UNIVERSITATEA DE STIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINARA

CLUJ-NAPOCA
PROF. CARMEN SOCACIU
STUDENI
BELBE GIORGIANA, BOGTEAN ANDREEA, BOLOG SIMONA,
COLDEA CLAUDIA,CONTRA MONICA
Referat.clopotel.ro
INTRODUCERE
Antibiotice i antibactericide
Termenul de antibiotic este folosit pentru o gam larg de compui att naturali ct i
semi-sintetici, care au efect antibacterian.
Antibioticele se impart n cinci clase: peniciline, tetracicline, macrolide, aminoglicoe i
amfenicoli. !ulfoaminele, nitrofuranii si c"inolonele nu sunt antibiotice n ade#ratul sens al
cu#ntului pentru c sunt sintetice.
Aceti compui sunt utiliate de mul$i ani n tratementul bolilor animalelor productoare
de carne, lapte i ou. %e asemenea au mai fost folosi$i i pentru pre#inerea anumitor boli, dar
i pentru accelerarea creterii.
&egisla$ia 'niunii (uropene pri#ind utiliarea antibioticelor
)entru prote*area snt$ii consumatorilor 'niunea (uropean a stabilit limite ma+ime
pentru reidurile de produse medicamentoase n $esuturile animaliere pro#enite. Aceste limite
au se ncadrea ntre factori de ,--,-- pentru a asigura o "ran lipsit de reiduri noci#e.
Anumite antibiotice au fost interise pentru animalele productoare de carne, lapte i
ou.
!trategii analitice pentru determinarea reidurilor de antibiotice
&a ora actual e+ist pu$ine metode capabile s msoare concentra$iile de antibiotice la
limitele impuse de '( pentru c unele antibiotice nu sunt solubile n sol#en$i organici, ceea ce
a ngreunat e+tragerea reidurilor $i stabilitrea concenta$iilor lor din $esuturi. Alte antibiotice
nu sunt suficient de #olatile sau sunt prea instabile la temperaturi nalte pentru a permite
analia lor folosinr ./ sau ./-0!. Astfel multe din metodele de msurare a reidurilor de
antibiotice se baea pe 1)&/. /u toate acestea 1)&/ nu este o metode suficient de
specific pentrua fi utiliat ca referin$ n '(.
PENICILINE
)enicilinele 2fig ,-3-acidul 4-aminoampicilinic sunt administrat animalelor productoare
de carne, lapte i ou din moti#e terapeutice dar i prolifice. 0anipularea catenei laterale fost
a modificat spectrul antibacterian al penicilinei pentru a include att bacteriile gram-poiti#e,
ct i cele gram-negati#e.
5
6 gam larg de procedee &/-0! a fost aplicat pentru analia penicilinei n $esuturi,
dar i n lapte. !-au nregistrat metode care folosesc att ioni poiti#i, ct i ioni negati#i.
/ompara$ia acestor metode n ceea ce pri#ete sensibilitatea este dependent de instrumentele
folosite, dar i de te"nicile de ioniare.
'n numr mare de cercettori au folosit metoda cu ioni poiti#i. 0ecanismul de
fragmentare presupune desc"iderea inelului 7-lactam, urmat de "idratarea i pierderea
dio+idului de carbon.
8n ,9:9 T;c<o=s<a et al. a aplicat &/-0! la penicilina . n laptele de bo#in. &aptele
a fost diluat cu un #olum ec"i#alent de acetonitril-metanol-ap 2 >-:5-:5-, #?#?#3 pentru ca
proteina s precipite. %up aceea a fost centrifugat. )entru msurare s-a folosit un
spectrometru de mas @innigan 0at >:--. !istemul &/ consista dintr-un cartu Aro=nlee
)"en;l !p"eri-B cu fa mobil de iopropanol -.50, acetat de amoniu i acid acetic
2 ,5.B::B.B:5, #?#?#3. &6%-ul a fost ,-- Cg?l baat pe monitorarea ionului D0E1F
E
la m? GGB
i D0E1E1
5
6-/6
5
F
E
la m? G-9.
Ho;<sner et al. a de#oltat aceast metod aplicnd-o i pentru clo+acilin, ampicilin i
amo+acilin n laptele de bo#in. )entru a optimia sensibilitatea metodei pentru amo+icilin
s-au monitoriat ionii D0E1F
E
la m? G44 i D@E1F
E
la m? 5-I datorit abundan$ei de ioni
D0E1E1
5
6E/6
5
F
E
la G>-. &6%-urile au fost estimate la ,--, 5--, 5-- Cg?l. n timp ce al$i
cercettori au folosit &/-0! pentru confirmare, linearitatea a fost ob$inut cu coeficien$ii de
corela$ie de -.9994. /ompara$ia fcut ntre ni#elele de clo+acilin din lapte determinate cu
&/-'H i &/-0! a demonstrat apropierea reultatelor.
&/-0! a fost folosit mpreun cu detectarea 'H de Aoison et Al. pentru a confirma
preen$a penicilinei n lapte. %up precipitarea proteinei probele au fost aplicate unui cartu
Aond (lut /
,:
!)( din care penicilinele au fost eluate cu aceto-nitril -.-,5B 0 i acetat de
amoniu 24-:>-, #?#3. !epararea &/ a fost ob$inut folosind o coloan Jo#a-)a< /
,:
cu fa
mobil de acetonitril -.,B 0 i acetat de amoniu 2,-:9-, #?#3. s-a folosit un spectrometru de
mas H. Trio KK. /ercettorii au declarat c rspunsul penicilinei . m? GB5 cu concentra$ie
de B Cg?<g a fost slab.
Ho;<sner i )ac< au studiat fragmentarea folosind te"nici electrospra; i ionspra; cu
/id pentru a reproduce informa$ia structural a penicilinei . i clo+acilinei. @ragmente din
ionii de D0E1E1
5
6-/6
5
F
E
nu au fost detectate la electrospra;. /um s-a crescut poten$ialul, s-
au format fragmente de ioni pro#enite de la inelul 7-lactam. &a diferem$e mai mari depoten$al
s-au format ioni a#nd #alori de m? sub ,--.
!tudii ec"i#alente asupra spectrului de ioni negati#i folosind Anal;tica electrospra; 0!
0odel ,--B>I-G conectat la un spectometru de mas 1a=lett L)ac<ard B9:9A. 8n general
metoda cu ioni negati#i a produs semnale cu intensit$i mai mici comparati# cu metoda ioni
poiti#i. @ragmentarea reultat din decarboilarea i desfacerea inelului 7-lactam, a format
ioni D0-1-/6
5
F
-
7-lactam la m? 5:9 i D@-1-1
5
6F
-
la m? ,95 pentru penicilina ..
8n concluie folosirea metodelor &/-0! pentru confirmarea penicilinelor poiti#e la
&/-'H nu a dat reultatele corespuntoare pentru c nu a ntrunit standardele &od-urilor.
TERTACICLINE
Tetraciclinele 2fig ,3, deri# din Streptomyce i sunt acti#e mpotri#a unei game largi
de microorganisme gram-poiti#e i gram-negati#e. Ac$ionea prin in"ibarea biosinteei
proteice. Tetraciclinele nu au #olatilitatea necesar pentru ./-0!. &/-0! a fost ns aplicat
cu succes pentru analia acestor compui.
G
Mi*a< et al. a de#oltat o metod pentru determinarea tetraciclinei, o+itetraciclinei,
clortetraciclinei n lapte folosind &/-0!. 'n filtrat de lapte a fost pus ntr-un cartu /
,:
!)(,
care a fost splat cu ap i metanol. Reidul de tetracilin a fost eluat n acid o+alic. Au fost
folosite un 1a=lett-)ac<ard 1)B99:-A i un spectometru 1) B9::A. @aa mobil consista
dintr acetonitril -.-B0, acid o+alic i metanol. 0etanul a fost folosit ca ga reacti#. %atele au
fost preentate n concentra $ie normal ,--Cg?l.
8n ,99I a fost descoperit o metod pentru determinarea tetraciclinei, o+itetraciclinei,
clortetraciclinei n muc"i i rinic"i folosind ioniarea c"imic la presiune atmosferic &/-
0!. )robele au fost e+trase n glicin. %up adi$ionarea de sulfat de amoniu, e+tractul a fost
centrifugat, iar supernatanul a fost cur$at folosind cartue de ciclo"e+il care au fost splate cu
ap i metanol. Tetraciclinele au fost eluate n metanol, uscate i reconstiuite n faa mobil
care consta din 5- m0 de acid o+alic ,- Cg?l i acetonitril. )robele au fost analiate folosind
spectrometrul de mas H. )latform KK. )entru fiecare compus ionii monitoria$i corespundeau
la D0EJF
E
, D0EJ-J1
G
F
E
i D0EJ-1
5
6F
E
. @aa mobil a permis reolu$ia tetraciclinelor.
0etoda a fost #alidat la B--5-- Cg?<g din muc"i i G---,5-- Cg?<g din rinic"i. !-a do#edit
c adi$ia de acid o+alic este necesar pentru a mri reolu$ia i forma picurilor.
6<a i colaboratorii au folosit n ,99> @AA 2@ast Atom Aombardment3 &/-0! pentru
analia tetraciclinei, do+acilinei, o+itetraciclinei, clortetracicli-nei n miere i a tetraciclinei,
o+itetraciclinei, clortetraciclinei n ficat, rinic"i i muc"i de bo#in folosind ionia$ia
electrospra; &/-0!-0! cu disocia$ia cu coliiune indus. 0etoda lor presupunea amestecul
probei cu solu$ie tampon de (%TA-0cKl#aine de p1 >.-. amestecul a fost centrifugat i filtrat
prin faa solid folosind ubn cartu Aond (lut /
,:
care a fost precondi$ionat cu solu$ie apoas
de (%TA. Reidul de tetracilin a fost eluat folosind acetat de etil i metanol. Apoi a fost
uscat diol#at n ap. !epararea a fost fcut folosind o coloan T!M !uper 6ct;l, fa
mobil fiind acetonitril 5BN n solu$ie apoas -.-BN de acid triofloroacetic. !pectrometrul de
mas folosit a fost @innigan T!O I---. metoda a fost #alidat pentru cele patru tetraciline la o
concentra$ie de ,-- Cg?<g.
8n concluie folosirea &/-0! n analia reidurilor de tetracicline a produ trei metode
#alidate la concentra$ii rele#ante. &/-0! pare s ofere i o metod de a msura i studia
iomerii structurali ai clortetraciclinei care sunt imprtan$i n determinare con$inutului de
reiduri n alimente.
MACROLIDE
0acrolidele sunt un grup de compui care con$in ,5, ,>, ,4 inele macrociclice la care
sunt ataa$i amnioglucide sau glucide neutre. 2fig G3.
'n singur test &/-0! pentru determinarea reidurilor a fost de#oltat pentru fiecare
membru din aceast grup, cu e+cep$ia *oamicineiP i un test capabil s detectee toa$i cei B
compui.
)leasance et al. a raportat metoda ionspra; &/-0! pentru confirmarea eritromicinei A
n $esut de somon. 6 prob din muc"i de somon a fost omogeniat de dou ori n acetonitril,
centrifugat i apoi fiftrat supernatantul. @iltratele combinate au fost e+trase cu "e+an pentru
ndeprtarea grsimilor. Acetonitrilul a fost alcaliniat cu "idro+id de natriu. !olu$ia a fost
apoi amestecat cu diclormetan. %up adi$ia de solu$ie apoas de Ja
5
1)6
>
amestecul a fost
agitat energic. /lorur de sodiu n stare solid a fost adi$ionat pentru a facilita separarea
stratelor apoase de cele organice. %iclormetanul a fost ndeprtat cu solu$ie de clorur de
sodiu, uscat i reidurile reconstituite n metanol. &a 1)&/ s-a folosit o coloan de Qorba+
R+-/
:
, folosind ca eluant solu$ie apoas de acetonitril con$innd i -.5N acid formic. A fost
solosit spectometrul de mas !cie+ A)K KKK. @olosind &/-0! i &/-0!-0! cu /K%,
>
eritromicina a putut fi detecdtat la -.-, i -.-B C?<g. %e asemenea au putut fi detectate i un
mare numr de metabolite i produi de degradare.
/u toate acestea s-a cerut o metod de cur$are pentru c analia a doar cte#a probe
cerea nlocuirea coloanei.
8n ,99>, !anders i %elepine, cel mai acti# grup n analia 0! a macrolidelor, descriu o
metod &/-0! pentru analia spiramicinei n muc"i de bo#in. !piramicina a fost e+tras
din probe de muc"i n cloroform. (+tactul a fost aplicat intr-un cartu Aond (lut %iol care a
fost mai nti splat cu cloroform. Reidul de spiramicin a fost mai nti eluat cu acid formic
5N n acetat de amoniu -.-B 0, metanol 2GBN3 i acetonitril 2,BN3. Acest sol#ent fost n
1)&/ pentru separarea spiramicinei. (l a fost trecut printr-o coloana &i/"ristop"or R)
,:.
a
fost folosit un

spectometrul de mas 1a=lett-)ac<ard B9:9 A, folosind ca reacti# metan. Konul
molecular nu a fost preent din caua labilit$ii spiromicinei, cea mai mare mas molecular a
fost cea a pierderii de ap D0E1-1
5
6F
-
. @olosind ionii la m? 4:>, 4:G, >IB, GG- i G->
cercettorii au putut s #alidee concentratii de *umtate, aceleai i dublu fa$ de cele cerute
de '( la B- C?<g de muc"i.
8n concluie acest grup de compui este relati# bine acoperit, cu o metod capabil s
determine reiduuri amestecate con$innd to$i membii acestui grup la concentra$ii apropiate de
cele stabilite de '(.
AMINOGLICOZIDE
Streptom!ce i M!cromo"opor# produc aminoglicoide. (le sunt antibiotice cu
spectru larg de acti#itate i sunt formate dintr-un inel aminociclitol 25-deo+istrept amina n
cele mai multe cauri3 legat de dou sau mai multe amninoglucide n legtur glicoidic 2fig
53. Analia c"imic a aminoglicoidelor a fost ntotdeauna un punct slab al analitilor. Aceti
comui preint toate propriet$ile fiicoc"imice care ngrunea metodele de confirmare.
@iind foarte "irdofilice e+tragerea lor este foarte dificil. !e descompun la temperaturi mari
facand analia ./ sau ./-0! aproape imposibil. /u toate c &/-0! ar terbui sa fie o
unelt ideal n analia acestor compui, pn la data curent s-au raportat doar dou metode,
amndou folosind ionspra; &/-0!.
0c&aug"lin i 1enion au de#oltat o metod capabil s detectee spectiomicina,
"igromicina A, streptomicina di"idrostreptomicina n rinic"i de bo#in. !olubilitatea slab a
acestor compui n sol#en$i organici a fost depit folosind dispersia faei solide. )roba de
rinic"i a fost omogeniat cu cianopropil. %up punerea ntr-un reer#or de e+trc$ie de :ml,
faa solid a fost splat cu "e+an, acetat de etil i metanol. )roba a fost eluat cu ap , apoi
cu acid supfuric -.-B 0. !-a folosit o coloan !p"erisorb 6%!-5, cu o fa mobil consistnd
din :N acetonitril cu ,- sau 5- m0 de acid pentafloropanic ca reacti#. )roba s-a introdus
ntr-un aparat !cie+ Taga 4--- ( cu surs A)/K.
@olosind !K0 la m? GB, pentru spectiomicin, m? 54B pentru "irgomicina A, m?
G-, pentru streptomicin i m? 59G pentru di"idrostrrptomicin, aceste antibiotice au putut fi
detectate n rinic"i de bo#in la concentra$ia de 5- --- C?<g.
8n concluie, analia reidurilor de aminoglicoide folosind spectrometria de mas
este imposibil de realiat ntr-un laborator obinuit. /u toate acestea, combinarea &/-0!-0!
B
i dispersiei faei solide d posibilitatea de confirmarea a tuturor acestor compui la
standardele impuse de '(.
BIBLIOGRAFIE
,3 R.0.A Jiessen, A.A. Tin<e, S. /romatogr. A I-G 2,99B3
4
53 ).S. Mi*a<, 0... &eadbetter, 0.1. T160A!, (.A. T"ompson, Aiol. 0ass
!pect. 5- 2,99,3
G3 &... 0c&aug"lin, S.%. 1enion, S. /"romatorg B9, 2,9953
>3 !. )leasance, ). Ala;, 0.A. Ouilliam, S. /romatogr. BB: 2,99,3
CUPRINS
UNIVERSITATEA DE STIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINARA. .1
I
/&'S-JA)6/A.............................................................................................................,
INTRODUCERE...........................................................................................................2
PENICILINE.................................................................................................................2
TERTACICLINE..........................................................................................................3
MACROLIDE...............................................................................................................4
AMINOGLICOZIDE...................................................................................................5
BIBLIOGRAFIE...........................................................................................................6
CUPRINS.......................................................................................................................7
: