Diagnosticul de laborator

al infec!iilor produse de
dermatofi!i
Partea aIVa
Teste fiziologice
Dermatofi!ii prezint" o serie de nsu#iri metabolice #i eco-fiziologice
care pot fi utile n demersul de identificare a speciei, n special pentru
discriminarea ntre specii cu caractere culturale !i aspecte
microscopice similare. Evaluarea prezen!ei sau absen!ei acestor
nsu#iri se realizeaz" prin punerea n practic" a unor teste cum ar fi:
- testul de perforare a firului de p"r i n vi tro (pune n eviden!"
eventuala prezen!" a organelor perforatoare ale dermatofi!ilor)
- testul de hidroliz" a ureei
- testul de depistare a necesit"!ilor nutritive speciale
- cultivarea pe Agar BCP-lapte-glucoz" (depisteaz" modul de cre#tere,
eventualele modific"ri de pH #i digestia cazeinei)
- cultivarea pe boabe de orez
- testul de termotoleran!" / termostimulare
Teste fiziologice
Testul de perforare a firului de p"r in vitro
Tehnica: se utilizeaz" fire de p"r de copil, care se cupeaz" n fragmente
de 0,5-1 cm #i se autoclaveaz" n pl"ci Petri timp de 10 minute la
121C. Dup" autoclavare, se adaug" n fiecare plac" cte 25 ml ap"
distilat" sterilizat" #i cteva pic"turi extract de drojdie 10%. Pl"cile
astfel preg"tite se ns"mn!eaz" cu cteva fragmente din colonia
dermatofitului de identificat, apoi se incubeaz" la 25C, timp de 21
zile. La fiecare 7 zile, utiliznd fragmente de p"r inoculate, se
preg"tesc preparate extemporanee (cu lichid clarificant, ntre lam" #i
lamel"). O alt" variant", ar fi etalarea unor fragmente de 0,5-1,5 cm
din firele de p"r autoclavate direct pe suprafa!a coloniilor dezvoltate
pe SDA #i continuarea incub"rii timp de 21 zile. Testul pozitiv este
indicat de prezen!a organelor perforatoare care str"bat tija pilar" din
loc n loc, avnd traiect perpendicular pe aceasta.

Teste fiziologice
Testul de perforare a firului de p"r
Aten!ie !!! Organele perforatoare apar doar in vitro, niciodat" in
vivo (nu le depist"m n prelevatele clinice)

Teste fiziologice
Testul de perforare a firului de p"r

Test de perforare pozitiv Test de perforare negativ Test de perforare variabil
M. canis M. audouinii E. flocosum
M. cookei M. praecox T. erinacei
M. gypseum T. equinum T. tonsurans
M. persicolor T. concentricum
T. ajelloi M. ferrugineum
M. galinae T. rubrum
M. nanum T. schoeuleinii
T. terrestre T. verrucosum
T. mentagrophytes T. violaceum
T. soudanense
Teste fiziologice
Testul de hidroliz" a ureei
Pune n eviden!" producerea de ureaz" de c"tre dermatofi!i, prin
cultivare pe bulion sau agar Christensen. n cazul producerii acestei
enzime, ureea din mediu este descompus" cu generare de amoniac care
va modifica pH-ul mediului (alcalinizare), fenomen indicat de virarea
culorii indicatorului de la galben-orange la roz-ro#u. Dup" inoculare,
mediul se incubeaz" la 25-30C, timp de pn" la 7 zile. Absen!a
contamin"rii bacteriene a culturii dermatofitului din care se fac
pasajele pe mediul Christensen este obligatorie!
Teste fiziologice
Testul de hidroliz" a ureei



Fig. nr. ..... Testul ureazei - negativ (stnga), pozitiv (dreapta)


Teste fiziologice
Testul de hidroliz" a ureei este:

pozitiv pentru M. cani s, M. cookei , M. gypseum, M. nanum, M.
per si col or, M. pr aecox, T. aj el l oi , T. mentagrophytes (ambele
variet"!i) #i T. ter restre
slab pozitiv pentru E. fl occosum #i rar M. cani s
variabil (inconstant pozitiv sau negativ, n func!ie de tulpin") pentru
M. audoui ni i , T. r ubr um, T. schoenl ei ni i , T. tonsur ans #i T. vi ol aceum
negativ pentru M. fer r ugi neum, T. concentr i cum #i T. ver r ucosum.

Teste fiziologice
Testul de depistare a necesit"#ilor nutritive speciale
Unele specii au exigen!e nutritive particulare, reclamnd prezen!a n
mediile de cultur" a unor factori trofici ca vitaminele (acid nicotinic,
inozitol, tiamin") sau aminoacizii (histidina). Testul presupune
cultivarea su#ei de identificat pe un set de 7 medii (Trichophyton Agars)
notate 1...7:
1. mediu bazal con!innd cazein", f"r" vitamine
2. 1 + inozitol
3. 1 + inozitol + tiamin"
4. 1 + tiamin"
5. 1 + acid nicotinic
6. mediu bazal con!innd nitrat de amoniu, f"r" aminoacizi
7. 6 + histidin"
Acest set de medii este disponibil comercial: Trichophyton Agars 1-7
(Remel, BD Diagnostics)

Teste fiziologice
Tuburile cu cele 7 medii se
ns"mn!eaz" prin transferul unui
mic fragment din colonia de
testat, avnd grij" s" nu se
preleveze #i por!iuni de mediu.
Ele se incubeaz" apoi la 25-30C
s a u l a 3 7 C ( c n d s e
suspicioneaz" T. ver r ucosum),
timp de 14 zile. Interpretarea
rezultatelor se face dup" 7,
respectiv 14 zile, !innd cont de
eventuala stimulare a cre!terii pe
mediile aditivate cu vitamine sau
aminoacizi comparativ cu cea
observat" pe mediile bazale.
Teste fiziologice
!
Specia 1 2 3 4 5 6 7
+ + + + +
+ + + + + + +
+ + + + + + + + + + + + + +
+ + + + + + +
+ + + + + + + +
+ + + + + + +
+ + + + + + + +
+ + + + + + +
+ + + + + + +
+ + + + + + +
- + + + + + -
+ + + + + + + + + + + + + +
+ + + + + + + + + + + + + +
+ + + + + + + + + + +, - + +
+ + + + + + + +
+ + + + + + +
+, - +, - +, - + +, - + +, - , -
- + + + - - -
+, - + + + + + + +
Legend!: + (cre"tere normal!), - (absen#a cre"terii), + + (cre"tere stimulat!), (cre"tere disgonic!)

Teste fiziologice
Cultivarea pe boabe de orez
Este util" n diferen!ierea M. audoui ni i (cre#tere restrictiv", pigment
brun-maroniu, absen!a sporul"rii) de M. cani s (cre#tere abundent",
pigment galben, sporulare intens"). Mediul se prepar" n flacoane
Erlenmeyer cu capacitate de 100 ml, n care se adaug" 8 g orez
decorticat #i 25 ml ap" distilat". Se sterilizeaz" prin autoclavare la
121C timp de 15 minute. Dup" inoculare, flacoanele se incubeaz" la
25-30C timp de pn" la 2 s"pt"mni. Aceast" metod" este util" #i
pentru inducerea sporul"rii unor tulpini dermatofitice nesporulate,
disgonice sau cu sporulare atipic".

Teste fiziologice
Diferen!ierea tulpinilor de
M.audouinii fa!" de tulpinile
sterile apar!innd speciei
M.canis se realizeaz" prin
cultivare pe mediul cu boabe
de orez: cre#tere restrictiv" +
pigment brun $ M.audoui ni i ,
cre#tere abundent" + pigment
galben $ M.cani s.
Teste fiziologice
Testul de termotoleran#" / termostimulare
Are la baz" faptul c" unele specii de dermatofi!i tolereaz" temperatura
de 37C pentru dezvoltare (E. fl occosum, T. mentagrophytes, T.
r ubr um, T. schoenl ei ni i , T. tonsur ans, T. ver r ucosum, T. vi ol aceum), iar
altele nu (T. aj el l oi , T. ter restre etc.); n plus, pentru unele specii
(T. verrucosum, T. soudanense), temperatura de 37C ac!ioneaz" chiar
stimulativ asupra dezvolt"rii coloniilor comparativ cu temperaturile
mai sc"zute (25C, 30C). In vederea studierii acestor caracteristici, se
ns"mn!eaz" perechi de tuburi con!innd SDA solidificat n pant" cu
tulpinile n cauz" #i se incubeaz" diferen!iat la 25 sau 30C #i 37C.
Interpretarea testului se realizeaz" n momentul cnd coloniile ajung
la maturitate pe mediile incubate la 25-30C.
Teste de biologie molecular!
Tratament
Tratament
Tratament
Tratament
Tratament