CURS 1 Biotehnologie generala

Fisa disciplinei: BIOTEHNOLOGIE GENERALA

Curs (capitole si subcapitole) Nr.ore
Capitolul I. Definitia biotehnologiei si corelatia
acesteia cu bioingineria. Stadiul actual si perspectiva
proceselor biotehnologice. Domeniile prioritare ce
utilizeaza produsele biotehnologice
2
Capitolul II. Aspecte fundamentale ale proceselor
biotehnologice. Microorganisme si metabolismul
microbian. Cinetica proceselor de biosinteza. Etapele
elaborarii proceselor biotehnologice. Clasificarea
proceselor biotehnologice.
2
Capitolul III. Bioingineria proceselor de
transformare. Tipuri si configuratia bioreactoarelor.
Implementarea standardelor europene de sustenabilitate
bioenergetica in Romania
4
Capitolul IV. Biotehnologii pentru producerea
combustibililor alternativi. Tipuri de combustibili
alternativi. Fermentatia biomaselor. Parametrii
proceselor de fermentatie alcoolica si anaeroba
4
Capitolul V. Procese si tehnologii de obtinere prin
presare la rece a uleiurilor vegetale de uz industrial
2
Capitolul VI. Procedee de obtinere a bioproteinelor
din hidrocarburi, alcooli si deseuri celulozice
2
Capitolul VII. Biotehnologii de degradare
microbiana a hidrocarburilor petroliere. Mecanisme
de biodegradare a poluanilor organici ai solului. Specii
de microorganisme izolate din soluri contaminate cu
reziduuri petroliere.
2
Capitolul VIII. Biotehnologii de depoluare a
fluxurilor gazoase. Principiul i tehnicile de biofiltrare.
Factori care influeneaz procesele de biofiltrare
2
Capitolul IX. Biotehnologii de fabricare a
polimerilor. Degradarea microbiologica a maselor
plastice.
2
Capitolul X. Biotehnologii pentru degradarea
xenobioticelor aromatice. Bioprocese ale degradarii
xenobioticelor.


2
Bibliografie
1. G.C. Suciu, I. Ghejan, S.F. Ionescu si I.Opris, Ingineria
prelucrarii hidrocarburilor, vol. 5., Ed. Tehnica, 1999
2. S. Jurcoane & colab., Tratat de biotehnologie, vol. 1, Ed.
Tehnic, Bucureti, 2004
3. S. Jurcoane & colab., Tratat de biotehnologie, vol. 2, Ed.
Tehnic, Bucureti, 2006
4. C. Ratledge si B. Kristiansen, Basic Biotechnology (editia 3),
Cambridge University Press, 2006
5. J.E. Smith, Biotechnology, Cambridge University Press, 2004
6. S.R. Barnum, Biotehnology an introduction, Wadsworth
Publishing Company, 1998
7. A. Vasile, Bazele proceselor biotehnologice, partea I, Ed.
Universitatii Al.I. Cuza, Iasi, 1998












I. 1. INTRODUCERE IN BIOTEHNOLOGIE
1.1. Definitie
Conform Comisiei pentru Biotehnologie a Uniunii Europene
(1996) biotehnologia consta in aplicarea principiilor
inginereti i tiinifice pentru procesarea materialelor cu
ajutorul agenilor biologici, pentru obinerea de bunuri i
servicii.
Federaia European de Biotehnologie definete biotehnologia
ca utilizarea integrat a tiinelor naturale i ingineriei prin
folosirea biosistemelor - celule microbiene, vegetale sau
animale, pri ale acestora sau analogi moleculari - n
bioindustrii.
Biotehnologia este o tiin complex, ce se caracterizeaz prin
utilizarea integrat a biochimiei, microbiologiei, biologiei
celulare i a ingineriei genetice. (fig. 1.).

Fig. 1. Biotehnologia o tiin interdisciplinar
Denumirea de biotehnologie provine de la cuvintele greceti:
-Bios care nseamn via,
-Tehnikos care nseamn tehnici i
-Logos care nsemn studiu al.
Biotehnologia este aplicat in diverse domenii, cum ar fi:
agricultur, industria alimentar, producie industrial, mediu i
medicin.
1.2. Principalele directii ale biotehnologiei
In functie de domeniul economic caruia se adreseaza
biotehnologiile pot fi clasificate astfel:
1. Biotehnologii aplicate n industria alimentara
Rolul biotehnologiei este covritor n industria alimentar. n
fapt industria alimentar este o biotehnologie deoarece materiile
prime agroalimentare sunt produse biologice i prin urmare
conservarea lor pn la consum, n stare proaspt (cazul
fructelor i legumelor) sau pn la industrializare (cazul tuturor
produselor agroalimentare) implic controlul activitii
enzimatice proprii esuturilor vegetale i animale sau a celor
elaborate de microflora de contaminare.
Enzimele proprii esuturilor vegetale i animale sunt
eseniale n transformrile pe care le ofer produsele
agroalimentare: maturarea fructelor i legumelor, cerealelor i
finurilor sau diferitelor produse alimentare pe baz de cereale
germinate, maturarea brnzeturilor, maturarea crnii.
Enzimele pot avea ns i rol deteriorativ cu implicaii n
modificarea caracteristicilor senzoriale i a valorii nutritive a
materiilor prime agroalimentare pn la prelucrarea termic a
acestora.
De asemenea, rolul microorganismelor este hotrtor, unele
dintre ele avnd aciune duntoare, altele avnd rol esenial n
obinerea unor produse alimentare datorit aciunii lor
fermentative: produse lactate acide, brnzeturi, bere, vin, spirt,
pine, salamuri crude, alimente fermentate din cereale i
leguminoase. Microorganismele intervin i n fermentarea unor
produse vegetale: varza, murturi, msline, castravei, cacao,
etc.
Biotehnologiile n industria alimentar s-au dezvoltat
impresionant prin folosirea enzimelor exogene (industria
laptelui, berii, spirtului, amidonului, crnii, sucurilor de fructe,
zahrului, panificaiei, etc.) i a culturilor STARTER (industria
berii, laptelui, crnii, panificaiei, etc.).
La toate acestea trebuie s avem n vedere obinerea de
metabolii secundari (alcool etilic, aceton, acizi organici,
aminoacizi, etc.) prin folosirea de microorganisme precum i de
biomas alimentar i furajer, etc.
Cu ajutorul enzimelor microorganismelor se pot accelera
procesele biochimice, se pot perfeciona procesele de producie,
se poate mbunti calitatea produselor alimentare i se poate
mri gradul de diversificare a produciei alimentare.
2. Biotehnologii agricole care se ocup cu:
- microreproducerea plantelor i animalelor prin tehnici de
inginerie genetic, hibridare somatic, selecionare, culturi in
vitro, culturi celulare vegetale i animale; pot obine replicarea
intensiv a seminelor, plantulelor sau liniilor animale
selecionate.
- ameliorarea plantelor i animalelor, pentru obinerea de linii
nalt productive, rezistente la boli duntori i condiii
climaterice extreme. In aceast direcie se nscrie obinerea de
plante cu rate crescute de fotosintez, plante rezistente la
temperaturi sczute sau ridicate, la secet sau salinitate crescut
a solurilor. Se pot obine de asemenea animale cu producii
crescute de carne, lapte, ou, ln, etc. Eforturi susinute se
depun n direcia obinerii de plante fixatoare de azot, altele
dect leguminoasele. Se caut de asemenea specii forestiere apte
unor producii rapide de mas lemnoas de calitate, nalt
regenerabile sau capabile de mpdurire a zonelor alpine
extreme sau deteriorate puternic.
3. Biotehnologii n medicin i sntate public.
Reprezint domeniul care a inregistrat cele mai mari progrese
datorita marilor descoperiri n biologia molecular care au
generat producerea i sinteza de medicamente, hormoni, de
antigene, de enzime, de reactivi necesari diagnosticrii si
vaccinuri contra a numeroase boli infecioase, virale i
parazitare. Cea mai mare parte a medicamentelor produse i
comercializate pe plan mondial sunt produse ntr-o form sau
alta prin biotehnologie.
4. Biotehnologii orientate spre producerea de energie.
Exist biotehnologii utilizate actual pe scar larg pentru
producerea de surse auxiliare de energie, precum alcooli, metan,
hidrogen, pe baza deeurilor organice rezultate n agricultur,
zootehnie, silvicultur, industria alimentar.
Randamentul acestora depinde ns drastic de resursele
tehnologice utilizate, de disponibilitatea tulpinilor microbiene
transformate, de capitalul financiar disponibil pentru a fi investit
ntr-un asemenea shift energetic i nu n ultimul rnd de
dimensiunea exploatrilor. Ca de altfel toate biotehnologiile, i
acestea n discuie se pot dovedi eficiente doar n msura n care
fac parte dintr-un plan integrat de utilizare privit din prisma
ecologiei sistemice, care s urmreasc maximizarea fluxurilor
materiale i energetice, in paralel cu acoperirea gradat dar
progresiv a datoriei fa de mediu, acumulat n decade de
dezvoltare economic guvernat doar de cerinele pieei libere.
5. Biotehnologii aplicate n controlul polurii.
Aceasta ramura a biotehnologiei este orientata in sensul limitarii
poluarii mediului inconjurator. Acestea ar trebui privite mai
degrab ca biotehnologii de limitare a impactului negativ al
sistemului socio-economic asupra componentelor capitalului
natural, tiut fiind c poluarea nu este singura verig a acestui
impact, la aceasta adugndu-se supraexploatarea resurselor
regenerabile, epuizarea acelora neregenerabile, deteriorarea
mediului prin extinderea spaial a sistemului socio-economic.
1.3. Etapele de dezvoltare a biotehnologiilor
Biotehnologia s-a dezvoltat pe urmatoarele etape sau ere:
a)Era prePasteur pana in 1845, se cunosteau anumite procese
fermentative, se aplicau in mod empiric fara sa fie justificate in
mod stiintific:
-fermentarea laptelui pentru obtinerea branzeturilor
(fermentatia lactica lactoza acid lactic)
-fermentatia alcoolica pentru obtinerea berii si a vinului
-fermentatia acetica de obtinere a otetului
Indienii foloseau fungii pentru tratarea ranilor (fungiile
sintetizeaza antibiotice)
De ex.: chinezii foloseau laptele acru pentru tratarea ranilor.
Bacteriile lactice sintetizeaza-bacteriocidele cu actiune
antiseptica (nizina este antiseptic)
b)Era Pasteur 1845-1890 se caracterizeaza prin punerea
bazelor stiintifice ale fermentatiei lactice, alcoolice, acetice, prin
precizarea ca aceste procese fermentative sunt determinate de
microorganisme specifice vii.
Se dezvolta la nivel industrial biotehnic de obtinere a
alcoolilor (etilic, butanol, glicerol)
Biotehnica de obtinere:
-solventi (acetona)
-acizi organici (acid citric)
-penicilina ca antibiotic sintetizata de tulpinile de
fungii Penicillium
c)Era antibioticelor 1940-1960
Se obtine pe cale de sinteza antibiotice si enzime, astfel se
dezvolta industria biochimica.
In Anglia se construieste prima fabrica de obtinere a penicilinei
in cultura submersa a fungului penicillium.
Se pun bazele sterilizarii mediului de cultura, sterilizarii aerului,
pasteurizarii,liofilizarii
Sterilizarea - tratament termic folosit in distrugerea
microrganismelor viabile (la temperaturi mai mari de 100C)
Pasteurizareatratament termic la <100 C cu distrugerea formei
vegetative a microrganismelor
Liofilizare:
procesul de evaporare n vid i la temperaturi foarte sczute a
unei soluii sau a unei suspensii apoase ce poate contine fie un
vaccin, fie plasma sangvina, etc. si pentru a le pastra timp
indelungat
Liofilizarea se poate realiza prin congelarea produsului la-20 C
d) Era post-antibiotice
-se dezvolta biotehnica de obtinere a acizilor esentiali, a
enzimelor de interes industrial si cele de interes in medicina.
Enzime reprezentative: amilaze care hidrolizeaza amidon,
catalaze care descompun H
2
O, celulaze hidrolizeaza celuloza,
dehidrogenaze, etc.
Glucozooxidazaoxideaza glucoza acid glucomic
Hemicelulaze hidrolizeaza hemicelulozele
Invertaza transforma zaharoza zahar invertit
Lipazele hidrolizeaza lipidele
Se dezvolta biotehnologia de obtinere a proteinelor unicelulare
(Single Cell protein - SCP). Apar procedeele industriale de
biosinteza ce contribuie la acoperirea deficitului mondial de
proteine. Drept substraturi se utilizeaza hidrocarburile
parafinice, alcooli, hidrati de carbon).
Se pun bazele tehnologiei de imobilizare a enzimelor si a
celulelor microbiene.
Biotehnologia de obtinere a biopolimerilor de tipul
polizaharidelor (xantan, dextran, acid alginic, scleroglucan, etc.)
















II. ETAPELE UNUI PROCES BIOTEHNOLOGIC
Elaborarea i industrializarea unei tehnologii de biosintez
presupune parcurgerea mai multor faze constnd n cercetri la
nivel de: laborator, pilot i industrial. Aceste cercetri permit
transpunerea procedeului de biosintez de la o faz la alta.
1. FAZA DE LABORATOR
Cercetrile de obinere a unui produs prin biosintez ncep
cu lucrri de laborator care sunt prezentate n cele ce urmeaz.
Izolarea i selecia. Se izoleaz i se selecteaz un mare
numr de microorganisme cunoscute din literatura de
specialitate ca productori ai compusului ce urmeaz a fi
biosintetizat. Tehnicile utilizate n acest scop sunt specifice
pentru fiecare microorganism i sunt realizate de microbiologi
cu pregtire corespunztoare. Manualele de specialitate indic
mai frecvent, pentru izolarea i selecia microorganismelor,
metode ca: tehnica diluiilor i tehnica granulelor de sol.
Microorganismele sunt preluate din diferite habitate
cultivate pe medii solide sau lichide, astfel nct s fie posibil
punerea n eviden a unor caracteristici fiziologice. In prima
etap se urmrete realizarea unei culturi pure prin tehnici
microbiologice specifice (epuizarea ansei, diluii succesive etc.).
n continuare, se stabilete o metod de triere (screening)
adecvat scopului urmrit.
De obicei, microorganismele sunt cultivate pe plci Petri,
pe medii solidificate cu agar-agar. Testele de identificare a
compusului care intereseaz pot fi calitative sau cantitative. n
cazul enzimelor, de exemplu, se aplic, de obicei, metode de
identificare calitativ prin includerea n mediul solid, pe care se
cultiv microorganismele, a substratului specific asupra cruia
acioneaz enzima ce se dorete a se sintetiza (amidon n cazul
amilazelor, casein n cazul proteazelor, celuloz n cazul
celulazelor). Dup dezvoltarea coloniilor izolate, enzimele
difuzeaz n gelul de agar-agar, atacnd substratul inclus n
mediu i astfel, zona respectiv poate fi vizualizat, n cazul n
care devine transparent sau folosind un reactiv specific.
n cazul altor enzime la care nu se poate aplica un test
calitativ, coloniile izolate se cultiv pe medii specifice, iar
extractul sau lichidul de biosintez este preluat i prelucrat n
scopul dozrii cantitative a acesteia prin metode
spectrofometrice, de fluorescen, titrimetrice, polarimetrice. n
urma acestor teste se rein numai cteva tulpini care au dat cele
mai bune rezultate n ceea ce privete biosinteza enzimei.
ntreinerea tulpinilor productoare. Dup faza de
izolare i selecie, tulpinile productoare se supun unor lucrri
de caracterizare dup criterii morfologice, biochimice,
fiziologice, imunologice, toxicologice. Tulpina astfel
caracterizat se nregistreaz ntr-o colecie de microorganisme
sub un numr de identificare. De obicei, aceste tulpini sunt
supuse unor lucrri de selecie natural i artificial
(mutagenez) n scopul obinerii de tulpini mutante nalt
productoare.
Att tulpinile parentale ct i tulpinile mutante sunt
conservate prin metode speciale i pstrate la temperaturi
sczute. Dintre metodele de conservare des utilizate apar:
liofilizarea i conservarea n azot lichid.
Tulpinile din colecie utilizate n lucrrile de biosintez
curente se pstreaz sub diferite forme, dup metode de
ntreinere a culturilor, specifice fiecrui microorganism i
formeaz aa-numita cultur stoc" de la care se pornete
procesul de biosintez.
De obicei, cultura stoc este pstrat la frigider, pe geloz
nutritiv, n tub nclinat. Pentru prepararea unei culturi inocul
de laborator, se pornete de la o astfel de cultur vegetativ.
Cultura de inocul. Inoculul reprezint o cultur
microbiana n curs de multiplicare pe un substrat nutritiv
corespunztor i n anumite condiii specifice de dezvoltare (pH,
temperatur, agitare, aerare).
Inoculul constituie materialul de nsmnare al mediului de
biosintez propriu-zis, din etapa urmtoare.
Transvazarea culturii inocul n mediul de biosintez se
realizeaz n condiii aseptice, dup o perioad de dezvoltare
bine stabilit de ctre microbiolog (vrst, cantitate, aspect
microscopic).
2. FAZA DE STAIE PILOT
Faza de biosintez propriu-zis se realizeaz n aparate
speciale, numite bioreactoare, care pot fi de diferite capaciti
(10 L, 100 L, 1 m
3
, 10 m
3
, 100 m
3
), fiind precedat de operaii
de sterilizare a aparaturii utilizate i a mediului de cultur
stabilit, la nivel de laborator, ca fiind optim. nceputul fazei de
biosintez este considerat momentul transvazrii culturii inocul
n mediul de cultur sterilizat i rcit la temperatura de cultivare
a microorganismului productor. Cnd raportul ntre capacitatea
de inocul i cantitatea de mediu de fermentaie (numit raport de
inoculare) nu permite pregtirea culturii inocul n laborator,
este necesar introducerea unei trepte intermediare de cultivare,
numite cultur intermediar".
n faza de staie pilot, tehnologia elaborat la nivel de
laborator este verificat i optimizat pe instalaii de biosintez
de capacitate medie (pilot).
Pe baza datelor de cercetare obinute la nivel pilot, se
elaboreaz aa-numitul proces tehnologic pilot" care urmeaz
o faz de experimentare industrial i apoi producia
biotehnologic propriu-zis.
Datele furnizate de tehnologia pilot elaborat constituie
elemente de proiectare pentru instalaiile industriale.
3. MEDII DE CULTUR
n procesele biotehnologice, mediile de cultur sunt
constituite din suporturi nutritive sterilizate care permit
dezvoltarea i studiul unui microorganism specific. Compoziia
mediilor de cultur are o mare importan asupra
reproductibilitii i eficienei tehnologiei respective.
n funcie de consisten, compoziie, scopul utilizrii,
mediile de cultur se clasific astfel:
dup consisten:
- medii lichide, solide, semisolide
dup compoziie:
- medii naturale, care conin elemente nutritive, de origine
vegetal sau animal
- medii sintetice, care conin numai compui cu structur
chimic cunoscut, care pot fi dozai
dup tipul respirator al microorganismelor cultivate:
medii pentru microorganisme aerobe sau anaerobe
dup scopul i frecvena ntrebuinrii:
- medii de uz curent
- medii speciale utilizate, n general, n studiile de izolare a
microorganismelor la nivel de laborator. Acestea pot fi, la
rndul lor: elective, selective, de mbogire, de conservare, de
identificare
dup faza de biosintez la care este utilizat mediul de
cultur poate fi mediu laborator, pilot sau mediu de cultur
industrial
dup destinaia final a culturii dezvoltate mediile pot fi:
- pentru cultura inocul
- pentru cultura de regim, numite i medii de fermentaie sau
medii de biosintez
n biotehnologie se utilizeaz n mod curent mediile naturale
avnd la baz subproduse agroalimentare: rot de floarea-
soarelui, de soia, fin de porumb, tre de gru, extract de
porumb. Aceste medii conin, n general, elemente nutritive
necesare dezvoltrii microorganismelor, completndu-se de
obicei cu cantiti mici de sruri minerale.
Mediile naturale sunt, n general, mai ieftine, dar prezint
dezavantajul variabilitii compoziiei, ceea ce nu permite o
standardizare corespunztoare i, n consecin, nu permite
reproducerea procesului de biosintez cu un randament
constant.
Spre deosebire de mediile naturale, mediile sintetice sunt
perfect reproductibile la scar industrial.
Un mediu de cultur utilizat pentru dezvoltarea
microorganismelor trebuie s conin ntotdeauna:
- o surs de carbon (n general glucide: glucoza, amidon,
lactoz, zaharoz etc);
- o surs de azot, care poate fi organic (aminoacizi,
proteine, uree) sau anorganic (NH
3
, (NH
4
)
2
SO
4
, etc);
- o surs de fosfor (H
3
P0
4
, (NH
4
)
3
PO
4
, KH
2
P0
4
etc)
- oligoelemente: K (din KCl sau K
2
HPO
4
), Mg (din
MgSO
4
), Fe (din FeCl
3
)
- microelemente: Mn, Ni, Co, W
- factori de cretere: aminoacizi, proteine, vitamine,
coenzime.
Compoziia mediului nutritiv specific pentru un
microorganism se stabilete n laborator, prin cultivarea
acestuia, alegndu-se astfel, n funcie de scopul urmrit, mediul
optim de cultivare.
Mediile de cultur utilizate n bioprocesele microbiene
trebuie s conin elementele eseniale: carbon, azot, sulf,
oxigen, fosfor, magneziu, calciu i numeroase alte elemente n
cantiti foarte mici (urme): fier, cupru, cobalt, zinc, mangan,
molibden, care sunt necesare funciilor celulare de baz. De cele
mai multe ori este ns nevoie s se utilizeze un mediu de
cultur ct mai ieftin i posibil de reprodus o perioad ct mai
lung de timp. Aceasta conduce la utilizarea unor substraturi ct
mai ieftine i mai accesibile n conjunctura economic
respectiv; nlocuirea unui component din compoziia mediului
nutritiv conduce la variaii n randamentul de producere, astfel
nct studiul aprofundat al influenei diferitelor componente ale
mediului de cultur asupra biosintezei constituie un element
important al cercetrilor n domeniul biotehnologiei.




A. Pregtirea mediului de cultur
Materii prime utilizate pentru fabricarea mediilor de cultur.
Materiile prime trebuie s asigure principalii nutrieni
microorganismelor n vederea dezvoltrii lor n timpul
fermentaiei.
Surse de carbon. Principala surs de carbon (surs de energie)
pentru microorganisme o constituie glucidele, sub form de
glucoz, fructoz, galactoz care sunt uor asimilabile, n timp
ce maltoz, zaharoza i lactoza sunt asimilate doar dac
microorganismele posed enzime capabile s le transforme n
monoglucide. Poliglucidele pot fi utilizate doar de ctre
microorganismele apte s sintetizeze enzimele care s le
hidrolizeze extracelular n monoglucide capabile s difuzeze
prin membrana celular.
Ca surse de carbon n reetele mediilor industriale se folosesc
urmatoarele:
- Melasele care provin de la rafinarea zahrului
- Extractul de porumb, este reprezentat de extractul obinut din
industria amidonului dup ce sufer o concentrare pn la 50%
S.U.
- Leiile sulfitice provin din industria hrtiei ca urmate a
transformrii masei lemnoase n pulp celulozic sub aciunea
bisulfitului de calciu.
Surse de azot. Azotul din mediul de cultur are rol anabolic,
participnd la biosinteza proteinelor structurale, a enzimelor i
acizilor nucleici.
Principalele surse de azot sunt:
- azot anorganic: amoniac, sruri de amoniu, sulfatul de
amoniu, fosfatul acid de amoniu,
- azot organic: hidrolizatele proteice de cazein, soia, carne etc.
Surse de ioni anorganici. Pentru dezvoltarea
microorganimelor n timpul procesului de fermentaie este
necesar prezena ionilor anorganici, acetia reprezint circa 8%
din substana uscat a a celulelor microbiene. Principalii ioni
anorganici care trebuie s fie prezeni n mediul de cultur sunt:
macronutrienii (azot, fosfor, sulf, potasiu, i magneziu) i
micronutrienii (sodiu, calciu, clor, fier, cobalt, zinc, molibden,
cupru, mangan, nichel i seleniu).
Surse de factori de cretere. Factorii de cretere sunt compui
organici a cror prezen n mediul de cultur este necesar n
cantiti mici, avnd un rol catalitic sau structural pentru
microorganisme. Factorii de cretere includ vitaminele, purine,
pirimidine, nucleotide i nucleozide, aminoacizi, acizi grai,
steroli i poliamide.
Principalele vitamine necesare ca factori de cretere sunt:
biotina, acid pantotenic, acidul nicotinic, tiamina.
Tratamentul termic al mediilor de cultur. Pentru buna
desfurare a procesului de fermentaie este necesar cultivarea
microorganismelor pe un mediu de cultur steril pentru a
preveni contaminarea. Sterilizarea mediului de cultur se poate
realiza direct n bioreatorul n care se realizeaz fermentaia sau
ntr-un vas sub presiune separat, ulterior fiind transferat n
bioreactor.
B. Etapa biologic.
Obinerea culturilor starter de producie
Pentru producerea enzimelor, fermentaiile industriale se
desfoar n volume de 150 250 m
3
de mediu de cultur,
motiv pentru care trebuie pregtit o cantitate suficient de
inocul. Cultura folosit drept inocul trebuie s fie n faza
exponenial de cretere. La microorganismele care au vitez de
cretere redus, se recomand s se foloseasc o cantitate mai
mare de inocul, pentru a se reduce durata iniierii fermentaiei.
Cultura starter de producie trebuie s conin celule active,
adaptate la mediul industrial pentru ca fermentaia s se
declaneze rapid. n cazul fermentaiilor desfurate pe mediul
solid, pentru care se utilizeaz inocule sporifere se recomand
s se asigure prin inoculare concentraii de 10
5
-10
6
spori/g
mediu, iar n cazul celor submerse cultura starter de producie s
fie de circa 10% din mediul de cultur.
In fig. 2 se prezinta schema bloc de obtinere a unui preparat
enzimatic.

Fig. 2. Schema bloc pe operaii de obinere a preparatelor enzimatice
microbiene brute