Sunteți pe pagina 1din 8

PROCEDURA DE NCERCARE

Determinarea ochratoxinei din alimente


COD PI - 01
Nume:

Elaborat
GORCEA CARMEN

Funcia:

Masterand

Data :
Semntura:

25.05.2011

Exemplar:
Pagina 1 / 8
Revizia: 0 / 25.05.2011
Editia: 2 / 25.05.2011
Aprobat

Verificat

EXEMPLAR CONTROLAT

EXEMPLAR NECONTROLAT

Acest document este proprietatea SAPCO din USAMV Cluj. Copierea, difuzarea sau utilizarea lui, chiar parial,
n exteriorul USAMV Cluj este interzis, dac nu exist acordul conducerii.

PROCEDUR DE NCERCARE
Laboratorul pentru Siguranta
Alimentara si Protectia
Consumatorului - SAPCO

Determinarea ochratoxinei din


alimente
Cod: PI - 01

Exemplar nr.
Pagina: 2 / 8
Ediia: 2 / 25.05.2011
Revizia: 0 / 25.05.2011

CUPRINS

Pag.
0 Evidena aprobrilor i reviziilor ........................................................................

1 Scop............................................................................................................. . 4
2 Domeniu de aplicare..........................................................................

3 Documente de referin.............................................................................

4 Terminologie, Abrevieri.............................................................................

5 Aciuni i / sau Msuri preventive si de imbunatatire............................... 5


6 Descriere procedur ........................................................................... 5
7 Responsabiliti ..........................................................................................................

8 nregistrri ..................................................................................................................

9 Anexe .........................................................................................................................

PROCEDUR DE NCERCARE
Laboratorul pentru Siguranta
Alimentara si Protectia
Consumatorului - SAPCO

Determinarea ochratoxinei din


alimente
Cod: PI - 01

Exemplar nr.
Pagina: 3 / 8
Ediia: 2 / 25.05.2011
Revizia: 0 / 25.05.2011

EVIDENA APROBRILOR I REVIZIILOR


Nr.
pagin
1
2
3
4
5

Revizia /
Ediia
R0 / Ed2

Nr.
revizie
0
0
0
0
0

Nr.
pagin
6
7
8

Activitatea /
procesul evideniat
(Numrul ediiei
sau capitolul /
paginile revizuite)
Elaborare Ediia 2

Nr.
revizie
0
0
0
0
0

Nr.
pagin

Nr.
revizie
0
0

Nume, prenume, data i semntura


Elaborat

Verificat

Aprobat

Gorcea Carmen
25.05.2011

cod PG-01-F01-Ed2-R0

PROCEDUR DE NCERCARE
Laboratorul pentru Siguranta
Alimentara si Protectia
Consumatorului - SAPCO

Determinarea ochratoxinei din


alimente
Cod: PI - 01

Exemplar nr.
Pagina: 4 / 8
Ediia: 2 / 25.05.2011
Revizia: 0 / 25.05.2011

1
SCOP
1.1.Prezenta procedura stabileste procedee de determinare a ochratoxinei din alimente.
2
DOMENIU DE APLICARE
2.1 Procedeul de determinare se aplica pentru:
-cereale si produse din cereale
-legume
-carne si organe de porc
-ciocolata , cafea si ceai
-vin si bere
3

DOCUMENTE DE REFERIN

3.1.
3.2.
3.3.
3.4.
3.5.
3.6.
3.7.
3.8.
3.9.
3.10.
3.11.
3.12.
3.13.
3.14.

SR EN 45020:2004 - Standardizarea i activitile conexe. Vocabular general


PG 02 - Procedura general. Analiza cererilor, ofertelor si contractelor
PG 07 - Procedura general. Controlul lucrrilor de ncercare neconforme
PG 08 - Procedura general. Aciuni corective, preventive i de imbuntire
PG 09 - Procedura general. Controlul nregistrrilor
PG 12 - Procedura general. Gestionarea datelor / nregistrrilor pe suport informatic
PG 15 - Procedura general. Estimarea incertitudinii
PG 16 - Procedura general. Echipamente
PG 17 - Procedura general. Trasabilitatea msurrii
PG 18 - Procedura general. Prelevare
PG 19 - Procedura general. Manipularea obiectelor de ncercare
PG 20 - Procedura general. Asigurarea calitii rezultatelor ncercrilor
PG 21 - Procedura general. Raportarea rezultatelor
Norme generale de protecia muncii, Ministerul Muncii i Solidaritii Sociale, Ministerul
Sntii i Familiei, Bucureti, 2002.
3.15. Norme departamentale de Protecia Muncii, M.I.Ch , 1987.
4

TERMINOLOGIE I ABREVIERI

4.1
Terminologie
4.1.1 Prelevarea aciune ce const n luarea unei probe reprezentative n scopul examinarii
diverselor caracteristici definite.
4.1.2 Prob parte ideal reprezentativ, prelevat dintr-o mas definit, intermitent sau coninutul,
pentru a examina diverse caracteristici.

PROCEDUR DE NCERCARE
Laboratorul pentru Siguranta
Alimentara si Protectia
Consumatorului - SAPCO

Determinarea ochratoxinei din


alimente
Cod: PI - 01

Exemplar nr.
Pagina: 5 / 8
Ediia: 2 / 25.05.2011
Revizia: 0 / 25.05.2011

4.1.3 ncercare - operaie tehnica de determinare a uneia sau a mai multor caracteristici ale unui
produs, proces sau serviciu dat, n conformitate cu o procedura specificat.
4.1.4 Soluia de analizat soluie a probei de analizat, prepart astfel nct compusul ce trebuie
s fie determinat s poat fi msurat printr-o tehnic analitic adecvat.
4.1.9 Repetabilitate - diferena ntre rezultatele a dou determinri efectuate n paralel din aceeai
prob, de acelai operator, n cadrul aceluiai laborator i care nu trebuie s depeasc 0,5g ap la
100g proba de analizat.
4.2
Abrevieri
4.2.1.
USAMV - Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Cluj
4.2.2.
FA Facultatea de Agricultur
4.2.3.
LICSA - Laboratorul de ncercri pentru Calitatea i Sigurana Alimentelor
4.2.4.
REC - Rector
4.2.5.
DEC Decan
4.2.6.
L ef Laborator
4.2.7.
RC Responsabilul Calitii
4.2.8.
RM Responsabilul Metrolog n SAPCO
4.2.9.
RPM Responsabil Protecia Muncii n SAPCO
4.2.10. R Raport de ncercri
4.2.11. IU - Instruciuni de utilizare
5
ACIUNI I/SAU MSURI PREVENTIVE SI DE IMBUNATATIRE
Conform procedurii cod PG-08.
.
6
DESCRIERE PROCEDUR
6.1 Determinarea ochratoxinei din alimente
6.1.1 Principiul metodei si materiale:
Probele de alimente, achiziioante din reeaua comercial a oraului , au fost
supuse extraciei cu un amestec CH3OH: NaHCO3 (n raport de 80:20). Toi solvenii folositi au fost
de grad HPLC i toi reactivii au fost de puritate analitic .Extractele au fost purificate prin extracie n
faz solid (C18) pentru reinerea ochratoxinei A. Micotoxina a fost eluat cu cloroform; faza organic
a fost evaporat la sec i apoi, reziduul reluat cu 0,6 ml faz mobil. Un volum de 20 l a fost supus
analizei HPLC.

6.2 Materiale:
- balan;
- baie de ultrasunete;
- micro-sering Hamilton;
- HP 1090 Series II lichid cromatograf echipat cu detector cu multidiode UV-VIS i detector de
fluorescen;
- coloan cromatografic tip Stable Bond SB - C18 (150 x 4,6 mm; 5 m);
- standard ochratoxin A
- coloane SPE C18
- hrtie de filtru cantitativ
- acetonitril (puritate HPLC)
- cloroform (puritate HPLC)
- metanol ChromasolvR (puritate HPLC)
- acid acetic glacial 99,99%

PROCEDUR DE NCERCARE
Laboratorul pentru Siguranta
Alimentara si Protectia
Consumatorului - SAPCO

Determinarea ochratoxinei din


alimente
Cod: PI - 01

Exemplar nr.
Pagina: 6 / 8
Ediia: 2 / 25.05.2011
Revizia: 0 / 25.05.2011

- sulfat de sodiu
- ap (puritate HPLC)
- faz mobil: amestec acetonitril : ap : acetic acid (n rapotul 99: 99: 2).

6.3 Mod de lucru


Probele solide:
-probele au fost amestecate cu 2,5 OTB mL soluie de lucru standard (10 mg / L, etalon intern) i 200
ml acetonitril 60% soluie apoas.Amestecul a fost apoi omogenizat la viteza mare timp de 2-3 min i
centrifugat la 3500 rpm timp de 5 min. O cantitate de 4 ml din soluie a fost picurat ntr-un tub de
centrifugare de 50 ml i se amestec cu 30 ml tampon PBS nainte de curatare IAC.
Probele lichide:
-o cantitate de 10 ml de prob a fost pipetata ntr-un tub de centrifugare de 50 ml, dup ce a fost agit
energic timp de 30 s, apoi s-a adugat 10 ml hidrogen soluie de carbonat de sodiu 1%. Solutia a fost
neutralizata la ph 7,4.50 mL de OTB soluie de lucru standard (10 mg / L) i 20 ml tampon PBS au
fost adugate n amestec. Amestecul a fost agitat timp de 5 s i a fost gata pentru curatare IAC.
Curatarea IAC:
Extrasul a fost transferat ntr-o coloan OchraStarTM si trecut prin coloana IAC cu debit de
aproximativ 1 picatura pe secunda.. Dup ce a fost extras complet, a fost trecut prin coloana IAC
aceasta fiind spalata cu10 ml de 0,2 M soluie de acetat de amoniu. Pentru probele de pudra de
cacao i cafea, coloana IAC a fost splat cu 50 ml 0,025% Tween-20 n soluie PBS cu un debit de
aproximativ 1 pictur pe secunda nainte fiind splat cu 5 mL de 0,2 M soluie de acetat de
amoniu in conformitate cu instruciunile productorului. Extractul purificat a fost obinut prin cltirea
coloanei IAC de 2 ori cu 1 ml de acid acetic 2% n metanol. Eluatul a fost evaporat la sec la 40 grade
C sub azot. Reziduul a fost dizolva n 1 ml de acetonitril: metanol 0.3% acid formic (1:1:1) pentru
analiza LC-MS/MS.
O curb de calibrare standard a fost preparata prin amestecarea 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0 i 2.0mL de
OTA soluie de lucru standard (10 ug / L) cu 0,1 mL de OTB soluie de lucru standard (50 ug / L) ntrun balon individual de 10 ml i apoi alcatuita pana la semn cu faza mobila.
EXTRACTIA OCHRATOXINEI SI PURIFICAREA EI
Probele de analizat sunt supuse extractiei in vederea separarii ochratoxinei A.
O cantitate de 20 g proba maruntita se agita 20 minute cu un volum de 20 ml amestec
CH3OH:NaHCO3 3% dupa care se filtreaza pe hartie de filtru cantitativa.Filtratul se trece prin coloana
SPE preconditionata prin spalare succesiva cu 4ml metanol, respectiv cu 4 ml apa
purificata.Ochratoxina A este elutata de pe coloana cu 3ml cloroform, cu o viteza de 2ml/min.Faza
organica se evapora la sec:reziduul obtinut se reia cu un volum de 0,6ml faza mobila si se supune
analizei HPLC prin injectarea unui volum de 20 microlitrii.
VALIDAREA DETODEI DE DETERMINARE A OCHRATOXINEI A PRIN HPLC
Pentru determinarea cantitativa a ochratoxinei A, metoda de analiza prin HPLC prezentata a fost
validata, urmarindu-se urmatorii parametrii: stabilitatea in timp a solutiei, limita de detectie si limita de
cuantificare, precizia sistemului, prezicia metodei, exactitatea metodei.

PROCEDUR DE NCERCARE
Laboratorul pentru Siguranta
Alimentara si Protectia
Consumatorului - SAPCO

Determinarea ochratoxinei din


alimente
Cod: PI - 01

Exemplar nr.
Pagina: 7 / 8
Ediia: 2 / 25.05.2011
Revizia: 0 / 25.05.2011

6.4 Rezultate si discutii


Specificitatea: pentru determinarea specificitatii metodei au fost analizate probe cotinand ochratoxina
A si o proba continand faza mobile utilizata ca solvent al probelor injectate.La timpul de retentie al
ochratoxinei A nu s-a obtinut nici un semnal in cromatograma corespunzatoare fazei mobile, rezulta
deci faptul ca nu exista interferenti.
Identificarea picurilor: se realizaeaza in functie de timpul de retentie.Pentru onchratoxina A timpul de
retentie este de 9.5minute.

7.RESPONSABILITI
Rector
Analizeaz i aprob Adresele de nsoire a R.
ef de laborator
Responsabilul Calitii
Verific, cu ocazia Auditurilor Interne, nregistrrile specifice acestui tip de ncercri n
Caietele de lucru i n registrul
Executant
Primitor probe
8.INREGISTRRI
Formulare
Dosare / caiete
Registre

ANEXE
Nu e cazul.

PROCEDUR DE NCERCARE
Laboratorul pentru Siguranta
Alimentara si Protectia
Consumatorului - SAPCO

Determinarea ochratoxinei din


alimente
Cod: PI - 01

Exemplar nr.
Pagina: 8 / 8
Ediia: 2 / 25.05.2011
Revizia: 0 / 25.05.2011