Capitolul 23 Diagnosticul de laborator al

infeciilor produse de fungi.

Fungii sunt organisme eucariote, sunt saprofi i descompun materia organic. Exist
100.000-200.000 specii din care aproximativ 300 specii sunt cunoscute ca fiind potenial
patogene pentru om.
Exist 4 tipuri de boli micotice cu mecanisme diferite:
Hipersensibilitate (reacie alergic la mucegaiuri i spori),
Micotoxicoze (intoxicarea animalelor / oamenilor cu produse
alimentare
contaminate cu fungi care produc toxine, de obicei grne),
Ingestia de toxine preformate (ciuperci "otrvitoare"),
Infecii
Morfologie
Fungii patogeni pot exista sub forma de:
Levuri
Hife (mai multe hife alctuiesc micelii).
Levurile sunt organisme unicelulare care se reproduc prin nmugurire.
Hifele sunt sunt structuri filamentoase multicelulare constituite din celule tubulare cu
perei celulari. O mas de hife formeaz micelii, miceliile formeaz ramuri. Modalitatea de a
forma ramuri i mrimea miceiului ajut la identificarea morfologic.
Termenii de hife, micelii sau mucegaiuri pot fi folosite ca echivalente.
Unii fungi pot apare ca levuri i ca forme miceliene i se numesc fungi dimorfi.
Fungii dimorfi prezint o forma levuric (forma parazit sau patogen), care este de obicei
vzut n seciuni tisulare, n exudate sau n culturi incubate la 37 C.
Miceliile (forma saprofit) sunt observate n natur sau pe mediile de cultur cu
incubare la 25 C. Conversia la levuri pare a fi esenial pentru patogenitatea fungilor dimorfi.
Sporii asexuai pot fi:
de dimensiuni mari i se numesc macroconidii sau clamidospori
de dimensiuni mici - microconidii, blastospori, artroconidii.
Epidemiologie
Fungii sunt ubicuitari n natur, oamenii fiind expui n mod constant.
Majoritatea sunt saprofii n sol i bolile micotice nu sunt n general boli transmisibile
(excepie Candida i unii dermatofii). Pot apare epidemii dar acestea se datoreaz expunerii
la condiii de mediu si nu din cauza transmisibilittii interumane.
Infeciile micotice
Depind de mrimea inoculului i de rezistena gazdei. Severitatea infeciei depinde n
special de statusul imunologic al gazdei.
Clasificarea clinic a micozelor:
Micoze superficiale (cutanate) localizate la nivelul pielii, unghiilor, firului de pr
(fungii implicai se numesc dermatofii).
Micoze subcutanate localizate la nivelul esutului subcutanat i care rareori produc
infecii sistemice.
Micoze sistemice pot afecta viscere profunde i pot fi diseminate, fiecare tip de
fungi are o anumit predispoziie pentru anumite organe.
Micoze oportuniste care sunt produse de saprofii ubicuitari i de patogeni
ocazionali care invadeaz esuturile pacienilor care au boli predispozante (diabet,
169
cancer, leucemie) sau condiii predispozante (agamaglobulinemie, tratamente
antibiotice sau cu steroizi). Clasificarea fungilor cu importan clinic medical:
Levuri: Candida, Cryptococcus.
Micoze superficiale: dermatofii Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton
Fungi filamentoi: produc chromoblastomicoza, micetoame, mucormocoza
Aspergilius: aspergiloza
Fungi dimorfi: blastomicoza, hisopasmoza {Hisioplasma
capsulatum), coccidioiodmicoza, paracoccidioidomicoza, sporotrichoza;
Micoze oportuniste
Candida albicans
Levur saprofit condiionat patogen poate face parte din flora normal a corpului.
Prezint factori de virulen cu ajutorai crora colonizeaz i persist n esuturile gazdei. Cel
mai important factor este aderena.
Prezint dou forme: blastospori care nmuguresc i hife.

Exist mai multe specii de Candida cu potenial patogen pentru om.
Ele se mpart n C. alhicans i C. non-aibicans.
Candida alhicans este un microorgansim endogen, prezent la 40-80% din persoanele
sntoase (la nivelul cavitii bucale, intestin, vagin). Apariia infeciei cu Candida pare a fi o
proprietate a gazdei i nu a microorganismului.
Infeciile cu Candida apar ia pacienii cu imunitate celular alterat sau modificri ale
florei saprofite (cu ct organismul este mai debilitat cu att mai sever va fi infecia).
Pacienii cu imunitate celular deprimat au o rezisten sczut la infeciile fungice.
Terapia prelungit cu antibiotice sau corticosteroizi, interveniile chirurgicale (chirurgie
cardiac, catetere) ce produc alterri ale fiziologiei gazdei favorizeaz infeciile cu Candida.
Poate produce infecii la nivelul mucoaselor i a tegumentelor dar i infecii severe de
tip pneumonie, septicemie, endocardit, esofagit la pacienii imunocompromii.
Diagnostic de laborator
Produsele patologice. Variaz n funcie de localizarea infeciei: snge pentru
hemocutur, secreie vaginal, exudat faringian, lingual, urin, materii fecale, fragmente de
leziuni cutanate, mucocutanate, fragmente de fanere.
Examenul direct se poate face pe:
Preparatul nativ (proaspt)
pe frotiul colorat Gram, albastru de metilen sau Giemsa
Imunofluorescen
170
Candida, preparat nativ
Blastosporii sunt celule mari (3-5u), sferice sau ovoide, nmugurite, Gram pozitive
Pseudomicelii, celule alungite aezate cap la cap, nedesprinse dup diviziune
Clamidospori, celule sferice cu dublu contur, mai mari dect blastosporii, se
observ doar la specia C. Albicans

Candida, microscopie cu imunofluorescen
Izolare
Cultivarea se realizeaz pe mediul Sabouraud simplu sau Sabouraud cloramfenicol.
Incubare la 30-37 C, un timp mediu de 5 zile.

Candida, cultur pe mediul Sabouraud
171
Identificare
caractere morfotinctoriale (examenul microscopic),
caractere de cultur: colonii de tip S, alb-glbui, cremoase, mari, cu
mat, miros de drojdie,
zimograma identificare pe baza studierea fermentrii zaharurilor,
auxonograma identificare pe baza studierea asimilrii zaharurilor,
testul filamentrii rapide pentru identificarea speciei C. albicans.
Cultura de cercetat se nsmneaz n plasm sau ser, apar prelungiri filamentoase
(tuburi germinative), foarte rapid n 3 ore care se evideniaz la microscopul optic prra
preparat nativ.
formarea clamidosporilor pentru identificarea speciei C. albicans C. albicans formeaz
clamidospori dac se cultiv pe medii speciale (PC, PBC. Tween80)
Antifungigrama reprezint testarea sensibilitii la antifungice (fluconazol,
itraconazol, voriconazol, amfotericina B, terbinafin).
Diagnosticul infeciei produse de Aspergillus
Boala se numete aspergioz. Speciile genului Aspergillus pot produce o mare
diversitate de boli, sunt ubicuitari n natur, au rol de degradare a plantelor n compost.
La fel ca i Candida, afecteaz rar pacienii imunocompeteni.
Produce enzime extracelulare care faciliteaz dezvoltarea n plmn i diseminarea
bolii. Factorul de virulen este reprezentat de producerea de toxine.
Sunt 3 tipuri de aspergioz pulmonar:
1. Alergic, prin hipersensiblizare la acest microorganism. Simptomele variaz de la
insuficien respiratorie moderat la fibroz alveolar.
2. Formarea de opaciti fungice observate de obicei n cavernele vechi ale pacienilor
de TBC (colonie de fungi care crete ntr-o cavern) sub form de semilun. Pacienii prezint
tuse cu expectorarea elementelor fungice din cauza invadrii frecvente a bronhiilor; la
examenul sputei se observa lanuri de conidii.
3.1nvazie tisular agresiv. Aspergiloz, iniial pulmonar, poate disemina n orice
organ. Pot apare: endocardita, osteomielita, otomicoza, infecii cutanate.
Exist peste 900 specii de aspergillus: A.fumigatus, A.niger, A.flavus (produce
aflatoxin care are efect toxigen i carcinogen i poate contamina alimente ca alunele).
Au o distribuie universal, frecvent n sol, alimente, vopsea, aerisiri, pot crete i n
dezinfectante.

Microscopie optic
Examen microscopic direct
^Se efectueaz preparate native sau frotiuri colorate cu albastru de metilen i se observ
miceliu aerian bogat, pe care se formeaz conidiofori mciucati, prevzui cu 1-2 rnduri de
sterigme care prin nmugurire formeaz conidii de culoare neagr (A. niger) sau verde (A.
flavus).
Izolare:
Pe medii uzuale, mediul Sabouraud {A. niger) sau pe medii speciale (medii cu extract de
cartof). Se dezvolt sub form de colonii pufoase:
albe, care dup cteva zile devin verzi-cenuii, apoi gri-nchis {A. fumigatus)
verde deschis cu reversul necolorat, crem sau slab glbui (A. flavus).
alb-glbui, devin apoi negre sau brun-nchis la suprafa ( A. niger).


Antifungigrama se realizeaz pentru posibilitatea iniierii unei terapii intite.
Diagnostic serologic
Exist 2 teste serlogice prin imunodifuzie sau metoda imunoenzimatic ELISA.
Msoar galactomananul cu specificitate si sensibilitate de aproape 100%
Incubare la temperatura de 25C, 24 ore-7 zile