Ctedra Parasitologa General

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Estudio helmintolgico de peces de agua dulce

Una vez recolectados los peces, se debe tratar que lleguen vivos al laboratorio. Es posible
transportar vivos a los peces en bolsas de plstico grueso, con agua del medio, aireando con
bombas de bateras o bien burbujeando oxgeno con un tanque antes de cerrar adecuadamente la
bolsa. Estas bolsas pueden transportarse en cubetas o en recipientes que permitan su manejo y
cuidado. El tipo de peces, su tamao y nmero, as como la temperatura del agua son aspectos
que deberemos cuidar mucho para el transporte al laboratorio.
En el laboratorio donde se har el examen helmintolgico, los peces deben mantenerse en
las mejores condiciones posibles. Es recomendable que los peces se examinen inmediatamente o
en el menor tiempo posible despus de su captura. Por lo general en la literatura especializada se
anota que los exmenes helmintolgicos se realizan en las siguientes 24 hs. a la captura de los
hospedadores. El mantenimiento conjunto de peces de distintas especies, hacinamiento o
sobrepoblacin con exceso de ejemplares, su disposicin en condiciones inapropiadas, o el
manejo excesivo, conducen a hospedadores estresados, lo cual puede alterar los contenidos
parasitolgicos de las poblaciones bajo estudio.

Datos del hospedador
Sacrificar al pez. Tomar los datos mersticos del hospedador, longitud total, longitud
estndar, longitud de la cabeza, segn cada las caractersticas de cada hospedador y los
objetivos del trabajo.
Estos datos permitirn correlacionar las helmintiasis con las caractersticas generales de
los hospedadores (los peces se sexarn posteriormente, durante la diseccin de los rganos
internos, por examen directo de las gnadas).
Estos datos se anotarn en planillas confeccionadas especialmente para cada tipo de
hospedadores. En las mismas se consignaran todos los hallazgos de helmintos indicando
especie, familia o clase, sitio de infeccin, nmero de ejemplares, estadio de desarrollo y
mtodos de fijacin y conservacin (ver anexo 1).
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Prospeccin Helmintolgica
Examen Externo de los Hospedadores. Antes de cualquier otro procedimiento, es importante
iniciar con el examen para monogeneos. Son los helmintos que ms fcilmente se pierden, o que
podemos obviar en la revisin de los peces. Inmediatamente, colocar al monogeneo en una caja
de Petri con (poca) agua del medio de donde proceda la pesca y proceder al examen bajo
microscopio estereoscpico. Durante todo el procedimiento cuidar de mantener la humedad
suficiente en todo el cuerpo del hospedador, mediante goteo frecuente con agua del medio.
Examinar la piel, y la superficie general del cuerpo, observar cuidadosamente ambas
caras de cada aleta. Separar las aletas plvicas y pectorales cortndolas desde su base, lo ms
prximo al cuerpo del hospedador, colocarlas en cajas de Petri con poca agua del medio para
facilitar su observacin. Abrir los oprculos y retirar de la cavidad branquial las branquias
completas. Colocarlas en una caja de Petri con agua del medio y separar cada arco branquial
individualizndolo para su mejor observacin. Revisar cada arco cuidadosamente, por ambas
caras, y entre los filamentos branquiales, ayudndose con agujas de diseccin finas y pinzas de
relojero, todo bajo microscopio estereoscpico, en cajas de Petri, con agua del medio. Con un
pincel fino revisar los orificios del pez, las cavidades nasales, cloaca, y el interior de la boca y la
cara interna de los oprculos. Con ayuda de pinzas de punta roma retirar una serie completa de
escamas, preferentemente las de la lnea lateral, colocarlas en un portaobjetos con agua del
medio, y examinarlas al microscopio estereoscpico, por ambas caras. Los monogeneos deben
fijarse inmediatamente.
En las escamas, la piel, o enquistadas en los filamentos branquiales es frecuente
encontrar metacercarias de digeneos. Separar las metacercarias de los tejidos del hospedador
con pinzas de punta fina, colocarlas entre porta y cubreobjetos o en cajas de Petri pequeas. Por
lo general estas metacercarias estn enquistadas, sacarlas del quiste mecnicamente, antes de
proceder a la fijacin.
Examen interno de los hospedadores: Con una tijera de punta recta abrir la cavidad
abdominal del hospedador, desde la cloaca hasta la interseccin branquial. Retirar el tracto
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digestivo completo, desde la regin oral branquial, hasta el recto, cortando cuidadosamente los
extremos. Colocarlo en una caja de Petri con poca solucin salina 0.7% Generalmente el aparato
digestivo queda envuelto en los mesenterios, un tejido delicado de color negro que lo contiene.
Ya en la caja de Petri y bajo microscopio estereoscpico, extender el tracto digestivo
cuidadosamente, separando los mesenterios, el hgado y los tejidos grasos. La limpieza del
examen es importante para determinar con precisin el sitio de infeccin de cada especie de
helminto que encontremos. Es recomendable separar cada rgano y tejido en cajas de Petri con
solucin salina 0.7% durante el examen. Durante sta fase cuidar que el resto del cuerpo del
hospedador no se seque, goteando continuamente solucin salina 0.7% al interior de la cavidad
corporal.
Examinar el interior del aparato digestivo desgarrndolo poco a poco con pinzas finas de
diseccin bajo microscopio estereoscpico. Hacia la luz intestinal podrn encontrarse helmintos
adultos, trematodes, cestodos, acantocfalos y nematodos. Con ayuda de pinceles finos
colocarlos en cajas de Petri chicas, con solucin salina 0.7% para su observacin y fijacin
posterior. Los acantocfalos se fijan a la mucosa intestinal introduciendo la proboscis en los
tejidos, para separarlos desgarrar cuidadosamente los tejidos intestinales alrededor de la
proboscis. En las paredes intestinales tambin pueden encontrarse metacercarias o larvas de
nematodes enquistadas. Aislarlos de los tejidos del hospedador, colocarlos en cajas de Petri con
solucin salina y sacarlos de los quistes para observarlos en vivo y fijarlos adecuadamente.
Los mesenterios, los tejidos grasos y el hgado, primeramente examinarlos con el
microscopio estereoscpico, luego comprimirlos entre 2 portaobjetos o vidrios de tamao
adecuado (hacer squash) y observarlos al microscopio estereoscpico. Pueden encontrarse
tambin metacercarias y larvas de nematodes libres o enquistadas. Tambin se encuentran sobre
el hgado, los mesenterios o sobre la parte externa de la pared del intestino, larvas de
acantocfalos enquistadas (cistacantos) y metacestodes (larvas de cestodos). Es preciso retirarlas
de los tejidos del hospedador, sacarlas del quiste y colocarlas en cajas de Petri para su fijacin
posterior.
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Examinar la cavidad celmica o cavidad general del cuerpo del hospedador bajo el
microscopio estereoscpico. Retirar lo que queda de los mesenterios, las gnadas (no olvidar
sexar cada hospedador por examen directo de las gnadas en este paso), la vejiga natatoria y los
riones. Examinar todos estos tejidos y rganos primero superficialmente y despus por
compresin entre 2 vidrios o entre portaobjetos, como en el paso anterior.
Retirar ambos ojos del pez y examinarlos. Pueden encontrarse helmintos (generalmente
metacercarias) sobre el ojo, sobre el lente o en el humor acuoso del glbulo ocular, es
importante precisar el hbitat donde se encuentren los parsitos.
Con un bistur o una sierra, en peces de gran tamao, retirar la tapa craneana. Observar in
situ las meninges que rodean el cerebro. Apartar el cerebro en una capsula de Petri y comenzar a
examinar su interior con ayuda de pinzas finas. Por ltimo examinarlo por compresin entre 2
portaobjetos o vidrios.
Con un bistur, cuchillo o navaja apropiada obtener filetes de la musculatura parietal del
pez para examinarlos tambin por compresin entre vidrios. Pueden encontrarse metacercarias o
larvas de nematodes.
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Fijacin de helmintos
Una vez aislados los helmintos debern ser fijados directamente con formol 4% caliente
(casi a ebullicin).
Las metacercarias de digeneos debern desenquistarse antes de agregar el fijador.
Los cestodes debern ser previamente lavados en solucin salina 0.7%
Los monogeneos se encuentran entre los helmintos ms frgiles y pequeos. Vivos deben
permanecer siempre en agua del medio. El estudio morfolgico de este grupo de helmintos es
muy complejo y cuando se tienen muchos ejemplares, es conveniente estudiar algunos
ejemplares vivos y fijar el resto aplicando distintas tcnicas de fijacin. Es muy prctico fijarlos
directamente con formol 4% caliente, o bien por aplanamiento ligero. Otro fijador muy utilizado
es el alcohol isobutlico: colocar directamente el monogeneo en una gota del fijador en el centro
del portaobjetos, cubrir el espcimen con un cubreobjetos. Estas preparaciones son permanentes
Los acantocfalos deben tener la proboscis completamente evertida antes de fijarlos. Es
necesario colocarlos en agua destilada en refrigeracin por 8, 12 o hasta 24 hs para lograr la
eversin de la proboscis. Luego pueden fijarse sumergindolos directamente en alcohol etlico
70% caliente, formol 4% caliente o AFA
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.

Conservacin de helmintos
Para su estudio morfolgico y determinacin taxonmica, los platelmintos y los
acantocfalos se procesan para hacer preparaciones microscpicas permanentes de organismos
totales in toto. La tincin y procesamiento de helmintos da mejores resultados si se hace
inmediatamente despus de la recoleccin y fijacin. Los especmenes pueden conservarse
indefinidamente en viales con alcohol etlico 70%. Los especmenes de cada especie de

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AFA
Formol (40% formaldehdo acuoso) 60ml
95% etanol 40ml
cido actico glacial 40ml
agua destilada 400ml

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helminto por cada hospedador y rgano se separan colocndolos en viales llenos con alcohol
etlico 70%. Cada vial se identifica con una pequea etiqueta que se coloca dentro junto con los
parsitos. Los datos se escriben con lpiz o tinta china usando papel vegetal, incluyendo el
nmero y tipo de helmintos, el hospedador, el rgano en que habitaban los parsitos, la
localidad de colecta de los hospedadores, la fecha y el colector. Cada dato es sumamente
importante, y debe escribirse correctamente con la mxima legibilidad.

Bibliografa
Salgado Maldonado, G. (s/ao). Manual de prcticas de Parasitologa con nfasis en helmintos
parsitos de peces de agua dulce y otros animales silvestres de Mxico. Instituto de
Biologa, Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Disponible en:
ntux.ibiologia.unam.mx/pdf/directorio/s/salgado/manual/manual_prac_parasitol.pdf.
(ltimo acceso, 17/03/09).
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Anexo 1
Datos del Hospedador (Peces)
Nombre cientfico/Nombre comn
Nmero o Cdigo
Fecha de captura
Localidad y Provincia
Colector/es
Mtodo de captura
Prospeccin
Sexo
Peso (indicar peso fresco/formol)
Longitud estndar
Otros datos de inters
Dieta (Contenido estomacal)
Helmintos (indicar especie/familia/clase, n de ejemplares, estadio de desarrollo,
Examen externo
Superficie corporal
Cloaca
Ojos
Orificios nasales
Aletas (caudal, dorsal, pectorales,
plvicas, anal)
Oprculo
Cavidad branquial
Arcos branquiales
Examen interno
Cavidad del cuerpo
Mesenterios
Musculatura
Boca
Esfago
Estmago
Intestino (indicar porcin)
Recto
Cloaca
Hgado
Rin
Vescula Biliar
Vejiga natatoria
Corazn
Gnadas
Cerebro
Ojos
Nombre del realizador de la Prosp.
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Datos del Hospedador (Aves)
Datos del Hospedador
Nombre cientfico/Nombre comn
Nmero o Cdigo
Fecha de captura
Localidad y Provincia
Colector/es
Mtodo de captura
Prospeccin
Sexo
Otros datos de inters
Dieta (Contenido estomacal)
Helmintos (indicar especie/familia/clase, n de ejemplares, estadio de desarrollo,
mtodos de fijacin y conservacin)

Cavidad del cuerpo

Mesenterios
Pulmn
Boca
Esfago
Estmago glandular



Estmago muscular


Intestino delgado



Intestino grueso


Ciegos

Cloaca

Hgado
Rin
Vescula Biliar
Corazn
Gnadas
Otros

Nombre del realizador de la
prospeccin helmintolgica