1

Raport de activitate
Titlul i codul proiectului: FILOGENIA MOLECULARA A PICOALGELOR DIN LACURI
SARATE DIN ROMANIA, CNCSIS TE/306
Conductor de proiect: ef lucr. Dr. Szkely Gyngyi
Perioada raportat: 15.12.2010-10.12.2011
Obiective tiiifice prevzute pentru perioada de raportare:
1. Identificarea picoalgelor i a picocianobacteriilor existente n fitoplanctonul unor lacuri srate
reprezentative din Romnia.
2. Izolarea tulpinilor de picoalge din apele srate bogate n picofitoplankton.
3. Selectarea lacurilor reprezentative cele mai bogate n picofitoplankton dintre cele analizate
anterior.
n iarna (februarie) i vara (august) anului 2011 am colectat probe de ap n sticle Meyyer din
zece lacuri saline situate n cinci locaii geografice din bazinul Transilvaniei (Fig. 1). n timpul
verii, probele de ap au fost colectete de pe suprafa apelor, unde apa era tulbure din cauza
scldatului intens, n timp ce la probele colectate iarna, am avut posibilitatea colectrii i din
adncimi diferite de ap.
Principalele caracteristici fizico-chimice ale apei, cum ar fi: temperatura, conductivitate
electric, pH-ul, concentraia de oxigen dizolvat, transparen Secchi i grosimea de ghea (n
timpul ierni) au fost determinate pe loc. Probele de ap nefixate au fost transportate n laborator
n cutii termoizolan, n condiii de ntuneric, pentru analize ulterioare. Concentraia clorofilei a
fost determinat spectrofotometric dup extracie cu metanol. Abundena i compoziia de
picofitoplankton a fost determinat folosind microscopul epifluorescent.
2
Fig. 1: Localizarea lacurilor incadrate n studiu: Ocna Dej (Lacul Cabdic), Sic (Lacul Bilor i
Lacul Spat), Cojocna (Lacul Bilor Cojocna i Lacul Durgu Cojocna), Turda (Lacul Tarzan,
Lacul Ocnei i Lacul Rotund) i Ocna Sibiului (Lacul Ocnia-Avram Iancu i Lacul Fr Fund).
Rezultatele obinute n urma msurrilor i determinrilor pe teren i n laborator, sunt prezentate
n tabelul 1.
n timpul verii, am constatat c apa din lacuri este tulbure din cauza scldatului intensiv, n timp
ce iarna lacurile au fost stratificate. A fost o diferen pronunat n caracteristicile hidrologice i
biologice, n probele de var i de iarn. n timpul verii, temperatura apei ntodeanua a fost mai
mare dect 28.2C, cu o temperaur maxim de 38.5 C. n timpul iernii temperatura apei a variat
intre -1,7 C i 17C (Tab. 1). Iarna, conductivitatea electric (EC) pe suprafa a fost ntotdeauna
mai mic dect vara, datorit afluxului mai mare de ap dulce i a lipsei de efectul de
amestecare datorit scldatului. Salinitatea apei pe suprafa a crescut treptat cu adncimea apei.
n cazul lacului 1 i 4 n timpul verii, concentraia de sare (NaCl) pe suprafa a fost de 59,3 gL
-1
(EC: 133 mScm
-1
), respectiv 109.8 gL
-1
(CE: 133 mScm
-1
) (Tab. 1.). Concentraia clorofilei n
timpul verii pe suprafa a variat ntre 4,3 i 1713 gL
-1
, n timp ce iarna am obinut valori mult
mai sczute: ntre 2.29 i 116.6 gL
-1
(Tab. 1). Dac celulele de picofitoplankton au fost
prezente, numrul lor n timpul verii a atins 7.3 milioane de celule pe mililitru ap. Abundena
maxim a picoalgelor n timpul verii a fost de 1.3 milioane de celule pe mililitru ap n lacul 4.
n majoritatea cazurilor n timplul verii, fraciunea de picofitoplankton a fost dominat de
picocianobacterii, n timp ce iarna picoalgele au fost prezente n numr mai mare. n doar patru
probe (2W0, 5S0, 7W0, 7W2.5) au fost observate coexistena a speciilor procariote i eucariote
de picofitoplankton (Tab. 1).
3
Tab. 1: Caracteristicile fizico-chimice ale probelor investigate. n coduri prima cifr reprezint numrul lacului, al doilea caracter reprezint perioada de colectare
(W=iarn, S=var), al treilea caracter reprezint adncimea de prelevare a probelor (n metri, 0 = ap de suprafa). NA, ND = nu a fost -analizat, -detectat.
Localitatea Lacul Coordinatele
GPS
Codul probei Data
collectrii
Adncimea
(m)
Temp
(C)
Conductivitate
electric
(mS cm
-1
)
pH Oxigen
dizolvat
(mg l
-1
)
Chl-a
(g l
-1
)
Abundena
picocianobecteriilor
cel ml
-1
Abundena
picoalgelor
cel ml
-1
Ocna Dej Cabdic N4707.71234'
E2351.90`
1S0 22-07-2010 0 28.2 80 8.9 10,5 104 7,302,152 ND
1W0 07-02-2011 0 -1.2 56 7.5 19,3 11.9 ND 83,837
1W1 07-02-2011 1 5.6 84 7.9 12.6 6.1 ND 20,211
Sic L. Bilor N4655.913`
E2354.073`
2S0 22-07-2010 0 29.9 67 8.8 11 51 141,146 ND
2W0 07-02-2011 0 1.4 48 8.6 18.2 17.9 1,048 111,084
2W2 07-02-2011 2 2.5 80 8.5 10.5 27.7 ND 487,593
L.Spat 3S0 22-07-2010 0 38.5 195 8.7 >20 1713 ND ND
Cojocna L. Bilor
Cojocna
N4644.90652'
E2350.44080'
4S0 22-07-2010 0 30.5 133 8.3 14 242 ND 1,294,889
4W0 07-02-2011 0 -0.5 89 8.6 >20 44.5 ND 442,472
Cojocna L Durgu
Cojocna
N4644.83638'
E2350.44242'
5S0 22-07-2010 0 30.5 129 8 6.2 27 43,208 58,060
5W0 07-02-2011 0 -1.7 69 8.9 >20 6.15 ND 2,619
5W1.5 07-02-2011 1.5 8.5 132 7.4 >20 7.79 ND 8,733
Turda L. Tarzan N4634.472`
E2348.549`
7S0 18-08-2010 0 28.8 32 NA NA 4.35 68,117 ND
7W0 08-02-2011 0 -0.6 36 9.2 14.7 3.34 1,655 48,537
7W2.5 2.5 8.2 52 7.3 2.1 8.7 441,890 54,145
Turda Lacul
Ocnei
N4635.15760'
E2347.28240`
8S0 29-08-2010 0 NA 68 8.9 NA 10.6 92,762 ND
8W0 08-02-2011 0 2 82 8.9 15 4.76 ND 31,439
8W3 08-02-2011 3 9 122 8.5 4.7 5.69 ND ND
8W4 08-02-2011 4 17 280 7 17.8 9.55 ND ND
Turda L. Rotund N4635.09880'
E2347.21400'
9S0 29-08-2010 0 NA 66 8.4 NA 14.6 116,459 ND
9W0 08-02-2011 0 -0.3 27 8.1 13.9 2.29 ND 13,474
Ocna
Sibiului
L. -Avram
Iancu
N4552.444`
E2403.983`
6S0 22-07-2010 0 31 145 8.6 15 80 ND 120,365
6W0 09-02-2011 0 -0.2 74 9.5 NA 20.54 ND ND
6W1.5 09-02-2011 1.5 10.3 154 8.8 NA 7.45 ND 69864
Ocna
Sibiului
L. Fr
Fund
N4552.578`
E2404,064`
10S0 22-07-2010 0 30.8 178 8.4 4.4 9.86 ND ND
10W0 09-02-2011 0 -0.4 101 9.4 NA 48.35 ND ND
10W1.5 09-02-2011 1.5 6.6 183 9.1 NA 116.66 ND ND
4
n figura 2 sunt prezentate caracteristicile fizico-chimice ale coloanei de ap din lacul Tarzan n
timpul verii. Pn la 3 m adncime valorile msurate sunt aproape constante, din cauza
balneaiei. Sub 3 metri temperatura apei scade de la 24C pe suprafa, pn la 15C la 10 m
adncime, la fel i oxigenul dizolvat. Pn la adncimea de 3 m conductivitatea electric nu
arat variaii, dup care, sub 3 m concentraia srii crete treptat cu adncimea, de la 46 mScm
-1
la 67 mScm
-1
. Din msurrile efectuate putem concluziona c n majoritatea lacurilor, dinamica
parametrilor fizico-chimici este similar cu cea prezentat n cazul lacului Tarzan n figura 2.
A B
Fig. 2: Temperatura (T), conductivitatea electric (EC, mprit cu 2), pH, concentraia
oxigenului i a clorofilei-a, i coloanei de ap n lacul Tarzan (Turda), n timpul verii.
n timpul iernii, coloana de ap n lacurilre srate era extrem de stratificat, cu variaii mari
privind parametri fizico-chimici. Figura 3 prezint modul de stratificaie a coloanei de ap n
lacul Ocnei (Turda). Apa srat pe suprafaa lacului este diluat cu ap dulce provenit din
topirea zpezii. Suprafaa lacului se caracterizeaz cu valori relativ mici de temperatur (2C) i
salinitate (82 mScm
-1
) (Fig. 3A). Concentraia clorofilei-a a fost 4,7 gL
-1
, pH-ul era 9,8. Apa pe
suprafa era suprasaturat cu oxigen (15 mgL
-1
), cu oxigen atmosferic. La adncimile de 1 m i 4
m a fost detectat stratul de transmisie, n acest strat valorile fizico-chimice ale apei au artat
schimbri brute. Temperatura a crescut de la 2C la 19C, salinitatea a crescut de la 82 mScm
-1
5
la 280 mScm
-1
. pH-ul a sczut de la 8,9 la 7. La acest adncime am obinut un vrf nalt de
clorofila, care este urmat de concentraia suprasaturat de oxigen, cauzat de prezena algelor.
Sub straul de transmisie temperatura nu s-a schimbat significativ, salinitatea a crescut, oxigenul
dizolvat i clorofila au sczut brusc, iar pH-ul a stagnat (Fig. 3).
A B
Fig. 3: Temperatura (T), conductivitatea electric (EC, mprit cu 20), pH-ul, concentraia
oxigenului i clorofilei-a i a coloanei de ap n lacul Ocnei (Turda), n timpul iernii.
Dup prezena i abundena picofitoplanktonului (prezentat n tabelul 1), Lacul Cabdic (Ocna
Dej), Lacul Bilor (Sic), Lacul Bilor (Cojocna), Lacul Tarzan, Rotund i Ocnei (Turda) au fost
selectate ca i lacuri cu cea mai mare abunden de picofitoplankton, cu precizerea c i celelalte
lacuri au mare potenial tiinific.
Izolarea tulpinilor de picoalge se face prin diluarea i etalarea probelor pe plci Petri cu mediu
nutritiv Brackish Water Medium. Dup dezvoltarea coloniilor, picoalgele se reizoleaz i se
intruduc n culturi. Numeroase preculturi din diferite lacuri au fost introduse spre cultivare n
laborator.
Bibliografie consultat
Altschul, S.F., T.L. Madden, A.A. Schaffer, J. Zhang, Z. Zhang, W. Miller, D.J. Lipman, 1997: Gapped BLAST and
PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. Nucleic Acids Res., 25:3389-3402
6
Lane DJ. 1991: 16S/23S rRNA sequencing. In: Nucleic acid techniques in bacterial systematics (Eds: Stackebrandt
E, Goodfellow M). John Wiley and Sons. pp. 115-175.
Nbel U., Garcia-Pichel F., Muyzer G. 1997: PCR primers to amplify 16S rRNA genes from Cyanobacteria. Appl.
Environ. Microbiol. 63: 3327-3332.
Elwood, H.J., Olsen, G.J. and Sogin, M.L. (1985) The smallsubunit ribosomal RNA gene sequences from the
hypotrichous ciliates Oxytricha nova and Stylonychia pustulata. Mol. Biol. Evol. 2, 399410.
Simon, N., Campbell, L., Ornolfsdottir, E., Groben, R., Guillou, L., Lange, M. and Medlin, L.K. (2000)
Oligonucleotide probes for the identification of three algal groups by dot blot and fluorescent whole-cell
hybridization. J. Euk. Microbiol. 47, 7684.
Tamura K, Peterson D, Peterson N, Stecher G, Nei M, and Kumar S (2011) MEGA5: Molecular Evolutionary
Genetics Analysis using Maximum Likelihood, Evolutionary Distance, and Maximum Parsimony Methods.
Molecular Biology and Evolution (In Press).
Becker S, Richl P, Ernst A. 2007. Seasonal and habitat-related distribution pattern of Synechococcus genotypes in
Lake Constance. FEMS Microbiol. Ecol. 62: 64-77.
Crosbie ND, Teubner K, Weisse T. 2003. Flow-cytometric mapping provides novel insights into the seasonal and
vertical distributions of freshwater autotrophic picoplankton. Aquat. Microb. Ecol. 33: 53-66.
Dez B, Pedrs-Ali C, Marsh TL, Massana R. 2001b. Application of denaturing gradient gel electrophoresis
(DGGE) to study the diversity of marine picoeukaryotic assemblages and comparison of DGGE with other
molecular techniques. Appl. Environ. Microbiol. 67: 2942-2951.
Fawley MW, Fawley KP, Owen HA. 2005. Diversity and ecology of small coccoid green algae from Lake Itasca,
Minnesota, USA, including Meyerella planktonica, gen. et sp. nov. Phycologia 44: 35-48.
Felfldi, T., Somogyi, B., Mrialigeti, K., Vrs, L. 2009. Characterization of photoautotrophic picoplankton
assemblages in turbid, alkaline lakes of the Carpathian Basin (Central Europe). J. Limnol. 68: 385-395.
Felfldi, T., Somogyi, B., Mrialigeti, K., Vrs, L. 2011a. Notes on the biogeography of non-marine planktonic
picocyanobacteria: re-evaluating novelty. J. Plankton Res. 33: 1622-1626.
Felfldi, T., Duleba, M., Somogyi, B., Vajna, B., Nikolausz, M., Prsing, M., Mrialigeti, K., Vrs, L. 2011b.
Diversity and seasonal dynamics of the photoautotrophic picoplankton in Lake Balaton (Hungary). Aquat. Microb.
Ecol. 63: 273-287.
Henley WJ, Hironaka JL, Guillou L, Buchheim MA, Buchheim JA, Fawley MW, Fawley KP. 2004. Phylogenetic
analysis of the Nannochloris-like algae and diagnoses of Picochlorum oklahomensis gen. et sp. nov.
(Trebouxiophyceae, Chlorophyta). Phycologia 43: 641-652.
Ivanikova NV, Popels LC, McKay ML, Bullerjahn GS. 2007. Lake Superior supports novel clusters of
cyanobacterial picoplankton. Appl. Environ. Microbiol. 73: 4055-4065.
Lewin RA, Krienitz L, Goericke R, Takeda H, Hepperle D. 2000. Picocystis salinarum gen. et sp. nov.
(Chlorophyta) a new picoplanktonic green alga. Phycologia 39: 560-565.
MacIsaac EA, Stockner JG. 1993. Enumeration of phototrophic picoplankton by autofluorescence microscopy. In:
The handbook of methods in aquatic microbial ecology (Eds: Kemp PF, Sherr BF, Sherr EB, Cole JJ). CRC Press.
pp. 187-197.
Mzes A, Prsing M, Vrs L. 2006. Seasonal dynamics of picocyanobacteria and picoeukaryotes in a large shallow
lake (Lake Balaton, Hungary). Int. Rev. ges. Hydrobiol. 91: 38-50.
7
Snchez-Baracaldo P, Handley BA, Hayes PK. 2008. Picocyanobacterial community structure of freshwater lakes
and the Baltic Sea revealed by phylogenetic analyses and clade-specific quantitative PCR. Microbiology (SGM)
154: 3347-3357.
Six C, Thomas J-C, Garczarek L, Ostrowski M, Dufresne A, Blot N, Scanlan DJ, Partensky F. 2007. Diversity and
evolution of phycobilisomes in marine Synechococcus spp.: a comparative genomics study. Genome Biol. 8: R259.
Somogyi, B., Felfldi, T., Vanyovszki, J., gyi, ., Mrialigeti, K., Vrs, L. 2009. Winter bloom of
picoeukaryotes in Hungarian shallow turbid soda pans and the role of light and temperature. Aquat. Ecol. 43: 735-
744.
Somogyi, B., Felfldi, T., Dinka, M., Vrs, L. 2010. Periodic picophytoplankton predominance in a large, shallow
alkaline lake (Lake Fert/Neusiedlersee). Ann. Limnol. - Int. J. Lim. 46: 9-19.
Somogyi, B., Felfldi, T., Solymosi, K., Makk, J., Homonnay, Z.G., Horvth, G., Turcsi, E., Bddi, B., Mrialigeti,
K., Vrs, L. 2011. Chloroparva pannonica gen. et sp. nov. (Trebouxiophyceae, Chlorophyta) a new
picoplanktonic green alga from a turbid, shallow soda pan. Phycologia 50: 1-10.
Stomp M, Huisman J, Vrs L, Pick FR, Laamanen M, Haverkamp T, Stal LJ. 2007. Colourful coexistence of red
and green picocyanobacteria in lakes and seas. Ecol. Lett. 10: 290-298.
Vrs L, Mzes A, Somogyi B. 2009. A five-year study of autotrophic winter picoplankton in Lake Balaton,
Hungary. Aquat. Ecol. 43: 727-734.
Yamamoto M., Nozaki H., Miyazawa Y., Koide T., Kawano S., 2003: Relationship between presence of a mother
cell wall and speciation in the unicellular microalga Nannochloris (Chlorophyta). Journal of Phycology 39: 172-184
Weisse T. 1993. Dynamics of autotrophic picoplankton in marine and freshwater ecosystems. In: Advances in
Microbial Ecology. Vol. 13. (Ed: Jones JG). Plenum Press. pp. 327-370.
West NJ, Schonhuber WA, Fuller NJ, Amann RI, Rippka R, Post AF, Scanlan DJ (2001) Closely related
Prochlorococcus genotypes show remarkably different depth distributions in two oceanic regions as revealed by in
situ hybridization using 16S rRNA-targeted oligonucleotides. Microbiology 147:17311744