Sunteți pe pagina 1din 37

COORDONATOR TIINIFIC :

conf. dr. Anioara Cmpean



CANDIDAT:
prof. S.I Veronica Carmen
Tudose(Stavarache)
IMPLANTURILE DENTARE
I IMPORTANA STUDIILOR DE BIOLOGIE
N EVALUAREA BIOCOMPATIBILITII LOR
LUCRARE METODICO-TIINIFIC
PENTRU OBINEREA GRADULUI DIDACTIC I
STRUCTURA LUCRRII METODICO-TIINIFICE



1. INTRODUCERE
2. MORFOLOGIA PARODONIULUI
3. NOIUNI DE ANATOMIE A DINILOR
4. BIOMATERIALE N IMPLANTALOGIA
DENTAR I BIOCOMPATIBILITATEA
5. CERCETRI PERSONALE
6. ASPECTE METODICE PRIVIND PREDAREA
LECIILOR DE IGIEN LA GIMNAZIU I LA
LICEU
ARGUMENT
Materialele dentare reprezinta de un timp indelungat
componentele esentiale ale unui tratament eficient al
starilor dentare patologice. Totusi, desi s-au realizat
imbunatatiri semnificative ale calitatii materialelor de
restaurare dentara cu trecerea anilor, majoritatea
restaurarilor necesita sa fie inlocuite in timp si chiar sunt
necesare biomateriale mai bune.
Exista putina informatie despre efectele biologice adverse
ale materialelor dentare. In ciuda folosirii de lunga durata
a anumitor materiale de restaurare , exista inca intrebari in
ceea ce priveste comportamentul lor in mediul biologic.
LINII CELULARE FOLOSITE N STUDIILE
DE BIOCOMPATIBILITATE
FIBROBLASTE GINGIVALE UMANE
OSTEOBLASTE
PREMISELE CERCETARII
Exist un numeroase studii care au
demonstrat c o serie de implanturi
elibereaz n mediu compui (n special
ioni metalici) cu poteniale efecte citotoxice,
situaie cu att mai grav cu ct avem de a
face cu reacii care pot avea loc n
cavitatea bucal.

SCOPUL CERCETARII
Standardizarea unor
metode in vederea evaluarii
citotoxicitatii materialelor
dentare care au patruns pe
piata romaneasca.
OBIECTUL CERCETARII
n aceasta lucrare este prezentat
comportamentul in vitro al fibroblastelor
gingivale umane (linia celular HGF-1)
i osteoblastelor fetale umane (hFOB
1.19) crescute in contact cu diferite
suporturi cu poteniale implicaii n
implantologia dentar:
1) discuri de titan comercial cu suprafee lefuite
cu hrtie metalografic de SiC cu diferite grade
de rugozitate;
2) discuri de titan (Ti/ TiO2) cu suprafee lefuite
pe care s-a depus o pelicul de TiO2 de diferite
grosimi si rugozitati;
3) discuri de material ceramic a cror
component principal este oxidul de zirconiu,
preparate conform normelor ISO 13356 (Biozyr).
Rezultatele obinute cu aceste materiale au fost
comparate cu culturile control ce au fost realizate
pe suprafee de plastic.

MATERIALE STUDIATE
METODOLOGII I TEHNICI DE TESTARE IN VITRO A
BIOCOMPATIBILITII IMPLANTURILOR DENTARE
1. EVALUAREA VIABILITII I MORFOLOGIEI
CELULARE
A. Studiul potenialului citotoxic manifestat de biomateriale prin
determinarea activitii extracelulare a lactat dehidrogenazei
B. Evaluarea viabilitii celulare prin determinarea
metabolismului energetic celular testul MTT

2. METODE MICROSCOPICE DE EVALUARE A
INTERACIILOR CELULE-MATERIAL DENTAR
Metode imunochimice de evaluare a interaciilor celul-suport

3.STUDIUL POTENIALULUI PROLIFERATIV


MORFOLOGIA CELULAR
Morfologia celular poate fi evideniat prin
microscopie n contrast de faz la intervale de 24 ore, cu
scopul de a evidenia modificrile fenotipice ale celulelor de
pe suportul de plastic crescute n prezena materialului de
testat pn cnd ajung la confluen. Pentru a obine
informaii despre morfologia celulelor crescute pe materialele
studiate a fost realizat un studiu de detectare n fluorescen
a actinei, principala protein a citoscheletului.
STUDII PE FIBROBLASTE GINGIVALE
Morfologia n contrast de faz a fibroblastelor gingivale la 48 ore de la nsmnare:
A cultura control; B n vecintatea suportului de Ti;
C n vecintatea suportului Biozyr
A. B. C.
MORFOLOGIA CELULAR
Nu exist diferene
semnificative de
aspect citomorfologic
i densitate
Celule
alungite cu
aspect
fusiform tipic
STUDII PE OSTEOBLASTE
Figura 25. Morfologia n contrast de faz a celulelor hFOB 1.19 la 48 ore de la
nsmnare:
a cultura control; b n vecintatea suportului de Ti;
c n vecintatea suportului Biozyr
A. B. C.
MORFOLOGIA CELULAR
Celule cu
aspect
poligonal,
uor alungite
Nu exist diferene
semnificative de
aspect citomorfologic
i densitate
VIABILITATEA CELULAR
Exist un numr mare de studii care au
demonstrat c o serie de implanturi elibereaz
n mediu compui (n special ioni metalici) cu
poteniale efecte citotoxice, situaie cu att mai
grav n cazul implantelor dentare cu ct avem
de a face cu reacii care pot avea loc n
cavitatea bucal.
Testul MTT
ctrl Zr Ti
0
50
100
150
Ti
%

v
i
a
b
i
l
i
t
a
t
e

d
i
n

c
o
n
t
r
o
l
Testul LDH
ctrl HGF Zr Ti
0.0
0.1
0.2
0.3
ctrl HGF
Zr
Ti
D
O

4
9
0

n
m
Figura 21. Rata de supravieuire a
celulelor HGF-1, expuse timp de 72
ore n condiii standard de cultivare
(control) i la suporturile Biozyr
(Zr) i de titan (Ti)
Figura 22. Evaluarea eliberrii LDH
n mediul de cultur de ctre
fibroblastele gingivale n condiii
standard i n prezena
suporturilor Biozyr (Zr) i titan (Ti)
VIABILITATEA CELULAR STUDII PE
FIBROBLASTE
Testul MTT, demonstreaz o proliferare uor mai mare n
vecintatea substratului Biozyr ceea ce-l recomand ca un
material mai bun pentru implantologia oral.

Testul LDH, ale crui rezultate sunt prezentate n figura 22 a
indicat c viabilitatea celulelor nu este afectat de expunerea
la cele dou tipuri de materiale, valorile activitii acestei
enzime nenregistrnd creteri n raport cu controlul.
VIABILITATEA CELULAR- STUDII PE
OSTEOBLASTE
Testul MTT
0
50
100
150
ctrl hFOB
Ti
Zr
%

v
i
a
b
i
l
i
t
a
t
e

d
i
n

c
o
n
t
r
o
l
Testul LDH
0.0
0.1
0.2
0.3
0.4
ctrl hFOB
Ti
Zr
D
O

4
9
0

n
m
Figura 26 . Rata de
supravieuire a celulelor
hFOB 1.19 crescute pe
suporturi de plastic, Ti i
oxid de zirconiu (Zr)
Figura 27 . Evaluarea
eliberrii LDH n mediul de
cultur de ctre hFOB 1.19
n condiii standard i n
prezena suporturilor titan
(Ti) i Biozyr (Zr)
Testele de proliferare MTT (figura 26) i
citotoxicitate LDH (figura 27) sugereaz c
viabilitatea osteoblastelor nu este afectat
semnificativ de prezena Ti i a materialului ceramic
Biozyr. Prin urmare, aceste rezultate mpreun cu
datele de microscopie n contrast de faz
demonstreaz c cele 2 materiale studiate nu
afecteaz semnificativ morfologia celular i nu
induc efecte citotoxice att n culturile de fibroblaste
gingivale ct i de osteoblaste fetale umane.

Figura 24.
Evidenierea prin
microscopie de
fluorescen a
morfologiei i
distribuiei celulelor
HGF-1 (marcate
faloidina-FITC
pentru evidenierea
exprimrii actinei F)
pe:
a Suport control;
b Suport de Ti cu
suprafaa de
rugozitate medie;
c i d Suporturi de
Ti cu film de TiO
2
cu
grosime, morfologie
i rugozitate,
diferite.
A B
C
D
Scade densitatea
contact guidance
contact guidance
Distribuie
aleatorie
Acest marcaj ofer indicii asupra morfologiei i orientrii
celulelor cultivate pe aceste suporturi.
Astfel, pe suprafaa neted a suportului de plastic (a),
fibroblastele sunt orientate aleatoriu, i prezint o morfologie
caracteristic unor celule bine etalate.
Pe de alt parte, celulele cultivate pe Ti neacoperit i pe film de
TiO
2
cu diferite grade de rugozitate, sunt alungite, cu filopodii de
diferite dimensiuni i aliniate aproximativ paralel unele fa de
altele (b), (c) i (d). Acest lucru se datoreaz fenomenului
denumit contact guidance conform cruia celulele sunt
orientate n sensul gridurilor de pe suprafaa unui substrat.
n plus, densitatea celular scade pe masur ce rugozitatea
suportului crete fapt ce sugereaz c fibroblastele gingivale
prefer suprafeele netede.

Figura 28 .
Evidenierea prin
microscopie de
fluorescen a
exprimrii actinei F
n citoscheletul
celulelor hFOB 1.19
crescute pe:
a Suport control;
b Suport de Ti cu
suprafa neted;
c Suport de Ti cu
film compact de
TiO
2
cu suprafa
rugoas;
Suport de Ti cu
film de TiO
2
cu
morfologie colonar
i suprafa neted.
Nucleii sunt marcai
cu DAPI.
A B
D
C
Se constatprezint o morfologie ca pe suprafeele
netede celulele hFOB 1.19 poligonal tipic, cu prelungiri
citoplasmatice scurte i o distribuie aleatorie, iar pe
suprafaa rugoas, celulele au un contur poligonal alungit,
cu prelungiri citoplasmatice mai lungi, ceea ce sugereaz
o aderen puternic la substrat, i tind s formeze
aliniamente paralele ca rezultat al fenomenului de
contact guidance.
O constatare important este faptul c densitatea celular
cea mai mare se nregistreaz pe suportul (c) caracterizat
prin cea mai mare rugozitate, fapt ce demonstreaz c,
spre deosebire de FB, OB prefer suprafeele rugoase.

STUDIUL EXPRESIEI FN SINTETIZATE DE FB GINGIVALE PE
SUPORTURILE TESTATE

Figura 30 .
Detectarea FN
sintetizate de
celulele HGF-1
pe:
a Suportul
control;
b Suport de Ti
comercial;
c Suport de Ti
acoperite cu
film de TiO
2
fin;
d Suport de Ti
acoperit cu un
strat de TiO
2
cu
rugozitate
crescut.

A B
C D
Marcaj absent
Distibuie aleatorie
Imaginile din figura 30 demonstreaz un nivel diferit
de expresie a FN i a adeziunii celulare pe suprafeele
studiate. Dac se compar controlul (a) cu suprafaa
de Ti comercial (b), se observ o distribuie aleatorie a
reelei de FN. Pe celelalte suporturi (cu suprafata
rugoasa), filamentele FN sunt orientate aproape
paralel ntr-o direcie comun, dictat probabil de
topografia iniial a substratului. Suportul de Ti care
are cel mai fin strat de TiO2 (c) i o suprafa mai puin
rugoas, prezint un nivel de expresie a FN similar cu
cel evideniat n experimentul control. Pe suportul care
prezint cea mai mare rugozitate a stratului de TiO2
(d), marcajul este aproape inexistent fapt ce
demonstreaz c fibroblastele gingivale ader mai
bine pe suprafee mai puin rugoase.
STUDIUL EXPRIMRII FN SINTETIZATE DE OSTEOBLASTE PE
SUPORTURILE TESTATE
Figura 31.
Exprimarea FN de
ctre osteoblastele
fetale umane
crescute pe
suporturi:
a Suporturi de
plastic (control);
b Suport de Ti cu
film de TiO
2
cu
morfologie
compact i
compoziie
rugozitate medie;
c Ti anodizat;
d Suporturi de Ti
cu film de TiO
2
cu
morfologie colonar
i rugozitate foarte
mare.
A B
C D
Nivel redus de expresie
a FN i o reea fibrilar
intrerupt
Distribuie
uniform
Dupa cum reiese din figura 31, nu se observ diferene
semnificative n organizarea reelei de FN de ctre
osteoblastele cultivate pe suporturile analizate. Excepie
face suportul de Ti/TiO2 cu structur colonar i cel mai
mare nivel de rugozitate, alctuit aproape exclusiv din
rutil (d), care conduce la cel mai redus nivel de expresie
a FN i o reea fibrilar ntrerupt.
Se observ o expresie puternic i o distribuie uniform
a FN n experimentul control. O organizare fibrilar
similar i un nivel de expresie uor crescut se constat
pe suprafeele de Ti cu film de TiO2 cu morfologie
compact i rugozitate medie (b) i Ti anodizat (c).
Inclusiv aceste studii au relevat c osteoblastele
prefer suprafeele moderat rugoase spre deosebire
de fibroblastele gingivale care manifest o adeziune
mai puternic pe suprafeele netede.

DETECTAREA NCORPORRII 5`-BROM DEOXIURIDINEI DE CTRE
FIBROBLASTELE GINGIVALE UMANE
Figura 32. Detectarea imunofluorescent a BrdU ncorporat n timpul sintezei ADN de ctre celulele
HGF-1 crescute pe: a Suportul de plastic (control); b Suport acoperit cu film de TiO
2
cu rugozitate
foarte mic; c Suport de Ti comercial cu suprafaa neteda; d Suport de Ti acoperit cu film de TiO
2

cu rugozitate foarte mare.
A B
C D
Frecventa cea
mai mare
Frecventa cea
mai mica
Nivele
similare
Studiul potenialului proliferativ manifestat de ctre
fibroblastele gingivale a demonstrat existena unui numr
crescut de nuclei fluoresceni pe suprafeele cele mai
netede [Fig.32 a, b i c]. n ceea ce privete suporturile
acoperite cu dioxid de Ti (b si d), imaginile indic faptul c
niciunul din aceste suporturi nu determin un grad de
proliferare celular mai mare dect experimentul control.
Totui, comparnd suporturile acoperite cu filme de
TiO2 ntre ele, s-a constatat c frecvena cea mai mare a
nucleilor marcai fluorescent se constat n cazul suportului
acoperit cu o pelicul fin de TiO2 (b), care manifest i un
grad mic de rugozitate. n cazul suportului cu rugozitate
mare se observ un numr mic de nuclei marcai. n
concluzie, se poate afirma c valori crescute ale rugozitii
suprafeei de TiO2 pot influena negativ proliferarea. Aceste
rezultate sunt n concordan cu rezultatele testelor
prezentate anterior care demonstreaz c FB gingivale
prezint un grad mai mare de biocompatibilitate fa de
suprafeele netede.
DETECTAREA NCORPORRII 5` - BROM DEOXIURIDINEI DE
CTRE OSTEOBLASTELE UMANE
Figura 33. Detectarea imunofluorescent a BrdU ncorporate n timpul sintezei ADN de ctre
osteoblastele fetale umane cultivate pe: a Suport de plastic (control); b Suport de Ti acoperit cu
TiO
2,
de rugozitate crescut si cu morfologie colonara; c Suport de Ti acoperit cu TiO
2,
de
rugozitate foarte mic si morfologie compact; d Suport de Ti anodizat de rugozitate mic si
morfologie compacta
A B
C D
Frecventa
scazuta
Nivele
crescute de
exprimare
n figura 33 sunt prezentate rezultatele deteciei
BrdU ncorporate n AND-ul osteoblastelor
cultivate pe urmtoarele suporturi: de plastic (a), Ti
acoperit cu film de TiO2 de rugozitate crescut; c)
suport de Ti acoperit cu film de rugozitate foarte
mic; d) suport de Ti anodizat cu suprafa de
rugozitate mic.
Se constat c pe suportul cu suprafaa cea mai
rugoas (b) se nregistreaz cea mai sczut
frecven a celulelor cu semnale pozitive la nivelul
nucleului (celule care se gsesc n faza S a ciclului
celular). Suprafeele cele mai netede (a, c i d)
manifest nivele ridicate de ncorporare a BrdU.
CONCLUZII
Rezultatele obinute au demonstrat c att
materialele ceramice (pe baza de dioxid de zirconiu)
ct i cele metalice (Ti i Ti acoperit cu filme de TiO
2
)
prezint un nivel ridicat de biocompatibilitate.
Totui se remarc un rspuns diferit al FB
gingivale i al OB la materialele testate determinat n
primul rnd de rugozitatea suprafeelor i mai puin de
compoziia chimic a materialului.
Astfel, este evident c FB prefer suprafeele
netede n timp ce OB manifest preferin n special
fa de suprafeele rugoase.
Aceste date sunt n concordan cu rezultatele
raportate n literatura de specialitate.