Peptide

Peptide si polipeptide
secvene diferite ale aminoacizilor
permite formarea unui numr mare de
izomeri
Proprietati biologice diferite mutante
Varietatea moleculara a peptidelor,
polipeptidelor i proteinelor
Conjugarea p- n legtura
peptidic
Legturile peptidice
planare
caracter de dubl legtur parial
legtura C-N este rigid,
adoptarea unei conformaii spaiale specifice
fiecrei structuri peptidice sau polipeptidice.

Gruparea iminic (-NH-) din legtura peptidic,
ncrcat parial pozitiv, nu mai are tendine de
protonare sau de a constitui legturi de
hidrogen n care atomul de azot s fie acceptor
de proton.
Comportarea acido-bazic a
peptidelor i polipeptidelor:
gruparea -amino-N-terminal liber
gruparea carboxil C-terminale libere
radicali specifici fiecrui rest de
aminoacid.

Curbele de titrare ale peptidelor i
polipeptidelor sunt asemntoare cu cele ale
-aminoacizilor liberi

Valori ridicate ale punctelor de topire

Solubilitate:
Salting in
Salting out

Activitate optic

Absorban

Solubilitate - Seriile Hofmeister
Salting in
Salting out









Activitate optic
Reactivitate:
- specific gruprilor funcionale
- ninhidrina
- biuret
Compusi colorati fotocolorimetrabili - Absorban
Evidenierea structurii primare a
lanurilor peptidice sau polipeptidice:

metoda Sanger fluorodinitrobenzenul
metoda cu clorur de dansil
metoda Edman - fenilizotiocianatul
clivarea oxidativ
clivarea reductiv
N-dinitrobenzen derivatul aminoacidului
N-terminal se poate determina calitativ i
cantitativ prin cromatografie de schimb ionic
dansilaminoacidul are proprieti fluorescente,
emisia de fluorescen fiind dependent de natura
aminoacidului.
Pentru determinarea structurii peptidelor i
polipeptidelor n care lanurile adiacente sunt
legate prin intermediul legturilor disulfur
Clivarea oxidativ
- n prezena acidului performic

Clivarea reductiva
- n prezena -mercaptoetanolului

Peptidele rezultate pot fi
evideniate prin
cromatografie sau pot fi
supuse procesului de
determinare a secvenei
resturilor de aminoacizi
Reactivi specifici restului cisteinic
Reactivi specifici restului de arginin
Reactivi specifici restului de lisin
Reactivi specifici restului de metionin
Evidenierea resturilor de metionin
prin utilizarea bromcianului
se cliveaza legtura peptidic din captul
carboxilic al metioninei
se formeaza homoserinlactona
metioninei
Digestia enzimatic Enzime proteolitice:
a. exopeptidaze

b. endopeptidaze

Digestia enzimatic Enzime proteolitice:
a. exopeptidaze:
- carboxipeptidaze
- aminopeptidaze
Enzima Specificitatea de aminoacid
Carboxipeptidaza A Rn: orice rest aminoacid, mai puin Arg,
Lys, Pro
Carboxipeptidaza B Rn: Arg, Lys
Carboxipeptidaza C Rn: orice rest aminoacid, pH optim 3,5
Carboxipeptidaza Y Rn: orice rest aminoacid, pH optim 3,5
Leucinaminopeptidaza R1: orice rest aminoacid N-terminal, mai
puin Pro
Aminopeptidaza M R1: orice rest aminoacid N-terminal
Digestia enzimatic Enzime proteolitice:

b. endopeptidaze
- Pepsina - Rn: Phe, Tyr, Trp, Leu;
- Tripsina R(n-1): Lys, Arg;
- Chimotripsina (Rn-1): Phe, Tyr, Trp, Ile,
Val;
- Papaina R(n-1): Lys, Arg, Leu.
Enzima Specificitatea
Pepsina Rn: Phe, Tyr, Trp, Leu
Rn-1: orice rest aminoacid, mai puin Pro
Tripsina Rn-1: Lys, Arg
Rn: orice rest aminoacid, mai puin Pro
Chimotripsina Rn-1: Phe, Tyr, Trp, Ile, Val
Rn: orice rest aminoacid, mai puin Pro
Papaina Rn-1: Lys, Arg, Leu
Elastaza Rn-1: Ala, Gly, Ser, Val
Rn: orice rest aminoacid, mai puin Pro
Termolisina Rn: Ile, Met, Phe, Trp, Tyr, Val
Rn-1: orice rest aminoacid, mai puin Pro
Endopeptidaza V8 Rn-1: Glu
Rn-1: aminoacid N-terminal; Rn: aminoacid C-terminal
Pentru peptida H
2
N Arg Leu Phe Lys Met COOH
propunei o metod enzimatic de hidroliz pentru obinerea
fenilalaninei. Scriei structura peptidei iniiale.

- Pepsina - Rn: Phe, Tyr, Trp, Leu;
- Tripsina R(n-1): Lys, Arg;
- Chimotripsina (Rn-1): Phe, Tyr, Trp, Ile,
Val;
- Papaina R(n-1): Lys, Arg, Leu.

Pentru peptida H
2
N Arg Leu Phe Lys Met COOH
propunei o metod enzimatic de hidroliz pentru obinerea
fenilalaninei. Scriei structura peptidei iniiale.
Rn-1: aminoacid N-terminal; Rn: aminoacid C-terminal
Pentru peptida H
2
N Arg Leu Phe Lys Met COOH
propunei o metod enzimatic de hidroliz pentru obinerea
fenilalaninei.
chimotripsina
H
2
N - Arg - Leu - Phe - Lys - Met - COOH
papaina
H
2
N - Arg - Leu - COOH + H
2
N - Phe - Lys - Met - COOH
Phe + H
2
N - Lys - Met - COOH
H
2
N Arg Leu Phe Lys Met COOH


Care este structura peptidei care conine
Lys, Pro, Arg, Phe, Tyr, Ser, dac:

nu reacioneaz cu FDNB;
n prezena chimotripsinei se separ dou
peptide mai mici ce conin (Tyr, Ser) i
(Pro, Phe, Lys, Arg);
n prezena tripsinei se obin dou peptide
cu urmtoarea compoziie: (Arg, Pro) i
(Phe, Tyr, Lys, Ser).

nu reacioneaz cu FDNB;
n prezena chimotripsinei se separ dou
peptide mai mici ce conin (Tyr, Ser) i
(Pro, Phe, Lys, Arg);
n prezena tripsinei se obin dou peptide
cu urmtoarea compoziie: (Arg, Pro) i
(Phe, Tyr, Lys, Ser).


Rolul peptidelor si polipeptidelor
Elemente structurale ale tesuturilor (anserina
si carnosina)
Transport de electroni (glutation)
Factori de reglare a actvititatii unor glande cu
secretie interna (factori de eliberare secretati
de hipotalamus)
Rol de hormoni (adrenocorticotrop, glucagon,
calcitonina, insulina)
Antibiotice (gramicidine, tirocidinele)
Toxine (faloidina)
Inhibitori naturali ai enzimelor
Absorbia peptidelor din diet
La nivelul stomacului acioneaz pepsina care
este o endopeptidaz secretat de celulele
stomacale, sub form de proenzim (form inactiv)
care este activat n prezena acidului clorhidric sau
autocatalitic.
Pepsina acioneaz asupra proteinelor
transformndu-le n polipeptide mici.

La nivelul intestinului subire acestea se vor
transforma n oligopeptide n prezena tripsinei
i chimotripsinei, dup neutralizarea pH-ului
acid, n prezena sucului pancreatic.
Absorbia peptidelor din diet
Tripsina i chimotripsina sunt
secretate de pancreas sub forme inactive, care
sunt activate de colecistochinina i secretina,
hormoni peptidici prezeni n tractul digestiv.

La intrarea n intestin, secretinele,
determin la nivelul pancreasului eliberarea
sucului pancreatic bogat n bicarbonai necesar
neutralizrii pH-ului acid, pentru obinerea
condiiilor optime de cataliz enzimatic la nivelul
intestinului subire.
Absorbia peptidelor din diet
La nivelul intestinului subire sunt
n continuare degradate enzimatic pn la
aminoacizi liberi n prezena altor
peptidaze, n special a exopeptidazelor.

Sub aceast form, aceste specii moleculare
(aminoacizii liberi) traverseaz peretele
intestinului trecnd n fluxul sangvin i
de aici n ficat.
Proteine
Peptide importante
Glutation
Participa la transferul de electroni
Se comporta ca un sistem redox (datorita gruparilor
tiol libere)
Rol activator a numeroase enzime

Xenobiotici (medicamente, carcinogeni, produi din
mediu),

organismul lupt mpotriva compuilor toxici care, prin
neconjugare cu glutationul, se pot conjuga cu DNA, cu
RNA sau cu proteinele celulare, determinnd apariia unor
afeciuni severe.
Reducerea apei oxigenate eritrocitare n
prezena glutationului:


Transferul unor aminoacizi prin membrana
celular, n prezena glutationului
Enzima implicat --glutamiltransferaza
prezent n membranele plasmatice,
celulele renale i hepatice.

eliminat excedentar n snge din celulele
hepatice bolnave valoare diagnostic n
diferite afeciuni hepatice
HOOC CH (CH2)2COHN CH COOH

NH2 R
H2N CH COOH + GSH


R
H2N CH COOH HOOC CH (CH2)2COOH +
NH2 R
prevenirea oxidrii catenelor
hidrocarbonate nesaturate din fosfolipidele
membranare
Carnosina
Ocitocina i vasopresina
Angiotensinele
Bradikinina
Insulina
Glucagonul
Hormonul adrenocorticotrop (ACTH)
Gastrinele
Colecistokinina
Endorfinele
Gramicidinele
Valinomicina
Bacitracina
Polimixinele
Actinomicinele

Angiotensina I si II
Cu actiune hipertensiva si stimulatoare a
musculaturii netede, care se formeaza in
plasma sanguina.

Regleaza balanta Na
+
, hipersecretia de
aldosteron (hormon mineralocorticoid),
regleaza metabolismul apei