Screening

Productie industriala
Produs util/tinta
Selectia tulpinii
Proces microbiologic
ETAPELE UNUI PROCES MICROBIOLOGIC INDUSTRIAL
ETAPELE UNUI PROCES MICROBIOLOGIC INDUSTRIAL
Laborator
Selectionarea microorgansimelor inalt productive

Studii de crestere si productie a microorganismului
selectionat inainte de a trece la productia industriala

Conservarea microorganismelor selectionate cu pastrarea
capacitatii lor de biosinteza
1.
ETAPELE UNUI PROCES MICROBIOLOGIC INDUSTRIAL
verificarea tehnologiei elaborata la nivel de laborator
in instalatii de biosinteza avand capacitati mai mari

Statie pilot 2.
ETAPELE UNUI PROCES MICROBIOLOGIC INDUSTRIAL
Productia
industriala
transferul tehnologiei la nivel de productie
3.
Separarea
Extractia cu solventi organici : alcooli esteri; cetone, eteri ; unele hidrocarburi
derivate din petrol.

Precipitare : hidroxidul de calciu pentru tetraciclina sau anumite saruri de
amoniu cuaternar pentru oxitetraciclina.

Adsorbtia asigura in acelasi timp izolarea, purificarea si concentrarea produsului
respectiv. Adsorbantii folositi sunt :
Carbune activ folosit la decolorarea sau adsorbtia compusilor aromatici ;
Oxidul de aluminiu si gelul de silice, utilizati la separarea pigmentilor sau
unor steroizi ;
Amidonul si celuloza, utilizati pentru separarea aminoacizilor sau a acizilor
nucleici ;
Rasini schimbatoare de ioni, folosite la separarea aminoacizilor,
antibioticelor si in general a majoritatii produsilor.
ETAPELE UNUI PROCES MICROBIOLOGIC INDUSTRIAL
CONDIIILE NECESARE REALIZRII UNUI
PROCESS MICROBIOLOGIC INDUSTRIAL
Compoziia
mediului de
cultur
Temperatura
Valoarea
pH
Aerarea Agitarea
Asepsia
Bioreactor/vas de fermentatie
FERMENTATIILE
Procese generatoare de energie
in care compusii organici
actioneaza atat ca donori cat si
ca acceptori de electroni
Cultivarea unor cantitati mari
de celule in conditii aerobe
sau anaerobe intr-un vas de
fermentatie sau bioreactor
contextul microbiologiei
industriale
Bioreactor/vas de fermentatie
Etapa de laborator Etapa de statie pilot
Etapa industriala
Caracteristicile unui proces microbian industrial
Recipientele in care se desfasoara procesele microbiologice
industriale se numesc bioreactoare.

Acestea pot varia ca dimensiune: 5 -10 litri in cazul bioreactoarelor
de laborator si 500,000 litri in cazul bioreactoarelor industriale.

Dimensiunile unui bioreactor depinde de proces si de modul de
operare.

Functia principala a unui vas de fermentatie/bioreactor este aceea
de a asigura un conditii adecvate in care sa un microorganism sa
produca in mod eficient un produs tinta (util):
biomasa, metabolit, produs de bioconversie.

CLASIFICARE
Procese microbiologice industriale
Procese industriale la scara mare
Bioreactoare 300,000L
Valoare scazuta a produsului obtinut
Procese traditionale obtinerea bauturilor alcoolice (fara
conditii de asepsie), produselor lactate, otet alimentar
pH extrem/temperaturi ridicate/substraturi greu utilizabile
Incurajeaza dezvoltarea microbiotei endogene industria
alimentara/tratarea apelor uzate
Producerea de MGS
Corneybacterium glutamicum
200,000 tone MGS (Glutamina) si
65,000 tone de lizina

Este dificil de cuantificat ce anume contribuie la
obtinerea unui produs utili de calitate
Nu exista inlocuitori pentru mestesugari

Procese biotehnologice la scara redusa
150 L -1000L

Produsi utili cu valoare ridicata

Respectarea conditii lor de asepsie

Industria farmaceutica, agenti terapeutici si de
diagnostic, produse obtinute cu ajutorul
microorganismelor transformate genetic sau
culturilor de celule

Necesita sisteme complexe de operare

masuri de precautie sunt necesare atunci cand sunt
manipulate microorganisme reprogramate genetic
CLASIFICARE
Procese microbiologice industriale
Procese industriale la scara redusa
Sistem de agitare
Manometru
Supapa pentru
suprapresiune
Panou de control: regleaza pompa pentru apa rece
pompa pentru aer
introducerea de acid/baza

Senzori: temperatura, pH, aerare

Eliminarea apei racite
Efluent
Eliberarea de vapori
Dispozitiv cu perei dubli
Alimentare cu aer
Mediu
Vapori
Bioreactor
Rata de agitare
Transferul de oxigen
pH
Temperatura
Producerea spumei
Rata de agitare
Scop: omogenizarea ingredientelor, bulelor de oxigen si celulelor microbiene in
vasul de fermentatie
-3 faze: lichida nutrienti dizolvati si metaboliti
gazoasa predomina oxigenul si dioxidul de carbon
solida celule si orice substrat solid prezent
Crearea unor conditii omogene
Sa promoveze transferul de nutrienti, gaze si caldura
Rata de agitare
Transferul de caldura sterilizare, mentinerea unei temperaturi ct
in cursul procesului

Necesita un aport ridicat de energie

Transferul de oxigen procesele aerobe


Prelungeste retentia bulelor de aer in suspensie
Reduce marimea bulelor
Previne fuzionarea bulelor

Forte de forfecare!!!
pot fi afectate celulele
floculare, crestere pe
suprafete (peretii vasului,
agitator si electrozi)
Bioreactoare cu agitare mecanica
cele mai comune bioreactoare utilizate in procesele microbiologice
industriale
genereaza forte de forfecare
Necesita un aport ridicat de energie
4-6 palete verticale
- Previn formarea
vortexului
- Elimina spatiile
moarte
Eficienta agitarii
- Forma si marimea discurilor
- Viteza de agitare
- Adancimea lichidului
Bioreactoare de tip air-lift
Necesita un aport scazut de
energie
Rata de agitare este mai mica
Bioreactoare cu barbotare de aer
Transferul de caldura
Important in controlul temperaturii in cursul operatiilor de sterilizare si
mentinerea temperaturii optime procesului de fermentatie

Caldura generata in procesul de fermentatie se datoreaza in principal
activitatii metabolice a microorganismelor si proceselor mecanice de
agitare

Pentru majoritatea fermentatiilor acesta caldura necesita sa fie disipata
prin racire

Peretii dubli ai vasului de fermentatie/serpentine interne

Nu exista un contact direct intre sistemul de incalzire/racire si mediul de
fermentatie

Racirea/incalzirea circulatia apei incalzite/racite sau a unui mediu de
racire - glicol
Temperatura
Lactobacillus delbrueckii utilizat la producerea acidului lactic, necesit o
temperatur de 55-60C,

dou temperaturi diferite - producerea penicilinei, prima faz care corespunde
creterii microorganismului, se desfoar la o temperatur mai joas, dect
faza a doua, n care se formeaz antibioticul. La producerea de acid citric
lucrurile se petrec invers: prima faz, corespunztoare creterii
microorganismului are loc la o temperatur mai ridicat dect faza a doua n
care se produce acidul citric.

In consecin, este esenial pentru industria microbiologic construirea unor
instalaii care s permit reglarea temperaturii care se realizeaz cu ajutorul
unui curent de ap mai mult sau mai puin nclzit sau rcit, care circul ntr-
un dispozitiv cu perei dubli, sau ntr-un schimbtor de cldur, de lungime
convenabil, plasat la exteriorul sau n interiorul bioreactorului.

Transferul de oxigen

Oxigenul este putin solubil in mediu lichid,

Solubilitatea scade cu cresterea temperaturii

Vase mari de fermentatie - cantitati mari de
biomasa necesitati ridicate in oxigen
Temperatura
Compozitia chimica a mediului
Tipul de sistem de spargere a bulelor de aer folosit
Volumul de aer introdus/unitatea de timp
Viteza de agitare
Transferul de oxigen
Transferul de oxigen
In procesele aerobe oxigenul
trebuie mentinut la o
concentratie optima asigurarea
unei productivitati maxime.

rata cu transfer a oxigelui in
mediu si de
rata de achizitie/preluare a
oxigenului de catre celula
microbiana
Rata de utilizare de catre celulele microbiene
afinitatea si saturatia oxidazei terminale
Controlul si monitorizarea
proceselor de fermentatie
Randament si productivitate optime
Asigurarea reproductibilitatii
Senzori (electrozi)
Sisteme de control si
analiza a datelor
Aerarea,
agitarea,
temperatura,
pH si
controlul spumei
Tipul de bioreactor
Modul de operare
Microorganismul
utilizat

Valoarea pH

Fiecare microorganism necesit pentru cretere un pH determinat,
bacteriile n jur de 7, drojdiile i mucegaiurile un pH n jur de 2-5.

Deoarece n cursul proceselor biotehnologice se formeaz CO
2
i acizi
organici care acidific progresiv mediul de cultur i mpiedic
dezvoltarea microorganismelor este deosebit de important
msurarea i ajustarea indicelui pH la o valoare adecvat.

Se folosesc n acest scop: substane tampon (carbonatul de calciu sau
fosfaii adugati n exces la nceputul procesului biotehnologic) sau
ageni neutralizani (acid clorhidric, hidroxid de sodiu ce se adaug
treptat pe parcursul desfurrii procesului biotehnologic pentru
recorectarea valorii pH).
Principalele modalitati de operare
bioreactoarelor
SISTEM
DISCONTINUU
SISTEM IN SARJE
SISTEM
SEMICONTINUU
SISTEM
CONTINUU
Concentratia substratului
limitativ


Producerea drojdiei de
panificatie
Antibiotice
Fermentatiile alcoolice
Tratarea deseurilor
Nu se adauga substrat
nutritiv - valoare limitativa
Aerare si ajustare pH

Producerea bauturilor
alcoolice
Aminoacizi
Enzime
Acizi organici
Chemostat
Auxostat
Alimentarea continua cu
nutrienti

Evacuarea unor cantitati
echivalente de mediu
generati in faza logaritmica a curbei de crestere
ex.: alcoolul etilic, produs in cursul metabolismului anaerob
de catre levuri si anumite bacterii ca parte a metabolismului
energetic.
produsi in faza stationara.
Metabolitii microbieni secundari prezinta urmatoarele caracteristici :
1. sunt produsi de cateva specii de microorgansime ;
2. nu sunt esentiali pentru cresterea si multiplicarea microorgansimelor ;
3. producerea acestora este dependenta de conditiile de crestere, in special de compozitia
mediului de cultura ;
4. de multe ori sunt produsi ca grup de structuri relativ inrudite ; de exemplu o singura specie
de Streptomyces poate produce peste 30 de structuri inrudite dar diferite de antracicline ;
5. producerea acestora poate fi amplificata spre deosebire de metabolitii primari
6. poate deriva fie din substratul de crestere fie din metabolitii primari, astfel ca metabolitul
secundar (produsul util ) se acumuleaza fie in mediul de cultura fie in celulele microbiene in
cursul metabolismului primar.
Metabolitii secundari
Metaboliti primari
Clasificarea produsilor microbieni sub aspect fiziologico-metabolic
1. Material celular (biomasa)
Reactia de baza: Substrat Celule microbiene

De exemplu: proteina celulara (Single cell protein) obtinuta din celule bacteriene, levuri si alge.
2. Produsi de metabolism
Reactia de baza: Substrat Produs de metabolism + Celule microbiene
a) Produsi finali ai metabolismului energetic (produsi de fermentatie)
De exemplu: etanol, acetona, butanol, acid lactic, acid propionic, acid butiric, 2-3 butandiol,
izopropanol
b) Metaboliti primari
De exemplu: aminoacizi, vitamine, nucleotide, acid citric
c) Metaboliti secundari
De exemplu: antibiotice, gibereline, micotoxine
d) Enzime
De exemplu: enzime extracelulare ca: amilaze, proteinaze, si enzime intracelulare ca: invertaza,
penicilinaza
3. Bioderivati (produsi de bioconversie)
Reactia de baza: Substrat precursor Produs

De exemplu: producerea acidului acetic si a acidului gluconic prin oxidarea etanolului si
respective a glucozei; transformari ale steroizilor cu formarea de hormoni
corticosteroizi; oxidarea D-sorbitolului la L-sorboza in procesul obtinerii vitaminei C.
Celule microbiene
CLASIFICARE
Procese microbiologice industriale
Medii lichide Medii solide
Procese Conditii aseptice Procese - Conditii lipsite de asepsie
aerobe anaerobe aerobe anaerobe
Alcaloizi Acetona Oxidarea etanolului in
procesul de obtinere a
otetului
Bauturi alcoolice, vin,
bere
Aminoacizi Butanol Maturarea unor branzeturi Insilozare
Antibiotice Etanol Tratamentul apelor uzate Tratamentul apelor
uzate
Biomasa (SCP) Glicerol
Enzime Acid lactic
Acizi organici Toxine
Proteine recombinante
Biotransformari ale steroizilor
Toxine
Vaccinuri
Vitamine
CLASIFICARE
Procese microbiologice industriale
Celule in suspensie Celule aderate la un substrat
Celule individuale Celule agregate Substraturi fixe Substrat suport aflat
in suspensie
Vase cilindrice
Saccharomyces
cerevisiae (berea)
Bioreactor cu namol
activat (tratmentul
apelor uzate)
Obtinerea otetului Tratmentul apelor
uzate
Bioreactor air-lift
Methylophilus
methylotrophus
(SCP)
Bioreactor cu
agitare mecanica
Aspegillus niger
(producerea de acid
citric)
Tratmentul apelor
uzate
Obtinerea
anticorpilor
monoclonali
Bioreactor cu
agitare mecanica
Bacillus subtillis
(enzime)
Bioreactor cu
agitare mecanica
Penicillium
chrysogenum
(penicilina)
Oxidarea etanolului la acid acetic de catre bacteriile acetice -
Acetobacter sp. (Obtinerea otetului)

CLASIFICARE
Procese microbiologice industriale
Celule microbiene aderate la substraturi fixe
Trickling film generators
Introducerea de etanol
Controlul
temperaturii
Aerare