Sunteți pe pagina 1din 46

GENETICA GENERALA

LUCRARI PRACTICE
CUPRINS
1. Ciclul celular mitotic
2. Metode de studiu a cromosomilor in mitoza
2.1. Metode citogenetice pentru studiul cromosomilor mitotici la plantele superioare
2.1.1. Metoda rapid Feulgen de colorare a cromosomilor la ceap Allium cepa L. (2n =
16)
2.1.2. Metoda rapid de colorare a cromosomilor la ceap Allium cepa L. (2n=16) n
mitoz cu soluie carmin-acetic
2.1.. Metode citogenetice pentru studiul cromosomilor mitotici la animale
. Meioza
!. Metode de studiu a cromosomilor in meioza
!.1. Metode de studiu a cromosomilor meiotici la plante
". Cariotip si idiograma
".1. #e$inirea termenilor% nomenclatur
6. &loidia la plante
'. Metode pentru determinarea gradului de ploidie la plante
(. Mutageneza si implicatiile sale la unele plante de cultura
(.1. )tudiul a*eraiilor cromosomiale n ana-telo$aza mitozei la unele plante de cultur
+. #rosop,ila melanogaster - o*iect de studiu in genetica
+.1. Cromosomii uriasi si cromosomii somatici la Drosophila melanogaster
(.1.1. Cromosomii uria.i
(.1.2. Cromosomii somatici
/i*liogra$ie
1. Ciclul celular mitotic
0n di1iziunea celular se disting dou categorii de e1enimente2 evenimente reproductive%
prin care sunt du*late structurile $uncionale ale celulei% esenial $iind du*larea cromosomilor% .i
evenimente distributive% prin care materialul rezultat n urma replicaiei este repartizat celulelor $iice
(Tudose, 1992).
Mitoa (gr. mitosis = $ir) sau di!iiu"ea ec!a#io"al$% este modalitatea de di1iziune celular
prin care% dintr-o celul somatic rezult dou celule $iice cu numr egal de cromosomi% at3t ntre
ele% c3t .i cu celula mam. Mitoza este di1iziunea celular care are loc n celule somatice .i
asigur transmiterea $idel a caracterelor la celulele $iice4 ea poate su$eri ns% di$erite in$luene
care adaug aparentei sta*iliti a caracterelor% noi 1alene. Ciclul celular mitotic% la plante .i
animale% cuprinde n principal urmtoarele procese2 duplicarea cromosomilor unicromatidici (.i a
centrozomului la animale) .i deplasarea spre poli a cromosomilor fii% dup care% urmeaz
diviziunea citoplasmei. 0n procesul mitozei se organizeaz aparatul mitotic alctuit din structuri
cromatice .i acromatice% care este complet n meta$az. &entru realizarea acestuia% sunt necesare
proteine speci$ice% a cror sintez necesit un mare consum de energie.
5otalitatea proceselor prin care trece celula somatic de la $ormare .i p3n la scindarea ei
n dou celule $iice% cu numr de cromosomi egal cu numrul de cromosomi al celulei din care au
pro1enit% alctuiesc ciclul celular.
Ciclul mitotic (%i&.1) cuprinde2 interfaza (perioada dintre dou di1iziuni succesi1e) .i cele
patru $aze ale di1iziunii mitotice propriu-zise - profaza% metafaza% anafaza .i telofaza a13nd o
durat 1aria*il% n $uncie de specie% tipul de celule% temperatur etc.% de la c3te1a ore% la zeci .i
sute de ore.
Interfaza
6nter$aza are cea mai mare durat n timp n ciclul mitotic .i este caracterizat de procese
de *iosintez. #urata inter$azei este 1aria*il% de la c3te1a ore p3n la zile. 7a plante% la un ciclu
tipic de 28-2! de ore% mitoza dureaz '8-118 minute (pro$aza = 8 - !" min.% meta$aza = " - 18
min.% ana$aza = 1" - 28 min. .i telo$aza = 28 - 8 min.) (Toma .i Ni#$, 199'). 7a celula animal% un
ciclu tipic dureaz 1( - 2! de ore% din care durata $azei 91 este de apro:imati1 6 ore (n general
1ariaz cel mai mult)% $aza ) (timpul necesar replicrii genomului) dureaz 6 - ( ore% iar $aza 92
este% de regul% cea mai scurt (mai ales c3nd mitozele se succed rapid). Mitoza% de o*icei
dureaz mai puin de o or (Le(i", 199)).
Cercetrile micro$otogra$ice .i microradiogra$ice au demonstrat c inter$aza este $oarte
puin acti1 din punct de 1edere mor$ologic% dar este cea mai acti1 din punct de 1edere meta*olic4
cantitatea de ;#< se du*leaz de la 2C la !C. &e *aza acestor o*ser1aii% *o(ard .i Pelc% n
19'+ au mprit inter$aza n trei perioade2
- perioada 91 (engl. gap = gol) - perioad presintetic% n care nu are loc sinteza de ;#<%
ci doar o acti1are a enzimelor. Cromosomii sunt monocromatidici4 se sintetizeaz ;=< (n special
;=<m) .i proteine4
- perioada ) (engl. s>nt,esis = sintez) - perioada de sintez a ;#<4 p3n la s$3r.itul $azei
) toat cantitatea de ;#< se replic (pe parcursul $azei ) cantitatea total de ;#< cre.te de la 2C
la !C). 7a s$3r.itul acestei perioade% cromosomii sunt alctuii din dou cromatide $oarte lungi .i
su*iri4
- perioada 92 - perioad postsintetic% c3nd sinteza ;#< se opre.te4 are loc *iosinteza
proteinelor .i a ;=<% care se des$.oar .i n celelalte perioade ale inter$azei. Celula conine
cromosomi *icromatidici.
%i&. 1. Ciclul celular mitotic ,du-$ Al.erts /i cola.., 199)0
&e parcursul inter$azei (%i&.2)% cromosomii sunt ,idratai% despiralizai .i nu se o*ser1 la
microscopul optic (1atso", 192)).
%i&. 2 As-ectul "ucleului 3" i"ter4a$, 3" celulele meristemului radicular la Allium cepa L. ,2"5160 ,du-$ *artl /i
7o"es, 19980
0n a$ar de celulele la care ciclul mitotic se des$.oar n mod normal% e:ist celule n
repaus sau n perioada 98% asemntoare $azei 91% dar di$erit prin $aptul c celulele nu pot intra n
$aza ). 0n $aza 98 intr celulele neproli$erati1e. ?neori% celulele se pot a$la n repaus n $aza !C
(e:emplu2 celulele em*rionare din semine)% ast$el nc3t% intr direct din 98 n 924 alteori% din 98 pot
intra n 91 timpuriu (Le(i", 199)).
0n e:plicarea cauzelor ce determin intrarea celulei n di1iziune mitotic (trecerea din 92 n
mitoz) e:ist di$erite ipoteze. )e pare c declan.area mitozei este determinat de modi$icarea
raportului nucleu @ citoplasm.
Profaza
0n pro$az au loc procesele2 mrirea volumului nucleului% condensarea cromosomilor%
stabilirea polilor pentru diviziune% dezorganizarea membranei nucleare% dispariia nucleolilor .i
formarea fusului acromatic.
7a nceputul acestei $aze% cromosomii se prezint su* $orm de $ilamente su*iri% lungi%
alctuind un spirem. 0n pro$aza timpurie (%i&.+) ei se dispun n tot spaiul nuclear (n celulele 1ii se
o*ser1 u.or% a13nd indicele de re$racie 1%"8 $a de cel al carioplasmei de 1%'). 0n pro$aza t3rzie
(%i&.))% gradul de spiralizare al cromosomilor cre.te .i ei de1in mai scuri .i mai compaci% apr3nd
$ormai din dou cromatide% $oarte apropiate ntre ele .i n$.urate una n Aurul celeilalte. 7a
nceputul pro$azei% are loc o prim spiralizare a cromosomilor denumit Bspiralizarea micC% ce se
realizeaz prin mic.orarea numrului de spire .i mrirea diametrului lor. )pre s$3r.itul pro$azei% are
di!iiu"ea
mitotic$
i"ter4aa
celule
4iice
2cA9N
2cA9N
2cA9N
)cA9N
loc a doua spiralizare denumit Bspiralizare somaticC% n care numrul de spire continu s scad%
ele apropiindu-se tot mai mult.
0n pro$az% distana dintre cromosomi cre.te treptat .i are loc dezorganizarea nucleului .i a
mem*ranei nucleare% dispariia nucleolilor .i $ormarea $usului mitotic. Centriolii migreaz spre polii
celulei% plas3ndu-se n dou puncte opuse. 0ntre centrioli se organizeaz fusul de diviziune ($us
acromatic% $us mitotic sau $us nuclear)% alctuit dintr-un numr mare de $ilamente% cu e:tremitile
inserate pe centrioli. Fusul nuclear este un organit tranzitoriu% cu aAutorul cruia se realizeaz
distri*uirea egal a cromosomilor n cele dou celule $iice. Filamentele $usului de di1iziune sunt de
dou tipuri2 filamente fusoriale de sprijin (continue) de la un centriol la altul ce condiioneaz
structura $usului .i filamente cromosomiale (kinetice)% care sunt sintetizate .i pleac de la
centromerul $iecrui cromosom .i nainteaz simultan% cu aceea.i 1itez% spre cei doi poli ai celulei.
%i&. + As-ect al "ucleului u"ei celule di" meristemul radicular de la Allium ce-a L. ,2"5160, a4lat$ 3" -ro4a$
tim-urie ,du-$ *artl /i 7o"es, 19980
%i&. ) As-ect al "ucleului u"ei celule di" meristemul radicular de la Allium ce-a L. ,2"5160, a4lat$ 3" -ro4a$
t:rie ,du-$ *artl /i 7o"es, 19980
)tadiul $inal al pro$azei - -rometa4aa% se caracterizeaz prin totala dezorganizare a
mem*ranei nucleare% care se $ragmenteaz n poriuni relati1 mari% ce pstreaz in$rastructura de
mem*ran du*l .i rm3n% n parte% n interiorul $usului de di1iziune% particip3nd mai t3rziu la
$ormarea mem*ranelor nucleilor $ii. Cromosomii e:ercit mi.cri neregulate ntre polii celulei .i
planul ecuatorial al acesteia.
Metafaza
0n aceast $az are loc des13r.irea aparatului mitotic% iar cromosomii% spiralizai la ma:im%
se dispun n placa ecuatorial meta$azic (%i&.'). Mi.carea de dispunere a cromosomilor n placa
ecuatorial% la distan egal de polii $usului de di1iziune prezint trei componente2
adunarea cromosomilor ntr-o poziie de ec,ili*ru ntre cei doi poli% mi.care datorat
interaciunii ntre polii $usului .i centromeri4
orientarea cromosomilor n placa ecuatorial ast$el ca% centromerii s $ie situai n a:ul
longitudinal al $usului de di1iziune% cromatidele $iind orientate lateral4
distri*uirea cromosomilor n placa meta$azic se realizeaz n Aurul unui $us central gol
(n seciune trans1ersal apare ca un ,alo)% cromosomii $iind dispu.i la peri$eria $usului% cu *raele
orientate n a$ar.
Mor$ologia cromosomilor se studiaz n meta$az% deoarece n aceast $az ei sunt
condensai n cel mai nalt grad. Fiecare cromosom este alctuit din dou cromatide .i prezint n
lungul acestora% spre s$3r.itul meta$azei% o $isur longitudinal% care reprezint spaiul dintre cele
dou cromatide surori. 7a s$3r.itul meta$azei (%i&.6)% cromatidele surori ncep s se separe
(cli1area longitudinal)% $c3ndu-se trecerea spre ana$az.
%i&. ' As-ect al cromosomilor u"ei celule di" meristemul radicular de la Allium ce-a L. ,2"5160, a4lat$ 3"
meta4a$ tim-urie ,du-$ *artl /i 7o"es, 19980
%i&. 6 As-ect al cromosomilor u"ei celule di" meristemul radicular de la Allium ce-a L. ,2"5160, a4lat$ 3"
meta4a$ t:rie,du-$ *artl /i 7o"es, 19980
Anafaza
;na$aza se caracterizeaz prin $ormarea% din cromatidele surori% a cromosomilor $ii .i
migrarea lor spre cei doi poli ai celulei. Formarea cromosomilor $ii de*uteaz n ana$aza timpurie%
c3nd are loc cli1area centromerilor% cromatidele rm3n3nd nc apropiate unele de altele. D dat
terminat cli1area centromerilor% ncepe separarea cromatidelor n lungul $isurii longitudinale
e1ideniate n meta$az (%i&.2). #up Le(i" (199))% la celulele animale% n ana$az% centromerul
este duplicat $uncional. C3nd .i acest proces se nc,eie% cromatidele $iice% $iecare cu c3te un
centromer propriu% ncep migrarea spre poli (%i&.8)% de1enind cromosomi $ii.
)e admite c mi.carea cromosomilor spre poli este o consecin a scurtrii $ilamentelor
$usoriale de spriAin% care leag polii $usului (prin pierderea sau adiia de tu*ulin din microtu*uli).
;lungirea determin sta*ilitatea $usului% iar scurtarea este mecanismul implicat n mi.carea
cromosomilor spre poli. ;ceast mi.care este posi*il datorit e:istenei n structura $usului mitotic
a unor proteine de natur actinic. 0n cazul n care setul de cromosomi migreaz aproape per$ect
sincron% se $ormeaz Bplaca anafazic sau Bdublul asterC. C,iar dac mi.carea cromosomilor nu
este sincron% ea nu ncepe dec3t dup ce toi cromosomii sunt plasai n placa ecuatorial.
0n celulele animale% de regul% autosomii migreaz concomitent% iar ,eterosomii au o 1itez
de migrare di$erit. 0n celulele plantelor% spre s$3r.itul ana$azei% $usul mitotic se mre.te n 1olum n
regiunea ecuatorial .i ia $orm de *utoia.% $orm3nd ulterior fragmoplastul.
%i&. 2 As-ect al cromosomilor u"ei celule di" meristemul radicular de la Allium ce-a L. ,2"5160, a4lat$ 3" a"a4a$
tim-urie ,du-$ *artl /i 7o"es, 19980
%i&.8 As-ect al cromosomilor u"ei celule di" meristemul radicular de la Allium ce-a L. ,2"5160, a4lat$ 3" a"a4a$
t:rie ,du-$ *artl /i 7o"es, 19980
Telofaza
5elo$aza este ultima $az a mitozei% caracterizat prin prezena $enomenelor opuse celor
din pro$az. Cromosomii su$er un proces de despiralizare .i re1in la aspectul inter$azic.
Fragmentele de mem*ran nuclear migreaz spre peri$eria $usului de di1iziune4 numrul lor
cre.te printr-o sintez suplimentar. ;ceste 1ezicule se agreg n Aurul masei cromosomiale% se
turtesc% nconAoar nucleul inter$azic .i $ormeaz noua mem*ran nuclear. D parte din 1eziculele
mem*ranoase aAung la ni1elul liniei de demarcaie dintre cele dou celule $iice. ;re loc .i
reorganizarea nucleolilor la ni1elul regiunilor ce ndeplinesc $uncia de organizatori nucleolari (%i&.9
.i %i&.1;).
%i&.9 Celul$ di" meristemul radicular de la Allium ce-a L. ,2"5160, a4lat$ 3" telo4a$ tim-urie ,du-$ *artl /i
7o"es, 19980
%i&.1; As-ect al "ucleilor 4ii, a-ar#i":"d u"ei celule di" meristemul radicular de la Allium ce-a L. ,2"5160, a4lat$
3" telo4a$ t:rie ,du-$ *artl /i 7o"es, 19980
Citochineza
0n mod o*i.nuit% di1iziunea nuclear este urmat de citochinez (plasmodierez%
citodierez sau plasmotomie).
Citoc,ineza poate a1ea loc centripet - la plantele in$erioare (Cladophora, Spirogyra)%
c3nd mem*rana ce separ cele dou celule $iice apare su* $orma unui inel ce cre.te centripetal%
asemntor unei dia$ragme (Toma /i Ni#$, 199'). 7a plantele superioare% citoc,ineza are loc
centrifug. #up <u!at% n zona ecuatorial a $ragmoplastului% se dispun 1ezicule proteice% printre
care se intercaleaz $ragmente ale reticulului endoplasmic% ce migreaz n aceast regiune dinspre
poli. 0mpreun cu elementele microtu*ulare% se $ormeaz o structur $i*rilar. 0n Aurul $i*relor
microtu*ulare se aglomereaz 1ezicule mici golgiene (%i&.11a,.). Eeziculele se mresc% se
contopesc .i 1in n contact cu pereii celulei mame% $orm3nd lamela median (%i&.11c). Celulele
$iice $ormate% ela*oreaz mem*rana primar% str*tut de plasmodesme (%i&.11d,e). 7a animale%
separarea celulelor $iice se $ace prin $ormarea unui inel contractil% deci prin .trangulare(%i&.12 a,
.).
%i&. 11 %ormarea -eretelui des-$r#itor, 3"tre celulele=4iice, co"secuti! di!iiu"ii mitotice la -la"tele su-erioare
,du-$ 9e Ro.ertis /i 9e Ro.ertis,198+0
%i&.12 Se-ararea celulelor=4iice, -ri" i"termediul 4orm$rii inelului contractil, co"secuti! di!iiu"ii mitotice, la
or&a"ismele a"imale ,du-$ 9e Ro.ertis /i 9e Ro.ertis,198+0
0n celulele normale% mitoza .i citoc,ineza sunt riguros coordonate. #ac are loc *locarea
citoc,inezei% mitoza se des$.oar normal% produc3ndu-se o celul *inucleat.
Ddat cu replicarea cromosomilor% are loc .i replicarea organitelor citoplasmatice sau
separarea lor din celula mam n celulele $iice% dup care acestea .i completeaz% prin noi
sinteze% setul de organite intracitoplasmatice. 0n pro$az% reticulul endoplasmic este trans$ormat
ntr-un sistem discontinuu de 1ezicule s$erice% dispuse n special n regiunile peri$erice ale
citoplasmei. 0n meta$az% mitocondriile se adun n Aurul $usului4 n ana$az% ele se grupeaz n
Aurul regiunii ecuatoriale% odat cu separarea celulelor $iice a13nd loc .i repartizarea acestora. 0n
inter$aza celulelor $iice% el re1ine la $orma tipic.
0n di1iziunea mitotic% meta$aza .i ana$aza sunt $azele cele mai scurte ale di1iziunii% n timp
ce pro$aza% uneori .i telo$aza% sunt cele mai lungi. #es$.urarea n timp a mitozei depinde .i de
tipul celulei% 13rst% starea $iziologic% condiii de mediu (mai ales temperatura). Mitoza poate $i
*locat prin aciunea .ocurilor de temperatur% narcoticelor% otr1urilor etc. (Raicu /i cola..,
192+).
2. Metode de studiu a cromosomilor i" mitoa
2.1. Metode cito&e"etice -e"tru studiul cromosomilor mitotici la -la"tele su-erioare
Cromosomii la plantele superioare se e1ideniaz n celulele a$late n di1iziune mitotic din
esuturile meristematice% din zonele de cre.tere ale organelor 1egetati1e (ape: radicular% ape:
caulinar)% sau n celulele meristemoide din calus.
0n lucrrile practice de citogenetic 1egetal se $olosesc mai ales specii de plante cu
cromosomi de dimensiuni mari .i n numr relati1 mic. &entru e1idenierea cromosomilor% n
celulele a$late n di1iziune mitotic% se $olosesc esuturile meristematice din zona de cre.tere a
rdcinii de ceap - Allium cepa L. (2n = 16)% secar - Secale cereale L. (2n = 1!)% *o* - Vicia
faba L. (2n = 12) etc.
Materialul *iologic tipic% este reprezentat de esutul meristematic din ape:ul radicular al
rdcinii de ceap - Allium cepa L. (2n = 16).
=dcinile de ceap se o*in dup o perioad de 2- zile de la punerea ntr-un pa,ar cu
ap a *ul*ului de ceap% ast$el ca numai discul s ptrund n lic,id. 7a temperatura camerei%
rdcinile ating n 2- zile% lungimea de 18-1" mm .i pot $i deta.ate (%i&.1+).
a b c d e
b
a
%i&. 1+ Germi"area u"ui .ul. de cea-$, 3" la.orator
&entru o*inerea rdcinielor em*rionare% seminele se pun la germinat pe ,3rtie de $iltru%
umectat cu ap% n cutii &etri% la temperatura camerei. 9erminarea seminelor la unele specii de
plante se $ace n nisip umed % n condiii speciale. =ecoltarea rdcinilor se realizeaz c3nd
acestea ating lungimea de 18-1" mm. Momentul optim de recoltare - c3nd un numr mare de
celule se a$l n di1iziune - se determin prin tatonare. 5impul optim de recoltare pe parcursul unei
zile este ntre orele ' - 18% $uncie de durata ciclului celular la specia respecti1.
2.1.1. Metoda rapid !eulgen de colorare a cromo"omilor la ceap Allium cepa L. #$n % &'(
Metodele rapide de colorare sunt *azate pe ,idroliza su*stanelor pectice din pereii celulari
.i colorarea di$ereniat a constituenilor celulari.
Pri"ci-iul metodei>
0n celulele n di1iziune% doar ;#<-ul cromosomial este colorat selecti1 n ro.u 1iolaceu% de
ctre o soluie de $u:in *azic decolorat (reacti! Sc?i44). Metoda a $ost ela*orat de %eul&e" .i
Rosse".ec@ (192)) .i modi$icat de Tomasi (19+6)4 se aplic pentru e1idenierea cromosomilor
mitotici la di$erite specii de plante (Tudose, 1962).
Materiale "ecesare>
material *iologic (rdcini de ceap de 1-1%" cm)4
sticlrie (pa,are /erzelius% $lacoane% lame de microscop% lamele% pipete)4
instrumentar (pensete% lame% *ee de c,i*rit)4
aparatur (microscop optic% termostat% $rigider)4
,3rtie de $iltru
reacti1i
pre$i:atori2
soluie apoas de colc,icin (8%81 - 8%2F)4
sau
ap rece la 2-!C
$i:atori nucleari2
alcool etilic a*solut - acid acetic glacial ( 21)% sau4
$i:ator Carno> (6 pri alcool etilic a*solut 2 pri cloro$orm 2 1 parte acid acetic
glacial)% sau4
$i:ator /attaglia (" pri alcool etilic a*solut 2 1 parte acid acetic glacial 2 1 parte $ormol 2
1 parte cloro$orm)
colorani2
reacti1 )c,i$$ - preparat dup 9arli"&to" .i La Cour (196;) (c4. Tudose, 1962).
)oluia $olosit la colorare se recomand s nu se arunce% deoarece poate $i $olosit de
nenumrate ori% p3n c3nd capacitatea ei de colorare scade.
Eta-e de lucru>
Pre4iAarea
&re$i:area este necesar pentru a in,i*a $ormarea $usului de di1iziune% determin3nd
acumularea de celule n meta$az. ;ceast etap nu se recomand s se e:ecute c3nd se
urmre.te o*ser1area tuturor etapelor di1iziunii. &re$i:area este a*solut necesar ns% la
e$ectuarea preparatelor $olosite pentru studierea cariotipului% realiz3nd o scurtare prin spiralizare% a
cromosomilor.
Materialul *iologic (rdcinile de ceap de 1 - 1%" cm lungime) se introduce n $lacoane mici
de sticl% adug3ndu-se 2 - ml de pre$i:ator. #up trecerea timpului necesar pre$i:rii%
pre$i:atorul se ndeprteaz cu o pipet sau prin decantare. Ca pre$i:atori se $oloseste de
e:emplu% soluie apoas de colc,icin 8%81-8%2F sau ap rece la 2 - !
8
C% ! - 2! ore% la $rigider.
&entru studiul cromosomilor n mitoz la ceap% recomandm pre$i:area *ul*ilor de ceap
germinai% cu rdcini de 1 - 1%" cm% timp de 2! de ore la $rigider (-!
8
C)% sau pre$i:area cu soluie
de colc,icin% 8%2F% timp de 2 ore la temperatura camerei.
%iAarea
Fi:area are rolul de a omor celulele% n starea n care se a$l n acel moment .i de a
coagula constituenii celulari% $r a modi$ica structura intern .i e:tern a celulelor. &rin $i:are%
*iocoloizii celulei se coaguleaz% constituenii celulari put3ndu-se colora cu di$erii colorani.
Fi:area se realizeaz prin adugarea peste materialul *iologic a 2- ml de $i:ator% dup
ndeprtarea su*stanei de pre$i:are. 7a ceap% se prele1eaz rdcinile .i se plaseaz ntr-un
$lacon de sticl% n 1ederea e$ecturii $i:rii cu $i:ator /attaglia% timp de 12 min.% la temperatura
camerei. 0n general% timpul de $i:are 1ariaz n $uncie de soluia de $i:are .i de consistena
materialului $i:at.
#ac prelucrarea materialului *iologic nu se continu imediat% el se conser1 la $rigider (2 -
!
8
C)% n alcool etilic '8F.
S-$larea
=olul splrii este de a ndeprta urmele de $i:ator. )plarea se realizeaz cu soluie de
GCl 1<% la temperatura camerei% timp de " min. #in $lacoane% se ndeprteaz soluia de $i:are .i
se adaug soluia de splare.
*idrolia
=olul ,idrolizei este de a u.ura colorarea% prin dizol1area parial a su*stanelor pectice
intercelulare% distrugerea parial a pecto-celulozei parietale% precum .i u.urarea etalrii celulelor
ntre lam .i lamel.
#up ndeprtarea soluiei de $i:are% sau a alcoolului% se realizeaz ,idroliza la cald sau la
rece. Gidroliza la cald se realizeaz la temperatura de 68
8
C% prin adugarea de 2 - ml GCl 1<.
5impul este 1aria*il% $uncie de duritatea esuturilor4 se sta*ile.te prin tatonri (la ceap% ' - ( min.).
Gidroliza la rece se realizeaz prin adugarea de soluie GCl "8F% dup ndeprtarea soluiei de
splare. 7a ceap% ,idroliza se realizeaz timp de 18-1" min.% la temperatura camerei.
Colorarea
#up ndeprtarea soluiei de ,idroliz (cu aAutorul unei ,3rtii de $iltru se ndeprteaz
urmele de soluie de ,idroliz)% se adaug 2- ml de reacti1 )c,i$$% ast$el nc3t rdcinile s $ie
scu$undate n colorant% iar colorantul s rm3n incolor. #up 1"-28 de min.% zona meristematic
din 13r$ul rdcinii ncepe s se coloreze n ro.u-1iolaceu% apoi n 1iolet intens% deoarece aici se
a$l celule n di1iziune4 restul rdcinii% unde $rec1ena di1iziunilor este sczut% iar celulele sunt
mari .i alungite% rm3ne 1izi*il necolorat. &entru o *un colorare sunt necesare 8 min. - 1 or% la
temperatura camerei. D colorare intens% uni$orm% se o*ine dac materialul introdus n colorant
se pstreaz la $rigider% c3te1a ore. &entru mrirea contrastului ntre cromosomi .i citoplasm se
recomand meninerea rdcinilor scoase din colorant ntr-o soluie de acid acetic !"F% timp de 18
- 1" min. sau n ap% timp de 8 de min.% spl3nd ast$el e:cesul de colorant. 0n cazul n care nu s-a
realizat o colorare satis$ctoare% intensi$icarea ei se realizeaz prin e:ecutarea preparatului ntr-o
pictur de carmin acetic. 0n colorant% la $rigider% materialul se poate pstra ma:im 1-2 zile% dup
care se degradeaz% a13nd loc .i colorarea citoplasmei.
E4ectuarea -re-aratelor tem-orare ra-ide ,ti- sBuas?0
&reparatele microscopice rapide se o*in prin etalarea 13r$ului colorat al rdcinii (de
pre$erin o poriune de 1-2 mm)% pe o lam de microscop curat .i degresat (prin splarea
lamelor n amestecuri o:idante speciale $olosite n lucrrile de citologie% n alcool etilic +6F% sau n
spirt sanitar% urmate de o *un .tergere cu o *ucat de ti$on% naintea e$ecturii preparatului)% ntr-o
pictur de acid acetic !"F. 0n preala*il% 13r$ul colorat al rdcinii se poate trece printr-un
cristalizor cu ap. ;.ez3nd deasupra 13r$ului deta.at al rdcinii o lamel .i in3nd cu un deget o
latur a lamelei% se etaleaz preparatul prin *ti ritmice .i sistematice n lamel% cu un * de
c,i*rit% pentru dispunerea celulelor ntr-un singur strat .i dispersarea cromosomilor n celule.
Hliminarea e:cesului de soluie .i des13r.irea dispersrii celulelor .i a cromosomilor se
realizeaz cu aAutorul unei ,3rtii de $iltru% aps3nd cu degetul mare peste lamel% $r a o mi.ca.
&entru a mpiedica mpr.tierea cromosomilor .i pentru o *un $i:are a celulelor pe lam% se
recomand ungerea acesteia naintea e:ecutrii preparatului cu al*umin glicerinat. 7ama uns
este trecut cu partea uscat deasupra unei $lcri% e1it3nd coagularea al*uminei glicerinate.
Cu c3t etalarea se e$ectueaz mai *ine% cu at3t preparatul este mai *un% prezent3nd
cromosomii *ine dispersai .i indi1idualizai. 5re*uie e1itat deplasarea lamelei pe lam n timpul
etalrii% $apt ce duce la rostogolirea celulelor .i la compromiterea parial sau total a preparatului.
#up etalare% ntre lam .i lamel% tre*uie s se o*ser1e cu oc,iul li*er un strat $oarte $in de
material celular colorat n 1iolet.
&reparatele ast$el o*inute% se pot o*ser1a la microscop imediat dup e$ectuare% timp de
c3te1a ore% deoarece la lumin .i la temperatura camerei% colorantul 1a dispersa n citoplasm.
E4ectuarea -re-aratelor semi-erma"e"te
&entru studiul preparatelor .i n ziua urmtoare% acestea se e$ectueaz semipermanent%
pentru a e1ita e1aporarea acidului acetic !"F% ceea ce ar duce la des,idratarea celulelor. ;st$el de
preparate se realizeaz prin para$inarea marginilor lamelei% sau prin adugare de glicerin pe
marginile acesteia% la contactul cu lama .i ndeprtarea e:cesului de glicerin cu aAutorul unei ,3rtii
de $iltru. 7amele semipermanente se pot pstra la $rigider timp de 2! - !( de ore. #up o pstrare
ndelungat% colorarea se intensi$ic% cuprinz3nd .i citoplasma.
E4ectuarea -re-aratelor -erma"e"te -ri" i"cludere 3" .alsam de Ca"ada
&reparatele microscopice pe care dorim s le pstrm timp ndelungat% cu scopul de a ser1i
drept model% sau ca do1ad a unei cercetri .tiini$ice% se monteaz n *alsam de Canada (r.in
misci*il cu :ilenul sau toluenul). 0n Aurul lamelei se pune o pictur de alcool +6F .i cu aAutorul
unei lame de ras% se desprinde cu atenie lamela de pe lam% printr-o mi.care de ridicare a lamelei.
Materialul de studiu rm3ne prins de lam .i de lamel. ;t3t lama% c3t .i lamela% se trec prin dou
*i succesi1e de alcool etilic a*solut sau alcool *utilic .i dou *i de :ilen sau toluen% timp de 2-"
min.% pentru $iecare *aie.
=olul alcoolului este acela de a des,idrata esuturile .i de a le spla de acidul acetic4 :ilenul
1a nlocui apa din esuturi4 de asemenea% *alsamul de Canada este misci*il cu :ilenul.
7amele se introduc n pa,are /orel sau orice alt tip de pa,ar% iar lamelele n capsule de
sticl sau porelan% ntotdeauna cu preparatul *iologic plasat la $aa superioar. &e lama umed% n
regiunea unde sunt celule% se pune o pictur de *alsam de Canada% iar deasupra se aplic o
lamel curat .i degresat. &e aceea.i lam% alturi (n regiunea $r celule) se pune o alt
pictur de *alsam de Canada peste care se a.eaz lamela iniial% cu $aa ce conine celulele% n
Aos. )e ndeprteaz e:cesul de *alsam de Canada printr-o u.oar apsare pe lamele% cu o
*ucat de ,3rtie de $iltru% realiz3ndu-se ast$el% .i prinderea lamelelor de lam. &reparatul se usuc
la termostat% la !8
8
C% timp de c3te1a zile .i se etic,eteaz (se noteaz specia .i esutul din care s-
a e$ectuat preparatul% metoda de colorare% data% e1entual numele persoanei care a e$ectuat
preparatul etc.)% put3nd $i pstrat apoi timp ndelungat.
EAami"area -re-aratelor la microsco-ul o-tic
H:aminarea preparatelor se e$ectueaz n lumin puternic% cu $olosirea unui $iltru 1erde%
care mre.te contrastul ntre cromosomi .i citoplasm. )e recomand ca o*ser1area s nceap
cu o*iecti1ul 18:% apoi% se sc,im* o*iecti1ele 28:% !8: .i c,iar +8: (cu imersie n ulei de cedru).
#eoarece reacti1ul )c,i$$ coloreaz selecti1 numai ;#<-ul% la microscopul optic% se 1or
o*ser1a cromosomii colorai n ro.u-1iolet4 nucleolii% citoplasma .i organitele celulare rm3n3nd
incolore. &ereii celulari nu se coloreaz% $iind greu 1izi*ili% de culoare gl*uie4 uneori se o*ser1
doar cromosomii celulelor n di1iziune .i nucleii celulelor n inter$az. &entru a delimita celulele% se
poate realiza o u.oar colorare a citoplasmei% cu o soluie alcoolic $oarte sla* de 1erde de metil.
;ceast colorare se realizeaz naintea e$ecturii preparatului permanent% prin trecerea lamei .i a
lamelei pentru un timp $oarte scurt (c3te1a secunde)% prin soluie alcoolic de 1erde de metil.
;st$el% citoplasma se coloreaz n 1erde desc,is .i celulele pot $i u.or delimitate% iar cromosomii se
o*ser1 mai *ine% datorit contrastului de culoare.
7a microscopul optic se 1or o*ser1a celule n inter$az cu nuclei mici% colorai n ro.u-1iolet%
cu nucleoli incolori% ce apar ca ni.te corpusculi lumino.i de $orm mai mult sau mai puin rotund.
)e o*ser1 .i celule n di$erite $aze ale di1iziunii mitotice2
celule n pro$az timpurie% c3nd cromosomii ncep s de1in 1izi*ili la microscopul
optic .i au aspectul unor $ilamente $ine .i su*iri4 n pro$aza t3rzie% c3nd cromosomii se
indi1idualizeaz% $iind situai n nucleu. )pre s$3r.itul pro$azei se dezorganizeaz mem*rana
nuclear4
celule n meta$az ($az cu $rec1en ridicat n preparatele microscopice% n cazul
n care s-a e$ectuat pre$i:area)4 se pot numra .i o*ser1a mor$ologic cromosomii care au atins
ma:imul spiralizrii% $iind *ine indi1idualizai. 7a Allium ce-a L. (2n = 16) se pot o*ser1a cu
u.urin .i se pot numra 16 cromosomi% de $orma unor *astona.e% cu capetele mai mult sau mai
puin ndoite. &rin studiu mai amnunit cu o*iecti1ul de imersie se poate o*ser1a mor$ologia
$iecrui cromosom n parte% put3ndu-se e:ecuta micro$otogra$ii4
celule n ana$az - n ana$az timpurie% cu cromosomii $ii unicromatidici ce se
deplaseaz spre polii celulei .i ana$az t3rzie% cu cromosomii $ii la cei doi poli ai celulei% su* $orm
de stea - diaster4
celule n telo$az timpurie% c3nd cromosomii $ii au aAuns la polii celulei .i telo$az
t3rzie% caracterizat prin $ormarea nucleilor $ii .i apariia peretelui despritor ($ragmoplastul).
2.1.2. Metoda rapid de colorare a cromo"omilor la ceap Allium cepa L. #$n%&'( )n mitoz
cu "olu*ie carmin+acetic
Metoda a $ost ela*orat n 1926 de ctre <elli"& (c4. Tudose, 1962).i se *azeaz pe $aptul
c acidul carminic (din colorantul natural carmin% e:tras din $emelele ,omopterului Coccus cacti)%
se comport ca un colorant acid n soluie alcalin .i se ncarc negati1% iar n soluie acid% ca un
colorant *azic% ncrc3ndu-se poziti1. ;ceast metod este des $olosit n studiile de citogenetic
1egetal% deoarece este u.or de e$ectuat% necesit3nd un timp scurt.
Materialul *iologic% sticlria% instrumentarul .i reacti1ii utilizai sunt identici cu cei $olosii n
cazul metodei Feulgen.
Colorantul utilizat este soluia carmin acetic ("" cm

ap distilat la 188
8
C% !" cm

acid
acetic glacial .i 8%" g carmin). ;mestecul se pune ntr-un *alon de sticl% se agit .i se a.eaz n
*ain-marie% ls3ndu-se s $iar* c3te1a minute. )e agit din nou .i se las s se rceasc4 se
$iltreaz .i se adaug c3te1a cristale de acetat de $ier (cu rol de mordant)% ce se dizol1 ncet n
soluie% e:cesul depun3ndu-se la *aza 1asului. )e pstreaz la ntuneric .i la rece (la $rigider).
Eta-e de lucru>
Pre4iAarea
&re$i:area materialului *iologic lipse.te% sau poate $i e$ectuat la $el ca la metoda Feulgen.
%iAarea
Fi:area nu este necesar4 se poate realiza n $i:ator alcool 2 acid acetic ( 2 1)% timp de 2 -
12 ore% sau cu alt $i:ator. #ac nu se continu lucrul% materialul poate $i pstrat la rece% n $iole cu
alcool '8F% *ine nc,ise.
*idrolia /i colorarea
Gidroliza .i colorarea se e$ectueaz simultan% n soluia carmin-acetic. 0ntr-o sticl de ceas
sau o capsul de porelan% se pun - " cm

colorant carmin acetic% peste materialul de studiat


(rdcinie de 18 - 1" mm lungime). &entru realizarea ,idrolizei se adaug c3te1a picturi (18 - 1")
de GCl 1<4 se nclze.te 28 - 2" min. la $lacra unei lmpi de spirt sau a unui *ec de gaz% e1it3nd
$ier*erea .i agit3nd% p3n c3nd materialul capt culoarea ro.u nc,is% de1ine moale .i se las la
*aza 1asului.
E4ectuarea -re-aratelor microsco-ice
&reparatele microscopice se realizeaz pe o lam de microscop% ntr-o pictur de carmin
acetic% n care se a.eaz 13r$ul unei rdcinie. &entru intensi$icarea culorii% se amestec u.or
colorantul cu aAutorul unei spatule metalice. )e a.eaz deasupra o lamel% se etaleaz .i se
ndeprteaz e:cesul de colorant% n acela.i mod ca la metoda Feulgen.
2.1.+. Metode citogenetice pentru "tudiul cromo"omilor mitotici la animale
)tudiul cromosomilor la animale se poate realiza direct C n esuturile cu acti1itate mitotic
intens (esut ,ematopoetic% ,epatic% splenic% gonadal% epiteliul cornean% esuturi em*rionare sau
de regenerare% c3t .i i"direct C n culturi de esuturi.
Metode -e"tru studiul cromosomilor 3" di4erite #esuturi -ro!e"ite de la a"imale
adulte
Studiul cromosomilor la -e/ti ,%am. CD-ri"idae0. Te?"ica E?"o ,196'0
Material *iologic2 splin% rinic,i% gonade% *ran,ii.
=eacti1i2 colc,icin 8%"F% ap distilat% acid acetic "8F% GCl 1<% colorant 9iemsa.
6nstrumentar2 lame de microscop% lamele% sering% $oar$ece% ac spatulat% pensete etc.
Eta-e de lucru>
Pretratame"t
&retratamentul se realizeaz cu colc,icin. Colc,icina *loc,eaz celulele n di1iziune n
stadiul de meta$az% prin in,i*area acti1itii $usului nuclear% determin3nd acumularea n esuturile
tratate a unui numr sporit de meta$aze% cu cromosomii *ine indi1idualizai% li*eri n citoplasm.
)e inAecteaz animalele adulte intramuscular (n musculatura dorsal) cu soluie de
colc,icin 8%"F% n cantitate de 8%"-1 ml. (n $uncie de talie)% cu dou ore nainte de sacri$icare.
Tratame"t
5ratamentul se realizeaz cu soluie ,ipotonic (,ipoton)% ce determin o um$lare .i o
$luidizare a citoplasmei celulare% permi3nd ast$el dispersarea cromosomilor% deci o etalare
superioar.
#up sacri$icarea animalului se recolteaz splina% rinic,iul% gonadele .i *ran,iile% care se
$ragmenteaz n *uci de apro:imati1 2 mm

. Gipotonia se realizeaz n ap distilat% la pG


neutru% timp de 1" min.% la temperatura camerei.
%iAare
Fi:area are rolul de a omor celulele% $r s altereze componentele celulare. #rept $i:ator
se $olose.te soluia de acid acetic "8F% timp de 1"-8 min.% la temperatura camerei.
*idroli$
Gidroliza se e$ectueaz n scopul macerrii esuturilor% n 1ederea $acilitrii ptrunderii
colorantului n nucleu4 se realizeaz cu GCl 1<% la 68
8
C% timp de 18-1" min.
Colorare
Colorarea se realizeaz cu soluie 9iemsa% n scopul o*inerii contrastului necesar
e:aminrii microscopice a cromosomilor.
E4ectuare de -re-arate microsco-ice de ti- sBuas?
&e o lam de microscop% ntr-o pictur de acid acetic !"F% se plaseaz un $ragment de
esut% se acoper cu lamela .i se etaleaz prin *ti ritmice cu un * de c,i*rit.
&reparatele se pot realiza permanente n *alsam de Canada% dup te,nica descris.
Studiul cromosomilor la am4i.ie"i. Te?"ica S-ur(aD /i Calla" ,196;0
;ceast te,nic este utilizat pentru e1idenierea cromosomilor din celulele esutului
gonadal (testicul)% la di$erite specii de Triturus.
Eta-e de lucru>
Tratame"t
&entru studiul cromosomilor meta$azici este necesar nlocuirea tratamentului ,ipotonic cu
o colc,icinizare cu soluie de colc,icin 8%8!F n ap distilat% timp de 8 min.% la '
8
C.
%iAare
Iesutul gonadal $ragmentat se $i:eaz 2- ore n $i:ator alcool acetic @1.
Colorare
Colorarea se realizeaz cu soluie carmin acetic 2F% cu acetat de $ier% timp de 18 min.
E4ectuarea -re-aratelor microsco-ice
&reparatele se e$ectueaz prin te,nica sJuas,. )e plaseaz o poriune din esutul colorat
pe lam .i se acoper cu lamela% apoi se preseaz u.or pentru etalare.
E4ectuarea -re-aratelor -erma"e"te
&reparatul se introduce n acid acetic 18F pentru desprinderea lamelei .i se trece n alcool
acetic @1% timp de c3te1a secunde. ?lterior se trec at3t lama% c3t .i lamela prin dou *i de alcool
.i dou *i de :ilol% apoi se monteaz preparatul n *alsam de Canada.
Studiul cromosomilor la mami4ere. Te?"ica %red&a ,196)0
Material *iologic2 cornee de .o*olan% .oarece% ,amster% co*ai.
*i-oto"ia
)e as$i:iaz animalul (.o*olan% .oarece% ,amster% co*ai) cu eter sau cloro$orm .i se e:tirp
glo*ii oculari cu un $oar$ece $in .i o pens cur*% e1it3nd atingerea corneei. 9lo*ii oculari se
plaseaz ntr-un 1as cu soluie ,ipoton de citrat de sodiu 8%'F (n ap distilat)% la '
8
C% timp de
8 min.
%iAarea
Fi:area materialului se realizeaz n soluie de acid acetic "8F - + pri .i o parte GCl 1<% "
min.
Colorarea
Colorarea se realizeaz n soluie de orcein acetic 2F% 2 min.
E4ectuarea -re-aratelor microsco-ice
9lo*ul ocular se plaseaz pe o lam de microscop curat .i cu un ac spatulat se rzuie
celulele din epiteliul cornean ntr-o pictur de colorant. )e acoper cu lamela .i se preseaz cu
griA% realiz3ndu-se un preparat de tip sJuas,.
+. Meioa
Hste procesul comple: de di1iziune% n urma cruia rezult celule-$iice cu numr de
cromosomi redus la Aumtate $a de celula-mam (de la care s-a pornit n di1iziune). 5ermenul
pro1ine de la grecescul meiosis (reducere).
Ca rezultat al meiozei se $ormeaz gameii la animale .i sporii la plante% acest tip de
di1iziune $c3nd trecerea de la un nucleu diploid (2n)% la unul ,aploid (n)% diplo$aza $iind nlocuit
cu ,aplo$aza. =educerea la Aumtate a numrului de cromosomi n cursul meiozei% este un proces
indispensa*il% pentru c% prin unirea n procesul $ecundaiei a gameilor paterni (cu n cromosomi)%
cu cei materni (tot cu n cromosomi)% are loc% n zigot% resta*ilirea numrului iniial (2n) de
cromozomi% .i nu du*larea acestuia.
#eci% pentru toate organismele ce se nmulesc pe cale se:uat% este o*ligatoriu procesul
alternrii $azelor ce se deose*esc dup numrul de cromosomi (,aplo$aza .i diplo$aza)4 ciclul de
1ia indi1idual cuprinde am*ele $aze.
Meioza reprezint un proces comple:% ce implic des$.urarea succesi1 a dou di1iziuni.
Cele dou di1iziuni% sunt precedate de o inter$az premeiotic (identic cu inter$aza mitotic) .i
separate de o inter$az meiotic scurt% din care lipse.te perioada sintetic (replicarea ;#<).
&rima di1iziune meiotic este denumit .i reducional (heterotipic)% iar a doua di1iziune este
denumit ecvaional (homeotipic sau de maturaie).
)c,ematic meioza poate $i redat ast$el2






Prima di,iziune meiotic
Ca .i n cazul di1iziunii mitotice% autoreplicarea ;#<-ului precede meioza% ast$el nc3t% la
nceputul pro$azei% $iecare cromosom este alctuit din dou cromatide surori (este *icromatidic).
Pro4aa F
;ceast etap este mprit n cinci stadii2 leptoten! zigoten! pachiten! diploten "i
diachinez.
Leptotenul (leptonemul) - de la grecescul lepto = su*ire4 tenuis = panglic.
Materialul cromatic din inter$az ncepe s se condenseze. Cromosomii sunt nc $oarte
despiralizai .i se indi1idualizeaz su* $orma unor $ilamente lungi .i $ine de cromatin. Fiecare
cromosom este alctuit din dou cromatide surori unite la ni1elul centromerului .i intim asociate%
ceea ce con$er cromosomului un aspect monocromatidic. Cromosomii sunt ata.ai cu am*ele
capete de n1eli.ul nuclear% prin intermediul unor structuri specializate% numite -l$ci de ata/are.
n
n
n
n
n
n
2n
n
9i!iiu"ea I 9i!iiu"ea II
0ntre leptoten .i zigoten% n mod $rec1ent% se o*ser1 un stadiu intermediar% n care
$ilamentele cromatice se adun la un loc% $orm3nd un g,em compact (s-irem).
)pre s$3r.itul leptotenului% se o*ser1 tendina a.ezrii paralele a cromosomilor omologi.
%i&. 1) -ea may" L. -ro4aa I = le-tote" ,Merte"s /i *ammersmit?, 19980
#igotenul (zigonemul) - de la grecescul z$go = Aug.
;cest stadiu se caracterizeaz prin conAugarea cromosomilor omologi (unul de origine
matern .i cellalt de origine patern)% proces denumit si"a-sis (sinapsare). )inapsisul ncepe
prin condensarea $iecrui cromosom n Aurul unei structuri denumit element a:ial% care este
aparent de natur proteic.
#up aceea% elementele a:iale ale cromosomilor corespunztori se dispun $a n $a% .i
constituie elementele laterale ale unei structuri tripartite (com-leAul si"a-to"emal)% $iind separate
de un element central% cu care sunt conectate prin intermediul unor *enzi proteice trans1ersale%
dispuse n mod similar treptelor unei scri.
ConAugarea cromosomilor omologi% ce $ormeaz *i1alenii% are loc treptat. #in punctul de
iniiere% conAugarea se e:tinde progresi1% cuprinz3nd integral cromosomii prealiniai ntr-o manier
Gi--er = li@eH (engl. zipper = $ermoar4 like = ca .i). C3nd cei doi cromosomi nu sunt per$ect
omologi% conAugarea se produce numai ntre poriunile omoloage. ConAugarea cromosomilor K .i L%
este posi*il datorit e:istenei la cei doi cromosomi de se: a unei regiuni terminale omoloage. )e
presupune c $orele care determin conAugarea sunt de natur electrostatic sau ,idrodinamic.
0n acest stadiu cromosomii sunt n numr diploid. 7a autopoliploizi (:% !: etc.) numrul
cromosomilor mperec,eai poate $i mai mare de doi. #eci% n loc de *i1aleni% 1or $i multi1aleni
(tri1aleni% tetra1aleni etc.).
%achitenul (pac,inemul) - de la grecescul pach$ = gros
0n acest stadiu% continu scurtarea .i ngro.area cromosomilor ce $ormeaz *i1alenii.
)curtarea este at3t de intens% nc3t de1ine e1ident structura du*lu cromatidic a $iecrui
cromosom. ;st$el% cei doi omologi ai *i1alentului $ormeaz o $igur tetracromatidic% numit
tetrad$. <umrul tetradelor este egal cu Aumtate din numrul diploid al cromosomilor.
Drice modi$icare n structura cromosomilor% care altereaz omologia% poate $i e1entual
decelat prin analiza *i1alenilor n pac,iten.
)pre s$3r.itul pac,itenului se o*ser1 ncruci.area reciproc a celor doi cromosomi
omologi din acela.i *i1alent. ;re loc sc,im*ul reciproc de segmente ntre cromosomii omologi% ca
rezultat al crossi"&=o!erului (recom.i"area i"tracromosomial$).
%i&. 1' -ea may" L. -ro4aa I = -ac?ite" ,Merte"s /i *ammersmit?, 19980
Diplotenul (diplonemul) - de la grecescul diplo = du*lu
Hste stadiul n care% ntre cromosomii omologi ncep s acioneze $ore de respingere%
ace.tia ndeprt3ndu-se ntre ei% ncep3nd din zona centromerilor spre e:tremiti. Dmologii mai
rm3n nc unii n anumite puncte% denumite c?iasme% considerate a reprezenta locul n care s-a
realizat sc,im*ul $izic ntre cromosomi. #e.i ncep s se $ormeze n pac,iten% c,iasmele de1in
1izi*ile numai dup desinapsarea cromosomilor ce alctuiesc *i1alentul. )-a constatat a*sena
c,iasmelor n regiunile ,eterocromatinice. #eci% aceste regiuni nu sunt antrenate n e1enimente
crosing-o1er.
Diachineza - n lim*a greac dia = prin .i kinesis = mi.care.
Cromosomii continu contractarea% $iind u.or 1izi*ili la microscop .i se deta.eaz de
mem*rana nuclear. )e remarc $enomenul de terminalizare a c,iasmelor (adic migrarea
c,iasmelor intercalare spre capetele cromosomilor)% care $ace ca *i1alenii s capete de regul
$orme inelare% omologii rm3n3nd asociai prin capetele lor.
0n cursul acestei $aze% nucleolul .i mem*rana nuclear se dezintegreaz .i cei doi
centromeri ai $iecrei tetrade se ata.eaz de $i*rele $usului nuclear% ce a aprut concomitent cu
ruperea mem*ranei nucleare.
%i&. 16 -ea may" L. -ro4aa I = di-lote" ,Merte"s /i *ammersmit?, 19980
Meta4aa I
0n aceast etap a primei di1iziuni% cromosomii ating ma:imum de scurtare .i ngro.are.
/i1alenii migreaz spre placa meta$azic .i se dispun ntr-un singur plan% perpendicular pe $i*rele
$usului. )unt nc 1izi*ile c,iasmele terminale ale $iecrei tetrade. 0n cadrul $iecrei tetrade%
centromerul unuia din cromosomii *i1aleni este orientat spre un pol% iar centromerul celuilalt
cromosom al aceluia.i *i1alent% spre cellalt pol al $usului. Drientarea centromerilor cromosomilor
de origine matern ori patern% ctre un pol sau cellalt este aleatorie (recom.i"are
i"tercromosomial$ sau Idansul cromosomilorH). 0n aceast $az% cromosomii se coloreaz
intens% ast$el nc3t pot $i u.or numrai .i studiai din punct de 1edere mor$ologic.
A"a4aa I
Dmologii din cadrul $iecrei tetrade se separ% n urma disAunciei rezult3nd c3te doi
cromosomi uni1aleni ce ncep s migreze spre polii opu.i (n $uncie de orientarea centromerilor).
)egregarea aleatorie a acestor cromosomi% st la *aza principiului mendelian al segregrii
independente a $actorilor ereditari. Mumtatea de origine patern a $iecrei tetrade 1a migra ctre
unul sau cellalt pol (n mod aleatoriu)% iar Aumtatea de origine matern 1a migra n $iecare caz
ctre polul opus.
7a s$3r.itul ana$azei 6% la $iecare pol al $usului% se a$l c3te un set ,aploid de cromosomi.
%i&. 12 -ea may" L. -ro4aa I = dia@i"e$ ,st:"&a0 /i meta4aa I ,drea-ta0 ,Merte"s /i *ammersmit?, 19980
#ac nu a a1ut loc nici un crosing-o1er n pro$aza 6% $iecare cromosom uni1alent 1a $i
alctuit doar din cromatidele de origine matern ori patern.
%i&. 18 -ea may" L. = a"a4aa I ,Merte"s /i *ammersmit?, 19980
Telo4aa I
Cromosomii uni1aleni% aAun.i la cei doi poli% su$er procese in1erse celor din pro$az (se
despiralizeaz). 0n Aurul $iecrui set ,aploid de cromosomi% se $ormeaz mem*rana nuclear. 0n
$inal% se $ormeaz cei doi nuclei% n $iecare a$l3ndu-se c3te Aumtate din cromosomii nucleului
celulei iniiale. ;poi% are loc di1izarea citoplasmei .i apariia a dou celule (denumite celule n
diad) cu nuclei ,aploizi (n).
#up telo$aza 6% urmeaz o scurt interc,inez% .i apoi ncepe a doua di1iziune meiotic
(di1iziune de maturaie). 7a maAoritatea speciilor% telo$aza 6 .i interc,ineza sunt $oarte scurte. 7a
unele specii aceste $aze lipsesc. 0n aceast scurt inter$az% nu are loc replicarea ;#<-ului.
%i&. 19 -ea may" L. telo4aa I ,st:"&a0 /i -ro4aa II ,drea-ta0 ,Merte"s /i *ammersmit?, 19980
A doua di,iziune meiotic
; doua di1iziune a meiozei (di1iziunea de maturaie)% este de $apt o di1iziune mitotic.
&rezentm $azele pe scurt2
Pro4aa a II a
7ipse.te la organismele care nu au nici interc,inez. ;colo unde este prezent% are loc
simultan n cele dou celule ale diadei. #eci% n $iecare din aceste dou celule% cromosomii se
spiralizeaz% se scurteaz .i se indi1idualizeaz. )unt *icromatidici (uni1aleni).
)e $ormeaz $usul de di1iziune.
Meta4aa a II a
Cromosomii se inser pe $ilamentele $usului de di1iziune .i migreaz n placa ecuatorial%
dispun3ndu-.i centromerii n acela.i plan.
%i&. 2; -ea may" L. meta4aa II ,Merte"s /i *ammersmit?, 19980
A"a4aa a II a
Cromatidele surori ale $iecrui *i1alent se separ .i se deplaseaz ctre polii opu.i ai
$usului.
Telo4aa a II a
Cromosomii aAun.i la polii $usului de di1iziune se despiralizeaz. 0n $inal% dintr-o diad BnC se
$ormeaz o tetrad (patru celule) BnC.
0n urma proceselor mor$o$iziologice% cele patru celule ale tetradei se trans$orm n gamei.
%i&. 21 -ea may" L. a"a4aa II ,st:"&a0 /i telo4aa II ,drea-ta0 ,Merte"s /i *ammersmit?, 19980
%i&. 22 -ea may" L. = Cito@i"e$ /i 4ormarea tetradei ,Merte"s /i *ammersmit?, 19980
; doua di1iziune a meiozei% dup mecanismul de des$.urare este asemntoare mitozei%
dar prezint .i deose*iri. #i$erena principal const n $aptul c% datorit crossing-o1erelor ce au
loc n pro$aza 6% cromatidele surori nu sunt identice. Cromosomii ce au participat la crosing-o1er
sunt o com*inaie de in$ormaie genetic de origine matern .i patern. D alt deose*ire este c%
n mitoz unitatea $uncional este cromatida% iar n meioz unitatea $uncional este cromosomul
(dou cromatide).
). Metode de studiu a cromosomilor i" meioa
).1. Metode de studiu a cromosomilor meiotici la -la"te
Metoda de colorare ra-id$ carmi"=acetic$
;ceast metod a $ost ela*orat de <elli"& (1926) .i ea se *azeaz pe capacitatea
acidului carminic ca n soluie alcalin s $ie ncrcat negati1 .i s se comporte ca un colorant acid%
iar n soluie acid s $ie ncrcat poziti1 .i s se comporte ca un colorant *azic. Colorantul carmin
care se $olose.te n mod curent n citologie este preparat dintr-un e:tract al $emelelor ,omopterului
Coccu" cacti. ;cest colorant nu este pur din punct de 1edere c,imic% acidul carminic $iind ns
constituentul pe care se *azeaz acti1itatea sa. &entru intensi$icarea capacitii sale de colorare%
n soluia de carmin n acid acetic se adaug acetat de $ier.
Ca material *iologic% se $olose.te secara - Secale cereale L. ,2"51)0.
0n general% la secar ca .i la alte cereale% meioza are loc n momentele c3nd tinerele antere
.i-au pierdut transluciditatea. )picele sunt recoltate n $aza de B*urdu$C c3nd au lungimea de !-6
cm% $iind n1elite n teaca ultimei $runze.
&entru studiul cromosomilor sunt necesare urmtoarele operaii2
Eta-e de lucru
%iAarea
)e $ace n $i:ator (soluie alcool-acid acetic n proporie de 21)% sau n soluie Carno>% n
care anterele se las 2!-!( de ore. )e pot conser1a $ie n $i:ator% $ie n alcool de '8
8
(n $iole *ine
nc,ise .i la rece 8-!
8
C% materialul se poate pstra timp ndelungat. Dperaia $i:rii poate lipsi%
dup cum nici ,idroliza nu este a*solut necesar.
Colorarea /i e4ectuarea -re-aratelor microsco-ice
)e ia un spic% se prele1 $lorile din partea de miAloc .i se scot staminele (c3te stamine n
$iecare $loare). Fiecare stamin se plaseaz pe o lam curat% ntr-o pictur de soluie carmin
acetic. Cu un ac spatulat se taie trans1ersal la miAloc .i apoi se apas ncet pe cele dou Aumti
pentru a goli antera de coninut% adic de celulele mam ale granulelor de polen unde are loc
meioza. )e ndeprteaz resturile staminei cu o penset $in. &este acest material se pune o
lamel curat .i uscat% (sau uns cu al*umin glicerinat .i trecut prin $lacr)% dup care cu o
*ucat de ,3rtie de $iltru se apas pe lamel pentru a etala *ine celulele .i pentru a ndeprta
e:cesul de colorant.
Colorarea materialului are loc $oarte repede% ast$el c imediat poate ncepe o*ser1area la
microscop. &entru intensi$icarea colorrii% se poate nclzi lama c3te1a minute deasupra unei
$lcri de la o lamp de spirt% e1it3nd $ier*erea.
&entru a e1ita e1aporarea soluiei% se para$ineaz marginile lamelei sau se pune soluie de
lipit cauciucul.
H:amin3nd preparatul la microscop% pot $i nt3lnite trei situaii2
1. nu a nceput di1iziunea% anterele $iind prea tinere - n acest caz% celulele mam ale
granulelor de polen sunt n inter$az.
2. a nceput di1iziunea - se o*ser1 celule n di$erite $aze ale meiozei.
. s-a terminat di1iziunea - se 1or o*ser1a gruncioarele de polen care au $orm
caracteristic.
0n general se consider c staminele din aceea.i $loare se a$l n aceea.i $az de di1iziune.
#ac la microscop nu am gsit di1iziuni meiotice% se caut $lori spre *aza sau spre 13r$ul spicului
(n$loritul n cadrul unui spic ncepe mai nt3i la miAlocul spicului .i se propag apoi spre *aza .i
13r$ul spicului).
&entru cercetare se recomand $olosirea metodei Feulgen pe care o 1om descrie n
continuare (cromosomii se coloreaz mai *ine% contrastul este mai mare ntre cromosomi .i
citoplasm .i n general se o*in preparate mai *une).
Studiul cromosomilor 3" meio$ -ri" metoda de colorare %eul&e"
;ceast metod a $ost ela*orat de %eul&e" .i Rosse".ec@ (192)) .i apoi modi$icat de
9e Tomasi (19+6). 0n celulele n di1iziune numai cromatina cromosomilor se coloreaz e$ecti1 n
ro.u-1iolaceu de ctre $u:in% n timp ce acidul ri*onucleic din nucleoli .i citoplasm nu se
coloreaz. =eacia Feulgen poziti1 este considerat ca $iind un indice sigur al prezenei acidului
dezo:iri*onucleic.
&entru studiul meiozei prin metoda Feulgen se poate $olosi ca material *iologic secara -
Secale cereale L. ,2"51)0.
0n general meioza are loc n momentele c3nd tinerele antere .i pierd transluciditatea% acest
moment coinciz3nd la gr3u .i la secar cu $aza n care spicele sunt n *urdu$ .i au o lungime de -
6 cm. &entru a repera momentul c3nd are loc meioza $olosim metoda rapid carmin-acetic
(descris anterior). 0n cazul n care la microscop am gsit di1iziuni meiotice se $i:eaz ntregul
spic.
)unt necesare urmtoarele operaii2
%iAarea
)e realizeaz n soluie alcool etilic a*solut 2 acid acetic glacial (21). 0n momentul $i:rii se
adaug o pictur de soluie de perclorur de $ier la cca. " cm

de $i:ator. Fi:area se e$ectueaz n


$iole de sticl n care se pun 2- cm

de $i:ator. 0n $i:ator anterele se las cel puin o or la


temperatura camerei% sau cel mult 2!-!( de ore n $rigider% dup care se trec n alcool a*solut
pentru o Aumtate de or% pentru ndeprtarea acidului acetic din esuturi. #e aici materialul se
trece n $iole cu alcool de '8
8
care se nc,id ermetic prin para$inare .i se pun n $rigider la 8-!
8
C%
unde se pot pstra timp ndelungat. #ac materialul se pstreaz n alcool de '8
8
timp mai
ndelungat% se poate renuna la trecerea prin alcool a*solut.
*idrolia
Materialul se scoate din alcool '8
8
dup ce a stat cel puin o Aumtate de or .i se spal cu
ap. 0n acest scop se ndeprteaz alcoolul din $iole% se pune ap .i se agit anterele p3n ce cad
la $und. Materialul se las n ap o Aumtate de or% dup care se $ace ,idroliza n acid clor,idric
normal% la temperatura de 68
8
C% timp de 12 min. la orz% (-+ min. n cazul gr3ului etc.
Colorarea
)e $ace n soluie de $u:in *azic (reacti1ul )c,i$$) n care materialul se las cel puin o
Aumtate de or. 0n colorant anterele pot rm3ne c3te1a ore% timp n care se $ac preparatele
microscopice. <u se recomand ca materialul s rm3n prea mult timp n colorant deoarece se
reduce contrastul dintre culoarea cromosomilor .i a citoplasmei% iar preparatele au o calitate mai
sla*.
E4ectuare -re-aratelor microsco-ice
&e o lam de microscop se pune o pictur de acid acetic !"F .i n aceasta se plaseaz o
stamin. Cu un ac spatulat se taie trans1ersal stamina n dou Aumti. )e apas u.or pe ele
p3n ce ies celulele mame ale granulelor de polen .i apoi sacii polinici se ndeprteaz. &este
material se pune o lamel uns cu al*umin glicerinat .i trecut prin $lacra unei lmpi de spirt.
Cu o *ucat de ,3rtie de $iltru se apas pentru etalarea celulelor .i pentru ndeprtarea e:cesului
de soluie.
&entru a pstra preparatele c3te1a zile se poate para$ina marginea lamelei sau se poate
pune soluie de lipit cauciucul. &reparatele permanente se pot $ace prin montarea n euparal sau
*alsam de Canada.
'. Carioti- si idio&rama
'.1. 9e4i"irea terme"ilor, "ome"clatur$
7a con$erina de la #en1er (1+68)% termenul de carioti- a $ost de$init ca $iind &o aranjare
sistematic a cromosomilor unei singure celule! preparai prin desenare sau fotografiere! 'n
'nelesul lrgit conform cruia cromosomii unei singure celule pot reprezenta cromosomii unui
individ sau chiar ai unei specii% iar termenul de idio&ram$ ca &reprezentarea diagramatic a unui
cariotip! care se bazeaz pe msurtori ale cromosomilor din c(teva sau din mai multe celule.
Carioti-ul% reprezint n esen% numrul% $orma .i mrimea cromosomilor% este constant n
ontogenia .i c,iar n $ilogenia unei specii% $iind tot mai des utilizat n ta:onomie.
)tudiul cariotipului $urnizeaz elemente pentru analiza procesului de speciaie% pentru
cunoa.terea gradului de nrudire ntre specii etc.
&entru $iecare specie% e:ist un carioti- sta"dard. H1entualele reara"Jame"te
cromosomiale (eliminri de cromosomi% duplicaii% translocaii% deleii etc.)% se pot sta*ili prin
comparaii cu cariotipul standard.
6ndi1izii aceleia.i populaii care au o alt aranAare a genelor pe cromosomii omologi
(consecin a modi$icrilor structurale ale cromosomilor)% sunt denumii heterocariotipici% antonimii
lor $iind cei homocariotipici.
0n $uncie de tipul cromosomilor pe care i conine% un cariotip poate $i simetric (toi
cromosomii sunt de acela.i tip) sau asimetric. Cariotipul cu cromosomi uni$ormi% este considerat
primiti1 comparati1 cu cel cu cromosomi neuni$ormi. )ensul e1oluiei cariotipului se consider a $i
acela al reducerii numrului de *az al cromosomilor .i asimetrizrii lui (prin in1ersii% translocaii%
$uziuni centrice% etc.).
Metodologia elaborrii unei analize cromo"omiale
6ndi$erent de materialul celular din care au $ost preparai cromosomii% sau de pro1eniena de
specie a acestora% pentru a o*ine ma:imum de in$ormaii citogenetice este necesar adoptarea
unui procedeu de lucru care conine mai multe etape.
)tadiul de di1iziune cel mai adec1at analizei cariotipului% este meta$aza mitotic% c3nd
cromosomii prezint ma:imum de condensare .i colora*ilitate.
0n continuare% 1om prezenta pe scurt etapele de lucru necesare alctuirii cariotipului.
Eta-a -relucr$rii microsco-ice
A. Eizualizarea preparatelor microscopice. )utarea metafazelor presupune *aleierea
(mi.carea lamei microscopice n sens orizontal sau 1ertical)% $r a omite nici o poriune pe care se
a$l celule. ;re ca scop2
Alegerea metafazelor potrivite analizei citogenetice. &rocentaAul meta$azelor apte
studiului citogenetic% este e:trem de 1aria*il% depinz3nd de materialul celular studiat% de te,nica de
preparare a cromosomilor% de a*ilitatea .i e:periena e:aminatorului. Cutarea meta$azelor tre*uie
$cut cu un o*iecti1 c3t mai mic (ma:im 18:). )e poate sc,im*a o*iecti1ul cu unul mai mare (28:
sau !8:)% pentru a rezol1a anumite incertitudini. 0n alegerea meta$azelor utiliza*ile sunt eseniale
dou criterii2 s nu e:iste suprapuneri de cromosomi% sau dac sunt% numrul lor s $ie mic .i s nu
intereseze mai mult de doi cromosomi4 cromosomii s nu $ie mpr.tiai pe o supra$a prea mare%
iar dispunerea lor s pstreze o $orm 1aria*il ntre un cerc .i un patrulater. ;cest ultim criteriu%
este deose*it de important% deoarece poate elimina meta$azele sparte% cu cromosomi pierdui%
care la e:amenul ulterior pot s sugereze apariia de complemente cromosomiale cu cromosomi
lips.
<. )tudiul microscopic al cromosomilor. Htapa o*ser1aiei directe a cromosomilor%
urmre.te o*inerea primelor rezultate citogenetice asupra materialului celular n studiu prin2
*umrtoarea de cromosomi% care prezint o mare importan% $iind prima
caracteristic citogenetic a populaiei celulare e:aminate. ;ceast numrtoare se poate $ace
direct n placa meta$azic% delimit3nd e1entual anumite regiuni% dar mai precis este numrarea
dup $otogra$ie. Mai demult% se numra dup desen (se desenau sc,ematic cromosomii pe o coal
de ,3rtie% sau prin procedeul clasic % $olosind camera clar).
+dentificarea cromosomilor aparin(nd la diferite grupe (de e:emplu din grupele # .i 9
ale cariotipului uman% din grupele M sau ) la ,icia faba! etc.
&entru ela*orarea unui cariotip% prima condiie este identificarea morfologic a
cromosomilor.
Metode de ide"ti4icare a cromosomilor
&rocedeul cel mai larg $olosit n studiul cromosomilor meta$azici% este acela al
msurtorilor. )e msoar lungimea integral a cromosomilor% lungimea *raelor cromosomiale%
poziia constriciilor secundare n raport cu aceea a centromerului etc.
#ar aceste criterii nu permit ntotdeauna o identi$icare precis a cromosomilor. #i$icultile
in mai ales de e:istena unor $luctuaii care pot masca considera*il di$erenele reale dintre
cromosomi. 7a $luctuaiile strict *iologice se pot aduga2 imprecizia msurtorilor (eroarea
personal% eroarea optic)% ,eteropicnoza unor regiuni cromosomiale sau a unor cromosomi ntregi
(cromosomii se:ului de e:emplu)% gradul de ntindere al regiunii centromerice% momentul meta$azic
pe *aza cruia se e$ectueaz analiza etc. )e .tie de e:emplu c% ma:imum de contractare este
atins de ctre cromosomii mai mari n stadiile mai a1ansate ale meta$azei% n timp ce cromosomii
mici ating acest ni1el n stadii mai timpurii.
#e.i metoda analizei cromosomiale prin msurtori a $ost contestat (Patau, 196') ea a
rmas p3n n prezent una dintre metodele de *az pentru identi$icarea cromosomilor.
0n caracterizarea acestora% con$erina de la 9e"!er a adoptat urmtorii trei parametrii2
1. lungimea $iecrui cromosom % raportat la lungimea total a unui complement
,aploid normal e:primat la 18884
2. raportul *raelor cromosomiale e:primat prin raportul dintre *raul lung @ *raul scurt4
. inde:ul centromeric e:primat prin raportul dintre *raul scurt .i lungimea total a
cromosomului% raportat la 188 (*raul scurt @ cromosom nmulit cu 188).
0n a$ara acestor parametrii% Patau% recomanda reprezentarea cromosomilor su* $orm de
puncte ntr-un sistem de coordonate% n care% pe a*scis s-ar nota lungimea *raului lung% iar pe
ordonat lungimea *raului scurt% am*ele e:primate n procente din lungimea total a
complementului cromosomial ,aploid (cariogram).
&entru identi$icarea mor$ologic a cromosomilor% poziia centromerului% una din
caracteristicile cele mai constante ale cromosomului% poate $i e:primat prin relaiile2
d 5 l=sK sau r 5 lLs
n care l .i s reprezint lungimea *raului lung .i respecti1 a celui scurt al cromosomului% d
di$erena ntre *raul lung .i scurt% iar r raportul dintre *rae.
&utem calcula lungimea *raului lung con$orm relaiei2
l 5 c,1;;=i0L1;;
n care c este lungimea cromosomului iar i% inde:ul centromeric. &oziia centromerului%
determinat prin asemenea relaii% este e:primat sim*olic ca mai Aos2
Le!a" /i cola.. (196)) au propus denumirea standardizat a cromosomilor n $uncie de
poziia centromerului2
Cromosomi metacentrici% cu centromerul situat n punctul median (M) sau n
regiunea median (m) .i cu un raport al *raelor 1%8-1%'
Cromosomi telocentrici% cu centromer terminal (5)
Cromosomi acrocentrici! cu centromerul n regiunea terminal (t)
Cromosomi submetacentrici .i subtelocentrici cu centromerul situat n regiunea
su*median .i respecti1 su*terminal (raportul *raelor 1%'-%8 .i respecti1 %8-'%8)
Nome"clatura cromosomilor -e .aa -oi#iei ce"tromerului ,du-$ Le!a" /i cola.., 196)0
Poi#ia
ce"tromerului
Nome"clatura
cromosomului
I"deA
ce"tromeric
Ra-ortul
.ra#elor
Ec?i!alarea cu
"ome"clatura
cito&e"etic$
cure"t$
Media" Gse"su
strictoH
Re&iu"ea media"$
Su.media"
Su.termi"al
Re&iu"ea termi"al$
Termi"al Gse"su
strictoH
M
m
sm
st
t
5
"8%8
'%"
2"%8
12%"
-
8%8
1%8
1%'
%8
'%8
-
-
Metacentric
)u*metacentric
)u*telocentric
;crocentric
5elocentric
Constriciile cromosomiale includ constriciile primare sau centromerice .i constriciile
secundare. Constriciile secundare% cuprind regiuni cromosomiale di$erite ca structur .i $uncie%
cum sunt regiunile organizatoare nucleolare (regiunile );5)% care delimiteaz sateliii de restul
cromosomului .i constriciile localizate n general interstiial pe *raele cromosomilor.
+dentificarea aberaiilor cromosomiale are loc n primul r3nd n aceast etap.
D*ser1aiile pri1ind prezena anumitor a*eraii cromosomiale se 1or nota pe $otogra$ia (desenul)
mitozei e:aminate% preciz3nd tipul de a*eraie% localizarea sa pe cromosom .i pe *ra etc. ;tunci
c3nd se urmre.te e$ectul citogenetic al unui agent $izic% c,imic sau *iologic (radiaii ionizate%
su*stane c,imice mutagene% 1irusuri etc.)% nregistrarea a*eraiilor cromosomiale reprezint
o*iecti1ul central al analizei cromosomiale.
.tapa prelucrrii fotografice
Micro$otogra$ierea se des$.oar n mai multe etape2
D prim etap este alegerea mitozelor pentru $otogra$iere (o dat cu studiul
microscopic al mitozelor). )e 1or alege pentru $otogra$iat doar meta$aze $oarte clare (este de dorit
ca numrul acestora s $ie c3t mai mare% minimum 18F din mitozele e:aminate).
; doua etap% fotografierea mitozelor se $ace cu orice dispoziti1 de micro$otogra$ie.
)e utilizeaz $ilme al*-negru cu granulaie $oarte $in% cu contrast sczut spre mediu.
&entru o*inerea de $otogra$ii corespunztoare% calitatea superioar a microscopului este
decisi1% n special a lentilelor utilizate la ocular .i o*iecti1. &entru $otogra$iere se aleg doar
meta$azele e:trem de clare. #up aceea% cromosomii sunt decupai .i aranAai n cariotip.
Prepararea cariotipurilor
)e recomand ca alctuirea cariotipului s se des$.oare pe *aza a cel puin dou copii
$otogra$ice ale meta$azei .i imaginii microscopice ns.i a meta$azei% luat cu un o*iecti1 cu
imersie. 0nainte de a trece la decuparea propriu-zis a cromosomilor% este indicat s se 1eri$ice
nc o dat toate particularitile meta$azei respecti1e% e1entualele a*eraii% limitele cromosomilor%
e1entuale suprapuneri% etc. 9ecu-area cromosomilor se $ace cu atenie% tind cu $oar$eca $iecare
cromosom n parte .i ls3nd ntotdeauna o margine al* n Aurul imaginii $otogra$ice negre.
Cromosomii decupai se a.eaz pe o coal de carton% sau ,3rtie mai tare% al*% pe care urmeaz
s $ie aranAat .i lipit cariotipul. &entru decuparea cromosomilor suprapu.i se taie un cromosom
dintr-o copie .i al doilea cromosom din alt copie. 0n aceast situaie% numai imaginea la microscop
precizeaz limitele cromosomilor.
Ara"Jarea cromosomilor 3" carioti-% (cu e:cepia studiilor ce urmresc sta*ilirea
cariotipului unor specii nestudiate nc)% tre*uie s porneasc de la cunoa.terea cariotipului normal
al speciei.
&rimul criteriu de aranAare a cromosomilor n cariotip este cel al lungimii% cromosomii $iind
dispu.i n ordine descresctoare. )e msoar de o*icei am*ele cromatide (de-a lungul a:elor lor
indi1iduale) .i se $ace o medie a rezultatelor. =egiunea centromeric se include n msurtoare% iar
sateliii nu se msoar.
;l doilea criteriu% este cel al dispunerii pe grupe mor$ologice. Cariotipurile normale au
adesea perec,ile de cromosomi aranAate pe grupe mor$ologice% care se noteaz cu litere
maAuscule n ordine al$a*etic% sau cu ci$re. ;ceste grupe cuprind dou sau mai multe perec,i de
cromosomi care se identi$ic greu sau deloc prin miAloace uzuale ale analizei citogenetice.
;l treilea criteriu $olosit n aranAarea cromosomilor n cariotip% este acela al mperec,erii
cromosomilor omologi. &lec3nd de la premisa c omologia genetic corespunde unei omologii
mor$ologice% cromosomii presupu.i omologi sunt dispu.i n perec,i sau grupe n $uncie de gradul
de gradul de poliploidie al celulei respecti1e (diploid% triploid% tetraploid etc.).
;ranAarea cromosomilor pe perec,i% notate de o*icei cu numere n cadrul cariotipului
normal% presupune $olosirea a cel puin doi parametrii de caracterizare a cromosomilor respecti1i2
lungimea .i raportul *raelor.
0mperec,erea cromosomilor omologi% prin simpla o*ser1aie 1izual% se poate realiza
in3ndu-se seama de anumite condiii2
1. se pot mperec,ea cu mai mult precizie cromosomii dintr-o meta$az mai puin
a1ansat% cu *raele puin contractate4
2. pentru mperec,erea cromosomilor din cadrul unei grupe mor$ologice primul criteriu
luat n considerare este raportul *raelor .i nu cel al lungimii4
. la cromosomii mici% mperec,erea pe criteriul raportului *raelor este relati1%
deoarece di$erenele dintre msurtori la acest indice sunt mici4
!. se 1a ine cont de condiiile n care $otogra$ierea poate modi$ica realitatea
microscopic% mrind anumii cromosomi sau mic.or3ndu-i pe alii% n $uncie de gradul de
e:punere .i de copiere.
Carioti-ul uma" "ormal
7a Con$erina de la 9e"!er (196;)% s-a czut de acord asupra unui sistem standard de
nomenclatur a cromosomilor din cariotipul uman normal. &rincipiile enunate la aceast con$erin
au $ost con$irmate .i dez1oltate la Con$erina de la Lo"dra (196+) .i cea de la C?ica&o (1966).
Carioti-ul uma" "ormal este reprezentat prin ' grupe distincte de cromosomi autozomali%
aranAai n ordine descresctoare a lungimii lor .i numerotai de la 1 la 22 c3t .i o perec,e de
cromosomi se:uali (K .i L). 0n cadrul aceluia.i grup% cromosomii sunt aranAai dup mrime.
6denti$icarea cromosomilor din aceste grupe nu este $oarte simpl. #e e:emplu% n grupa de
cromosomi numerotai 6-12% incluz3nd .i cromosomul K% deose*irile dintre cromosomi sunt e:trem
de di$icil de precizat. )e disting ce1a mai u.or cromosomii 6 .i K de restul grupei. &entru
desemnarea grupelor cromosomiale se $olosesc ci$rele indic3nd e:tremele $iecrei grupe unite
printr-o liniu sau litere de la ; la 9.
Con$erina de Lo"dra (196+) a considerat drept caracteristici importante ale cromosomilor
constriciile secundare .i modul di$ereniat de ncorporare a timidinei marcate radioacti1
demonstra*il prin autoradiogra$ie.
;t3t la Con$erina de la Lo"dra (196+)% c3t .i la cea de la C?ica&o (1966) s-a sta*ilit c
anumii cromosomi umani prezint 1ariaii mor$ologice la indi1izi normali $enotipic.
&entru descrierea complementului cromosomial Con$erina de la C?ica&o (1966) propune
$olosirea unor sim*oluri care permit o nelegere u.oar% scris .i codi$icat% a acestora.
<omenclatura acestor sim*oluri este urmtoarea2
A=G grupurile de cromosomi
1=22 numerele autosomilor (sistemul #en1er)
M, N cromosomii se:uali
,L0 separ linii celulare la descrierea
mozaicismului
,O0 sau ,=0 a.ezat imediat dup desemnarea numrului
de autosomi sau a literei de grup% indic
$aptul c acel cromosom este n plus sau
lipse.te4 a.ezat imediat dup indicatorul de
*ra sau de structur% semnaleaz c acel
*ra sau acea structur este mai mare sau
mai mic dec3t normal
,P0 indic o identi$icare discuta*il a
cromosomului sau structurii
Cromosomiale
Asterisc ,Q0 indic un cromosom sau o structur
cromosomial e:plicat n te:t sau n not
de su*sol
Ace acentric
Ce" centromer
9ic dicentric
E"d endoduplicaie
I? constricie secundar sau regiune
necolorat (colorat negati1) izocromosom
I"! in1ersiune
i"! ,- O B = 0 sau i"! ,- C B O 0 in1ersiune pericentric
Mar cromosom marc,er
Mat origine matern
P *raul scurt al cromosomului
Pat origine patern
R *raul lung al cromosomului
R cromosom inelar
S satelit
T translocaie
Tri tricentric
sim.oluri re-etate duplicare de structur cromosomial.
=aportul Con$erinei de la C?ica&o completeaz $olosirea sim*olurilor prezentate at3t
pentru a*eraiile numerice% c3t .i pentru cele structurale.
0ntr-o descriere de cariotip% primul care tre*uie nregistrat este numrul total de cromosomi%
inclusi1 cromosomii se:uali% desprii printr-o 1irgul. Constituia cromosomilor se:uali este
indicat ulterior. #e e:emplu2
)',M !" de cromosomi% un cromosom K4
)2,MMN !' de cromosomi% cromosomi se:uali KKL.
;utosomii se speci$ic n cazul n care e:ist o anomalie. #ac e:ist o a*eraie numeric
a autosomilor% litera grupului din care $ace parte autosomul e:tra sau lips este urmat de semnul
(N) sau (-)% a.ezat dup indicarea cromosomilor se:uali. #e e:emplu2
)', MM, C= !" de cromosomi% cromosomi se:uali KK% un cromosom lips n grupul C.
;tunci c3nd cromosomul sau cromosomii lips sau suplimentari pot $i identi$icai cu
siguran% se poate $olosi numrul cromosomului2
)', MM, 16= !" de cromosomi% doi cromosomi K% un cromosom numrul 16 a*sent.
)emnul (O) indic incertitudine. #e e:emplu2
)', MM, P C= !" de cromosomi% cromosomi se:uali KK% un cromosom lips% care $ace
parte pro*a*il din grupul C.
D celul triploid sau poliploid este e1ideniat prin numrul de cromosomi .i prin alte
indicati1e. #e e:emplu2
69, MMN sau 2;, MMN, G O.
D meta$az endoreduplicat poate $i indicat pun3nd a*re1ierea BendC naintea indicati1ului
cariotipului ast$el2 e"d )6, MM.
-ozaicisme cromosomiale. Constituia cromosomial a di$eritelor linii celulare este
nregistrat n ordine numeric sau al$a*etic% indi$erent de $rec1ena tipurilor celulare la indi1idul
studiat. 6ndicarea cariotipului se separ printr-o diagonal (@). #e e:emplu2
)', M L )6, MN mozaicism cromosomial cu dou tipuri celulare% unul cu !" de cromosomi .i
un singur K% cellalt cu !6 de cromosomi .i cromosomi se:uali KL.
/raul scurt al unui cromosom este indicat prin litera BpC% *raul lung prin litera BJC% un satelit
prin litera BsC% o constricie secundar prin litera B,C% iar centromerul prin a*re1ierea BcenC.
Cre.terea n lungime a unui *ra cromosomial% se indic pun3nd semnul (N)% iar mic.orarea
lungimii% pun3nd semnul (-) dup indicati1ul *raului. #e e:emplu2 2-OK GB=.
&entru o modi$icare a unui *ra la un cromosom mediocentric (1% % 1+ .i 28) se pune un
semn de ntre*are ntre indicati1ul cromosomului .i semnul N sau -. #e e:emplu% un cromosom
nr. cu un *ra alungit 1a $i indicat ast$el2 +PO.
=ezultatul unei in1ersiuni pericentrice se indic prin pNJ- sau p-JN% care se nc,ide n
parantez .i este precedat de a*re1ierea Bin1C. #e e:emplu2 i"! ,9 -OB=0.
D translocaie este indicat prin litera BtC% urmat de paranteze care includ cromosomul
interesat. #e e:emplu2
)6, MN, t ,<-=K9BO0 o translocaie reciproc *alansat ntre *raul scurt al unui cromosom
/ .i *raul lung al unui cromosom #
5ranslocaiile care a$ecteaz un cromosom se:ual .i un autozom% 1or $i desemnate ast$el2
)6, M, t ,MB O K 16-=0 o translocaie reciproc ntre *raul lung al unui cromosom K .i *raul
scurt al unui cromosom 16 la o $emel.
)epararea cromosomilor dintr-o parantez prin punct .i 1irgul (4)% indic prezena a doi
cromosomi alterai structural .i *alansarea translocaiei. 0ntr-o translocaie de tip B$uziune centricC%
n care un singur cromosom translocat este prezent% semnul de punct .i 1irgul se omite. #e
e:emplu2
)', MM, 9 = ,G = , t ,9BGB0 O !" de cromosomi% cromosomii se:uali KK% un cromosom este
a*sent din grupul # .i unul din grupul 9% *raele lor lungi $orm3nd pin unire un cromosom
translocat #9.
#ac un anume cromosom a $ost mo.tenit de la mam sau de la tat% aceasta se poate
nota prin a*re1ierile BmatC sauCpatC.
)tructurile cromosomiale duplicate se indic prin repetarea indicati1ului.
6zocromosomii se indic prin litera BiC a.ezat dup *raul cromosomial interesat.
Cromosomii inelari se indic prin litera BrC a.ezat dup cromosomul a$ectat.
0n cazul celulelor cu complemente cromosomiale pro$und dezec,ili*rate .i anormale%
Con$erina de la C?ica&o propune aplicarea urmtoarei con1enii n nomenclatura cariotipurilor2
numrul de cromosomi ntr-o celul dat 1a include toate structurile cromosomiale centrice
prezente n celul% indi$erent de numrul de centromeri. Cromosomii neidenti$icai% sunt indicai prin
BmarC (marPer). Fragmentele acentrice nu se include n numr% dar se 1or indica prin a*re1iaia
BaceC. Cromosomii dicentrici .i tricentrici se 1or numra ca unul singur .i se 1or indica prin BdicC .i
BtriC.
&entru indicati1e care nu $igureaz n sistemul de nomenclatur propus de Con$erina de la
C?ica&o% se sugereaz $olosirea primelor trei litere mici% de$inite cu claritate .i a.ezate imediat
naintea sau dup sim*olul cromosomului sau al indicati1ului cromosomului la care se re$er n
paranteze.
Cariotipul la animale
Carioti-ul la ?amsterul auriu
Cariotipul la ,amsterul auriu (%i&.2+) (unul dintre animalele de la*orator larg studiate n
la*orator)% a $ost ela*orat de mai multe grupe de cercettori (Is?i?ara /i cola.., 1962% Le?ma" /i
cola.., 196+ .i Nac?ti&al, 196').
Complementul cromosomial al celulelor somatice este constituit din !! de cromosomi (21
de perec,i de autosomi .i 2 cromosomi se:uali ,eteromor$i% K .i L). Cromosomii autosomali se
distri*uie n cinci grupe mor$ologice% notate cu primele litere ale al$a*etului. &erec,ile de autosomi
se numeroteaz de la 1 la 21. Cromosomul K este caracteristic .i u.or de recunoscut.
.rupa A (prima grup)% cuprinde perec,ile 1-!. &rima perec,e (;1) este mai mare sau de
aceea.i mrime cu perec,ea a doua (;2) $iind de asemenea mai su*metacentric. Celelalte
perec,i se dispun n ordinea descresctoare a raportului *raelor.
.rupa / cuprinde perec,ile "-18. &erec,ile " .i 18 reprezint cromosomi metacentrici% u.or
de identi$icat. &erec,ea /6 este $ormat din su*telocentrici% cu un raport mare al *raelor .i se
poate relati1 u.or identi$ica. &erec,ile /'-/+ se dispun n ordinea descresctoare a raportului
*raelor cromosomiale.
.rupa ) cuprinde perec,ile 11-1". &rima perec,e a acestei grupe% se poate u.or identi$ica%
$iind 1or*a de cromosomi su*telocentrici. ?ltima perec,e a grupei se identi$ic mai greu
(constituind cei mai mici su*metacentrici). 0n cadrul acestei grupe% perec,ile 1 .i 1! se deose*esc
greu% $iind cromosomi su*metacentrici asemntori.
.rupa D cuprinde ! perec,i de cromosomi su*telocentrici asemntori ntre ei% dar
deose*ii u.or de toi ceilali.
.rupa 0 este constituit dintr-o singur perec,e de cromosomi metacentrici mici% iar grupa
F din perec,ea 21 de cromosomi su*telocentrici.
%i&. 2+ Carioti-ul ,sus0 /i meta4aa care a stat la .aa 3"tocmirii acestuia ,Jos0, la Mesocricetus auratus ,2" 5 ))0
,Raicu /i Nac?ti&al, 19690
Cariotipul la unele plante de cultur
Metodele de alctuire a cariotipului sunt relati1 di$erite n $uncie de specie .i de autori.
&rezentm n cele ce urmeaz cariotipurile la c3te1a specii de plante culti1ate.
Carioti-ul /i idio&rama la Allium cepa L. ,2"5160
Con$orm studiilor noastre (utiliz3nd o pre$i:are a rdcinilor% timp de 2 ore la temperatura
camerei% cu o soluie de colc,icin 8%2F4 dup pre$i:are% prelucrarea materialului s-a realizat dup
metoda Feulgen)% raport3nd datele o*inute la nomenclatura dup Le!a" /i cola.., 196)% am
realizat cariotipul .i idiograma la Allium cepa L. (2" 5 16) (%i&. 2'). ?tiliz3nd sistemul de sta*ilire
a tipurilor de cromosomi dup Le!a" /i cola.. ,196)0% am ncadrat cele opt perec,i de cromosomi
de la ceap n dou grupe2
cromosomi metacentrici - mediani n sens strict - M (perec,ea E66) - n regiune
median - m (per. 6% 66% 666% 6E% E% E666)4
cromosomi subtelocentrici - cu satelit% la ni1elul *raului scurt (perec,ea E6).
&erec,ile de cromosomi omologi au $ost numerotate de la 6 la E666 n ordinea
descresctoare a lungimii totale.
I I I I I I I V V V I V I I V I I I
1 0
%i&.2' Meta4a$, carioti- ,sus0 /i idio&rama ,Jos0 la Allium cepa L. ,ori&i"al0
Carioti-ul /i idio&rama la Secale cereale L. ,2" 5 1)0
)ecara% ca .i ceapa% este un material mult $olosit n cercetrile de citogenetic 1egetal. Ca
atare% descrierea cromosomilor mitotici la secar a $ost realizat de muli cercettori4
caracteristicile cromosomilor de secar studiai de di$erii autori prezint di$erene datorate pro*a*il
polimor$ismului cromosomial al acestei specii% precum .i metodelor de lucru. #i$erenele ntre
autori apar .i datorit sistemului di$erit de clasi$icare a cromosomilor.
Tudose (192;)% utiliz3nd pre$i:area cu soluie de colc,icin 8%2F .i colorarea prin metoda
Feulgen% grupeaz cromosomii la Secale cereale L. (2" 5 1))% n patru tipuri mor$ologice (%i&. 26)2
1ipul A - dou perec,i de cromosomi (66 .i 666)% cu centromer median4
1ipul / - dou perec,i de cromosomi (6 .i E6)% cu centromer su*median4
1ipul ) - o perec,e de cromosomi (E666)% cu centromer su*median .i satelii mari%
constricia secundar $iind u.or de e1ideniat% n regiunea ei $orm3ndu-se nucleul4
1ipul D - dou perec,i de cromosomi (6E .i E) cu centromer su*median% pe *raul
scurt cu o constricie secundar .i satelii mici care pot $i pu.i n e1iden numai $olosind
tratamente speciale (temperaturi sczute 8QC% timp de 2!-!( ore)% ei apr3nd ca urmare a
e1idenierii zonelor ,eterocromatice.
Caracteristicile ca"titati!e ale cromosomilor la Secale cereale L. ,du-$ I.G?.Tudose, 192;0
Perec?ea de
cromosomi
Poi#ia
ce"tromerului
<ra# lu"&
,m0
<ra#
scurt
,m0
Suma
.ra#elor
Lu"&imea
total$ a
cromosomului
x s x
I"dicele
.ra#elor
6 )u*median '%( !%"' 11%+" 12%""8%12 1%61
66 Median "%(( "%22 11%18 11%'! 8%18 1%12
666 Median "%'2 "%1+ 18%+1 11%""8%8+ 1%18
6ER )u*median "%+( %+' +%+" 11%!(8%12 1%"8
ER )u*median "%(' %'6 +%6 18%+68%18 1%"!
E6 )u*median "%'" %"' +%2 +%+"8%11 1%68
E66R )u*median 6%8" 2%+( +%8 11%!8%12 2%8
cromosomi cu satelit% pe *raul scurt.
%i&.26 Carioti- ,sus0 /i idio&ram$ ,Jos la Secale cereale ,2" 5 1)0 ,Tudose, 192;0
6. Ploidia la -la"te
0n celulele plantelor superioare se gse.te un numr du*lu de cromosomi 2" (celule
diploide)% $a de " cromosomi n spori .i gamei (celule ,aploide). #atorit unor dereglri ale
di1iziunii celulare% produse ca urmare a aciunii di$eriilor $actori mutageni naturali sau arti$iciali - de
e:emplu% colc,icina - numrul de cromosomi din celule se poate modi$ica.
&oliploidia const n multiplicarea numrului de cromosomi din celulele somatice $a de
numrul de *az.
<umrul de *az sau numrul $undamental (numrul de origine)% notat cu :% reprezint
setul ,aploid% cu cel mai mic numr de cromosomi al numrului somatic diploid de cromosomi ai
unei specii.
0n anul 1916, 1i"@ler introduce noiunea de &e"om (numrul de cromosomi din garnitura
de *az :% di$ereniai mor$ologic .i genetic) .i de$ine.te -oli-loidia ca $enomenul de multiplicare a
numrului de cromosomi (A"&?el /i I&"at, 192)).
#up numrul de garnituri de cromosomi n celulele somatice ale plantelor% acestea pot $i2
,aploide (:)% diploide (2:)% triploide (:)% tetraploide (!:)% pentaploide (":) etc. 9radul de ploidie (&)
al unei specii se apreciaz din relaia 2n@:. #e e:emplu% aplic3nd aceast relaie% se poate a$la
gradul de ploidie la speciile2
Secale cereale L. 2 "ecara diploid #$/( are 2n3456 n376 :37! deci P32n@:3$.
2 "ecara tetraploid #0/(are 2n=896 n3456 :37! deci P32n@:30.
Triticum mo"ococcum : gr1ul diploid #$/( are 8n3456 n376 :=7! deci P32n@:3$.
Triticum durum + gr1ul tetraploid #0/( are 2n3896 n3456 :37! deci P32n@:30.
Triticum aesti!um 2 gr1ul he/aploid #'/( are 2n3584 n3846 :37! deci P32n@:3'.
&rin cercetri de citogenetic s-a constatat c% la plante% n cadrul aceluia.i gen numrul de
cromosomi este% de o*icei% un multiplu al numrului de *az :. 0n cadrul unor genuri e:ist mai
multe specii cu di$erite grade de ploidie% constituind "erii #2iruri( poliploide, ca n cazul genului
Triticum.
0n cadrul genului 3o"a! se nt3lnesc specii cu 2n=1!4 214 2(4 "4 !24 "6 de cromosomi. 0n
natur s-au descoperit o serie de ast$el de genuri% ca2 genul Chry"antemum cu :=+ - cu specii 2n=1(
(2:)4 6 (!:)4 "! (6:)4 '2 ((:) .i +8 (18:) cromosomi4 genul Solanum cu :=12 - cu specii 2n=2! (2:)4
6 (:)4 !( (!:)4 68 (":)4 '2 (6:)4 +6 ((:)4 18( (+:)4 128 (18:) .i 1!! (12:).
Seriile poliploide% n $uncie de numrul par sau impar de garnituri cromosomiale sau
genomuri% pot $i clasi$icate n2
- artioploide #artiopoliploide0, cu numr par de genomuri (!:% 6:% (: etc.)4
- peri"oploide #peri"opoliploide)% cu numr impar de genomuri (:% ":% ':% +: etc.)% de
o*icei sterile.
&rimele organisme poliploide au aprut dup apariia procesului se:ual% respecti1 a $ecundrii%
prin care% organismele nou $ormate do*3ndesc un numr du*lu de cromosomi (2n)% $a de cel al
gameilor (n) (Tudose, 1962).
#up originea cromosomilor% Si?ara /i E"o (1926)% clasi$ic pentru prima dat $enomenul de
poliploidie n2
1. Auto-oli-loidie ,auto-loidie0 - multiplicarea numrului propriu de genomuri sau de seturi
(garnituri) cromosomiale.
Forme autopoliploide se cunosc la Secale cereale! 4eta ,ulgari"! Trifolium praten"i" etc.
&oliploidia este ntotdeauna nsoit de importante modificri morfo2fiziologice. Cre.terea
numrului de cromosomi determin mrirea nucleului% a celulei% a esutului .i organului .i @ sau a
organismului% aAung3ndu-se ast$el la gigantism.)e pare c $iecrui gen de organisme i este
caracteristic un ni1el optim al e$ectului poziti1 al poliploidizrii% ni1el care dac este dep.it% poate
determina e$ecte negati1e (Coma", 1991).
7a plante% care se nmulesc .i 1egetati1% poliploidia s-a do1edit a $i a1antaAoas. 7a
A"&ios-erme 6!F din genurile actuale posed serii poliploide naturale. &entru speciile ce se
nmulesc e:clusi1 pe cale se:uat% poliploidia este deza1antaAoas determin3nd dereglarea meiozei
.i scderea $ertilitii. &oliploidia este prezent .i n grupul Gim"os-ermelor .i al Pterido4itelor% dar
n procente mai mici. &rezena poliploidiei n regnul 1egetal este mult mai mare dec3t n cadrul
regnului animal (Coma", 1991).
&oliploidia este $oarte rsp3ndit n special n special n regiunile cu climat mai aspru2 regiuni
nordice% montane% de.erturi. ?n procent ridicat de specii poliploide se nt3lne.te n $lora )a,arei% n
regiunile de rm ale Maponiei% unde se nt3lnesc 1ariaii mari de temperatur% n regiunile srturoase
etc. Hste interesant de remarcat c procesul de apariie al autopoliploidiei este mai intens la plantele
culti1ate% deoarece acestea sunt puse n condiii $oarte 1ariate de mediu% $apt care mre.te
posi*ilitatea de apariie a plantelor poliploide (A"&?el /i I&"at, 192)).
2. Allo-oli-loidie ,am4i-oli-loidie0 - multiplicarea numrului de genoame prin ,i*ridare
interspeci$ic .i nsumarea lor la ,i*rid% urmat de du*larea numrului diploid de cromosomi.
9e eAem-lu, la &r:u s=a demo"strat c$ 4ormele di-loide au &e"omul A -ro!e"it de la
s-ecia 1riticum monococcumK 4ormele tetra-loide au &e"omul A<, cu &e"omul < -ro!e"it de
la s-ecia Aegilops speltoidesK 4ormele ?eAa-loide au &e"omul A<9, cu &e"omul 9 -ro!e"it
de la s-ecia Aegilops s;uarrosa.
0n a$ar de Triticum ae"ti,um (2"5)2) se cunosc n natur mai multe specii am$iploide2
5o""ypium hir"utum (2"5'2)% pro1enit din ,i*ridarea speciilor 5o""ypium arboreum (2"526) cu
5o""ypium raimondii (2"526)4 6icotiana tabacum (2"5)2) pro1enit din ncruci.area speciilor
6icotiana "il,e"tri" (2"52)) cu 6icotiana tomento"iformi" (2"52)) etc.
P"eudopoliploidia - multiplicarea numrului de cromosomi are loc prin $ragmentarea
cromosomilor cu centromeri multipli sau di$uzi% $r a a1ea loc o mrire corespunztoare a cantitii de
;#<.
&seudopoliploidia poate $i e1ideniat prin msurarea lungimii cromosomilor% atunci c3nd
$ragmentarea lor este trans1ersal4 prin studiul cito$otometric al cantitii de ;#< din celule sau prin
studiul comportrii cromosomilor n pro$aza sau meta$aza di1iziunii mitotice reducionale.
&seudopoliploidia a $ost o*ser1at la speciile c3tor1a genuri de plante (Care/) sau animale
(A"cari") etc.
Metode pentru inducerea autopoliploidiei la plante
0n general% pentru ploidizare se $olosesc specii de plante ce prezint un numr redus de
cromosomi n celulele somatice% plante alogame% plante culti1ate pentru organele lor 1egetati1e etc.
D*inerea autotetraploizilor se poate realiza prin distrugerea $usului de di1iziune sau oprirea
plasmodierezei din timpul di1iziunii celulare. 0n acest scop se $olosesc mai multe metode2
a. Metoda ce"tri4u&$rii% ela*orat de Sosto44 (19+2) const n centri$ugarea plantelor cu
esuturi meristematice% n 1ederea distrugerii $usului de di1iziune .i $ormarea celulelor cu numr du*lu
de cromosomi. Metoda este greoaie .i prezint o serie de deza1antaAe. ;st$el% numai o mic parte din
celulele meristematice de1in poliploide% ele $iind de o*icei eliminate ulterior% deoarece 1iteza lor de
di1iziune este mai mic dec3t a maAoritii celulelor diploide.
.. Metoda /ocurilor de tem-eratur$% ela*orat de Ra"dol-? (19+2) se *azeaz pe
in$luena .ocurilor de temperatur ridicat asupra primelor mitoze ale zigotului. ;st$el% un .oc de
temperatur de !-!"% timp de 2! de ore% asupra zigotului la -ea may" produce "F plante poliploide.
c. Metoda -oliem.rio"iei% *azat pe o*ser1aiile lui Mu"ti"& (19+8) con$orm crora la
maAoritatea plantelor superioare se a$l un procent redus de semine cu doi sau mai muli em*rioni (la
5ramineae% apro:imati1 8%88'-8%1"F)% dintre care o parte ("F) au un numr di$erit de cromosomi.
d. Metoda ac#io"$rii cu i"secte -araite asu-ra !:r4urilor de cre/tere ale -la"telor%
*azat pe o*ser1aia c galele prezint celule poliploide. Metoda este di$icil% o*in3ndu-se un
procent mic de plante poliploide.
e. Metoda re&e"er$rii% ela*orat de 1i"@ler (1916) .i 7oer&e"se" (1928)% se *azeaz pe
o*ser1aia c o parte din lstarii pro1enii din rnirea calusului $ormat n urma tierii altoiului de la locul
de altoire% sunt poliploizi. Metoda se utilizeaz la speciile care se preteaz la altoire (din genurile
Solanum! 6icotiana etc.).
4. Metoda iradierii, utilizat n 1ederea distrugerii $usului de di1iziune% urmat de $ormarea
gameilor diploizi sau a celulelor somatice poliploide (prin autopoliploidie)% precum .i $ragmentarea
cromosomilor. ;st$el% n mod e:perimental% n urma iradierii cu radiaii gamma a seminelor uscate de
Lactuca "ati,a soiul S&olul <ordS (2n=1() s-au o*inut celule somatice tetraploide (2n=6) .i
octoploide (2n='2). Celulele tetraploide au $ost o*inute printr-un proces de autopoliploidie% n urma
distrugerii $usului de di1iziune% iar celulele octoploide datorit $enomenului de pseudoautopoliploidie%
prin $ragmentarea ulterioar a tuturor cromosomilor unei celule autotetraploide.
&. Ac#iu"ea su.sta"#elor de ti-ul -aradiclor.e"e"ului mpiedic plasmodiereza%
rezult3nd celule cu dou sau mai multe nuclee ce pot $uziona ulterior.
?. Metoda colc?ici"i$rii% *azat pe proprietatea colc,icinei .i a altor su*stane (acena$ten%
$eniluretan etc.) de a in,i*a sau e a distruge $usul de di1iziune% rezult3nd% n urma di1iziunilor% celule al
cror nucleu de restituie are numr du*lu de cromosomi.
9esco-erirea 3" 1+' de c$tre /laPeslee /i ;1er> a e4ectului -oli-loidia"t al
colc?ici"ei asu-ra -la"telor a desc?is "oi -ers-ecti!e de o.#i"ere eA-erime"tal$ a
-oli-loiilor ,;ng,el .i 6gat% 1+'!0.
Colc,icinizarea se e$ectueaz cu o soluie de 8%8" -1F colc,icin n care se introduc semine
negerminate% semine germinate sau plantule. )oluia de colc,icin poate $i aplicat .i pe 13r$urile de
cre.tere2 direct (<ra&do, 19'' - la secar4 Sears, 19)1 - la gr3u4 Mi?$ilescu .i Raicu, 1968 - la orz4
Raicu .i A"&?el, 1966 - la Citrullu" ,ulgare) sau n amestec cu agar-agar (S(ami"at?a", 19'1 - la
carto$)% sau ca past de lanolin-cu acid indolil--acetic (*o(ard .i S(ami"at?a", 19'+ - la
Solanum demi""um)% n 1ederea mpiedicrii e1aporrii ei rapide. 7a pomi .i 1i de 1ie se trateaz
mugurii cu soluie de colc,icin. 5impul de aciune .i concentraia di$er de la o specie la alta. )oluia
de colc,icin se consider cu aciune optim atunci c3nd2 o parte din plante pier% o parte din plantele
tratate de1in mi:oploide (cu celulele n di$erite grade de ploidie) datorit unei colc,icinizri pariale% iar
o parte din plante de1in autotetraploide.
2. Metode -e"tru determi"area &radului de -loidie la -la"te
&entru depistarea organismelor poliploide naturale din cadrul populaiei unei specii sau pentru
e1idenierea speciilor poliploide ale unui gen% ca .i pentru determinarea indi1izilor poliploizi produ.i pe
cale arti$icial n 1ederea separrii lor dintr-un amestec% au $ost ela*orate o serie de metode directe .i
indirecte.
Metodele directe sunt metodele prin care se determin cu precizie gradul de ploidie. &rin
cercetri de citogenetic s-a constatat c% la plante% n cadrul aceluia.i gen numrul de cromosomi
este% de o*icei% un multiplu al numrului de *az A.
Metodele i"directe sunt metodele *azate pe corelaia e:istent ntre gradul de ploidie .i
anumite caracteristici macroscopice .i microscopice ale plantelor. #e.i aceste metode nu sunt at3t de
precise ca metodele directe% ele se pot utiliza cu succes% n special pentru deose*irea plantelor
poliploide de cele diploide de la care au pro1enit% n general pentru trierea materialului *iologic.
Metode directe de determinare a gradului de ploidie la plante
&entru e1idenierea cromosomilor n di1iziune mitotic .i meiotic la plante au $ost descrise n
capitolele anterioare o serie de metode. Ca e:emplu de determinare a numrului de cromosomi la o
serie poliploid natural s-a ales seria am$iploid a genului Triticum% n cadrul creia e:ist specii
diploide% tetraploide .i ,e:aploide.
Metoda %eul&e" -e"tru e!ide"#ierea /i "um$rarea cromosomilor 3" di!iiu"e mitotic$
la Triticum mo"ococcum, Triticum dicoccum /i Triticum aesti!um
)tudiul cromosomilor se realizeaz n di1iziunea mitotic a celulelor meristematice din
ape:ul radicular% la cele trei specii de gr3u.
Eta-e de lucru>
Germi"area
)e pun la germinat cariopse din cele trei specii de Triticum n cutii &etri% pe ,3rtie de $iltru
umectata cu ap% la temperatura camerei(se recomand plasarea ,3rtiei de $iltru .i pe capacul cutiilor
&etri pentru crearea unei atmos$ere umede .i pentru mpiedicarea ptrunderii luminii puternice).
9erminarea se realizeaz n timp relati1 scurt% n 2- zile rdciniele ating3nd dimensiunea de 18-1"
mm.
Pre4iAare
=dciniele se prele1% realiz3ndu-se pre$i:area n $iole de sticl% n soluie de colc,icin
8%2F% timp de 2 ore% la temperatura camerei. )e poate realiza .i o pre$i:are a cariopselor cu
rdcinie (plasate n cutii &etri) la temperaturi sczute (8-!C)% timp de 12-2! de ore.
&re$i:area este necesara deoarece% cele trei specii de Triticum% n special Triticum
ae"ti,um% prezint un numr relati1 mare de cromosomi% cromosomi relati1 lungi. Ca urmare a
pre$i:arii se produce o scurtare aprecia*il a cromosomilor% o indi1idualizare .i colorare intens% ast$el
nc3t cromosomii se pot o*ser1a .i numra u.or.
%iAarea
Fi:area rdcinielor se realizeaz n $i:ator /attaglia% la temperatura camerei% timp de 28-2"
de minute.
S-$larea
)plarea rdcinielor de urmele de $i:ator se realizeaz n GCl 1<% timp de " minute% la
temperatura camerei4 se ndeprteaz soluia de $i:are .i se adaug soluia de splare.
*idrolia
Gidroliza se e$ectueaz n soluie de GCl "8F% timp de 2"-8 de minute% la temperatura
camerei.
Colorarea
#up ndeprtarea soluiei de ,idroliz se e$ectueaz colorarea cu $u:in *azic decolorat
(reacti1 )c,i$$)% la temperatura camerei% timp de 1"-8 de minute% p3n c3nd 13r$urile rdcinielor
prezint culoarea ro.u-1iolet nc,is.
E4ectuarea -re-aratelor microsco-ice
&reparatele microscopice se realizeaz pe o lam de microscop curat .i uscat% ntr-o
pictur de acid acetic !"F. )e procedeaz ca la metoda Feulgen pentru studiul cromosomilor n
mitoz la ceap% dar se recomand realizarea unei c3t mai *une etalri pentru dispersarea
cromosomilor% n 1ederea o*ser1rii lor indi1iduale .i a numrrii cu u.urin.
Studiul -re-aratelor la microsco-
&reparatele se studiaz la microscop% la un o*iecti1 cu putere de mrire ridicat% n lumin
puternic% utiliz3nd un $iltru 1erde care mre.te contrastul ntre cromosomi .i citoplasm. )e studiaz
doar meta$azele% c3nd cromosomii sunt spiralizai .i contractai% sunt puternic colorai .i datorit
dispersrii prin etalare% se o*ser1 indi1idual .i pot $i u.or numrai.
&e cele mai *une preparate se pot o*ser1a .i numra pentru Triticum monococcum 1!
cromosomi% pentru Triticum dicoccum 2( de cromosomi .i pentru Triticum ae"ti,um !2 de
cromosomi. Mor$ologia cromosomilor poate $i studiat $olosind o*iecti1ul de imersie. ;tunci c3nd
dorim s e$ectum cariotipul .i idiograma speciilor studiate se e$ectueaz micro$otogra$ii% se
decupeaz cromosomii .i se a.eaz n ordinea descresc3nd a lungimii lor% lu3ndu-se n consideraie
poziia centromerului% a constriciilor secundare etc.
;st$el se constat originea ,e:aploid a speciei Triticum ae"ti,um (2"56A5)2)% precum .i
tetraploidia speciei Triticum dicoccum (2"5)A528) .i diploidia speciei Triticum monococcum
(2"52A51)).
E4ectuarea -re-aratelor semi-erma"e"te /i -erma"e"te
Cele mai reu.ite preparate% pe care se pot u.or numra cromosomii se pot e$ectua
semipermanent sau permanent% dup metodele descrise anterior. &reparatele permanente pot ser1i
drept model.
Metode i"directe de determi"are a &radului de -loidie la -la"te
Metodele indirecte de determinare a gradului de ploidie la plante sunt mai puin precise n
comparaie cu metodele directe% dar sunt mai rapide .i mai puin costisitoare% $olosindu-se cu
succes n staiunile de ameliorare a plantelor de cultur pentru a tria plantele poliploide dintr-un
amestec sau pentru a separa plantele tetraploide de cele diploide% o*inute ca urmare a
tratamentului cu colc,icin.
;ceste metode se *azeaz% n esen% pe corelaia dintre gradul de ploidie al plantelor .i
di$erite caractere mor$ologice macroscopice .i microscopice ale plantelor.
Metoda determi"$rii &radului de -loidie la -la"te -ri" eAami"area u"or caractere
mor4olo&ice macrosco-ice
&rimii cercettori ai $enomenului de poliploidie au remarcat e:istena unei corelaii ntre
numrul de garnituri cromosomiale .i unele caractere mor$ologice macroscopice. Modi$icrile de
ordin mor$ologic a$ecteaz di1erse organe sau planta n ntregime4 ele sunt ntr-o anumit msur
di$erite la di$eritele specii de plante% dar unele prezint un caracter general.
Metode de determi"are a &radului de -loidie la -la"te -ri" eAami"area u"or caractere
microsco-ice
;ceste metode se *azeaz pe corelaia e:istent la plante ntre numrul garniturilor
cromosomiale .i unele caractere microscopice% cum ar $i2 mrimea .i densitatea stomatelor% numrul
de cloroplaste din celulele stomatelor% numrul cromocentrilor nucleolari% diametrul gruncioarelor de
polen% numrul de pori germinati1i ai gruncioarelor de polen etc.
A. Metoda eAami"$rii stomatelor
a. 9etermi"area m$rimii stomatelor
#e regul% se studiaz lungimea stomatelor% care este mai constant dec3t limea% care
1ariaz cu gradul de desc,idere al ostiolei. ;st$el% s-a constatat o corelaie poziti1 ntre lungimea
stomatelor .i numrul de garnituri cromosomiale din celule la speciile diploide% triploide .i tetraploide.
&rin studiul comparati1 al dimensiunii stomatelor la plantele 2: .i !:% aparin3nd la + specii
di$erite Raicu /i cola..% n 196'% au constatat c la $ormele tetraploide lungimea stomatelor este cu
2+%2-("%'F mai mare dec3t la speciile diploide% di$erenele $iind n toate cazurile semni$icati1e.
Mod de lucru>
)e aleg $runze de Triticum monococcum L. (2"52A51)) .i Triticum ae"ti,um L.
(2"56A5)2)4 se desprinde cu o lam de *r*ierit o poriune de c3i1a mm. de epiderm in$erioar .i
se plaseaz pe lam ntr-o pictur de ap4 se studiaz la microscop% determin3ndu-se lungimea
stomatelor.
)e calculeaz media .i a*aterea standard a mediei la cel puin 188 de stomate4 1alorile sunt
e:primate n microni.
;mplitudinea 1ariaiei lungimii stomatelor la $ormele poliploide este mai mare dec3t la $ormele
diploide% recomand3ndu-se ca numrul msurtorilor e$ectuate sa $ie su$icient de mare (peste 188).
.. 9etermi"area de"sit$#ii stomatelor -e u"itatea de su-ra4a#$ 4oliar$
#ensitatea stomatelor pe unitatea de supra$a $oliar este in1ers proporional cu gradul
de ploidie% $iind mai mic la $ormele poliploide% datorit $aptului c celulele% respecti1 stomatele
plantelor poliploide au dimensiuni superioare diploizilor. )-a constatat c 1alorile relati1e ale
$rec1enei stomatelor la poliploizi nu reprezint dec3t 1%"-'1%(F din 1aloarea de 188F la diploizi.
Mod de lucru>
)e aleg $runze de s$ecl de za,r - 4eta ,ulgari" (2:% : .i !:)4 se desprinde cu o lam de
*r*ierit o poriune de c3i1a mm. de epiderm in$erioar .i se plaseaz pe o lam de microscop ntr-
o pictur de ap4 se studiaz la microscop% determin3ndu-se densitatea stomatelor. &entru
calcularea densitii stomatelor se noteaz numrul de stomate din apro:imati1 188 de c3mpuri
microscopice% calcul3ndu-se apoi media .i eroarea ei. se calculeaz supra$aa c3mpului microscopic
dup $ormula r2 .i se raporteaz% utiliz3nd regula de trei simple% numrul de stomate la unitatea de
supra$a $olosit (1mm
2
).
c. Sta.ilirea "um$rului de cloro-laste di" celulele stomatelor
Moc?iu@i /i Sueo@a, n 19'', au demonstrat e:istena unei corelaii directe ntre numrul
de cloroplaste din celulele stomatelor .i gradul de ploidie al plantelor. Cercetrile au artat c
numrul de cloroplaste din stomate 1ariaz puin $a de condiiile de mediu4 la s$ecla de za,r
numrul este identic n di$erite poriuni ale $runzei (*az% miAloc sau 13r$)% precum .i pe cele dou
$ee ale $runzei. 0n sc,im*% numrul de cloroplaste 1ariaz cu 13rsta ontogenetic a plantelor.
Materiale "ecesare>
- lame de microscop% lamele% ,3rtie de $iltru% lame de *r*ierit% pensete
Reacti!i>
- soluie 6 n T6 - 1g. iod metalic% 2g. T6 la 8 cc ap distilat
- $i:ator alcool - acid acetic (@1)
Mod de lucru>
Ale&erea -la"telor
&entru studiul cloroplastelor se aleg plante tinere de s$ecl de za,r% a$late n aceea.i $az
de 1egetaie (-! $runze). )e recomand ca recoltarea $runzelor s se e$ectueze dimineaa% la o
or dup rsritul soarelui% atunci c3nd $runzele sunt turgescente .i conin ma:imum de cloro$il4
e:cesul de lumin .i cldur pro1oac nc,iderea stomatelor.
<umrarea cloroplastelor din cele dou celule ale unei stomate poate $i e$ectuat la
$runzele proaspete sau la $runzele conser1ate.
Co"ser!area materialului
Conser1area se realizeaz n $i:ator alcool - acid acetic (@1)% materialul put3nd $i pstrat
timp de 2 - ! ani de la recoltare.
E4ectuarea -re-aratelor microsco-ice
<umrarea cloroplastelor se poate e$ectua direct% cu aAutorul microscopului cu contrast de
$az% te,nic ce nu d rezultate precise. #e aceea% se recomand e1idenierea cloroplastelor prin
colorare cu o soluie de 6 n T6.
Cu aAutorul unei pensete cu 13r$urile ascuite% cu un *isturiu% ac spatulat sau cu o lam de
*r*ierit% se desprinde o poriune de epiderm in$erioar% de apro:imati1 8%" - 1 cm
2
% .i se
plaseaz pe o lam de microscop% ntr-o pictur de iod n iodur de potasiu. )e acoper
preparatul cu o lamel% e1it3ndu-se $ormarea *ulelor de aer ntre lam .i lamel. Colorarea se
realizeaz aproape instantaneu% dar se recomand o perioad de -! minute pentru colorarea
intens a cloroplastelor. Cu o *ucat de ,3rtie de $iltru se ndeprteaz e:cesul de su*stan4 nu
se recomand etalarea.
EAami"area -re-aratelor la microsco-
&reparatele se studiaz imediat dup realizare la microscopul optic% n lumin puternic% cu
o*iecti1e mai mici (p3n la !8:) deoarece stomatele sunt mari% cloroplastele sunt e1idente% se
coloreaz *ine .i pot $i o*ser1ate .i numrate cu u.urin.
0n cazul n care colorarea s-a e$ectuat cu iod n iodur de potasiu pe material proaspt%
cloroplastele se coloreaz n *leu% datorit coninutului n amidon. C3nd materialul este conser1at%
amidonul se degradeaz .i cloroplastele se coloreaz n *run nc,is. Celelalte elemente celulare
apar colorate n gal*en desc,is.
7a microscop se o*ser1 celulele epidermice cu perei sinuo.i .i stomatele reni$orme4 se
numr cloroplastele din cele dou celule stomatice% la minim 2"-8 stomate% calcul3ndu-se media .i
a*aterea ei.
0n cazul acestei metode% corelaia e:istent ntre gradul de ploidie la s$ecla de za,r .i
numrul de cloroplaste din cele dou celule ale unei stomate este urmtoarea2
4eta ,ulgari" L. 2"518 (n=+% :=+)% $orma diploid (2:)% 1( cromosomi ntr-o celul somatic =
1( cloroplaste (n medie) n cele dou celule ale unei stomate.
4eta ,ulgari" L. 2"522 (:=+)% $orma triploid (:)% 2' de cromosomi ntr-o celul somatic =
2' cloroplaste (n medie) n cele dou celule ale unei stomate.
4eta ,ulgari" L. 2"5+6 (n=1(% :=+)% $orma tetraploid (!:)% 6 de cromosomi ntr-o celul
somatic = 6 cloroplaste (n medie) n cele dou celule ale unei stomate.
)u*liniem $aptul c% la microscop% se pot o*ser1a la $ormele 2: de s$ecl de za,r c3te +
cloroplaste n $iecare celul stomatic% c3t .i celule care au repartizate cloroplastele n mod inegal n
cele dou celule stomatice4 se nt3lnesc adesea .i celule stomatice cu un numr mai mic de
cloroplaste. 0ntotdeauna pentru $ormele diploide (2n=1() se o*ine o medie a numrului de cloroplaste
mai mic de 1( .i $oarte rar mult apropiat de 1(. ;tunci c3nd media numrului de cloroplaste nu
dep.e.te 1(% se consider c $orma respecti1 este diploid.
C3nd numrul mediu de cloroplaste este mai mic sau egal cu 2'% $orma respecti1 este
triploid% iar c3nd numrul mediu de cloroplaste este mai mic sau egal cu 6 este o $orm de s$ecl
de za,r tetraploid.
;ceast metod se $olose.te cu succes la trierea materialului la s$ecla de za,r% n 1ederea
separrii $ormelor triploide .i tetraploide de cele diploide% dintr-un amestec.
&reparatele microscopice (%i&. +2) se studiaz imediat dup realizare .i se pot e$ectua
micro$otogra$ii. &reparatele se pot pstra doar un timp scurt% prin e$ectuarea lor semipermanente.
%i&. +2 Ima&i"ea microsco-ic$ a u"ei stomate /i a cloro-lastelor la 4eta ,ulgari" ,colora#ie cu iod 3" iodur$ de
-otasiu, );A0 ,ori&i"al0
<. Metoda e!ide"#ierii cromoce"trilor "ucleolari
Metoda a $ost ela*orat de Reit.er&er% n 19'6% pe *aza cercetrilor sale la 4eta ,ulgari" L.%
.i se *azeaz pe corelaia ntre numrul de cromocentri nucleolari .i gradul de ploidie al plantelor. 7a
s$ecla de za,r $iecare garnitur de cromosomi prezint un cromosom cu satelit (,eterocromatic).
Constricia secundar este organizatoare nucleolar% ast$el c% la ni1elul su se $ormeaz un nucleol.
0n telo$az% partea ,eterocromatic reprezentat de satelit rm3ne ata.at de nucleol4 $orm3nd un
cromocentru% care poate $i e1ideniat prin colorare cu colorani speci$ici nucleului% nu numai n timpul
di1iziunii celulare% ci .i n inter$az.
Metoda ela*orat de Reit.er&er se *azeaz tocmai pe capacitatea cromocentrilor de a se
colora n inter$az .i pe e:istena unui cromocentru pentru $iecare garnitur de cromosomi4 mrirea
numrului de garnituri cromosomiale implic mrirea numrului de cromocentri nucleolari.
;st$el% $ormele diploide (2:) prezint doi cromocentri% $ormele triploide (:) - trei
cromocentri .i $ormele tetraploide (!:) - patru cromocentri nucleolari. Cromocentrii se a$l de
o*icei grupai n Aurul unui singur nucleol4 uneori% ns% sunt mai muli nucleoli n Aurul crora se
grupeaz cromocentrii (%i&. ++).
%i&. ++ Sc?ema distri.u#iei cromoce"trilor "ucleolari la "i!elul "ucleului, la 4eta ,ulgari" L. ,ori&i"al0
Cercetrile lui Reit.er&er au artat c% la plantele diploide% cei doi cromocentri sunt a.ezai
n Aurul unui singur nucleol% nt3lnindu-se mai rar situaia c3nd ei sunt plasai pe c3te un nucleol4 la
$el .i pentru plantele triploide% unde se nt3lnesc $rec1ent celule cu trei cromocentri plasai pe un
nucleol% mai rar $iind grupai pe doi sau pe trei nucleoli4 la plantele tetraploide% n maAoritatea
cazurilor cei patru cromocentri sunt plasai pe un singur nucleol% mai rar pe doi% pe trei sau patru
nucleoli. 0n general% cromocentrii se dispun simetric n Aurul nucleolului% al crui 1olum este n
raport direct cu numrul de cromocentri4 ast$el% nucleolul cu patru cromocentri are un 1olum mai
mare $a de nucleolul cu trei% doi sau un cromocentru.
Mod de lucru>
Ale&erea materialului
)e utilizeaz $runze de !-" cm. lungime% recoltate de la plante de s$ecl de za,r : 4eta
,ulgari" L.% n 13rst de 2 luni% pro1enite din semine.
%iAarea
Fi:area $runzelor se realizeaz n $i:atorul alcool-acid acetic (@1)% n care materialul se
poate pstra timp ndelungat.
Colorarea
Colorarea se realizeaz n soluie carmin-acetic% timp de 1" min.
E4ectuarea -re-aratelor microsco-ice
&reparatul se realizeaz pe o lam de microscop% n 1-2 picturi de carmin acetic. Cu
aAutorul unei lame de *r*ierit% se desprinde o poriune (de 8%"-1 cm.2) din epiderma in$erioar a
unei $runze .i se plaseaz pe o lam de microscop% n 1-2 picturi de carmin-acetic. )e agit
colorantul cu un ac spatulat n 1ederea unei mai *une colorri. Colorarea se realizeaz la
temperatura camerei% timp de 1"-28 de minute (e1entual% lama poate $i nclzit 18-1" min. la
$lacra unei spirtiere% e1it3nd $ier*erea .i adug3nd noi picturi de colorant). )e acoper
preparatul cu lamela% $r a realiza etalarea% ce poate duce la deplasarea cromocentrilor.
EAami"area -re-aratelor la microsco-
&reparatele se studiaz la microscop% n lumin puternic% cu $iltru 1erde. )tudiul se
realizeaz n nucleele celulelor epidermei in$erioare% colorate n ro.u carmin% nucleolii rm3n3nd
sla* colorai. Cromocentrii se o*ser1 ca ni.te corpusculi mici% de $orm s$eric% plasai la peri$eria
nucleolului sau a nucleolilor% colorai n ro.u intens spre negru% mai intens n comparaie cu nucleul
.i $oarte intens $a de nucleol. &rin mi.carea $in a .uru*ului micrometric% cromocentrii pot $i
o*ser1ai cu u.urin. &rin o*ser1area c3tor1a celule se poate constata gradul de ploidie.
7a 4eta ,ulgari" L. 2"518 (n=+% :=+)% $orma diploid (2:)% 1( cromosomi ntr-o celul
somatic (dou garnituri cromosomiale) = 2 cromocentri nucleolari.
4eta ,ulgari" L. 2"522 (:=+)% $orma triploid (:)% 2' de cromosomi ntr-o celul somatic (
garnituri cromosomiale) = cromocentri nucleolari.
4eta ,ulgari" L. 2"5+6 (n=1(% :=+)% $orma tetraploid (!:)% 6 de cromosomi ntr-o celul
somatic (! garnituri cromosomiale) = ! cromocentri nucleolari.
Cercetrile au artat c% la plantele 2:% cromocentrii sunt mult mai 1izi*ili la microscopul
optic% n comparaie cu cei de la plantele : .i !:. )-a constatat c% pentru plantele 1irozate .i
*olna1e% utilizarea acestei metode d rezultate eronate4 n acest caz se recomand $olosirea
metodei determinrii numrului de cloroplaste din celulele stomatelor.
&reparatele microscopice nu se pot e$ectua permanent% ast$el nc3t se recomand
studierea lor imediat dup realizare .i e$ectuarea de micro$otogra$ii. &reparatele se pot e$ectua
semipermanente .i 1or $i e:aminate a doua zi.
C. Metoda eAami"$rii &r$u"cioarelor de -ole"
Metoda 1izeaz dou aspecte mor$ologice ale gruncioarelor de polen (diametrul .i
numrul de pori germinati1i) cu aAutorul crora se poate aprecia gradul de ploidie la unele plante.
8. Muta&e"ea si im-licatiile sale la u"ele -la"te de cultura
;nomaliile de structur sunt e1ideniate de modi$icrile mor$ologiei cromosomilor% nsoite
de modi$icri cantitati1e ale materialului genetic sau de modi$icri ale poziiilor genelor n
cromosomi. Hle apar $ie ca urmare a lezionrii cromosomului n $aza 91 prereplicati1 a ciclului
celular (a*eraii de tip cromosomial)% $ie n urma lezionrii cromatidelor surori n $aza ) .i 92
(a*eraii de tip cromatidic).
A"omalii structurale ale cromosomilor /i cauele lor TSocaciu, 1996U.
A"omalia
Caua
A. A.era#ii de ti- cromosomial Leio"area cromosomilor 3" 4aa G1
I. I"tracromosomiale
1. #eleii de $ragmente acentrice deleii cromosomiale terminale sau intercalare
2. 6nele acentrice deleii ale cromatidelor (asocieri inter*rae)
. Cromosomi inelari deleii ale am*elor *rae ale cromosomilor .i
unirea capetelor
!. 6n1ersii pericentrice .i paracentrice rsuciri de 1(8
o
ale segmentelor ntre dou
puncte de deleie
". 5ranslocaia intracromosomial dislocare prin deleie a unui $ragment .i $i:are pe
cellalt *ra al cromosomului
6. #iscontinuiti cromosomiale lipsa materialului genetic (;<#) pe poriunile
a$ectate
'. 6zocromosomi (cromosomi metacentrici cli1aA intercromatidic trans1ersal la ni1elul
neomologi) centromerului
II> I"tercromosomiale simetrice sau asimetrice
1. 5ranslocaii reciproce sc,im* de segmente acentrice distale din doi
cromosomi neomologi
2. Fuziuni centrice intercromosomiale (translocaie
ro*ertsonian)
$uziunea a doi cromosomi neomologi acentrici
. Cromosomi policentrici $uziune de $ragmente centrice dup o deleie
terminal
!. Cromosomi duplicai $i:are pe cromosom a unui $ragment acentric%
dislocat prin deleie de la un cromosom omolog
<. A.era#ii de ti- cromatidic Leio"area cromatidelor surori
1. Fragmente izolate lezionarea unei cromatide
2. 5ranslocaia intracromatidic (in1ersie
pericentric)
dislocare de $ragmente de la $iecare *ra al
cromatidei .i sudare la *rae di$erite
. =uptura cromosomial separarea unui $ragment cromatidic de restul
cromosomilor
!. 7acuna cromosomial ruptur cromatidic nee:teriorizat n meta$az
datorit plierii cromatinei
T i - u l d e a . e r a # i e T i - u l d e a . e r a # i e 9 i a & r a m a 9 i a & r a m a
1 . 9 a p s a u l a c u n c r o m o s o m i c
2 . # e l e i e c r o m o s o m i a l - $ r a g m e n t
. C r o m o s o m d i c e n t r i c
. i $ r g a m e n t
! . C r o m o s o m i n e l a r
. i $ r a g m e n t
" . 6 n e l a c e n t r i c
6 . 9 a p s a u l a c u n c r o m a t i d i c
' . # e l e i e c r o m a t i d i c
$ r a g m e n t c r o m a t i d i c
( . # e l e i e i z o c r o m a t i d i c
+ . ) c , i m * i n t e r c r o m o s o m i a l a s i m e t r i c
1 8 . ) c , i m i n t e r c r o m o s o m i a l s i m e t r i c
1 1 . ) c , i m * i n t r a c r o m o s o m i a l a s i m e t r i c
1 2 . ) c , i m * i n t r a c r o m o s o m i a l s i m e t r i c
1 . # e l e i e i n t e r s t i i a l
( l a n i 1 e l u l u n e i c r o m a t i d e )
1 ! . ) c , i m * u r i
i z o c r o m a t i d i c e @ c r o m a t i d i c e
a . C r o m o s o m d i c e n t r i c
t r i r a d i a l . i $ r a g m e n t
* . C r o m o s o m
m o n o c e n t r i c t r i r a d i a l
1 " . 6 z o c r o m o s o m i
%i&. +) Pri"ci-alele ti-uri de a.era#ii cromosomiale ,modi4icat du-$ Scott /i cola.., 198+ /i Ga!ril$,19860
8.1. Studiul a.era#iilor cromosomiale 3" a"a=telo4aa mitoei la u"ele -la"te de
cultur$
Ca rezultat al deleiilor cromosomiale apar n ana-telo$aza mitozei a*eraii cromosomiale%
1izi*ile la microscopul optic (color3nd materialul *iologic mutagenizat cu un colorant speci$ic
nuclear)% de tipul2
- $ragmente acentrice (lipsite de centromer) - nu migreaz spre poli% se pierd n cursul
di1iziunilor succesi1e% $iind meta*olizate. )e produce ast$el un dezec,ili*ru n doza genelor% ceea
ce% n general conduce la moartea celulei respecti1e.
- $ragmente centrice (cromosomi inelari% inele centrice) - $ormate n urma a dou deleii
terminale la ni1elul unui cromosom% ca urmare a reunirii capetelor $r telomeri. Fragmentele
centrice% deoarece posed centromerul cromosomului% pot participa la di1iziune.
- inele acentrice - rezultate n urma reunirii capetelor unor $ragmente acentrice mari% n
cazul n care deleia a $ost produs n a.a $el nc3t nici un capt al $ragmentului nu posed
telomer.
- puni (cromosomi dicentrici sau policentrici)- de regul sunt rezultatul reunirii a doi
cromosomi ce au su$erit deleii terminale. =especti1ii cromosomi $ormeaz una sau mai multe
puni% 1izi*ile ntre cele dou mase cromatidice separate la polii celulei.
- micronuclee
H:ist .i alte tipuri de a*eraii ce se pot e1idenia n ana-telo$aza mitozei% la microscopul
optic2
- cromosomi retardartari - sunt cromosomi la care centromerul .i-a pierdut capacitatea de
cuplare la $i*ra $usorial. Hi nu pot participa la di1iziune% nu pot migra spre polii celulei%
dezec,ili*r3nd repartiia cromosomilor ntre cele dou celule $iice.
- ana-telo$aze tripolare% tetrapolare% multipolare - pro1ocate de $ormarea de$ectuoas a
$usului de di1iziune. ;par $usuri de di1iziune cu % ! sau mai muli poli. Cromatidele cromosomilor%
dup cli1are% migreaz n % ! sau mai multe direcii% ceea ce 1a conduce la repartizarea inegal a
cromatidelor ntre celulele $iice rezultate.
Frec1ent% multe dintre a*eraiile cromosomiale descrise se pot asocia. Cele mai $rec1ente
asocieri sunt de tipul2 puni N $ragmente% puni N cromosomi retardatari% puni N micronuclee etc.
Material .iolo&ic>
- cariopse de gr3u - Triticum ae"ti,um L.(2n=!2)
- *oa*e de *o* - Vicia faba L. (2n=12)
Reacti!i>
- soluii de ca$ein de di$erite concentraii (8%81F4 8%8"F4 8%1F4 8%"F)
- soluii de nicotin de di$erite concentraii (8%81F4 8%8"F4 8%1F4 8%"F)
- ap distilat
- $i:ator (alcool-acid acetic @1 sau /attaglia)
- GCl 1<
- GCl "8F
- acid acetic !"F
- reacti1 )c,i$$
I"strume"tar, sticl$rie>
- cutii &etri
- ,3rtie de $iltru
- pensete
- lame
- lame .i lamele pentru microscop
Mod de lucru>
1. Germi"area
- n cutii &etri tapetate cu ,3rtie de $iltru% umectat cu ap distilat. 9erminarea se 1a
des$.ura la ntuneric% la 2-2!8C% p3n n momentul n care rdciniele 1or a1ea cca. 18 mm
lungime.
2. Tratame"tul muta&e"
- prin imersia materialului n soluiile de mutagen% timp de e:punere ore.
+. S-$lare
-n ap distilat% de trei ori% c3te 18 minute
). %iAarea
-deta.area rdcinielor de pe cariopse .i $i:are n $i:ator /attaglia pentru 2" minute% la
temperatura camerei
'. S-$lare
- cu GCl 1< timp de " minute% la temperatura camerei
6. *idroli$
- cu GCl "8F% cca. 8 minute% la temperatura camerei
2. Colorare
- cu reacti1 )c,i$$% 1"-8 minute% la temperatura camerei
8. E4ectuarea -re-aratelor microsco-ice
- radcinia la *o*% sau rdciniele unei cariopse de gr3u se plaseaz pe o lam de
microscop% ntr-o pictur de acid acetic !"F. &reparatul microscopic se realizeaz prin te,nica
sJuas,
9. Studiul -re-aratelor
- se studiaz ana-telo$azele normale .i a*erante% not3du-se tipurile de a*eraii .i numrul
a*eraiilor cromosomiale
1;. E4ectuarea -re-aratelor -erma"e"te
- dac materialul prezint $rec1ente a*eraii% preparatele respecti1e se e$ectueaz
permanent.
0n %i&. +' C +8 sunt prezentate aspecte ale a*eraiilor cromosomiale n ana-telo$aza mitozei
la *o*% induse prin tratamente cu mutageni c,imici.
%i&. +' A"a=telo4a$ cu -u"te la Vicia faba ,);A0 ,ori&i"al0
%i&. +6 A"a=telo4a$ cu -u"te /i 4ra&me"t la Vicia faba ,);A0 ,ori&i"al0
%i&. +2 A"a=telo4a$ cu -u"#i la Vicia faba ,);A0 ,ori&i"al0
%i&. +8 I"ter4a$ cu micro"ucleu la Vicia faba ,);A0 ,ori&i"al0
9. 9roso-?ila mela"o&aster C o.iect de studiu i" &e"etica
?tilizarea musculiei de oet (7ro"ophila melanoga"ter) drept o*iect de studiu n genetic
se datoreaz c3tor1a a1antaAe pe care aceast insect le o$er cercettorilor2
cre.tere relati1 u.oar n la*orator% pe o larg 1arietate de medii simple4
timpul scurt necesar o*inerii unei noi generaii - +-11 zile la 2"
o
C4
proli$icitate mare (c3te1a sute de descendeni dintr-un singur cuplu de aduli)4
dimensiuni reduse4
caractere de se: *ine de$inite% u.or de recunoscut4
numrul mic de cromosomi (2"58)% cu mor$ologie caracteristic4
prezena n celulele glandelor sali1are de la lar1e a cromosomilor uria.i.
Ciclul ,ital
)uccesiunea rapid a generaiilor precum .i marea proli$icitate a unui organism reprezint
caracteristici atracti1e n studiile de genetic. Ciclul 1ital la 7ro"ophila melanoga"ter (Drd.
9i-tera% Fam. 9roso-?ilidae) cuprinde patru stadii (%i&. +902
ou4
lar14
pup4
adult.
%i&.+9 Eta-ele de de!oltare la 7ro"ophila melanoga"ter ,ou = -u-$0
5impul necesar parcurgerii acestor stadii depinde de temperatura la care musculiele sunt
meninute. 7a 2"
8
C% ciclul 1ital se poate derula complet n circa 18 zile% n sc,im*% la 28
8
C se poate
prelungi la 1" zile.
Cercetrile au demonstrat c e:punerea culturilor de 7ro"ophila melanoga"ter la
temperaturi ridicate (cca. 8
8
C)% determin sterilitate% n special n r3ndurile masculilor .i moartea
culturii respecti1e% iar temperaturile sczute (de e:emplu% 18
8
C) prelungesc $oarte mult ciclul 1ital
(cca. "' zile) .i reduc 1ia*ilitatea.
<ptimul de temperatur pentru cre"terea musculielor de oet 'n laborator este deci! 8=
>
).
Eul
Femele adulte de 7ro"ophila melanoga"ter ncep s depun ou la circa dou zile dup
ie.irea din pup% n cazul n care au a1ut la dispoziie parteneri pentru mperec,ere. Fiecare ou are
lungimea de apro:. 8%" mm% este o1oidal .i de culoare al*. &e $aa anterodorsal prezint dou
e:pansiuni% cu regiunile distale lite% su* $orm de linguri. ;ceste structuri au rol n ata.area
oului de supra$aa pe care este depus% mpiedic3nd% de asemenea% scu$undarea acestuia n mediu.
#ez1oltarea em*rionar se realizeaz $oarte rapid% dup o zi la 2"
8
C% de la momentul
depunerii% din ou ie.ind o lar1.
Lar!a
7ar1ele de 7ro"ophila melanoga"ter au culoarea al* .i sunt segmentate. Mandi*ulele%
de culoare neagr% sunt *ine 1izi*ile n regiunea ce$alic. 7ar1ele sunt lipsite de orice $el de
apendici locomotori% deplasarea realiz3ndu-se prin t3r3re.
)tadiul lar1ar este caracterizat de o ,rnire .i cre.tere deose*it de intens. ;cest stadiu se
su*mparte n trei periode% separate prin etape de np(rlire. Fiecare np3rlire conduce la
nlocuirea complet a tegumentului .i armturii *ucale% $enomenul st3nd la *aza cre.terii lar1ei.
Cea de-a treia perioad (consecuti1 celei de-a doua np3rliri) se $inalizeaz cu 'mpuparea. Cu
puin timp naintea declan.rii acestui proces% lar1ele nceteaz s se mai ,rneasc .i caut
supra$ee relati1 uscate (de e:emplu% pereii 1asului de cultur) de care se $i:eaz.
)tadiul lar1ar dureaz (incluz3nd np3rlirile)% !-" zile la 2"
8
C. 6n momentul declan.rii
procesului de mpupare% lar1ele au o lungime de apro:. !%" mm.
ou lar!$ lar!$ lar!$ -u-$
,stadiul I0 ,stadiul II0 ,stadiul III0
Pu-a
&upa reprezint stadiul de reorganizare mor$o-$iziologic din ciclul 1ital de la 7ro"ophila
melanoga"ter. 6n aceast etap% cele mai multe structuri lar1are sunt distruse% iar structurile
caracteristice adultului se dez1olt pe seama esutului em*rionar denumit disc imaginal. ;ceste
esuturi e:ist la ni1elul lar1ei% dar de la $ormarea lor% n em*riogenez% rm3n n stadiu dormind%
p3n n $aza de pup.
7ar1ele mpupeaz n ultimul lor tegument% care iniial moale .i de culoare al*% se ntre.te
.i se *runi$ic progresi1. 5rans$ormrile care se petrec n interiorul pupei (deose*it de comple:e%
$c3nd o*iectul unei ramuri speciale a geneticii - genetica dezvoltrii)% conduc la apariia
structurilor caracteristice adultului (imago).
)tadiul pupal dureaz circa ! zile la 2"
8
C% iar la $inele acestuia% din pup 1a emerge un
adult.
Adultul
;dulii reprezint stadiul reproducti1 din ciclul 1ital la 7ro"ophila melanoga"ter (%i&. );0.
;dulii se eli*ereaz din pupe $or3nd regiunea anterioar a acestora. 6niial% orice musculi ie.it
din pup are corpul $oarte alungit% de culoare desc,is .i aripile pliate (mpac,etate). #up circa o
or% aripile se e:tind la dimensiunea lor normal% iar corpul do*3nde.te $ormele .i culoarea
caracteristic adultului.
Musculiele adulte se pot mperec,ea la apro:imati1 6 ore de la ie.irea din pup. )perma
este depozitat n spermateca .i receptaculele 1entrale ale $emelei% $iind gradual eli*erat n
o1iduct% pe msura producerii oulelor .i trecerii acestora prin o1iduct spre 1agin. Femele depun
ast$el% c3te1a zile% c3te "8-'" ou pe zi. &roducia de ou 1a descre.te apoi n timp% p3n la
dispariia sa total.
#urata de 1ia a unui adult de 7ro"ophila melanoga"ter% la 2"
8
C% este de apro:. ' zile.
%i&. ); Adul#i de 7ro"ophila melanoga"ter ,st:"&a C mascul /i drea-ta C 4emel$0
Cre/terea musculi#elor de o#et 3" la.orator
Medii
7ro"ophila melanoga"ter (2n = () este $rec1ent nt3lnit n natur pe $ructe .i legume
care au nceput s $ermenteze (struguri% pere% prune% *anane% ro.ii% etc.).
&entru cre.terea n la*orator a acestei insecte% n mediul de cultur sunt a*solut necesare
dou componente principale2 zahrul .i drojdia de bere care realizeaz $ermentaia. 6n la*orator%
cre.terea se realizeaz pe medii sintetice din compoziia crora nu tre*uie s lipseasc cele dou
componente menionate.
Mediul cu &ris
Compoziia acestui mediu este2
Gri/ "8 g
Va?$r "8 g
A&ar 4i.r$ 18 g
9roJdie de .ere 1" g
A-$ de ro.i"et 1888 ml
Acid -ro-io"ic " ml
6ntr-un 1as smluit n care se a$l 2@ din cantitatea de ap% se dizol1 prin $ier*ere agarul%
apoi se adaug droAdia% continu3ndu-se $ier*erea% !" minute% p3n la o*inerea unei suspensii. 6n
restul de 1@ ap se pune gri.ul .i za,rul .i se adaug suspensiei de agar cu droAdie. Fier*erea
1a $i continuat nc 1" minute% p3n la o*inerea unui mediu de consistena mierei de al*ine. )e
las c3te1a minute s se rceasc .i se distri*uie% ca .i n cazul mediului cu $in de porum* n
1ase de cultur.
)imilar% se pot pregti medii n care gri.ul sau mlaiul s $ie nlocuit de $ina de gr3u%
melas% uruial de o1z.
Mediul de .a"a"e
7arg utilizat n rile unde aceste $ructe se gsesc din a*unden% sau au un pre redus%
mediul de *anane este cel mai simplu mediu de cultur pentru 7ro"ophila melanoga"ter. ;cest
mediu se prepar introduc3nd un $ragment de *anan *ine coapt% n 1asul de cultur% dup ce% n
preala*il% *anana $usese imersionat ntr-o suspensie de droAdie de *ere.
Mediul de *anane are ns .i un deza1antaA - se nmoaie $oarte repede la cldur% ceea ce
$ace di$icil scoaterea insectelor din 1as% n momentul eclozrii% acestea scu$und3ndu-se n mediu.
6n locul *ananelor se pot $olosi .i alte $ructe - $ragmente de pere% prune% struguri% imersionate n
suspensie de droAdie de *ere.
#in cele prezentate% putem concluziona c un mediu de cultur pentru 7ro"ophila
melanoga"ter% pentru a putea $i $olosit cu *une rezultate% tre*uie s ndeplineasc urmtoarele
condiii2
s $ie consistent% pentru a nu permite scu$undarea adulilor4
s conin su$icient za,r% necesar ,rnirii lar1elor .i adulilor% c3t .i pentru
declan.area nmulirii droAdiilor care s produc $ermentaia.
Mediul ast$el pregtit poate $i $olosit imediat% sau poate $i pstrat c3te1a zile la $rigider
(N!
8
C).
#ac mediul o$er condiii optime de dez1oltare% lar1ele ie.ite din ou 1or $i n numr mare
.i $oarte acti1e% 1orace% *rzd3nd mediul n toate direciile.
Te?"ici de ma"i-ulare 3" la.orator, la 9roso-?ila mela"o&aster
7ro"ophila melanoga"ter este o insect de dimensiuni destul de mici pentru a putea $i
manipulat cu u.urin n condiii de la*orator% dar pentru aceste mane1re este ne1oie de2
utilizarea unei lupe sau a unui stereomicroscop pentru o*ser1aii4
eterizarea musculielor% pentru ca acestea s poat $i e:aminate.
Hc,ipamentul necesar pentru cercetrile n la*orator e$ectuate pe 7ro"ophila
melanoga"ter cuprinde2
lup *inocular (stereomicroscop) cu surs de lumin4
$lacoane de eterizare4
cutii &etri tapetate cu ,3rtie de $iltru pentru re-eterizarea musculielor ce se trezesc
n timpul e:aminrii4
plci de sticl n dou culori (al*-negru) pe care 1or $i plasate musculiele% pentru
e$ectuarea o*ser1aiilor4
pensule de dimensiuni mici% din pr moale4
ace de disecie (ace entomologice).
Eteriarea
Musculiele tre*uie eterizate pentru a $i meninute inacti1e% n 1ederea e:aminrii sau
trans$errii n 1ase de cultur. Hterizatorul const ntr-un $lacon ce conine un tampon de 1at% care
1a $i umezit cu eter etilic. Hste necesar .i o p3lnie metalic% nc,is la e:tremitatea mai mic cu o
plas $in de s3rm% iar e:tremitatea opus cu desc,iderea de un diametru cu puin superior celui
al 1asului de cultur. Easul de cultur 1a $i rsturnat n p3lnie% captul nc,is cu plas a acesteia
$iind introdus n eterizator. #up introducerea adulilor n p3lnie% desc,iderea acesteia 1a $i imediat
acoperit cu un ti$on% sau o plac &etri. ;nsam*lul 1a $i ulterior agitat u.or% musculiele $iind ast$el
meninute n partea de Aos a p3lniei% n atmos$era saturat cu 1apori de eter. 6n mai puin de 1
minut insectele 1or $i eterizate% put3nd $i rsturnate pe placa de o*ser1aie.
Precau#ii>
1ata din $laconul eterizatorului nu 1a $i prea m*i*at n eter .i n nici un caz n
$lacon nu tre*uie s $ie eter lic,id% deoarece prin mane1rele care se e:ecut% eterul poate aAunge
pe corpul insectelor% pro1oc3ndu-le arsuri4
e:punerea la eter nu tre*uie s $ie ndelungat% deoarece poate duce la omor3rea
musculielor4
toate mane1rele tre*uie $cute cu delicatee% insectele $iind e:trem de $ragile4
eterul etilic este un compus to?ic. @e va evita pe c(t posibil inhalarea lui direct "i
e?punerea prelungit.
Re=eteriarea
6n cazul n care% pe parcursul o*ser1aiilor% musculiele ncep s se trezeasc% deasupra lor
se a.eaz o plac &etri tapetat cu ,3rtie de $iltru% stropit cu eter. &laca se las c3te1a zeci de
secunde% pe parcursul crora musculiele 1or $i re-eterizate.
AtenieA -anevra nu poate fi repetat de prea multe ori pentru c omoar insectele.
Ide"ti4icarea seAului la adul#ii de 9roso-?ila mela"o&aster
Masculii .i $emelele de 7ro"ophila melanoga"ter se di$ereniaz printr-o serie de
caractere mor$ologice% relati1 u.or de recunoscut% caractere care se genereaz dimorfismul se?ual.
0n cazul e$ecturii ncruci.rilor de analiz genetic% recunoa.terea se:ului este 1ital% deoarece%
n cele mai multe dintre aceste ncruci.ri% $emelele genitoare tre*uie s nu se $i mperec,eat n
preala*il% deci% tre*uie s $ie 1irgine. ;ceast stare a $emelelor se pstreaz ma:im 12 ore de la
ie.irea din pup% ast$el nc3t% atunci c3nd intenionm e$ectuarea de ncruci.ri% este important s
separm indi1izii con$orm se:ului lor.
6denti$icarea se:ului adulilor are la *az urmtoarele criterii2
1U pieptenele se?ual. Hste o $ormaiune nt3lnit doar la mascul% care const dintr-un
mnunc,i de peri.ori (cca.18) c,itino.i% de culoare neagr% reunii% plasai n apropierea
nc,eieturilor tarsale% pe prima perec,e de picioare. )tructura poate $i 1izualizat din stadiul pupal%
cu puin nainte de ie.irea adultului din pup% peretele acesteia de1enind n acel moment
transparent (%i&. )10.
%i&. )1 Ide"ti4icarea seAului la 7ro"ophila melanoga"ter -e .aa -ree"#ei -ie-te"ului seAual la mascul
2U abdomenul. Femelele au a*domenul $ormat din ' segmente 1izi*ile% alungite posterior% n
timp ce masculii posed doar " segmente% ultimul $iind rotunAit. 7a masculi% ultimele *enzi
ntunecate ce separ segmentele a*dominale $uzioneaz% ast$el nc3t toi masculii au regiunea
teminal a a*domenului de culoare mai nc,is dec3t restul corpului.
U regiunea genital. ;rmtura genital a $emelei include o1opozitorul .i este de culoare
desc,is% n timp ce piesele armturii genitale a masculilor (inclusi1 penisul) au culoare nc,is.
Sim.oluri utiliate 3" &e"etica la 9roso-?ila mela"o&aster
5ipul normal% a.a numit - slbatic (Bild t$pe) la 7ro"ophila melanoga"ter are caracterele
determinate de gene care se noteaz cu 2- litere pro1enite din denumirea n lim*a englez a
caracterului respecti1% cu indice SNS.
6n cazul mutantelor% acest indice lipse.te. #ac mutaia respecti1 este recesi1 $a de
tipul sl*atic% prescurtarea numele su se scrie cu liter mic% iar n cazul mutaiilor dominante% cu
liter mare.
D musculi poate s $ie purttoarea unei singure mutaii% caz n care poart denumirea de
mutant% sau a mai multor mutaii% situaie n care se nume.te linie mutant. Mutaiile mor$ologice
la 7ro"ophila melanoga"ter se clasi$ic n $uncie de organul a$ectat n mutaii ale formei aripilor%
culorii ochilor! corpului! formei peri"orilor de pe corp! formei ochilor! etc.
H:emple2
1U Mutante2
oc,i de culoare al* - ( (engl. V,ite = al*)4
oc,i de culoare normal% ro.ii - (
O
4
aripi 1estigiale% rudimentare - !& (engl.1estigial - 1estigial)4
aripi ntregi - !&
O
4
oc,i *arai% mutaie dominant asupra tipului normal (apare prin reducerea
numrului de omatidii) - < (engl./ar = *ar)4
oc,i ntregi - <
O
4
corp de culoare gal*en - D (engl.>elloV = gal*en)4
corp de culoare ca$enie% normal - D
O
2U 7inii mutante2
(, !& - linie cu dou caractere mutante% oc,i de culoare al*% aripi 1estigiale4
CD, L, Pm (Curl> = cre4 7o*e = lo*at4 &lume = 1ineiu% de culoarea prunelor) - linie
triplu mutant% cu aripile cur*ate la capete% oc,ii redu.i dimensional% lo*ai .i de culoare 1ineie4
D, ct, !, 4 (>elloV = gal*en4 cut = retezat4 1ermillon = portocaliu aprins4 $orPed =
mciucat) - linie cu patru caractere mutante - corp de culoare gal*en% aripi retezate la capete
(tipul sl*atic are aripile rotunAite)% oc,ii de culoare portocaliu aprins .i peri.orii de pe corp
mciucai.
9.1. Cromosomii uriasi si cromosomii somatici la 9roso-?ila mela"o&aster
8.&.&. Cromo"omii uria2i
?nul dintre a1antaAele cele mai importante o$erite de 7ro"ophila melanoga"ter% ca o*iect
de studiu n genetic% este relati1a u.urin n studiul cromosomilor acestei specii. )tudiile asupra
cromosomilor nu o$er doar in$ormaii legate de numrul acestora la di$erite specii% ci .i
posi*ilitatea elucidrii cauzelor unor anormaliti de ordin $izic sau mental (n cazul omului)% care%
a.a cum s-a do1edit% pot $i puse pe seama 1ariaiilor numerice sau anomaliilor structurale ale
cromosomilor $a de complementul cromosomial normal.
#e.i de multe ori% studiul cromosomilor se do1ede.te o ntreprindere destul de di$icil% care
solicit timp .i ec,ipament speci$ic% n cazul musculiei de oet% preparatele microscopice conin3nd
celule n care se pot o*ser1a cromosomii% sunt destul de u.or de realizat. Mai mult dec3t at3t% la
7ro"ophila melanoga"ter% la lar1e% n celulele glandelor sali1are% e:ist cromosomi de dimensiuni
$oarte mari% cu o structur aparte% care odat e1ideniai% o$er posi*ilitatea e$ecturii de studii
amnunite de structur precum .i de localizare a genelor n cromosomi (ntocmirea ,rilor $izice).
;ce.ti cromosomi au primit denumirea de cromosomi uria"i (%i&.)2).
%i&. )2 Cromosomii uria/i la 7ro"ophila melanoga"ter, !edere de a"sam.lu
6n celulele glandelor sali1are de la lar1e ($enomenul este caracteristic .i altor specii de
diptere)% cromosomii omologi se a$l ntr-o stare de permanent sinapsare. Celulele din aceste
esuturi nu se di1id% cresc3nd doar n dimensiuni pe parcursul stadiului lar1ar. Cu toate acestea%
cromosomii lor su$er runde succesive de replicare. &rocesul de replicare a cromosomilor% $r ca
respecti1a celul s se di1id% poart denumirea de endomitoz% cromosomii lor primind
denumirea de cromosomi politenici (lat. tenuis 3 panglic4 lat. pol$ = mai multe).
#imensiunile $oarte mari ale acestor cromosomi sunt completate .i de o aranAare $oarte
special a lor. 6n preparatele microscopice% apar su* $orma a = brae foarte lungi "i unul e?trem de
scurt% unite la ni1elul unei regiuni care se coloreaz cu colorani speci$ici pentru acizi nucleici%
$oarte intens% .i care a primit denumirea de cromocentru. Cromocentrul reprezint regiunea
centromeric a $iecrui cromosom% n timp ce *raele corespund dup cum urmeaz2 cele cinci
*rae lungi reprezint perec,i de cromosomi alungii% iar cel de-al .aselea *ra% scurt% perec,ea a
6E-a de cromosomi.
Cromosomii perec,ii 6 (KK la $emele) sunt str3ns unii pe toat lungimea lor .i a13nd
centromerul plasat terminal% $ormeaz un unic *ra. 7a masculi% deoarece cei doi cromosomi ai
perec,ii a-6-a (KL) nu sunt omologi .i nu pot sinapsa% *raul 6 este $ormat de $apt doar din
cromosomul K% cromosomul L $iind inclus% alturi de regiunile centromerice ale celorlali
cromosomi% n cromocentru (%i&. )+).
Cromosomii perec,ii 66% sinapsai pe toat lungimea lor% $ormeaz dou *rae% 66 dreapta
(engl. 2=) .i 66 st3nga (engl. 27)% deoarece au centromerii plasai su*metacentric (%i&. ))).
Cromosomii perec,ii 666% de asemenea sinapsai pe toat lungimea lor% $ormeaz dou
*rae% 666 dreapta (engl. 2=) .i 666 st3nga (engl. 27)% .i ace.ti cromosomi $iind apro:imati1
su*metacentrici (%i&.)').
/raul scurt al cromosomilor uria.i este $ormat din cromosomii perec,ii a-6E-a% telocentrici%
care n preparatele microscopice cu cromosomi somatici% apar puncti$ormi (%i&.)6).
%i&. )+ Cromosomii -erec?ii I ,.ra#ul 10
%i&. )) Cromosomii -erec?ii II ,.ra#ul 2L C sus /i .ra#ul 2R C Jos0
%i&.)' Cromosomii -erec?ii III ,.ra#ul +L C sus /i .ra#ul +R C Jos0
%i&. )6 Cromosomii -erec?ii IW
Fiecare *ra al unui cromosom uria. este deci $ormat din doi cromosomi% omologi% unul de
origine matern .i altul de origine patern. #e o*icei% cromosomii omologi care alctuiesc *raele
sunt $oarte greu de identi$icat% datorit sinapsrii lor e:treme% dictat de omologia regiunilor
corespunztoare genelor de pe ace.ti cromosomi (,omozigoie). 6n cazul n care organismul
respecti1 este ,eterozigot dup o gen dat% la ni1elul regiunii corespunztoare genei respecti1e%
sinapsarea nu mai este at3t de str3ns% se $ormeaz *ucle% permi3nd 1izualizarea celor doi
cromosomi ce alctuiesc de $apt% *raul. 5ot ast$el de *ucle apar .i n cazul n care la ni1elul unor
regiuni s-au produs in1ersii% translocaii% deci mutaii structural cromosomiale.
6n lungul *raelor cromosomilor uria.i% apar n urma aplicrii unor metode speci$ice de
colorare (cu colorani selecti1i pentru ;#<)% benzi transversale care se coloreaz mai intens%
altern3nd cu *enzi mai sla* colorate. )e consider c regiunile mai intens colorate ar corespunde
poriunilor de cromatin cu o spiralizare mai intens% n timp ce cele mai sla* colorate% unor poriuni
n care cromatina este mai rela:at. =egiunile ar corespunde deci% ,eterocromatinei (cele mai
dense% care se coloreaz mai intens) .i eucromatinei (cele mai rela:ate% mai sla* colora*ile). #at
$iind $aptul c 1irtual $iecare cromatid are aceea.i dispoziie a regiunilor eu- .i ,eterocromatice% iar
la ni1elul unui *ra% cei doi omologi s-au replicat de nenumrate ori% iar numrul de cromatide este
$oarte mare% alturarea acestor regiuni conduce la apariia *enzilor. ;u $ost identi$icate peste "888
de *enzi. )ta*ilindu-se o coresponden ntre locii genelor .i distri*uia *enzilor% a $ost re1izuit .i
corectat ,arta genetic la Drosophila melanogaster% $iind ntocmit .i ,arta $izic a cromosomilor
uria.i la aceast specie.
7ungimea total a cromosomilor uria.i este de 11(8% ei $iind de 1"': mai lungi dec3t
cromosomii somatici. /raele au urmtoarele dimensiuni2
perec,ea 6 (KK) - 228
perec,ea 66 - 21" .i 2!"
perec,ea 666 - 218 .i 2'"
perec,ea 6E - 1"
#eci% cromosomii uria.i au aceste dimensiuni din dou moti1e2
aU se replic normal% dar replicarea lor ne$iind urmat de di1iziunea celulei% cromatidele
surori rm3n mpreun% ceea ce conduce la ngro.area lor4
*U nu su$er procese de condensare pentru $ormarea structurii de tip cromosom meta$azic%
celulele n care se gsesc a$l3ndu-se ntr-o continu inter$az% ast$el nc3t lungimea lor este
deose*it de mare% $a de cromosomii somatici o*i.nuii.
E!ide"#ierea cromosomilor uria/i la 9roso-?ila mela"o&aster
Material .iolo&ic
lar1e a$late n stadiul 666 de cre.tere% *ine dez1oltate% cu o lungime de cca. !mm.
<umrul de lar1e din mediul de cultur n $iolele destinate pentru aceast lucrare nu tre*uie s $ie
$oarte mare% pentru a permite dez1oltarea 1iguroas a lar1elor.
de la lar1e se 1or recolta glandele sali1are.
Recoltarea &la"delor sali!are
se plaseaz lar1a pe placa de sticl pe care se e$ectueaz o*ser1aiile% n Aumtatea
neagr% n c3te1a picturi de ser $iziologic% sau ap4
se a.eaz placa de o*ser1aie la un stereomicroscop *inocular .i se regleaz
imaginea% p3n la o*ser1area clar a lar1ei4
cu un ac entomologic se $i:eaz *ine lar1a% $r a o nepa% acul $iind plasat imediat
su* regiunea armturii *ucale% u.or 1izi*ile% de culoare neagr4
cu un al doilea ac de disecie% plasat trans1ersal peste corpul lar1ei% $r a o nepa%
apro:imati1 la miAlocul distanei dintre cele dou e:tremiti% se e$ectueaz o mi.care de ntindere
n direcia a:ului longitudinal al corpului lar1ei4
aceast mane1r% corect e:ecutat% 1a conduce la decapitarea lar1ei% de
e:tremitatea ce$alic rm3n3nd ata.ate .i glandele sali1are% saci$orme% de culoare al* argintie .i
translucide. =esturile de tu* digesti1% e1entual antrenate% 1or $i ndeprtate (%i&. )2).
%i&. )2 Lar!a de 7ro"ophila melanoga"ter ,disec#ie0 ,1 C &la"de sali!areK 2 C &a"&lio"i "er!o/i0
Colorarea materialului
glandele sali1are se preiau cu acul de disecie% $iind trecute pe o lam curat .i *ine
degresat de microscop% ntr-o pictur de colorant carmin acetic% sau orcein 2F4
1
2
colorarea dureaz cca.-" minute. Materialul poate $i apoi% e1entual% trecut pe o
nou lam de microscop% ntr-o pictur de colorant proaspt4
peste material se a.eaz o lamel% peste aceasta o *ucat de ,3rtie de $iltru care 1a
a*sor*i e:cesul de colorant .i se preseaz u.or cu degetul mare% sau se trece un rulou de cauciuc
pe deasupra% ceea ce 1a permite etalarea u.oar (de tip sJuas,). @ub nici o form nu se va
efectua o etalare energic! prin bti repetate 'n lamel! care conduce inevitabil la fragmentarea
cromosomilor "i compromiterea preparatului.
E.ser!area -re-aratelor la microsco-
metoda de coloraie aplicat 1a conduce la e1idenierea cromosomilor uria.i colorai
n ro.u desc,is% trans1ersal pe *raele acestora apr3nd *enzi de culoare ro.u ntunecat4
distri*uia *enzilor este constant .i caracteristic $iecrui cromosom4
o*ser1aiile se e$ectueaz de pre$erin% la o*iecti1ul cu imersie% pentru o*ser1area
c3t mai multor detalii.
8.&.$. Cromo"omii "omatici
Cromosomii somatici pot $i e1ideniai la 7ro"ophila melanoga"ter% n celulele
neuro*lastice din ganglionii ner1o.i ai lar1ei a$late n stadiul 666 de dez1oltare.
Celulele din esutul ner1os se di1id mitotic normal% moti1 pentru care% alturi de celulele n
inter$az 1om putea gsi .i celule a$late n di1iziune. Eom cuta celule a$late n meta$az% la care
cromosomii sunt condensai% eli*erai de su* mem*rana nuclear care s-a $ragmentat la $inele
pro$azei .i dispu.i n regiunea ecuatorial a celulei. &entru mai *una lor dispersare este
recomandat ca n mediul de cultur n care se a$l lar1ele% s se adauge o soluie de colc,icin
8%8!F% cu cca. 2 ore nainte de disecia acestora. 6n acest $el% colc,icina ingerat de lar1e% 1a
produce *locarea $ormrii $usului mitotic de di1iziune% .i acumularea de meta$aze cu cromosomii
dispersai n celul.
<umrul de cromosomilor la 7ro"ophila melanoga"ter este 8.
Femela are o perec,e de cromosomi de se: omologi MM% n timp ce masculul are o perec,e
de cromosomi neomologi% MN% ace.ti cromosomi primind denumirea de perec,ea a-6-a.
#eterminismul cromosomial al se:elor la 9roso-?ila mela"o&aster este identic celui uman.
;ce.ti cromosomi poart denumirea de heterosomi% spre deose*ire de ceilali cromosomi din
complement - autosomii. Cromosomul K are $orma unui *aston% n timp ce cromosomul L are
$orm de *aston $r3nt.
;utosomii $ormeaz perec,ile 66% 666 .i 6E. &erec,ile a-66-a .i a-666-a% la am*ele se:e% sunt
reprezentate de cromosomi cu $orma literei BEC% cu *rae mai mult sau mai puin egale (cromosomi
su*metacentrici)% n timp ce cromosomii perec,ii 6E sunt e:trem de mici% puncti$ormi (%i&. )8).
%i&. )8 Cromosomii somatici la 7ro"ophila melanoga"ter ,2" 5 80
-aterialul biologic % prelevarea sa .i colorarea sunt identice ca .i n cazul cromosomilor
uria.i% dar la e:tremitatea ce$alic deta.at de corpul lar1ei% n urma diseciei% se a$l ata.ai%
mpreun cu glandele sali1are .i ganglionii ner1o.i% care intereseaz n cazul studiului
cromosomilor somatici. ;ce.tia sunt dou structuri translucide% gri-al*strui% plasate imediat
deasupra glandelor sali1are. 9anglionii se deta.eaz de restul materialului (de fapt! disecia larvei
se poate finaliza cu prelevarea at(t a glandelor salivare! c(t "i a ganglionilor cerebroizi ) .i se trec
pe o lam de microscop% ntr-o pictur de orcein 2F% sau colorant carmin-acetic. #up 2-
minute% materialul se acoper cu o lamel .i se etaleaz u.or.
E.ser!area -re-aratelor la microsco-
D*ser1aiile se 1or e$ectua cu o*iecti1ul de imersie (+8:) .i n lumin puternic (cu
condensorul ridicat) pentru 1izualizarea c3t mai *un a cromosomilor% care 1or a1ea o coloraie
ro.u nc,is.
<i.lio&ra4ie
/ra% 6.6. 1+++ .enetica% Hd. Corson% 6a.i
/utnaru% 9allia 1+(" .enetica% Hd. 6nstitutului ;gronomic% 5imi.oara
Carr% #.G.% WalPer% M.H. 1+61 Car*ol - $uc,sin% a d>e $or ,uman c,romosomes. @tain 1echnol.! CD
E 8CC28CD
Gartl% #.7.% Mones% Hliza*et,
W.
1++( .enetics : %rinciples and Anal$sis% !
t,
edition% Mones and /artlett
&u*lis,ers% /oston% 7ondon% )ingapore
Tao% T.<. 1+'" ; c,romosomal staining met,od $or cultured cells. 6n %lant 1issue
)ulture -ethods (edited b$ <.L. .amborg and L.F. Getter)! *F))!
@askatoon! @askatcheBan! )anada E DC2D5
Teller% W.;.% Gar1e>% /.7.%
Tao% T.<.% Miller% =.;.%
9am*org% D.7.
1+' #etermination o$ t,e $reJuenc> o$ interspeci$ic protoplast $usion *>
di$$erential staining. )ollo;. +nt. )ent. *atl. Fech. @ci.! 848 E 5==25DC
Tlug% ).W.% Cummings% M.=. 2888 )oncepts of .enetics% 6
t,
edition% &rentice Gall 6nternational% 6nc.%
?);
Mertens% 5.=.%
Gammersmit,% =.7.
1++( .enetics : Laborator$ +nvestigations% 11
t,
edition% &rentice Gall
6nternational% 6nc.% ?);
Miller% =.;.% 9am*org% D.7.%
Teller% W.;.% Tao% T.<.
1+'1 Fusion and di1ision o$ nuclei in multinucleated so>*ean protoplasts.
)an. H. .enet. )$tol.! 4C E C572C=C
<icolae% 6. 1+'( -utageneza e?perimental% Hd. Ceres% /ucure.ti
<iPonoroV% M. 1+(1 %esticidele 'n lumina to?icologiei mediului% Hd. Ceres% /ucure.ti
=aicu% &. 1++' .enetic general "i uman% Hd. Gumanitas% /ucure.ti
)nustad% &.#.% )immons
M.M.% MenPins% M./.
1++' %rinciples of .enetics% Mo,n Wile> X )ons% 6nc.% <eV LorP
)ocaciu% Carmen 1++6 -utageneza chimic% Hd. 9enesis% CluA-<apoca
5udose% 6. 9,.% Cmpeanu -
&ricop Mirela - Mi,aela%
Maniu - 5udose Marilena
1++1 C>togenetic e$$ects induced *> nicotinic acid in Eicia $a*a 7. (2n=12)
and 5riticum aesti1um 7. (2n=!2). An. "t. Iniv. Al. +. )uza +asi! 1
JJJ,++! s. ++. a! /iologie vegetalE 8C28=
5udose% 6. 9,.% Meg>eri%
Cristina% Cmpeanu - &ricop
Mirela - Mi,aela% Maniu -
5udose Marilena
1++2 C>togenetic action o$ a neV *iostimulator on r>e - )ecale cereale 7.
(2n=1!). An. "t. Iniv. Al. +. )uza +asi! 1 JJJ,+++! s.++.a! /iologie
vegetalaE =C2=D
5udose% 6. 9,.% 5ru% Hlena%
Cmpeanu - &ricop Mirela -
Mi,aela
1++! /andarea cromosomilor la plante si importana sa. /uletinul @*/)!
a J++ a @esiune a @*/)! 1g.-ure"! 4>244 iunie! C>
5udose% 6.9,. 1++ .enetica% 1ol.66% Hd. ?ni1. Y;l.6.CuzaC% 6a.i
5udose% 6.9,. 1+6' .enetica : Kndrumtor de laborator% 7ito% Hd. ?ni1. Y;l.6.CuzaC% 6a.i