verdes, cianofitas o cianobacterias, y dinoflagelados) han demostrado que
estos organismos producen una amplia variedad de metabolitos secundarios biolgicamente activos, con
estructuras moleculares nicas, no encontradas en otros organismos, los cuales han mostrado ser capaces de
inhibir el crecimiento de ciertas bacterias, virus y hongos.
En cuanto a la actividad antibitica de las microalgas, se pueden nombrar algunos de estos compuestos que
ya han sido identificados: cido acrlico obtenido en la microalga Phaeocystis, cido .-linolnico en los
extractos metanlicos de Spirulina platensis, Chlorococcum, Dunaliella primolecta, amfidinol 2, hidroxilpolieno
en el extracto del dinoflagelado Amphidinium klebsii. Las microalgas, y ms especficamente las
cianobacterias (algas azul-verdosas), constituyen una importante fuente de compuestos antivirales.
Un estudio reciente de 600 especies de cianofitas mostraron que cerca del 10% de los extractos probados
tuvieron actividad contra el virus Herpes simplex tipo 2 (VHS-2) y contra el virus de inmunodeficiencia tipo 1
(VIH-1). Entre los compuestos responsables de esta actividad se puede nombrar a una molcula similar a la
clorofila (feofrbido) aislada de Dunaliella primolecta, a un sulfolpido obtenido de Lyngbya lagerheimii y a una
protena de bajo peso molecular (cianovirn) aislada de Nostoc ellipsosporum.
Un grupo de cientficos japoneses aisl de Spirulina platensis un polisacrido sulfatado, el calcio-spiruln, que
present actividad contra el VHS-1 y el VIH-1. La actividad antiviral de esta molcula fue comparada con un
sulfatodextrano mostrando una actividad superior. El calcio-spiruln inhibe la replicacin del virus, creando
una perturbacin en las interacciones inicas entre las membranas glicoprotecas del virus y los fosfolpidos
presentes en las membranas de la clula del husped, inhibiendo as la fusin celular de ambos. Asimismo, el
calcio-spiruln mostr un tiempo de vida media en la sangre de ratn significativamente ms largo (150
minutos) que el sulfatodextrano (30 minutos). Los resultados de este estudio son prometedores. El calcio-
spiruln presenta todas las caractersticas necesarias de un buen antiviral: no estimula la replicacin del virus,
tiene actividad a bajas concentraciones, posee elevado tiempo de vida media en la sangre y tiene poca
actividad anticoagulante. Aunado a esto, la tecnologa del cultivo del gnero Spirulina est totalmente
desarrollada, por lo que el abastecimiento de materia prima no presenta problema.
Queda, sin embargo, la puesta a punto de los procedimientos de extraccin a nivel industrial de este principio
activo. Un ejemplo de esto ltimo lo tenemos en los trabajos realizados desde 1996 por un grupo de
investigadores italo-franceses sobre la variacin estacional de la actividad de los extractos de Schizymenia
dubyi contra el virus VIH-1. Esta macroalga es una alga roja colectada en las costas de Sicilia cuya
particularidad es la de poseer un elevado contenido de cido gulurnico, un tipo de cido no propio de las
algas rojas. Esta alga contiene efectivamente un polisacrido denominado glucorono-galacto-sulfato,
responsable de la actividad antiviral. Esta actividad disminuye en ciertas pocas del ao (otoo-invierno) y
llega al mximo de abril a julio, con la correspondiente disminucin en el contenido de galactosa y sulfatos en
el polisacrido (Freile, 2001).

IV. APROXIMACIONES EXPERIMENTALES
Existen sustancias generalmente de origen natural cuya efectividad biolgica no puede ser determinada por
sus propiedades qumicas o fisicoqumicas. En ese caso, para evaluar su actividad, se emplean mtodos de
dosificacin biolgica. En estos se compara cuantitativamente el efecto de una muestra sobre un sistema
biolgico con el efecto producido por una preparacin estndar en las mismas condiciones. Se obtiene as un
valor de potencia relativo a un estndar de referencia.
Los dos mtodos ms comnmente usados para evaluacin de actividad antimicrobiana son:
a) Mtodo turbidimtrico o ensayo en tubo:
Se basa en la incubacin de un medio de cultivo lquido inoculado con un microorganismo sensible al
antibitico en presencia de una concentracin conocida del agente antimicrobiano. Luego de un tiempo
adecuado se detiene el crecimiento y se evala el mismo por medidas turbidimtricas. El uso de un
espectrofotmetro o un fotocolormetro para medir los cambios de densidad ptica en base a la mayor o
menor turbidez producida por el crecimiento microbiano, evita la posible subjetividad de lecturas en una escala
nefelomtrica de McFarland. La base cuantitativa del ensayo es la relacin entre la concentracin del
antibitico y la densidad ptica del medio de cultivo en donde hubo crecimiento microbiano.
En los estudios de actividad antibacteriana de propleo, para hallar la Concentracin Mnima Bactericida
(CMB), Ota y col. (1998) trabajaron a partir del liofilizado de dicha sustancia, el cual se suspendi en una
solucin hidroalcohlica con una concentracin final de 50 mg/ml; de esta suspensin se dispensaron, en
diferentes tubos, volmenes de 0.1, 0.2, 0.3 hasta 1.0 ml y se complet a 5 ml con el medio de cultivo,
obteniendo as concentraciones de propleo desde 1 mg/ml hasta 10 mg/ml; luego se procedi a agregar a
cada tubo 0.1 ml de inculo bacteriano y se incub a 37C por 24 horas. Como la adicin del propleo
ocasiona una turbiedad en el medio de cultivo, no fue posible observar el crecimiento bacteriano, por lo que de
cada tubo se extrajo 0.1 ml y se sembr en tubos con caldo de cultivo puro que se incubaron a 37 C por 24
horas para observar si hubo crecimiento microbiano. Se concluy que el propleo presenta actividad
antibacteriana in vitro siguiendo este orden de sensibilidad: Streptococcus mutans > Lactobacillus sp. >
Sthaphylococcus aureus > Sthaphylococcus epidermidis.
En un trabajo de pptidos antimicrobianos, el MIC de cada pptido fue determinado por el uso de un ensayo
de dilucin en caldo del mtodo de Amsterdam modificado. Diluciones seriadas de cada pptido fueron
preparadas con cido actico 0.01% en microplacas de 96 pocillos. Cada pocillo fue inoculado con 0.1 ml del
organismo de prueba en Caldo MH a una concentracin final de 2 x 104 a 105 UFC/mL (Friedrich y col.,
1999). Este procedimiento permite cuantificar el MIC o concentracin mnima inhibitoria como la primera
dilucin del extracto en la cual el crecimiento se inhibe despus de un perodo de incubacin (generalmente
18 horas a 37 C), y a la concentracin mnima bactericida como la primera dilucin en la cual ya no se
detecta presencia de bacterias (Araujo y col., 2004).
b) Mtodo de difusin en placa:
Se basa en la difusin radial de una solucin de extracto o de antibitico desde un reservorio a travs de una
capa de agar que ha sido inoculada con un microorganismo sensible al antibitico. Se confrontan diferentes
medidas de la sustancia a ensayar en placas con medios de cultivo slido inoculado con microorganismos
adecuados. Las placas se incuban para permitir el desarrollo del microorganismo. Durante la incubacin, el
antibitico difunde desde su reservorio (que puede ser un disco de papel filtro, un pozo excavado en el mismo
medio de cultivo con inculo bacteriano, o pequeos cilindros colocados en la superficie del medio) mientras
la poblacin microbiana aumenta por divisin celular. La respuesta obtenida es una zona clara o halo de
inhibicin del crecimiento bacteriano en torno a los reservorios El lmite de la zona de inhibicin se forma
cuando se alcanza la concentracin crtica del antibitico, es decir, la mnima concentracin que inhibe el
crecimiento de la poblacin microbiana presente.
Los halos de inhibicin se miden con la mayor precisin posible: se utiliza regla, vernier un sistema de
ampliacin de imagen y proyeccin sobre una pantalla. La base cuantitativa del ensayo es la relacin entre el
dimetro de la zona de inhibicin y la concentracin del antibitico. La determinacin de sensibilidad por
difusin en agar es habitualmente suficiente; sin embargo, en ciertas situaciones se recomienda la
determinacin del MIC por mtodos turbidimtricos (Harvey, 2000).
El gradiente de concentracin es inversamente proporcional a la distancia de la fuente y depende del volumen
de la sustancia en ella, y el crecimiento de microorganismos depende de la poblacin inicial y de la velocidad
de crecimiento.
Estudios con Rubus urticaefolius mora, utilizada en Centro y Sur Amrica para el tratamiento de afecciones
de la cavidad oral, demostraron una gran accin antibacteriana al efectuar extractos hidroalcohlicos, en
especial del fruto. El mtodo empleado para la determinacin de la actividad fue el de Difusin en Agar con
orificios. La extraccin consisti en macerar separadamente hojas, tallo y frutos en solucin hidroalcohlica al
70% durante 5 das a temperatura ambiente, y luego se elimin el alcohol por evaporacin (De Paula y
Martnez, 2000).
Para un estudio de actividad antibacteriana y antifngica de flavonoides y alcaloides de Lupinus ballianus c.p.
smith jera, se obtuvieron extractos etanlicos de las hojas desecadas, de las cuales se extrajeron los
principios activos mediante cromatografa. La determinacin de la actividad antimicrobiana de flavonoides y
alcaloides se realiz mediante el mtodo de excavacin en placa-cultivo utilizando el medio TSA y los
microorganismos S. aureus, Bacillus cereus, Micrococcus luteus y Klebsiella pneumonae, adems del hongo
Aspergillus nger (Fuertes y col., 1997).
Mbwambo y col. (2007) trabajaron con extractos de raz y tronco de Terminalia brownii. La prueba se realiz
con el mtodo de difusin en disco, usando extractos con solventes de diferente polaridad, yendo desde el
ter de petrleo hasta agua. El resultado fue una nula actividad antimicrobiana en los extractos obtenidos con
los solventes menos polares (ter de petrleo), y una actividad antimicrobiana incrementada en intensidad y
nmero de especies bacterianas susceptibles conforme aumenta la polaridad del solvente. Lo ms notorio de
este trabajo es que el extracto acuoso mostr la mayor actividad antimicrobiana de todos los dems extractos,
pero una menor accin toxignica en bioensayos usando camarones de mar (los extractos acuosos son los
ms frecuentemente usados por los curanderos y naturistas). Se usaron discos de papel filtro (Whatman N1)
de 5 mm de dimetro, impregnado con extractos crudos (5 g/disco) o antibiticos estndar (10 mg/ml de
gentamicina) o antimicticos (20 g/disco de clotrimazol), usando TSA o Sabouraud glucosado segn el caso.
La incubacin se realiz a 37C por 24 horas. Se hace cada prueba por triplicado tanto para los extractos y los
estndares, se toman promedio. Los reportes se realizan usando las medias de las zonas de inhibicin
(dimetros de inhibicin menos dimetro del disco de papel, o sea 5 mm). El ndice de actividad (IA) se calcula
como la media de la zona de inhibicin del extracto entre la media de la zona de inhibicin producida por la
droga estndar.
Estudios en aceites esenciales han demostrado actividad antibacteriana. En la UNMSM se extrajeron los
aceites esenciales de tres plantas: Tagetes pusilla, Senecio tephrosiodes y Lepechinia meyenii, utilizando
bacterias Grampositivas como S. aureus y Gramnegativas como Salmonella typhi, S. typhimurium, V.
cholerae. Los aceites fueron extrados por arrastre de vapor, y la actividad antimicrobiana fue llevada a cabo
mediante el mtodo modificado del cromatograma, realizndose las lecturas por medio de los halos de
inhibicin de los discos impregnados con el aceite. Los resultados mostraron accin antibacteriana frente a las
bacterias evaluadas (Morales, 1996).
La alicina (allyl 2-propeno tiosulfinato) se produce durante la molienda de los dientes de ajo. Su formacin
depende de la enzima aliinasa presente en las clulas de la cscara sobre la aliina de las clulas del mesfilo.
La destilacin al vapor de machacados de ajo durante la produccin del aceite grlico, usado con fines
teraputicos, producen metil y alil sulfoderivados de la alicina. Se ha considerado que la alicina es la
responsable de la actividad antimicrobiana de los homogenizados de dientes de ajo (y del aceite grlico) sobre
Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Helicobacter pylori. Se us la tcnica de difusin radial en placa
usando agar TSA, con una incubacin de 48 horas a 37 C. Las placas, previamente al uso de los extractos,
fueron preparadas conteniendo el cultivo bacteriano y fueron dejadas en reposo dentro de un extractor de aire
seco a fin de evitar la prdida de actividad del ajo por volatilizacin. Adems, este trabajo ha demostrado que
al enfrentar el aceite grlico con el cultivo bacteriano se debe tener en cuenta la naturaleza hidrofbica del
aceite, por lo que estudios anteriores no mostraron actividad antibacteriana (Ross y col., 2001).
En Cuba se estudi la actividad antimicrobiana de diferentes concentraciones de un extracto fluido (etanol
80%) de hojas de copal Schinus terebinthifolius. Se utilizaron cepas ATCC de microorganismos que incluyen
a Staphylococcus aureus como Gram-positivas y Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa como Gram-
negativas, y la levadura Candida albicans. El mtodo utilizado fue el de excavacin en placa y difusin en agar
para adicionar los extractos.
El inculo de microorganismos precultivados en medio lquido permiti un crecimiento en csped en el agar
con una concentracin de 108 cel/mL. Las placas se incubaron a 37C durante 24 horas, y luego se evaluaron
los resultados mediante la lectura en milmetros del dimetro del halo de inhibicin de crecimiento. Los
resultados obtenidos mostraron que aun a la menor concentracin (1%) se aprecia inhibicin del crecimiento
de todo microorganismo y la respuesta es incrementada gradualmente con la concentracin hasta el 80%
(Martnez y col., 2000).
Los resultados de un trabajo sobre actividad antibacteriana de propleos argentinos demostraron la influencia
de la vegetacin en la composicin qumica y, como consecuencia de ello, en la actividad biolgica; es decir,
la composicin de los propleos vara de acuerdo a su origen botnico y fitogeogrfico. El objetivo de este
estudio fue determinar la validez del uso popular de propleos como agentes antibiticos. Para dicho ensayo,
se obtuvo un extracto etanlico de propleos en el cual se embebieron discos de papel Whatman N 4 (5 ml) y
luego se colocaron en placas con agar MH conteniendo la suspensin bacteriana apropiada. Los discos
contenan cantidades variables del extracto de propleo; las placas se incubaron a 37C por 24 horas, y se
probaron cepas de bacterias como S. aureus, Streptococcus pyogenes, Enterococcus faecalis, K.
pneumoniae, P. aeruginosa, E. coli, entre otras. Los resultados se interpretaron por los halos de inhibicin de
crecimiento bacteriano, y el MIC se determin con un software basado en la ecuacin de Michaelis-Menten.
Se observ que todos los propleos mostraron actividad antimicrobiana sobre las bacterias Gram-positivas y
no sobre las Gram-negativas (Ota y col., 1998).
Para obtener un ensayo de accin bactericida, Friedrich y col. (1999) tomaron por toda la noche un cultivo de
E. coli y lo diluyeron hasta 10-2 en caldo MH fresco, dejndolo crecer hasta la fase logartmica (D.O600 0.6) o
estacionaria (D.O600 de 2) para luego diluirlo en medio fresco, produciendo una concentracin de trabajo de
108 cel/mL. Los pptidos o antibiticos a ensayar fueron adicionados a 4 veces sus MICs, y estas
suspensiones fueron incubadas a 37C despus de la adicin del pptido. Las muestras fueron removidas a
intervalos regulares, diluidas y plaqueadas sobre placas de agar MH para obtener un conteo viable.
La investigacin de tioglicsidos en plantas del gnero Tropaeolum demostr que dichos metabolitos poseen
actividad antimicrobiana y antifngica. Para determinar la actividad antimicrobiana, se aplic la tcnica de
dilucin en placas de Agar, con diferentes concentraciones del extracto etanlico puro obtenido de hojas,
flores y frutos de Tropaeolum majus (los extractos contienen el tioglicsido y sus productos de hidrlisis
determinados mediante cromatografa y la formacin de derivados). Las pruebas antibacterianas se
efectuaron con cepas de S. aureus, E. coli, Bacillus subtilis, Klebsiella pneumonae y Proteus vulgaris. Para
comprobar la actividad antifngica, se hicieron pruebas cualitativas utilizando la tcnica de difusin en placas
de agar, y en tubos para determinar la concentracin mnima inhibitoria.
Se utilizaron cepas de hongos dermatofitos y Candida albicans. Se concluy que los extractos etanlicos y
acuosos de hojas, flores y frutos tienen un metabolito secundario (mayor en frutos) que se agrupa dentro de
los glicsidos. Las hojas, flores y frutos presentaron actividad antimicrobiana y antifngica (Cumpa y col.,
1991).

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. ARAUJO, J.; CRDOVA, B.; RODRGUEZ, M.; SALAS, R. 2004. Cuantificacin de la actividad
antimicrobiana de Caesalpinia spinosa contra Staphylococcus aureus. Resmenes del III Congreso Peruano
de Plantas Medicinales y Fitoterapia.
2. BAZALAR, D.; CHOQUESILLO, F.; MILLA, H.; HERRERA, O.; FELIX, M. 1998. Accin inhibitoria de
crecimiento de la asociacin de los extractos acuosos de Erythroxilum novogranatense var. Truxyllense y
Plantago major frente a bacterias y hongos. Ciencia e Investigacin. 1 (2). 24 30.
3. BRIGHAM, L.A.; MICHAELS, P.J.; FLORES, H.E. 1999. Cell-specific production and antimicrobial activity of
naphthoquinones in roots of Lithospermum erythrorhizon. Plant Physiology. 119: 417 428.
4. COWAN, M. 1999. Plant Products as antimicrobial agents. Clinical Microbiological Reviews. 12(4): 564
582.
5. CUMPA, N; GUERRA, M; VEJAR, V; FUENTES, C. 1991. Avances en la investigacin de tioglicsidos en
plantas del gnero Tropaeolum, actividad antibacteriana y antifngica. Boletn de la Sociedad Qumica del
Per.
6. DE PAULA, J.; MARTNEZ, A. 2000. Accin antibacteriana de extractos hidroalcohlicos de Rubus
urticaefolius. Rev. Cubana Plant. Med. 5(1): 26-9.
7. FREILE, Y. 2001. Algas en la botica. Avance y Perspectiva. 20: 283 292.
8. FRIEDRICH, C.; SCOTT, M.; KARUNARATNE, N.; YAN, H.; HANCOCK, R. 1999. Salt-resistant alpha-
helical cationic antimicrobial peptides. Antimicrobial agents and chemotherapy. 42 (8): 1542-1548.
9.FUERTES, C.; ROQUE, M.; TRISTAN, M. 1997. Flavonoides y alcaloides de Lupinus ballianus con actividad
antibacteriana y antifngica. Instituto de Microbiologa UNMSM.
10. HARVEY, A. 2000. Strategies for Discovering Drugs from Previously Unexplored Natural Products. Drug
Discovery. 5(7). Review.
11. KATSURA, H.; TSUKIYAMA, R.; SUZUKI, A.; KOBAYASHI, M. 2001. In vitro antimicrobial activities of
bakuchiol against oral microorganisms. Antimicrobial agents and chemotherapy. 45 (11): 30093013.
12. KONTIOKARI, T.; SUNDQVIST, K.A.J.; NUUTINEN, M.; POKKA, T.; KOSKELA, M.; UHARI, M. 2001.
Randomised trial of cranberrylingonberry juice and Lactobacillus GG drink for the prevention of urinary tract
infections in women. British Medical Journal. 322 (30): 1 5.
13. MARTINEZ, M; LOPEZ, M; MOREJON, Z y RUBALCABA, Y. 2000. Actividad antimicrobiana de un
extracto fludo al 80% de Schinus terebinthifolius raddi copal. Rev. Cubana Plant. Med. 5(1): 23-25.
14. MBWAMBO, Z.H.; MOSHI, M.J.; MASIMBA, P.J.; KAPINGU, M.C.; NONDO, R.S. 2007. Antimicrobial
activity and brine shrimp toxicity of extracts of Terminalia brownii roots and stem. BMC Complementary and
Alternative Medicine. 2007, 7:9.
15. MORALES, L. 1996. Estudio in vitro de la actividad antimicrobiana de aceites esenciales de tres plantas
del Per. Tesis para optar el grado de bilogo. UNMSM.
16. OTA, C.; MUZETTI, P.; SCHIMIDIT, C.; TSUNEZI, M. 1998. Actividade da prpolis sobre bacterias
isoladas da cavidade bucal. LECTA, Braganca Paulista. 16 (1). 73-77.
17. ROSS, Z.M.; OGARA, E.A.; HILL, D.J.; SLEIGHTHOLME, H.V.; MASLIN, D.J. 2001. Antimicrobial
properties of garlic oil against human enteric bacteria: evaluation of methodologies and comparisons with garlic
oil sulfides and garlic powder. Applied and environmental microbiology. 67 (1): 475480.
18. TAM, J.P.; LU, Y.A.; YANG, J.L.; CHIU, K.W. 1999. An unusual structural motif of antimicrobial peptides
containing end-to-end macrocycle and cystine-knot disulfides. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96: 89138918.