Referat - Analiz instrumental

LABORATOR 1

Spectrofotometria= msurtoare cantitativ a spectrelor de absorbie/emisie ale unei
substane
Aplicaiile spectrofotometriei:
Analiza calitativ
Din spectrul de absorbie pot fi deduse informaii structurale, pe baza vrfurilor de
absorbie ntlnite.
Analiza cantitativ
Amplitudinea absorbiei depinde de concentraia substanei
Determinri de concentraii ADN/ARN
Determinarea densitii bacteriilor ntr-o cultur
Screening toxicologic etc.
Albastru de bromfenol (C19H10Br4O5S) este un indicator de culoare ce prezint
proprietatea de a-i modifica culoarea atunci cnd n sistemul chimic se schimb un anumit
parametru. Acesta are grupri cromatofore care i schimb structura odat cu schimbarea pH-
ului sistemului.
La pH acid, albastru de bromfenol are culoarea galben, n timp ce la pH bazic are
culoarea violet.
Soluia la pH acid se citete la spectrofotometru n domeniu 400-700 nm din 25 n 25 nm
fa de ap distilat, n cuve de 1 cm. Procesul se repet similar i pentru soluia la pH bazic.
Pentru a verifica dac valorile obinute se ncadreaz n domeniul de pH al indicatorului,
se citete la spectrofotometru n UV n domeniu 400-700 nm, pentru a evidenia virajul
indicatorului, respectiv curba gaussian a indicatorului la pH bazic i acid.
Se imprim un grafic cu cele dou viraje n funcie de lungimea de und exprimat n nm
i densitatea optic. Apoi se reprezint pe grafic punctele obinute anterior prin citirea
absorbanei la spectrofotometru din 25 n 25 nm.
Se observ dac valorile absorbanei la pH acid, respectiv la pH bazic se ncadreaz n
curba indicatorului.
Enescu Diana Gabriela- Biochimie, An I, Grupa I