Biologia molecular

grupeaz un ansamblu de tehnici bazate pe studiul

i detecia modificrilor acizilor nucleici.

Utilizat n medicina uman i veterinar pentru
cercetare, diagnostic, tratamentul bolilor,
ameliorare.

1985 K.B. Mulis a descoperit tehnica PCR

markerii moleculari
Biologia molecular a evoluat n ultimii 10
ani datorit progreselor realizate n
cercetrile de biochimie, genetic,
tehnicilor de microscopie electronic,
tehnologie a ADN recombinant
informaticii.
Secvenializarea genomului uman - va
permite tratarea unor boli care prezint
numeroase necunoscute.
Primul genom secvenializat a fost cel
de gin (Hillier i col., 2004; Wong i
col., 2004). taurine, iar n 2005, suine
2006

Genotip- componenta genetica a unui
organism; mai poate fi definit ca secvena
acizilor nucleici. Secvena nucleotidic din
ADN este informaia transmisibil

Fenotipul aspectul exterior,reprezint
totalitatea caracteristicilor funcionale i
structurale ale unui organism sau expresia
informaiei genetice asupra creia
opereaz selecia natural.

Acizii nucleici
Dintre acizii nucleici ARN a aprut
primul
ARN este considerat molecula
primordial a vieii i nu ADN,
deoarece:
riboza (glucidul coninut de ARN) se
realizeaz mult mai uor dect
deoxiriboza (glucidul coninut de ADN);
structura ciclic a deoxiribozei (din
ADN) nu posed gruparea 2hidroxil.

ARN
Gruprile 2 i 3 joac rol structural
n ARN i sunt implicate n formarea
structurii teriare a ARN de transport
(forma de trefl), prin legturi de H;

gruparea 2hidroxil a ribozei joac ea nsi
un rol catalitic direct. De exemplu
capacitatea de autoexcizie (matisare) a
intronilor din ARN mitocondrial

ozele
ARNt
ARNt
Tipuri de ARN
Celula procariot
Caracteristici ale procariotelor (pro- nainte, karyion smbure sau
nucelu).
-bacteriile au forme i dimensiuni diferite.

Au membrana celular care formeaz un singur compartiment
citoplasmatic, fr o structur intern bine organizat.

Conin un singur cromozom, constituit dintr-o singur molecul de
ADN circular, fr a prezenta un nucleu bine conturat.
Celula procariot
se multiplic prin diviziune simpl sau
fisiune binar, n funcie de condiiile de
mediu.
Neexistnd compartimente intracelulare
transcripia ADN i translaia ARNm au
loc concomitent.

Un singur tip de ARN polimerizeaz,
transcrie cele trei tipuri de ARN (m, r,
t).

Caracteristicile celulelor eucariote

90-99% din informaia genetic,
existent n genomul unei celule
eucariote, este represat, deci este
netranscriptibil i nu se exprim
fenotipic.

Exist gene funcionale comune aproape
tuturor tipurilor celulare ale organismului
respectiv, care sunt n mod selectiv
activate sau reprimate n funcie de
tipul i stadiul de difereniere al celulei
respective.

Caracteristicile celulelor
eucariote
Exist un sistem de control care decide i
menine expresia anumitor gene i supresia
altora, n funcie de necesitile celulei
respective.

Factorii de control sunt proteinele reglatoare.
codificate de gene reglatoare, care sunt mai
mult sau sau mai puin active n funcie de tipul
celular, funciile i vrsta celulei.


Proteinele reglatoare au
capacitatea de a se lega de ADN,
care controleaz activitatea unei
anumite gene structurale i pot
supresa sau activa expresia acestei
gene n funcie de cerinele
fiziologice ale celulei.


Transcripia unei gene
Nucleul celulelor
eukcariote
Nucleul, conine aproape ntreaga
cantitate de ADN care formeaz genomul
celular,
ocup aproximativ 10% din volumul total al
celulei, dar acesta variaz n funcie de
esut, vrsta celulei, activitatea
metabolic, gradul de difereniere,
patologia celulei.

Nucleul
Structur:
cromatina nuclear,
nucleolul
matrixul nucleolar care formeaz
nucleoplasma (sau carioplasma)
membrana nuclear care nchide
compartimentul.

Membrana nuclear
-dubl trilaminar:
membrana nuclear intern prin proteinele
specifice se leag de lamina nuclear.
membrana nuclear extern se continu
cu membrana reticulului endoplasmatic
spaiu perinuclear care are diametrul de
20-40 nm.
Structura nucleului la
microscopul electronic
Structura nucleului la
microscopul electronic
Nucleul celulelor eukcariote
Nucleul reprezint un centru metabolic activ care
realizeaz
-replicarea ADN,
transcripia informaiei n ARN,
asigur diviziunea celular,
repararea ADN.
proteinele joac un rol important.
ARN-urile sintetizate i procesate n nucleu, sunt
urmate de sinteza proteic.
Deci ARN-urile i alte componente din nucleu
trebuiesc exportate n citoplasm iar altele-
proteinele- transportate n nucleu.

Porii membranei nucleare
traversarea membranei nucleare este un
proces selectiv.
Numrul porilor variaz cu specia i
tipul celular.
Fiecare por este format dintr-o
structur de proteine asociate
cunoscute sub denumirea de complex al
porului nuclear.

Diametrul porului este de 9 nm i lungimea
de 15 nm.
moleculele mici (greutate molecular pn
la 1500 daltoni ) difuzeaz rapid, iar cele
mari, mai greu.

Moleculele mai mari dect diametrul porului
(de exemplu, ARNm) sunt complexate cu
diferite proteine (nucleoproteine), care
interacioneaz cu receptorii specifici
coninui de proteinele globulare ale
porului.

Receptorii activeaz tranzitul acestor particule n
sau n afara nucleului, prin lrgirea canalelor
porilor.

Transportul nuclear este selectiv i necesit un
semnal nuclear de import care este prezent
numai n proteinele nucleare (implicate n
activitatea nuclear; enzime, histone, factori de
transcripie).

Acest semnal este reprezentat de o secven
scurt de aminoacizi (4 pn la 8 aminoacizi).

Cromatina nuclear

n nucleul celulelor eucariote, ADN exist
sub form de cromatin care este
organizat n mod ierarhic, n structuri
din ce n ce mai complexe:
Nucleozomul
Complexul octameric conine cte dou molecule
din fiecare tip de histon: H2A, H2B, H3 i H4.

segmente de ADN formate de 20-100 pb i
care reprezint regiunile de legtur denumite
ADN linkeri.

histona H1 care este situat n afara
octamerului. Ea este asociat att cu nucleozomul
core, ct i cu segmentul ADN linker i are rol n
stabilitatea nucleozomului

Nucleozomul
Nucleozomi
Fibre de cromatin
Nucelozomii legai prin intermediul
linkerilor n irag de perle realizeaz o
structur mult mai compact, formnd
superfibre spiralizate cu un diametru de
250-300 denumite fibre groase.

Acestea reprezint cel de-al doilea
nivel de condensare al cromatinei.

Cromozomii metafazici
n metafaz, cnd se formeaz
cromozomii, fibrele devin mult mai
condensate, prin mpachetri adiionale,
formnd domenii (sau loops-uri).

Acest tip structural de cromatin este
bine legat ntr-un suport structural din
nucleu, denumit matrix nuclear (matrix sau
scaffold).


Eucromatina i
heterocromatina
Genele active care transcriu ARN formeaz zona
eucromatic, pe cnd genele inactive zona
heterocromatic. Cele dou zone se disting prin
sensibilitatea la atacul ARN-azei.

La nivelul eucromatinei, cromatina fiind, enzima
are acces i poate mai puin condensat aciona,
n timp ce la nivelul heterocromatinei enzima este
inactiv, accesul ei fiind mpiedicat de gradul
mare de condensare a acesteea.

Cromatina eucariotelor
Cromatina eucariotelor conine
proteine nehistonice (proteine
reglatoare, factori de transcripie
precum i
enzime ca ADN polimeraza sau
ARN polimeraza,
enzime de reparare,
topoizomeraze).

eritrocite
neuron
Nucleolul la ME
Nucleolul este situat la celulele aflate n
interfaz. Structur:
un centru fibrilar, format din ADN
netranscriptibil;
o regiune fibrilar dens, care conine
ARN n curs de sintez;
o component granular care conine
particulelor de preribozomi.

plasmocite

Rolul nucleolului
n 1960 s-a descoperit c nucleolul joac rol n
sinteza ARN ribozomal (ARNr) i n asamblarea
ribozomilor.

Din ARNr 45S, prin clivarea parial rezult cele 3
tipuri de ARN ribozomal: ARNr 18S din
subunitatea mic,ARNr5S, ARNr 5,8S i ARN
28S n subunitatea mare a ribozomilor.

Aceste molecule de ARN, nainte de a fi exportate
n citoplasm, formeaz complexe
ribonucleoproteice cu mai multe tipuri de proteine
(peste 70 proteine).

Volumul nucleolului
n mod normal nucleolul ocup 30%
din volumul nucleului.

n celulele tumorale nucleolii apar
hipertrofiai avnd o form
neregulat.

Gradul lor de hipertrofie este
proporional cu gradul de malignitate.

Matricea nuclear
Matricea nuclear este structurat dintr-o
reea de filamente insolubile, care ar fi
echivalent citoscheletului citoplasmei.

Se consider c fiecare tip celular ar avea un
set distinct de proteine, pe acestea fiind
structurate loops-urile din structura
cromozomilor i ajut la organizarea
cromozomilor, la reglarea replicrii, a
transcripiei ADN.

Importana biomedical a acizilor nucleici: baza
chimic a ereditii
Un clugr din secolul XIX - Gregor Mendel
a introdus pentru prima oar noiunea de
gen: unitate de baz responsabil pentru
deinerea i transmiterea a unei
caracteristici unice.

Iniial s-a crezut c proteinele sunt carui ai
informaiei genetice, pn la mijlocul secolului
XX, cnd s-a descoperit c ADN-ul este baza
ereditii, datorit faptului c este capabil
de auto-replicare.
Acizii nucleici sunt
ADN-ul i ARN-ul
ADN
Sediul principal al
localizrii ADN-ului
este nucleul
celulelor.
Sedii secundare
sunt: mitocondriile
i cloroplastele (n
celula vegetal).


ARN
Diferitele tipuri de
ARN sunt
localizate n nucleu,
citoplasm,
mitocondrii,
ribozomi.

STUCTURA ACIZILOR
NUCLEICI
ADN-ul a fost descoperit in anul 1896, in nucleii
leucocitelor din sange.
Functia lui era necunoscuta. Acest compus denumit
acid nucleic, a fost izolat din nucleii diferitelor tipuri
de celule.
Analizele chimice, efectuate in anul 1910 au
identificat doua clase de acizi nucleici: ADN si
ARN.
In anul 1924, studiile microscopice si utilizarea
colorantilor specifici pentru ADN si proteine au
demonstrat ca amandoua substantele se gasesc in
cromozomi
Dogma Central a geneticii moleculare
RNA
Protein
DNA
Propus de ctre Francis Crick
n 1958 pentru a descrie fluxul
informaiei genetice n celul.




Informaia depozitat n ADN
este transferat ARN-ului, care
mai departe o transfer
proteinelor.


Dogma Central propus de
Crick a suferit numeroase revizii
n ultimii 47 de ani.


Acid dezoxiribonucleic
Acid ribonucleic
Dogma Central a Geneticii
ADN ARN proteine
Transcriere Traducere


transcrierea = transferul informaiei genetice
de la ADN la ARN (sintez de ARN pe matri de
ADN)

traducerea = transferul informaiei genetice de
la ARN la proteinele functionale, a cror
secven de aminoacizi este codificat n
structura ADN-ului.

replicarea = transferul informaiei
genetice de la celula mam la
celulele-fiice prin copierea ADN-ului
parental cu formarea a dou molecule
de ADN cu structur identic ADN-
ului parental